JP2007523594A - Sarsウイルスおよび他の感染因子を検出するための方法および組成物 - Google Patents
Sarsウイルスおよび他の感染因子を検出するための方法および組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2007523594A JP2007523594A JP2005503791A JP2005503791A JP2007523594A JP 2007523594 A JP2007523594 A JP 2007523594A JP 2005503791 A JP2005503791 A JP 2005503791A JP 2005503791 A JP2005503791 A JP 2005503791A JP 2007523594 A JP2007523594 A JP 2007523594A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sars
- cov
- virus
- nucleotide sequence
- complementary
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Ceased
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase
- C12Q1/6837—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase using probe arrays or probe chips
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Description
上記の3つの検出法には大きな欠点がある。例えばELISAは、SARS患者血清からの抗体を高い信頼性で検出することができるが、それらの抗体が検出できるのは、症状発現の21日後になってからである。細胞培養法は比較的長期の検出周期を有しており、限定された条件に対してのみ適用できる。また、細胞培養法によって検出できるのは生存ウイルスの存在のみである。
一態様において、本発明は、重症急性呼吸器症候群を引き起こすコロナウイルス(SARS−CoV)および非SARS−CoV感染生物をアッセイするためのチップに関し、該チップは、SARS−CoVゲノムの少なくとも10個のヌクレオチドを含むヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブ、および以下のオリゴヌクレオチドプローブ(1つまたは複数):a)SARS様症状を引き起こす非SARS−CoV感染生物のヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブであって、上記ヌクレオチド配列が少なくとも10個のヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドプローブ;b)感染宿主の免疫系を損傷している非SARS−CoV感染生物のヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブであって、上記ヌクレオチド配列が、少なくとも10個のヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドプローブ;またはc)非SARS−Covコロナウイルス科ウイルスのヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブであって、上記ヌクレオチド配列が、少なくとも10個のヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドプローブを支持体上に固定化させた核酸ハイブリダイゼーションにおける使用に適切な該支持体を含んでなる。
限定する目的ではなく、開示を明快にするために、本発明の詳細な説明は、以下の小節に分けられる。
別に定義されない限り、本明細書に用いられる全ての専門用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者により一般に解釈される意味と同様の意味を有する。本明細書に引用された全ての特許、特許出願、出願公開および他の刊行物は、参照として、それらの全体が参考として援用される。本節に記載された定義が、参考として本明細書に援用されている特許、特許出願、出願公開および他の刊行物に記載された定義に反するか、または矛盾する場合は、本節に記載された定義が、参考として本明細書に援用されている定義に優先する。
1)高ストリンジェンシー:0.1×SSPE(または0.1×SSC)、0.1%SDS、65℃;
2)中程度(medium)ストリンジェンシー:0.2×SSPE(または1.0×SSC)、0.1%SDS、50℃(中(moderate)ストリンジェンシーともいう);および
3)低ストリンジェンシー:1.0×SSPE(または5.0×SSC)、0.1%SDS、50℃。
一態様において、本発明は、重症急性呼吸器症候群を引き起こすコロナウイルス(SARS−CoV)および非SARS−CoV感染生物をアッセイするためのチップに関し、該チップは、その上にSARS−CoVゲノムの少なくとも10個のヌクレオチドを含むヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブ、および以下のオリゴヌクレオチドプローブ(1つまたは複数):a)SARS様症状を引き起こす非SARS−CoV感染生物のヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブであって、上記ヌクレオチド配列が少なくとも10個のヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドプローブ;b)感染宿主の免疫系を損傷している非SARS−CoV感染生物のヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブであって、上記ヌクレオチド配列が、少なくとも10個のヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドプローブ;または,c)非SARS−Covコロナウイルス科ウイルスのヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブであって、上記ヌクレオチド配列が、少なくとも10個のヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドプローブを支持体上に固定化させた核酸ハイブリダイゼーションにおける使用に適切な該支持体を含んでなる。
別の態様において、本発明は、サンプル内のSARS−CoVおよび非SARS−CoV感染性生物に関するアッセイ法に関し、上記方法は:a)上記のチップを提供すること;b)核酸ハイブリダイゼーションに適切な条件下で、上記チップを、SARS−CoVおよび非SARS−CoV感染性生物のヌクレオチド配列を含有するか、含有する疑いのあるサンプルと接触させること;および、c)上記サンプルに存在する場合、上記SARS−CoVまたは上記非SARS−CoV感染性生物の上記ヌクレオチド配列と上記SARS−CoVゲノムのヌクレオチド配列に相補的な上記オリゴヌクレオチドプローブまたは上記非SARS−CoV感染性生物ゲノムのヌクレオチド配列に相補的な上記オリゴヌクレオチドプローブとの間に形成されたハイブリッドを評価することを含んでなり、これにより、上記ハイブリッドの一方または両方の検出が、上記サンプル内の上記SARS−CoVおよび/または上記非SARS−CoV感染性生物の存在を示す。
さらに別の態様において、本発明は、SARS−CoVおよび/または非SARS−CoV感染性生物のヌクレオチド配列を増幅するためのオリゴヌクレオチドプライマーに関し、上記オリゴヌクレオチドプライマーは:a)表18または表19〜表21に記載される、標的SARS−CoVまたは非SARS−CoV感染性生物のヌクレオチド配列またはその相補鎖と、高ストリンジェンシー下でハイブリダイズするか;またはb)表18または表19〜表21に記載されるヌクレオチド配列またはその相補鎖を含んでなる標的SARS−CoVまたは非SARS−CoV感染性生物のヌクレオチド配列に、少なくとも90%の同一性を有するヌクレオチド配列を含んでなる。
(プローブの固定化)
本法、プローブおよびプローブアレイは溶液中で使用できる。それは、例えば、固体支持体上に固定化されたプローブ(1つまたは複数)を用いることにより、チップ様式で実施するのが好ましい。
ハイブリダイゼーションは、当該分野で公知の任意の適切な方法のもとで実施できる。ハイブリダイゼーション条件は、ハイブリダイゼーションの程度、ハイブリダイゼーションの特異性のレベル、および非特異的結合のバックグラウンドレベルを増加させるか、または減少させるために変えることができること(すなわち、ハイブリダイゼーションまたは洗浄塩の濃度または温度を変えることによって)は当業者にとって明らかであろう。プローブと標的ヌクレオチド配列との間のハイブリダイゼーションは、高、中程度または低ストリンジェンシーを含めて、任意の適切な緊縮下で実施できる。典型的には、ハイブリダイゼーションは、高ストリンジェンシー条件下で実施される。
プローブと標的SARS−CoV核酸との間のハイブリダイゼーションの検出は、当該分野で公知の任意の方法、例えば、プローブの標識、第2のプローブ、標的核酸またはそれらの組合せにより実施でき、本発明の目的に適切である。あるいは、ハイブリッドは、検出可能な標識の不在下、質量分析法により検出できる(米国特許第6,300,076号)。
ヒト、動物、または環境(例えば、土壌または水)起源のサンプルを含む任意の適切なサンプルが、本法を用いて分析できる。試験サンプルとしては、尿、血液、精液、髄液、膿、羊水、涙液などの体液または半固体または液体排泄物、例えば、痰、唾液、肺吸引液、膣または尿道排泄物、便または生検または絨毛膜絨毛標本などの固体組織サンプルを挙げることができる。試験サンプルはまた、皮膚、性器、または喉からのかき出しにより採取されたサンプルを含む。
当該プローブは、標的遺伝子を検出するためにキット様式で、好ましくは、プローブ使用に関する取り扱い説明書と共に包装することができる。キットの構成要素は、典型的には本明細書に開示されている方法の選択された特定の実施形態を実施するための取り扱い説明書を含めて、通常の容器内に共に包装される。本明細書に記載される検出法に関する構成要素、例えば、第2のプローブ、および/または試薬および標識検出を実施するための手段(例えば、放射性標識、酵素基質、抗体など)をキットの中に任意に含んでもよい。
(実施例1. プローブ設計)
SARS−CoVの種々のゲノム配列は入手できる(例えば、表22を参照)。
SARSコロナウイルスゲノムの分析に基づいて、我々は、標的遺伝子として3つの遺伝子を選択した。これら3つの遺伝子は、orf1Aおよび1Bのポリメラーゼタンパク質、スパイクタンパク質、およびヌクレオカプシドタンパク質である。我々は、RNA単離用ポジティブコントロールとしてヒトハウスキーピング遺伝子GAPD(グリセルアルデヒド3−ホスフェートデヒドロゲナーゼ)(GenBank番号:NM_002046)を選択した。我々は、組み入れるポジティブコントロールとして、ヒトおよび共通の病原体のヌクレオチド配列に対して相同性を有さない遺伝子(Arabidopsis)(GenBank番号:GenBank番号:AJ441252)を選択した。
SARSコロナウイルスの3つのタンパク質を分析し、それらの保存配列を比較した。マルチプレックスPCRの要件に従って、同様のTm値を有し、距離が1.5kBあり、200BPから900BPの間の増幅産物を有する複数のプライマー対を、種々のゲノム間で保存配列に基づいて設計した。さらに、複数の非重なりオリゴヌクレオチド(70マー)を、プライマー各対の増幅産物に基づいて設計した。BLASTNを用いてこれらのプライマーおよびプローブを最新のNCBI核酸非重複ヌクレオチドデータベースと比較し、プローブとプライマーの特異性を確認した。
血液サンプルの前処理は、比較的複雑な過程を含む。しかしながら、血清中、SARSウイルスは比較的低濃度であることが報告されていることを考慮すると、本明細書に記載された前処理は、検出機会を増加させるために、約2mlの全血から効果的にリンパ球の濃度を高めることができる。
1) 病室の患者から採取されたサンプルを、第1の移動窓に入れる。次いで
該窓のドアを閉めてロックする。
2) 次にサンプルを、第2の移動窓に移す。サンプルをノートに記録し、3つのバーコード標識を印刷する。サンプルを通常の検出のために試験し、前処理移動窓に移す。
1) 前処理過程を実施する病院従業員は、前処理室に入り、ドアを閉める。次いでバイオセーフキャビネットを開ける。キャビネットファンおよびライトは自動的につく。
2) 電源スイッチ、風速スイッチ、および作業ライトスイッチに関する表示ライトを、標準的操作でチェックする。風速選択スイッチの表示ライトがオフ状態であることをチェックする。異常または異例の操作は記録する。
3) アラームスイッチの表示ライトは、自動試験後のバイオセーフキャビネットの標準状態示すアラーム音を立てる。15分後、アラームスイッチの表示ライトからのアラーム音が停止し、バイオセーフキャビネットにおける処理を開始できる。
4) アラーム音が続く場合、キャビネットの処理を開始できないか、または処理中にアラーム音があれば、この処理を中止しなければならない。事故を直ちに記録しなければならない。
5) バイオセーフキャビネットが正常に操作したら、サンプルを、第2の移動窓からとり、キャビネットに入れる。移動窓の上部を、75%アルコールで拭き、0.5%過酢酸でスプレーすることにより清浄にする。次いで移動窓のドアを閉めてロックする、
6) 次に、サンプル前処理の完全処理をバイオセーフキャビネット内で実施する。
1) 抗凝血剤と共に血液(1.8ml)を、3,500rpmで10分間遠心分離する。上層をマーカーペンでマークする。
2) 次に上層血清(約1.0ml)を採取し、1.5mlの滅菌エッペンドルフ遠心管に入れる。
3) エッペンドルフ遠心管に、バーコード(「P」としてマーク)を標識し、配列番号を標識する。
4) 次にサンプルを、ノートに記録する。
5) 血清サンプルを含む遠心管を、専用サンプルボックスに入れて−80℃で保存する。サンプルボックスの外側に、SARS、血清およびサンプル番号の範囲を標識する。
1) リンパ球の単離溶液(3.6ml)を、10mlの遠心管に加える。
2) 滅菌生理食塩水(上記の遠心管に取られた血清に等しい容量)を、血液細胞を含む遠心管に加える。血液細胞を、パスツールピペットを用いて生理食塩水に再懸濁する。
3) 再懸濁された血液細胞を、リンパ球単離溶液の上部に徐々に載せ、1,500rpmで20分間遠心分離する。
4) 層間に位置する細胞を採取し、1.5mlの滅菌エッペンドルフ遠心管に入れてから、細胞を遠心沈殿させるために10,000で5分間遠心分離する。上澄み液を取り出す。
5) 次いで細胞ペレットを含有する管に、バーコード(「C」とマーク)を標識し、配列番号で標識する。
6) サンプルをノートに記録する。
7) 血液細胞サンプルを含む遠心管を、専用サンプルボックスに入れて−80℃で保存する。細胞ボックスの外側に、SARS、血清およびサンプル番号の範囲を標識する。
8) 次にバイオセーフキャビネットのガラス面プレートを開ける。次いでバイオセーフキャビネットにおけるベンチ面および他の表面を、70%アルコールで拭き、0.5%過酢酸でスプレーすることにより滅菌する。
9) 清浄後、ガラス面プレートを閉じる。紫外光をキャビネット内に当て15分間つける。
10) バイオセーフキャビネットの電源スイッチを切ってから、サンプル前処理室を離れる。
1) リンパ球単離溶液を、冷蔵庫から取り出した直後に使用してはいけない。該溶液は、その温度が室温に到達し、溶液がよく混合されてから使用すべきである。
2) 単離処理全体を、18〜28℃で実施する必要がある。高すぎたりまたは低すぎたりする温度は、単離処理の性質に影響を与え得る。
3) ピペットチップ、エッペンドルフ遠心管、手袋、および処理済み試薬または液体は、廃液タンク(0.5%過酢酸を含有)中に廃棄すべきである。廃棄タンク中の全てのものを、実験後、高圧で処理してから廃棄すべきである。
4) 0.5%過酢酸は、、32mlの16%過酢酸をH2O中に希釈し、1,000mlの最終容量を作製することにより調製する。
以下の方法を、RNA調製に用いる:
1. Carrier RNAを含有する調製された緩衝液AVLの560μlをピペットにより1.5ml遠心管に入れる。サンプル容量が140μl以上である場合、緩衝液AVL/Carrier RNAの量を比例して増加させる(例えば、280μlのサンプルは、1120μlの緩衝液AVL/Carrier RNAを必要とする)。
2. 140μlの血漿、血清、尿、細胞培養上澄み液、または細胞無しの体液を、マイクロ遠心管の緩衝液AVL/Carrier RNAに加える。パルスボルテックシングにより15秒間混合する。効率的な溶解を保証するために、サンプルを、緩衝液AVLにより完全に混合して均一溶液を生成することが必要である。一度だけ解凍した凍結サンプルもまた使用できる。
3. 室温(15〜25℃)で10分間温置する。ウイルス粒子溶解は、室温で10分間溶解後完全である。より長い時間温置しても、精製RNAの収量または性質に影響を与えない。潜在的病原菌およびRNアーゼは、緩衝液AVL中で不活化される。
4. 1.5mlのマイクロ遠心管を、蓋の内側からの滴を除くために簡単に遠心分離する。
5. 560μlのエタノール(96〜100%)をサンプルに加え、パルスボルテクシングにより15秒間混合する。混合後、1.5mlのマイクロ遠心管を手短に遠心分離して、蓋の内側の滴を除く。他のアルコールは、RNAの収量および純度の減少をもたらすため、エタノールのみが好ましい。サンプルの容量が140μl超である場合は、比例して、エタノールの量を増やす(例えば、280μlのサンプルは、1120μlのエタノールを必要とする)。効率的な結合を保証するためには、サンプルをエタノールと完全に混合して、均一な溶液を得ることが必要である。
6. ステップ5の溶液630μlを、縁を濡らさないように注意して、QIAampスピンカラム(2mlの採集管中)に入れる。キャップを閉め、6000×g(8000rpm)で1分間、遠心分離する。QIAampスピンカラムを清浄な2mlの採集管に入れ、ろ液を含有する上記管を引き抜く。遠心分離時のクロス汚染を避けるために、各スピンカラムを閉じる。マイクロ遠心分離ノイズを制限するために、6,000×g(8000rpm)で遠心分離を行う。フルスピードで遠心分離しても、ウイルスRNAの収量または純度に影響しない。上記溶液が、上記膜を完全に通過しなかった場合は、全ての溶液が通過するまで、より高スピードで、再度遠心分離する。
7. QIAampスピンカラムを注意して開き、ステップ6を繰り返す。サンプル容量が140μl超の場合は、全てのライセートがスピンカラム上に装入されるまで、このステップを繰り返す。
8. QIAampスピンカラムを注意して開き、500mlの緩衝液AW1を加える。キャップを閉じ、6,000×g(8000rpm)で1分間、遠心分離する。QIAampスピンカラムを2mlの採集管(備え付けの)に入れ、ろ液を含有する上記管を引き抜く。元のサンプル容量が140μl超であっても、緩衝液AW1の容量を増加させる必要はない。
9. QIAampスピンカラムを注意して開き、500mlの緩衝液AW2を加える。キャップを閉じ、フルスピード(20,000×g;14,000rpm)で3分間遠心分離する。すぐステップ10に続けるか、または緩衝液AW2のキャリーオーバー可能性の機会を排除するために、ステップ9aを実施してから、ステップ10に続ける。注意:溶出液中の残留緩衝液AW2は、下流の適用において問題を起こし得る。いくつかの遠心分離ローターは、減速時に振動して、流動を生じ、緩衝液AW2を含有して、QIAampスピンカラムに接触し得る。
上記ローターからのQIAampスピンカラムおよび採集管の除去によってもまた流動が生じて、QIAampスピンカラムに接触し得る。これらの場合は、任意のステップ9aを実施すべきである。
9a. (任意):QIAampスピンカラムを新たな2mlの採集管(備え付けでない)に入れ、ろ液を有する古いほうの採集管を引き抜く。フルスピードで1分間、遠心分離する。
10. QIAampスピンカラムを清浄な1.5mlのマイクロ遠心管(備え付けでない)に入れ、ろ液を含有する古いほうの採集管を引き抜く。QIAampスピンカラムを2mlの採集管(備え付けの)に入れ、ろ液を含有する上記管を引き抜く。QIAampスピンカラムを注意して開き、室温に平衡化した60μlの緩衝液AVEを加える。キャップを閉じ、室温で1分間温置する。6,000×g(8000rpm)で1分間遠心分離する。QIAampスピンカラムから少なくとも90%のウイルスRNAを溶出させる上で、60μlの緩衝液AVEによる1回の溶出で十分である。2×40μlの緩衝液AVEを用いて2回の溶出を実施すれば、収率の10%増加までが生じる。30μl未満の容量での溶出は収率の減少をもたらし、溶出液中のRNA最終濃度を増加させない。ウイルスRNAは、−20℃または−70℃で保存した場合、1年まで安定である。
・ サンプルを室温(15℃〜25℃)に平衡化する。
・ ステップ10の溶出では、緩衝液AVEを室温に平衡化する。
・ 緩衝液AW1、緩衝液AW2、およびキャリアRNAが、14〜15頁の指示にしたがって調製されたかどうかをチェックする。
・ 必要ならば、緩衝液AVL/キャリアRNAにおける沈殿物を、加熱によって再溶解し、使用前に室温まで冷却する。
・ 遠心分離ステップは全て、室温で実施する。
図5はSARS−CoV検出チップの例示的なアレイ形式を示している。
図6Aおよび図6Bは、SARS患者血液サンプル(サンプル番号3)からのSARS−CoV検出を示す。3#SARS患者血液サンプルからリンパ球を単離した。リンパ球からのRNAをQIAampキットを用いて抽出した。テンプレートとして、上記抽出されたRNAを用いて、RT−ネステッドPCRを実施した。044のRT−ネステッドPCR結果は良好であり、ハイブリダイゼーション結果も良好であった。040のRT−ネステッドPCR結果は不良であったが、ハイブリダイゼーション結果は良好であった。これは、このチップハイブリダイゼーション法が高感度で特異的であることを示している。
図7Aおよび図7Bは、SARS患者血液サンプル(サンプル番号4)からのSARS−CoV検出を示す。4#SARS患者血液サンプルからリンパ球を単離した。リンパ球からのRNAをQIAampキットを用いて抽出した。テンプレートとして、上記抽出されたRNAを用いて、RT−ネステッドPCRを実施した。024、040および044のRT−ネステッドPCR結果は良好であり、ハイブリダイゼーション結果も良好であった。
図8は、SARS患者痰サンプル(サンプル番号5)からのSARS−CoV検出を示す。QIAampキットにより、5#SARS患者痰サンプルからRNAを抽出した。テンプレートとして、上記抽出されたRNAを用いて、RT−ネステッドPCRを実施した。040のRT−ネステッドPCR結果は良好であり、ハイブリダイゼーション結果も良好であった。
図9は、SARS患者痰サンプル(サンプル番号6)からのSARS−CoV検出を示す。QIAampキットにより、6#SARS患者痰サンプルからRNAを抽出した。テンプレートとして、上記抽出されたRNAを用いて、RT−ネステッドPCRを実施した。全プローブのRT−ネステッドPCR結果は良好であり、ハイブリダイゼーション結果も良好であった。
図10はSARS−CoV検出チップの別の例示的なアレイ形式を示している。
図11は、図10に示されたSARS−CoV検出チップの、可能性のある陽性結果の全てを示す。
第四のラインは、ただ1セットのプローブ:011,024,040,044上に現れるシグナルによる、可能性のある全ての陽性結果(4つ)を示している
(実施例11.図12に示されたSARS−CoV検出チップの可能性のある陽性結果)
図13は、図12に示されたSARS−CoV検出チップの可能性のある全ての陽性結果を示す。
・ 011+127;
・ 040+127;
・ 011+127+024;
・ 011+127+044;
・ 024+127+044;
・ 011+127+024+040;
・ 024+127;
・ 044+127;
・ 011+127+040;
・ 024+127+040;
・ 044+127+040;
・ 011+127+044;
・ 011+127+024+044;
・ 011+127+024+040+044;および
・ 127+024+040+044。
Claims (74)
- 重症急性呼吸器症候群を引き起こすコロナウイルス(SARS−CoV)および非SARS−CoV感染性生物をアッセイするためのチップであって、前記チップは、支持体を備え、該支持体は、SARS−CoVゲノムの少なくとも10個のヌクレオチドを含むヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブと、以下のオリゴヌクレオチドプローブ:
a) SARS様症状を引き起こす非SARS−CoV感染性生物のヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブであって、前記ヌクレオチド配列が少なくとも10個のヌクレオチドを含む、オリゴヌクレオチドプローブ;
b) 感染宿主の免疫系に損傷を与える非SARS−CoV感染性生物のヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブであって、前記ヌクレオチド配列が、少なくとも10個のヌクレオチドを含む、オリゴヌクレオチドプローブ;または、
c) 非SARS−Covコロナウイルス科ウイルスのヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブであって、前記ヌクレオチド配列が、少なくとも10個のヌクレオチドを含む、オリゴヌクレオチドプローブ、
の1つ以上とが該支持体に固定化され、核酸ハイブリダイゼーションにおける使用に適切である、チップ。 - 前記チップは、支持体を備え、該支持体は、SARS−CoVゲノムの少なくとも2つの異なるヌクレオチド配列に相補的な、少なくとも2つのオリゴヌクレオチドプローブを支持体に固定化され、核酸ハイブリダイゼーションにおける使用に適切であり、前記2つの異なるヌクレオチド配列の各々が、少なくとも10個のヌクレオチドを含んでなる、請求項1に記載のチップ。
- SARS−CoVゲノムの前記少なくとも2つの異なるヌクレオチド配列が、以下:
a) SARS−CoVゲノムの保存領域内に位置する少なくとも10個のヌクレオチドのヌクレオチド配列およびSARS−CoVゲノムの可変領域内に位置する少なくとも10個のヌクレオチドのヌクレオチド配列;または
b) SARS−CoVゲノムの構造タンパク質コード遺伝子内に位置する少なくとも10個のヌクレオチドのヌクレオチド配列およびSARS−CoVゲノムの非構造タンパク質コード遺伝子内に位置する少なくとも10個のヌクレオチドのヌクレオチド配列、
を含んでなる、請求項2に記載のチップ。 - 請求項2に記載のチップであって、以下:
a)以下の3つのオリゴヌクレオチドプローブのうちの少なくとも1つ:固定化コントロールプローブ、ポジティブコントロールプローブおよびネガティブコントロールプローブであって、該固定化コントロールプローブは、標識され、そしてSARS−CoVまたは非SARS−CoV感染性生物を含有するか、または含有することが疑われるサンプルがチップに接触されるとき、いかなるハイブリダイゼーション反応にも関与せず、該ポジティブコントロールプローブは、SARS−CoVまたは非SARS−CoV感染性生物のいずれの配列にも相補的でないが、SARS−CoVまたは非SARS−CoV感染性生物に見出されない、サンプルに含まれる配列に相補的であり、該ネガティブコントロールプローブは、サンプルに含まれるいずれのヌクレオチド配列にも相補的でない;および
b) ブランクスポット、
をさらに含んでなる、チップ。 - 請求項2に記載のチップであって、少なくとも2つのオリゴヌクレオチドプローブを備え、該プローブは、それぞれ、SARS−CoVゲノムの保存領域内に位置するか、SARS−CoVゲノムの構造タンパク質コード遺伝子内に位置するか、またはSARS−CoVゲノムの非構造タンパク質コード遺伝子内に位置する少なくとも10個のヌクレオチドの2つの異なるヌクレオチド配列に相補的である、チップ。
- 請求項2に記載のチップであって、
a) SARS−CoVゲノムの前記保存領域が、SARS−CoVのレプリカーゼ1Aまたは1B遺伝子あるいはヌクレオカプシド(N)遺伝子内に位置する領域であるか;
b) SARS−CoVゲノムの前記構造タンパク質コード遺伝子が、スパイク糖タンパク質(S)、小型エンベロープタンパク質(E)またはヌクレオカプシドタンパク質(N)をコードする遺伝子であるか;あるいは
c) SARS−CoVゲノムの前記非構造タンパク質コード遺伝子が、レプリカーゼ1Aまたは1Bをコードする遺伝子である、
請求項2に記載のチップ。 - SARS−CoVゲノムの前記可変領域が、SARS−CoVのスパイク糖タンパク質(S)遺伝子内に位置する領域である、請求項2に記載のチップ。
- 以下の4つのオリゴヌクレオチドプローブのうちの少なくとも2つを含んでなる、請求項2に記載のチップ:SARS−CoVのレプリカーゼ1Aまたは1B遺伝子内に位置する少なくとも10個のヌクレオチドの2つの異なるヌクレオチド配列に相補的な2つのオリゴヌクレオチドプローブ、SARS−CoVのN遺伝子内に位置する少なくとも10個のヌクレオチドのヌクレオチド配列に相補的な1つのオリゴヌクレオチドプローブ、およびSARS−CoVのS遺伝子内に位置する少なくとも10個のヌクレオチドのヌクレオチド配列に相補的な1つのオリゴヌクレオチドプローブ。
- SARS−CoVのレプリカーゼ1Aまたは1B遺伝子内に位置する前記2つの異なるヌクレオチド配列のうちの1つが、
a) 表13に記載される、レプリカーゼ1Aまたは1Bヌクレオチド配列、あるいはその相補鎖と高ストリンジェンシー下でハイブリダイズするか;あるいは
b) 表13に記載される、ヌクレオチド配列またはその相補鎖を含むレプリカーゼ1Aまたは1Bヌクレオチド配列に対して少なくとも90%の同一性を有する、
ヌクレオチド配列を含んでなる、請求項8に記載のチップ。 - SARS−CoVのレプリカーゼ1Aまたは1B遺伝子内に位置する前記2つの異なるヌクレオチド配列のうちの1つが、表13に記載されるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項9に記載のチップ。
- SARS−CoVの前記N遺伝子内に位置する前記ヌクレオチド配列が、
a) 表13に記載されるNヌクレオチド配列またはその相補鎖と高緊縮下でハイブリダイズするか;または
b) 表13に記載されるヌクレオチド配列またはその相補鎖を含んでなるNヌクレオチド配列に対して少なくとも90%の同一性を有する、
ヌクレオチド配列を含んでなる、請求項8に記載のチップ。 - SARS−CoVの前記N遺伝子内に位置する前記ヌクレオチド配列が、表13に記載されるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項11に記載のチップ。
- SARS−CoVの前記S遺伝子内に位置する前記ヌクレオチド配列が、
a) 表13に記載されるSヌクレオチド配列またはその相補鎖と高ストリンジェンシー下でハイブリダイズするか;あるいは
b) 表13に記載されるヌクレオチド配列またはその相補鎖を含んでなるSヌクレオチド配列に対して少なくとも90%の同一性を有する、
ヌクレオチド配列を含んでなる、請求項8に記載のチップ。 - SARS−CoVの前記S遺伝子内に位置する前記ヌクレオチド配列が、表13に記載されるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項13に記載のチップ。
- 前記固定化コントロールプローブの標識が、化学標識、酵素標識、免疫標識、放射性標識、蛍光標識、発光標識およびFRET標識からなる群より選択される、請求項4に記載のチップ。
- 前記非SARS−CoV配列が、アッセイすべきサンプル内にスパイクされる、請求項4に記載のチップ。
- 前記スパイクされた非SARS−CoV配列が、Arabidopsis起源の配列である、請求項16に記載のチップ。
- SARS−CoVのレプリカーゼ1Aまたは1B遺伝子内に位置する2つの異なるヌクレオチド配列に対して相補的な2つのオリゴヌクレオチドプローブ、SARS−CoVの前記N遺伝子内に位置するヌクレオチド配列に対して相補的なオリゴヌクレオチドプローブ、SARS−CoVの前記S遺伝子内に位置するヌクレオチド配列に対して相補的なオリゴヌクレオチドプローブ、SARS−CoVまたは非SARS−CoV感染性生物を含有するかまたは含有することが疑われるサンプルをチップと接触させても、いずれのハイブリダイゼーション反応にも関与しない標識される固定化コントロールプローブ、SARS−CoVまたは非SARS−CoV感染性生物のいずれの配列にも相補的でないが、SARS−CoVまたは非SARS−CoV感染性生物に見出されず前記サンプルに含有される配列に相補的であるポジティブコントロールプローブ、および前記サンプルに含有されるいずれのヌクレオチド配列にも相補的でないネガティブコントロールプローブ、を含んでなる、請求項8に記載のチップ。
- SARS−CoVの前記レプリカーゼ1B遺伝子内に位置する2つの異なるヌクレオチド配列に対して相補的な前記2つのオリゴヌクレオチドプローブ、SARS−CoVの前記N遺伝子内に位置する前記ヌクレオチド配列に対して相補的なオリゴヌクレオチドプローブ、SARS−CoVの前記S遺伝子内に位置するヌクレオチド配列に対して相補的な前記オリゴヌクレオチドプローブ、前記固定化コントロールプローブ、前記ポジティブコントロールプローブおよび前記ネガティブコントロールプローブのマルチプレックススポットを含んでなる、請求項18に記載のチップ。
- 前記オリゴヌクレオチドプローブの少なくとも1つが、その5’末端に、前記支持体上におけるその固定化を増強するポリdT領域を含んでなる、請求項4に記載のチップ。
- 前記オリゴヌクレオチドプローブの少なくとも1つが、SARS−CoVゲノムの高発現ヌクレオチド配列に対して相補的である、請求項2に記載のチップ。
- SARS様症状を引き起こす非SARS−CoV感染性生物が、ヒトコロナウイルス229E、ヒトコロナウイルスOC43、ヒト腸内コロナウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、RS(respiratory sncytical)ウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、肺炎マイコプラスマ、肺炎クラミジア、麻疹ウイルスおよび風疹ウイルスからなる群より選択される、請求項1に記載のチップ。
- 前記インフルエンザウイルスが、A型インフルエンザウイルスまたはB型インフルエンザウイルスである、請求項22に記載のチップ。
- 前記パラインフルエンザウイルスが、パラインフルエンザウイルス1、パラインフルエンザウイルス2、パラインフルエンザウイルス3およびパラインフルエンザウイルス4からなる群より選択される、請求項22に記載のチップ。
- 感染宿主の免疫系に損傷を与える前記非SARS−CoV感染性生物が、肝炎ウイルス、輸血媒介ウイルス(TTV)、ヒト免疫不全症ウイルス(HIV)、パルボウイルス、ヒトサイトメガロウイルス(HCMV)、エプスタイン−バーウイルス(EBV)および梅毒トレポネーマからなる群より選択される、請求項1に記載のチップ。
- 前記肝炎ウイルスが、A型肝炎ウイルス(HAV)、B型肝炎ウイルス(HBV)、C型肝炎ウイルス(HCV)、D型肝炎ウイルス(HDV)、E型肝炎ウイルス(HEV)およびG型肝炎ウイルス(HGV)からなる群より選択される、請求項25に記載のチップ。
- HIVがHIV Iである、請求項25に記載のチップ。
- パルボウイルスが、パルボウイルスB19である、請求項25に記載のチップ。
- 非SARS−CoVコロナウイルス科のウイルスが、鳥伝染性気管支炎ウイルス、鳥伝染性喉頭気管炎ウイルス、マウス肝炎ウイルス、ウマコロナウイルス、イヌコロナウイルス、ネココロナウイルス、ブタ流行性下痢ウイルス、ブタ伝染性胃腸炎ウイルス、ウシコロナウイルス、ネコ感染性腹膜炎ウイルス、ラットコロナウイルス、新生子ウシ下痢コロナウイルス、ブタ血球凝集性脳脊髄炎ウイルス、ミズナギドリ病ウイルス(puffinosis virus)、シチメンチョウコロナウイルスおよびラットの唾液腺炎ウイルスからなる群より選択される、請求項1に記載のチップ。
- 前記支持体が、シリコン、プラスチック、ガラス、セラミック、ゴムおよびポリマー表面からなる群より選択される、請求項1に記載のチップ。
- サンプル中のSARS−CoVおよび非SARS−CoV感染性生物をアッセイする方法であって、前記方法は、
a) 請求項1に記載のチップを提供すること;
b) 前記チップを、核酸のハイブリダイゼーションに適切な条件下で、SARS−CoVおよび非SARS−CoV感染性生物のヌクレオチド配列を含有するかまたは含有する疑いのあるサンプルと接触させること;ならびに
c) 前記サンプルに存在する場合、前記SARS−CoVまたは前記非SARS−CoV感染性生物の前記ヌクレオチド配列と、前記SARS−CoVゲノムノヌクレオチド配列に相補的な前記オリゴヌクレオチドプローブまたは前記非SARS−CoV感染性生物ゲノムのヌクレオチド配列に相補的な前記オリゴヌクレオチドプローブとの間に形成されるハイブリッドを評価することを含んでなり、
これにより、前記ハイブリッドの一方または両方の検出が、前記サンプル中の前記SARS−CoVおよび/または前記非SARS−CoV感染性生物の存在を示す、方法。 - SARS−CoVが、
a) 請求項2に記載のチップを提供すること;
b) 前記チップを、核酸のハイブリダイゼーションに適切な条件下で、SARS−CoVのヌクレオチド配列を含有するかまたは含有する疑いのあるサンプルと接触させること;
c) 前記サンプルに存在する場合、前記サンプル中の前記SARS−CoVの有無または量を決定するために、前記SARS−CoVヌクレオチド配列と、SARS−CoVゲノムの2つの異なるヌクレオチド配列に相補的な前記少なくとも2つのオリゴヌクレオチドプローブのそれぞれとの間で形成されたハイブリッドを評価すること、
によりアッセイされ、
これにより、前記ハイブリッドの一方または両方の検出が、前記サンプル中の前記SARS−CoVの存在を示す、請求項31に記載の方法。 - SARS−CoVが、
a) 請求項3に記載のチップを提供すること;
b) 前記チップを、核酸のハイブリダイゼーションに適切な条件下で、SARS−CoVのヌクレオチド配列を含有するかまたは含有する疑いのあるサンプルと接触させること;および
c) 前記サンプルに存在する場合、前記サンプル中の前記SARS−CoVの有無または量を決定するために、前記SARS−CoVのヌクレオチド配列と、
i) それぞれ、SARS−CoVゲノムの保存領域内に位置するヌクレオチド配列に相補的な前記オリゴヌクレオチドプローブおよびSARS−CoVゲノムの可変領域内に位置するヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブ;または
ii)SARS−CoVゲノムの構造タンパク質コード遺伝子内に位置するヌクレオチド配列に相補的な前記オリゴヌクレオチドプローブおよびSARS−CoVゲノムの非構造タンパク質コード遺伝子内に位置するヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブ
との間で形成されたハイブリッドを評価すること、
によりアッセイされ、
これにより、前記ハイブリッドの一方または両方の検出が、前記サンプル中の前記SARS−CoVの存在を示す請求項31に記載の方法。 - SARS−CoVが、
a) 請求項4に記載のチップを提供すること;
b) 前記チップを、核酸のハイブリダイゼーションに適切な条件下で、SARS−CoVのヌクレオチド配列を含有するかまたは含有する疑いのあるサンプルと接触させること;
c) サンプル中の前記SARS−CoVの有無または量を決定するために、
(i)前記サンプルに存在する場合、前記SARS−CoVヌクレオチド配列と、SARS−CoVの保存領域内に位置するヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブおよびSARS−CoVの可変領域内に位置するヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブのそれぞれの間に形成されたハイブリッド;
(ii)前記固定化コントロールプローブに含まれる標識、またはポジティブコントロールプローブおよび/またはネガティブコントロールプローブを含むハイブリッド(1つまたは複数);および
(iii) 前記ブランクスポットにおけるシグナル、
を評価することによりアッセイされる、請求項31に記載の方法。 - 前記チップが、SARS−CoVの前記レプリカーゼ1Aまたは1B遺伝子内に位置する2つの異なるヌクレオチド配列に相補的な2つのオリゴヌクレオチドプローブ、SARS−CoVの前記N遺伝子内に位置するヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブ、SARS−CoVの前記S遺伝子内に位置するヌクレオチド配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブ、固定化コントロールプローブ、ポジティブコントロールプローブ、およびネガティブコントロールプローブを含んでなり、SARS−CoVの存在が、
a) SARS−CoVの前記レプリカーゼ1Aまたは1B遺伝子内に位置する2つの異なるヌクレオチド配列に相補的な前記2つのオリゴヌクレオチドプローブの少なくとも1つ、SARS−CoVの前記N遺伝子内に位置するヌクレオチド配列に相補的な前記オリゴヌクレオチドプローブ、および/またはSARS−CoVの前記S遺伝子内に位置するヌクレオチド配列に相補的な前記オリゴヌクレオチドプローブを用いて、陽性ハイブリダイゼーションシグナルが検出される場合、
b) 前記固定化コントロールプローブから、ポジティブシグナルが検出される場合、
c) 前記ポジティブコントロールプローブを用いて、陽性ハイブリダイゼーションシグナルが検出される場合、
d) 前記ネガティブコントロールプローブを用いて、陽性ハイブリダイゼーションシグナルが検出されない場合、
e) 前記ブランクスポットにおいて、陽性ハイブリダイゼーションシグナルが検出されない場合
に、決定される、請求項34に記載の方法。 - SARS−CoVの前記レプリカーゼ1Aまたは1B遺伝子内に位置する2つの異なるヌクレオチド配列に相補的な前記2つのオリゴヌクレオチドプローブの少なくとも1つ、またはSARS−CoVの前記N遺伝子内に位置するヌクレオチド配列に相補的な前記オリゴヌクレオチドプローブを用いて陽性ハイブリダイゼーションシグナルが検出される一方で、SARS−CoVの前記S遺伝子内に位置するヌクレオチド配列に相補的な前記オリゴヌクレオチドプローブを用いて陽性ハイブリダイゼーションシグナルが検出されなければ、SARS−CoVの変異が示される、請求項35に記載の方法。
- 初期段階のSARS患者を診断するために、請求項21に記載のチップを用い、前記方法を用いる、請求項31に記載の方法。
- 前記初期段階のSARS患者とは、SARS−CoVに感染して約1日未満から約3日までである、請求項37に記載の方法。
- 被験体が、SARS−CoVおよび/またはSARS様症状を引き起す非SARS−CoV感染性生物により感染しているかどうかを決定するために用いられる、請求項31に記載の方法。
- SARS様症状が、ヒトコロナウイルス229E、ヒトコロナウイルスOC43、ヒト腸内コロナウイルス、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、RSウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、肺炎マイコプラスマ、肺炎クラミジア、麻疹ウイルスおよび風疹ウイルスからなる群より選択される非SARS−CoV感染性生物により引き起される、請求項39に記載の方法。
- 前記インフルエンザウイルスが、A型インフルエンザウイルスまたはB型インフルエンザウイルスである、請求項40に記載の方法。
- 前記パラインフルエンザウイルスが、パラインフルエンザウイルス1、パラインフルエンザウイルス2、パラインフルエンザウイルス3およびパラインフルエンザウイルス4からなる群より選択される、請求項40に記載の方法。
- 被験体が、被験体の免疫系に損傷を与えるSARS−CoVおよび/または非SARS−CoV感染性生物に感染しているかどうかを決定するために用いられる、請求項31に記載の方法。
- 被験体の免疫系に損傷を与える非SARS−CoV感染性生物が、肝炎ウイルス、輸血媒介ウイルス(TTV),ヒト免疫不全症ウイルス(HIV)、パルボウイルス、ヒトサイトメガロウイルス(HCMV),エプスタイン−バーウイルス(EBV)および梅毒トレポネーマからなる群より選択される、請求項43に記載の方法。
- 前記肝炎ウイルスが、A型肝炎ウイルス(HAV)、B型肝炎ウイルス(HBV)、C型肝炎ウイルス(HCV)、D型肝炎ウイルス(HDV)、E型肝炎ウイルス(HEV)およびG型肝炎ウイルス(HGV)からなる群より選択される、請求項44に記載の方法。
- HIVがHIV Iである、請求項44に記載の方法。
- パルボウイルスが、パルボウイルスB19である、請求項44に記載の方法。
- 被験体が、SARV−CoVおよび/または非SARV−CoVコロナウイルス科のウイルスに感染しているかどうかを決定するために用いられる、請求項31に記載の方法。
- 非SARV−CoVコロナウイルス科ウイルスが、鳥伝染性気管支炎ウイルス、鳥伝染性喉頭気管炎ウイルス、マウス肝炎ウイルス、ウマコロナウイルス、イヌコロナウイルス、ネココロナウイルス、ブタ流行性下痢、ブタ伝染性胃腸炎ウイルス、ウシコロナウイルス、ネコ感染性腹膜炎ウイルス、ラットコロナウイルス、新生子ウシ下痢コロナウイルス、ブタ血球凝集性脳脊髄炎ウイルス、ミズナギドリ病ウイルス、シチメンチョウコロナウイルスおよびラットの唾液腺炎ウイルスからなる群より選択される、請求項48に記載の方法。
- SARS−CoVまたは非SARS−CoV感染性生物の前記ヌクレオチド配列が、SARS−CoVまたは非SARS−CoV感染性生物のゲノム配列、または抽出されたSARS−CoV RNAゲノム配列あるいは抽出された非SARS−CoV感染性生物のゲノム配列から増幅されたDNA配列である、請求項31に記載の方法。
- 前記SARS−CoV RNAゲノム配列が、QIAampウイルスRNAキット、Chomczynski−Sacchi法またはTRIzolを用いてSARS−CoV感染細胞から抽出される、請求項50に記載の方法。
- 前記SARS−CoV RNAゲノム配列が、QIAampウイルスRNAキットを用いてSARS−CoV感染細胞から抽出される、請求項50に記載の方法。
- 前記SARS−CoVまたは非SARS−CoV感染性生物のゲノム配列が、痰または唾液サンプル、血液サンプルのリンパ球から抽出される、請求項31に記載の方法。
- 前記SARS−CoVまたは非SARS−CoV感染性生物のゲノム配列が、ヒト、マウス、イヌ、ラット、ネコ、ウマ、鳥類の鼻咽頭、口咽頭、気管、気管支洗浄液、胸膜液、尿、便、結膜、組織、土壌、水、空気から抽出される、請求項31に記載の方法。
- 前記SARS−CoVまたは非SARS−CoV感染性生物のゲノム配列が、PCRにより増幅される、請求項50に記載の方法。
- 標識が、PCR中に増幅されたDNA配列に組み込まれる、請求項55に記載の方法。
- PCRが、従来のPCR,マルチプレックスPCR、ネステッドPCRまたはRT−PCRを含んでなる、請求項55に記載の方法。
- PCRが、2ステップ式のネステッドPCRを含んでなり、第1のステップが、RT−PCRであり、第2のステップが、従来のPCRである、請求項55に記載の方法。
- PCRが、複数の5’および3’特異的プライマーを用いる1ステップマルチプレックスRT−PCRを含んでなり、前記特異的プライマーの各々が、増幅すべき標的配列に相補的な特異的配列および共通配列、および5’および3’ユニバーサルプライマーを含んでなり、5’ユニバーサルプライマーが、5’特異的プライマーの共通配列に相補的であり、3’ユニバーサルプライマーが、3’特異的プライマーの共通配列に相補的であり、前記PCRにおいて、5’および3’ユニバーサルプライマーの濃度が、それぞれ、5’および3’特異的プライマーの濃度に等しいか、またはそれよりも高い、請求項55に記載の方法。
- 前記3’ユニバーサルプライマーおよび/または前記5’ユニバーサルプライマーが、標識される、請求項59に記載の方法。
- 前記標識が、蛍光標識である、請求項60に記載の方法。
- 前記PCRが、マルチプレックスネステッドPCRを含んでなる、請求項55に記載の方法。
- 前記PCRが、表18または表19〜表21に記載されるプライマー対のうち、少なくとも1対を用いて行われる、請求項55に記載の方法。
- A型インフルエンザウイルス、B型インフルエンザウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトコロナウイルス229EまたはヒトコロナウイルスOC43のヌクレオチド配列を増幅させるためのオリゴヌクレオチドプライマーであって、前記オリゴヌクレオチドプライマーが:
a) 高ストリンジェンシー下、A型インフルエンザウイルス、B型インフルエンザウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトコロナウイルス229EまたはヒトコロナウイルスOC43の表1〜6に記載される標的ヌクレオチド配列またはそれらの相補鎖とハイブリダイズするか;あるいは
b) 表1〜6に記載されるヌクレオチド配列またはそれらの相補鎖を含んでなるA型インフルエンザウイルス、B型インフルエンザウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトコロナウイルス229EまたはヒトコロナウイルスOC43の、標的ヌクレオチド配列に対して少なくとも90%の同一性を有する、
ヌクレオチド配列を含んでなるオリゴヌクレオチドプライマー。 - DNA、RNA、PNAまたはそれらの誘導体を含んでなる、請求項64に記載のプライマー。
- 表1〜表6に記載されるヌクレオチド配列またはその相補鎖を含んでなる、請求項64に記載のプライマー。
- A型インフルエンザウイルス、B型インフルエンザウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトコロナウイルス229EまたはヒトコロナウイルスOC43のヌクレオチド配列を増幅させるためのキットであって:
a) 請求項64に記載のプライマー;および
b) 請求項64に記載の前記プライマーを用いて、A型インフルエンザウイルス、B型インフルエンザウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトコロナウイルス229EまたはヒトコロナウイルスOC43のヌクレオチド配列を増幅できる核酸ポリメラーゼ、
を含んでなるキット。 - 前記核酸ポリメラーゼが、逆転写酵素である、請求項67に記載のキット。
- A型インフルエンザウイルス、B型インフルエンザウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトコロナウイルス229EまたはヒトコロナウイルスOC43のヌクレオチド配列にハイブリダイズするためのオリゴヌクレオチドプローブであって、前記オリゴヌクレオチドプローブが、:
a) 高ストリンジェンシー下、A型インフルエンザウイルス、B型インフルエンザウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトコロナウイルス229EまたはヒトコロナウイルスOC43の、表7〜表12に記載される標的ヌクレオチド配列またはそれらの相補鎖とハイブリダイズするか;あるいは
b) A型インフルエンザウイルス、B型インフルエンザウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトコロナウイルス229EまたはヒトコロナウイルスOC43の、表7〜表12に記載される標的ヌクレオチド配列またはそれらの相補鎖に対して少なくとも90%の同一性を有する、
ヌクレオチド配列を含んでなるオリゴヌクレオチドプローブ。 - DNA、RNA、PNAまたはそれらの誘導体を含んでなる、請求項69に記載のプローブ。
- 表7〜表12に記載されるヌクレオチド配列またはその相補鎖を含んでなる、請求項69に記載のプローブ。
- 標識されている、請求項69に記載のプローブ。
- 前記標識が、化学標識、酵素標識、免疫標識、放射性標識、蛍光標識、発光標識およびFRET標識からなる群より選択される、請求項72に記載のプローブ。
- A型インフルエンザウイルス、B型インフルエンザウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトコロナウイルス229EまたはヒトコロナウイルスOC43のヌクレオチド配列のハイブリダイゼーション分析用キットであって:
a) 請求項69に記載のプライマー;および
b) A型インフルエンザウイルス、B型インフルエンザウイルス、ヒトメタニューモウイルス、ヒトアデノウイルス、ヒトコロナウイルス229EまたはヒトコロナウイルスOC43のヌクレオチド配列と前記プローブとの間に形成されたハイブリッドを評価するための手段、
を含んでなる、キット。
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/CN2003/000561 WO2005005658A1 (en) | 2003-07-14 | 2003-07-14 | Methods and compositions for detecting sars virus and other infectious agents |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2007523594A true JP2007523594A (ja) | 2007-08-23 |
Family
ID=33569592
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2005503791A Ceased JP2007523594A (ja) | 2003-07-14 | 2003-07-14 | Sarsウイルスおよび他の感染因子を検出するための方法および組成物 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20070042350A1 (ja) |
EP (1) | EP1644516A4 (ja) |
JP (1) | JP2007523594A (ja) |
CN (1) | CN100510101C (ja) |
AU (1) | AU2003254594A1 (ja) |
WO (1) | WO2005005658A1 (ja) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013528049A (ja) * | 2010-05-19 | 2013-07-08 | キアゲン ガイサーズバーグ アイエヌシー. | 核酸の配列特異的な精製及び多重分析のための方法及び組成物 |
JP2014057565A (ja) * | 2012-09-14 | 2014-04-03 | Ngk Insulators Ltd | 標的核酸の検出方法 |
JP2016523076A (ja) * | 2013-06-14 | 2016-08-08 | ドイッチェス・クレープスフォルシュングスツェントルムDeutsches Krebsforschungszentrum | 癌の将来の発生についての早期マーカーならびに癌の治療および予防のための標的としてのTTV miRNA配列 |
JP6976621B1 (ja) * | 2021-02-04 | 2021-12-08 | 株式会社Icst | 検査器具、検査キットおよび検査方法 |
JP2022119706A (ja) * | 2021-02-04 | 2022-08-17 | 株式会社Icst | 検査器具、検査キットおよび検査方法 |
Families Citing this family (49)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060094105A1 (en) | 1998-04-24 | 2006-05-04 | University Hospitals Of Cleveland | Mixed cell diagnostic systems for detection of respiratory, herpes and enteric viruses |
US8258288B2 (en) * | 2002-02-20 | 2012-09-04 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of respiratory syncytial virus (RSV) expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
US20070248949A1 (en) * | 2003-12-17 | 2007-10-25 | Agency For Science, Technology And Research | Sensitive and Specific Test to Detect Sars Coronavirus |
ES2392445T3 (es) | 2004-07-13 | 2012-12-10 | Gen-Probe Incorporated | Composiciones y métodos para la detección de ácido nucleico del virus de la hepatitis A |
US20060252081A1 (en) * | 2005-05-06 | 2006-11-09 | Applera Corporation | PNA probes, mixtures, methods and kits pertaining to the determination of Mycoplasma and related Mollicutes |
US8124335B2 (en) | 2005-05-06 | 2012-02-28 | Gen-Probe Incorporated | Compositions and assays to detect influenza virus A and B nucleic acids |
JP2009536825A (ja) * | 2006-05-11 | 2009-10-22 | ジーンオーム サイエンシーズ、インク. | 可変ゲノムのための100%配列一致検出方法 |
WO2008046923A2 (en) * | 2006-10-20 | 2008-04-24 | Innogenetics N.V. | Methodology for analysis of sequence variations within the hcv ns3/4a genomic region |
EP2023142A1 (en) * | 2007-07-30 | 2009-02-11 | Mikrogen Molekularbiologische Entwicklungs-GmbH | Immunoassay utilizing recombinant nucleocapsid-proteins for detection of antibodies to human coronaviruses |
AU2010226466A1 (en) * | 2009-03-20 | 2011-10-20 | Alios Biopharma, Inc. | Substituted nucleoside and nucleotide analogs |
WO2011035322A2 (en) * | 2009-09-21 | 2011-03-24 | Intelligent Medical Devices, Inc. | Optimized probes and primers and methods of using same for the binding, detection, differentiation, isolation and sequencing of influenza a; influenza b; 2009 inlfuenza a/h1n1; and a 2009 influenza a/h1n1 rna sequence mutation associated with oseltamivir resistance |
KR20110081717A (ko) * | 2010-01-08 | 2011-07-14 | 주식회사 파나진 | 항바이러스제 내성을 갖는 b형 간염 바이러스 검출을 위한 pna 프로브, 키트 및 방법 |
CN101838710A (zh) * | 2010-06-04 | 2010-09-22 | 湖州市疾病预防控制中心 | 甲型肝炎病毒核酸荧光定量rt-pcr检测试剂盒及使用方法 |
CA2810928A1 (en) | 2010-09-22 | 2012-03-29 | Alios Biopharma, Inc. | Substituted nucleotide analogs |
US9528163B2 (en) * | 2011-06-20 | 2016-12-27 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Reagents and methods for detecting HCV |
GB201121210D0 (en) | 2011-12-09 | 2012-01-18 | Health Prot Agency | Respiratory infection assay |
CA2860234A1 (en) | 2011-12-22 | 2013-06-27 | Alios Biopharma, Inc. | Substituted phosphorothioate nucleotide analogs |
CN104321333A (zh) | 2012-03-21 | 2015-01-28 | 沃泰克斯药物股份有限公司 | 硫代氨基磷酸酯核苷酸前药的固体形式 |
WO2013142157A1 (en) | 2012-03-22 | 2013-09-26 | Alios Biopharma, Inc. | Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog |
WO2015188899A1 (en) * | 2014-06-12 | 2015-12-17 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Novel ttv mirna sequences as an early marker for the future development of cancer and as a target for cancer treatment and prevention |
CN103725799B (zh) * | 2014-01-15 | 2015-03-11 | 湖南圣维尔医学检验所有限公司 | 一种检测风疹病毒rna的方法及试剂盒 |
CN104846119A (zh) * | 2015-04-18 | 2015-08-19 | 湖北创瑞生物科技有限公司 | 一种麻疹病毒一步实时荧光定量rt-pcr试剂盒 |
CN106313043B (zh) * | 2015-10-14 | 2019-04-26 | 山东世纪元通智能科技有限公司 | 一种路径点式行走机器人系统的控制方法 |
CN107164562B (zh) * | 2017-06-27 | 2021-07-09 | 华东医院 | 腹泻相关病毒多重基因检测体系及其试剂盒和应用 |
CN109420242A (zh) * | 2017-08-27 | 2019-03-05 | 南京乐朋电子科技有限公司 | 纳米级医疗机器人 |
CN107475450A (zh) * | 2017-09-13 | 2017-12-15 | 河南省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一种用于猪流行性腹泻病毒新型变异株与疫苗株鉴别诊断的引物组及试剂盒 |
CN107586884B (zh) * | 2017-10-25 | 2020-08-18 | 东北农业大学 | 一种用于猫传染性腹膜炎病毒检测的rt-pcr引物组,含有该引物组的试剂盒及其应用 |
CN108761077A (zh) * | 2018-08-06 | 2018-11-06 | 南京农业大学 | 禽病毒病蛋白芯片抗体检测试剂盒及其制备方法和应用 |
CN109825567B (zh) * | 2018-12-27 | 2022-06-10 | 博奥生物集团有限公司 | 肺炎诊断用circRNA生物标志物及应用、引物和试剂 |
CN111074001B (zh) * | 2019-12-19 | 2023-03-21 | 苏州华益美生物科技有限公司 | 9种呼吸道病原体核酸协同多重pcr检测 |
WO2021156882A1 (en) * | 2020-02-04 | 2021-08-12 | Indian Institute Of Technology Delhi | Primer sets, biomarkers, kit and applications thereof |
WO2021168427A1 (en) * | 2020-02-20 | 2021-08-26 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Compositions and methods for rapid detection of sars-cov-2 |
WO2021164488A1 (en) * | 2020-02-21 | 2021-08-26 | The University Of Hong Kong | COMPOSITIONS AND METHODS FOR DETECTING SARS-CoV-2 |
CN111273026B (zh) * | 2020-02-21 | 2023-05-09 | 无锡市人民医院 | 一种新型冠状肺炎病毒快速检测试纸条及其应用 |
KR20220152205A (ko) * | 2020-03-09 | 2022-11-15 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(sars-cov-2), 인플루엔자 a 및 인플루엔자 b를 검출하기 위한 조성물 및 방법 |
CN111041129B (zh) * | 2020-03-13 | 2020-06-05 | 博奥生物集团有限公司 | 检测6项呼吸道病毒的引物探针组合、试剂盒及应用 |
CN111388018B (zh) * | 2020-03-20 | 2023-09-19 | 威图姆卡医疗中心 | 采集下呼吸道样本的方法及其装置、空气消毒方法及其装置 |
CN111206123B (zh) * | 2020-04-21 | 2020-07-24 | 珠海丽珠试剂股份有限公司 | 用于血液筛查的核酸组合物和试剂盒 |
WO2021212523A1 (zh) * | 2020-04-25 | 2021-10-28 | Huang Wanqiu | 利用巢式RPA技术检测SARS-CoV-2的引物对、探针、试剂盒及其应用 |
GB202006216D0 (en) * | 2020-04-28 | 2020-06-10 | Quantumdx Group Ltd | A SARS-CoV-2 molecular diagnostic test |
WO2021247756A1 (en) * | 2020-06-02 | 2021-12-09 | Apc Research Assets Llc | Recombinant human cc10 protein for treatment of influenza, ebola, and coronavirus |
CN111893212A (zh) * | 2020-06-17 | 2020-11-06 | 安徽农业大学 | 猫传染性腹膜炎病毒实时荧光定量pcr引物组及试剂盒 |
CN111808989A (zh) * | 2020-06-18 | 2020-10-23 | 重庆浦洛通基因医学研究院有限公司 | 一种冠状病毒/流感病毒/鼻病毒核酸联合检测试剂盒及使用方法 |
WO2022013761A1 (en) * | 2020-07-14 | 2022-01-20 | University Of Peradeniya | System and method for screening patients infected with severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 |
CN111826273B (zh) * | 2020-07-22 | 2023-03-21 | 上海逢伙泰企业管理有限公司 | 一种用于核酸检测的自动化全封闭微流控芯片 |
CN112063752A (zh) * | 2020-08-20 | 2020-12-11 | 广东省科学院动物研究所 | 一种通用型冠状病毒pcr引物及其应用 |
US11175293B1 (en) | 2021-01-04 | 2021-11-16 | University Of Utah Research Foundation | Rapid assay for detection of SARS-CoV-2 antibodies |
CN113981147B (zh) * | 2021-11-17 | 2023-08-01 | 华南农业大学 | 用于检测多种呼吸道病毒的组合物及其试剂盒和应用 |
CN114561492A (zh) * | 2022-02-28 | 2022-05-31 | 宁夏回族自治区疾病预防控制中心(宁夏回族自治区性病艾滋病防治中心) | 一种新冠病毒核酸检测阳性质控品及其制备方法和用途 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5800992A (en) * | 1989-06-07 | 1998-09-01 | Fodor; Stephen P.A. | Method of detecting nucleic acids |
US5474796A (en) * | 1991-09-04 | 1995-12-12 | Protogene Laboratories, Inc. | Method and apparatus for conducting an array of chemical reactions on a support surface |
EP0880598A4 (en) * | 1996-01-23 | 2005-02-23 | Affymetrix Inc | RAPID EVALUATION OF NUCLEIC ACID ABUNDANCE DIFFERENCE, WITH A HIGH-DENSITY OLIGONUCLEOTIDE SYSTEM |
EP1203945B1 (en) * | 2000-10-26 | 2006-12-20 | Agilent Technologies, Inc. (a Delaware corporation) | Microarray |
US7582740B2 (en) * | 2003-04-17 | 2009-09-01 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Methods and kits for detecting SARS-associated coronavirus |
CN1177224C (zh) * | 2003-04-26 | 2004-11-24 | 杭州华大基因研发中心 | 检测sars冠状病毒抗体的方法及其试剂盒 |
CN100350055C (zh) * | 2003-06-26 | 2007-11-21 | 上海科华生物工程股份有限公司 | 一种定量检测传染性非典型肺炎冠状病毒拷贝数的试剂盒 |
-
2003
- 2003-07-14 EP EP03817386A patent/EP1644516A4/en not_active Withdrawn
- 2003-07-14 CN CNB038267896A patent/CN100510101C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2003-07-14 WO PCT/CN2003/000561 patent/WO2005005658A1/en active Application Filing
- 2003-07-14 JP JP2005503791A patent/JP2007523594A/ja not_active Ceased
- 2003-07-14 US US10/564,378 patent/US20070042350A1/en not_active Abandoned
- 2003-07-14 AU AU2003254594A patent/AU2003254594A1/en not_active Abandoned
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013528049A (ja) * | 2010-05-19 | 2013-07-08 | キアゲン ガイサーズバーグ アイエヌシー. | 核酸の配列特異的な精製及び多重分析のための方法及び組成物 |
JP2014057565A (ja) * | 2012-09-14 | 2014-04-03 | Ngk Insulators Ltd | 標的核酸の検出方法 |
JP2016523076A (ja) * | 2013-06-14 | 2016-08-08 | ドイッチェス・クレープスフォルシュングスツェントルムDeutsches Krebsforschungszentrum | 癌の将来の発生についての早期マーカーならびに癌の治療および予防のための標的としてのTTV miRNA配列 |
JP2020005657A (ja) * | 2013-06-14 | 2020-01-16 | ドイッチェス・クレープスフォルシュングスツェントルムDeutsches Krebsforschungszentrum | 癌の将来の発生についての早期マーカーならびに癌の治療および予防のための標的としてのTTV miRNA配列 |
JP6976621B1 (ja) * | 2021-02-04 | 2021-12-08 | 株式会社Icst | 検査器具、検査キットおよび検査方法 |
JP2022119706A (ja) * | 2021-02-04 | 2022-08-17 | 株式会社Icst | 検査器具、検査キットおよび検査方法 |
JP7133247B2 (ja) | 2021-02-04 | 2022-09-08 | 株式会社Icst | 検査器具、検査キットおよび検査方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2003254594A8 (en) | 2005-01-28 |
EP1644516A4 (en) | 2007-03-21 |
CN1802440A (zh) | 2006-07-12 |
AU2003254594A1 (en) | 2005-01-28 |
CN100510101C (zh) | 2009-07-08 |
EP1644516A1 (en) | 2006-04-12 |
WO2005005658A1 (en) | 2005-01-20 |
US20070042350A1 (en) | 2007-02-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2007523594A (ja) | Sarsウイルスおよび他の感染因子を検出するための方法および組成物 | |
US5283171A (en) | Compositions for and detection of human papillomavirus by specific oligonucleotide polymerase primers using the polymerase chain reaction | |
JP2007506404A (ja) | 核酸分子を検出するための迅速な方法 | |
ES2832609T3 (es) | Métodos para la amplificación y detección de polinucleótidos a base de helicasas | |
KR101063037B1 (ko) | 핵산 증폭법을 이용한 인간 유두종 바이러스의 검출 방법및 핵산쇄 고정화 담체 | |
US7718362B2 (en) | DNA chip based genetic typing | |
WO2007130519A2 (en) | Viral nucleic acid microarray and method of use | |
US20070037140A1 (en) | Methods and compositions for detecting sars virus | |
EP1969145B1 (en) | Oligonucleotide microarray and method for identification of pathogens | |
US20220333215A1 (en) | Methods and compositions for detecting co-infection with sars-cov-2 and influenza a virus and/or influenza b virus | |
EP0622464A2 (en) | Nucleic acid assay procedure | |
US20030219757A1 (en) | IS6110 based molecular detection of Mycobacterium tuberculosis | |
US20090136916A1 (en) | Methods and microarrays for detecting enteric viruses | |
CN111961763A (zh) | 一种新型冠状病毒检测基因芯片 | |
US20040009574A1 (en) | Compositions and methods for detecting streptococcus agalactiae capsular polysaccharide synthesis genes | |
US20030219755A1 (en) | Compositions and methods for performing hybridization assays using target enhanced signal amplification (TESA) | |
WO2004101733A1 (fr) | Dispositif d'amplification pcr pour reaction a etapes multiples et tube d'amplification pcr sans lavage pour detection de genes | |
US20060073475A1 (en) | Compositions and methods for detecting pathogenic bacteria expressing chaperonin proteins | |
KR100460747B1 (ko) | 인체포진 바이러스의 프로브, 이를 이용한 인체포진바이러스의 유전형 분석용 키트 및 유전형 분석방법 | |
AU2021372524A1 (en) | Compositions and methods for detecting influenza a, influenza b, and sars-cov-2 | |
WO2010125420A1 (en) | A method for detection and identification of hpv16 variants using primers and probes | |
JP2007289179A (ja) | プローブ、プローブセット、プローブ固定担体及び検査方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090529 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090818 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20090908 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100108 |
|
A911 | Transfer of reconsideration by examiner before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20100121 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100223 |
|
A045 | Written measure of dismissal of application [lapsed due to lack of payment] |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A045 Effective date: 20100617 |