JP2005508849A

JP2005508849A - ワクチン組成物

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Publication number: JP2005508849A
Application number: JP2002579004A
Authority: JP
Inventors: バウトリアウ，ドミニク; キャピアウ，カリーン; デスモンス，ピエール，ミシェル; リモーネ，ドミニク; プールマン，ヤン
Original assignee: グラクソスミスクラインバイオロジカルズソシエテアノニム
Priority date: 2001-04-03
Filing date: 2002-03-28
Publication date: 2005-04-07
Anticipated expiration: 2022-03-28
Also published as: CA2727715A1; HK1114781A1; KR20090026371A; JP5410498B2; ZA200307640B; NO20034410D0; ATE553775T1; PL393582A1; BR0208595A; CN101112618B; CA2442865A1; US20110212124A1; KR100870280B1; PL393618A1; ES2384041T3; KR20090120017A; KR101045412B1; ES2388690T3; EP1946771A1; PL211910B1

Abstract

本発明は、新規かつ有利なＤＴＰベースの混合ワクチン製剤、及び同時投与される混合ワクチンキットに関する。これらのワクチン及びキットの投与方法もまた提供される。

Description

本発明は新しい混合ワクチン製剤に関する。複数の病原体に対する防御を付与し、投与コストを下げ、並びに許容率及び達成範囲率を高めるために、必要とされる免疫処置回数を最小限にするためには、混合ワクチン（複数の病原体に対する防御を提供する）が非常に望ましい。文献によく記載されている抗原の競合（又は干渉）現象により、多成分系ワクチンの開発が複雑になっている。抗原の干渉とは、複数の抗原を投与すると、これらの抗原を個別に投与する場合に観察される免疫反応に比べて一定の抗原に対する反応がしばしば減少する、という観察結果を指す。

百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｔｅｔａｎｉ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、並びに任意によりＢ型肝炎ウイルス及び／又はインフルエンザ菌ｂ型（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）を防御することができる混合ワクチンは公知である（例えば、国際特許出願公開番号ＷＯ９３／２４１４８号及びＷＯ９７／００６９７号参照）。

発明の概要
本発明は、そのワクチンを投与すると、百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、Ｂ型肝炎ウイルス及び髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、そして好ましくはさらにインフルエンザ菌、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ａ型肝炎ウイルス及び／又はポリオウイルスによる感染を予防又は治療することができる多価ワクチンであって、その多価ワクチンの成分がワクチン成分のいずれか１つの免疫学的機能を著しく干渉しないことを特徴とする、現在までに最も望まれている多価ワクチンの製造に関する。

従って、一つの態様において、本発明は、
（ａ）死菌全細胞百日咳菌（Ｐｗ）、又は２種以上の無細胞百日咳成分（Ｐａ）のいずれか［好ましくは後者］、
（ｂ）破傷風トキソイド（ＴＴ若しくはＴ）、
（ｃ）ジフテリアトキソイド（ＤＴ若しくはＤ）、
（ｄ）Ｂ型肝炎表面抗原（ＨｅｐＢ若しくはＨＢ）、
（ｅ）不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）、並びに
（ｆ）髄膜炎菌Ｙ型及び髄膜炎菌Ｃ型からなる群より選択される細菌の莢膜多糖（ＭｅｎＹ及びＭｅｎＣ）と担体タンパク質との複合体の一方又は両方、並びに
（ｇ）場合により、インフルエンザ菌Ｂ型の莢膜多糖（Ｈｉｂ）と担体タンパク質との複合体、
を含むことを特徴とする、百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、Ｂ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、及び髄膜炎菌により引き起こされる疾患に対する防御を宿主に付与するための多価免疫原性組成物を提供する。

上記免疫原性組成物は、組成物の抗原のいずれに対しても実質的な干渉問題を生じない、次のリストから選択される１、２、３、４、５又は６種の成分を更に含んでもよい：髄膜炎菌Ａ型多糖［ＭｅｎＡ］（好ましくは複合体）、髄膜炎菌Ｗ型多糖［ＭｅｎＷ］（好ましくは複合体）、チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉ）のＶｉ多糖、髄膜炎菌（好ましくは血清型Ｂ）外膜小胞、１種以上の髄膜炎菌（好ましくは血清型Ｂ）外膜（表面に露出した）タンパク質、及び死菌弱毒化Ａ型肝炎ウイルス（ＨｅｐＡ−好ましくは「Ｈａｖｒｉｘ^ＴＭ」［スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルズ社製］として知られる製品）。

本発明の第２の態様において、本発明は、２又は３の多価免疫原性組成物を含む種々の有利なキットを提供し、該キットは、百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、Ｂ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、及び肺炎連鎖球菌、そして場合により髄膜炎菌及びインフルエンザ菌により引き起こされる疾患に対する防御を宿主に付与することが可能なものである。

本発明の第２の態様の第１の実施形態においては、百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、Ｂ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、及び肺炎連鎖球菌、そして場合により髄膜炎菌及びインフルエンザ菌により引き起こされる疾患に対する防御を宿主に付与するための、２つの多価免疫原性組成物を含むキットを提供する。

上記キットは、
（ａ）死菌全細胞百日咳菌（Ｐｗ）、又は２種以上の無細胞百日咳成分（Ｐａ）のいずれか［好ましくは後者］、
（ｂ）破傷風トキソイド（ＴＴ若しくはＴ）、
（ｃ）ジフテリアトキソイド（ＤＴ若しくはＤ）、
（ｄ）Ｂ型肝炎表面抗原（ＨｅｐＢ若しくはＨＢ）、及び
（ｅ）不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）、
を含む第１容器と、
（２ａ）肺炎連鎖球菌に由来する莢膜多糖と担体タンパク質との１以上の複合体（該莢膜多糖が、１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ又は３３Ｆからなる群より選択される肺炎球菌血清型に由来することが好ましい）、
を含む第２容器、を含むものである。

本発明の上記キットのさらに有利な実施形態においては、
第１容器がさらに以下の成分を含む：（ｆ）髄膜炎菌Ｙ型及び髄膜炎菌Ｃ型からなる群より選択される細菌の莢膜多糖（ＭｅｎＹ及びＭｅｎＣ）と担体タンパク質との複合体の一方又は両方、並びに（ｇ）インフルエンザ菌Ｂ型の莢膜多糖（Ｈｉｂ）と担体タンパク質との複合体；あるいは、
第２容器がさらに以下の成分を含む：（２ｂ）髄膜炎菌Ｙ型及び髄膜炎菌Ｃ型からなる群より選択される細菌の莢膜多糖（ＭｅｎＹ及びＭｅｎＣ）と担体タンパク質との複合体の一方又は両方、並びに（２ｃ）インフルエンザ菌Ｂ型の莢膜多糖（Ｈｉｂ）と担体タンパク質との複合体；あるいは、
第１容器がさらに（ｆ）髄膜炎菌Ｙ型及び髄膜炎菌Ｃ型からなる群より選択される細菌の莢膜多糖（ＭｅｎＹ及びＭｅｎＣ）と担体タンパク質との複合体の一方又は両方を含み、かつ第２容器がさらに（２ｂ）インフルエンザ菌Ｂ型の莢膜多糖（Ｈｉｂ）と担体タンパク質との複合体を含む；あるいは、
第１容器がさらに（ｆ）インフルエンザ菌Ｂ型の莢膜多糖（Ｈｉｂ）と担体タンパク質との複合体を含み、かつ第２容器がさらに（２ｂ）髄膜炎菌Ｙ型及び髄膜炎菌Ｃ型からなる群より選択される細菌の莢膜多糖（ＭｅｎＹ及びＭｅｎＣ）と担体タンパク質との複合体の一方又は両方を含むものである。

本発明の第２の態様の第２の実施形態においては、百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、Ｂ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、髄膜炎菌及びインフルエンザ菌により引き起こされる疾患に対する防御を宿主に付与するための、２つの多価免疫原性組成物を含むキットを提供する。

上記キットは、
（ａ）死菌全細胞百日咳菌（Ｐｗ）、又は２種以上の無細胞百日咳成分（Ｐａ）のいずれか［好ましくは後者］、
（ｂ）破傷風トキソイド（ＴＴ若しくはＴ）、
（ｃ）ジフテリアトキソイド（ＤＴ若しくはＤ）、
（ｄ）Ｂ型肝炎表面抗原（ＨｅｐＢ若しくはＨＢ）、及び
（ｅ）不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）、
を含む第１容器と、
（２ａ）髄膜炎菌Ｙ型及び髄膜炎菌Ｃ型からなる群より選択される細菌の莢膜多糖（ＭｅｎＹ及びＭｅｎＣ）と担体タンパク質との複合体の一方又は両方、及び
（２ｂ）インフルエンザ菌Ｂ型の莢膜多糖（Ｈｉｂ）と担体タンパク質との複合体、
を含む第２容器、を含むものである。

本発明の第２の態様の第３の実施形態においては、百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、Ｂ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、及び髄膜炎菌、インフルエンザ菌及び肺炎連鎖球菌により引き起こされる疾患に対する防御を宿主に付与するための、３つの多価免疫原性組成物を含むキットを提供する。

上記キットは、
（ａ）死菌全細胞百日咳菌（Ｐｗ）、又は２種以上の無細胞百日咳成分（Ｐａ）のいずれか［好ましくは後者］、
（ｂ）破傷風トキソイド（ＴＴ若しくはＴ）、
（ｃ）ジフテリアトキソイド（ＤＴ若しくはＤ）、
（ｄ）Ｂ型肝炎表面抗原（ＨｅｐＢ若しくはＨＢ）、及び
（ｅ）不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）、
を含む第１容器と、
（２ａ）肺炎連鎖球菌に由来する莢膜多糖と担体タンパク質との１以上の複合体（該莢膜多糖が、１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ又は３３Ｆからなる群より選択される肺炎球菌血清型に由来することが好ましい）、
を含む第２容器と、
（３ａ）髄膜炎菌Ｙ型及び髄膜炎菌Ｃ型からなる群より選択される細菌の莢膜多糖（ＭｅｎＹ及びＭｅｎＣ）と担体タンパク質との複合体の一方又は両方、及び
（３ｂ）インフルエンザ菌Ｂ型の莢膜多糖（Ｈｉｂ）と担体タンパク質との複合体、
を含む第３容器、を含むものである。

本発明の上記キットの任意又は上記の容器は、組成物の抗原のいずれに対しても実質的な干渉問題を生じない、次のリストから選択される１、２、３、４、５、６、又は７種の成分を更に含んでもよい：髄膜炎菌Ａ型多糖［ＭｅｎＡ］（好ましくは複合体）、髄膜炎菌Ｗ型多糖［ＭｅｎＷ］（好ましくは複合体）、チフス菌のＶｉ多糖、髄膜炎菌（好ましくは血清型Ｂ）外膜小胞、１種以上の髄膜炎菌（好ましくは血清型Ｂ）外膜（表面に露出した）タンパク質、ＨｅｐＡ（上記参照）、及び１以上の肺炎連鎖球菌タンパク質（好ましくは表面に露出したもの）。

上記キットの容器は、別々に包装してもよいし、又は好ましくは一緒に包装してもよい。好ましくは、上記キットは、２以上の容器中にワクチン投与のための取扱い書（リスト）を含む。

キット中の容器が特定の多糖複合体を含む場合には、同じ複合体が該キットの他の容器に存在しないことが好ましい。

本発明者らは、驚くべきことに、上述のように提供されたキットが、宿主の免疫系に対して最適に種々の抗原を有利に提示することを見出した。上記キットは、医療従事者に対し、以下に示す１以上の利点（好ましくは、２又は３、最も好ましくは全ての利点）を有する、宿主の最適な免疫方法を提供するものである：すなわち、全ての抗原に対する防御の有効性、最小の反応原性（reactogenicity）、最小の担体抑制干渉作用、最小のアジュバント／抗原干渉作用、又は最小の抗原／抗原干渉作用。このようにして、最小回数（２回）の投与、好ましくは実施者に同じ訪問時に行うことによりこれらの目的を達成可能である。

好ましい実施形態においては、第１及び第２（そして適用可能な場合には第３）の容器のワクチンを異なる部位（後述する）と同時に投与するが、別の実施形態においては、本発明者らは、第１及び第２容器の内容物を単回ワクチンとして投与前に混合（好ましくは即時に混合）することも想定している。

本発明の抗原
破傷風トキソイド（ＴＴ）を調製する方法は、当分野で周知である。例えばＴＴは、好ましくは、破傷風菌の培養物からトキシンを精製した後、化学的に無毒化して生成されるか、あるいはこのトキシンの組換え類似体又は遺伝的に無毒化された類似体を精製することにより作製される（例えば、ＥＰ２０９２８１号に記載されている）。また、「破傷風トキソイド」は、全長タンパク質の免疫原性フラグメントも包含する（例えばフラグメントＣ。ＥＰ４７８６０２号を参照されたい）。

ジフテリアトキソイド（ＤＴ）を調製する方法もまた当分野において公知である。例えばＤＴは、好ましくは、ジフテリア菌の培養物からトキシンを精製した後に化学的に無毒化して生成されるか、あるいはこのトキシンの組換え類似体又は遺伝的に無毒化された類似体を精製することにより作製される（例えば、ＣＲＭ１９７、又は米国特許第４，７０９，０１７号、同第５，８４３，７１１号、同第５，６０１，８２７号、及び同第５，９１７，０１７号に記載されるような他の変異体）。

無細胞百日咳菌の成分（Ｐａ）は当分野において周知である。例として、百日咳トキソイド（ＰＴ）、線維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（ｐｅｒｔａｃｔｉｎ；ＰＲＮ）及び凝集原２及び３が挙げられる。これらの抗原は、部分的に又は高純度で精製される。好ましくは、２種以上の無細胞百日咳菌の成分がワクチン中で使用される。より好ましくは、上記に例示した無細胞百日咳菌の成分のうち２種、３種、４種又は５種全てが、ワクチン中に使用される。最も好ましくは、ＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮが含まれる。ＰＴは、様々な方法、例えば百日咳菌の培養物からトキシンを精製した後に化学的に無毒化することにより、或いは（例えば、米国特許第５，０８５，８６２号に記載されるように）ＰＴの遺伝的に無毒化された類似体を精製することにより作製することができる。

本発明に適する死菌全細胞百日咳菌（Ｐｗ）を調製する方法は、ＤＴ−ＴＴ−Ｐｗ−ＨｅｐＢ及びＤＴ−ＴＴ−Ｐａ−ＨｅｐＢワクチンの作製に適した製剤化方法として、国際特許出願公開番号ＷＯ９３／２４１４８号に開示されている。

不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）は、好ましくはワクチン技術において標準的である１型、２型、及び３型を含み、最も好ましくはソークポリオワクチンを含む。

本発明の肺炎連鎖球菌ワクチンは、典型的には多糖抗原（好ましくは複合体化したもの）を含み、該多糖は、血清型：１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ及び３３Ｆからなる群より選択される肺炎球菌の少なくとも４つの血清型に由来するものである。好ましくは、この４つの血清型は、６Ｂ、１４、１９Ｆ及び２３Ｆを含む。より好ましくは、上記組成物には、少なくとも７つの血清型（例えば、４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、及び２３Ｆを含む）に由来する多糖を含む。さらに好ましくは８種以上の血清型（例えば、少なくとも１１種の血清型）に由来する多糖が組成物中に含まれる。例えば、一実施形態において、組成物は、血清型１、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ及び２３Ｆに由来する１１種の莢膜多糖（好ましくは複合体化されている）を含む。本発明の好適な実施形態では、少なくとも１３種の多糖抗原（好ましくは複合体化されている）が含まれるが、他の多糖抗原、例えば２３価（血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ及び３３Ｆ等）のものも本発明により想定される。

（例えば肺炎を予防するための）高齢者のワクチン接種の場合、上述の好ましい１１価抗原性組成物に加えて血清型８及び１２Ｆ（また、最も好ましくは血清型１５及び２２も）を含ませて１３／１５価ワクチンを生成することが有利であり、これに対して、（特に中耳炎が心配な）乳児又は幼児の場合、血清型６Ａ及び１９Ａを含ませて１３価ワクチンを生成するのが有利である。

複合体
細菌性莢膜多糖複合体は、少なくとも１種のＴ−ヘルパーエピトープを含む任意の担体ペプチド、担体ポリペプチド又は担体タンパク質を含み得る。好ましくは、使用される担体タンパク質は、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ１９７、組換え型ジフテリアトキシン（米国特許第４，７０９，０１７号、国際特許出願公開番号ＷＯ９３／２５２１０号、ＷＯ９５／３３４８１号、又はＷＯ００／４８６３８号のいずれかに記載されるようなもの）、肺炎連鎖球菌に由来するニューモリシン（pneumolysin）（好ましくは化学的に無毒化されたもの、又は無毒化変異体）、髄膜炎菌に由来するＯＭＰＣ、及びインフルエンザ菌に由来するプロテインＤ（ＰＤ）（ＥＰ５９４６１０号）からなる群より選択される。周知の担体抑制（carrier suppression）作用のため、本発明の組成物の各々において、組成物中に含まれる多糖抗原（‘ｎ’種の抗原）を２種以上の担体と複合体化させるのが有利である。従って、（ｎ−１）種の多糖をある１つのタイプの担体に（別々に）担持させ、残り１種を他のタイプの担体に担持させるか、或いは（ｎ−２）種の多糖をある１つのタイプの担体に担持させ、残り２種を他の２つのタイプの担体に担持させる、等が考えられる。例えば、４種類の細菌性多糖複合体を含むワクチンにおいては、１種、２種又は４種全てを異なる担体と複合体化させることができる。しかし、プロテインＤは、組成物中で様々な（２種、３種若しくは４種以上の）多糖に対して顕著な担体抑制作用もなく使用され得るため、本発明の組成物中で担体として有益に使用される。最も好ましくは、ＨｉｂはＴＴ複合体として、並びにＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＹ及びＭｅｎＷはＴＴ複合体又はＰＤ複合体のいずれかとして存在する。またプロテインＤはインフルエンザ菌に対する防御を提供することができる他の抗原を提供するので、これも有効な担体である。

多糖は、任意の公知方法により担体タンパク質に結合させることができる（例えば、Ｌｉｋｈｉｔｅによる米国特許第４，３７２，９４５号及びＡｒｍｏｒ等による米国特許第４，４７４，７５７号）。好ましくは、ＣＤＡＰ複合体化（ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）により行う（国際特許出願公開番号ＷＯ９５／０８３４８号）。

ＣＤＡＰでは、多糖−タンパク質複合体の合成のために、好ましくはシアン化試薬１−シアノ−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート（ＣＤＡＰ）が使用される。シアン化反応は、アルカリ感受性多糖の加水分解を回避する比較的穏かな条件下で実施することができる。この合成により、担体タンパク質に直接結合させることができる。

本発明の免疫学的組成物の性質
本発明の免疫原性組成物は、宿主にｉｎｖｉｖｏ投与するためのワクチンとして好ましく製剤化される。それにより組成物の個別の成分が、その組成物の他の個々の成分によりその個々の成分の免疫原性が実質的に損なわれないように製剤化されることになる。「実質的に損なわれない」とは、免疫感作を行ったときに、抗原が単独で投与された時に得られる力価の６０％を超える、好ましくは７０％を超える、より好ましくは８０％を超える、更により好ましくは９０％を超える、最も好ましくは９５〜１００％を超える抗体力価（例えばＩｇＧ）が各成分に対して得られる、という意味である。

興味深いことに、上述のキットの組み合わせを用いることにより、免疫感作を行ったときに、Ｈｉｂ莢膜多糖又はいくつかの肺炎球菌多糖のアプローチ（approaching）に対する抗体力価、又は単離した抗原を投与した場合に得られる力価を超える若しくはその１００％を得ることが可能である。

ワクチン製剤
本発明の免疫原性組成物は、好ましくは各抗原の成分ごとの血清防御がヒト被験者の許容割合（％）の基準を超える抗体力価を付与するように、宿主にｉｎｖｉｖｏ投与するためのワクチンとして製剤化される。これは、集団全体におけるワクチン効力の評価において重要な試験である。それを超えると宿主が抗原に対してセロコンバージョン（抗体陽転）を起こすと考えられている関連抗体力価を有する抗原は周知であり、そのような力価はＷＨＯのような機関により公表されている。好ましくは統計学的に有意な被験者サンプルの８０％超がセロコンバージョンを起こし、より好ましくは９０％超、更に好ましくは９３％超、及び最も好ましくは９６〜１００％がセロコンバージョンを起こす。

本発明の免疫原性組成物には好ましくはアジュバントが加えられる。適切なアジュバントとしては、水酸化アルミニウムゲル（アルム）又はリン酸アルミニウムのようなアルミニウム塩が挙げられるが、カルシウム、鉄若しくは亜鉛の塩、又はアシル化チロシン、又は、アシル化糖、カチオン若しくはアニオンにより誘導体化された多糖、又はポリフォスファゼンの不溶性懸濁液でもよい。

アジュバントは、免疫反応の細胞性免疫を促進するためのＴＨ１型の反応の選択的誘導物質となるように選択することも可能である。

高レベルのＴｈ１型サイトカインは、所定の抗原に対する細胞性免疫反応の誘導を促進する傾向がある。一方で、高レベルのＴｈ２型サイトカインは、抗原に対する体液性免疫反応の誘導を促進する傾向がある。

Ｔｈ１反応を優勢に促進する適切なアジュバント系は、モノホスホリル脂質Ａ又はその誘導体、特に、３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ、及びモノホスホリルリピドＡ（好ましくは３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ−ＭＰＬ））とアルミニウム塩との組合せを含む。増強系としては、モノホスホリルリピドＡとサポニン誘導体との組合せ、特に、国際特許出願公開番号ＷＯ９４／００１５３号に開示されたようなＱＳ２１と３Ｄ−ＭＰＬとの組合せ、又は、国際特許出願公開番号ＷＯ９６／３３７３９号に開示されたようなＱＳ２１がコレステロールで抑制される低反応原性組成物が含まれる。ＱＳ２１、３Ｄ−ＭＰＬ及び水中油型エマルション中のトコフェロールを含む特に強力なアジュバント製剤が国際特許出願公開番号ＷＯ９５／１７２１０号に記載されている。ワクチンは、サポニンを、より好ましくはＱＳ２１を更に含んでもよい。また製剤は、水中油型エマルション、及びトコフェロールを含んでもよい（国際特許出願公開番号ＷＯ９５／１７２１０号）。オリゴヌクレオチドを含む非メチル化ＣｐＧ（国際特許出願公開番号ＷＯ９６／０２５５５号）もまた、ＴＨ１反応の選択的誘導物質であり、本発明において使用するのに適している。

アルミニウム塩は上記免疫原性組成物において用いるための好ましいアジュバントである。特にＨｅｐＢは、他の成分と混合する前にリン酸アルミニウムに吸着させておくことが好ましい。パータクチン（pertactin）は、他の成分と混合する前に水酸化アルミニウムに吸着させておくことが好ましい。本発明の組成物においてアジュバント（特にアルミニウム塩）のレベルを最小限にするために、多糖複合体にアジュバントを加えなくてもよい。

また本発明は、薬学的に許容される賦形剤と共にワクチンの成分を混合する工程を含むワクチン製剤の製造方法も提供する。

本発明の特に好ましいＤＴＰａ組成物（独立して使用するための、又は上記キットの一つの第１容器の内容物としての組成物）は、以下のものを含む：ＴＴ、ＤＴ、Ｐａ（好ましくはＰＴ、ＦＨＡ及びＰＲＮを含み、ＰＲＮは好ましくは水酸化アルミニウムに吸着されている）、ＨｅｐＢ（好ましくはリン酸アルミニウムに吸着されている）、ＩＰＶ、ＭｅｎＣ（好ましくはプロテインＤ、ＴＴ、ＤＴ又はＣＲＭ１９７のいずれかと複合体化されている）、及び場合によりＭｅｎＹ（好ましくはプロテインＤ、ＴＴ、ＤＴ又はＣＲＭ１９７のいずれかと複合体化されている）。組成物は、場合によりＨｉｂ（好ましくはＴＴとの複合体及び／又はアジュバントに吸着されていないもの）を含んでいてもよい。好ましくは、ワクチンは、２個のバイアル、すなわち液体状のＤＴＰａ−ＩＰＶ−ＨｅｐＢを含む第１バイアル、及び、好ましくはショ糖、乳糖又はトレハロースのような凝結防止剤の存在下に凍結乾燥状態のＭｅｎＣ（及び場合によりＭｅｎＹ及び／又はＨｉｂ）を含む第２バイアルに入れて提供することができる。バイアルの内容物は、１回の投与／注射で宿主に投与する前に即時に一つの容器内で混合することができる。この組成物は上述したキットに使用することもできる（第１容器の内容物）。

Ｈｉｂ（好ましくはＴＴとの複合体及び／又はアジュバントに吸着されていないもの）、並びに／あるいはＭｅｎＣ及びＭｅｎＹ（好ましくはプロテインＤ、ＴＴ、ＤＴ若しくはＣＲＭ１９７のいずれかとの複合体及び／又はアジュバントに吸着されていないもの）の一方又は両方を入れた容器を含むキットのために、この組成物は凍結乾燥した状態で、好ましくはショ糖、乳糖又はトレハロースのような凝結防止剤の存在下に好ましく保存される。

ＤＴＰａ及びＨｉｂ、並びに／あるいはＭｅｎＣ及びＭｅｎＹ（Ｈｉｂ及び／若しくはＭｅｎ成分はＴＴと複合体化されている）の一方又は両方を入れた容器を含む本発明のＤＴＰａ組成物（独立して使用するための、又は上記キットの一つの第１容器の内容物としての組成物）のために、ＴＴ免疫干渉作用又は多糖と複合体化されたＴＴの担体抑制作用を低減、最小化又は防止するために、単一容器中のＴＴの合計含有量が臨界閾値（例えば、４０、４５、５０、６０、７０又は８０μｇのＴＴ）以下になるようにワクチン中のＴＴ含有量を調整することが好ましい。好ましくは、この閾値は５０μｇである。本発明者らは、この点で有益であるように、上記複合体における多糖：ＴＴの比率を重量で１：０．５〜１．５（好ましくは１：０．６〜１．２、最も好ましくは約１：１）に低減できることを見出した。例えば、ＤＴＰａ―ＨＢ−ＩＰＶ−Ｈｉｂ（ＴＴ）−ＭｅｎＣ（ＴＴ）ワクチンにおいて、ＤＴＰａ中のＴの量は、典型的な標準的量未満（通常の量の好ましくは約１／４〜３／４、最も好ましくは約１／２）に、例えば、１０〜３０μｇのＴＴ、好ましくは２０〜２５μｇのＴＴに好ましく低減される。例えば、Ｈｉｂと複合体化されたＴＴの量が約１２μｇのＴＴであり、ＭｅｎＣと複合体化されたＴＴの量が約５μｇのＴＴであり、そして複合体化されていないＴＴの量が２４μｇであるならば、合計ＴＴは約４１μｇとなる。

特に好ましいＨｉｂ／肺炎球菌多糖組成物（独立して使用するための、又は上記キットの一つの第１容器の内容物としての組成物）は、以下のものを含む：Ｈｉｂ（好ましくはＴＴとの複合体及び／又はアジュバントに吸着されていないもの）、及び複数の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又は１１種より多い）肺炎球菌多糖複合体（例えば、上記の「本発明の肺炎連鎖球菌ワクチン」の節に記載した組み合わせ）。最も好ましくは、１１種の肺炎球菌多糖（血清型１、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ及び２３Ｆに由来するのもの）が含まれる。好ましくは、肺炎球菌多糖は、ＰＤ、ＤＴ、ＣＲＭ１９７又はＴＴとの複合体である。好ましい実施形態において、Ｈｉｂ多糖抗原は、アジュバント、特にアルミニウム塩に吸着されていない。肺炎球菌多糖抗原にはアジュバント（好ましくはリン酸アルミニウム）を加えてもよいが、それらはアジュバント、特にアルミニウム塩に吸着させなくてもよい。特定の実施形態において、組成物にはアルミニウムアジュバント塩が存在しない。本発明の組成物は、他の抗原（例えば、髄膜炎菌Ｃ型夾膜多糖複合体［好ましくはプロテインＤ、ＴＴ、ＤＴ若しくはＣＲＭ１９７のいずれかとの複合体及び／又はアジュバントに吸着されていないもの）を含んでいてもよいが、別の実施形態においては、組成物中に存在する抗原はＨｉｂ及び肺炎球菌多糖複合体だけである。上記の製剤のもう一つの特定の実施形態において、Ｈｉｂ及び肺炎球菌多糖は同じ担体と複合体化されていない（特に担体がＣＲＭ１９７の場合）。

ワクチンは、１個の容器に入れて（内容物は液体状若しくは凍結乾燥状態のいずれかである）、又は２個のバイアル、すなわちＨｉｂ（好ましくは凍結乾燥物）を含む第１バイアル、肺炎球菌抗原（好ましくは液体状）を含む第２バイアルに入れて提供することができる。凍結乾燥組成物には、好ましくはショ糖、乳糖又はトレハロースのような凝結防止剤を存在させる。バイアルの内容物は１回の投与／注射で宿主に投与する前に即時に一つの容器内で混合することができる。そのような製剤を用いて免疫を行うと、抗原を単独で投与した場合に得られる力価の１００％に近いか、又は最も頻繁にはその力価を超える抗体力価をＨｉｂ夾膜多糖を用いる免疫に対して得ることが可能である。好ましい実施形態において、（防御効力の点では）単独投与と比較して、組み合わせ投与において肺炎球菌多糖複合体に（有意な）有害作用は生じない。これは、最後の一次投与（一次投与は生後１年までに受ける初回抗原刺激投与（通常３回）である）の１ヶ月後に抗多糖抗体の一次投与後の相乗平均濃度（ＧＭＣ）を測定するという形で評価することができる。本発明のワクチンのＧＭＣ（単位μｇ／ｍｌ）は、好ましくは、肺炎球菌多糖がＨｉｂ複合体無しで投与される場合のＧＭＣの５５％を超える（より好ましくは６０、７０、８０又は９０％を超える）はずである。有害作用が生じなかったことを示すもう一つの指標は、本発明のワクチンの一次投与の１ヶ月後と、Ｈｉｂ複合体無しのワクチンの一次投与の１ヶ月後とを比較した場合に、抗体濃度が０．５μｇ／ｍｌ以上である被験者のパーセンテージの差が１０％以下（好ましくは、９、７、５、３又は１％未満）であるかどうかである。

上記では、Ｈｉｂ、肺炎球菌及び髄膜炎菌「多糖」について言及しているが、本発明は、Ｈｉｂ及びワクチン技術において周知である肺炎球菌の「サイズを規制した多糖」及び「オリゴ糖」（扱い易くするために多糖のサイズを小さくしたものであって、宿主における防御免疫反応を誘発することができるもの）まで広く含み得ると考えられる（例えば、ＥＰ４９７５２５参照）。有利には、ＭｅｎＹは、オリゴ糖複合体として存在することができ、該オリゴ糖は天然多糖の分子量の０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８又は０．９倍の分子量を有する。

本発明のもう一つの態様において、医薬に使用するための本明細書中に記載される免疫原性組成物又はワクチンを提供する。

本発明のさらにもう一つの態様において、百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、Ｂ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス及び髄膜炎菌（及び場合によりインフルエンザ菌）の感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防するための医薬の製造における本発明の免疫原性組成物の使用を提供する。さらに、百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、Ｂ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、インフルエンザ菌、肺炎連鎖球菌及び髄膜炎菌の感染によって引き起こされる疾患を治療又は予防するためのワクチンキットの製造における本発明の免疫原性組成物の使用を提供する。

さらに、百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、Ｂ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス及び髄膜炎菌（及び場合によりインフルエンザ菌）によって引き起こされる疾患に対する免疫をヒト宿主に付与する方法であって、本発明の免疫原性組成物の免疫防御量を宿主に投与することを含む上記方法も提供する。

本発明のもう一つの態様は、本発明の上記キットを用いて、百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、Ｂ型肝炎ウイルス及びポリオウイルス、並びにインフルエンザ菌、肺炎連鎖球菌及び髄膜炎菌の１種以上、によって引き起こされる疾患に対する免疫をヒト宿主に付与する方法であって、以下に明確に記載する同時投与スケジュールを含む上記方法に関する。

同時投与スケジュール
そのようなスケジュールは、宿主に、キット（例えば、本発明のキットの一つ）の第１容器の免疫原性組成物の免疫防御量を、該キットの第２（又は第３）の容器の免疫原性組成物が投与される部位とは異なる（別の流入領域のリンパ節；drained by different lymph node）部位に投与する工程を含む。好ましくは、異なる部位は異なる肢である。ワクチンの投与は、好ましくはそれぞれ２４時間以内、より好ましくは同日以内、最も好ましくは宿主が開業医を訪問した同じ時に行われる。好ましくは、宿主への後続の初回抗原刺激投与は、両方（又は全て）のワクチンを用いて、１回以上（好ましくは２回）の更なる時点で毎回２〜１２週間（好ましくは約１ヶ月）の間隔をおいて同じ手段で行われる。しばしば、３度目の初回抗原刺激投与は、２度目の投与後の２週間〜７ヶ月の間に与えることができる。例えば、ワクチンを上記のようにＤＴＰワクチンのための通常の投与スケジュール（例えば、３回訪問システムで各訪問ごとに１ヶ月の間隔をおいて、例えば生後３、４及び５ヶ月の月齢スケジュール；生後３、５及び１１ヶ月の月齢スケジュール；又は生後３、５及び１２ヶ月の月齢スケジュール）に従って投与することができる。そのような投与スケジュールによって、キットの両方（又は全て）の容器中の抗原に対する免疫反応の最適化を可能となる。

ワクチンの追加免疫投与は、生後２年〜成人までのいつでも同じ手段で与えることができる。初回免疫刺激は好ましくは筋肉内径路から行われるが、追加免疫刺激は、場合により粘膜アジュバント（好ましくはラウレス（ｌａｕｌｅｔｈ）９、又は大腸菌に由来する熱不安定トキシン［ＬＴ］、及びその変異体又はフラグメント）の存在下に、粘膜内に有利に行うことができ（例えば、ワクチンの鼻内投与は投与が容易であり、特に宿主が非経口的に初回免疫刺激された場合は著しく良好に作用する）、そしてワクチンの投与部位を別のリンパ節に流入する必要がない。

同時投与のための本発明のワクチンキットの製造方法における、容器内の本発明の免疫原性組成物の使用も包含される。

２個以上の容器中にＴＴを含むキット
本発明のもう一つの態様は、同時投与（上記で定義した通り）のためのワクチンキットであって、ＴＴ免疫干渉作用又はＴＴ複合体化多糖の担体抑制作用を有利に低減、最小化又は防止するために２個以上の容器中のＴＴ含有量を調整したものである、上記ワクチンキットに関する。ＴＴは著しく良好な担体であるが、ワクチン組成物に過剰に用いられる場合、特に遊離ＴＴも存在する場合には制限があることが知られている。過剰に使用する場合、ＴＴと複合体化された全ての抗原は低下した抗体力価を示す。従って、当分野では、上記の欠点無くＴＴを多数の異なる範囲で（例えば、遊離抗原として、及び多数の多糖抗原の担体として）多くの混合ワクチンに使用する方法に関して明らかな問題がある。本発明者らは、この問題を解決する最適な方法；すなわち、キット同時投与スケジュール（上記で定義した通り）の使用によって、免疫干渉作用又は担体抑制作用が生じる臨界閾値以下の量でＴＴを含む第１容器のワクチンを、免疫干渉作用又は担体抑制作用が生じる臨界閾値以下の量でＴＴを含む第２（場合により第３）の容器のワクチンとともに、同時に投与されるＴＴの合計量がこの臨界閾値を超えるように投与することができ、そして免疫干渉作用（又は担体抑制作用）が最小化され（すなわち成分を１回の注射で投与した場合より少なく）、好ましくは全く生じないという方法を見出した。臨界閾値は、４０、４５、５０、６０、７０又は８０μｇのＴＴであってよく、好ましくは約５０μｇのＴＴである。従って、投与できる最大合計ＴＴは、およそ、キットの容器の数（２又は３）からの量に臨界閾値を乗じた量までである。

従って、本発明は、遊離形態及び／又は複合体形態のＴＴをそれぞれ含む２種（又は３種）の免疫原性組成物を入れた２個（又は３個）の容器を含む同時投与のためのキットであって、各容器中のＴＴの量がＴＴ免疫干渉（又は担体抑制）作用を防止又は最小化するために臨界閾値以下であり、ただし全容器中の合計ＴＴは該臨界閾値を超えるものである、上記キットを提供する。

好ましくは、容器の少なくとも１個は、遊離の（複合体化されていない）ＴＴを含むべきであり、これはＤＴＰａ又はＤＴＰｗ多価ワクチンに関して最も好ましい。遊離ＴＴの量は約４２μｇのほぼ通常レベルで存在し得るが、本発明のさらなる利点は、より少ない量（１０〜３０又は１０〜２０μｇ、例えば、１０、１５、２０、２５又３０μｇ）の存在を可能にし、ただし、最適な抗ＴＴ抗体力価を最小（又は皆無の）免疫干渉又は担体抑制作用で誘発させ得ることである。

好ましくは、容器の少なくとも１個（ただし、できれば２又は３個）は、少なくとも１種（ただし、できれば２、３、４、５、６、７又はそれ以上）のＴＴ複合体化多糖を含むべきである。１個の容器に遊離ＴＴが存在する場合には、キットの他の容器の１個が少なくとも１種のＴＴ複合体化多糖を含むことが好ましい。多糖は本明細書に記載するいずれであってもよく、好ましくは１種以上の肺炎球菌多糖（上記の通り）、又はＭｅｎＣ、ＭｅｎＹ若しくはＨｉｂであってよい。

好ましくは、キットは上述した本発明のキットのいずれかである。

好ましくは、キットに存在する多糖−ＴＴ複合体の１、２、３種又は全ては、複合体がなお免疫学的機能を有するが、ＴＴ免疫干渉又は担体抑制作用の最小化又は防止を容易にするように、多糖：ＴＴの比率が（標準的複合体と比較して）重量で１：０．５〜１．５（好ましくは１：０．６〜１．２、最も好ましくは約１：１）まで低減したようなものである。

さらに、第１容器の免疫原性組成物の免疫防御量を宿主の第１部位に投与し、第２容器の免疫原性組成物の免疫防御量を宿主の第２部位に投与する（そして場合により、第３容器の免疫原性組成物の免疫防御量を宿主の第３部位に投与する）ことを含む、上記キットを使用してヒト宿主に免疫を付与する方法を提供するが、第１及び第２（及び場合により第３）の部位が異なる流入領域リンパ節である。

同時投与は、上記のように行うべきである。好ましくは、第１及び第２（及び場合により第３）の部位は宿主の異なる肢に存在する。好ましくは、第１及び第２（及び場合により第３）の容器の免疫原性組成物の投与は、同じ日に行われる。好ましくは、宿主への後続のワクチン接種は、１回以上の更なる時点で毎回２〜１２週間の間隔をおいて、より好ましくは２回の更なる時点で毎回約１〜２ヶ月間の間隔をおいて、同じ手段で与えられる。

２個以上の容器にＤＴ又はＣＲＭ１９７を含むキット
本発明のさらにもう一つの態様は、同時投与（上記で定義した通り）のためのワクチンキットを提供し、このワクチンキットにおいては、２個以上の容器中のＤＴ含有量（ＤＴ、及びＣＲＭ１９７のような免疫学的に同一の任意の変異体を含む）を調整して、ＤＴ（又はＣＲＭ１９７）と複合体化された多糖の抗体力価を強化する一方で、反応原性を最小化する（すなわち、容器中の成分を１回の注射で投与する場合よりも反応原性が低い）ものである。ＤＴ及びＣＲＭ１９７は著しく良好な担体であるが、ＤＴはこれを含むワクチンの反応原性の大きな一因であることが知られている。本発明らは、キットの同時投与スケジュール（上記で定義した通り）の使用によって、ＤＴ（及び／又はＣＲＭ１９７）を含む第１容器のワクチンが、ＤＴ又はＣＲＭ１９７と複合体化した多糖を含む第２（及び場合により第３）の容器のワクチンを同時に投与する場合に、有利に高い量（４０〜１５０μｇ、好ましくは６０〜１２０μｇ、より好ましくは７０〜１００μｇ、最も好ましくは約９５μｇ）で存在することを見出した。

本発明の利点は、ａ）第１容器中のＤＴ含有量は高いが、ＤＴ免疫干渉又は担体抑制作用を誘導するほどには高くないこと、ｂ）ＤＴ−又はＣＲＭ１９７−多糖複合体は第１容器から分離されているので、第１容器のワクチンの反応原性が高められないこと、さらに、ｃ）ＤＴ又はＣＲＭ１９７と複合体化された多糖に対する抗体力価を低下させるのではなく、強化できる（複合体を別個に投与した場合と比較して、又は第１容器中に存在するＤＴ量が低い場合と比較して、力価が大きい）ことである。

従って、本発明は、同時投与（上記で定義した通り）のための２種（又は３種）の免疫原性組成物を入れた２個（又は３個）の容器を含むキットを提供し、該キットは、第１容器が高い量（上記で定義した通り）で存在するＤＴの含有量（ＤＴ＋ＣＲＭ１９７；好ましくは遊離のもの又は複合体化されていないもの）を含み、そして第２（及び第３）の容器がＤＴ及び／又はＣＲＭ１９７と複合体化された多糖の１種以上を含むものである。

好ましくは、第１容器は遊離の（複合体化されていない）ＤＴを含むべきであり、これはＤＴＰａ又はＤＴＰｗ多価ワクチンに関して最も好ましい。

ＤＴ及び／又はＣＲＭ１９７と複合体化された多糖の１種以上は、以下のリストから選択することができる：肺炎球菌多糖１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ又は３３Ｆ、及びＭｅｎＣ、ＭｅｎＹ又はＨｉｂ。好ましくは、本発明によれば、これらの１以上の多糖に対する免疫反応（抗体力価）は、複合体それ単独の投与と比較して持続され、そして最も好ましく強化される。

好ましくは、キット中に存在する多糖−ＤＴ（又はＣＲＭ１９７）複合体の１、２、３種又は全ては、多糖：ＤＴ／ＣＲＭ１９７の比率が（標準的複合体と比較して）重量で１：０．５〜１．５（好ましくは１：０．６〜１．２、最も好ましくは約１：１）まで低下されたようなものである。

さらに、上記キットを使用して、第１容器の免疫原性組成物の免疫防御量を宿主の第１部位に投与し、第２容器の免疫原性組成物の免疫防御量を宿主の第２部位に投与する（そして場合により、第３容器の免疫原性組成物の免疫防御量を宿主の第３部位に投与する）ことを含むヒト宿主に免疫を付与する方法であって、第１及び第２（及び場合により第３）の部位が異なる流入領域リンパ節である、上記方法を提供する。

同時投与は上記のように行うべきである。好ましくは、第１及び第２（及び場合により第３）の部位は宿主の異なる肢に存在する。好ましくは、第１及び第２（及び場合により第３）の容器の免疫原性組成物の投与は、同じ日に行われる。好ましくは、宿主への後続のワクチン接種は、１回以上の更なる時点で毎回２〜１２週間の間隔をおいて、より好ましくは２回の更なる時点で毎回約１〜２ヶ月間の間隔をおいて、同じ手段で与えられる。

本発明のワクチン調製物は、全身又は粘膜経路からの上記ワクチンの投与によって、感染し易い哺乳動物を保護又は治療するために使用することができる。これらの投与としては、筋肉内、腹腔内、皮内、若しくは皮下経路からの注射、又は口腔／食道、気道、尿生殖器官からの粘膜投与による注入が含まれる。

各ワクチン用量中の抗原の量は、一般的なワクチンにおける重大な有害副作用を伴うことなく免疫反応を誘導する量として選択される。そのような量は、具体的にどのような免疫源が使用されるのか、及びそれがどのように提示（投与）されるのかによって変わる。一般に、各用量は、多糖を０．１〜１００μｇ、好ましくは０．１〜５０μｇ、より好ましくは０．１〜１０μｇ含み、そのうち１〜５μｇが最も好ましい範囲と考えられる。

ワクチン中のタンパク質抗原の含有量は、一般的には１〜１００μｇの範囲であり、好ましくは５〜５０μｇ、最も好ましくは５〜２５μｇの範囲である。

初回ワクチン接種に続いて、被験者は１回又は数回の追加抗原免疫処置を適切な期間をあけて受けることができる。

ワクチン調製物は、ＶａｃｃｉｎｅＤｅｓｉｇｎ（”Ｔｈｅｓｕｂｕｎｉｔａｎｄａｄｊｕｂａｎｔａｐｐｒｏａｃｈ”（ＰｏｗｅｌｌＭ．Ｆ．＆ＮｅｗｍａｎＭ．Ｊ．編）（１９９５）ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓＮｅｗＹｏｒｋ）に一般に記載さている。リポソーム内への封入は、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎによる米国特許第４，２３５，８７７号に記載されている。

実施例は単に説明目的のために提供されるのであって、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。

実施例１：ＤＴ−ＴＴ−Ｐａ−ＩＰＶ−ＨｅｐＢ（ＤＴＰａＩＰＶＨｅｐＢ）ワクチンの調製
本実施例は、国際特許出願公開番号ＷＯ９３／２４１４８号に記載されたように行った。ワクチンはＩｎｆａｎｒｉｘ−ＰｅＮＴａ^ＴＭ（スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカル）という商品名で市販されている。

実施例２：ＭｅｎＣ又はＭｅｎＣ−ＭｅｎＹワクチンの調製
ＭｅｎＣ：（ＣＤＡＰ技法を用いて）プロテインＤ又はＴＴのいずれかと複合体化された髄膜菌Ｃ型夾膜多糖（ヒト用量０．５ｍＬ当たり複合体における多糖は５μｇの量）。ｐＨを６．１に調節し、ショ糖の存在下に凍結乾燥した。

ＭｅｎＣＭｅｎＹ：（ＣＤＡＰ技法を用いて）プロテインＤ又はＴＴのいずれかと複合体化された髄膜菌Ｃ型夾膜多糖、及びプロテインＤ又はＴＴのいずれかと複合体化された髄膜菌Ｙ型夾膜多糖を混合した（ヒト用量０．５ｍＬ当たり各複合体における多糖は５μｇの量）。ｐＨを６．１に調節し、ショ糖の存在下に凍結乾燥した。

実施例３：ＤＴ−ＴＴ−Ｐａ−ＩＰＶ−ＨｅｐＢ−ＭｅｎＣ−ＭｅｎＹ（ＤＴＰａＩＰＶＨｅｐＢ／ＭｅｎＣＭｅｎＹ）ワクチン、又はＤＴ−ＴＴ−Ｐａ−ＩＰＶ−ＨｅｐＢ−ＭｅｎＣ（ＤＴＰａＩＰＶＨｅｐＢ／ＭｅｎＣ）ワクチンの調製
実施例１及び実施例２のワクチンを使用前に即時に（使用する日に）混合した。

実施例４：Ｈｉｂ−１１価肺炎球菌複合体（Ｈｉｂ／Ｓｔｒｅｐ１１Ｖ）ワクチンの調製
ＴＴと複合体化されたインフルエンザ菌ｂ型夾膜多糖（用量当たり複合体における多糖は１０μｇ）（これはｐＨ６．１でショ糖の存在下に凍結乾燥されている）［Ｈｉｂｅｒｉｘ^ＴＭ（スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカル）］を、ＰＤと複合体化された１１価肺炎球菌夾膜多糖（血清型１、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ及び２３Ｆ）（用量当たり各複合体における多糖は１μｇ）の溶液に即時に（使用する日に）溶解した。肺炎球菌ワクチンは、前もって０．５ｍｇのＡｌ^３＋（ＡｌＰＯ_４として）に吸着させておいた。

実施例５：臨床試験
実施例４のワクチンに対する研究
実施例４のワクチン及び対照ワクチンをドイツ人乳児に３回投与スケジュールで（生後３、４、５ヶ月の月齢のときに）投与した。

得られた免疫反応の結果（最後の一次投与の１ヶ月後に測定）は、以下の通りであった。

Ｈｉｂｅｒｉｘ（吸着されていないＨｉｂ−ＴＴ複合体）は、同様の投与スケジュール後に約６μｇ／ｍｌのＧＭＣを有した。

ＥＬＩＳＡ抗体に関し、１１Ｐｎ―ＰＤ／Ｈｉｂワクチンを与えた乳児の免疫反応は、血清型１、３及び９Ｖを除く全ての血清型に関して、１１Ｐｎ−ＰＤワクチンを与えた乳児で観察されたものと類似しており、血清型１、３及び９Ｖについては、１１Ｐｎ−ＰＤ／Ｈｉｂワクチンの場合に相乗平均濃度が低下する傾向が観察された。しかしこれらの相違は、９５％信頼区間の重複によって示されるように、有意ではなかった。

１１Ｐｎ-ＰＤ／Ｈｉｂワクチンは、１１種の血清型全てに対する機能的（オプソニン食細胞性）抗体を誘導した。

Ｈｉｂワクチンと肺炎球菌複合体ワクチンとを組み合わせても、肺炎球菌免疫反応を有意に干渉することはなく、そして登録されたワクチンであるＩｎｆａｎｒｉｘ−ＨｅＸａ及びＨｉｂｅｒｉｘの両方と比較して抗ＰＲＰ反応を驚くほど強化した。

実施例３のワクチン、又は実施例３及び実施例４のワクチンの同時投与に関する研究
研究１：
Ｈｉｂワクチンと一緒に投与されるか、又はＨｉｂｅｒｉｘと混合した１１価肺炎球菌ワクチンと同時に投与される、ＭｅｎＣ複合体ワクチンと混合したＩｎｆａｎｒｉｘ−ＰｅＮＴａの安全性及び免疫原性を評価することができる。ＰＤ及びＴＴ担体の両方を、ＭｅｎＣ複合体について評価することができる。異なる肢への同時注射は、開業医を訪問した日に投与することができる。

研究２：
Ｈｉｂワクチンと一緒に投与されるか、又はＨｉｂｅｒｉｘと混合した１１価肺炎球菌ワクチンと同時に投与される、ＭｅｎＣ−ＭｅｎＹ複合体ワクチンと混合したＩｎｆａｎｒｉｘ−ＰｅＮＴａの安全性及び免疫原性を評価することができる。ＰＤ及びＴＴ担体の両方を、ＭｅｎＣ及びＭｅｎＹ複合体について評価することができる。異なる肢への同時注射は、開業医を訪問した日に投与することができる。

Claims

百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、Ｂ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス及び肺炎連鎖球菌により引き起こされる疾患に対する防御を宿主に付与するための２種の多価免疫原性組成物を含む、同時投与のためのワクチンキットであって、該キットが
（ａ）百日咳トキソイド及びＦＨＡを含む無細胞百日咳成分、
（ｂ）破傷風トキソイド（ＴＴ）、
（ｃ）ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、
（ｄ）Ｂ型肝炎表面抗原、及び
（ｅ）不活化ポリオウイルス、
を含む第１容器と、
（２ａ）肺炎連鎖球菌に由来する夾膜多糖と担体タンパク質との１以上の複合体を含む第２容器、
を含むものである、上記ワクチンキット。
肺炎連鎖球菌に由来する夾膜多糖と担体タンパク質との１以上の複合体が、１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ及び３３Ｆからなる群より選択される肺炎球菌血清型の１種以上に由来するものである、請求項１に記載のワクチンキット。
第１容器が（ｆ）髄膜炎菌Ｙ型及び髄膜炎菌Ｃ型の群より選択される細菌の夾膜多糖（ＭｅｎＹ及びＭｅｎＣ）と担体タンパク質との複合体の一方又は両方、並びに（ｇ）インフルエンザ菌Ｂ型の夾膜多糖（Ｈｉｂ）と担体タンパク質との複合体をさらに含むものである、請求項１又は２に記載のワクチンキット。
第２容器が（２ｂ）髄膜炎菌Ｙ型及び髄膜炎菌Ｃ型の群より選択される細菌の夾膜多糖（ＭｅｎＹ及びＭｅｎＣ）と担体タンパク質との複合体の一方又は両方、並びに（２ｃ）インフルエンザ菌Ｂ型の夾膜多糖（Ｈｉｂ）と担体タンパク質との複合体をさらに含むものである、請求項１又は２に記載のワクチンキット。
第１容器が（ｆ）髄膜炎菌Ｙ型及び髄膜炎菌Ｃ型の群より選択される細菌の夾膜多糖（ＭｅｎＹ及びＭｅｎＣ）と担体タンパク質との複合体の一方又は両方をさらに含み、第２容器が（２ｂ）インフルエンザ菌Ｂ型の夾膜多糖（Ｈｉｂ）と担体タンパク質との複合体をさらに含むものである、請求項１又は２に記載のワクチンキット。
第１容器が（ｆ）インフルエンザ菌Ｂ型の夾膜多糖（Ｈｉｂ）と担体タンパク質との複合体をさらに含み、第２容器が（２ｂ）髄膜炎菌Ｙ型及び髄膜炎菌Ｃ型の群より選択される細菌の夾膜多糖（ＭｅｎＹ及びＭｅｎＣ）と担体タンパク質との複合体の一方又は両方をさらに含むものである、請求項１又は２に記載のワクチンキット。
（３ａ）髄膜炎菌Ｙ型及び髄膜炎菌Ｃ型の群より選択される細菌の夾膜多糖（ＭｅｎＹ及びＭｅｎＣ）と担体タンパク質との複合体の一方又は両方、並びに（３ｂ）インフルエンザ菌Ｂ型の夾膜多糖（Ｈｉｂ）と担体タンパク質との複合体を含む、第３容器をさらに含むものである、請求項１又は２に記載のワクチンキット。
２個以上の容器がＴＴを含み、該２個以上の容器それぞれ中のＴＴの量が、ＴＴ免疫干渉又は担体抑制作用を防止又は最小化するために５０μｇのＴＴの臨界閾値以下であり、しかしワクチンキットの全容器中の合計ＴＴが該臨界閾値より多いものである、請求項１〜７のいずれか１項に記載のワクチンキット。
１個、２個又は３個の容器が、肺炎球菌多糖、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＹ及びＨｉｂからなるリストより選択される１以上のＴＴ−複合体化多糖を含むものである、請求項８に記載のワクチンキット。
１以上のＴＴ−複合体化多糖が重量で１：０．５〜１．５の多糖：ＴＴの比率を有するものである、請求項９に記載のワクチンキット。
第１容器が６０〜１００μｇのＤＴ含有量を含み、第２又は第３の容器がＤＴ及び／又はＣＲＭ１９７と複合体化された１以上の多糖を含むものである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のワクチンキット。
ＤＴ及び／又はＣＲＭ１９７と複合体化された１以上の多糖が、肺炎球菌多糖１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ及び３３Ｆ、髄膜炎菌多糖ＭｅｎＣ及びＭｅｎＹ、並びにインフルエンザ菌ｂ型多糖Ｈｉｂからなるリストより選択されるものである、請求項１１に記載のワクチンキット。
ＤＴ及び／又はＣＲＭ１９７と複合体化された１以上の多糖が重量で１：０．５〜１．５の多糖：ＤＴ又はＣＲＭ１９７の比率を有するものである、請求項１１又は１２に記載のワクチンキット。
百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、Ｂ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス及び髄膜炎菌により引き起こされる疾患に対する防御を宿主に付与するための多価免疫原性組成物であって、
ａ）百日咳トキソイド及びＦＨＡを含む無細胞百日咳成分、
ｂ）破傷風トキソイド、
ｃ）ジフテリアトキソイド、
ｄ）Ｂ型肝炎表面抗原、
ｅ）不活化ポリオウイルス、及び
ｆ）髄膜炎菌Ｙ型及び髄膜炎菌Ｃ型の群より選択される細菌の夾膜多糖と担体タンパク質との複合体の一方又は両方、
を含むものである、上記多価免疫原性組成物。
インフルエンザ菌ｂ型、髄膜炎菌Ａ型及び髄膜炎菌Ｗ型の群より選択される細菌の夾膜多糖と担体タンパク質との１以上の複合体をさらに含むものである、請求項１４に記載の免疫原性組成物。
死滅弱毒化Ａ型肝炎ウイルスをさらに含むものである、請求項１４又は１５に記載の免疫原性組成物。
使用する担体タンパク質が、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ１９７、組換えジフテリアトキシン、髄膜炎菌に由来するＯＭＰＣ、肺炎連鎖球菌に由来するニューモリシン及びインフルエンザ菌に由来するプロテインＤからなる群より選択されるものである、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
宿主にｉｎｖｉｖｏ投与するためのワクチンとして製剤化された請求項１４〜１７のいずれか１項に記載の免疫原性組成物であって、該組成物の個々の成分は、該組成物の他の個々の成分によって該個々の成分の免疫原性が損なわれないように製剤化される、上記免疫原性組成物。
宿主にｉｎｖｉｖｏ投与するためのワクチンとして製剤化された請求項１４〜１７のいずれか１項に記載の免疫原性組成物であって、各抗原成分ごとの血清防御がヒト被験者の許容率（％）の基準を超える抗体力価を付与するものである、上記免疫原性組成物。
さらにアジュバントを含むものである請求項１４〜１９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
アジュバントがアルミニウム塩である請求項２０に記載の免疫原性組成物。
百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、Ｂ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス及び髄膜炎菌の感染により引き起こされる疾患の治療又は予防のための医薬の製造における、請求項１４〜２１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物の使用。
百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、Ｂ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス及び髄膜炎菌により引き起こされる疾患に対する免疫をヒト宿主に付与する方法であって、請求項１４〜２１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物の免疫防御量を該宿主に投与することを含む、上記方法。
請求項１４〜２１のいずれか１項に記載の多価免疫原性組成物の製造方法であって、個々の成分を一緒に混合する工程を含む、上記方法。
インフルエンザ菌及び肺炎連鎖球菌により引き起こされる疾患に対する防御を宿主に付与するための多価免疫原性組成物であって、
（ａ）インフルエンザ菌Ｂ型の夾膜多糖と担体タンパク質との複合体、及び
（ｂ）肺炎連鎖球菌に由来する夾膜多糖と担体タンパク質との１以上の複合体、
を含むものである、上記多価免疫原性組成物。
肺炎連鎖球菌に由来する夾膜多糖と担体タンパク質との２以上の複合体を含むものである、請求項２５に記載の免疫原性組成物。
肺炎連鎖球菌に由来する夾膜多糖と担体タンパク質との７より多い複合体を含むものである、請求項２６に記載の免疫原性組成物。
肺炎連鎖球菌に由来する夾膜多糖が、１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ及び３３Ｆからなる群より選択される血清型に由来するものである、請求項２５〜２７のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
肺炎連鎖球菌血清型１、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ及び２３Ｆに由来する夾膜多糖と担体タンパク質との複合体を含むものである、請求項２８に記載の免疫原性組成物。
さらにアジュバントを含むものである、請求項２５〜２９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
インフルエンザ菌Ｂ型の夾膜多糖がアルミニウム塩アジュバントに吸着されていないものである、請求項２５〜２９のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
肺炎連鎖球菌の夾膜多糖がアルミニウム塩アジュバントに吸着されたものである、請求項３１に記載の免疫原性組成物。
インフルエンザ菌Ｂ型の夾膜多糖及び肺炎連鎖球菌の夾膜多糖の両方がアルミニウム塩アジュバントに吸着されていないものである、請求項３１に記載の免疫原性組成物。
使用する担体タンパク質が、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ１９７、組換えジフテリアトキシン、髄膜炎菌に由来するＯＭＰＣ、肺炎連鎖球菌に由来するニューモリシン及びインフルエンザ菌に由来するプロテインＤからなる群より選択されるものである、請求項２５〜３３のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
インフルエンザ菌Ｂ型の夾膜多糖及び肺炎連鎖球菌に由来する夾膜多糖が同じ担体と複合体化されていないものである、請求項２５〜３４のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
インフルエンザ菌Ｂ型の夾膜多糖及び肺炎連鎖球菌に由来する夾膜多糖の全てがＣＲＭ１９７と複合体化されているとは限らない、請求項３５に記載の免疫原性組成物。
インフルエンザ菌Ｂ型の夾膜多糖のための担体タンパク質が破傷風トキソイドである、請求項３４又は３５に記載の免疫原性組成物。
肺炎連鎖球菌の夾膜多糖の全てのための担体タンパク質がプロテインＤである、請求項３４、３５又は３７に記載の免疫原性組成物。
宿主にｉｎｖｉｖｏ投与するためのワクチンとして製剤化された請求項２５〜３８のいずれか１項に記載の免疫原性組成物であって、該組成物の個々の成分は、該組成物の他の個々の成分によによって該個々の成分の免疫原性が損なわれないように製剤化される、上記免疫原性組成物。
宿主にｉｎｖｉｖｏ投与するためのワクチンとして製剤化された請求項２５〜３８のいずれか１項に記載の免疫原性組成物であって、各抗原成分ごとの血清防御がヒト被験者の許容率（％）の基準を超える抗体力価を付与するものである、上記免疫原性組成物。
医薬において使用するための請求項２５〜４０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物。
インフルエンザ菌及び肺炎連鎖球菌の感染により引き起こされる疾患の治療又は予防のための医薬の製造における、請求項２５〜４０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物の使用。
インフルエンザ菌及び肺炎連鎖球菌により引き起こされる疾患に対する免疫をヒト宿主に付与する方法であって、請求項２５〜４０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物の免疫防御量を該宿主に投与することを含む、上記方法。
請求項２５〜４０のいずれか１項に記載の多価免疫原性組成物の製造方法であって、個々の成分を一緒に混合する工程を含む、上記方法。
百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、Ｂ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス及び髄膜炎菌、インフルエンザ菌及び肺炎連鎖球菌により引き起こされる疾患に対する防御を宿主に付与するための２種の多価免疫原性組成物を含むキットであって、請求項１４〜２１のいずれか１項に記載の免疫原性組成物を含む第１容器と、請求項２５〜４０のいずれか１項に記載の免疫原性組成物を含む第２容器を含むものである、上記キット。
請求項１〜１３又は４５のいずれか１項に記載のキットを使用して疾患に対する免疫をヒト宿主に付与する方法であって、第１容器の免疫原性組成物の免疫防御量を該宿主の第１部位に投与し、第２容器の免疫原性組成物の免疫防御量を該宿主の第２部位に投与し、そして場合により、第３容器の免疫原性組成物の免疫防御量を該宿主の第３部位に投与することを含み、第１、第２及び第３の部位が異なる流入領域リンパ節である、上記方法。
第１、第２及び場合により第３の部位が宿主の異なる肢である、請求項４６に記載の方法。
第１、第２及び場合により第３の容器の免疫原性組成物の投与が同じ日に行われる、請求項４６又は４７に記載の方法。
宿主への後続のワクチン接種が、１回以上の更なる時点で毎回２〜１２週間の間隔をおいて同じ手段で行われる、請求項４６〜４８のいずれか１項に記載の方法。
宿主への後続のワクチン接種が、２回の更なる時点で毎回約１〜２ヶ月間の間隔をおいて同じ手段で行われる、請求項４９に記載の方法。