JP2007210948A

JP2007210948A - タイトジャンクション形成促進剤

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Publication number: JP2007210948A
Application number: JP2006032838A
Authority: JP
Inventors: Noriyuki Omori; 敬之大森; Shunsuke Koike; 俊輔小池
Original assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Current assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Priority date: 2006-02-09
Filing date: 2006-02-09
Publication date: 2007-08-23
Anticipated expiration: 2026-02-09
Also published as: JP4684906B2

Abstract

【課題】タイトジャンクション形成促進剤を提供する。
【解決手段】本発明は化学式（１）で表される化合物／またはその塩を含有するタイトジャンクション形成促進剤に関する。本発明の化学式（１）で表される化合物および／またはその塩はタイトジャンクション形成促進効果に優れ、消化管粘膜や上皮組織におけるアレルゲン、細菌、微生物の侵入防止に有用である。本発明に係るタイトジャンクション形成促進剤の形態は特に問わず、錠剤、顆粒剤、飲料、乳液等の通常の医薬品、医薬部外品、化粧品、食品に応用できる。

Description

本発明は、生体の防御や組織の機能維持に関する技術分野の発明であり、特に細胞接着や、クローディン、オクルディンの発現を亢進する、化学式（１）で表される化合物および／またはこれらの塩を有効成分とするタイトジャンクション形成促進剤に関する。

生体には様々な上皮細胞が存在し、その機能は複雑である。その上皮細胞同士が集合した上皮組織の重要な役割の一つは細胞間を通る物質の制御である。これは、水や特定のイオン、タンパク質等の必要な小分子は通すものの、外来物質を体内に取り込む吸収過程で、有害物質を無制限に取り込まないような障壁としての機能を有している。
このような障壁は主として細胞間の接着により形成されるが、その接着の１つがタイトジャンクション（以下「ＴＪ」と略記する）である。ＴＪは、隣接する細胞同士を結合させるだけでなく、消化管の粘膜上皮や血管内皮の細胞間を、シールする結合装置である。
ＴＪを構成しているのは、細胞膜タンパク質クローディンやオクルディンである。これらのタンパク質はＴＪストランドの骨格を構成し、足場タンパク質によってＦ−アクチンと連結されており、ＴＪ機能を制御すると考えられている。
クローディンやオクルディンの発現が何らかの原因で減少した場合、ＴＪの構造的な破壊が起こり、有害物質に対する抵抗力は低下する。これは、細菌による感染症や敗血症および多臓器不全等の原因となる。また、消化管では食物アレルゲン、病原性微生物および環境ホルモン等の体内への侵入を許し、健康を著しく害する恐れがある。

近年、このような観点からＴＪ機能を高めるような素材を探索する試みがなされている。例えば、ガングリオシドがＴＪの形成を促進し、アレルゲンの侵入を防ぐこと（特許文献１）、消化管ホルモンを有効成分とする消化管粘膜機能維持剤（特許文献２）、核酸ならびにその分解物を有効成分とするＴＪ形成促進剤（特許文献３）、アレルゲンの吸収抑制活性を有するペプチドやアミノ酸（特許文献４）等が開示されている。
特開平８−１０９１３３特開平８−２６８９０８特開平９−３０９７８特開２００２−２５７８１４

しかしながら、製剤中の安定性や経済性等の点から未だ満足できるものは至っておらず、副作用のない素材の開発が望まれていた。

このような事情により、本発明者らは鋭意研究検討した結果、化学式（１）で表される化合物および／またはそれらの塩が安定で、優れたＴＪ形成促進効果を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。

本発明の化学式（１）は、天然由来のものを利用することができるほか、トコフェロールから常法により合成でき、下記の文献も参考にできる。

特公昭６１−２０５８３特公平３−３２５５８

また、本発明においては化学式（１）の塩も使用可能であり、塩の種類は限定されないが、一般的にはナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩が用いられる。

本発明のＴＪ形成促進剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品または食品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、座剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤等を含む）、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、錠菓、飲料等が挙げられる。また、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常の化粧品、医薬部外品、医薬品等に用いられる各種成分、例えば油性成分、乳化剤、保湿剤、増粘剤、薬効成分、防腐剤、顔料、粉体、ｐＨ調整剤、紫外線吸収剤、抗酸化剤、香料等を適宜配合することができる。

油性成分としては、例えば流動パラフィン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス、スクワラン、ホホバ油、ミツロウ、カルナウバロウ、ラノリン、オリーブ油、ヤシ油、高級アルコール、脂肪酸、高級アルコールと脂肪酸のエステル、シリコーン油等が挙げられる。乳化剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の非イオン界面活性剤、ステアロイル乳酸ナトリウム等のアニオン界面活性剤、大豆リン脂質等の両性界面活性剤、塩化アルキルトリメチルアンモニウム等のカチオン界面活性剤が挙げられる。保湿剤としては、例えばグリセリン、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、１，３−ブチレングリコールなどが挙げられる。増粘剤としては、例えばカルボキシビニルポリマー、キサンタンガム、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ベントナイト等の粘土鉱物等が挙げられる。薬効成分としては、例えば各種ビタミンおよびその誘導体、アラントイン、グリチルリチン酸およびその誘導体、各種動植物抽出物等が挙げられる。

本発明のＴＪ形成促進剤中に配合される化合物の量は、剤型や期待する効果の程度により異なるが、通常０．００１重量％以上、好ましくは０．１〜５０重量％程度配合するのがよい。０．００１重量％未満では十分な効果は望みにくい場合があり、５０重量％を超えて配合した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。

本発明の新規な薬効成分は、ＴＪ形成促進効果を有し、腸管粘膜における食物アレルゲンの侵入や重層上皮における細菌や微生物の侵入に対する抑制効果を示し、これらが原因で起こる各種疾患の予防、抑制、症状の改善に有用である。

次に本発明による効果を具体的な実施例を挙げ説明する。これらの実施例は効果を具体的に説明するもので、発明の範囲を限定するものではない。実施例中の配合量は重量％である。

本発明の薬効成分は、処方例として下記の製剤化を行うことができる。

処方例−１飲料
処方配合量（％）
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム２．０
２．クエン酸０．７
３．果糖ブドウ糖液糖６０．０
４．香料適量
５．精製水にて全量を１００とする。
［製法］５に１〜４を加え、攪拌溶解してろ過し、加熱殺菌後、５０ｍＬガラス瓶に充填する。

処方例−２飲料
処方配合量（％）
１．ｄ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム１．０
２．クエン酸０．７
３．ショ糖６０．０
４．香料適量
５．精製水にて全量を１００とする。
［製法］５に１〜４を加え、攪拌溶解してろ過し、加熱殺菌後、５０ｍＬガラス瓶に充填する。

処方例−３顆粒剤
処方配合量（％）
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ジナトリウム３．０
２．還元麦芽糖水あめ３８．０
３．微結晶セルロース５９．０
［製法］成分１〜３に７０％エタノールを適量加えて練和し、押出し造粒した後、乾燥して顆粒剤を得る。

処方例−４錠剤
処方配合量（％）
１．ｄ−α−トコフェリルリン酸カリウム４．０
２．乾燥コーンスターチ２５．０
３．還元麦芽糖水あめ２０．０
４．粉糖４８．０
５．ショ糖脂肪酸エステル３．０
［製法］成分１〜４に７０％エタノールを適量加えて練和し、押出し造粒した後、乾燥して顆粒を得る。顆粒に成分５を加えて打錠し、１錠０．５２ｇの錠剤を得る。

処方例−５錠菓
処方配合量（％）
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム０．９
２．乾燥コーンスターチ５１．１
３．エリスリトール３９．０
４．クエン酸５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル３．０
６．香料１．０
［製法］成分１〜４に水を適量加えて練和し、押出し造粒した後、乾燥して顆粒を得る。顆粒に成分５及び６を加えて打錠し、１個１．０ｇの錠菓を得る。

処方例−６カプセル剤
処方配合量（％）
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム１５．０
２．セルロース８５．０
［製法］成分１および２を混合し、２号硬カプセルに２５０ｍｇ充填してカプセル剤を得る。

処方例−７クリーム配合量（％）
処方
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム２．０
２．スクワラン５．５
３．オリーブ油３．０
４．ステアリン酸２．０
５．ミツロウ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ベヘニルアルコール１．５
９．モノステアリン酸グリセリン２．５
１０．香料０．１
１１．１，３−ブチレングリコール８．５
１２．パラオキシ安息香酸エチル０．０５
１３．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１４．精製水にて全量を１００とする
［製法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１および１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、さらに３０℃まで冷却して製品とする。

処方例−８化粧水配合量（％）
処方
１．ｄ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム０．１
２．１，３−ブチレングリコール８．０
３．グリセリン２．０
４．キサンタンガム０．０２
５．クエン酸０．０１
６．クエン酸ナトリウム０．１
７．エタノール５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）０．１
１０．香料適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製法］成分１〜６および１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。

処方例−９乳液配合量（％）
処方
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ジナトリウム０．５
２．スクワラン５．０
３．オリーブ油５．０
４．ホホバ油５．０
５．セタノール１．５
６．モノステアリン酸グリセリン２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタン
モノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
９．香料０．１
１０．プロピレングリコール１．０
１１．グリセリン２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１および１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、さらに３０℃まで冷却して製品とする。

処方例−１０ゲル剤配合量（％）
処方
１．ｄ−α−トコフェリルリン酸カリウム０．１
２．エタノール５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油０．１
５．香料適量
６．１，３−ブチレングリコール５．０
７．グリセリン５．０
８．キサンタンガム０．１
９．カルボキシビニルポリマー０．２
１０．水酸化カリウム０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製法］成分２〜５と、成分１および６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。

処方例−１１軟膏配合量（％）
処方
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム１．０
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）２．０
３．モノステアリン酸グリセリン１０．０
４．流動パラフィン５．０
５．セタノール６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル０．１
７．プロピレングリコール１０．０
８．精製水にて全量を１００とする
［製法］成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１および６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化し、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例−１２パック配合量（％）
処方
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸カリウム０．１
２．ポリビニルアルコール１２．０
３．エタノール５．０
４．１，３−ブチレングリコール８．０
５．パラオキシ安息香酸メチル０．２
６．パラオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）０．５
７．クエン酸０．１
８．クエン酸ナトリウム０．３
９．香料適量
１０．精製水にて全量を１００とする
［製法］成分１〜１０を均一に溶解し製品とする。

処方例−１３ファンデーション配合量（％）
処方
１．ｄ−α−トコフェリルリン酸ジナトリウム１．０
２．ステアリン酸２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタン
モノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）１．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
５．セタノール１．０
６．液状ラノリン２．０
７．流動パラフィン３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル６．５
９．パラオキシ安息香酸ブチル０．１
１０．カルボキシメチルセルロースナトリウム０．１
１１．ベントナイト０．５
１２．プロピレングリコール４．０
１３．トリエタノールアミン１．１
１４．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１５．二酸化チタン８．０
１６．タルク４．０
１７．ベンガラ１．０
１８．黄酸化鉄２．０
１９．香料適量
２０．精製水にて全量を１００とする
［製法］成分２〜９を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分２０に成分１０をよく膨潤させ、続いて、成分１および１１〜１４を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１５〜１８を加え、冷却し、４５℃で成分１９を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例−１４浴用剤配合量（％）
処方
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム１．０
２．炭酸水素ナトリウム５０．０
３．黄色２０２号適量
４．香料適量
５．無水硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。

次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。

実験例１ＴＪ形成促進試験
ヒト消化管上皮細胞Ｃａｃｏ−２に試料を１０μＭとなるように添加し、１０日間培養した。ＴＪ形成の確認はＣａｃｏ−２細胞の経上皮電気抵抗値をＭｉｌｌｉｃｅｌｌ−ＥＲＳ（ミリポア）で測定した。その結果、表１に示すように、化学式（１）で表される化合物および／またはそれらの塩はＴＪ形成を促進した。

実験例２クローディンおよびオクルディンｍＲＮＡの発現解析
コンフルエントな状態の正常ヒト角化細胞に、試料を１０μＭとなるように添加し、２４時間後に総ＲＮＡの抽出を行った。総ＲＮＡを基にＲＴ−ＰＣＲ法によりクローディンおよびオクルディンｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ＲＴ−ＰＣＲ法はＴａＫａＲａＲＮＡＰＣＲＫｉｔ（ＡＭＶ）Ｖｅｒ．２．１を用いた。また、内部標準としてはＧＡＰＤＨを用いた。その他の操作は定められた方法に従い、ＰＣＲ反応液をアガロースゲル電気泳動に供し、クローディン、オクルディン、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現をバンドとして確認した。これらのバンドをポラロイドカメラにて撮影してデンシトメーターを用いて定量化し、クローディンおよびオクルディンｍＲＮＡの発現量を内部標準であるＧＡＰＤＨｍＲＮＡ発現量に対する割合として求め、対照を１とした場合の発現比で表した。その結果、表２に示すように、化学式（１）で表される化合物および／またはそれらの塩はクローディンおよびオクルディンｍＲＮＡの発現を亢進した。

実験例３紫外線照射に対するクローディンおよびオクルディンの防御効果
コンフルエントな状態の正常ヒト角化細胞に、試料を１０μＭとなるように添加し、２４時間後にＵＶＢを３０ｍＪ／ｃｍ^２照射した。照射３時間後に総ＲＮＡを抽出し、総ＲＮＡを基にＲＴ−ＰＣＲ法によりクローディンおよびオクルディンｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ＲＴ−ＰＣＲ法はＴａＫａＲａＲＮＡＰＣＲＫｉｔ（ＡＭＶ）Ｖｅｒ．２．１を用いた。また、内部標準としてはＧＡＰＤＨを用いた。その他の操作は定められた方法に従い、ＰＣＲ反応液をアガロースゲル電気泳動に供し、クローディン、オクルディン、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現をバンドとして確認した。これらのバンドをポラロイドカメラにて撮影してデンシトメーターを用いて定量化し、クローディンおよびオクルディンｍＲＮＡの発現量を内部標準であるＧＡＰＤＨｍＲＮＡ発現量に対する割合として求め、対照を１とした場合の発現比で表した。その結果、表３に示すように、化学式（１）で表される化合物および／またはそれらの塩は、紫外線によるクローディンおよびオクルディンｍＲＮＡの発現低下を抑制し、防御効果を示した。

本発明の化学式（１）で表される化合物および／またはその塩は、消化管粘膜や上皮組織においてアレルゲン、細菌、微生物の侵入を防止する効果に優れたタイトジャンクション形成促進剤を提供できる。

Claims

化学式（１）で表される化合物および／またはこれらの塩を配合することを特徴とするタイトジャンクション形成促進剤。
Ｒ_１、Ｒ_２が水素原子であることを特徴とする請求項１記載のタイトジャンクション形成促進剤。
クローディンの発現を亢進することを特徴とする請求項１〜２のいずれか一項記載のタイトジャンクション形成促進剤。
オクルディンの発現を亢進することを特徴とする請求項１〜２のいずれか一項記載のタイトジャンクション形成促進剤。
請求項１〜４のいずれか一項記載のタイトジャンクション形成促進剤を含有する医薬品、医薬部外品、化粧品または食品。
化学式（１）で表される化合物および／またはこれらの塩を配合することを特徴とするアレルゲン吸収抑制剤。
化学式（１）で表される化合物および／またはこれらの塩を配合することを特徴とする免疫賦活剤。
化学式（１）で表される化合物および／またはこれらの塩を配合することを特徴とする紫外線障害改善剤。