BRPI0210428B1

BRPI0210428B1 - Uso de glicoproteína para preparação de composições para o tratamento e a reepitelização de feridas

Info

Publication number: BRPI0210428B1
Application number: BRPI0210428-8A
Authority: BR
Inventors: PARENTE DUEÑA Antonio; Garces Garces Josep; Guinea Sanchez Jesús; Maria Garcia Anton Josep; Casaroli Marano Ricardo; Reina Del Pozo Manuel; Vilaro Coma Senen
Original assignee: Lipotec, S.A.
Priority date: 2001-06-14
Filing date: 2002-06-07
Publication date: 2018-04-17
Also published as: EP1402898B1; EP1402898A1; DE60202474D1; ES2236525T3; JP4252444B2; BRPI0210428B8; ATE285787T1; BR0210428A; KR20040030675A; ES2181592B1; MXPA03011622A; PT1402898E; US7022668B2; ES2181592A1; DE60202474T2; WO2002102406A1; CA2449910A1; CA2449910C; JP2004534076A; US20040242466A1

Abstract

"uso de glicoproteína para preparação de composições para o tratamento e a reepitelização de feridas". uso de uma glicoproteína produzida por pseudoalteromonas antartica, e constituída por 14% de carboidratos e 86% de proteína, na preparação de composições farmacêuticas, veterinárias e cosméticas de aplicação tópica ou em mucosa, para o tratamento e a reepitelização de feridas, e na preparação de composições cosméticas para o tratamento da pele, do cabelo ou de unhas.

Description

(54) Título: USO DE GLICOPROTEÍNA PARA PREPARAÇÃO DE COMPOSIÇÕES PARA O TRATAMENTO E A REEPITELIZAÇÃO DE FERIDAS (51) Int.CI.: A61K 38/46; A61P 17/12 (30) Prioridade Unionista: 14/06/2001 ES P 200101383 (73) Titular(es): LIPOTEC, S.A.

(72) Inventor(es): ANTONIO PARENTE DUENA; JOSEP GARCES GARCES; JESÚS GUINEA SANCHEZ; JOSEP MARIA GARCIA ANTON; RICARDO CASAROLI MARANO; MANUEL REINA DEL ΡΟΖΟ; SENEN VILARO COMA

1/5

USO DE GLICOPROTEÍNA PARA PREPARAÇÃO DE COMPOSIÇÕES PARA O TRATAMENTO E A REEPITELIZAÇÃO DE FERIDAS

CAMPO DA INVENÇÃO [001] A presente invenção está relacionada ao uso de uma glicoproteina conhecida como Antarticina - NF3 na preparação de composições farmacêuticas, veterinárias e cosméticas para o tratamento e a reeptilelização de feridas.

ESTADO DA TÉCNICA [002] A Antarticina - NF3 é uma glicoproteina conhecida por Pseudoalteromonas antartica, uma bactéria Gram-negativa isolada do oceano Antártico. Esta bactéria aeróbica heterotrópica apresenta um único flagelo polar e produz uma glicoproteina hexopolimérica (a Antarticina - NF3), composta por 14% de carboidrato e 86% de proteína, que a rodeia completamente. A Pseudoalteromonas antartica está perfeitamente adaptada às baixas temperaturas em torno do Antártico e suporta altas concentrações salinas.

[003] A Antarticina - NF3 forma em dissolução agregados regulares mediante automontagem. O progressivo aumento da concentração em dissolução desta glicoproteina produz uma diminuição progressiva na tensão superficial da dissolução. Por outro lado, a Antarticina - NF3 é conhecida porque apresenta uma grande afinidade com os lipossomas de fosfatidilcolina, recobrindo-os e protegendo-os do efeito permeabilizante dos tensoativos como o SDS, tal como se descreve no WO98/42731. Adicionalmente, a Antarticina - NF3 é conhecida porque induz a nucleação do gelo e impede o crescimento dos grandes cristais hexagonais do gelo. Estes dados fazem pensar que a Antarticina - NF3 é responsável

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2/5 pela adaptação da Pseudoalteromonas antartica às condições de meio ambiente de seu habitat antártico.

[004] Por outro lado, os ceratinócitos são um tipo de células que se encontra na epiderme, constituindo sua camada mais profunda. Os ceratinócitos geram a camada externa da pele (extrato córneo) mediante multiplicação e modificação de sua estrutura até formarem a camada de células maduras ceratinizadas na superfície da pele. A velocidade de cura das feridas é influenciada, entre outros fatores, pela velocidade de proliferação e de migração dos ceratinócitos. Qualquer fator que favoreça um destes processos favorecerá o processo de cura e cicatrização de feridas.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO [005] Como resultado de nossas investigações, surpreendentemente descobrimos que a glicoproteína solúvel procedente da Pseudoalteromonas antartica, conhecida como Antarticina - NF3, constituída por 14% de carboidrato e 86% de proteína, melhora sensivelmente a adesão dos fibroblastos dérmicos humanos e promove o crescimento celular dos ceratinócitos epidérmicos humanos. Desse modo, a Antarticina - NF3, surpreendentemente, revelou-se um bom agente melhorador da cicatrização de feridas.

[006] Portanto, é o objetivo da presente invenção a utilização da Antarticina - NF3 em dissoluções ou formulações medicamente aceitáveis para sua utilização no tratamento e na reepitelização de feridas no campo farmacêutico e veterinário, assim como para os tratamentos cosméticos regeneradores. As concentrações de uso da Antarticina - NF3 estão compreendidas entre 100 mg/L e 1

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3/5 fg/mL, e, mais concretamente, entre 10 mg/mL e 0,1 ng/mL.

[007] Para complementar a descrição que está sendo realizada e com o objetivo de ajudar na melhor compreensão das características da invenção, a seguir são incluídos alguns exemplos, com caráter explicativo e não limitativo. Esta invenção não deverá ser considerada limitada às realizações expostas.

Exemplo N° 1: citotoxicidade in vitro.

[008] Foram realizadas experiências mediante o teste

WST-1, que mede a atividade das desidrogenases mitocondriais em um ensaio colorimétrico não radioativo utilizando sais de formazan. Foram testadas diferentes concentrações de glicoproteína (entre 1 mg/mL e 0,01 pg/mL). Como controle negativo, foi empregado 0,01 M de NaCl, e como controle positivo foi empregado SDS a 0,02%.

[009] Os resultados obtidos são mostrados na tabela a seguir:

	Concentração testada	Resultado sobre HDF	Resultado sobre HEK
Controle		0,46	0,92
Controle negativo (NaCl)	0,01 M	0,43	0,70
Controle positivo (SDS)	0,02%	0,17	0,20
	1 fg	—	0,78
	o, i pg	—	0,92
	0,0 ngl	0,44	0,92
	1 ng	0,43	1,02
	0,1 pg	0,41	0,97
	10 pg	0,42	0,80
	1 mg	0,44	0,81

[0010] Como se pode apreciar na tabela anterior, os

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4/5 ensaios de toxicidade mostraram que a Antarticina - NF3 não apresenta toxicidade em ceratinócitos epidérmicos humanos (HEK) nem em fibroblastos dérmicos humanos (HDF).

Exemplo N° 2: efeito na adesão celular [0011] Os ensaios de adesão celular in vitro demonstraram que a Antarticina - NF3 apresenta um efeito específico na adesão dos HDF. As células de HDF mostraram um incremento importante na adesão celular quando cresciam em substratos recobertos com 1 mg/mL de Antarticina - NF3 após 2 e 5 horas de cultivo.

[0012] Os resultados obtidos para HDF são mostrados na tabela a seguir:

	Concentração ensaiada	Tempo de 2 horas	Tempo de 5 horas
Controle		0,10	0,13
Glicoproteína	0,001 mg/mL	0,11	0,24
1 mg/mL	0,24	0,28

Os resultados obtidos para HEK são mostrados na tabela a seguir:

	Concentração ensaiada	Tempo de 2 horas	Tempo de 5 horas
Controle		0,09	0,15
Glicoproteína	0,001 mg/mL	0,11	0,17
1 mg/mL	0,15	0,19

[0013] Como se pode apreciar, em condições similares de cultivo, o efeito apreciado sobre HEK não é estatisticamente significativo.

Exemplo N° 3: efeito no crescimento celular [0014] Os experimentos de crescimento celular in vitro realizados utilizando-se o método de eluição com cristal

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5/5 violeta expuseram que a Antarticina - NF3 a diferentes concentrações em presença ou não de um mínimo aporte de soro fetal bovino (FCS a 2%) estimula o crescimento das células HEK, tal como mostrado na tabela a seguir:

	Concentração ensaiada	Tempo de 0 hora	Tempo de 24 horas	Tempo de 48 horas
Controle		0,2	0,16	0,58
Glicoproteína	10 pg/mL		0,15	0,78
0,1 pg/mL		0,16	0,77
0,001 pg/mL		0,18	0,77

[0015] Enquanto que experimentos similares realizados sobre células HDF não obtiveram resultados significativamente relevantes, tal como se pode apreciar na tabela a seguir:

	Concentração ensaiada	Tempo de 0 hora	Tempo de 24 horas	Tempo de 48 horas
Controle		0,21	0,16	0,25
Glicoproteína	10 pg/mL		0,175	0,26
0,1 pg/mL		0,17	0,248
0,001 pg/mL		0,175	0,249

Exemplo N° 4: efeito na regeneração das feridas in vitro” [0016] Os experimentos de regeneração de feridas in vitro” foram efetuados em cultivos de células HEK diferenciadas, na ausência e na presença de FCS. A duração dos ensaios foi de sete dias.

[0017] As concentrações de Antarticina - NF3 superiores a 0,1 ng/mL mostraram um efeito positivo na regeneração da ferida em comparação com os cultivos de controle; este efeito da Antarticina - NF3 na regeneração de feridas in vitro” se pode observar na figura 1, para uma concentração de 0,1 pg/mL.

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Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Uso de uma glicoproteína, produzida por Pseudoalteromonas antartica e constituída por 14% de carboidratos e 86% de proteína, caracterizado pelo fato de ser para preparar composições farmacêuticas, veterinárias e cosméticas de aplicação tópica ou em mucosa, para o tratamento e a reepitelização de feridas.
2. Uso de uma glicoproteína, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser para preparar composições cosméticas para o tratamento da pele, do cabelo ou de unhas.
3. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a glicoproteína é empregada em concentrações entre 100 mg/mL e 1 fg/mL.
4. Uso, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato que as concentrações são entre 10 mg/mL e 0,1 ng/mL.

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FIGURA 1

Υ/Υ

USO DE GLICOPROTEÍNA PARA PREPARAÇÃO DE COMPOSIÇÕES PARA O TRATAMENTO E A REEPITELIZAÇÃO DE FERIDAS

Uso de uma glicoproteína produzida por Pseudoalteromonas antartica, e constituída por 14% de carboidratos e 86% de proteína, na preparação de composições farmacêuticas, veterinárias e cosméticas de aplicação tópica ou em mucosa, para o tratamento e a reepitelização de feridas, e na preparação de composições cosméticas para o tratamento da pele, do cabelo ou de unhas.

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