MX2007001209A - Solucion biactiva de minerales ena, metodo de fabricacion de la misma y su aplicacion para la prevencion de la osteoporosis. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a un metodo para la fabricacion de una solucion bioactiva de mineral, alcalina de la cual las materias primas son huesos de calamar quemados a una alta temperatura y polvo triturado de algas rojas, y a las composiciones y a los alimentos para salud que tienen la eficacia para la prevencion de osteoporosis. Las soluciones alcalina acuosas que tienen minerales abundantes de la presente invencion pueden ser utilizados para soluciones biactivas que tienen la eficacia para la prevencion y mejoramiento de las enfermedades oseas tales como osteolisis y osteoporosis en mamiferos, incluyendo seres humanos.

Description

( SOLUCIÓN BIOACTIVA DE MINERALES ENA, MÉTODO DE FABRICACIÓN DE LA MISMA Y SU APLICACIÓN PARA LA PREVENCIÓN DE LA OSTEOPOROSIS 5 CAMPO TÉCNICO La presente invención está relacionada a un método de fabricación de solución bioactiva de ENA mineral A y las soluciones bioactivas para la prevención y mejoramiento de la osteoporosis aplicando las mismas. Con 10 más detalle, la presente invención está relacionada a las composiciones bioactivas minerales fabricadas mediante el uso de huesos de calamar y/o algas rojas que tienen abundantes minerales como las materias primas principales y alimentos para la salud utilizando los mismos. 15 ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Conforme la sociedad industrial ha avanzado y se ha profesionalizado, la vida dietética de tomar alimentos lentos tradicionalmente ha estado cambiando a la vida 20 dietética de tomar alimentos rápidos, el suministro de minerales que han sido esenciales para la gente moderna ha sido insuficiente debido a los factores de estrés y contaminación en el ambiente de vida, y el suministro de calcio que ha sido requerido esencialmente para la gente 25 moderna no ha sido estable.

Aunque los minerales que son requeridos por los cuerpos humanos existen en cuerpos humanos en cantidades extremadamente pequeñas, éstos asumen papeles importantes al ayudar a promover el desarrollo de las células y a mantener los tejidos corporales y el control de las actividades corporales. Particularmente, respecto al calcio que asume un papel importante en el metabolismo del cuerpo humano, éste es esencial para la prevención de la osteoporosis, pero es difícil de suministrar una cantidad adecuada que sea necesaria para seres humanos y mamíferos, y es problemático ya que su ingestión es incrementada pero la proporción de absorción es baja. La osteoporosis es una enfermedad del esqueleto comúnmente sufrida por mujeres u hombres post -climatéricos, de edad avanzada. En realidad su diagnóstico temprano y prevención no son todavía suficientes. La osteoporosis ocurre principalmente debido a la falta de hormonas, tales como estrógenos, hormonas de crecimiento, hormona androgénica, etc., o aparece secundariamente después de las enfermedades de la tiroides. La osteoporosis es una enfermedad que tiene síntomas de la disminución en la densidad ósea, ya que la cantidad de destrucción de los huesos por los osteoclastos excede la cantidad de producción de los huesos por los osteoblastos. Esta progresa sin síntomas especiales primeramente, pero puede i ocurrir la fractura fácilmente incluso con una pequeña cantidad de impacto. En mujeres menopáusicas, la reducción de la densidad ósea ocurre rápidamente y después de esto, la reducción de la densidad ósea ocurre lentamente en 5 hombres y mujeres. En tal osteoporosis, se han mostrado cambios en el calcio (Ca) en suero y en la fosfatasa alcalina total y cambios en las concentraciones de hormonas relacionadas a la osteogénesis (tales como el estradiol, osteocalcina, etc.) y hormonas relacionadas a la osteólisis 10 (tales como la hormona paratifoidea, etc.) . También, la descarga de piridinolina, la cual es un agente de reticulación del colágeno, utilizado como un índice de osteólisis en la orina, es incrementada. En el tratamiento de osteoporosis, el estrógeno 15 ha sido administrado como una terapia suplementaria de hormonas, y se ha reportado que la terapia suplementaria de hormonas debe haber sido iniciada en la última parte de la perimenopausia o en una parte temprana de la menopausia, con el fin de obtener los efectos máximos (Stepan J.J. et 20 al., (2003) Endocr Regul 37 (4) : 225-238 ; Chem L. et al., (2000) 20 (4) :283-286) . También, los agentes terapéuticos de la osteoporosis aplicados a la contraindicación de la administración de estrógeno incluyen calcio, bisfosfonato, calcitonina, raloxifeno, vitamina D, etc. 25 Mientras tanto, la calcitonina es una hormona t producida en las células C de la glándula tiroides. Sus acciones fisiológicas en los cuerpos humanos no son todavía claras, pero se considera que está involucrada en el control diminuto de la homeostasis del calcio por un tiempo 5 corto probablemente, y el efecto de la supresión de la osteólisis es mostrado con dosis farmacológica. Particularmente, se ha reportado que la calcitonina ha sido más efectiva para la osteoporosis de alta proporción de conversión. Los ejemplos de agentes terapéuticos que 10 tienen el efecto de tratamiento de la osteoporosis incluyen "Fosamax" y "Evista" en el mercado, que muestran sus efectos a través del mecanismo de suprimir los daños a los huesos o retardar la velocidad de los daños a los huesos a través de la acción de impedimento de la producción y 15 actividades de los osteoclastos, así como un nuevo agente terapéutico de la osteoporosis llamado "Porteo" que ayuda a la formación de nuevos huesos al acelerar la producción y las actividades de los osteoblastos. No obstante, entre los nuevos fármacos químicos, el ralroxifeno ha sido un 20 modulador selectivo del receptor de estrógeno (SERM) y un fármaco ideal que actúa como un fármaco de eficacia de estrógeno en el sistema cardiovascular óseo, pero como un antagonista de estrógeno en el tejido mamario y en el útero, la toxicidad de este fármaco mostrado durante su 25 metabolismo ha sido reportado recientemente (Hirsimaki P. i. et al., (2002) Breast J. 8(2): 92-96).

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Por lo tanto, un objetivo de la presente 5 invención es proporcionar una solución bioactiva de ENA mineral A y el método de fabricación de tal solución. Otro objetivo más de la presente invención es proporcionar nuevas soluciones bioactivas de minerales que sean útiles para la prevención y mejoramiento de la osteoporosis. La 10 presente invención está relacionada al método de fabricación de la solución bioactiva ENA mineral A y composiciones que son útiles para la prevención y mejoramiento de la osteoporosis, aplicando la solución anterior. Con más detalle, la presente invención está 15 relacionada a una composición de solución bioactiva de minerales A de ENA fabricada al tener los huesos de calamar y/o algas rojas que tienen abundantes minerales como las materias primas principales y alimentos para la salud que utilizan los mismos. 20 La presente invención es ilustrada con más detalle en seguida: La presente invención es para fabricación de una solución alcalina que distribuye minerales naturales a través de la refinación ova, agar-agar, Gracilaria 25 verrucosa, Nemalion vermiculare, Bangia fusco -purpurea, Grateloupia filicina, Gigartina tenella, y Ceraminum kondol que son algas naturales comestibles, y el almidón de algas rojas y huesos de calamar, que son los principales componentes . La solución acuosa alcalina de la presente invención es fabricada de acuerdo a un método que comprende los pasos de: lavar y triturar los huesos de calamar y las algas rojas; fabricar los minerales inorgánicos al quemar materiales triturados; enfriar los minerales inorgánicos a una temperatura ambiente y convirtiéndolos en un polvo diminuto; ionizar el polvo diminuto en agua; y obtener una solución acuosa alcalina al precipitar y filtrar el polvo diminuto. Las algas rojas anteriores se refieren a 100% de algas vegetales comestibles que son de los grupos vegetales rojos o púrpuras, ya que contienen auxocromos rojos además de las clorofilas. Sus cuerpos son multicelulares y son en forma de trenza o en forma de hoja, la mayor parte del tiempo, y viven en el océano. La ova, agar-agar, Gloiopel tis tenax, etc., pertenecen a estas algas rojas. También, los huesos de calamar son llamados jibiones, que son huesos blancos secos en las partes centrales de los calamares . Respecto al método de fabricación de los minerales inorgánicos utilizando las algas rojas anteriormente descritas, y huesos de calamar en la presente invención, es preferible lavar limpiamente y secar perfectamente las algas rojas y los huesos de calamar, y calentar y quemarlos de 1,000 a 2,000°C por 1 hora. Después de que las bacterias o impurezas son quemadas completamente y removidas, únicamente permanecen minerales que son materiales inorgánicos. Estos son luego completamente enfriados a una temperatura ambiente y triturados en partículas diminutas mediante el uso de un pulverizador. En seguida, los minerales triturados son disueltos en agua mediante el uso de huesos de calamar quemados o algas rojas. En el agua ionizante dentro de la cual se disuelven los minerales quemados anteriormente mencionados, es preferible triturar de 80 a 100 °C con una bomba de agua a una presión mayor de 10 atmósferas por más de 1 hora mediante el uso de la diferencia en elevación. Es efectivo cuando la presión de la bomba del agua es mayor de 10 K a lo mínimo. De este modo, la solución ionizada es precipitada y filtrada. Después de que se precipita un lodo mineral naturalmente al tener la solución ionizada en reposo todavía por 15-35 horas, únicamente es filtrado un sobrenadante claro mediante el uso de un filtro de precipitación con el fin de fabricar una solución bioactiva de minerales alcalina.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Una precisión más completa de la presente invención, y muchas de las ventajas esperadas de la misma, serán fácilmente aparentes conforme la misma se llega a entender mejor con referencia a la siguiente descripción detallada, como se considera en conjunto con los dibujos anexos en donde : La figura 1 muestra el equipo para el paso de ionización de una solución; La figura 2 muestra una gráfica en la cual son comparados los cambios en el peso corporal promedio de animales en cada grupo durante el término completo de la prueba ; La figura 3 es una gráfica que muestra los cambios en el peso corporal promedio de los animales en cada grupo, medidos durante la autopsia de los animales 4, 8 y 12 semanas después de la administración de los materiales de prueba después de la ovariectomía; La figura 4 muestra una gráfica en la cual se muestran los efectos de las soluciones bioactivas de minerales sobre los cambios en la concentración de calcio en suero después de la autopsia de animales 4, 8 y 12 semanas después de la administración de los materiales de prueba después de la ovariectomía; La figura 5 muestra una gráfica en la cual se muestran los efectos de las soluciones bioactivas de minerales sobre los cambios en la concentración de fósforo en suero después de la autopsia de animales 4, 8 y 12 semanas después de la administración de los materiales de prueba después de la ovariectomía; La figura 6 muestra una gráfica en la cual se muestran los efectos de las soluciones bioactivas de minerales sobre los cambios en la concentración de estradiol en suero después de la autopsia de animales 4, 8 y 12 semanas después de la administración de los materiales de prueba después de la ovariectomía; La figura 7 muestra una gráfica en la cual se muestran los efectos de las soluciones bioactivas de minerales sobre los cambios en la concentración de osteocalcina en suero después de la autopsia de animales 4, 8 y 12 semanas después de la administración de los materiales de prueba después de la ovariectomía; La figura 8 muestra una gráfica en la cual se muestran los efectos de las soluciones bioactivas de minerales sobre los cambios en la concentración de fosfatasa alcalina en suero después de la autopsia de animales 4, 8 y 12 semanas después de la administración de los materiales de prueba después de la ovariectomía; La figura 9 muestra una gráfica en la cual se muestran los efectos de las soluciones bioactivas de minerales sobre los cambios en la concentración de piridinolina aislada en suero, durante la osteólisis después de la autopsia de animales 4, 8 y 12 semanas después de la administración de los materiales de prueba después de la ovariectomía; La figura 10 muestra una gráfica en la cual se muestran los efectos de las soluciones bioactivas de minerales sobre los cambios en el área de los tejidos óseos trabeculares después de la autopsia de animales 4, 8 y 12 semanas después de la administración de los materiales de prueba después de la ovariectomía; La figura 11 muestra la observación de los huesos trabeculares, que son índices de colágeno óseos, a través de la tinción de Azan, que es un método de tinción específico para el colágeno, 4, 8 y 12 semanas después de la administración de las soluciones bioactivas de mineral, que son los materiales de prueba después de la ovariectomía ; La figura 12 muestra una gráfica en la cual se muestran los efectos de las soluciones bioactivas de minerales sobre los cambios en el número de osteoclastos, incrementados durante la osteólisis después de la autopsia de animales, 4, 8 y 12 semanas después de la administración de los materiales de prueba después de la ovariectomía; La figura 13 muestra la observación del grado de actividad de los osteoclastos, incrementada durante la osteólisis, 4 semanas después de la administración de las soluciones bioactivas de minerales, que son los materiales de prueba después de la ovariectomía; La figura 14 muestra la observación del grado de actividad de los osteoclastos, incrementada durante la osteólisis, 8 semanas después de la administración de las soluciones bioactivas de minerales, que son los materiales de prueba después de la ovariectomía; La figura 15 muestra la observación del grado de actividad de los osteoclastos, incrementada durante la osteólisis, 12 semanas después de la administración* de las soluciones bioactivas de minerales, que son los materiales de prueba después de la ovariectomía; La figura 16 muestra el efecto de la administración de las soluciones bioactivas de minerales sobre los órganos parenquimatosos de animales que son sometidos a ovariectomía.

DESCRIPCIÓN DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS DE LA INVENCIÓN Características y ventajas adicionales de la presente invención serán descritas en la descripción siguiente, y en parte serán aparentes a partir de la descripción, o pueden ser aprendidas por la práctica para la presente invención. De aquí en adelante, por ciento significa por ciento en peso, a no ser que se defina de otro modo.

Modalidad preferida 1 Fabricación de la solución bioactiva de minerales A de ENA Huesos de calamar y algas rojas que son lavados limpiamente y secados son triturados hasta tener un polvo y quemados a 1,100°C por 1 hora. Los huesos de calamar y las algas rojas quemados son enfriados completamente hasta la temperatura ambiente y fabricados hasta formar un polvo diminuto mediante el uso de un pulverizador. Para las algas rojas anteriores, la misma cantidad de cada ova, agar-agar, Gracilaria verrucosa, Nemalion vermiculare, Bangia fusco -purpurea, Grateloupia filicina, Gigartina tenella, y Ceraminum kondol y almidón de alga roja, se mezclan y se utilizan. En 500 litros de agua, se coloca 1.5 kg de polvo de huesos quemados de calamar y 4 kg de polvo diminuto de algas rojas quemadas, se agitan y se disuelven. Una solución ionizada es fabricada mediante la trituración de las partículas en la solución anterior con una bomba de agua a una presión de 10 atmósferas por 2 horas, mediante el uso de la diferencia en la elevación. La solución bioactiva de minerales es fabricada mediante la filtración del sobrenadante claro superior en el reactor, con un filtro de precipitación después de tener la solución ionizada en reposo por 24 horas. Los resultados del análisis de los componentes de la solución bioactiva de minerales fabricada de este modo, se muestra en la tabla 1 siguiente .

Tabla 1. Análisis de los componentes de la solución bioactiva de minerales A de ENA Como se muestra en la tabla 1 anterior, se observa que la solución ionizada de acuerdo a la presente invención es una solución alcalina con un pH de 12.85, tiene un alto contenido de calcio particularmente, y contiene una gran cantidad de diversos iones metálicos que son benéficos para el cuerpo humano.

Modalidad preferida 2 Fabricación de la solución bioactiva de minerales A de ENA Una solución ionizada es fabricada en el mismo método que aquel de la modalidad preferida 1 después de lavar limpiar y secar los huesos de calamar. La solución bioactiva de minerales es fabricada mediante el mismo método que aquel de la modalidad preferida 1, excepto que 5.5 kg de polvo diminuto de huesos quemados de calamar se disuelven en 500 litros de agua. Los resultados del análisis de los componentes de la solución bioactiva de minerales fabricada de este modo, se muestra en la tabla 2 siguiente .

Tabla 2. Análisis de los componentes de la solución bioactiva de minerales A de ENA Como se muestra en la tabla 2 anterior, se observa que la solución ionizada de acuerdo a la presente invención es una solución alcalina con un pH de 12.2, tiene un alto contenido de calcio particularmente, y contiene una gran cantidad de diversos iones metálicos que son benéficos para el cuerpo humano.

Modalidad preferida 3 Experimentos en animales utilizando la solución bioactiva de minerales alcalina Experimentos en animales son realizados mediante el uso de la solución bioactiva de minerales alcalina fabricada en la modalidad preferida 1 anterior. Como los animales utilizados para los experimentos, ratas libres de patógenos específicos (SPF) en el grupo Wistar son suministradas por Orient Company y utilizadas. Cinco ratas Wistar cada una alojada en una caja de crianza de policarbonato (240 mm de anchura x 390 mm de largo x 175 mm de altura) equipada con un equipo higrotermostático automático a una temperatura de 22 ± 3°C, con humedad relativa de 50 ± 10%, y tiempo de iluminación de 12 horas (encendido a la 08:00 - apagado a las 20:00), domesticadas y criadas. Respecto al forraje, se utilizó forraje sólido para animales experimentales (PMI Nutrition Internacional, 505 North 4th Street, Richmond, IN 47374, Estados Unidos) que es esterilizado a través de radiación (13.2 kGy) y tomado libremente. Respecto al agua, se utiliza agua de la llave tomada libremente mediante el uso de botellas de agua. Después de la aplicación de 24 litros de la solución bioactiva de minerales fabricada en la modalidad preferida 1 a modelos animales experimentalmente inducidos de osteoporosis a concentraciones de 0.5%, 5% y 10% por 12 semanas como agua para beber, mientras que se le mantiene refrigerada, los experimentos para el efecto de la prevención de la osteoporosis, son realizados a través de los cambios en los índices de diagnóstico de la osteoporosis en suero, y examen histopatológico de los huesos del muslo. En General se utiliza agua de la llave para experimentos control . Entre las ratas Wistar, las ratas hembra que tienen pesos corporales de 200 a 230 g son seleccionadas, y 24 ratas hembra son utilizadas para cada grupo. Las ratas en cada grupo individual son acomodadas en una caja de policarbonato para crianza. Después de que las ratas son anestesiadas con Rompun® (0.04 cc/100 g) y cetamina (0.14 cc/100 g) , sus abdómenes son afeitados y desinfectados perfectamente con un desinfectante, y las ratas son sometidas a ovariectomía. Los ovarios en ambos lados son retirados completamente mediante el corte de aproximadamente 1 cm de la línea media del abdomen mediante el uso de una pinza, trayendo el ligamento del útero y exponiendo los ovarios en ambos lados. La infección es prevenida al desinfectar perfectamente los sitios de operación después de la sutura de cada músculo y la piel, y la separación de las tensiones es realizada mediante la medición de los pesos corporales al siguiente día de la operación. Después de que las ratas son separadas en cuatro grupos, el material de prueba es suministrado libremente a través de bebida a todo lo largo del término de prueba, y los animales son sacrificados 4, 8 y 12 semanas después de la administración del material de prueba.

Tabla 3. Condiciones para la administración a cada grupo para experimentos animales.

Grupo I.D. del animal Operación Tratado cona Grupo 1 1-24 OVX Agua de la llave Grupo 2 25-48 OVX 0.5% ENAD Grupo 3 49-72 OVX 5% ENAb Grupo 4 73-96 OVX 10%ENAD a. Suministrado libremente a través de la bebida a todo lo largo del término de prueba. b. ENA (nombre de la solución bioactiva de minerales) Los resultados de los experimentos animales son ilustrados en seguida: <Observación de los cambios en los pesos corporales de ratas> Los cambios en los pesos corporales de modelos animales de osteoporosis inducida a partir de ratas hembra a través de ovariectomía, son observados mediante la medición de los pesos corporales una vez a la semana a todo lo largo del término de prueba. Y los síntomas generales de los animales son observados y mostrados en las figuras 2 y 3. Se observa que los pesos corporales son incrementados en todos los grupos de prueba después de la ovariectomía. Pero no son observados cambios estadísticamente significativos en los pesos corporales en los grupos a los cuales se administran 0.5%, 5% y 10% de las soluciones bioactivas minerales, que son las soluciones de prueba, en comparación son administradas al grupo control con rellenador, y no son observados síntomas anormales a todo lo largo del término de prueba en la observación de los síntomas generales de los animales. <Observación de los efectos sobre los índices séricos> En modelos animales de osteoporosis inducida después de la realización de ovariectomía experimentalmente a ratas hembra, la eficacia del material de prueba es verificada mediante la observación de las concentraciones de estradiol, osteocalcina, calcio, fósforo y fosfatasa alcalina, que se utilizan como índices séricos en la osteoporosis, en animales que son sacrificados a través de muerte periódica. Posteriormente el suero es separado a través de centrifugación de las muestras de sangre (3,000 g, por 15 minutos) , y se miden el estradiol y la osteocalcina en el método de radioinmunoensayo (Bayer, Estados Unidos) , el calcio es medido en el método de punto final OCPC (Bayer, Estados Unidos) , y la concentración del fósforo es medida en términos de espectrofotometría a través de la formación del complejo de fosfomolibdato con un equipo comercializado (Bio Systems S.A., Buenos Aires, Argentina) . La actividad de la fosfatasa alcalina total del suero es medida en términos del ensayo colorimétrico (Bayer, Alemania) . Cada componente es mostrado en las figuras 4 a la 8. 1) Calcio Como se muestra en la figura 4, no se observan cambios estadísticamente significativos en la concentración del calcio en suero en los grupos a los cuales se administran 0.5%, 5% y 10% de soluciones bioactivas de minerales, que son los materiales de prueba, a todo lo largo del término de prueba, en comparación al grupo control con rellenador. Se considera que la administración de las soluciones bioactivas de minerales no tiene efecto sobre la concentración del calcio en la sangre. 2) Fósforo Como se muestra en la figura 5, no se observan cambios estadísticamente significativos en la concentración del fósforo en suero en los grupos a los cuales se administran 0.5%, 5% y 10% de soluciones bioactivas de minerales, que son los materiales de prueba, a todo lo largo del término de prueba, en comparación al grupo control con rellenador. Se considera que la administración de las soluciones bioactivas de minerales no tiene efecto sobre la concentración del fósforo en la sangre. 3) Estradiol Como se observa en la figura 6, se observa que existe un incremento estadísticamente significativo (p < 0.05) en la concentración del estradiol en suero de los grupos a los cuales se administran 5% y 10% de las soluciones bioactivas de minerales, 12 semanas después de la administración en comparación al grupo control con rellenador. Se determina que tal concentración incrementada del estradiol en la sangre viene de los materiales de prueba que tienen componentes naturales. Y se considera que la osteólisis puede ser prevenida a través de la ovariectomía en modelos animales de osteoporosis inducida por falta de hormonas. 4) Osteocalcina Como se observa en la figura 7, se observa que existen reducciones estadísticamente significativas (p < 0.05 y p < 0.001) en la concentración de la osteocalcina en suero en los grupos a los cuales se administran 5% y 10% de soluciones bioactivas de minerales, respectivamente, 12 semanas después de la administración en comparación al grupo control con rellenador. Se observa también que la concentración de la osteocalcina en suero tiende a ser baja en los grupos a los cuales se administran soluciones bioactivas de minerales 4 y 8 semanas después de la administración en comparación al grupo control con rellenador. Se considera que la administración a largo plazo de los materiales de prueba reduce la osteogénesis al nivel original, al disminuir la concentración de osteocalcina, aunque las soluciones bioactivas de minerales no tienen grandes efectos sobre la osteocalcina, el cual es un índice de la osteogénesis. 5) Fosfatasa alcalina Como se observa en la figura 8, no se observan cambios estadísticamente significativos en la concentración de la fosfatasa alcalina en suero, en los grupos en los cuales se administran soluciones bioactivas de minerales al 0.5%, al 5%, al 10%, que son los materiales de prueba, a todo lo largo del término de prueba en comparación al grupo control con rellenador. <Observación de los efectos sobre la piridinolina en suero> La piridinolina (PYD) , que es una molécula de reticulación de colágeno tipo I es aislada en la sangre circulante y orina debido a la reducción del colágeno de los huesos durante la osteoporosis. El progreso de la osteoporosis puede ser observado mediante la medición de PYD, que es un indicador específico del hueso. En la medición de PYD, aunque el método de la invención de PYD aislado en la orina utilizando HPLC o inmunoensayo convencionales, a sido desventajoso, ya que éste ha tenido baja sensibilidad y especificidad es un índice serológico útil para el diagnóstico temprano de la osteoporosis, ya que incluso una concentración 40 veces menos de PYD puede ser medida en vez de la PYD en suero y en la orina que es medida mediante la aplicación del inmunoensayo ligado a enzimas (ELISA) en el presente experimento. Los resultados de la medición se muestran en la figura 9. Como resultado de la observación de los efectos de las soluciones bioactivas de minerales sobre la piridinolina (PYD) , que es una molécula de reticulación del colágeno tipo I, aislada en el suero durante la osteólisis, como se muestra en la tabla 9, se observa una reducción estadísticamente significativa (p < 0.01) de la concentración de PYD en suero, 4 y 12 semanas después de la administración del material de prueba en el grupo al cual se administra 10% de material de prueba en comparación al grupo control con rellenador. Se observa una reducción significativa (p < 0.05) de la concentración de PYD en el suero en los grupos en los cuales se administra 5% y 10% de los materiales de prueba 8 semanas después de la administración de los materiales de prueba. <Observación de los efectos sobre los huesos y otros órganos> Para la observación histopatológica de los huesos de muslos de modelos animales de osteoporosis inducida experimentalmente, los huesos de los muslos son tomados de cada animal sacrificado por muerte periódica, y el área de los huesos trabeculares, es un índice de la osteoporosis, es analizada mediante el uso de un programa de análisis de imágenes (análisis de imágenes Visus, Foresthill Products, Foresthill, CA, Estados Unidos) a través de la tinción con Azan, que es un método de tinción específica con el colágeno, con el fin de observar los cambios en el colágeno de los huesos del muslo, de acuerdo al progreso de la osteoporosis con respecto a los especímenes titulares fabricados a través del proceso de descalcificación utilizando ácido fórmico y el proceso de fijación de tejido utilizando formalina neutra al 10%. Y el número de osteoclastos, gue son las células relacionadas a la osteólisis, es confirmado a través de la tinción con hematoxilina-eosina . Mientras tanto, para la observación de los efectos de la exposición a largo plazo a los materiales de prueba sobre cada órgano, son tomados los órganos parenquimatosos tales como pulmón, corazón, hígado, bazo, páncreas, riñon, glándula tiroides, glándulas adrenales, etc., junto con los huesos del muslo, cuando se sacrifican los animales, y se observan a través de la tinción con hematoxilina-eosina de acuerdo a los procesos generales de tratamiento de tejidos, a través de un proceso de fijación en formalina neutra al 10%. Los resultados de la observación se muestran en las figuras 10 a la 16. 1) Área de los huesos trabeculares Los efectos de las soluciones bioactivas minerales, que son los materiales de prueba, sobre el colágeno de los huesos después de la ovariotomía, son realizados a través de la tinción con Azan, que es un método de tinción específico para el colágeno en tejidos. Como se observa en las figuras 10 y 11, se observa que la osteoporosis de acuerdo a la falta de hormonas ha progresado debido a la ovariotomía, y el área de huesos trabeculares es reducida gradualmente conforme pasa el término de prueba debido a la disminución en la cantidad de colágeno óseo en el grupo control con rellenador. Aunque no se observan cambios estadísticamente significativos por la administración de los materiales de prueba para cuatro semanas después de la ovariotomía, se observa que el área de los huesos trabeculares, que es un índice de la formación del colágeno óseo, tiende a ser algo alta en los grupos a los cuales se administran 0.5%, 5% y 10% de los materiales de prueba en comparación al grupo control con rellenador. Aunque se observa que el colágeno óseo es reducido en todos los grupos de prueba, 8 semanas después de la administración de los materiales de prueba, en comparación a 4 semanas después de la administración, en la comparación de un grupo de administración a las 8 semanas, se observan incrementos estadísticamente significativos (p < 0.05 y p < 0.001) en el área de los huesos trabeculares en los grupos, a los cuales se administran, respectivamente, 5% y 10% de los materiales de prueba, en comparación al grupo control con rellenador. Mientras tanto, en el grupo de administración de 12 semanas, se observa que la cantidad de colágeno óseo es disminuida en el grupo control con rellenador y el grupo al cual se suministra 0.5% de material de prueba en comparación a los grupos de administración a las 4 semanas y 8 semanas. Y en el grupo de administración a las 12 semanas, como en el grupo de administración a las 8 semanas, se observa un incremento significativo (p < 0.01) en el área de los huesos trabeculares en los dos grupos a los cuales se administra 5% y 10% de los materiales de prueba. 2) Cambios en los números de osteoclastos Como resultado de la observación de los cambios en el número de osteoclastos, que son las células utilizadas para un índice de la osteólisis, como se muestra en las figuras 12 a la 15, se observan cambios estadísticamente significativos a todo lo largo del término de prueba. Los cambios en el número de osteoclastos en la parte de diafisis de los huesos del muslo se observan después de la administración de la solución bioactiva de minerales, que es el material de prueba, para 4 semanas después de la ovariotomía. Una disminución estadísticamente significativa (p < 0.01) en el número de osteoclastos, es observada en el grupo al cual se administra el material de prueba al 10%. Y en los grupos en los cuales se administran los materiales de prueba en todas las concentraciones por 8 semanas, se observan disminuciones significativas en los números de osteoclastos, en comparación al grupo control con rellenador. Mientras tanto, el número de osteoclastos es mostrado similarmente alto en el grupo de administración a las 12 semanas, en comparación al grupo de administración a las 8 semanas en el caso del grupo control, se observa que el número de osteoclastos es significativamente (p < 0.01) disminuido en los grupos a los cuales son administrados los materiales de prueba en todas las concentraciones, en comparación al grupo control con rellenador en el caso de los grupos a los cuales se administran los materiales de prueba . 3) Observación de los efectos sobre los órganos parenquimatosos No solamente los efectos de las soluciones bioactivas de minerales, que son los materiales de prueba, sino también los efectos del suministro a largo plazo del agua para beber sobre los órganos parenquimatosos son observados. Los resultados muestran que éstos no tienen efectos sobre el pulmón, corazón, hígado, bazo, páncreas, riñon, glándula tiroides y glándulas adrenales. Éstos son mostrados en la figura 16. Se realizan múltiples pruebas de comparación para los materiales obtenidos. Respecto al valor promedio, la prueba de Dunnett que es un método de comparación múltiple, es realizada con el fin de examinar si existe una diferencia entre el grupo control con rellenador y los grupos de administración si existe homogeneidad en la prueba de Battlett. Si la homogeneidad no es reconocida como resultado de la prueba de Battlett, la prueba H de Kruskal-Wallis, la cual es un método no paramétrico, utilizando datos ordenados, es realizada, y la diferencia significativa entre grupos es investigada mediante el uso de la prueba de Dunnett, en el caso de p < 0.05. Tal análisis es realizado mediante el uso de GraphPad InStat (versión 3.05, GraphPad Software Inc.), que es un programa estadístico. Las proporciones de peligro de verificación son determinadas como de 5% y 1%.

Posibilidad de Aplicación Industrial La administración a largo plazo de las soluciones bioactivas de minerales de acuerdo a la presente invención incrementan la concentración del estradiol en suero, pero reduce la concentración de osteocalcina; previene la osteoporosis al incrementar el área de huesos trabeculares, pero reduciendo el número de osteoclastos de los huesos del muslo, pero no muestra toxicidad hacia otros órganos. Mientras que ciertas modalidades preferidas actuales de la presente invención han sido mostradas y descritas, se debe entender distintamente que la invención no está limitada a éstas, pero puede de otro modo ser diversamente ejemplificada y practicada dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones.

Claims (11)

REIVINDICACIONES

1. Un método de fabricación de una solución bioactiva de mineral A de ENA, caracterizada porque comprende los pasos de : lavar y triturar huesos de calamar y algas rojas; fabricar los minerales inorgánicos al quemar los materiales triturados; enfriar los minerales inorgánicos a temperatura ambiente y convirtiendo los minerales inorgánicos en un polvo diminuto; ionizar el polvo diminuto en agua; y obtener una solución acuosa alcalina al precipitar y filtrar el polvo diminuto.

2. El método de fabricación de una solución bioactiva de mineral A de ENA, de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el paso de fabricación de los minerales inorgánicos es quemando los materiales triturados de 1,000 a 2,000°C.

3. El método de fabricación de una solución bioactiva de mineral A de ENA, de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el paso de ionización del polvo diminuto en agua es realizado en el método de trituración de 80 a 100 °C, y a una presión de 10 atmósferas o mayor mediante el uso de la diferencia en la elevación con una bomba de agua.

4. El método de fabricación de una solución bioactiva de mineral A de ENA, de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el paso de ionización del polvo diminuto en agua es continuado por 1 hora o más .

5. El método de fabricación de una solución bioactiva de mineral A de ENA, de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el paso de precipitación es realizado por 15 a 35 horas.

6. La solución bioactiva de mineral A de ENA, caracterizada porque es fabricada de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

7. La solución bioactiva de mineral A de ENA de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque la solución bioactiva del mineral A de ENA es efectiva para la prevención de osteoporosis.

8. Un método de fabricación de una solución bioactiva del mineral A de ENA, caracterizado porque comprende los pasos de : lavar y triturar huesos de calamar y algas rojas; fabricar minerales inorgánicos al quemar los materiales triturados a 1, 000-2 , 000°C; enfriar los minerales inorgánicos a temperatura ambiente y convirtiendo los materiales inorgánicos en un polvo diminuto; ionizar el polvo diminuto en agua a 80-100°C en el método de trituración a una presión de 10 atmósferas o más, mediante el uso de la diferencia en la elevación con una bomba de agua; y obtener una solución acuosa alcalina al precipitar y filtrar el polvo diminuto.

9. El método de fabricación de la solución bioactiva de mineral A de ENA de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el paso de ionización del polvo diminuto en agua a 80-100°C es continuado por 1 hora más.

10. El método de fabricación de la solución bioactiva de mineral A de ENA de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el paso de precipitación es realizado por 15 a 35 horas.

11. Una solución bioactiva de mineral A de ENA, fabricada de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a la 10, caracterizada porque la solución bioactiva de mineral A de ENA es efectiva para la prevención de osteoporosis.