ES2236525T3 - Antarticina-nf3 para el tratamiento y re-epitelizacion. - Google Patents
Antarticina-nf3 para el tratamiento y re-epitelizacion.Info
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Abstract
Uso de una glicoproteína, producida por Pseudoalteromonas antartica, y constituida por 14 % de carbohidratos y 86 % de proteína, en la preparación de composiciones farmaceúticas, veterinarias y cosméticas de aplicaciòn tópica o mucosal, para el tratamiento y re-epitelización de heridas, y en la preparación de composiciones coséticas para el tratamiento de la piel, cabello o uñas.
Description
Antarticina-NF3 para el
tratamiento y re-epitelización de heridas.
La presente invención se refiere al uso de una
glicoproteína conocida como Antarticina-NF3 para
preparar composiciones farmacéuticas, veterinarias y cosméticas para
el tratamiento y re-epitelización de heridas.
La Antarticina-NF3 es una
glicoproteína producida por Pseudoalteromonas antartica, una
bacteria Gram-negativa aislada en el océano
Antártico. Esta bacteria heterotrópica aerobia tiene un solo flagelo
polar y produce una glicoproteína hexapolimérica
(Antarticina-NF3) compuesta por un 14% de
carbohidratos y un 86% de proteína que la rodea completamente.
Pseudoalteromonas antartica esta adaptada perfectamente a las bajas
temperaturas del medio antártico y soporta altas concentraciones de
sal.
La Antarticina-NF3 en solución
forma agregados regulares por autoensamblaje. Un aumento gradual en
la concentración de una solución de esta glicoproteína produce una
reducción gradual de la tensión superficial de la solución. Además,
la Antarticina-NF3 se conoce por su gran afinidad
por los liposomas de fosfatidilcolina, recubriéndolos y
protegiéndolos del efecto de permeabilización de tensioactivos tales
como SDS, como se describe en el documento WO98/42731. Además, se
sabe que la Antarticina-NF3 induce la nucleación del
hielo y previene el crecimiento de cristales de hielo hexagonales
grandes. Estos datos sugieren que la Antarticina-NF3
es responsable de la adaptación de Pseudoalteromonas antartica a las
condiciones ambientales de su hábitat antártico.
Además, los queratinocitos son un tipo de células
que se encuentran en la epidermis, formando su capa más profunda.
Los queratinocitos generan la capa externa de la piel (estrato
córneo) por multiplicación y modificación de su estructura hasta que
forman la capa de células maduras queratinizadas en la superficie de
la piel. La velocidad de la curación de heridas se ve influenciada,
entre otros factores, por la velocidad de proliferación y migración
de queratinocitos. Cualquier factor que potencie uno de estos
procesos favorecerá los procesos de curación y cicatrización de
heridas.
Como resultado de nuestras investigaciones hemos
descubierto que, sorprendentemente, la glicoproteína soluble de
Pseudoalteromonas antartica conocida como
Antarticina-NF3, que consta de un 14% de
carbohidratos y un 86% de proteína, mejora selectivamente la
adhesión de fibroblastos dérmicos humanos y promueve el crecimiento
celular de queratinocitos epidérmicos humanos. De esta manera, la
Antarticina-NF3 sorprendentemente se ha revelado
como un buen agente para mejorar la formación de cicatrices en
heridas.
De esta manera, el objeto de la presente
invención es el uso de Antarticina-NF3 en la
preparación de soluciones o formulaciones galénicas aceptables para
uso en el tratamiento y re-epitelización de heridas
en el campo farmacéutico y veterinario, así como para tratamientos
cosméticos de regeneración. Las concentraciones usadas de
Antarticina-NF3 están comprendidas entre 100 mg/l y
1 fg/ml, y más específicamente entre 10 mg/ml y 0,1 ng/ml.
Como complemento de la descripción que se hace y
para ayudar a comprender mejor las características de la invención,
a continuación se proporcionan algunos ejemplos sólo con fines
ilustrativos y no en sentido limitante. Esta invención no debe
considerarse limitada por las realizaciones descritas.
Se realizaron experimentos con el ensayo
WST-1, que mide la actividad de deshidrogenasas
mitocondriales en un ensayo colorimétrico no radiactivo usando sales
de formazan. Se ensayaron diferentes concentraciones de
glicoproteína (entre 1 mg/ml y 0,01 \mug/ml). Como control
negativo se usó NaCl 0,01 M y como control positivo se usó SDS al
0,02%.
Los resultados obtenidos se muestran en la
siguiente tabla:
Como puede verse en la tabla anterior, los
ensayos de citotoxicidad revelaron que la
Antarticina-NF3 no muestra toxicidad en
queratinocitos epidérmicos humanos (HEK), ni en fibroblastos
dérmicos humanos (HDF).
Los ensayos de adhesión celular in vitro
revelaron que la Antarticina-NF3 tiene un efecto
específico sobre la adhesión de HDF. Las células HDF mostraron un
crecimiento significativo en adhesión celular cuando se cultivaron
sobre substratos recubiertos con 1 mg/ml de
Antarticina-NF3 después de 2 y 5 horas de
cultivo.
Los resultados obtenidos para HDF se muestran en
la siguiente tabla:
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados obtenidos para HEK se demuestran
en la siguiente tabla:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Como puede verse, en condiciones de cultivo
similares, el efecto visto en HEK no es estadísticamente
significa-
tivo.
tivo.
Los experimentos sobre el crecimiento celular
in vitro realizados con el método de elución de cristal
violeta revelaron que la Antarticina-NF3 a
diferentes concentraciones, en presencia o ausencia de una cantidad
mínima de suero bovino fetal (FCS al 2%) estimula el crecimiento de
células HEK, como se muestra en la siguiente tabla:
Sin embargo, experimentos similares realizados
con células HDF no mostraron resultados relevantes, como se muestra
en la siguiente tabla:
Se realizaron experimentos para la regeneración
de heridas in vitro en cultivos de células HEK diferenciadas,
en presencia y ausencia de FCS. La duración de los ensayos fue de 7
días.
Las concentraciones de
Antarticina-NF3 por encima de 0,1 ng/ml mostraron un
efecto positivo sobre la regeneración de heridas en comparación con
los cultivos de control; este efecto de la
Antarticina-NF3 sobre la regeneración de heridas
in vitro puede verse en la figura 1 para una concentración de
0,1 \mug/ml.
Claims (4)
1. Uso de la glicoproteína
Antarticina-NF3 producida por Pseudoalteromonas
antartica y que consta de un 14% de carbohidratos y un 86% de
proteína, en la preparación de composiciones farmacéuticas,
veterinarias y cosméticas para aplicación tópica o mucosa en el
tratamiento y re-epitelización de heridas.
2. Uso de una glicoproteína de acuerdo con la
reivindicación 1, en la preparación de composiciones cosméticas
para el tratamiento de la piel, el cabello o las uñas.
3. Uso de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones 1 y 2, donde dicha glicoproteína se usa en
concentraciones comprendidas entre 100 mg/ml y 1 fg/ml.
4. Uso de acuerdo con la reivindicación 3, donde
dicha glicoproteína preferiblemente se usa en concentraciones
comprendidas entre 10 mg/ml y 0,1 ng/ml.
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