JP2005508293A

JP2005508293A - ４（フェニル−ピペラジニル−メチル）ベンズアミド誘導体及び疼痛、不安症又は胃腸障害の治療のためのその使用

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Publication number: JP2005508293A
Application number: JP2002591467A
Authority: JP
Inventors: ウィリアム・ブラウン; クリストファー・ウォルポール; ニクラース・プローベック
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 2001-05-18
Filing date: 2002-05-16
Publication date: 2005-03-31
Anticipated expiration: 2022-05-16
Also published as: US7915413B2; HUP0401086A2; WO2002094794A8; DE60230869D1; AU2002305994B2; CZ20033092A3; MXPA03010445A; EE05243B1; CN1527820A; ES2319876T3; ATE420866T1; EP1395567A1; CA2446326C; KR20080106586A; WO2002094794A1; SI1395567T1; BR0209678A; US20070270435A1; MY140070A; NZ529401A

Abstract

一般式Ｉの化合物：Ｒ¹は、フェニル、ピリジニル、チエニル、フラニル、イミダゾリル、ピロリル、トリアゾリル、チアゾリル及びピリジンＮ−オキシドのいずれか一つから選ばれ；Ｒ²は、独立してエチル及びイソプロピルから選ばれ；Ｒ³は、独立して水素及びフルオロから選ばれ；Ｒ⁴は、独立して−ＯＨ、−ＮＨ₂及び−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁵から選ばれ；そしてＲ⁵は、独立して水素、−ＣＦ₃及びＣ₁−Ｃ₆アルキルから選ばれる、若しくはその塩又は個々の鏡像異性体及びその塩；その際、Ｒ¹複素芳香族環は、それぞれ場合により、独立して直鎖及び分枝Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ＮＯ₂、ＣＦ₃、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、クロロ、フルオロ、ブロモ、及びヨードから選ばれる１、２又は３個の置換基によってさらに置換されていてもよく、この複素芳香族環上の置換は、前記環系上の任意の位置で実施することができる；及び化合物の個々の鏡像異性体及び塩並びに新規化合物を含んでなる医薬組成物並びに治療、特に疼痛、不安症及び機能性胃腸障害の処置におけるその使用が、本明細書で開示され、請求されている。

Description

【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物、その製造方法、その使用及び新規化合物を含んでなる医薬組成物に関する。新規化合物は、治療、特に疼痛、不安症及び機能性胃腸障害の治療に有用である。
【背景技術】
【０００２】
δ受容体は、循環系や痛覚系といったような多くの身体機能において役割を有することが確認されている。従って、δ受容体のリガンドは、鎮痛剤及び／又は抗高血圧剤としての使用可能性を見出すことができる。また、δ受容体のリガンドは、免疫調節活性を有することがわかった。
今のところ、少なくとも３つの異なる個体群のオピオイド受容体（μ、δ及びκ）が確認されており、３つは、いずれもヒトを含めた多くの種の中枢及び末梢神経系の両方で見られる。これらの受容体の１つ以上が活性化された時に、種々の動物モデルで痛覚脱失が観察された。
【０００３】
一部の例外を除いて、現在入手可能な選択的オピオイドδリガンドは、性質がペプチド性であり、全身経路による投与に適していない。非ペプチド性δ作動薬の一例は、ＳＮＣ８０である(Bilsky E.J.等, Journal of Pharmacology ahd Experimental Therapeutics,
273(1), 第359-366頁 (1995))。しかし、改善された選択性を有するだけでなく副作用プロフィールも改善された選択的δ作動薬が、なお必要とされている。
従って、本発明の根本的な課題は、改善された鎮痛効果を有するだけでなく、現在のμ作動薬よりも改善された副作用プロフィールを有し、しかも改善された全身有効性を有する新しい鎮痛剤を見出すことである。
【０００４】
先行技術において確認された既存の鎮痛剤は、薬理動態に乏しく、全身経路によって投与した場合に鎮痛性がないといった多くの欠点を有する。また、先行技術に記載された好ましいδ作動薬化合物は、全身投与した場合、有意な痙攣効果を示すことが報告されている。
ここで、本発明者らは、驚くほど改善された性質、すなわち改善されたδ作動薬効力、生体内効力、薬理動態、生物学的利用能、生体外安定性及び／又はより低い毒性を示すある種の化合物を見出した。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の新規化合物は、式Ｉ
【化１】

（式中、Ｒ¹は、
（ｉ）フェニル；
【化２】

（ii）ピリジニル
【化３】

（iii）チエニル
【化４】

（iv）フラニル
【化５】

（ｖ）イミダゾリル
【化６】

（vi）トリアゾリル
【化７】

（vii）ピロリル
【化８】

（viii）チアゾリル
【化９】

（ix）ピリジル−Ｎ−オキシド
【化１０】

のいずれか一つから選ばれ、その際、Ｒ¹複素芳香族環は、それぞれ場合により、独立して直鎖及び分枝Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ハロゲン化Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ＮＯ₂、ＣＦ₃、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、クロロ、フルオロ、ブロモ及びヨードから選ばれる１、２又は３個の置換基によってさらに置換されていてもよく、
Ｒ²は、独立してエチル及びイソプロピルから選ばれ；
Ｒ³は、独立して水素及びフルオロから選ばれ；
Ｒ⁴は、独立して−ＯＨ、−ＮＨ₂及び−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁵から選ばれ；そして
Ｒ⁵は、独立して水素、−ＣＦ₃及びＣ₁−Ｃ₆アルキルから選ばれるが、但し、Ｒ²がエチルであり、Ｒ³が水素である時は、Ｒ⁴は、−ＯＨであることができない）によって定義される。
複素芳香族環上の置換は、前記環系上の任意の位置で行うことができる。
【０００６】
Ｒ¹フェニル環及びＲ¹複素芳香族環が置換されている場合、好ましい置換基は、ＣＦ₃、メチル、ヨード、ブロモ、フルオロ及びクロロのいずれか１つより選ばれ、このうちメチルが最も好ましい。
従って、本発明のさらなる実施態様は、Ｒ¹が上記定義された通りであり、そしてＲ¹フェニル環及びＲ¹複素芳香族環は、それぞれ独立してメチル基によってさらに置換されることができる。
【０００７】
本発明のさらなる実施態様は、Ｒ¹がフェニル、ピロリル、フラニル、チエニル又はイミダゾリルであり；Ｒ²は、エチル又はイソプロピルであり；Ｒ³は、水素又はフルオロであり；Ｒ⁴は、−ＮＨ₂又は−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁵であり；そしてＲ⁵はＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、場合によりＲ¹フェニル又はＲ¹複素芳香族環上に１個又は２個の好ましい置換基を有する式Ｉの化合物である。
本発明のさらなる実施態様は、Ｒ¹が、フェニル、ピロリル、フラニル、チエニル又はイミダゾリルであり；Ｒ²は、エチル又はイソプロピルであり；Ｒ³は、水素であり；Ｒ⁴は、−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁵であり；そしてＲ⁵は、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルである、場合によりＲ¹フェニル又はＲ¹複素芳香族環上で１個又は２個の好ましい置換基を有する式Ｉの化合物である。
【０００８】
本発明の別の実施態様は、ａ) Ｒ¹が、フェニル、ピロリル又はフラニルであり；Ｒ²は、エチル又はイソプロピルであり；Ｒ³は、水素又はフルオロであり；そしてＲ⁴は、−ＮＨ₂であり；ｂ) Ｒ¹は、チエニル又はイミダゾリルであり；Ｒ²は、エチル又はイソプロピルであり；Ｒ³は、水素又はフルオロであり；そしてＲ⁴は、−ＮＨ₂であり；ｃ) Ｒ¹は、フェニル、ピロリル、フラニル、チエニル又はイミダゾリルであり；Ｒ²は、エチル又はイソプロピルであり；Ｒ³は、水素又はフルオロであり；Ｒ⁴は、−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁵であり；そしてＲ⁵は、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルであり；そしてｄ) Ｒ¹は、フェニル、ピロリル、フラニル、チエニル又はイミダゾリルであり；Ｒ²は、エチル又はイソプロピルであり；Ｒ³は、水素又はフルオロであり；Ｒ⁴は、−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁵であり、そしてＲ⁵は、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルであり、その際、ａ）〜ｄ）の全ての実施態様では、場合により、Ｒ¹フェニル又はＲ¹複素芳香族環上で１個又は２個の好ましい置換基で置換されていてもよい式Ｉの化合物である。
【０００９】
また、式Ｉの化合物の個々の鏡像異性体及び塩は、鏡像異性体の塩を含めて本発明の範囲内にある。また、個々の鏡像異性体の混合物、例えばラセミ混合物だけでなく個々の鏡像異性体の混合物の塩も本発明の範囲内である。
【００１０】
ラセミ混合物を個々の鏡像異性体へ分離することは、当分野でよく知られており、例えば適切なキラルクロマトグラフィカラム上での分離によって実施することができる。塩の製造は、当分野でよく知られており、例えば式Ｉの化合物を適切な溶媒中で所望のプロトン性酸と混合し、当分野で標準的な方法で単離することによって実施することができる。式Ｉの化合物の塩には、医薬上許容しうる塩、そしてまた、医薬上許容しえない塩が含まれる。
【００１１】
本発明の新規化合物は、治療、特に種々の疼痛状態、例えば慢性疼痛、神経因性疼痛、急性疼痛、癌性疼痛、慢性関節リウマチによって生じる疼痛、偏頭痛、内臓痛等の治療に有用である。しかし、このリストは、網羅するものとして解釈してはならない。
本発明の化合物は、免疫調節物質として、特に自己免疫疾患、例えば関節炎、皮膚移植片、臓器移植及び同様の外科的必要性、膠原病、種々のアレルギー、抗腫瘍剤及び抗ウイルス剤としての使用に有用である。
本発明の化合物は、オピオイド受容体の退行変性又は機能不全が存在する又はそのパラダイムが関与する疾病状態に有用である。診断技術及び画像化用途、例えば陽電子射出断層撮影法（ＰＥＴ）においては、本発明化合物の同位元素的に標識化されたバージョンの使用を含むことができる。
【００１２】
本発明の化合物は、下痢、うつ病、不安症及びストレス関連障害、例えば心的外傷後ストレス障害、恐慌性障害、全般性不安障害、社会的恐怖症、及び強迫性障害；尿失禁、種々の精神的な病気、咳、肺水腫、種々の胃腸障害、例えば便秘、機能性胃腸障害、例えば過敏性腸症候群及び機能性消化不良、パーキンソン病及び他の運動性障害、外傷性脳損傷、卒中、心筋梗塞後の心臓保護、脊髄損傷及び薬物嗜癖（アルコール、ニコチン、オピオイド及び他の薬物乱用の治療を含む）並びに交感神経系の障害、例えば高血圧の治療に有用である。
本発明の化合物は、全身麻酔やモニターによる麻酔治療中に使用する鎮痛剤として有用である。麻酔状態（例えば記憶喪失、痛覚脱失、筋弛緩及び鎮静作用）を維持するために必要な効果のバランスを得るため、しばしば異なる性質の薬剤の組合せが用いられる。この組合せには、吸入麻酔剤、催眠剤、不安緩解剤、神経筋遮断剤及びオピオイドが含まれる。
【００１３】
また、上で議論したいずれかの状態を治療する医薬の製造における上記式Ｉのいずれかの化合物の使用は、本発明の範囲である。
本発明のさらなる態様は、上記式Ｉの化合物の有効量を治療の必要な患者に投与することによって上で議論したいずれかの状態で苦しむ患者を治療する方法である。
【００１４】
製造方法
本発明の化合物は、以下の一般的方法を用いて製造することができる。
フェノールの製造：実施例１〜３
Ｒ⁴が−ＯＨである式Ｉの化合物は、一般式II
【化１１】

（式中、Ｒ²及びＲ³は、式Ｉに定義された通りであり、そしてＲ⁴は、ＯＭｅである）の化合物を標準条件下でトリエチルアミンの存在下、アセトニトリル中のＢｏｃ−ピペラジンと反応させ、続いて標準条件下でＢｏｃ保護基を除去して式III
【化１２】

の化合物を得、その後、これを還元条件下で式Ｒ¹−ＣＨＯの化合物を用いてアルキル化し、続いてジクロロメタン中のＢＢｒ₃を用いてメチルエーテルを開裂してＲ⁴が−ＯＨである式Ｉの化合物を得ることによって製造される。
【００１５】
アニリンの製造：実施例４〜６
Ｒ⁴が−ＮＨ₂である式Ｉの化合物は、一般式IV
【化１３】

（式中、Ｒ²及びＲ³は、式Ｉに定義された通りであり、そしてＲ⁴は、ＮＯ₂である）の化合物を、標準条件下でトリエチルアミンの存在下、アセトニトリル中のＢｏｃ−ピペラジンと反応させ、続いて標準条件下でＢｏｃ保護基を除去して式Ｖ
【化１４】

の化合物を得、その後、これを還元条件下で式Ｒ¹−ＣＨＯの化合物を用いてアルキル化し、続いて水素及び木炭上のパラジウムを用いてニトロ基を還元してＲ⁴が−ＮＨ₂である式Ｉの化合物を得ることによって製造される。
【００１６】
メチルスルホンアニリドの製造；実施例７〜８
Ｒ⁴が−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁵である式Ｉの化合物は、一般式VI
【化１５】

（式中、Ｒ²及びＲ³は、式Ｉに定義された通りであり、そしてＲ⁴はＮＯ₂である）の化合物を、標準条件下でトリエチルアミンの存在下、アセトニトリル中のＢｏｃ−ピペラジンと反応させ、続いて触媒として木炭上のパラジウムを用いる水素化分解によりニトロ基を還元し、トリエチルアミンの存在下でジクロロメタン中のメタンスルホニル無水物を用いてメタンスルホニル化し、その後、標準条件下でＢｏｃ保護基を除去して式VII
【化１６】

の化合物を得、その後、これを還元的条件下で式Ｒ¹−ＣＨＯの化合物を用いてアルキル化し、続いて水素及び木炭上のパラジウムを用いてニトロ基を還元してＲ⁴が−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁵である式Ｉの化合物を得ることによって製造される。
【００１７】
また、式Ｉの化合物の個々の鏡像異性体及び塩は、鏡像異性体の塩を含めて本発明の範囲内にある。式Ｉの化合物は、ステレオジェン中心であるジアリールメチルピペラジン基を有するキラル化合物である（下記の式Ｉ^*参照）。
【化１７】

【００１８】
従って、本発明のさらなる実施態様は、式Ｉの化合物の（−）−鏡像異性体、及び前記化合物の塩である。
従って、本発明のさらなる実施態様は、式Ｉの化合物の（＋）−鏡像異性体、及び前記化合物の塩である。
【００１９】
〔実施例〕
ここで、本発明を以下の実施例によってより詳細に説明するが、これらは本発明を限定するものとして解釈されない。
【化１８】

【００２０】
中間体１：４−[（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）(ヒドロキシ)メチル]−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−ベンズアミド
Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−４−ヨードベンズアミド（６.０ｇ,１８mmol）をＴＨＦ（２００ｍＬ）に溶解し、窒素雰囲気下で−７８℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉ（１４ｍＬ，ヘキサン中の１.３Ｍ溶液，１８mmol）を−６５〜−７８℃で１０分間の間に滴加した。４−フルオロ−３−メトキシベンズアルデヒド（２.８ｇ，１８mmol）を、ＴＨＦ（５ｍＬ）に滴加して溶解した。３０分後、ＮＨ₄Ｃｌ（水性）を加えた。真空下で濃縮した後、ＥｔＯＡｃ／水で抽出し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、有機相を蒸発させ、残留物をシリカ上のクロマトグラフィ（０〜７５％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン）によって精製して所望の生成物（３.９ｇ，６０％）を得た。¹H NMR (CDCl₃) δ 1.0-1.6 (m, 12H), 2.65 (d, J = 4Hz, 1H), 3.4-3.9 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 6.10 (d, J= 4Hz, 1H), 6.76 (m, 1H), 6.95 (m, 1H), 7.04 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 7.25, 7.40 (2d, J=7.5Hz, 4H).
【００２１】
中間体２：４−[（４−フルオロ−３−メトキシフェニル）(１−ピペラジニル)メチル]−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルベンズアミド
中間体１（３.９ｇ，１１mmol）を乾燥ＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｍＬ）に溶解し、０〜２５℃で３０分間ＳＯＢｒ₂（０.８８ｍＬ，１１mmol）で処理した。ＫＨＣＯ₄（水性）で中和し、有機相を乾燥（Ｋ₂ＣＯ₄）し、続いて真空下で溶媒を蒸発させた。残留物及びＥｔ₃Ｎ（１.８ｍＬ，１３mmol）をＭｅＣＮ（５０ｍＬ）に溶解し、Ｂｏｃ−ピペラジン（２.１ｇ，１１mmol）と共に２５℃で１２時間撹拌した。真空下で濃縮し、シリカ上のクロマトグラフィ（ヘプタン中の０〜５０％ＥｔＯＡｃ）により４.６ｇを得た。１.６ｇを、ＣＨ₂Ｃｌ₂中ＴＦＡ（１:１）で処理し、真空下で濃縮して、ＣＨ₂Ｃｌ₂／Ｋ₂ＣＯ₄（水性）で抽出し、乾燥（Ｋ₂ＣＯ₄）し、そして真空下で蒸発させて中間体２を得た（１.３ｇ，中間体１から８１％）。MS (ES) 428.21 (MH+).
【実施例１】
【００２２】
４−[１−（４−ベンジル−ピペラジン−１−イル）−１−（４−フルオロ−３−ヒドロキシ−フェニル）−メチル]−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−ベンズアミド
中間体２（０.４１ｇ，０.９６mmol）及びトリエチルアミン（０.２０ｍＬ，１.４mmol）をＭｅＣＮ（１０ｍＬ）に溶解した。臭化ベンジル（０.１４ｍＬ，１.１mmol）を加え、２５℃で撹拌した。１２時間後、溶液を濃縮し、逆相クロマトグラフィ（LiChroprep RP-18，水中の１０〜８０％ＭｅＣＮ，０.１％ＴＦＡ）によって精製した。ＣＨ₂Ｃ1₂／Ｋ₂ＣＯ₄（水性）で抽出し、乾燥（Ｋ₂ＣＯ₄）し、そして真空下で蒸発させた後、０.５３ｇの遊離塩基を得た。−７８℃でＣＨ₂Ｃｌ₂中の三臭化ホウ素（４当量，ＣＨ₂Ｃｌ₂中の１Ｍ溶液）で処理し、水を加え真空下で濃縮し、逆相クロマトグラフィにより、実施例１をトリフルオロアセテート（０.３５ｇ，５０％）として得た。MS (ES) 504.22 (MH+). IR (NaCl) 3222, 1677, 1592, 1454, 1346, 1201, 1135(cm-1). ¹H NMR(CD₃OD) δ= 1.1, 1.5(m, 12H), 2.3 (m, 3H), 2.9-3.8 (m, 7H), 4.33 (s, 2H), 4.75 (s, 1H), 6.60 (m, 1H), 6.83 (m, 1H), 6.94 (m,1H), 7.24 (d, J= 8Hz, 2H), 7.47 (m, 7H). C₃₁H₃₈FN₃O₂×0.8C₄H₂F₆O₄についての分析計算値 C: 59.87, H: 5.82, N: 6.12. 実測値 C: 60.06, H: 5.83, N: 6.19.
【実施例２】
【００２３】
４−[１−（４−フルオロ−３−ヒドロキシ−フェニル）−１−（４−チオフェン−３−イルメチル−ピペラジン−１−イル）−メチル]−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−ベンズアミド
中間体２（０.４３ｇ，１.０mmol）を、３−チオフェン−カルボキシアルデヒド（０.１１ｍＬ，１.２mmol）及びＨＯＡｃ（５７μｌ，１.０mmol）と共にＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解し、そして１時間撹拌した。ナトリウムシアノボロヒドリド（６３ｍｇ，１.０mmol）をひとかたまりで６時間かけて加え、反応物を２５℃でさらに１２時間撹拌し、その後、真空下で濃縮し、抽出（ＣＨ₂Ｃｌ₂／Ｋ₂ＣＯ₃(水性)）して後処理した。実施例１のように逆相クロマトグラフィによって精製し、遊離塩基として０.３２ｇ（０.６２mmol）を得た。実施例１のように三臭化ホウ素で処理し、そしてクロマトグラフィによりトリフルオロアセテートとして実施例２（０.２０ｇ，２６％）を得た。MS (ES) 510.17 (MH+).
IR (NaCl) 3281, 1674, 1606, 1454, 1346, 1200, 1135 (cm-1). ¹H NMR (CD₃OD) δ=1.1, 1.5 (m, 12H), 2.30 (m, 2H), 2.9-3.7 (m, 10H), 4.37 (s, 2H), 4.75 (s,1H), 6.60 (m, 1H), 6.84 (m, 1H), 6.94 (m, 1H), 7.18 (m, 1H), 7.25, 7.48 (2d, J=8.0Hz, 4H), 7.55 (m, 1H), 7.65 (m, 1H). C₂₉H₃₆FN₃O₂S x0.8 C₄H₂F₆O₄ x0.5 H₂Oについての分析計算値 C: 55.16, H: 5.55, N: 5.99. 実測値 C: 55.12, H: 5.39, N: 6.07.
【実施例３】
【００２４】
４−｛１−（４−フルオロ−３−ヒドロキシ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルメチル）−ピペラジン−１−イル]−メチル｝−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−ベンズアミド
実施例２と同じ手順を用いて、２−イミダゾール−カルボキシアルデヒド（０.１０ｇ，１.１mmol）と反応させ、続いて三臭化ホウ素（６当量）で処理してトリフルオロアセテートとして実施例３（０.１８ｇ，２５％）を得た。MS (ES) 494.23 (MH+). IR (NaCl) 3123, 1673, 1592, 1454, 1350, 1201, 1135 (cm-1). ¹H NMR (CD₃OD) δ=1.1, 1.5 (m, 12H), 2.7-3.8 (m, 10H), 3.95 (s, 2H), 5.20 (m, 1H), 6.70 (m, 1H), 6.94 (m, 1H), 7.02 (m, 1H), 7.32, 7.58 (2d, J = 8.0Hz, 4H), 7.46 (s, 1H). C₂₈H₃₆FN₅O₂x 1.2 C₄H₂F₆O₄x0.7 H₂Oについての分析計算値 C: 50.51, H: 5.14, N: 8.98. 実測値 C: 50.44, H: 5.18, N: 9.11.
【００２５】
【化１９】

【００２６】
中間体３：４−[ヒドロキシ(３−ニトロフェニル)メチル]−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルベンズアミド
中間体１の方法を用いたが、ｎ−ＢｕＬｉを添加した後、溶液を、−７８℃でトルエン／ＴＨＦ（約１：１，１００ｍＬ）中の３−ニトロベンズアルデヒド（２.７ｇ，１８mmol）の溶液中にカニューレを通して入れた。後処理してクロマトグラフィにより中間体３（２.４ｇ，３７％）を得た。¹H NMR (CDCl₃) δ1.1-1.7 (m, 12H), 3.90 (d, J=3.5 Hz, 1H), 3.4-3.9 (m, 2H), 5.91 (s, J=3.5Hz,1H), 7.27, 7.35 (2d, J= 8Hz; 4H), 7.51 (m, 1H), 7.71 (m, 1H), 8.13 (m, 1H), 8.30 (s, 1H).
【００２７】
中間体４：Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−４−［（３−ニトロフェニル）(１−ピペラジニル)メチル］ベンズアミド
中間体２と同じ手順を用いて、中間体３（２.４ｇ，６.７mmol）からＢｏｃ−保護された中間体４（２.８３ｇ，８１％）を得た。ＴＦＡ処理して中間体４を定量的に得た。MS (ES) 425.23 (MH+).
【実施例４】
【００２８】
４−[１−（３−アミノ−フェニル）−１−（４−ベンジル−ピペラジン−１−イル）メチル]−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−ベンズアミド
実施例１のように、７（０.４０ｇ，０.９４mmol）を臭化ベンジルと反応させ、続いてＥｔＯＨ（２５ｍＬ）及び２ＮＨＣｌ（１.２ｍＬ，２.４mmol）中の１０％Ｐｄ／Ｃ（５０ｍｇ）を用いて２時間水素化（Ｈ₂，４０ｐｓｉ）した。実施例１と同じ条件を用いて逆相クロマトグラフィにより精製してトリフルオロアセテートとして実施例４（０.２０ｇ，３０％）を得た。MS (ES) 485.40 (MH+). IR(NaCl) 3414, 1673, 1605, 1455, 1345, 1201, 1134 (cm-1). ¹H NMR(CD₃OD) δ=1.1, 1.5 (m, 12H), 2.3 (m, 2H), 2.9-3.8 (m, 8H), 4.31 (s, 2H), 4.47 (s, 1H), 7.02 (m, 1H), 7.21-7.52 (m, 12H). C₃₁H₄₀N₄O×1.2 C₄H₂F₆O₄×0.5H₂Oについての分析計算値 C: 56.04, H: 5.70, N: 7.30. 実測値 C: 56.06, H: 5.67, N: 7.41.
【実施例５】
【００２９】
４−[１−（３−アミノ−フェニル）−１−（４−チオフェン−３−イルメチル−ピペラジン−１−イル）−メチル]−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−ベンズアミド
実施例２のように、中間体４（０.４０ｇ，０.９４mmol）を３−チオフェン−カルボキシアルデヒドと反応させ、続いてＥｔＯＨ（２５ｍＬ）及び２ＮＨＣｌ（１.０ｍＬ，２.０mmol）中の１０％Ｐｄ／Ｃ（５０ｍｇ）を用いて１２時間水素化（Ｈ₂，３０ｐｓｉ）した。実施例１と同じ条件を用いて逆相クロマトグラフィにより精製してジトリフルオロアセテートとして実施例５（０.１３ｇ，２０％）を得た。MS (ES) 491.28 (MH+). IR (NaCl) 3408, 1673, 1605, 1455, 1345, 1201, 1134 (cm-1).¹H NMR(CD₃OD) δ= 1.1, 1.5 (m, 12H), 2.3 (m, 2H), 2.9-3.8 (m, 8H), 4.35 (s, 2H), 4.44 (s, 1H), 6.98 (m, 1H), 7.16-7.32 (m, 6H), 7.49 (d, J=8Hz, 2H), 7.55 (m,1H), 7.64 (m, 1H). C₂₉H₃₈N₄OS×1.3 C₄H₂F₆O₄×0.6 H₂Oについての分析計算値 C: 51.48, H: 5.28, N: 7.02. 実測値 C: 51.51, H: 5.20, N: 7.01.
【実施例６】
【００３０】
４−｛１−（３−アミノ−フェニル）−１−[４−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルメチル）−ピペラジン−１−イル]−メチル｝−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−ベンズアミド
実施例２と同じ手順を用いて、中間体４を２−イミダゾール−カルボキシアルデヒド（０.１０ｇ，１.１mmol）と反応させ、続いて水素化してジトリフルオロ酢酸塩として実施例６（４５ｍｇ，７％）を得た。MS (ES) 475.30 (MH+). IR (2x TFA, NaCl) 3351, 1674, 1621, 1455, 1349, 1202, 1134 (cm-1). ¹H NMR(2xTFA, CD₃OD) δ 1.1, 1.5 (m, 12H), 2.9-3.8 (m, 8H), 4.35 (s, 2H), 4.44 (s, 1H), 6.98 (m, 1H), 7.16-7.32 (m, 6H), 7.49 (d, J= 8Hz, 2H), 7.55 (m, 1H), 7.64 (m, 1H). C₂₈H₃₈N₆O×1.6 C₄H₂F₆O₄×0.8 H₂Oについての分析計算値 C: 48.39, H: 5.05, N: 9.84. 実測値 C: 48.43, H:5.06, N: 9.85.
【００３１】
【化２０】

【００３２】
中間体５：Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−４−[｛３−[(メチルスルホニル)アミノ]フェニル｝(１−ピペラジニル)メチル]ベンズアミド
上記中間体４について記載されたように、中間体３からＢｏｃ−保護された中間体４を得た。Ｂｏｃ−保護された中間体４（１.２１ｇ，２.３mmol）を、ＡｃＯＨ（２５ｍＬ）中１０％Ｐｄ／Ｃ（１５０ｍｇ）を用いてＨ₂下、３０ｐｓｉで１２時間水素化した。真空下で蒸発させ、ＣＨ₂Ｃｌ₂／Ｋ₂ＣＯ₄（水性）で抽出し、中間体アニリン１.１ｇ（２.３mmol）を得、これをＭｅＣＮ／ＣＨ₂Ｃｌ₂（１：１，１０ｍＬ）に溶解した。Ｅｔ₃Ｎ（０.４８ｍＬ，３.４mmol）、次いでメタンスルホニル無水物（０.４１ｇ，２.４mmol）を０℃で加えた。室温に加温した後、反応物をＣＨ₂Ｃｌ₂／食塩水で抽出して後処理した。シリカ上のクロマトグラフィ（０〜５％ＭｅＯＨ／ＣＨ₂Ｃｌ₂）により精製してＢｏｃ−保護された中間体５（１.３ｇ，９７％）を得た。ＣＨ₂Ｃ1₂中のＴＦＡで処理して中間体５を定量的に得た。MS (ES) 473.16 (MH+).
【実施例７】
【００３３】
Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−４−[１−（３−メタンスルホニルアミノ−フェニル）−１−（４−チオフェン−３−イルメチル−ピペラジン−１−イル）−メチル]−ベンズアミド
実施例２と同様の還元アミノ化法により、中間体５（０.２０ｇ，０.４３mmol）からジトリフルオロ酢酸塩として実施例７（９０ｍｇ，２６％）を得た。ＣＨ₂Ｃｌ₂／Ｋ₂ＣＯ₄（水性）を用いて遊離塩基を抽出し、２当量のＨＣｌ（水性）で処理して二塩酸塩を得た。MS (ES) 569.21 (MH+). IR(遊離塩基, NaCl) 1604, 1455, 1340, 1151 (cm-1). ¹H NMR(遊離塩基, CDCl₃) δ= 0.9-1.7 (m, 12H), 2.5 (m, 8H), 2.85 (s, 3H), 3.55 (s, 2H), 3.8 (m, 2H), 4.22 (s, 1H), 7.00-7.40 (m, 12H). C₃₀H₄₀N₄O₃S₂×2.6 HClについての分析計算値 C: 54.30, H: 6.47, N: 8.44. 実測値 C: 54.33, H: 6.20, N: 8.32.
【実施例８】
【００３４】
４−（[４−（３−フリルメチル）−１−ピペラジニル]｛３−[(メチルスルホニル)アミノ]フェニル｝−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−ベンズアミド
中間体７と同じ手順を用いて、中間体５（０.２１ｇ，０.４５mmol）から遊離塩基として実施例８（８０ｍｇ，３２％）を得た。MS (ES) 553.23 (MH+). IR (遊離塩基, NaCl) 1604, 1455, 1340, 1151 (cm-1).¹H NMR (遊離塩基, CDCl₃) δ=1.0-2.6(m, 20H), 2.91 (s, 3H), 3.40 (s, 2H), 4.22 (s, 1H), 6.39 (s, 1H), 7.06-7.42 (m, 11H). C₃₀H₄₀N₄O₄S × 2.8 HClについての分析計算値 C: 55.03, H: 6.59, N: 8.56. 実測値 C: 54.93, H: 5.93, N: 8.49.
【００３５】
【化２１】

【実施例９】
【００３６】
４−｛(３−アミノフェニル)［４−(３−チエニルメチル)−１−ピペラジニル］メチル｝−Ｎ,Ｎ−ジエチルベンズアミド
Ｎ,Ｎ−ジエチル−４−［（３−ニトロフェニル）(１−ピペラジニル)メチル］ベンズアミド（スキーム２の中間体(４)と同様に製造）（０.８５ｇ，２.１mmol）を３−チオフェンカルボキシアルデヒド（０.４０ｍＬ，４.３mmol）及びＨＯＡｃ（６０μｌ，１.０mmol）と共にＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解し、１時間撹拌した。ナトリウムシアノボロヒドリド（１３５ｍｇ，２.１mmol）をひとかたまりで６時間かけて加え、反応物をさらに２５℃で１２時間撹拌し、その後、真空下で濃縮し、抽出（ＣＨ₂Ｃｌ₂／Ｋ₂ＣＯ₃(水性)）によって後処理した。シリカ上のクロマトグラフィにより精製して３−チエニルメチル誘導体（０.４５ｇ，４３％）を得た。生成物（０.３０ｇ，０.６１mmol）を水素化し、逆相クロマトグラフィによりトリス−トリフルオロアセテートとして標題化合物（０.１７ｇ，３５％）を得た。MS (ES) 463.34 (MH+). IR (NaCl) 3418, 1673, 1600, 1461, 1200, 1135 (cm-1). ¹H NMR (CD₃OD) δ= 1.17, 1.31 (m, 6H), 2.45 (m, 2H), 3.11 (m, 2H), 3.24-3.66 (m, 10H), 4.47 (s, 2H), 4.62 (s, 1H), 7.21 (m, 1H), 7.31 (m, 1H), 7.39-7.56 (m, 5H), 7.61-7.68 (m, 3H), 7.77 (m, 1H).
【実施例１０】
【００３７】
４−[（３−アミノフェニル）(４−ベンジル−１−ピペラジニル)メチル]−Ｎ,Ｎ−ジエチルベンズアミド
Ｎ,Ｎ−ジエチル−４−[（３−ニトロフェニル）(１−ピペラジニル)メチル]ベンズアミド（１.７ｇ，４.３mmol）及びトリエチルアミン（１.２ｍＬ，８.６mmol）をＭｅＣＮ（１０ｍＬ）に溶解した。臭化ベンジル（０.５６ｍＬ，４.７mmol）を２５℃で撹拌しながら加えた。１２時間後、溶液を真空下で濃縮した。抽出（ＣＨ₂Ｃ1₂／Ｋ₂ＣＯ₃(水性)）し、シリカ上のクロマトグラフィにより精製してベンジル化生成物（１.４ｇ，２.９mmol）を得た。ＥｔＯＨ（２５ｍＬ）及び２ＮＨＣｌ(２.５ｍＬ，５mmol)中の１０％Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）を用いて４時間水素化（Ｈ₂，４０ｐｓｉ）し、続いて真空下で濃縮し、逆相クロマトグラフィによりトリス−トリフルオロアセテート（０.９ｇ，２６％）として、標題化合物を得た。MS (ES) 457.26 (MH+). IR (NaCl) 3422, 1672, 1603, 1458, 1209, 1133 (cm-1). ¹H NMR(CD₃OD) δ=1.1, 1.2 (m, 6H), 2.3 (m,2H), 2.9-3.6 (m, 10H), 4.33 (s, 2H), 4.49 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 7.01 (m, 1H), 7.24-7.34 (m, 5H), 7.47 (m, 5H), 7.52 (d, J =7.5 Hz, 2H).
【実施例１１】
【００３８】
４−（（４−ベンジル−１−ピペラジニル）｛３−［(メチルスルホニル)アミノ］フェニル｝メチル）−Ｎ,Ｎ−ジエチルベンズアミド
実施例１０の生成物（０.３５ｇ，０.７６mmol）及びトリエチルアミン（０.１２ｍＬ，０.８４mmol）をＭｅＣＮ（１０ｍＬ）に溶解し、メタンスルホン酸無水物（０.１４ｇ，０.８４mmol）を０℃で加えた。２５℃で１０分撹拌した後、溶液を真空下で濃縮し、逆相クロマトグラフィによって精製し、ビス−トリフルオロアセテート（０.２３ｇ，４０％）として標題化合物を得た。MS (ES) 535.21 (MH+). IR (NaCl) 3479, 1673, 1604, 1458, 1337, 1200, 1150(cm-1). ¹H NMR(CD₃OD) δ= 1.18, 1.31 (m,6H), 2.41 (m, 2H), 2.98 (s, 3H), 3.13 (m, 2H), 3.28-3.65 (m, 8H), 4.44 (s, 2H), 4.57 (s, 1H), 5.57 (d, J=2Hz, 2H), 7.15 (m, 1H), 7.30 (m, 1H), 7.37 (m, 1H), 7.42 (m, 2H), 7.54-7.60 (m, 6H), 7.63 (m, 2H).
【００３９】
医薬組成物
本発明による新規な化合物は、経口的に、筋内に、皮下に、局所的に、鼻腔内に、腹膜内に、胸腔内に、静脈内に、硬膜外に、髄膜下に、脳室内に、そして関節への注射によって投与することができる。
好ましい投与経路は、経口的、静脈内又は筋内である。
用量は、投与経路、疾患の重さ、患者の年齢及び体重並びに個々の処方計画及び特定の患者にとって最適な用量レベルを決定する時に主治医によって通常考慮される他の因子に左右される。
【００４０】
本発明の化合物から医薬組成物を製造する際、不活性の医薬上許容しうる担体は、固体又は液体であることができる。固形製剤には、散剤、錠剤、分散性顆粒剤、カプセル剤、カシェ剤及び坐剤が含まれる。
また、固体担体は、希釈剤、着香剤、可溶化剤、潤滑剤、懸濁化剤、結合剤又は錠剤崩壊剤として作用することができる１つ以上の物質であることができ、それはまたカプセル化物質であってもよい。
散剤では、担体は微粉砕された活性成分との混合物中にある微粉砕された固形物である。錠剤では、活性成分を、必要な結合性を有する担体と適切な比率で混合して所望の形状及びサイズに成形する。
坐剤組成物を製造するには、最初に、低融点ロウ、例えば脂肪酸グリセリド及びカカオ脂の混合物を溶融し、活性成分を、例えば撹拌によってその中に分散させる。次に、溶融した均質な混合物を、都合のよいサイズの型に注ぎ、冷やして凝固させる。
【００４１】
適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ラクトース、砂糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、トラガカンタ、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ロウ、カカオ脂、等である。
【００４２】
塩には、医薬上許容しうる塩が含まれるが、これに限定されるものではない。本発明の範囲内の医薬上許容しうる塩の例には、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、炭酸水素塩、酒石酸水素塩、臭化物、酢酸カルシウム、カムシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストレート、エシル酸塩、フマル酸塩、グルカプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレソルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエート、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、臭化メチル、硝酸メチル、硫酸メチル、粘液酸塩、ナプチル酸塩、硝酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トリエチオジド、ベンザチン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン、プロカイン、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム及び亜鉛が含まれる。本発明の範囲内の医薬上許容しえない塩の例には、ヨウ化水素酸塩、過塩素酸塩、テトラフルオロホウ酸塩が含まれる。医薬上許容しえない塩は、それらの有益な物理的及び／又は化学的性質、例えば結晶化度のため有用である可能性がある。
【００４３】
好ましい医薬上許容しうる塩は、塩酸塩、硫酸塩及び酒石酸水素塩である。塩酸塩及び硫酸塩は、特に好ましい。
組成物なる用語は、カプセル供給担体としてカプセル化物質を用いた活性成分の製剤を含むものとし、その中で活性成分（他の担体と共に又はなしで）は担体によって囲まれ、担体と会合している。同様に、カシェ剤が含まれる。
錠剤、散剤、カシェ剤及びカプセル剤は、経口投与に適切な固体剤形として使用することができる。
【００４４】
組成物の液体には、液剤、懸濁剤及び乳剤が含まれる。活性化合物の滅菌水又は水−プロピレングリコール溶液は、非経口投与に適切な液体製剤の例として記載することができる。また、液体組成物は、水性ポリエチレングリコール溶液中の液剤として処方することができる。
経口投与の水性液剤は、活性成分を水中に溶解し、所望の適切な着色剤、着香剤、安定剤及び増粘剤を加えることによって製造することができる。経口用の使用について水性懸濁剤は、微粉砕された活性成分を、水中で、粘性物質、例えば天然の合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、及び医薬製剤技術で知られている他の懸濁化剤と共に分散させることによって製造することができる。
【００４５】
好ましくは、医薬組成物は、単位剤形である。このような形態では、組成物は適当な量の活性成分を含む単位用量に分割される。単位剤形は、パック製剤、離散量の製剤を含むパッケージ、例えばパケット単位にされた錠剤、カプセル剤及びバイアル又はアンプル中の散剤であることができる。また、単位剤形は、カプセル、カシェ剤又は錠剤それ自体であることができるし、又は適当な数のこれらのいずれかのパック形態であることができる。
【００４６】
生物学的評価
生体外モデル
細胞培養
Ａ．クローニングされたヒトμ、δ及びκ受容体及びネオマイシン耐性を発現するヒト２９３Ｓ細胞を、３７℃及び５％ＣＯ₂で、カルシウムを含まないＤＭＥＭ１０％ＦＢＳ、５％ＢＣＳ、０.１％Pluronic Ｆ−６８及び６００μｇ／ｍｌのジェネチシンを含む振盪フラスコ中の懸濁液中で成長させた。
Ｂ．マウス及びラット脳を計量し、氷冷ＰＢＳ（２.５ｍＭＥＤＴＡを含む、ｐＨ７.４）中ですすいだ。ポリトロンを用いて、氷冷溶解緩衝液（５０ｍＭトリス，ｐＨ７.０，２.５ｍＭＥＤＴＡ、使用直前に、フェニルメチルスルホニルフルオリドを、ＤＭＳＯ：エタノール中の０.５ＭｍＭ〜０.５Ｍのストックに加えた）中で、脳を１５秒間（マウス）又は３０秒間（ラット）均一化した。
【００４７】
膜調製
細胞をペレット化し、溶解緩衝液（５０ｍＭトリス，ｐＨ７.０，２.５ｍＭＥＤＴＡ，使用直前にＰＭＳＦを、エタノール中０.１ｍＭ〜０.１Ｍのストックに加えた）中で再懸濁し、氷上で１５分間インキューベートし、次いでポリトロンで３０秒間均一化した。懸濁液を４℃で１０分間、１０００ｇ（最大）で遠心した。上澄液を氷上で保存し、ペレットを再懸濁し、前と同様に遠心した。両遠心からの上澄液を合わせ、４６，０００ｇ(最大)で３０分間遠心した。ペレットを冷トリス緩衝液（５０ｍＭトリス／Ｃｌ，ｐＨ７.０）中で再懸濁し、再び遠心した。最終的なペレットを、膜緩衝液（５０ｍＭトリス，０.３２Ｍスクロース，ｐＨ７.０）中で再懸濁した。ポリプロピレン管中のアリコート（１ｍｌ）をドライアイス／エタノール中で冷凍し、使用するまで−７０℃で保存した。硫酸ドデシルナトリウムを用いて改良されたLowryアッセイによってタンパク質濃度を測定した。
【００４８】
結合アッセイ
膜を３７℃で解凍し、氷冷し、２５ゲージニードルに３回通過させ、そして結合緩衝液（５０ｍＭのトリス，３ｍＭのＭｇＣｌ₂，１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ（Sigma A-7888），ｐＨ７.４、これを０.２２ｍフィルタで濾過した後、４℃で保存し、これに新しく５μｇ／ｍｌのアプロチニン，１０μＭのベスタチン、１０μＭのジプロチンを加えた、ＤＴＴは含まない）中に希釈した。適当な放射性リガンド１００μｌ及び種々の濃度の試験化合物１００μｌを含む氷冷した１２×７５ｍｍのポリプロピレン管に、１００μｌのアリコートを加えた。全結合（ＴＢ）及び非特異的（ＮＳ）結合を、それぞれ１０μＭナロキソンの非存在下及び存在下で測定した。管をかき混ぜ、２５℃で６０〜７５分間インキューベートし、この後、内容物を急速に真空濾過し、少なくとも２時間、０.１％のポリエチレンイミン中に前もって浸したＧＦ／Ｂフィルタ(Whatman)を通して、約１２ｍｌ／管の氷冷洗浄緩衝液（５０ｍＭのトリス，ｐＨ７.０，３ｍＭのＭｇＣｌ₂）により洗浄した。６〜７ｍｌのシンチレーション液を含むミニバイアル中に少なくとも１２時間フィルタを浸した後にベータカウンターを用いてフィルタに保持された放射活性（ｄｐｍ）を測定した。アッセイを９６穴深型プレートで行う場合、９６箇所のＰＥＩ浸漬ユニフィルタで濾過し、これを３×１ｍｌの洗浄緩衝液で洗浄し、オーブン中５５℃で２時間乾燥した。フィルタープレートは、５０μｌのＭＳ−２０シンチレーション液／穴を加えた後にTopCount (Packard)で計数した。
【００４９】
機能性アッセイ
化合物の作動薬活性は、化合物受容体複合体が、ＧＴＰと、受容体が結合するＧ−タンパク質との結合を活性化する程度を測定することによって評価した。ＧＴＰ結合アッセイでは、ＧＴＰ[γ]³⁵Ｓを、試験化合物及びクローニングされたヒトオピオイド受容体を発現するＨＥＫ−２９３Ｓ細胞からの膜、又は均一化されたラット及びマウス脳からの膜と結合させる。作動薬は、これらの膜中のＧＴＰ[γ]³⁵Ｓの結合を刺激する。化合物のＥＣ₅₀及びＥ_max値は、用量応答曲線から決定される。作動薬活性がδ受容体を介して仲介されることを確認するため、δ拮抗薬ナルトリンドールによる用量応答曲線の右シフトを実施した。
【００５０】
ラット脳ＧＴＰ法
ラット脳膜を３７℃で解凍し、２５ゲージブラントエンドニードルに３回通過させ、ＧＴＰγＳ結合液（５０ｍＭ Hepes，２０ｍＭのＮａＯＨ，１００ｍＭのＮａＣｌ，１ｍＭのＥＤＴＡ，５ｍＭのＭｇＣｌ₂，ｐＨ７.４、新たな１ｍＭのＤＴＴ，０.１％のＢＳＡを加えた）で希釈した。最終的に１２０μＭのＧＤＰを膜希釈物に加えた。適当な量の膜タンパク質（２０μｇ／穴）及び１０００００〜１３００００ｄｐｍのＧＴＰγ³⁵Ｓ／穴（０.１１〜０.１４ｎＭ）を用いて３００μｌ中で実施した１０点用量応答曲線から化合物のＥＣ₅₀及びＥ_maxを評価した。刺激された結合の基底及び最大を３μＭのＳＮＣ−８０の非存在下及び存在下で測定した。
【００５１】
データ分析
特異的結合（ＳＢ）をＴＢ−ＮＳとして算出し、そして種々の試験化合物の存在下でのＳＢを、対照ＳＢのパーセンテージとして示した。特異的に結合した放射性リガンドの置換におけるリガンドのＩＣ₅₀及びヒル係数（ｎ_H）の値は、対数プロット又は曲線適合プログラム、例えばLigand、GraphPad Prism、SigmaPlotもしくはReceptorFitから算出した。Ｋ_iの数値は、Cheng-Prussoff式から算出した。ＩＣ₅₀、Ｋ_i及びｎ_Hの平均±Ｓ.Ｅ.Ｍ.値を、少なくとも３つの置換曲線で試験したリガンドについて報告した。本発明の化合物の生物活性を表２に示す。
【００５２】
【表１】

【００５３】
受容体飽和実験
予想されるＫ_δ値の０.２〜５倍の範囲の濃度（必要な放射性リガンドの量が可能ならば、１０倍まで）で適当な放射性リガンドを用いて細胞膜における結合アッセイを実施することによって放射性リガンドのＫ_δ値を測定した。特異的な放射性リガンド結合は、ｐmole／ｍｇの膜タンパク質として示した。個々の実験からのＫ_δ及びＢ_maxの値は、ワンサイトモデル(one−site model)に従って特異結合（Ｂ）対個体からのｎＭ遊離(Ｆ)放射性リガンドの非線形適合から得た。
【００５４】
Von Frey試験を用いた機械性異痛の測定
試験は、Chaplan等（１９９４）に記載された方法を用いて０８:００〜１６:００時の間で実施した。脚へのアクセス可能なワイヤーメッシュボトム上のプレキシガラスケージ中にラットを入れ、１０〜１５分間、順化させた。試験部分は、左後脚の足底中央であり、感受性の低い足の肉趾を避けた。硬さが対数的に徐々に増加する一連の８種のVon Frey毛（０.４１、０.６９、１.２０、２.０４、３.６３、５.５０、８.５１及び１５.１４グラム；Stoelting、III、ＵＳＡ）を脚に接触させた。von Frey毛は、脚に対してわずかな反りが生じるのに十分な力で、足底表面に対して垂直にメッシュ床の下側から適用し、約６〜８秒間保持した。脚を急激に引っ込める場合、正の反応と記載した。また、毛を除去して直ちに畏縮するのも正の反応とみなした。歩行はあいまいな反応とみなし、このような場合、刺激を繰り返した。
【００５５】
試験プロトコール
ＦＣＡ処理した群について、手術後１日に動物を試験した。５０％の引っ込め閾値は、Dixon (1980)のアップ−ダウン法(up−down method)を用いて測定した。試験は、一連の中程にあたる２.０４ｇの毛で開始した。上り又は下りにかかわらず、刺激は常に連続的なやり方で与えた。最初に選択された毛に対して脚の引っ込め反応がなければ、より強い刺激を与え；脚を引っ込めた場合には、次により弱い刺激を選んだ。この方法による最適閾値の算出には５０％閾値付近で６つの反応が必要であり、これらの６つの反応の計数は、反応の最初の変化が生じた時、例えば閾値が最初に超えた時に開始した。閾値が刺激の範囲外になった場合は、それぞれ１５.１４（通常の感度）又は０.４１（最大異痛）の値にした。正及び負の反応の得られたパターンを、表記法を用いて表にした。Ｘ＝引っ込めなかった；Ｏ＝引っ込めた、そして５０％の引っ込め閾値は、式：
５０％ｇ閾値＝１０^(Xf+k ^δ ⁾／１０,０００
を用いて内挿した。式中、Ｘｆ＝使用する最後のvon Frey毛の値（ログ単位）；ｋ＝正／負の反応パターンについての表の数値（Chaplan等(1994)）；そしてδ＝刺激間の平均の差分（ログ単位）である。ここでδ＝０.２２４。
【００５６】
Von Frey閾値は、Chaplan等1994に従って最大可能な効果（％ＭＰＥ）のパーセントに変換した。以下の式は、％ＭＰＥを計算するために用いた：
【数１】

【００５７】
試験物質の投与
von Frey試験前に、試験物質をラットに注射（皮下に、腹膜内に、静脈内に又は経口的に）し、試験化合物の投与間の時間及びvon Frey試験は、試験化合物の性質に応じて変更した。
【００５８】
身もだえ（writhing）試験
酢酸は、マウスの腹膜内に投与した時に腹筋を収縮させる。次に典型的なパターンでは、これはマウスの身体に広がる。鎮痛薬を投与した時には、この記載した運動はあまり頻繁に観察されず、その薬物は潜在的に良好な候補物質として選ばれる。
以下の要素：動物が身動きしない；下背部をわずかに下げる；両脚の足底状況が観察可能である、があるときにのみ完全な及び典型的な身もだえ反射とみなした。本アッセイでは、本発明の化合物は、１〜１００μmol／ｋｇの経口投薬後、身もだえ反応の有意な阻害を示した。
【００５９】
（ｉ）液剤調製
酢酸（ＡｃＯＨ）：０.６％ＡｃＯＨの最終濃度で２０ｍｌの最終体積にするため１２０μｌの酢酸を１９.８８ｍｌの蒸留水に加えた。次に、液剤を混合し（かきまぜ）、注射の準備をした。
化合物（薬物）：各化合物を製造し、標準方法に従って最も適切なビヒクル中に溶解した。
【００６０】
（ii) 液剤投与
化合物（薬物）を、試験前２０分、３０分又は４０分に（化合物の種類及びその特性による）、１０ｍｌ／ｋｇ（平均マウス体重を考慮して）で経口的に、腹膜内に（ｉ.ｐ.）皮下に（ｓ.ｃ.）又は静脈内に（ｉ.ｖ.）投与した。化合物を中枢に供給する時は、心室内に（ｉ.ｃ.ｖ.）又は髄膜下に（ｉ.ｔ.）、５μｌの体積を投与した。
試験直前に１０ｍｌ／ｋｇ（平均マウス体重を考慮して）で、ＡｃＯＨを２箇所に腹膜内（ｉ.ｐ.）投与した。
【００６１】
（iii）試験
動物（マウス）を２０分間観察し、事象（身もだえ反射）数を記し、実験終了後にまとめた。接触床を備えた個々の「シューボックス」ケージ中にマウスを保持した。通常、合計４匹のマウスを同時に観察した（一つの対照及び３つの用量の薬物）。
不安症及び不安症に類似の適応症について、ラットにおけるgeller−seifter葛藤試験で有効性を確認した。
機能性胃腸障害の適応症について、Coutinho SV 等, in American Journal of Physiology-Gastrointestinal & Liver Physiology. 282(2):G307-16, 2002年2月に記載されたアッセイではラットにおける有効性を確認することができる。

Claims

式Ｉ

（式中、Ｒ¹は、
（ｉ）フェニル；

（ii）ピリジニル

（iii）チエニル

（iv）フラニル

（ｖ）イミダゾリル

（vi）トリアゾリル

（vii）ピロリル

（viii）チアゾリル

（ix）ピリジル−Ｎ−オキシド

のいずれか一つから選ばれ、その際、Ｒ¹複素芳香族環は、それぞれ場合により独立して直鎖及び分枝Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ハロゲン化Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、ＮＯ₂、ＣＦ₃、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、クロロ、フルオロ、ブロモ及びヨードから選ばれる１、２又は３個の置換基によってさらに置換されていてもよく；
Ｒ²は、独立してエチル及びイソプロピルから選ばれ；
Ｒ³は、独立して水素及びフルオロから選ばれ；
Ｒ⁴は、独立して−ＯＨ、−ＮＨ₂およびＮＨＳＯ₂Ｒ⁵から選ばれ；そして
Ｒ⁵は、独立して水素、−ＣＦ₃及びＣ₁−Ｃ₆アルキルから選ばれるが、但し、Ｒ²がエチルであり、Ｒ³が水素である時は、Ｒ⁴は、−ＯＨであることができない）の化合物若しくはその塩又は個々の鏡像異性体及びその塩。
Ｒ¹が、フェニル、ピロリル、フラニル、チエニル又はイミダゾリルであり；Ｒ²は、エチル又はイソプロピルであり；Ｒ³は、水素又はフルオロであり；Ｒ⁴は、−ＮＨ₂若しくは−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁵であり；そしてＲ⁵は、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルである請求項１記載の化合物。
Ｒ¹が、フェニル、ピロリル、フラニル、チエニル又はイミダゾリルであり；Ｒ²は、エチル又はイソプロピルであり；Ｒ³は、水素であり；Ｒ⁴は、−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁵であり；そしてＲ⁵は、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルである請求項１記載の化合物。
複素芳香族環が、ＣＦ₃、メチル、ヨード、ブロモ、フルオロ又はクロロによって置換される請求項１記載の化合物。
複素芳香族環が、メチルによって置換される請求項１記載の化合物。
４−［１−（４−ベンジル−ピペラジン−１−イル）−１−（４−フルオロ−３−ヒドロキシ−フェニル）−メチル]−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−ベンズアミド；
４−［１−（４−フルオロ−３−ヒドロキシ−フェニル）−１−（４−チオフェン−３−イルメチル−ピペラジン−１−イル）−メチル］−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−ベンズアミド；
４−｛１−（４−フルオロ−３−ヒドロキシ−フェニル）−１−｛４−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルメチル）−ピペラジン−１−イル]−メチル｝−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−ベンズアミド；
４−［１−（３−アミノ−フェニル）−１−（４−ベンジル−ピペラジン−１−イル）−メチル］−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−ベンズアミド；
４−［１−（３−アミノ−フェニル）−１−（４−チオフェン−３−イルメチル−ピペラジン−１−イル）−メチル］−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−ベンズアミド；
４−｛１−（３−アミノ−フェニル）−１−［４−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルメチル）−ピペラジン−１−イル］−メチル｝−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−ベンズアミド；
Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−４−［１−（３−メタンスルホニルアミノ−フェニル）−１−（４−チオフェン−３−イルメチル−ピペラジン−１−イル）−メチル］−ベンズアミド；
４−（［４−（３−フリルメチル）−１−ピペラジニル］｛３−［（メチルスルホニル）アミノ］フェニル｝−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−ベンズアミド；
４−｛（３−アミノフェニル）［４−（３−チエニルメチル）−１−ピペラジニル］メチル｝−Ｎ,Ｎ−ジエチルベンズアミド；
４−［（３−アミノフェニル）（４−ベンジル−１−ピペラジニル）メチル]−Ｎ,Ｎ−ジエチルベンズアミド、及び
４−（（４−ベンジル−１−ピペラジニル）｛３−［（メチルスルホニル）アミノ］フェニル｝メチル）−Ｎ,Ｎ−ジエチルベンズアミド
のいずれか一つから選ばれる請求項１記載の化合物。
塩酸塩、二塩酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、ジトリフルオロ酢酸塩又はクエン酸塩の形態の請求項１〜６のいずれか一項記載の化合物。
一般式II

（式中、Ｒ²及びＲ³は請求項１に定義された通りであり、そしてＲ⁴はＯＭｅである）の化合物を標準条件でトリエチルアミンの存在下、アセトニトリル中のＢｏｃ−ピペラジンと反応させ、続いて標準条件下でＢｏｃ保護基を除去して式III

の化合物を得、その後、これを還元条件下で式Ｒ¹−ＣＨＯの化合物を用いてアルキル化し、続いてジクロロメタン中のＢＢｒ₃を用いてメチルエーテルを開裂してＲ⁴が−ＯＨである式Ｉの化合物を得ることからなる、Ｒ⁴が−ＯＨである式Ｉの化合物の製造方法。
一般式IV

（式中、Ｒ²及びＲ³は、請求項１において定義された通りであり、そしてＲ⁴は、ＮＯ₂である）の化合物を、標準条件でトリエチルアミンの存在下、アセトニトリル中のＢｏｃ−ピペラジンと反応させ、続いて標準条件下でＢｏｃ保護基を除去して式Ｖ

の化合物を得、その後、これを還元的条件下で式Ｒ¹−ＣＨＯの化合物を用いてアルキル化し、続いて水素及び木炭上のパラジウムを用いてニトロ基を還元してＲ⁴が−ＮＨ₂である式Ｉの化合物を得ることからなる、Ｒ⁴が−ＮＨ₂である式Ｉの化合物の製造方法。
一般式VI

（式中、Ｒ²及びＲ³は、請求項１に定義された通りであり、そしてＲ⁴はＮＯ₂である）の化合物を、標準条件でトリエチルアミンの存在下、アセトニトリル中のＢｏｃ−ピペラジンと反応させ、続いて触媒として木炭上のパラジウムを用いる水素化分解によりニトロ基を還元し、トリエチルアミンの存在下でジクロロメタン中のメタンスルホニル無水物を用いてメタンスルホニル化し、その後、標準条件下でＢｏｃ保護基を除去して式VII

の化合物を得、その後、これを還元的条件下で式Ｒ¹−ＣＨＯの化合物を用いてアルキル化し、続いて水素及び木炭上のパラジウムを用いてニトロ基を還元してＲ⁴が−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁵である式Ｉの化合物を得ることからなる、Ｒ⁴が−ＮＨＳＯ₂Ｒ⁵である式Ｉの化合物の製造方法。
治療に使用するための請求項１〜７のいずれか一項記載の化合物。
疼痛、不安症又は機能性胃腸障害の治療に使用する医薬を製造するための請求項１記載の式Ｉによる化合物の使用。
活性成分として請求項１記載の式Ｉの化合物を、薬理学上及び医薬上許容しうる担体と共に含む医薬組成物。
請求項１記載の式Ｉの化合物の有効量を疼痛処置の必要な患者に投与する疼痛の治療方法。
請求項１記載の式Ｉの化合物の有効量を機能性胃腸障害の患者に投与する機能性胃腸障害の治療方法。