JP2006343783A - コンフォーカル顕微鏡 - Google Patents

Abstract

【課題】観察者が求める画像を簡易に設定することができる操作性の良いコンフォーカル顕微鏡を提供すること。
【解決手段】コンピュータ５０は、駆動装置３４、３６、３７、３８を制御して波長選択装置１２、光分割装置２１、対物光学系２４、蛍光選択装置２６を観察者からの入力に応じた装置条件に設定する。この際、コンピュータ５０は、以上のような基本的な装置条件から、他の装置条件を自動的に算出する。まず、入力された対物レンズ２４ａの倍率と開口数から、コンフォーカル顕微鏡として期待される分解能を与えるピンホールサイズを決定する。次に、入力あるいは選択された蛍光色素の種類から、先に入力された実験時間中に蛍光が著しく退色しない条件で、励起光のレーザパワーを決定する。最後に、入力あるいは選択された試料に実際に導入する色素の濃度で、すでに決定されたレーザ光強度及びピンホールサイズを用いた際に適切な輝度の画像が得られるように、検出感度を決定する。
【選択図】図１

Description

本発明は、コンフォーカル顕微鏡に関し、特に簡易に観察条件を設定することができるコンフォーカル顕微鏡に関する。

レーザスキャンタイプのコンフォーカル顕微鏡では、分解能及び画質ともに最適で再現性のある画像を得るために、例えば、レーザ照明の強度、検出器の感度、ピンホールの大きさ等の装置設定を適切に行わねばならない。

これら種々の装置設定は、試料からの検出光の明るさや、観察者が画像に最も期待する情報が何であるかに大きく依存するため、個々の設定内容は観察者に任されているのが現状である。この結果、観察者がコンフォーカル顕微鏡の特性を熟知していない場合には、装置設定が不適切となって、顕微鏡装置が持っている性能を十分に発揮できないことも少なくない。

特に、蛍光観察用のコンフォーカル顕微鏡の場合には、試料から発せられる蛍光が極微弱光であり、かつ試料が生きた生物である場合が多い。このような場合には、上述した３つの設定を上手に行わないと画質が大きく劣化してしまうという、顕微鏡装置の操作上の難しさがある。

観察者にとって最適な画像を求めるための装置設定に関して、具体例を挙げて説明する。共焦点による効果を重視する場合には、ピンホールサイズを小さくするが、これに伴って検出光量が少なくなるので画像のＳ／Ｎ比が悪くなる。それでもできうる限りの分解能を求めたい場合には、生物試料へのダメージと蛍光色素の退色現象とを承知の上で、レーザ照射パワーを上げ、画像のＳ／Ｎ比を確保する。一方、長時間にわたる現象を観察したい場合には、レーザ照射パワーは極力抑えねばならず、それに伴う検出光量の減少、ひいては画像のＳ／Ｎ比の低下を防ぐために、分解能が多少犠牲になるのを承知でピンホールサイズを大きくする。

しかし、以上のような装置設定は、コンフォーカル顕微鏡を使い慣れない観察者にとって、顕微鏡装置の適切な操作方法を分かりにくくしている主要因の一つとなっている。

このような従来の問題点に鑑み、本発明は、観察者が求める画像を簡易に設定することができる操作性の良いコンフォーカル顕微鏡を提供することを目的とする。

上記課題を解決するため、本発明のコンフォーカル顕微鏡は、光源と、前記光源からの光のうち、特定波長の光を照明光として選択する波長選択装置と、複数の対物レンズを保持するとともに顕微鏡光路に択一的に配置する対物レンズ切換装置と、前記光源と前記顕微鏡光路に配置される前記対物レンズとの間に配置され、前記顕微鏡光路に配置される対物レンズを介して前記試料に照射される前記照明光を２次元走査する走査装置と、前記照明光の走査により前記試料から発する光を前記顕微鏡光路に配置される対物レンズと前記走査装置とを介して検出する検出装置と、前記顕微鏡光路に配置される対物レンズの結像面と光学的に共役な位置に配置され、前記検出装置に入射する前記試料からの光を制限するピンホールが設けられるとともに前記ピンホールの径を変更可能な開口部材と、前記照明光の波長に関する情報と前記顕微鏡光路に配置される対物レンズの開口数に関する情報とに基づいて、前記ピンホール径の標準値を算出する制御装置とを備えることを特徴とする。

また、前記制御装置が、前記顕微鏡光路に配置される対物レンズの開口数と前記照明光の波長とに関する情報に基づいて前記ピンホール径について所定の調整範囲を算出することが好ましい。

また、前記制御装置が、前記開口部材を動作させることによって前記ピンホール径を変更できる範囲を前記調整範囲内に制限することが好ましい。

また、前記光源が、前記照明光として前記試料に導入すべき蛍光色素を励起するための励起光を発生し、前記制御装置は、前記蛍光色素の種類及び導入量と、前記蛍光色素からの蛍光を前記検出装置で観察する際の実験時間とに関する情報設定に基づいて、前記光源の出力の標準値を計算し、さらに前記蛍光色素の種類及び導入量と前記光源の出力の標準値と前記ピンホール径の標準値とに基づいて、前記検出装置の検出感度の標準値を計算することが好ましい。

また、前記制御装置に対して、前記蛍光色素の種類及び導入量に関する情報と前記実験時間に関する情報とを入力するための入力装置をさらに有することが好ましい。

また、前記入力装置が、前記顕微鏡光路に配置される対物レンズの開口数に関する情報と前記照明光の波長に関する情報とを前記制御装置に対して入力可能であることが好ましい。

また、前記波長選択装置が、複数の波長選択フィルタを顕微鏡光路に択一的に配置するフィルタ切換装置と、前記顕微鏡光路に配置されている波長選択フィルタの種類に関する情報を検出するフィルタ検出装置とを有し、前記対物レンズ切換装置が、前記顕微鏡光路に配置されている対物レンズに関する情報を検出する対物レンズ検出装置を有し、前記制御装置が、前記複数の波長選択フィルタの選択波長に関する情報と、前記複数の対物レンズの開口数に関する情報とを記憶する記憶装置を有し、前記フィルタ検出装置と前記対物レンズ検出装置とからの検出情報に基づいて、前記記憶装置に記憶された情報から前記照明光の波長に関する情報と前記顕微鏡光路に配置される対物レンズの開口数に関する情報とを選択することが好ましい。

また、前記制御装置が、算出した前記ピンホール径の標準値に基づいて、前記開口部材を制御し前記ピンホール径を変更することが好ましい。

また、前記制御装置が、算出した前記光源の出力の標準値と前記検出装置の検出感度の標準値とに基づいて、前記光源の出力及び前記検出装置の検出感度を変更することが好ましい。

本発明によれば、観察者が求める画像を簡易に設定することができる操作性の良いコンフォーカル顕微鏡を提供することができる。

図１は、レーザスキャンタイプのコンフォーカル顕微鏡の一実施形態を説明するための模式図である。

このコンフォーカル顕微鏡は、顕微鏡本体として、照明用のレーザ光を発生するレーザ光源１１と、レーザ光源１１から出射したレーザ光から特定波長の励起光を選択する波長選択装置１２と、励起光の強度を調節する調光装置１３と、励起光のビーム径を拡大するビームエキスパンダ１４と、試料ＳＰに照射する励起光と試料ＳＰから発生する蛍光とを分離するための光分割装置２１と、励起光を試料ＳＰ位置で２次元的に走査するための走査装置であるスキャナモジュール２２と、リレーレンズ２３と、励起光を試料ＳＰ位置に集光する対物光学系２４と、試料ＳＰを支持して３次元に移動可能なステージ２５と、試料ＳＰから出射して対物光学系２４、リレーレンズ２３及びスキャナモジュール２２を逆行して光分割装置２１を透過した蛍光からノイズ光を除去する蛍光選択装置２６と、蛍光選択装置２６を通過した蛍光を集光する集光レンズ２７と、共焦点効果を生じさせるための開口部材であるピンホールモジュール２８と、ピンホールモジュール２８を通過した蛍光を検出する検出器２９とを備える。

レーザ光源１１は、例えば波長４８８ｎｍ、５６８ｎｍ、６４７ｎｍの複数のレーザ光を発生するマルチラインタイプのＫｒ−Ａｒレーザになっている。

波長選択装置１２は、透過波長特性の異なる複数のバンドパスフィルタ１１２ａ、１１２ｂを有する。これらのバンドパスフィルタ１１２ａ、１１２ｂは、切換装置であるタレット板１１２に固定されており、光路上に択一的に配置可能となっている。タレット板１１２を駆動装置３４に設けた電動モータ等によって適宜回転させることにより、使用する蛍光色素の種類に応じて試料ＳＰに照射する励起光の波長を適宜選択できる。

調光装置１３は、円周方向に濃度が連続的に変化するタイプのＮＤフィルタを内蔵する。このＮＤフィルタを駆動装置３５に設けた電動モータ等によって回転駆動することにより、試料ＳＰに照射する励起光のレーザパワー、すなわち光源出力を調節することができる。

光分割装置２１は、波長特性が異なる複数のダイクロイックミラーを備えている（図中では、便宜上単一のダイクロイックミラー１２１のみを示している）。これらのダイクロイックミラーは、図示を省略するタレット板に固定されて光路上に択一的に配置可能となっている。タレット板を駆動装置３６によって適宜回転させることにより、試料ＳＰに照射する励起光の波長に応じて適切なダイクロイックミラーを選択して光路上に配置することができる。

対物光学系２４は、倍率が異なる複数の対物レンズ２４ａ、２４ｂ、２４ｃを備える。これらの対物レンズ２４ａ、２４ｂ、２４ｃは、同様に図示を省略するレボルバに固定されており、光路上に択一的に配置可能となっている。レボルバを駆動装置３７によって適宜回転させることにより、試料ＳＰの蛍光像を得る際の倍率を適宜調整することができる。

蛍光選択装置２６は、図示を省略するが、波長特性が異なる複数のバリアフィルタを備えている。これらのバリアフィルタは、図示を省略するタレット板に固定されて光路上に選択的に配置可能となっている。タレット板を駆動装置３８によって適宜回転させることにより、試料ＳＰの蛍光像を検出する際の蛍光波長に応じて適切なバリアフィルタを光路上に配置することができる。

ピンホールモジュール２８は、直径が異なる複数のピンホール１２８ａ、１２８ｂを形成したタレット板１２８を内蔵する。このタレット板１２８を駆動装置３９で適宜回転駆動することにより、観察の対象となる蛍光波長や対物レンズ２４ａの開口数に対応した直径のピンホール１２８ａを選択して光路上に配置することができる。なお、ピンホールモジュール２８として、虹彩絞り式のピンホールを用い、連続的にピンホールサイズを変更することとしてもよい。

検出器２９は、例えば光電子増倍管で構成され、感度調整装置４６によって蛍光像の検出感度を調整可能となっている。

図２は、一例として対物光学系２４の具体的な構造を説明する図である。鏡筒３１の下端には、レボルバ１２４が回転可能に取り付けられている。このレボルバ１２４をアクチュエータ３７ａによって適宜回転させることにより、レボルバ１２４に固定された対物レンズ２４ａ、２４ｂ、２４ｃのいずれか１つを光路ＯＰ上に配置することができる。レボルバ１２４には、各対物レンズ２４ａ、２４ｂ、２４ｃを識別するための番地を表す磁石４３が各対物レンズ２４ａ、２４ｂ、２４ｃの位置に対応して埋め込んである。一方、鏡筒３１側には、対物レンズ２４ａの番地検出用のホール素子３２が設けてある。このホール素子３２を利用した番地検出により、どの対物レンズ２４ａ、２４ｂ、２４ｃが光路ＯＰ上にあるかの設定状態を認識できる。ホール素子３２による番地検出結果は、図１に示す駆動装置３７を介して制御装置であるコンピュータ５０に入力される。

なお、波長選択装置１２にも、図示を省略するが、いずれのバンドパスフィルタ１１２ａ、１１２ｂが光路上に配置されているかの設定状態を表す番地検出用のホール素子を設けており、番地検出結果は、駆動装置３４を介してコンピュータ５０に入力される。また、光分割装置２１や蛍光選択装置２６にも、これらの設定状態を表す番地検出用のホール素子をそれぞれ設けており、これらの番地検出結果は、それぞれ駆動装置３６、３８を介してコンピュータ５０に入力される。また、ピンホールモジュール２８にも、その設定状態を表す番地検出用のホール素子を設けており、この番地検出結果は、駆動装置３９を介してコンピュータ５０に入力される。さらに、調光装置１３にも、ＮＤフィルタの回転位置を検出するためのエンコーダ等を設けており、この検出結果は、駆動装置３５を介してコンピュータ５０に入力される。

以下、顕微鏡本体の動作について説明する。レーザ光源１１から出射した励起光は、波長選択装置１２及び調光装置１３で波長及び強度が適当に調整され、ビームエキスパンダ１４によって対物レンズ２４ａの瞳を満たす程度にビーム径が拡げられる。ビームエキスパンダ１４を通過した励起光は、光分割装置２１に組み込んだダイクロイックミラー１２１によって反射され、スキャナモジュール２２及びリレーレンズ２３を介して対物光学系２４に組み込まれている１つの対物レンズ２４ａに導かれ、試料ＳＰを２次元走査する。ここで、リレーレンズ２３は、スキャナモジュール２２に組み込まれた一対のスキャナミラー２２ａ、２２ｂを対物レンズ２４ａの瞳面に写像する役割を果たす。試料ＳＰより発した蛍光は、対物レンズ２４ａ、リレーレンズ２３、スキャナモジュール２２を逆進し、ダイクロイックミラー１２１を透過する。ダイクロイックミラー１２１を透過した蛍光は、蛍光選択装置２６を通過し、集光レンズ２７を介して集光スポットとして適当なサイズのピンホール１２８ａを通過し、適当な感度に調整された検出器２９によって光電変換される。

以下、コンフォーカル顕微鏡の制御系について説明する。このコンフォーカル顕微鏡は、制御系として、波長選択装置１２、調光装置１３、光分割装置２１、対物光学系２４、蛍光選択装置２６及びピンホールモジュール２８をそれぞれ駆動するとともにこれらの設定状態をそれぞれ検出する駆動装置３４、３５、３６、３７、３８、３９と、検出器２９を駆動してその感度を調整する感度調整装置４６と、検出器２９が検出した信号に適当な画像処理を施す画像処理装置４７と、画像処理装置４７で処理した信号を画像として映し出す画像モニタ４８と、これらを統括制御するコンピュータ５０と、コンピュータ５０にコンフォーカル顕微鏡の動作に必要な数値やコマンドを入力するためのキーボード等の入力装置４９とを備える。

コンピュータ５０は、入力装置４９からのコマンド等に応じ、駆動装置３４、３６、３８を介して試料ＳＰを照明する励起波長と試料ＳＰから検出する蛍光波長とを制御し、駆動装置３７を介して試料ＳＰの拡大率を制御する。また、コンピュータ５０は、駆動装置３５を介して試料ＳＰに照射するレーザパワーを制御し、駆動装置３９を介してピンホールサイズを制御し、感度調整装置４６を介して試料ＳＰの蛍光像の検出感度を制御する。

また、コンピュータ５０は、試料ＳＰに照射するレーザパワーを決定するためのルックアップテーブル５１と、ピンホールサイズを決定するためのルックアップテーブル５２と、試料ＳＰの蛍光像の検出感度を決定するためのルックアップテーブル５３とを内部に記憶している。これらのルックアップテーブル５１、５２、５３は、予め顕微鏡メーカ側にて一般的な観察者を想定して装置条件を標準化したものである。

さらに、コンピュータ５０は、駆動装置３４、３５、３６、３７、３８、３９による番地検出結果に基づいて、波長選択装置１２、調光装置１３、光分割装置２１、対物光学系２４、蛍光選択装置２６及びピンホールモジュール２８の設定状態をそれぞれ記憶する記憶装置５５を備える。具体的には、検出した番地に対応する励起波長、レーザパワー、蛍光波長、開口数（倍率）及びピンホールサイズが記憶されることになる。

以下、図１のコンフォーカル顕微鏡を用いた蛍光画像の読み取りについて説明する。

観察者は、試料ＳＰの画像取り込みにあたり、まず、基本となる装置条件の設定として、使用する蛍光色素の種類、実験継続時間、倍率をコンピュータ５０に入力する。

具体的に説明すると、観察者は、使用する蛍光色素の種類と試料ＳＰに実際に導入する色素の濃度とを試料情報としてコンピュータ５０に入力する。なお、蛍光色素の種類や濃度に関する試料情報は、対応する数値を入力装置４９を介して直接入力することもできるが、コンピュータ５０内部に記憶した表の中から対応する試料情報を適宜選択することによって間接的に入力することもできる。

また、観察者は、試料ＳＰについて画像取り込みを行うための実験継続時間（間欠画像取得の場合には、試料に励起光があたっている時間の総和）を入力装置４９を介してコンピュータ５０に入力する。また、試料ＳＰに照射するレーザ光の励起波長を入力装置４９を介してコンピュータ５０に入力する。

さらに、観察者は、使用する対物レンズ２４ａの倍率と開口数とを入力装置４９を介してコンピュータ５０に入力する。なお、使用する対物レンズ２４ａの倍率等は、コンピュータ５０内部に記憶した表の中から選択することもできる。さらに、観察者がレボルバ１２４を回転させて選んだ対物レンズ２４ａの倍率と開口数とを自動検出することとしてもよい。

コンピュータ５０は、以上のようにして入力された情報に基づき、前述の番地検出を行いつつ駆動装置３４、３６、３７、３８を制御して波長選択装置１２、光分割装置２１、対物光学系２４、蛍光選択装置２６を入力情報に対応する装置条件に設定する。

これと同時に、コンピュータ５０は、以上のようにして入力された基本的な装置条件から、他の装置条件を自動的に算出する。

まず、入力された対物レンズ２４ａの開口数とレーザ光の励起波長とから、コンフォーカル顕微鏡として期待される分解能を与えるピンホールサイズを決定する。具体的には、コンピュータ５０が、内部に記憶しているルックアップテーブル５２に従ってピンホールサイズの標準値を決定し、ピンホールモジュール２８を駆動する駆動装置３９により適当なピンホール１２８ａを選択してピンホールサイズをこの標準値に自動的に設定する。この決定に際しては、例えば対物レンズ２４ａの開口数とレーザ光の励起波長とで決定されるピンホール面でのエアリー・ディスク・サイズ（λ／ＮＡ）をもって最適のピンホールサイズとする。なお、このようなピンホールサイズは、観察者が任意に再決定できるようにしておくこともできる。

次に、入力された蛍光色素の種類から、先に入力されている実験時間中に蛍光が著しく退色しない条件で、蛍光像に十分なコントラストが得られるように、励起光のレーザパワーを決定する。具体的には、コンピュータ５０が、内部に経験値として記憶しているルックアップテーブル５２に従ってレーザパワーの標準値を決定し、調光装置１３を駆動する駆動装置３５によりＮＤフィルタを適宜回転させてレーザパワーをこの標準値に自動的に設定する。なお、このようなレーザパワーの標準値は、例えば最大出力の７０％と決めておく。なお、このようなレーザパワーは、観察者が任意に再決定できるようにしておくこともできる。

最後に、入力された蛍光色素の種類及び濃度から、既に決定されているレーザパワー及びピンホールサイズを用いた際に適切な輝度の画像が得られるように、検出感度を決定する。具体的には、コンピュータ５０が、内部に記憶しているルックアップテーブル５３に従ってレーザパワーの標準値を決定し、駆動装置４６から検出器２９に印加する電圧を調節して検出感度を前述の標準値に自動的に設定する。検出感度は、例えば画像モニタ４８に表示される画像の平均輝度が輝度ダイナミックレンジの半分（画像輝度分解能が８ビットの場合には、輝度値で１２８）になるような検出感度として、あらかじめコンピュータ内に記憶されているルックアップテーブル５３から決定される。なお、このような検出感度は、観察者が任意に再設定できるようにしておくこともできる。

以上の実施形態によれば、観察者は、試料情報、実験継続時間、さらに対物レンズ情報という、一義的に決まる情報を入力するのみで、画像取り込みのための初期条件を装置が自動的に決定してくれる。もちろん、以上の自動設定によって観察者が希望する画像が直ちに得られるわけではなく、この段階から調整が必要である場合も少なくないと考えられるが、少なくとも、間違った設定でスタートをせずに済み、無駄な時間を費やすことが回避され、かつ、試料ＳＰへの無駄なダメージや蛍光色素の退色を防げる。

以上実施形態に即してこの発明を説明したが、この発明は上記実施形態に限定されるものではない。例えば、上記実施形態では、試料情報、実験継続時間、及び対物レンズ情報に基づいて、ピンホールサイズ、レーザパワー及び検出感度を特定の標準値として算出しているが、ピンホールサイズ、レーザパワー及び検出感度を一定の幅を有する調整範囲として算出することもできる。この際、ピンホールサイズ、レーザパワー及び検出感度がこのような調整範囲内になるように、駆動装置３５、３９、４６の動作を制御して調光装置１３、ピンホールモジュール２８、検出器２９を所定の設定範囲内にロックすることもできる。

また、上記実施形態では、蛍光色素を用いる試料の測定について説明したが、蛍光色素を用いないで試料ＳＰの反射像を測定する場合にも、ピンホールサイズの設定等を上記ように自動化することができる。なお、この場合、ダイクロイックミラー１２１の代わりにビームスプリッタを用いるとともに、蛍光選択装置２６を取り除く。そして、通常は、対物レンズ２４ａの開口数等に基づいてピンホールサイズが設定される。

また、上記実施形態では、試料情報、実験継続時間、及び対物レンズ情報に基づいて、ピンホールサイズ、レーザパワー及び検出感度を特定の標準値を算出しているが、観察者が画像から求めるものに関する他の情報からピンホールサイズ、レーザパワー、検出感度等の標準値を算出することもできる。

以上説明したように、本発明のコンフォーカル顕微鏡によれば、制御装置が前記照明光の波長に関する情報と前記顕微鏡光路に配置される対物レンズの開口数に関する情報とに基づいて前記ピンホール径の標準値を算出するので、この標準値に基づいて装置条件を設定すれば、コンフォーカル顕微鏡の操作に慣れていない観察者であっても、簡易に所望の試料画像を得ることができる。

また、前記制御装置が前記顕微鏡光路に配置される対物レンズの開口数と前記照明光の波長とに関する情報に基づいて前記ピンホール径について所定の調整範囲を算出するので、このような所定の調整範囲で前記ピンホール径を調節して標準値からずらすことにより、より簡易に観察者の意図を反映した試料画像を得ることができる。

また、前記制御装置が前記開口部材を動作させることによって前記ピンホール径を変更できる範囲を前記調整範囲内に制限するので、確実に観察者の意図を反映した試料画像を得ることができる。

また、前記光源が、前記照明光として前記試料に導入すべき蛍光色素を励起するための励起光を発生し、前記制御装置は、前記蛍光色素の種類及び導入量と、前記蛍光色素からの蛍光を前記検出装置で観察する際の実験時間とに関する情報設定に基づいて、前記光源の出力の標準値を計算し、さらに前記蛍光色素の種類及び導入量と前記光源の出力の標準値と前記ピンホール径の標準値とに基づいて、前記検出装置の検出感度の標準値を計算するので、これらの標準値に基づいて装置条件を設定すれば、より簡易に観察者が希望する試料画像を得ることができる。

また、前記制御装置に対して前記蛍光色素の種類及び導入量に関する情報と前記実験時間に関する情報とを入力するための入力装置をさらに有するので、コンフォーカル顕微鏡の操作性が高まる。

また、前記入力装置が前記顕微鏡光路に配置される対物レンズの開口数に関する情報と前記照明光の波長に関する情報とを前記制御装置に対して入力可能であるので、コンフォーカル顕微鏡の操作性が高まる。

また、前記波長選択装置が複数の波長選択フィルタを顕微鏡光路に択一的に配置するフィルタ切換装置と前記顕微鏡光路に配置されている波長選択フィルタの種類に関する情報を検出するフィルタ検出装置とを有し、前記対物レンズ切換装置が前記顕微鏡光路に配置されている対物レンズに関する情報を検出する対物レンズ検出装置を有し、前記制御装置が前記複数の波長選択フィルタの選択波長に関する情報と前記複数の対物レンズの開口数に関する情報とを記憶する記憶装置を有し、前記フィルタ検出装置と前記対物レンズ検出装置とからの検出情報に基づいて前記記憶装置に記憶された情報から前記照明光の波長に関する情報と前記顕微鏡光路に配置される対物レンズの開口数に関する情報とを選択するので、前記フィルタ切換装置や前記対物レンズ切換装置の設定を自動的に認識して観察者が希望する試料画像を得ることができる。

また、前記制御装置が算出した前記ピンホール径の標準値に基づいて前記開口部材を制御し前記ピンホール径を変更するので、コンフォーカル顕微鏡の操作性がより高まる。

また、前記制御装置が算出した前記光源の出力の標準値と前記検出装置の検出感度の標準値とに基づいて前記光源の出力及び前記検出装置の検出感度を変更するので、コンフォーカル顕微鏡の操作性がより高まる。

本発明の一実施形態であるコンフォーカル顕微鏡の構造を説明するためのブロック図である。 図１のコンフォーカル顕微鏡の対物光学系を説明する図である。

符号の説明

１１ レーザ光源
１２ 波長選択装置
１３ 調光装置
１４ ビームエキスパンダ
２１ 光分割装置
２２ スキャナモジュール
２３ リレーレンズ
２４ 対物光学系
２６ 蛍光選択装置
２７ 集光レンズ
２８ ピンホールモジュール
２９ 検出器
３４，３５，３６，３７，３８，３９，４６ 駆動装置
４７ 画像処理装置
４８ 画像モニタ
５０ コンピュータ
４９ 入力装置

Claims (1)

1. 光源と、前記光源からの光のうち、特定波長の光を照明光として選択する波長選択装置と、
   複数の対物レンズを保持するとともに顕微鏡光路に択一的に配置する対物レンズ切換装置と、
   前記光源と前記顕微鏡光路に配置される前記対物レンズとの間に配置され、前記顕微鏡光路に配置される対物レンズを介して前記試料に照射される前記照明光を２次元走査する走査装置と、
   前記照明光の走査により前記試料から発する光を前記顕微鏡光路に配置される対物レンズと前記走査装置とを介して検出する検出装置と、
   前記顕微鏡光路に配置される対物レンズの結像面と光学的に共役な位置に配置され、前記検出装置に入射する前記試料からの光を制限するピンホールが設けられるとともに前記ピンホールの径を変更可能な開口部材と、
   前記照明光の波長に関する情報と前記顕微鏡光路に配置される対物レンズの開口数に関する情報とに基づいて、前記ピンホール径の標準値を算出する制御装置とを備えることを特徴とするコンフォーカル顕微鏡。

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