JP2007520228A5 - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- JP2007520228A5 JP2007520228A5 JP2006551865A JP2006551865A JP2007520228A5 JP 2007520228 A5 JP2007520228 A5 JP 2007520228A5 JP 2006551865 A JP2006551865 A JP 2006551865A JP 2006551865 A JP2006551865 A JP 2006551865A JP 2007520228 A5 JP2007520228 A5 JP 2007520228A5
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- recombinant
- seq
- dna
- ssx
- producing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 20
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims 16
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 claims 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims 10
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims 8
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N Imidazole Chemical compound C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 8
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 claims 8
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 claims 8
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims 8
- WFPZSXYXPSUOPY-ROYWQJLOSA-N ADP α-D-glucoside Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H]1O)O)N1C=2N=CN=C(C=2N=C1)N)OP(O)(=O)OP(O)(=O)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WFPZSXYXPSUOPY-ROYWQJLOSA-N 0.000 claims 7
- 102100017079 MPG Human genes 0.000 claims 7
- 101710007617 MPG Proteins 0.000 claims 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims 6
- 239000000047 product Substances 0.000 claims 6
- 229920002676 Complementary DNA Polymers 0.000 claims 5
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N HEPES Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 5
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 claims 5
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L MgCl2 Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 5
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N edta Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims 5
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 claims 5
- 101700011961 DPOM Proteins 0.000 claims 4
- 108010043934 EC 2.4.1.13 Proteins 0.000 claims 4
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 4
- 101710029649 MDV043 Proteins 0.000 claims 4
- 101700061424 POLB Proteins 0.000 claims 4
- 101700054624 RF1 Proteins 0.000 claims 4
- 240000001016 Solanum tuberosum Species 0.000 claims 4
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims 4
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 claims 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 4
- 108091007521 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims 4
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N Nicotinamide adenine dinucleotide Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims 3
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 claims 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims 3
- HSCJRCZFDFQWRP-JZMIEXBBSA-L UDP-α-D-glucose(2-) Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-JZMIEXBBSA-L 0.000 claims 3
- 230000024881 catalytic activity Effects 0.000 claims 3
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 claims 3
- 238000011045 prefiltration Methods 0.000 claims 3
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 claims 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims 3
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 claims 3
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 claims 2
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 claims 2
- WMGFVAGNIYUEEP-WUYNJSITSA-N Amylopectin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](OC[C@@H]2[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]3[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)CO)O2)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@H]1O WMGFVAGNIYUEEP-WUYNJSITSA-N 0.000 claims 2
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 claims 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims 2
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 claims 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 claims 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 claims 2
- 102000010705 glucose-6-phosphate dehydrogenase activity proteins Human genes 0.000 claims 2
- 108040005050 glucose-6-phosphate dehydrogenase activity proteins Proteins 0.000 claims 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims 2
- 230000000813 microbial Effects 0.000 claims 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims 2
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 claims 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 claims 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims 2
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 claims 1
- 101710036873 NUDT14 Proteins 0.000 claims 1
- 102100010762 NUDT14 Human genes 0.000 claims 1
- 101710036861 NUDT22 Proteins 0.000 claims 1
- 240000008962 Nicotiana tabacum Species 0.000 claims 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 claims 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims 1
- 108010003581 Ribulose-Bisphosphate Carboxylase Proteins 0.000 claims 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 claims 1
- 108010054269 Uridine Diphosphate Glucose Dehydrogenase Proteins 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 230000002068 genetic Effects 0.000 claims 1
- 125000003372 histidine group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 claims 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 claims 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims 1
Claims (43)
- 高レベルの可溶性且つ活性型の組換型スクロースシンターゼ(SS)酵素を効率的に作製する方法であって、
a)ジャガイモSS4のSSのアイソフォームをコードする遺伝子のヌクレオチド配列から配列番号1及び配列番号2によって示される2種のプライマーを得、それらのプライマーを用いて、ジャガイモの葉のcDNAライブラリーに基づき、配列番号3によって示される2418塩基対のcDNA断片をPCRによって増幅するステップと、
b)第1のベクター中に前記cDNA断片を挿入するステップと、
c)前記第1のベクターを、増幅場所とする第1の宿主微生物中に挿入するステップと、
d)増幅された構築物を少なくとも2種の制限酵素で消化するステップと、
e)先に消化した後に、演繹されるアミノ酸配列が配列番号4によって示されるSSXをコードするcDNAを含有するDNA断片を得るステップと、
f)ヒスチジンに富む配列をコードするヌクレオチド配列を含むベクターと同じ制限部位に前記断片をクローニングし、前記ヒスチジンに富む末端をSSに融合し、第2の発現ベクターを作製するステップと、
g)この第2のベクターを、発現場所とする第2の宿主微生物中に挿入するステップと、
h)前記形質転換された微生物を、可溶性且つ活性型のSSXを合成するのに適した培養条件でインキュベートするステップと、
i)活性型のSSXを単離及び精製するステップと
を含むことを特徴とする方法。 - ステップb)で使用される第1の発現ベクターが、配列番号3に挿入されると図3Aの構築物pSSを生じるプラスミドpSKであることを特徴とする、前記請求項に記載の組換型SSの作製方法。
- pSKプラスミドを増幅させるためにステップc)で使用される第1の宿主微生物が大腸菌(E.coli)XL1 Blueであることを特徴とする、前記請求項に記載の組換型SSの作製方法。
- ステップd)で使用される制限酵素がNcoI及びNotIであることを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の組換型SSの作製方法。
- ステップf)において、ステップd)後に遊離されるDNA断片がクローニングされる制限部位が、図3Bで示されるプラスミドpET−28a(+)と同じであり、図3Cで示されるpET−SSプラスミドを生じることを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の組換型SSの作製方法。
- ステップg)で使用される第2の宿主微生物が大腸菌(Escherichia coli)のBLR(DE3)株であることを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の組換型SSの作製方法。
- 可溶性且つ活性型のSSXを合成するのに適した培養条件においてステップh)でインキュベートされる、ステップg)で形質転換された株がCECT5850であることを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の組換型SSの作製方法。
- SSXを合成するのに適した培養条件が、細菌培養物を20℃の温度下に置くステップを含むことを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の組換型SSの作製方法。
- SSXの精製が、好ましくは、イミダゾールを好ましくは200mMの濃度で含む溶出緩衝液を用いた、ヒスチジン残基に富むアミノ酸配列に対するアフィニティクロマトグラフィーによって実施されることを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の組換型SSの作製方法。
- 活性型の精製されたSSX酵素を維持するために、アフィニティクロマトグラフィーから溶出された前記精製酵素を直ちに透析にかけて、微量のイミダゾールを除去することを特徴とする、前記請求項のいずれか一項に記載の組換型SSの作製方法。
- 組換型のジャガイモSS5アイソフォームの作製方法であって、
a)構築物pSSを鋳型として使用し、[配列番号5、配列番号6]、[配列番号7、配列番号8]、及び[配列番号9、配列番号10]の配列を有するプライマー対を連続して使用した後に特異的突然変異誘発を起こすことによって、配列番号11によって示される2418塩基対のDNA断片を得るステップと、
b)第1のベクター中に前記DNA断片を挿入するステップと、
c)前記第1のベクターを、増幅場所とする第1の宿主微生物中に挿入するステップと、
d)増幅された構築物を少なくとも2種の制限酵素で消化するステップと、
e)先に消化した後に、アミノ酸配列が配列番号12によって示されるSS5をコードするDNA断片を得るステップと、
f)ヒスチジンに富む配列をコードするヌクレオチド配列を含むベクターと同じ制限部位に前記断片をクローニングし、前記ヒスチジンに富む末端をSS5に融合し、第2の発現ベクターを作製するステップと、
g)この第2のベクターを、発現場所とする第2の宿主微生物中に挿入するステップと、
h)前記形質転換された微生物を、可溶性且つ活性型のSS5を合成するのに適した培養条件でインキュベートするステップと、
i)活性型のSS5を単離及び精製するステップと
を含むことを特徴とする方法。 - ステップb)が構築物pSS5を生じることを特徴とする、請求項11に記載の組換型SS5の作製方法。
- pSS5を増幅させるためにステップc)で使用される第1の宿主微生物が大腸菌XL1 Blueであることを特徴とする、請求項11又は12のいずれか一項に記載の組換型SS5の作製方法。
- ステップd)で使用される制限酵素がNcoI及びNotIであることを特徴とする、請求項11から13までのいずれか一項に記載の組換型SS5の作製方法。
- ステップf)において、ステップd)後に遊離されるDNA断片がクローニングされる制限部位が、プラスミドpET−28a(+)と同じであり、プラスミドpET−SS5を生じることを特徴とする、請求項11から14までのいずれか一項に記載の組換型SS5の作製方法。
- ステップg)で使用される第2の宿主微生物が大腸菌のBLR(DE3)株であることを特徴とする、請求項11から15までのいずれか一項に記載の組換型SS5の作製方法。
- 可溶性且つ活性型のSS5を合成するのに適した培養条件においてステップh)でインキュベートされる、ステップg)で形質転換された株がCECT5849であることを特徴とする、請求項11から16までのいずれか一項に記載の組換型SS5の作製方法。
- SS5を合成するのに適した培養条件が、細菌培養物を20℃の温度下に置くステップを含むことを特徴とする、請求項11から17までのいずれか一項に記載の組換型SS5の作製方法。
- SS5の精製が、好ましくは、イミダゾールを好ましくは200mMの濃度で含む溶出緩衝液を用いたアフィニティクロマトグラフィーによって実施されることを特徴とする、請求項11から18までのいずれか一項に記載の組換型SS5の作製方法。
- 活性型の精製されたSS5酵素を維持するために、アフィニティクロマトグラフィーから溶出された前記精製酵素を直ちに透析にかけて、任意の微量のイミダゾールを除去することを特徴とする、請求項11から19までのいずれか一項に記載の組換型SS5の作製方法。
- 配列番号4によって示される演繹された配列を有し、スクロースシンターゼ(SS)活性を示すことを特徴とする、請求項1から10までに記載の方法で請求されるようにして得ることができる、可溶性且つ活性な組換型SSX酵素製品。
- スクロース及びUDPが存在する場合の比活性がタンパク質1mg当たり80ユニットであり、Km(UDP)=0.25mM及びKm(スクロース)=30mMの動態パラメータを有することを特徴とする、請求項21に記載の可溶性且つ活性な組換型SSX酵素製品。
- 配列番号12によって示される演繹されたアミノ酸配列を有し、スクロースシンターゼ(SS)活性を示すことを特徴とする、請求項11から20までに記載の方法で請求されるようにして得ることができる、請求項21及び22に記載の可溶性且つ活性な組換型酵素製品のSS5アイソフォーム。
- UDP及びADPが存在する場合の比活性がそれぞれタンパク質1mg当たり80ユニット及び60ユニットであり、UDP及びADPに対する動態パラメータがKm(UDP)=Km(ADP)=0.3mMであることを特徴とする、請求項23に記載の組換型SS5アイソフォーム。
- 適切な条件下でUDP及びSSXをインキュベートし、次いで、生成されたUDPGを単離及び精製することを含むことを特徴とする、請求項21又は22に記載の酵素製品を使用してUDPGを作製する方法。
- 請求項25に記載の方法であって、
a)以下の溶液、即ち、
スクロース 1M
HEPES、pH7.0 50mM
EDTA 1mM
ポリエチレングリコール 20%
MgCl2 1mM
KCl 15mM
UDP 100mM
SSX 30U
の100mlを37℃で12時間インキュベートするステップと、
b)好ましくは100℃で90秒間加熱することによって反応を停止するステップと、
c)10000gで10分間遠心分離するステップと、
d)上清をHPLCによるクロマトグラフィーにかけ、従来の方法によってUDPGを溶離及び精製するステップと
を含むことを特徴とする、上記方法。 - 適切な条件下でADP及びSS5をインキュベートし、次いで、生成されたADPGを単離及び精製することを含むことを特徴とする、請求項23又は24に記載の酵素製品を使用してADPGを作製する方法。
- 請求項27に記載の方法であって、
e)以下の溶液、即ち、
スクロース 1M
HEPES、pH7.0 50mM
EDTA 1mM
ポリエチレングリコール 20%
MgCl2 1mM
KCl 15mM
ADP 100mM
の100mlを37℃で12時間インキュベートするステップと、
f)好ましくは100℃で90秒間加熱することによって反応を停止するステップと、
g)10000gで10分間遠心分離するステップと、
h)上清をHPLCによるクロマトグラフィーにかけ、従来の方法によってADPGを溶離及び精製するステップと
を含むことを特徴とする、上記方法。 - スクロースシンターゼ(SS)活性を有する酵素製品を含む、スクロースの分光光度的/蛍光定量的/アンペロメトリックな測定用のアッセイキット。
- 請求項29に記載のアッセイキットであって、以下のインキュベーション媒体、即ち、
a.2ユニットのSS
b.2mMのADP
c.2ユニットの植物、動物、又は微生物由来ADPGピロホスファターゼ
d.2ユニットのPGM
e.2ユニットのG6PDH
f.0.5mMのNAD(P)
g.反応緩衝液100ml:50mM HEPES、pH7.0/1mM EDTA/20%ポリエチレングリコール/1mM MgCl2/15mM KC1
h.予めろ過した試験サンプル
と組合せて使用するための、上記アッセイキット。 - 請求項29に記載のアッセイキットであって、以下のインキュベーション媒体、即ち、
a.2ユニットのSS
b.2mMのUDP
c.2ユニットの植物、動物、又は微生物由来UDPGピロホスファターゼ
d.2ユニットのPGM
e.2ユニットのG6PDH
f.0.5mMのNAD(P)
g.反応緩衝液100ml:50mM HEPES、pH7.0/1mM EDTA/20%ポリエチレングリコール/1mM MgCl2/15mM KC1
h.予めろ過した試験サンプル
と組合せて使用するための、上記アッセイキット。 - 請求項29に記載のアッセイキットであって、以下のインキュベーション媒体、即ち、
a.2ユニットのSS
b.2mMのUDP
c.2ユニットのUDPGデヒドロゲナーゼ
d.0.5mMのNAD
e.反応緩衝液100ml:50mM HEPES、pH7.0/1mM EDTA/20%ポリエチレングリコール/1mM MgCl2/15mM KC1
f.予めろ過した試験サンプル
と組合せて使用するための、上記アッセイキット。 - SSが、任意選択で、SS4、SS5、若しくはSSX、又はそれらの組合せであることを特徴とする、請求項29から32までのいずれか一項に記載のアッセイキット。
- SSをコードするDNAであって、前記DNAを含み発現する遺伝子構築物を適切なベクター中に挿入し、前記遺伝子構築物を植物のゲノムに導入することによって、SSを発現するトランスジェニック植物を作製する方法に使用される、上記DNA。
- 使用されるcDNAがSSXをコードしていることを特徴とする、請求項34に記載のDNA。
- 請求項35に記載のDNAであって、前記方法が、以下のステップ、即ち、
a)SSX遺伝子又はSSをコードする他の任意の変種のそれぞれ5’及び3’領域の35Sプロモーター及びNOSターミネーターをpSSプラスミドに連続的に挿入することにより、図4Bに示す制限地図を有するプラスミドp35S−SS−NOSを作製するステップと、
b)酵素NotI、T4 DNAポリメラーゼ、及びHindIIIでp35S−SS−NOSを連続的に消化するステップと、
c)予めEcoRI、T4 DNAポリメラーゼ、及びHindIIIで連続的に消化しておいたバイナリープラスミドpBIN20内に、作製した断片をクローニングして、図4Cに示すプラスミドpBIN35S−SS−NOSを得るステップと、
d)大腸菌(XL1 Blue)中でpBIN35A−SS−NOSを増幅させるステップと、
e)上記のステップで増幅された遺伝子構築物をアグロバクテリウムチュメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)C58:GV2260に挿入して、形質転換株CECT 5851を得るステップと、
f)形質転換株CECT 5851で植物をトランスフェクションするステップと
を含むことを特徴とする、上記DNA。 - 請求項35に記載のDNAであって、前記方法が、以下のステップ、即ち、
a)図5Aで示す制限地図を有するプラスミドpGEMT−RBCSpromを作製するために、RUBISCOの小サブユニットをコードしている遺伝子のプロモーターをpGEMTプラスミドに連続的に挿入するステップと、
b)遊離された断片をp35S−SS−NOSの対応する制限部位に挿入するために酵素HindIII及びNcoIでpGEMP−RBCSを消化して、図5Bで示す制限地図を有するpRBCS−SS−NOSを作製するステップと、
c)HindIII、T4 DNAポリメラーゼ、及びNotIで連続的にpRBCS−SS−NOSを消化し、遊離された断片を、HindIII、T4 DNAポリメラーゼ、及びEcoRIで連続的に消化したpBIN20中にクローニングして、図5Cで示す制限地図を有するpBINRBCS−SS−NOSを作製するステップと、
d)大腸菌(XL1 Blue)中でpBINRBCS−SS−NOSを増幅させるステップと、
e)上記のステップで増幅された遺伝子構築物をアグロバクテリウムチュメファシエンスC58:GV2260に挿入し、その形質転換株で植物をトランスフェクションするステップと
を含むことを特徴とする、上記DNA。 - SS酵素活性の過剰発現を特徴とする、請求項34から37までのいずれか一項に記載のDNAを使用する方法によって得ることができるトランスジェニック植物。
- 前記過剰発現が、非トランスジェニック野生型植物の同じ組織中で認められる酵素活性の2〜10倍程度高いSS酵素活性レベルを呈することを特徴とする、請求項38に記載のトランスジェニック植物。
- タバコ、ジャガイモ、トマト、及びイネ植物から選択されることを特徴とする、請求項38又は39に記載のトランスジェニック植物。
- さらに、同一の条件下で栽培された対応する野生型植物の同じ組織又は器官で観察される含有量より、スクロース、G6P、ADPG、及びデンプンの含有量がより多いことを特徴とする、請求項38から40までのいずれか一項に記載のトランスジェニック植物。
- 対応する野生型植物の葉で観察されるより、スクロース、G6P、ADPG、及びデンプンの含有量が多く、アミロース/アミロペクチン比が高い葉を有する、請求項40に記載のトランスジェニック植物。
- 対応する野生型植物の同じ組織又は器官で観察されるより、スクロース、G6P、ADPG、及びデンプンの含有量が多く、アミロース/アミロペクチン比が高い根、塊茎、及び/又は種子を有する、請求項40に記載のトランスジェニック植物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ES200400257A ES2245867B1 (es) | 2004-02-05 | 2004-02-05 | Procedimiento produccion sacarosa sintasa recombinante a partir de escherichia coli y uso en fabricacion de kits de determinacion de sacarosa, produccion de azucares-nucleotidos y obtencion de plantas transgenicas con alto contenido de almidon y alto balance amilosa/amilopectina. |
ESP200400257 | 2004-02-05 | ||
PCT/ES2005/070010 WO2005075649A1 (es) | 2004-02-05 | 2005-01-27 | Procedimiento para la producción de sacarosa sintasa recombinante su uso en la fabricación de kits de determinación de sacarosa producción de adpglucosa y obtención de plantas transgénicas cuyas hojas y órganos de reserva acumulen alto contenido en adpglucosa y almidón |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2007520228A JP2007520228A (ja) | 2007-07-26 |
JP2007520228A5 true JP2007520228A5 (ja) | 2008-03-13 |
JP4738351B2 JP4738351B2 (ja) | 2011-08-03 |
Family
ID=34833892
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006551865A Expired - Fee Related JP4738351B2 (ja) | 2004-02-05 | 2005-01-27 | 組換型スクロースシンターゼを作製する方法、スクロース測定キットの作製におけるその使用、adpグルコースを作製する方法、並びに、高濃度のadpグルコース及びデンプンを蓄積する葉及び貯蔵器官を有するトランスジェニック植物を得る方法 |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (3) | USRE46642E1 (ja) |
EP (1) | EP1721980B1 (ja) |
JP (1) | JP4738351B2 (ja) |
KR (1) | KR101244638B1 (ja) |
CN (1) | CN1984994B (ja) |
AT (1) | ATE502107T1 (ja) |
AU (1) | AU2005210055B2 (ja) |
BR (1) | BRPI0507477B1 (ja) |
CA (2) | CA2554780C (ja) |
DE (1) | DE602005026917D1 (ja) |
ES (3) | ES2245867B1 (ja) |
IL (1) | IL176847A (ja) |
MX (1) | MXPA06008811A (ja) |
PL (1) | PL1721980T3 (ja) |
RU (1) | RU2369637C2 (ja) |
WO (1) | WO2005075649A1 (ja) |
ZA (1) | ZA200606235B (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2354895B1 (es) * | 2008-09-12 | 2012-01-23 | Iden Carbohydrate Biotechnology, S.L | Procedimiento para la producción de plantas transgénicas que presentan alto contenido y rendimiento en almidón y alto balance amilosa/amilopectina. |
ES2339094B1 (es) * | 2008-11-13 | 2011-03-18 | Iden Carbohydrate Biotechnology, S.L. | Procedimiento para la produccion de plantas transgenicas que presentan alto contenido en compuestos antioxidantes, alta capacidad antioxidante y resistencia al empardecimiento. |
CN106834343B (zh) * | 2017-02-21 | 2019-09-13 | 中国农业大学 | 蔗糖合成酶在调控植物果实发育中的应用 |
KR101985668B1 (ko) * | 2017-10-30 | 2019-06-04 | 명지대학교산학협력단 | 벼 유래 OsSUS4 유전자를 이용한 도열병 저항성이 조절된 형질전환 식물체의 제조방법 및 그에 따른 식물체 |
CN111172237A (zh) * | 2019-10-24 | 2020-05-19 | 新疆农业科学院农产品贮藏加工研究所 | 一种测定植物中蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶含量的方法 |
DE102020111560A1 (de) | 2020-04-28 | 2021-10-28 | Rheinisch-Westfälische Technische Hochschule (Rwth) Aachen | Enzymkaskaden auf Basis von Saccharose Synthase und Pyrophosphorylase zur Umsetzung von ADP zu ATP |
CN111793641B (zh) * | 2020-07-20 | 2022-07-19 | 中国农业科学院郑州果树研究所 | 甜樱桃PavSS或PavSPS基因在调控果实着色或果实成熟软化中的用途 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1340522C (en) * | 1987-03-10 | 1999-05-04 | Heinz Dobeli | Fusion proteins containing neighbouring histidines for improved purification |
WO1994028146A2 (en) * | 1993-05-24 | 1994-12-08 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Dna sequences and plasmids for the preparation of sugar beet with changed sucrose concentration |
US6682918B1 (en) * | 1996-07-19 | 2004-01-27 | Arch Development Corporation | Bacterial sucrose synthase compositions and methods of use |
DE19736343B4 (de) * | 1997-08-21 | 2006-02-09 | Forschungszentrum Jülich GmbH | Verfahren zur Erhöhung der Genexpression von Saccharose Synthase |
US7598361B2 (en) * | 1997-11-24 | 2009-10-06 | Monsanto Technology Llc | Nucleic acid molecules and other molecules associated with the sucrose pathway |
JP2001335600A (ja) * | 2000-05-25 | 2001-12-04 | Funakoshi Co Ltd | タンパク質の精製方法 |
JP2002065265A (ja) * | 2000-08-25 | 2002-03-05 | Sumitomo Electric Ind Ltd | 複合タグ |
WO2002045485A1 (en) * | 2000-12-08 | 2002-06-13 | Commonwealth Scienctific And Industrial Research Organisation | Modification of sucrose synthase gene expression in plant tissue and uses therefor |
WO2002067662A1 (en) * | 2001-02-22 | 2002-09-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Manipulation of sucrose synthase genes to improve stalk and grain quality |
-
2004
- 2004-02-05 ES ES200400257A patent/ES2245867B1/es not_active Expired - Lifetime
-
2005
- 2005-01-27 US US14/267,538 patent/USRE46642E1/en not_active Expired - Fee Related
- 2005-01-27 CA CA2554780A patent/CA2554780C/en not_active Expired - Fee Related
- 2005-01-27 AU AU2005210055A patent/AU2005210055B2/en not_active Ceased
- 2005-01-27 BR BRPI0507477-0A patent/BRPI0507477B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2005-01-27 CA CA3002836A patent/CA3002836C/en not_active Expired - Fee Related
- 2005-01-27 AT AT05708108T patent/ATE502107T1/de not_active IP Right Cessation
- 2005-01-27 CN CN200580004166XA patent/CN1984994B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2005-01-27 PL PL05708108T patent/PL1721980T3/pl unknown
- 2005-01-27 US US10/587,372 patent/US8168856B2/en not_active Ceased
- 2005-01-27 DE DE602005026917T patent/DE602005026917D1/de active Active
- 2005-01-27 EP EP05708108A patent/EP1721980B1/en not_active Not-in-force
- 2005-01-27 JP JP2006551865A patent/JP4738351B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2005-01-27 MX MXPA06008811A patent/MXPA06008811A/es active IP Right Grant
- 2005-01-27 KR KR1020067015794A patent/KR101244638B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2005-01-27 WO PCT/ES2005/070010 patent/WO2005075649A1/es active Application Filing
- 2005-01-27 RU RU2006131670/13A patent/RU2369637C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2005-01-27 ES ES05708108T patent/ES2363231T3/es active Active
-
2006
- 2006-07-13 IL IL176847A patent/IL176847A/en not_active IP Right Cessation
- 2006-07-27 ZA ZA200606235A patent/ZA200606235B/xx unknown
-
2007
- 2007-12-21 ES ES200703413A patent/ES2342246B1/es active Active
-
2012
- 2012-04-27 US US13/458,228 patent/US8841514B2/en not_active Expired - Fee Related
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2263171T3 (es) | Mejoras en o relativas al contenido de almidon de plantas. | |
US6483011B1 (en) | Modified ADP-glucose pyrophosphorylase for improvement and optimization of plant phenotypes | |
CN112852791B (zh) | 腺嘌呤碱基编辑器及其相关生物材料与应用 | |
JP2007520228A5 (ja) | ||
RU2006131670A (ru) | Способ получения рекомбинантной сахарозосинтазы, ее применение в приготовлении наборов для определения сахарозы, получении adp-глюкозы и получении трансгенных растений, листья и запасающие органы которых накапливают высокие содержания adp-глюкозы и крахмала | |
Meyer et al. | The maize Sh2r6hs ADP-glucose pyrophosphorylase (AGP) large subunit confers enhanced AGP properties in transgenic wheat (Triticum aestivum) | |
Bellaloui et al. | Transgenically enhanced sorbitol synthesis facilitates phloem‐boron mobility in rice | |
JPWO2005006847A1 (ja) | 窒素制限下における生育の改善された植物の作出方法 | |
JP2005130770A (ja) | 植物体あたり得られるデンプン量が増加したバレイショおよびその作出法 | |
JP2001509376A (ja) | フィードバック不感性トレオニンデヒドラターゼ/デアミナーゼを発現する植物および微生物を製造するための方法および組成物 | |
US8536407B2 (en) | Heat resistant plants and plant tissues comprising a variant adenosine diphosphate glucose pyrophosphorylase small subunit protein and methods of use thereof | |
Díaz‐Leal et al. | Molecular and functional characterization of allantoate amidohydrolase from Phaseolus vulgaris | |
CN105087516B (zh) | 一种adp-葡萄糖焦磷酸化酶突变体及其筛选方法与应用 | |
US7462762B2 (en) | Method for producing modified carbon-based metabolism C4 plants by overexpression of phosphoenolpyruvate carboxylase | |
US7186892B2 (en) | Expression of sedoheptulose 1,7 bisphosphatase in transgenic plants | |
US20160083744A1 (en) | Method for speeding up plant growth and improving yield by altering expression levels of kinases and phosphatases | |
KR101590521B1 (ko) | 식물의 탄소,질소,바이오매스 및 수율을 증진시키기 위한 발현 구조체 및 방법 | |
JP5001602B2 (ja) | デオキシムギネ酸合成酵素およびその利用 | |
Migge et al. | Greenhouse-grown conditionally lethal tobacco plants obtained by expression of plastidic glutamine synthetase antisense RNA may contribute to biological safety | |
JP2001238556A (ja) | アミノ酸組成が改良されたトランスジェニック植物の作出法 | |
CN114196644B (zh) | 一种蛋白棕榈酰化转移酶dhhc16及其在提高水稻耐盐方面的应用 | |
Zhang et al. | Co-expression of the tobacco anthranilate synthase β subunit with its feedback-insensitive α subunit as a selectable marker that also markedly increases the free tryptophan content | |
JP2002527039A (ja) | Ampデアミナーゼ | |
CN116042576A (zh) | 种子重量调控相关的大豆蛋白GmSFR2及其相关生物材料的应用 | |
CN118207226A (zh) | 调控甘蔗适应低钾胁迫的ShCIPK23基因及其应用 |