JP2007501860A - 免疫抑制化合物および組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、免疫抑制剤、その製造法、その使用およびそれらを含む医薬組成物に関する。本発明は、リンパ球相互作用が介在する疾患または障害、特にＥＤＧ受容体介在シグナル伝達が関連する疾患の処置または予防に有用な新規クラスの化合物を提供する。

Description

発明の詳細な説明

関連出願の相互参照
本出願は、米国仮特許出願番号６０／４７１,９３１(２００３年５月１９日出願)および米国仮特許出願番号６０／５６２,１８２(２００４年４月１４日出願)の優先権の利益を主張する。これらの出願の全部の記載は、引用により、その全体として、かつすべての目的に関して、本出願に包含される。

発明の背景
技術分野
本発明は、リンパ球相互作用が介在する疾患または障害、特にＥＤＧ受容体介在シグナル伝達が関連する疾患の処置または予防に有用な免疫抑制化合物の新規クラスを提供する。

背景技術
ＥＤＧ受容体は、密接に関係した、脂質活性化Ｇ−タンパク質結合受容体のファミリーに属する。ＥＤＧ−１、ＥＤＧ−３、ＥＤＧ−５、ＥＤＧ−６、およびＥＤＧ−８(各々Ｓ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ３、Ｓ１Ｐ２、Ｓ１Ｐ４、およびＳ１Ｐ５とも呼ばれる)は、スフィンゴシン−１−ホスフェート(Ｓ１Ｐ)に特異的な受容体である。ＥＤＧ２、ＥＤＧ４、およびＥＤＧ７(各々ＬＰＡ１、ＬＰＡ２、およびＬＰＡ３とも呼ばれる)は、リゾホスファチジン酸(lysophosphatidic)(ＬＰＡ)に特異的な受容体である。Ｓ１Ｐ受容体アイソタイプの中で、ＥＤＧ−１、ＥＤＧ−３およびＥＤＧ−５は種々の組織で広範囲に発現されるが、一方ＥＤＧ−６の発現は主としてリンパ組織および血小板で、そしてＥＤＧ−８は中枢神経系で確認される。ＥＤＧ受容体はシグナル伝達を担い、細胞発育、増殖、維持、移動、分化、可塑性およびアポトーシスを含む細胞過程において重要な役割を演ずると考えられている。あるＥＤＧ受容体は、リンパ球相互作用が介在する疾患、例えば、移植拒絶反応、自己免疫性疾患、炎症性疾患、感染症および癌と関連する。ＥＤＧ受容体活性の変更が、これらの疾患の病態および／または総体症状に関与する。したがって、それ自体ＥＤＧ受容体の活性を変える分子が、このような疾患の処置における治療剤として有用である。

発明の概要
本発明は、式Ｉ：

〔式中、
ｎは１、２または３であり；
Ａは−Ｘ_１Ｃ(Ｏ)ＯＲ_６、−Ｘ_１ＯＰ(Ｏ)(ＯＲ_６)_２、−Ｘ_１Ｐ(Ｏ)(ＯＲ_６)_２、−Ｘ_１Ｓ(Ｏ)_２ＯＲ_６、−Ｘ_１Ｐ(Ｏ)(Ｒ_６)ＯＲ_６および１Ｈ−テトラゾール−５−イルから選択され；ここでＸ_１は結合およびＣ_１−３アルキレンから選択され；そして各Ｒ_６は独立して水素およびＣ_１−６アルキルから選択され；
Ｘは結合であるかまたはＣ_１−４アルキレン(alkyelene)、−Ｘ_１ＯＸ_２−、−Ｘ_１ＮＲ_７Ｘ_２−、−Ｘ_１Ｃ(Ｏ)ＮＲ_７Ｘ_２−、−Ｘ_１ＮＲ_７Ｃ(Ｏ)Ｘ_２−、−Ｘ_１Ｓ(Ｏ)Ｘ_２−、−Ｘ_１Ｓ(Ｏ)_２Ｘ_２−、−Ｘ_１ＳＸ_２−およびＣ_２−９ヘテロアリーレンから選択され；ここで、Ｘ_１およびＸ_２は独立して結合およびＣ_１−３アルキレンから選択され；Ｒ_７は水素およびＣ_１−６アルキルから選択され；そしてＸの任意のヘテロアリーレンは、所望によりハロおよびＣ_１−６アルキルからなる群のメンバーにより置換されており；
ＹはＣ_６−１０アリールおよびＣ_２−９ヘテロアリールから選択され、ここで、Ｙの任意のアリールまたはヘテロアリールは、所望により、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換Ｃ_１−６アルコキシから選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；
Ｒ_１はＣ_６−１０アリールおよびＣ_２−９ヘテロアリールから選択され；ここで、Ｒ_１のアリールまたはヘテロアリールは、所望によりＣ_６−１０アリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_２−９ヘテロアリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキルＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８ヘテロシクロアルキルＣ_０−４アルキルまたはＣ_１−６アルキルから選択されるラジカルで置換されており；ここで、Ｒ_１の任意のアリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基またはヘテロシクロアルキル基は、所望により、ハロ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ_１−６アルコキシから選択される１個から５個のラジカルで置換されていてよく；そしてＲ_１の任意のアルキル基は、所望により、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)_２−、−ＮＲ_７−および−Ｏ−から選択される原子または基で置換されたメチレンを有してよく；ここで、Ｒ_７は水素またはＣ_１−６アルキルから選択され；
Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_５は、独立して水素、Ｃ_１−６アルキル、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換Ｃ_１−６アルコキシから選択される。〕
の化合物およびそのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、保護された誘導体、個々の異性体および異性体の混合物；およびこのような化合物の薬学的に許容される塩および溶媒和物(例えば水和物)に関する。

本発明の第２の局面は、式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体または異性体の混合物、またはその薬学的に許容される塩を、１個またはそれ以上の適当な賦形剤と共に含む、医薬組成物である。

本発明の第３の局面は、動物における、ＥＤＧ受容体介在シグナル伝達の変更が、その疾患の病態および／または総体症状を予防、阻害または軽減できるものである疾患を処置する方法であり、動物に治療的有効量の式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体または異性体の混合物；またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法である。

本発明の第４の局面は、動物における、ＥＤＧ受容体介在シグナル伝達の変更が、その疾患の病態および／または総体症状に関与するものである疾患の処置用医薬の製造における式Ｉの化合物の使用である。

本発明の第５の局面は、式Ｉの化合物およびそのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、保護された誘導体、個々の異性体および異性体の混合物；およびその薬学的に許容される塩の製造法である。

好ましい態様の記載
本発明は、リンパ球相互作用が介在する疾患または障害の処置および／または予防に有用な化合物を提供する。また提供されるのは、このような疾患または障害を処置する方法である。

定義
本明細書中、特記しない限り：
基または他の基、例えばハロ−置換−アルキル、アルコキシ、アシル、アルキルチオ、アルキルスルホニルおよびアルキルスルフィニルの構造要素としての“アルキル”は、直鎖または分枝鎖のいずれでもあり得る。基または他の基の構造要素としての“アルケニル”は、１個またはそれ以上の炭素−炭素二重結合を含み、かつ直鎖または分枝鎖のいずれでもあり得る。すべての二重結合は、ｃｉｓ−またはｔｒａｎｓ−立体配置であり得る。基または他の基の構造要素としての“アルキニル”は、少なくとも１個のＣ≡Ｃ三重結合を含み、かつまた１個またはそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を含んでよく、かつ、可能である限り、直鎖または分枝鎖のいずれでもあり得る。単独または他の基の構造要素としてのシクロアルキル基は、３から８炭素原子、好ましくは３から６炭素原子を含んでよい。“アルキレン”および“アルケニレン”は、各々“アルキル”基および“アルケニル”基に由来する２価基である。本明細書中、Ｒ^１の任意のアルキル基は、所望により、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)_２−、−ＮＲ^２０−および−Ｏ−(式中、Ｒ^２０は水素またはＣ_１−６アルキルである)から選択される群のメンバーで中断されていてよい。このような基は、−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２−Ｓ(Ｏ)_２−ＣＨ_２−、−(ＣＨ_２)_２−ＮＲ^２０−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２−Ｏ−(ＣＨ_２)_２−などを含む。

“アリール”は、６個から１０個の環炭素原子を含む、単環式または縮合二環式芳香環集合体を意味する。例えば、Ｃ_６−１２アリールはフェニル、ビフェニルまたはナフチル、好ましくはフェニルであり得る。縮合二環式環は、部分飽和、例えば、１,２,３,４−テトラヒドロ−ナフタレンなどであり得る。“アリーレン”は、アリール基由来の２価基を意味する。例えば、本明細書で使用するアリーレンは、フェニレン、ビフェニレン、ナフチレンなどであり得る。

“ハロ”または“ハロゲン”は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ、好ましくはＦまたはＣｌを意味する。ハロ−置換アルキル基および化合物は、部分的にハロゲン化されまたは過ハロゲン化されていてよく、複数ハロゲン化の場合、ハロゲン置換基は同一または異なり得る。好ましい過ハロゲン化アルキル基は、例えばトリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシである。

“ヘテロアリール”は、特記しない限り、Ｎ、ＯまたはＳから選択される少なくとも１個のヘテロ原子部分が付加され、かつ、各環が５から６環原子からなる、本明細書で定義のアリールである。例えば、Ｃ_２ヘテロアリールは、オキサジアゾール、トリアゾールなどを含む。Ｃ_９ヘテロアリールはキノリン、１,２,３,４−テトラヒドロ−キノリンなどを含む。本明細書で使用するＣ_２−９ヘテロアリールはチエニル、ピリジニル、フラニル、イソオキサゾリル、ベンゾオキサゾリルまたはベンゾ[１,３]ジオキソリル、好ましくはチエニル、フラニルまたはピリジニルを含む。“ヘテロアリーレン”は、環集合体が２価ラジカルを含むときの、本明細書で定義のヘテロアリールを意味する。縮合二環式ヘテロアリール環系は部分的に飽和され、例えば、２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール、１,２,３,４−テトラヒドロ−キノリンなどである。

本明細書で使用するＥＤＧ−１選択的化合物(薬剤またはモジュレーター)は、ＥＤＧ−３を超え、かつ、ＥＤＧ−５、ＥＤＧ−６、およびＥＤＧ−８の１個を超えてＥＤＧ−１に選択的である特異性を有する。本明細書で使用する他のＥＤＧ受容体(“非選択的受容体”)を超える１個のＥＤＧ受容体(“選択的受容体”)に対する選択性は、該化合物が、該選択的ＥＤＧ受容体(例えば、ＥＤＧ−１)が介在する活性の誘導に、非選択的Ｓ１Ｐ−特異的ＥＤＧ受容体に対するよりもより高い効果を有することを意味する。ＧＴＰ−γＳ結合アッセイで測定したとき(下記実施例に記載した通り)、ＥＤＧ−１選択的化合物は、典型的に、非選択的受容体(例えば、ＥＤＧ−３、ＥＤＧ−５、ＥＤＧ−６、およびＥＤＧ−８の１個またはそれ以上)に対するＥＣ５０(最大応答の５０％をもたらす濃度)よりも５、１０、２５、５０、１００、５００、または１０００倍低い、選択的受容体(ＥＤＧ−１)に対するＥＣ５０を有する。

発明の詳細な説明
本発明は、リンパ球相互作用が介在する疾患または障害の処置または予防に有用な化合物を提供する。一つの態様において、式Ｉに関して、Ｒ_１が、所望により、Ｃ_６−１０アリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_２−９ヘテロアリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキルＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８ヘテロシクロアルキルＣ_０−４アルキルまたはＣ_１−６アルキルで置換されているフェニル、ナフチル、フラニルまたはチエニルであり；ここで、Ｒ_１の任意のアリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基またはヘテロシクロアルキル基が、所望により、ハロ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ_１−６アルコキシから選択される１個から５個のラジカルで置換されていてよく；そしてＲ_１の任意のアルキル基は、所望により、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)_２−、−ＮＲ_７−および−Ｏ−から選択される原子または基で置換されたメチレンを有してよく；ここで、Ｒ_７は水素またはＣ_１−６アルキルである。

別の態様において、Ｙがフェニルおよびベンゾオキサゾリルから選択され；そしてＸが結合であるかまたは−Ｘ_１ＯＸ_２−およびＣ_４−６ヘテロアリーレンから選択され；ここで、Ｘ_１およびＸ_２が独立して結合およびＣ_１−３アルキレンから選択され；ここで、Ｘの任意のヘテロアリーレンが所望によりハロおよびＣ_１−６アルキルから選択される群のメンバーで置換されている。

別の態様において、Ｒ_１が：

(式中、アスタリスクはＲ_１とＸの結合点を示し；ｍは１および２から選択され；Ｒ_１２は水素、Ｃ_６−１０アリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_２−９ヘテロアリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキルＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８ヘテロシクロアルキルＣ_０−４アルキルまたはＣ_１−６アルキルから選択され；ここで、Ｒ_１２の任意のアリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基またはヘテロシクロアルキル基は、所望により、ハロ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ_１−６アルコキシから選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；そしてＲ_１２の任意のアルキル基は、所望により、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)_２−、−ＮＲ_１０−および−Ｏ−から選択される原子または基で置換されたメチレンを有してよく；ここで、Ｒ_１０は水素またはＣ_１−６アルキルであり；そしてＲ_１３はハロ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ_１−６アルコキシから選択される。

別の態様において、Ａが−(ＣＨ_２)_２Ｃ(Ｏ)ＯＨであり；そしてＲ_２、Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_５が水素である。

別の態様において、ｎが１または２であり；Ｙがフェニルおよびベンゾオキサゾリルから選択され；そしてＸが結合であるかまたは[１,２,４]オキサジアゾール、−ＣＨ_２Ｏ−、−ＯＣＨ_２−、イソキサゾールおよび[１,３,４]オキサジアゾールから選択される。

別の態様において、Ｒ_１が：

(式中、Ｒ_１２は水素、フェニルおよびシクロヘキシルから選択され；ここで、Ｒ_１２の任意のフェニルまたはシクロヘキシルは、所望によりメチルで置換されており；そしてＲ_１３はトリフルオロメチル、メチルおよびエチルから選択される)
から選択される。

本発明の好ましい化合物は、３−｛６−[３−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,２,４]オキサジアゾール−５−イル]−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル｝−プロピオン酸、３−[６−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルオキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸、３−｛５−[５−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−イソキサゾール−３−イル]−１,３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル｝−プロピオン酸、３−｛５−[５−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,２,４]オキサジアゾール−３−イル]−１,３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル｝−プロピオン酸、３−｛５−[５−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イル]−１,３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル｝−プロピオン酸、３−[２−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−５,７−ジヒドロ−オキサゾロ[４,５−ｆ]イソインドール−６−イル]−プロピオン酸、３−｛７−[５−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,２,４]オキサジアゾール−３−イル]−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル｝−プロピオン酸、３−｛６−[５−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,２,４]オキサジアゾール−３−イル]−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル｝−プロピオン酸、３−｛６−[５−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イル]−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル｝−プロピオン酸、３−[６−(３−トリフルオロメチル−ベンジルオキシ)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸、３−[６−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルオキシ)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸、３−[６−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメトキシ)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸、３−[７−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルオキシ)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸、３−[６−(４−シクロヘキシル−３−メチル−フェノキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸、３−[６−(４−シクロヘキシル−３−エチル−フェノキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸、３−[６−(２−エチル−ビフェニル−４−イルオキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸および３−[６−(２−エチル−３'−メチル−ビフェニル−４−イルオキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸から選択される。

さらに、好ましい化合物はまた下記実施例および表１に示す。

本発明は、保護された形で存在するヒドロキシルまたはアミン基を有する化合物の形を提供する；これらはプロドラッグとして働く。プロドラッグは、投与後に、１つまたはそれ以上の生化学的変換を経由して活性薬剤形に変換される化合物である。生理学的条件下で容易に請求の化合物に変換される本発明の化合物の形は、請求の化合物のプロドラッグであり、本発明の範囲内である。プロドラッグの例は、ヒドロキシル基が酢酸エステルのような相対的に不安定なエステルにアシル化されている形、およびアミン基がグリシンもしくはセリンのようなＬ−アミノ酸のカルボン酸基でアシル化され、一般的な代謝酵素による加水分解を特に受けやすいアミド結合を形成している形を含む。

式Ｉの化合物は、遊離形または塩形、例えば無機または有機酸の付加塩で存在できる。ヒドロキシル基が存在するとき、これらの基はまた塩形、例えばアンモニウム塩またはリチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛もしくはマグネシウム、またはそれらの混合物のような金属との塩として存在できる。水和物または溶媒和物の形の式Ｉの化合物およびそれらの塩も本発明の一部である。

式Ｉの化合物が分子中に不斉中心を有するとき、種々の光学異性体が得られる。本発明はまたエナンチオマー、ラセミ体、ジアステレオ異性体およびこれらの混合物も含む。さらに、式Ｉの化合物が幾何学異性体を含むとき、本発明はまたｃｉｓ−化合物、ｔｒａｎｓ−化合物およびそれらの混合物を包含する。同様の解釈が、上記のような不斉炭素原子または不飽和結合を示す出発物質に関しても適用される。

免疫調節状態を処置するための方法および組成物
遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物は、例えば、実施例３のインビトロおよびインビボ試験で示されるような、価値のある薬理学的特性、例えばリンパ球再循環調節特性を示し、したがって、治療に適用される。式Ｉの化合物は、好ましくは１×１０^−１１から１×１０^−５Ｍの範囲の、好ましくは５０nMより小さいＥＣ_５０を示す。本化合物は、１個またはそれ以上のＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体、好ましくはＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１に選択性を示す。本発明のＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１選択的モジュレーターは、ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１への、および１個またはそれ以上のＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体(例えば、ＥＤＧ−３／Ｓ１Ｐ−３、ＥＤＧ−５／Ｓ１Ｐ−２、ＥＤＧ−６／Ｓ１Ｐ−４、およびＥＤＧ−８／Ｓ１Ｐ−５)への化合物の結合をアッセイすることにより同定できる。ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１選択的モジュレーターは、通常、ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１受容体に１×１０^−１１から１×１０^−５Ｍの範囲の、好ましくは５０nMより小さい、より好ましくは５nMより小さいＥＣ５０を示す。それはまた１個またはそれ以上の他のＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体についてＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１のＥＣ５０よりも少なくとも５、１０、２５、５０、１００、５００、または１０００倍高いＥＣ５０を示す。故に、ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１調節化合物のいくつかは、ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１について５nMより小さいＥＣ５０を示し、その１個またはそれ以上の他のＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体についてのＥＣ５０は、少なくとも１００nMまたはそれより高い。ＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体に対する結合活性を測定する以外に、ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１選択的薬剤はまたＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体が介在する細胞過程または活性を調節する薬剤の能力を試験することにより同定できる。

式Ｉの化合物は、したがって、リンパ球相互作用が介在する疾患または障害、例えば移植において、例えば、細胞、組織または臓器の同種−または異種移植の急性または慢性拒絶反応または移植片機能の遅発、移植片対宿主病、自己免疫性疾患、例えばリウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型またはII型糖尿病およびその合併症、脈管炎、悪性貧血、シェーグレン症候群、ブドウ膜炎、乾癬、グレーブス眼症、円形脱毛症およびその他、アレルギー性疾患、例えばアレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎／結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、所望により異常反応が根底にある炎症性疾患、例えば炎症性腸疾患、クローン病または潰瘍性大腸炎、内因性喘息、炎症性肺傷害、炎症性肝臓傷害、炎症性糸球体傷害、アテローム性動脈硬化症、骨関節症、刺激性接触性皮膚炎および別の湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、免疫介在障害の皮膚症状、炎症性眼疾患、角結膜炎、心筋炎または肝炎、虚血／再潅流傷害、例えば心筋梗塞、卒中、腸虚血、腎不全または出血性ショック、外傷性ショック、Ｔ細胞リンパ腫またはＴ細胞白血病、感染症、例えば毒素ショック(例えば超抗原誘発)、敗血症性ショック、成人呼吸窮迫症候群またはウイルス感染、例えばＡＩＤＳ、ウイルス性肝炎、慢性細菌感染、または老人性痴呆の処置および／または予防に有用である。細胞、組織または固形臓器移植の例は、例えば膵臓島、幹細胞、骨髄、角膜組織、神経組織、心臓、肺、複合心臓−肺、腎臓、肝臓、腸、膵臓、気管または食道を含む。上記使用に関して、必要な投与量はもちろん投与の形態、処置すべき特定の状態および所望の効果に依存して変化するであろう。

さらに、式Ｉの化合物は癌化学療法、特に固形腫瘍、例えば乳癌の癌化学療法に、または抗血管形成薬剤として有用である。

必要な投与量は、もちろん、投与の形態、処置すべき特定の状態および所望の効果に依存して変化するであろう。一般に、十分な結果が、約０.０３から２.５mg／体重kgの全身一日投与量で得られることが示される。大型哺乳類、例えばヒトにおいて指示される一日投与量は、約０.５mgから約１００mgの範囲であり、簡便には、例えば、１日４回までの分割投与量でまたは徐放性形で投与する。経口投与のための適当な単位投与形は、約１から５０mgの活性成分を含む。

式Ｉの化合物は、任意の慣用の経路で、特に経腸的に、例えば、経口で、例えば錠剤またはカプセルの形で、または非経腸的に、例えば、注射溶液または懸濁液の形で、局所的に、例えばローション、ジェル、軟膏またはクリームの形で、または経鼻または坐薬形で投与できる。遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物を、少なくとも１個の薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物は、慣用法で、薬学的に許容される担体または希釈剤との混合により製造できる。

式Ｉの化合物は、例えば、上記の通りの、遊離形または薬学的に許容される塩形で投与できる。このような塩は慣用法で製造でき、遊離化合物と同程度の活性を示す。

前記によって、本発明はさらに下記を提供する：
１.１ 処置を必要とする対象における、例えば、上記の通りの、リンパ球が介在する障害または疾患を予防または処置する方法であり、該対象に、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。

１.２ 処置を必要とする対象における、例えば、上記の通りの、急性もしくは慢性移植拒絶反応またはＴ細胞介在炎症性または自己免疫性疾患を予防または処置する方法であり、該対象に、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。

１.３ 処置を必要とする対象における、無秩序な血管形成、例えばスフィンゴシン−１−ホスフェート(Ｓ１Ｐ)介在血管形成を阻害または制御する方法であり、該対象に、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。

１.４ 処置を必要とする対象における、新規血管形成過程が介在するまたは無秩序な血管形成が関連する疾患を予防または処置する方法であり、該対象に、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。

２. 医薬として、例えば、上記１.１から１.４に示す方法のいずれかにおいて使用するための、遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物。

３. 遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物を、薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、例えば、上記１.１から１.４に示す方法のいずれかにおいて使用するための医薬組成物。

４. 上記１.１から１.４に示す方法のいずれかにおいて使用するための医薬組成物の製造において使用するための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩。

式Ｉの化合物は、唯一の活性成分として、または、例えばアジュバントとして、他の薬剤と、例えば同種−もしくは異種移植片急性もしくは慢性拒絶反応または炎症性または自己免疫性障害の処置または予防のためには例えば免疫抑制剤もしくは免疫調節剤または他の抗炎症剤と、または化学療法剤、例えば悪性細胞抗増殖剤と併用して投与してよい。例えば式Ｉの化合物は、カルシニューリン阻害剤、例えばシクロスポリンＡまたはＦＫ５０６；ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシン、４０−Ｏ−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、ＣＣＩ７７９、ＡＢＴ５７８またはＡＰ２３５７３；免疫抑制特性を有するアスコマイシン、例えばＡＢＴ−２８１、ＡＳＭ９８１など；コルチコステロイド；シクロホスファミド；アザチオプレン；メトトレキサート；レフルノミド；ミゾルビン；ミコフェノール酸；ミコフェノール酸モフェチル；１５−デオキシスペルグアリンまたはその免疫抑制性ホモログ、アナログまたは誘導体；免疫抑制性モノクローナル抗体、例えば白血球受容体、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはそれらのリガンドに対するモノクローナル抗体；他の免疫調節化合物、例えばＣＴＬＡ４またはその変異体の細胞外ドメイン少なくとも一部、例えば非ＣＴＬＡ４タンパク質配列に結合したＣＴＬＡ４またはその変異体の細胞外領域の少なくとも一部を有する組み換え結合分子、例えばＣＴＬＡ４Ｉｇ(例えば、名称ＡＴＣＣ６８６２９)またはその変異体、例えばＬＥＡ２９Ｙ；接着分子阻害剤、例えばＬＦＡ−１アンタゴニスト、ＩＣＡＭ−１または−３アンタゴニスト、ＶＣＡＭ−４アンタゴニストまたはＶＬＡ−４アンタゴニスト；または化学療法剤と併用して使用できる。

“化学療法剤”なる用語は、すべての化学療法剤を意味し、
ｉ. アロマターゼ阻害剤、
ii. 抗エストロゲン、抗アンドロゲン(とりわけ前立腺癌の場合)またはゴナドレリンアゴニスト、
iii. トポイソメラーゼＩ阻害剤またはトポイソメラーゼII阻害剤、
iv. 微小管活性化剤、アルキル化薬剤、抗新生物代謝拮抗剤またはプラチン化合物、
ｖ. タンパク質または脂質キナーゼ活性またはタンパク質または脂質ホスファターゼ活性をターゲッティング／減少させる化合物、さらなる抗血管形成化合物または細胞分化過程を誘発する化合物、
vi. ブラジキニン１受容体またはアンギオテンシンIIアンタゴニスト、
vii. シクロオキシゲナーゼ阻害剤、ビスホスホネート、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ヘパラナーゼ阻害剤(ヘパランスルフェート分解を防止)、例えばＰＩ−８８、生物学的応答修飾剤、好ましくはリンフォカインまたはインターフェロン、例えばインターフェロン□、ユビキチン化阻害剤、または抗アポトーシス経路を遮断する阻害剤、
viii.Ｒａｓ発癌性アイソフォーム、例えばＨ−Ｒａｓ、Ｋ−ＲａｓまたはＮ−Ｒａｓの阻害剤、またはファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばＬ−７４４,８３２またはＤＫ８Ｇ５５７、
ix. テロメラーゼ阻害剤、例えばテロメスタチン、
ｘ. プロテアーゼ阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メチオニンアミノペプチダーゼ阻害剤、例えばベンガミドまたはその誘導体、またはプロテオソーム阻害剤、例えばＰＳ−３４１、および／または
xi. ｍＴＯＲ阻害剤
を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“アロマターゼ阻害剤”は、エストロゲン産生、すなわち基質アンドロステンジオンおよびテストステロンから各々エストロンおよびエストラジオールへの変換を阻害する化合物に関する。本用語は、ステロイド、とりわけアタメスタン、エキセメスタンおよびホルメスタンおよび、特に、非ステロイド、とりわけアミノグルテチミド、ログレチミド、ピリドグルテチミド、トリロスタン、テストラクトン、ケトコナゾール、ボロゾール、ファドロゾール、アナストロゾールおよびレトロゾールを含むが、これらに限定されない。アロマターゼ阻害剤である化学療法剤を含む本発明の組み合わせは、特にホルモン受容体陽性腫瘍、例えば乳房腫瘍の処置に有用である。

本明細書で使用する“抗エストロゲン”なる用語は、エストロゲンの効果と、エストロゲン受容体レベルで拮抗する化合物に関する。本用語は、タモキシフェン、フルベストラント、ラロキシフェンおよび塩酸ラロキシフェンを含むが、これらに限定されない。抗エストロゲンである化学療法剤を含む本発明の組み合わせは、特にエストロゲン受容体陽性腫瘍、例えば乳房腫瘍の処置に有用である。

本明細書で使用する“抗アンドロゲン”なる用語は、アンドロゲンホルモンの生物学的効果を阻害できる任意の物質に関し、ビカルタミドを含むが、これに限定されない。

本明細書で使用する“ゴナドレリンアゴニスト”なる用語は、アバレリックス、ゴセレリンおよび酢酸ゴセレリンを含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“トポイソメラーゼＩ阻害剤”なる用語は、トポテカン、イリノテカン、９−ニトロカンプトテシンおよび巨大分子カンプトテシン・コンジュゲート・ＰＮＵ−１６６１４８(ＷＯ９９／１７８０４の化合物Ａ１)を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“トポイソメラーゼII阻害剤”なる用語は、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシンおよびネモルビシンのようなアントラサイクリン、アントラキノンであるミトキサントロンおよびロソキサントロン、およびポドフィロトキシンであるエトポシドおよびテニポシドを含むが、これらに限定されない。

“微小管活性化剤”なる用語は、微小管安定化および微小管脱安定化剤に関し、タキサン、例えばパクリタキセルおよびドセタキセル、ビンカアルカロイド、例えば、ビンブラスチン、とりわけ硫酸ビンブラスチン、ビンクリスチン、とりわけ硫酸ビンクリスチン、およびビノレルビン、ジスコデルモライドおよびエポシロンおよびそれらの誘導体、例えばエポシロンＢまたはその誘導体を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“アルキル化剤”なる用語は、ブスルファン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イフォスファミド、メルファランまたはニトロソウレア(ＢＣＮＵまたはGliadel^ＴＭ)を含むが、これらに限定されない。

“抗新生物代謝拮抗剤”は、５−フルオロウラシル、カペシタビン、ゲムシタビン、シタラビン、フルダラビン、チオグアニン、メトトレキサートおよびエダトレキサートを含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“プラチン化合物”なる用語は、カルボプラチン、シスプラチンおよびオキサリプラチンを含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“タンパク質または脂質キナーゼ活性をターゲッティング／減少させる化合物またはさらなる抗血管形成化合物”は、タンパク質チロシンキナーゼおよび／またはセリンおよび／またはスレオニンキナーゼ阻害剤または脂質キナーゼ阻害剤、例えば受容体チロシンキナーゼの上皮成長因子ファミリー(ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、モノ−またはヘテロダイマーとして)、受容体チロシンキナーゼの血管内皮細胞増殖因子ファミリー(ＶＥＧＦＲ)、血小板由来増殖因子受容体(ＰＤＧＦＲ)、繊維芽細胞増殖因子受容体(ＦＧＦＲ)、インシュリン様増殖因子受容体１(ＩＧＦ−１Ｒ)、Ｔｒｋ受容体チロシンキナーゼファミリー、Ａｘｌ受容体チロシンキナーゼファミリー、Ｒｅｔ受容体チロシンキナーゼ、Ｋｉｔ／ＳＣＦＲ受容体チロシンキナーゼ、ｃ−Ａｂｌファミリーのメンバーおよびそれらの遺伝子融合産物(例えばＢＣＲ−Ａｂｌ)、タンパク質キナーゼＣ(ＰＫＣ)およびセリン／スレオニンキナーゼのＲａｆファミリーのメンバー、ＭＥＫ、ＳＲＣ、ＪＡＫ、ＦＡＫ、ＰＤＫまたはＰＩ(３)キナーゼファミリーのメンバー、またはＰＩ(３)−キナーゼ−関連キナーゼファミリーのメンバー、および／またはサイクリン依存性キナーゼファミリー(ＣＤＫ)のメンバーの活性をターゲッティングし、減少させ、または阻害する化合物ならびに活性に関して他の、例えば、タンパク質または脂質キナーゼに無関係の機構を有する抗血管形成化合物を含むが、これらに限定されない。

ＶＥＧＦＲの活性をターゲットとし、減少させ、または阻害する化合物は、とりわけＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼを阻害し、ＶＥＧＦ受容体を阻害し、またはＶＥＧＦに結合する化合物、タンパク質または抗体であり、そして特にＷＯ９８／３５９５８に一般的にかつ具体的に記載の、例えば１−(４−クロロアニリノ)−４−(４−ピリジルメチル)フタラジンまたはその薬学的に許容される塩、例えばコハク酸塩、ＷＯ００／２７８２０に一般的にかつ具体的に記載の、例えばＮ−アリール(チオ)アントラニル酸アミド誘導体、例えば２−[(４−ピリジル)メチル]アミノ−Ｎ−[３−メトキシ−５−(トリフルオロメチル)フェニル]ベンズアミドまたは２−[(１−オキシド−４−ピリジル)メチル]アミノ−Ｎ−[３−トリフルオロメチルフェニル]ベンズアミド、またはＷＯ００／０９４９５、ＷＯ００／５９５０９、ＷＯ９８／１１２２３、ＷＯ００／２７８１９およびＥＰ０７６９９４７に一般的にかつ具体的に記載の化合物、タンパク質またはモノクローナル抗体；M. Prewett et al in Cancer Research 59(1999) 5209-5218、F. Yuan et al in Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 93, pp. 14765-14770, Dec. 1996、Z. Zhu et al in Cancer Res. 58, 1998, 3209-3214、およびJ. Mordenti et al in Toxicologic Pathology, Vol. 27, no. 1, pp 14-21, 1999に記載のもの；ＷＯ００／３７５０２およびＷＯ９４／１０２０２記載のもの；M. S. O'Reilly et al, Cell 79, 1994, 315-328により記載のAngiostatin^ＴＭ；M. S. O'Reilly et al, Cell 88, 1997, 277-285により記載のEndostatin^ＴＭ；アントラニル酸アミド；ＺＤ４１９０；ＺＤ６４７４；ＳＵ５４１６；ＳＵ６６６８；または抗ＶＥＧＦ抗体または抗ＶＥＧＦ受容体抗体、例えばＲｈｕＭａｂである。

抗体は、完全なモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの完全な抗体から形成された多特異性抗体、および所望の生物学的活性を示す限り、抗体フラグメントを意味する。

上皮成長因子受容体ファミリーの活性をターゲットとし、減少させまたは阻害する化合物は、とりわけ、ＥＧＦ受容体チロシンキナーゼファミリー、例えばＥＧＦ受容体、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４のメンバーを阻害するかまたはＥＧＦリガンドもしくはＥＧＦ関連リガンドと結合するか、または、ＥｒｂＢおよびＶＥＧＦ受容体キナーゼに二重の阻害効果を有する化合物、タンパク質または抗体、特に一般的にかつ具体的にＷＯ９７／０２２６６に記載されている、例えば実施例３９の化合物、またはＥＰ０５６４４０９、ＷＯ９９／０３８５４、ＥＰ０５２０７２２、ＥＰ０５６６２２６、ＥＰ０７８７７２２、ＥＰ０８３７０６３、ＵＳ５,７４７,４９８、ＷＯ９８／１０７６７、ＷＯ９７／３００３４、ＷＯ９７／４９６８８、ＷＯ９７／３８９８３に記載されている、とりわけ、ＷＯ９６／３０３４７(例えばＣＰ３５８７７４として既知の化合物)、ＷＯ９６／３３９８０(例えば化合物ＺＤ１８３９)およびＷＯ９５／０３２８３(例えば化合物ＺＭ１０５１８０)またはＰＣＴ／ＥＰ０２／０８７８０に記載の化合物、タンパク質またはモノクローナル抗体；例えばトラスツズマブ(Herpetin^Ｒ)、セツキシマブ、Iressa、ＯＳＩ−７７４、ＣＩ−１０３３、ＥＫＢ−５６９、ＧＷ−２０１６、Ｅ１.１、Ｅ２.４、Ｅ２.５、Ｅ６.２、Ｅ６.４、Ｅ２.１１、Ｅ６.３またはＥ７.６.３である。

ＰＤＧＦＲの活性をターゲットとし、減少させ、または阻害する化合物は、とりわけＰＤＧＦ受容体を阻害する化合物、例えばＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、例えばイマチニブである。

ｃ−ＡｂＩファミリーメンバーおよびそれらの遺伝子融合産物の活性をターゲットとし、減少させ、または阻害する化合物は、例えばＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、例えばイマチニブ；ＰＤ１８０９７０；ＡＧ９５７；またはＮＳＣ６８０４１０である。

タンパク質キナーゼＣ、Ｒａｆ、ＭＥＫ、ＳＲＣ、ＪＡＫ、ＦＡＫおよびＰＤＫファミリーメンバー、またはＰＩ(３)キナーゼまたはＰＩ(３)キナーゼ−関連ファミリーメンバー、および／またはサイクリン依存性キナーゼファミリー(ＣＤＫ)のメンバーの活性をターゲットとし、減少させ、または阻害する化合物は、とりわけＥＰ０２９６１１０に記載のスタウロスポリン誘導体、例えばミドスタウリンである；さらなる化合物の例は、例えばＵＣＮ−０１、サフィンゴル(safingol)、ＢＡＹ４３−９００６、Bryostatin 1、Perifosine；Ilmofosine；RO 318220およびRO 320432；GO6976；Isis 3521；またはLY333531/LY379196を含む。

さらなる抗血管形成化合物は、例えばサリドマイド(THALOMID)およびTNP-470である。

タンパク質または脂質ホスファターゼの活性をターゲットとし、減少させ、または阻害する化合物は、例えばホスファターゼ１、ホスファターゼ２Ａ、ＰＴＥＮまたはＣＤＣ２５の阻害剤、例えばオカダ酸またはその誘導体である。

細胞分化過程を誘発する化合物は、例えばレチノイン酸、α−、γ−またはδ−トコフェロールまたはα−、γ−またはδ−トコトリエノールである。

本明細書で使用するシクロオキシゲナーゼ阻害剤なる用語は、例えばセレコキシブ(Celebrex^Ｒ)、ロフェコキシブ(Vioxx^Ｒ)、エトリコキシブ、バルデコキシブまたは５−アルキル−２−アリールアミノフェニル酢酸、例えば５−メチル−２−(２'−クロロ−６'−フルオロアニリノ)フェニル酢酸を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“ヒストンデアセチラーゼ阻害剤”なる用語は、MS-27-275、SAHA、ピロキサミド、FR-901228またはバルプロ酸を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“ビスホスホネート”なる用語は、エチドロン酸(etridonic)、クロドロン酸、チルドロン酸、パミドロン酸、アレンドロン酸、イバンドロン酸、リセドロン酸およびゾレドロン酸を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤”なる用語は、コラーゲンペプチド模倣および非ペプチド模倣阻害剤、テトラサイクリン誘導体、例えばヒドロキサメートペプチド模倣物阻害剤であるバチマスタットおよびその経口生物利用可能アナログであるマリマスタット、プリノマスタット(prinomastat)、BMS-279251、BAY 12-9566、TAA211またはAAJ996を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“ｍＴＯＲ阻害剤”なる用語は、ラパマイシン(シロリムス)またはその誘導体、例えば３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２−デオキソ−ラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(Ｓ)−ジヒドロ−ラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(Ｓ)−ジヒドロ−４０−Ｏ−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンおよび、より好ましくは、４０−０−(２−ヒドロキシ−エチル)−ラパマイシンを含むが、これらに限定されない。ラパマイシン誘導体のさらなる例は、例えばＵＳＰ５,３６２,７１８に記載されるようなCCI779または４０−[３−ヒドロキシ−２−(ヒドロキシ−メチル)−２−メチルプロパノエート]−ラパマイシンまたはその薬学的に許容される塩、例えばＷＯ９９／１５５３０に記載されるようなABT578または４０−(テトラゾリル)−ラパマイシン、特に４０−エピ−(テトラゾリル)−ラパマイシン、または例えばＷＯ９８／０２４４１およびＷＯ０１／１４３８７に記載されるようなラパログ(rapalog)、例えばAP23573を含む。

式Ｉの化合物を、他の免疫抑制剤／免疫調節剤、抗炎症剤または化学療法剤と併用して投与するとき、併用する免疫抑制性、免疫調節性、抗炎症性または化学療法化合物の投与量は、もちろん、用いる併用剤、例えばそれがステロイドかカルシニューリン阻害剤か、用いる具体的な薬剤、処置する状態などに依存して変化するであろう。

前記によって、本発明はなおさらに下記の局面を提供する：
５. 治療的有効非毒性量の式Ｉの化合物と、少なくとも一個の第２医薬物質、例えば上記の通りの、例えば免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤または化学療法剤を、例えば同時にまたは連続して併用投与することを含む、上記で定義の方法。

６. ａ)本明細書に記載の遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物である第１薬剤、およびｂ)少なくとも１個の併用薬剤、例えば上記の通りの、例えば免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤または化学療法剤を含む、薬学的組み合わせ、例えばキット。キットはその投与のための指示書を含み得る。

本明細書で使用する“併用投与”または“組み合わせ投与”などの用語は、選択した治療剤を単独の患者に投与することを包含することを意味し、薬剤を必ずしも同じ投与経路でまたは同時に投与するものではない処置レジメンを含むことを意図する。

本明細書で使用する“医薬的組み合わせ”なる用語は、１個またはそれ以上の活性成分の混合または組み合わせにより得られる製品を意味し、活性成分の固定されたまたは固定されていない組み合わせの両方を含む。“固定された組み合わせ”なる用語は、活性成分、例えば式Ｉの化合物および併用薬剤を、両方とも患者に同時に一つの物または投与量の形で投与することを意味する。“固定されていない組み合わせ”なる用語は、活性成分、例えば式Ｉの化合物および併用薬剤が、両方とも患者に別々の物として、同時に、共に、または特別な時間制限なしに連続して投与することを意味し、このような投与が患者の体内で２個の化合物の治療的有効量を提供するものである。後者はまたカクテル療法、例えば、３個またはそれ以上の活性成分の投与にも適用される。

本発明の化合物の製造法
本発明はまた本発明の免疫調節化合物の製造法も含む。記載の反応において、反応性官能基、例えばヒドロキシ基、アミノ基、イミノ基、チオ基またはカルボキシ基を、これらが最終産物で望まれるとき、それらの望ましくない反応への参加を避けるために、保護する必要があり得る。慣用の保護基を標準的慣習にしたがって使用でき、例えば、T.W. Greene and P. G. M. Wuts in “Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley and Sons, 1991を参照のこと。

式Ｉの化合物は、下記の反応スキームの通りの手順により製造できる：

(式中、ｎ、Ｘ、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_５は、上記式Ｉについて定義の通り)。式Ｉの化合物は、式２の化合物を、連続的に、適当な酸(例えばＴＦＡなど)と反応させ、ｔ−ブチルアクリレートと、適当なアミン(例えばＤＩＥＡなど)の存在下で反応させ、ｔ−ブチル保護基を、適当な酸(例えばＴＦＡなど)で除去することにより製造できる。反応は、約０から約１２０℃で進行し、完了まで約２４時間かかり得る。

本発明の化合物の製造の付加的工程：
本発明の化合物は、薬学的に許容される酸付加塩として、遊離塩基の形の化合物と薬学的に許容される無機または有機酸を反応させることにより製造できる。あるいは、本発明の化合物の薬学的に許容される塩基付加塩は、遊離塩基の形の化合物と薬学的に許容される無機または有機塩基を反応させることにより製造できる。あるいは、本発明の化合物の塩形は、塩の出発物質または中間体の使用により製造できる。

本発明の化合物の遊離酸または遊離塩基形は、対応する塩基付加塩または酸付加塩形から各々製造できる。例えば酸付加塩形の本発明の化合物は、対応する遊離塩基に、適当な塩基(例えば、水酸化アンモニウム溶液、水酸化ナトリウムなど)での処理により変換できる。塩基付加塩形の本発明の化合物は、対応する遊離酸に、適当な酸(例えば、塩酸など)での処理により変換できる。

酸化されていない形の本発明の化合物を、本発明の化合物のＮ−オキシドから、還元剤(例えば、硫黄、二酸化硫黄、トリフェニルホスフィン、リチウムボロハイドライド、水素化ホウ素ナトリウム、三塩化リン、三臭化物など)の適当な不活性有機溶媒(例えばアセトニトリル、エタノール、水性ジオキサンなど)中での、０から８０℃での処理により製造できる。

本発明の化合物のプロドラッグ誘導体は、当業者に一般的な方法により製造できる(例えば、さらなる詳細は、Saulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985参照)。例えば、適切なプロドラッグを、非誘導体である本発明の化合物を、適当なカルバミル化剤(例えば、１,１−アシルオキシアルキルカルバノクロリデート、パラ−ニトロフェニルカーボネートなど)と反応させることにより製造できる。

本発明の化合物の保護された誘導体は、当業者に一般的な手段により製造できる。保護基の創成およびその除去に適用できる技術の詳細な記載は、T W. Greene, “Protecting Groups in Organic Chemistry”, 3^rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999に見ることができる。

本発明の化合物は、溶媒和物(例えば、水和物)として、簡便に製造でき、はた、亜本発明の方法中に形成され得る。本発明の化合物の水和物は、ジオキシン、テトラヒドロフランまたはメタノールのような有機溶媒を使用した水性／有機溶媒混合物からの再結晶により簡便に製造できる。

本発明の化合物は、該化合物のラセミ混合物と、光学活性分解剤を反応させ、ジアステレオ異性体化合物のペアを形成させ、ジアステレオマーを分離し、光学的に純粋なエナンチオマーを回収することにより、個々の立体異性体として製造できる。エナンチオマーの分離は、本発明の化合物の共有結合的ジアステレオマー誘導体を使用して行うことができるが、分離できる複合体(例えば、結晶ジアステレオマー塩)が好ましい。ジアステレオマーは異なる物理特性(例えば、融点、沸点、溶解度、反応性など)を有し、これらの差異を利用して容易に分離できる。ジアステレオマーは、クロマトグラフィーにより、または好ましくは溶解度の差に基づいた分離／分解法により分離できる。光学活性エナンチオマーを、次いで、解離剤と共に、ラセミ化をもたらさない任意の慣用的手段により回収する。ラセミ混合物からの化合物の立体異性体の分離に適用できる技術のより詳細な記載は、Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, “Enantiomers, Racemates and Resolutions”, John Wiley and Sons, Inc., 1981に見ることができる。

要約すると、式Ｉの化合物は、下記を含む方法により製造できる：
(ａ)上記反応スキーム；そして
(ｂ)所望により本発明の化合物を薬学的に許容される塩に変換する；
(ｃ)所望により塩の形の本発明の化合物を、非塩形に変換する；
(ｄ)所望により非酸化形の本発明の化合物を薬学的に許容されるＮ−オキシドに変換する；
(ｅ)所望によりＮ−オキシド形の本発明の化合物をその非酸化形に変換する；
(ｆ)所望により本発明の化合物の個々の異性体を異性体の混合物から分離する；
(ｇ)所望により非誘導体である本発明の化合物を薬学的に許容されるプロドラッグ誘導体に変換する；そして
(ｈ)所望により本発明の化合物のプロドラッグ誘導体をその非誘導体形に変換する。

出発物質の製造を特に記載していない限り、該化合物は既知であるか、または、当分野で既知の方法に準じて、または、下記実施例に記載の通り製造できる。

当業者は、上記の変換は本発明の化合物の製造の代表であるのみであり、他の既知の方法を同様に使用できることを認識しよう。

実施例
下記実施例は代表的化合物の製造の詳細な記載を提供し、本発明を説明するために提供するが、限定するものではない。

実施例１
３−｛６−[３−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,２,４]オキサジアゾール−５−イル]−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル｝−プロピオン酸の合成

３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２,６−ジカルボン酸２−ｔｅｒｔ−ブチルエステル(９６mg、０.３４８mmol)のトルエン(４mL)中の懸濁液に、ＳＯＣｌ_２(２５４μL、１０当量)を添加する。混合物を３時間加熱還流する。すべての溶媒を減圧下除去する。残渣をトルエンに再溶解し、２回蒸発乾固して過剰のＨＣｌを除去し、高真空下で２時間乾燥させ、粗６−クロロカルボニル−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得る。

別のフラスコに、Ｎ−ヒドロキシ−２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−カルボキシアミジン(８２mg、０.２９mmol)およびＤＩＥＡ(２４２μL、４当量)およびＣＨ_２Ｃｌ_２(５mL)を添加する。混合物を氷−塩浴を使用して０℃に冷却する。前の工程の塩化物をＣＨ_２Ｃｌ_２(２mL)に溶解し、ゆっくり添加する。添加後、得られた混合物を室温に温め、２時間撹拌する。すべての溶媒を蒸発させ、混合物をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、勾配)で精製し、１２０mgの所望の生成物を得る。生成物をＴＨＦ(２mL)に溶解し、ＴＢＡＦ(４４４μL、２当量)と、マイクロ波バイアル中で混合する。混合物を１００℃で１５分、マイクロ波照射を使用して加熱する。すべての溶媒を蒸発させ、残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、勾配)で精製し、７０mgの６−[３−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,２,４]オキサジアゾール−５−イル]−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得る。

６−[３−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,２,４]オキサジアゾール−５−イル]−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(６８mg、０.１３mmol)のＣＨ_２Ｃｌ_２(１mL)溶液に、ＴＦＡ(２mL)を添加する。混合物を室温で３０分撹拌する。すべての溶媒を減圧下除去する。混合物をＣＨ_３ＯＨ(１.５mL)に溶解する。次いでＤＩＥＡ(１１９μL、１０当量)およびアクリル酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(３８μL、２当量)を添加する。混合物を９０℃で２０分、マイクロ波照射を使用して加熱する。すべての溶媒を蒸発させ、３−｛６−[３−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,２,４]オキサジアゾール−５−イル]−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル｝−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの粗生成物を、精製することなく次工程に使用する。

粗３−｛６−[３−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,２,４]オキサジアゾール−５−イル]−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル｝−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルのＣＨ_２Ｃｌ_２(１mL)溶液に、ＴＦＡ(１mL)を添加する。混合物を室温で１時間撹拌する。すべての溶媒を蒸発させる。混合物を逆相分取ＬＣ／ＭＳにより精製し、３−｛６−[３−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,２,４]オキサジアゾール−５−イル]−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル｝−プロピオン酸を得る: ¹H NMR (DMSO, 400 MHz) δ 8.52 (s, 1H), 8.38 (d, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.10 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.50 (m, 4H), 7.38 (m, 2H), 3.20-3.50 (m, 8H), 2.92 (t, 2H), MS (ES⁺): (494.10, M+1)⁺。

実施例２
３−[６−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルオキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸の合成

６−ヒドロキシメチル−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(８５mg、０.３２３mmol)のＣＨ_２Ｃｌ_２(１.５mL)溶液に、４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェノール(７６mg、１.２３当量)のＣＨ_２Ｃｌ_２(０.５mL)、ＰＰｈ_３(１２７mg、１.５当量)、および１,１'−(アゾジカルボニル)−ジピペリジン(１２２mg、１.５当量)を添加する。混合物を室温で一晩撹拌する。すべての溶媒を減圧下除去し、混合物をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、勾配)で精製し、７０mgの６−(４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェノキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得る。

６−(４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェノキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(７０mg、０.１５８mmol)のＣＨ_２Ｃｌ_２(１mL)溶液に、ＴＦＡ(１mL)を添加する。混合物を室温で３０分撹拌する。すべての溶媒を減圧下除去する。混合物をＣＨ_３ＯＨ(１.５mL)に溶解する。次いでＤＩＥＡ(２６９μL、１０当量)およびアクリル酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(４６μL、２当量)を添加する。混合物を９０℃で２０分、マイクロ波照射を使用して加熱する。すべての溶媒を蒸発させ、混合物をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、勾配)で精製し、５６mgの３−[６−(４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェノキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得る。

マイクロ波バイアルに、３−[６−(４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェノキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(５６mg、０.１１９mmol)、フェニルボロン酸(１７mg、１.２当量)、Ｐｄ(ＯＡｃ)_２(１.３mg、５mol％)、(ジシクロヘキシルホスフィノ)ビフェニル(４.２mg、１０mol％)、ＫＦ(２１mg、３当量)、およびＴＨＦ(０.２５mL)を入れる。得られた混合物を１２０℃に、マイクロ波照射を使用して２０分加熱する。混合物をセライトを通して濾過する。セライトをＥｔＯＡｃで数回洗浄する。次いで、濾液を濃縮して暗色油状物を得る。混合物をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、勾配)で精製し、３−[６−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルオキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得る。

３−[６−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルオキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(３５mg、０.０６８mmol)のＣＨ_２Ｃｌ_２(１mL)溶液に、ＴＦＡ(１mL)を添加する。混合物を室温で１時間撹拌する。すべての溶媒を蒸発させる。混合物を逆相分取ＬＣ／ＭＳで精製して、３−[６−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルオキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸を得る：¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 7.45 (m, 2H), 7.38-7.41 (m, 3H), 7.35 (s, 1H), 7.16-7.23 (m, 5H), 4.85 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 3.68 (m, 2H), 3.60 (t, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.96 (t, 2H), MS (ES⁺): (456.20, M+1)⁺。

上記実施例の方法を繰り返し、適当な出発物質を使用して、下記の式Ｉの化合物を表１に同定した通りに得る。

実施例３
式Ｉの化合物は生物学的活性を示す
Ａ. インビトロ：ヒトＥＤＧ受容体を発現するＣＨＯ細胞から調製した膜へのＧＴＰ[γ− ^３５ Ｓ]の結合を測定するＧＰＣＲ活性化アッセイ
ＥＤＧ−１(Ｓ１Ｐ_１)ＧＴＰ[γ−^３５Ｓ]結合アッセイ：均質化膜を、ヒトＥＤＧ−１ Ｎ−末端ｃ−ｍｙｃタグを安定に発現するＣＨＯ細胞クローンから調製する。細胞を２個の８５０cm^２ローラーボトル中の懸濁液で、３日または４日増殖させ、その後収集する。細胞を遠沈させ、冷ＰＢＳで洗浄し、＜２０mlの緩衝液Ａ(２０mM ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.４、１０mM ＥＤＴＡ、無ＥＤＴＡの完全プロテアーゼ阻害剤カクテル[１錠／２５ml])に再懸濁する。細胞懸濁液を氷上で、Polytronホモジナイザーを使用して、３００００rpmで各１５秒の３インターバルで均質化する。ホモジネートを最初に２０００rpmで卓上式低速遠心器で１０分遠心する。上清を、細胞ストレーナーを通した後、次いで、５０,０００×ｇで２５分、４℃で遠心する。ペレットを緩衝液Ｂ(１５％グリセロール、２０mM ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.４、０.１mM ＥＤＴＡ、無ＥＤＴＡの完全プロテアーゼ阻害剤カクテル[１錠／１０ml])に再懸濁する。調製物のタンパク質濃度をＢＣＡタンパク質アッセイキット(Pierce)を使用して、ＢＳＡを標準として用いて決定する。膜をアリコートに分け、−８０℃で凍結保存する。

１０mMから０.０１nMの範囲の試験化合物をＤＭＳＯ中に調製する。Ｓ１Ｐを４％ＢＳＡ溶液に、ポジティブコントロールとして希釈する。所望の量の膜調製物を氷冷アッセイ緩衝液(２０mM ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.４、１００mM ＮａＣｌ、１０mM ＭｇＣｌ_２、０.１％無脂肪酸ＢＳＡ、５μM ＧＤＰ)で希釈し、十分ボルテックス処理する。２μlまたはそれより少ない化合物を丸底９６−ウェルポリスチレンアッセイプレートの各ウェルに分配し、続いて１００μlの希釈した膜(３−１０μg／ウェル)を添加し、ホットＧＴＰγＳを添加するまで氷上に維持する。[^３５Ｓ]−ＧＴＰγＳを、冷アッセイ緩衝液で１：１０００(ｖ／ｖ)に希釈し、１００μlを各ウェルに添加する。反応を室温で９０分行い、その後、膜をPerkin-Elmer Unifilter(登録商標)GF/B-96フィルタープレートに、Packard Filtermate Harvesterを使用して収集する。数回洗浄緩衝液(２０mM ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.４、１００mM ＮａＣｌ、１０mM ＭｇＣｌ_２)で洗浄し、９５％エタノールで濯いだ後、フィルターを３７℃オーブンで３０分で乾燥させる。MicroScint-20を添加し、プレートをTopCountでのシンチレーションカウントのために密封する。ＥＣ５０値を、ＧＴＰ[γ−^３５Ｓ]結合曲線(生データ)のGraphPad Prismの用量応答曲線適合ツールでの適合により得る。６または１２の異なる濃度を使用して、濃度応答曲線を産生する(濃度当たり３データ点を使用)。

ＥＤＧ−３、−５、−６および−８ＧＴＰ[γ−^３５Ｓ]結合アッセイを、ＥＤＧ−１ＧＴＰ[γ−^３５Ｓ]結合アッセイに準じた方法を使用して、ｃ−末端ｃ−ｍｙｃタグ付加または非タグ付加受容体を安定に発現するＣＨＯ細胞由来の膜を使用して行う。各膜調製物について、力価測定実験を最初にＳ１Ｐコントロールで行い、アッセイウェル当たりに添加すべき膜の最適量を決定する。本発明の化合物を上記アッセイで試験し、ＥＤＧ−１受容体に選択性を示すことが観察された。例えば、３−｛４−[１−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルオキシイミノ)−エチル]−２−エチル−ベンジルアミノ｝−プロピオン酸(実施例２)は、上記アッセイで０.８nMのＥＣ_５０を示し、ＥＤＧ−１に対して、ＥＤＧ−３、ＥＤＧ−５、ＥＤＧ−６およびＥＤＧ−８を含む他の受容体の１個またはそれ以上と比較して、少なくとも１０００倍選択的である。同様に、３−[６−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルオキシ)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸(化合物９)は上記アッセイで０.２nMのＥＣ_５０を示し、ＥＤＧ−１に対して、ＥＤＧ−３、ＥＤＧ−５、ＥＤＧ−６およびＥＤＧ−８を含む他の受容体の１個またはそれ以上と比較して、少なくとも１０００倍選択的である。

Ｂ. インビトロ：ＦＬＩＰＲカルシウム流動アッセイ
本発明の化合物を、ＥＤＧ−１、ＥＤＧ−３、ＥＤＧ−５、およびＥＤＧ−６に対するアゴニスト活性について、ＦＬＩＰＲカルシウム流動アッセイで試験する。簡単に言うと、ＥＤＧ受容体を発現するＣＨＯ細胞を、５％ＦＢＳと５００μg／mlのＧ４１８を含むＦ−１２Ｋ培地(ＡＴＣＣ)に維持する。アッセイ前に、細胞を３８４黒色透明底プレートに、１０,０００細胞／ウェル／２５μlの密度で、１％ＦＢＳ含有Ｆ−１２Ｋの培地に播く。二日目に、細胞を３回(各２５μl)洗浄緩衝液で洗浄する。約２５μlの色素を各ウェルに添加し、１時間、３７℃および５％ＣＯ_２でインキュベートする。細胞を次いで４回洗浄緩衝液(各２５μl)で洗浄する。カルシウム流動を、２５μlのＳＥＱ２８７１溶液を各細胞のウェルに添加後に測定する。同じアッセイを、異なるＥＤＧ受容体を発現する細胞で行う。ＦＬＩＰＲカルシウム流動アッセイにおける力価を、３分インターバルにわたり測定し、ＥＤＧ−１活性化に相対的な、最大ピーク高パーセンテージ応答として定量する。

Ｃ. インビボ：血液リンパ球枯渇のためのスクリーニングアッセイおよび心臓作用の評価
循環しているリンパ球の測定：化合物をＤＭＳＯに溶解し、４％ＤＭＳＯ(ｖ／ｖ、最終濃度)の最終濃度を得るために希釈し、次いで、一定用量のＴｗｅｅｎ８０ ２５％／Ｈ_２Ｏ、ｖ／ｖで希釈する。Ｔｗｅｅｎ８０ ２５％／Ｈ_２Ｏ(２００μl)、４％ＤＭＳＯ、およびＦＴＹ７２０(１０μg)を各々ネガティブおよびポジティブコントロールとして包含させる。マウス(Ｃ５７ｂｌ／６雄、６−１０週齢)に２５０−３００μLの化合物溶液を経口で、短いイソフルラン麻酔下に胃管栄養法により投与する。

血液を、眼窩後洞(retro-orbital sinus)から薬剤投与６および２４時間後に短いイソフルラン麻酔下に採る。全血サンプルを血液学的分析に付す。末梢リンパ球計数を自動アナライザーを使用して決定する。末梢血リンパ球の分画をフルオロクローム−接合特異的抗体により染色し、蛍光活性化細胞分別機(Facscalibur)を使用して分析する。スクリーニングした各化合物のリンパ球枯渇活性を評価するために２匹のマウスを使用する。結果はＥＤ_５０であり、これは、５０％の血液リンパ球枯渇を示すのに必要な有効投与量として定義する。本発明の化合物を上記アッセイにしたがい試験し、好ましくは１mg／kgより小さいＥＤ_５０、より好ましくは０.５mg／kgより小さいＥＤ_５０を示すことが判明した。例えば、３−[６−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルオキシ)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸(化合物９)は、０.２mg／kgのＥＤ_５０を示す。

心臓作用の評価：化合物の心機能に対する作用を、AnonyMOUSE ECGスクリーニングシステムを使用してモニターする。心電図を、有意識マウス(Ｃ５７ｂｌ／６雄、６−１０週齢)で、化合物の投与前後に測定する。次いで、ＥＣＧシグナルを、e-MOUSEソフトウエアを使用して処理し評価する。２００μl 水、１５％ＤＭＳＯにさらに希釈した９０μgの化合物をＩＰで注射する。各化合物の心臓作用を評価するために４匹のマウスを使用する。

Ｄ. インビボ：抗血管形成活性
(ｉ)スフィンゴシン−１−ホスフェート(５μM／チャンバー)または(ii)ヒトＶＥＧＦ(１μg／チャンバー)の０.５mlの０.８％ｗ／ｖ寒天(ヘパリン、２０Ｕ／ml含有)溶液を含む、多孔性チャンバーをマウスの横腹に皮下にインプラントする。Ｓ１ＰまたはＶＥＧＦは、チャンバー周囲の血管組織の増殖を誘導する。この応答は用量依存性であり、組織の重量および血液含量の測定により定量できる。マウスに、チャンバーのインプラントの前４−６時間に開始して、１日１回、式Ｉの化合物を経口または静脈内投与し、４日間続ける。動物を最後の投与２４時間後に血管組織の測定のために殺す。チャンバー周囲の血管組織の重量および血液含量を測定する。式Ｉの化合物で処置した動物は、媒体単独で処置した動物と比較して、血管組織の重量および／または血液含量の減少を示した。式Ｉの化合物は、約０.３から約３mg／kgの投与量で投与したとき、抗血管形成である。

Ｅ. インビトロ：抗腫瘍活性
乳癌から元々単離したマウス乳癌細胞系、例えばＪｙｇＭＣ(Ａ)を使用する。工程前に、新鮮培地に播くために、細胞数を５×１０^５に調節する。細胞を、２.５mMのチミジン含有、ＦＣＳ非含有新鮮培地で、１２時間インキュベートし、ＰＢＳで２回洗浄し、続いて１０％ＦＣＳ含有新鮮培地を添加し、さらに１２時間インキュベートする。その後、細胞を２.５mMのチミジン含有、ＦＣＳ非含有新鮮培地で１２時間インキュベートする。細胞をブロックから解放するために、細胞を２回ＰＢＳ洗浄し、１０％ＦＣＳ含有新鮮培に再び播く。同調後、細胞を種々の濃度の式Ｉの化合物の存在下または非存在下、３、６、９、１２、１８または２４時間インキュベートする。細胞を０.２％ＥＤＴＡで処理後収集し、氷冷７０％エタノール溶液で固定し、２５０□g／mlのＲＮａｓｅＡ(タイプ１−Ａ：Sigma Chem. Co.)で、３７℃で３０分加水分解し、１０mg／mlのヨウ化プロピジウムで２０分染色する。インキュベーション期間の後、細胞数を、CoulterカウンターおよびＳＲＢ比色アッセイの両方で測定する。これらの条件下、式Ｉの化合物は、腫瘍細胞の増殖を、１０^−１２から１０^−６Ｍの範囲の濃度で阻害する。

本明細書に記載の実施例および態様は、説明の目的のためのみであり、それに鑑みた種々の修飾および改変が、当業者には示唆され、本出願の精神および理解の範囲内および添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれる。本明細書で引用したすべての文献、特許および特許出願は、引用によりすべての目的で本明細書に包含させる。

Claims (12)

1. 式Ｉ：
   

   

   〔式中、
   ｎは１、２または３であり；
   Ａは−Ｘ_１Ｃ(Ｏ)ＯＲ_６、−Ｘ_１ＯＰ(Ｏ)(ＯＲ_６)_２、−Ｘ_１Ｐ(Ｏ)(ＯＲ_６)_２、−Ｘ_１Ｓ(Ｏ)_２ＯＲ_６、−Ｘ_１Ｐ(Ｏ)(Ｒ_６)ＯＲ_６および１Ｈ−テトラゾール−５−イルから選択され；ここでＸ_１は結合およびＣ_１−３アルキレンから選択され；そして各Ｒ_６は独立して水素およびＣ_１−６アルキルから選択され；
   Ｘは結合であるかまたはＣ_１−４アルキレン、−Ｘ_１ＯＸ_２−、−Ｘ_１ＮＲ_７Ｘ_２−、−Ｘ_１Ｃ(Ｏ)ＮＲ_７Ｘ_２−、−Ｘ_１ＮＲ_７Ｃ(Ｏ)Ｘ_２−、−Ｘ_１Ｓ(Ｏ)Ｘ_２−、−Ｘ_１Ｓ(Ｏ)_２Ｘ_２−、−Ｘ_１ＳＸ_２−およびＣ_２−９ヘテロアリーレンから選択され；ここで、Ｘ_１およびＸ_２は独立して結合およびＣ_１−３アルキレンから選択され；Ｒ_７は水素およびＣ_１−６アルキルから選択され；そしてＸの任意のヘテロアリーレンは、所望によりハロおよびＣ_１−６アルキルからなる群のメンバーにより置換されており；
   ＹはＣ_６−１０アリールおよびＣ_２−９ヘテロアリールから選択され、ここで、Ｙの任意のアリールまたはヘテロアリールは、所望により、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換Ｃ_１−６アルコキシから選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；
   Ｒ_１はＣ_６−１０アリールおよびＣ_２−９ヘテロアリールから選択され；ここで、Ｒ_１のアリールまたはヘテロアリールは、所望によりＣ_６−１０アリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_２−９ヘテロアリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキルＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８ヘテロシクロアルキルＣ_０−４アルキルまたはＣ_１−６アルキルから選択されるラジカルで置換されており；ここで、Ｒ_１の任意のアリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基またはヘテロシクロアルキル基は、所望により、ハロ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ_１−６アルコキシから選択される１個から５個のラジカルで置換されていてよく；そしてＲ_１の任意のアルキル基は、所望により、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)_２−、−ＮＲ_７−および−Ｏ−から選択される原子または基で置換されたメチレンを有してよく；ここで、Ｒ_７は水素またはＣ_１−６アルキルから選択され；
   Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_５は、独立して水素、Ｃ_１−６アルキル、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換Ｃ_１−６アルコキシから選択される。〕
   の化合物ならびにその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、異性体およびプロドラッグ。
2. Ｒ_１が、所望により、Ｃ_６−１０アリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_２−９ヘテロアリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキルＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８ヘテロシクロアルキルＣ_０−４アルキルまたはＣ_１−６アルキルで置換されているフェニル、ナフチル、フラニルまたはチエニルであり；ここで、Ｒ_１の任意のアリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基またはヘテロシクロアルキル基が、所望により、ハロ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ_１−６アルコキシから選択される１個から５個のラジカルで置換されていてよく；そしてＲ_１の任意のアルキル基は、所望により、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)_２−、−ＮＲ_７−および−Ｏ−から選択される原子または基で置換されたメチレンを有してよく；ここで、Ｒ_７は水素またはＣ_１−６アルキルである、請求項１記載の化合物。
3. Ｙがフェニルおよびベンゾオキサゾリルから選択され；そしてＸが結合であるかまたは−Ｘ_１ＯＸ_２−およびＣ_４−６ヘテロアリーレンから選択され；ここで、Ｘ_１およびＸ_２が独立して結合およびＣ_１−３アルキレンから選択され；ここで、Ｘの任意のヘテロアリーレンが所望によりハロおよびＣ_１−６アルキルから選択される群のメンバーで置換されている、請求項１記載の化合物。
4. Ｒ_１が：
   

   

   (式中、アスタリスクはＲ_１とＸの結合点を示し；ｍは１および２から選択され；Ｒ_１２は水素、Ｃ_６−１０アリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_２−９ヘテロアリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキルＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８ヘテロシクロアルキルＣ_０−４アルキルまたはＣ_１−６アルキルから選択され；ここで、Ｒ_１２の任意のアリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基またはヘテロシクロアルキル基は、所望により、ハロ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ_１−６アルコキシから選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；そしてＲ_１２の任意のアルキル基は、所望により、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)_２−、−ＮＲ_１０−および−Ｏ−から選択される原子または基で置換されたメチレンを有してよく；ここで、Ｒ_１０は水素またはＣ_１−６アルキルであり；そしてＲ_１３はハロ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ_１−６アルコキシから選択される、請求項１記載の化合物。
5. Ａが−(ＣＨ_２)_２Ｃ(Ｏ)ＯＨであり；そしてＲ_２、Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_５が水素である、請求項１記載の化合物。
6. ｎが１または２であり；Ｙがフェニルおよびベンゾオキサゾリルから選択され；そしてＸが結合であるかまたは[１,２,４]オキサジアゾール、−ＣＨ_２Ｏ−、−ＯＣＨ_２−、イソキサゾールおよび[１,３,４]オキサジアゾールから選択される、請求項５記載の化合物。
7. Ｒ_１が：
   

   

   (式中、Ｒ_１２は水素、フェニルおよびシクロヘキシルから選択され；ここで、Ｒ_１２の任意のフェニルまたはシクロヘキシルは、所望によりメチルで置換されており；そしてＲ_１３はトリフルオロメチル、メチルおよびエチルから選択される)
   から選択される、請求項６記載の化合物。
8. ３−｛６−[３−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,２,４]オキサジアゾール−５−イル]−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル｝−プロピオン酸、３−[６−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルオキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸、３−｛５−[５−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−イソキサゾール−３−イル]−１,３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル｝−プロピオン酸、３−｛５−[５−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,２,４]オキサジアゾール−３−イル]−１,３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル｝−プロピオン酸、３−｛５−[５−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イル]−１,３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル｝−プロピオン酸、３−[２−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−５,７−ジヒドロ−オキサゾロ[４,５−ｆ]イソインドール−６−イル]−プロピオン酸、３−｛７−[５−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,２,４]オキサジアゾール−３−イル]−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル｝−プロピオン酸、３−｛６−[５−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,２,４]オキサジアゾール−３−イル]−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル｝−プロピオン酸、３−｛６−[５−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)−[１,３,４]オキサジアゾール−２−イル]−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル｝−プロピオン酸、３−[６−(３−トリフルオロメチル−ベンジルオキシ)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸、３−[６−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルオキシ)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸、３−[６−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメトキシ)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸、３−[７−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルオキシ)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸、３−[６−(４−シクロヘキシル−３−メチル−フェノキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸、３−[６−(４−シクロヘキシル−３−エチル−フェノキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸、３−[６−(２−エチル−ビフェニル−４−イルオキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸および３−[６−(２−エチル−３'−メチル−ビフェニル−４−イルオキシメチル)−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル]−プロピオン酸から選択される、請求項７記載の化合物。
9. 治療的有効量の請求項１記載の化合物を、薬学的に許容される賦形剤と共に含む、医薬組成物。
10. 動物における、ＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体介在シグナル伝達の変更が、その疾患の病態および／または総体症状を予防、阻害または軽減できるものである疾患を処置する方法であり、動物に治療的有効量の請求項１記載の化合物を投与することを含む、方法。
11. 対象における、リンパ球が介在する障害または疾患を予防または処置する、急性もしくは慢性移植拒絶反応またはＴ細胞介在炎症性または自己免疫性疾患を予防または処置する、無秩序な血管形成を阻害または制御する、または新規血管形成過程が介在するまたは無秩序な血管形成が関連する疾患を予防または処置する方法であり、有効量の請求項１の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
12. 動物における、ＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体介在シグナル伝達の変更が、その疾患の病態および／または総体症状に関与するものである疾患の処置用医薬の製造における、請求項１記載の化合物の使用。