JP2004534076A - 傷の治療および再上皮形成のための糖蛋白質の使用 - Google Patents

傷の治療および再上皮形成のための糖蛋白質の使用 Download PDF

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Abstract

本発明は、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ によって作り出され、１４％の炭水化物と８６％の蛋白質とから成る糖蛋白質の、局所的使用または粘膜への使用のための薬剤、獣医学、および化粧品組成物の製造における使用、に関する。前記糖蛋白質は、傷の治療および再上皮形成のために使用され、また、皮膚、髪、および爪の手入れのために使用される化粧品組成物の製造において使用される。

Description

【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ａｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３として知られている糖蛋白質の、傷の治療および再上皮形成のための薬剤、獣医学、および化粧品組成物の製造のため（ｆｏｒ ｐｒｅｐａｒｉｎｇ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ，ｖｅｔｅｒｉｎａｒｉａｎ ａｎｄ ｃｏｓｍｅｔｉｃ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄｒｅ−ｅｐｉｔｈｅｌｉｚａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｗｏｕｎｄｓ）の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ａｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３は、南極海から採取されたグラム陰性細菌であるＰｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ａｎｔａｒｔｉｃａ によって作り出される糖蛋白質である。この好気性従属栄養（ｈｅｔｅｒｏｔｒｏｐｉｃ）細菌は、単極（ｓｉｎｇｌｅ ｐｏｌａｒ）鞭毛を有し、また１４％の炭水化物と該炭水化物を完全に包囲している８６％の蛋白質とから成るヘキサ重合（ｈｅｘａｐｏｌｙｍｅｒｉｃ）糖蛋白質（Ａｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３）を作り出す。Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ａｎｔａｒｔｉｃａ は、低温の南極環境に完全に適応しており、高い食塩濃度に耐える。
【０００３】
Ａｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３は、溶液の場合、自己集合により、規則的な集合体となる。この糖蛋白質の溶液の濃度が少しずつ増大すると、該溶液の表面張力が少しずつ低下する。さらに、Ａｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３は、ＷＯ９８／４２７３１号明細書に記載されているように、ホスファチジルコリンリポソームに対して非常に大きな親和性を有し、これを被覆して、界面活性剤たとえばＳＤＳの浸透効果から保護する、ということが知られている。また、Ａｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３は、氷の核生成を誘起し、大きな六角形氷結晶の成長を防ぐ、ということが知られている。これらのデータは、Ａｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３が、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ａｎｔａｒｔｉｃａ の南極生息環境状態への適応に寄与している、ということを示唆している。
【０００４】
角化細胞は、表皮に見られる種類の細胞であり、表皮の最深層を形成している。角化細胞は、増殖とそれ自身の構造の変化とにより外側皮膚層（角質層（ｃｏｒｎｅａｌ ｓｔｒａｔｕｍ））を生成させることにより、皮膚の表面に成熟した角質化細胞の層を生じる。傷の治癒の速さは、特に、角化細胞の増殖と移動との速度によって影響される。これらの過程の一つを促進する要因は、どんなものでも、傷の治療と傷あと残留治癒の過程に対して好ましい。
【発明の開示】
【発明の効果】
【０００５】
ここでの研究の結果として見出された意外なことによれば、１４％の炭水化物と８６％の蛋白質とから成る、Ａｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３として知られているＰｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ａｎｔａｒｔｉｃａ由来の可溶性糖蛋白質は、ヒトの皮膚線維芽細胞の接着を選択的に改善し、ヒト表皮角化細胞の成長を促進する。このように、意外にも、Ａｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３は傷における傷あと形成に好影響を与える良い薬剤である、ということがわかった。
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、薬剤および獣医学の分野での傷の治療と再上皮形成における使用、ならびに化粧品再生手入れ（ｃｏｓｍｅｔｉｃ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ）のための、溶液または許容される製剤（ｇａｌｅｎｉｃａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ）でのＡｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３の使用である。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
Ａｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３の使用濃度は、１００ｍｇ／ｌと１ｆｇ／ｍｌとの間にあり、さらに限定すれば１０ｍｇ／ｍｌと０．１ｎｇ／ｍｌとの間にある。
【０００８】
以上の説明を補完するため、また本発明の特徴のさらに十分な理解のために、以下、説明のためだけに、限定を意図しないいくつかの実施例を示す。本発明が以下で示す具体例によって限定されると考えてはならない。
【実施例１】
【０００９】
体外細胞毒性
【００１０】
実験は、ＷＳＴ−１試験によった。この試験は、フォルマゾン塩を使用して、非放射性（ｎｏｎ−ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ）熱量計試験により、ミトコンドリアデヒドロゲナーゼの活性を測定するものである。いくつかの濃度（１ｍｇ／ｍｌと０．０１μｇ／ｍｌとの間）の糖蛋白質について試験した。ＮａＣｌ ０．０１Ｍ を、負の制御物質（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）として使用し、ＳＤＳ ０．０２％ を、正の制御物質（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）として使用した。
【００１１】
得られた結果を、下記の表に示す。
【００１２】
【表１】
Figure 2004534076
【００１３】
上記の表からわかるように、この細胞毒性試験によれば、Ａｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３は、ヒトの表皮角化細胞（ＨＥＫ）においても、ヒトの皮膚線維芽細胞（ＨＤＦ）においても、毒性を示さない。
【実施例２】
【００１４】
細胞接着におよぼす影響
【００１５】
体外での細胞接着試験によれば、Ａｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３は、ＨＤＦの接着に特異な影響をおよぼす。ＨＤＦ細胞は、１ｍｇ／ｍｌのＡｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３で被覆した培養基上で成長させると、２および５時間の培養後に、細胞接着の有意の増加を示す。
【００１６】
ＨＤＦに関して得られた結果を下記の表に示す。
【００１７】
【表２】
Figure 2004534076
【００１８】
ＨＥＫに関して得られた結果を下記の表に示す。
【００１９】
【表３】
Figure 2004534076
【００２０】
この表からわかるように、培養条件が同様であっても、ＨＥＫに対する影響は統計的に有意のものではない。
【実施例３】
【００２１】
細胞成長におよぼす影響
【００２２】
クリスタルバイオレット溶離法によって実施した体外細胞成長に関する実験によれば、いろいろな濃度のＡｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３は、最小限の量の胎児雌牛血清（２％ＦＣＳ）の存在下または非存在下で、下記の表に示すように、ＨＥＫ細胞の成長を促進する。
【００２３】
【表４】
Figure 2004534076
【００２４】
一方、ＨＤＦ細胞に関して実施した同様の実験では、下記の表に示すように、類似の結果は得られなかった。
【００２５】
【表５】
Figure 2004534076
【実施例４】
【００２６】
体外傷再生におよぼす影響
【００２７】
体外傷再生の実験を、分化したＨＥＫ細胞の培養組織において、ＦＣＳの存在下または非存在下で、実施した。試験期間は７日間とした。
【００２８】
０．１ｎｇ／ｍｌよりも大のＡｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３濃度は、対照培養組織との比較から、傷再生に正の影響を与える、ということがわかった。体外での傷再生に対するＡｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３のこの影響は、濃度０．１μｇ／ｍｌの場合の結果を示す図１に見ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】濃度０．１μｇ／ｍｌのＡｎｔａｒｔｉｃｉｎｅ−ＮＦ３の、体外での傷再生に対する正の影響を示す写真である。

Claims (4)

  1. Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ａｎｔａｒｔｉｃａ によって作り出され、１４％の炭水化物と８６％の蛋白質とから成る糖蛋白質の、傷の治療および再上皮形成における局所的使用または粘膜への使用のための薬剤、獣医学、および化粧品組成物の製造における使用。
  2. 皮膚、髪、または爪の手入れのための化粧品組成物の製造における請求項１に記載の糖蛋白質の使用。
  3. 前記糖蛋白質が１００ｍｇ／ｍｌと１ｆｇ／ｍｌとの間の濃度で使用されることを特徴とする請求項１または２に記載の使用。
  4. 前記糖蛋白質が好ましくは１０ｍｇ／ｍｌと０．１ｎｇ／ｍｌとの間の濃度で使用されることを特徴とする請求項３に記載の使用。
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