JP2006117556A

JP2006117556A - アミノ酸配列がＳｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｒｇで表されるペプチドの医薬用途

Info

Publication number: JP2006117556A
Application number: JP2004305132A
Authority: JP
Inventors: Teruo Nishida; 輝夫西田; Makoto Inui; 誠乾; Masatane Nakamura; 雅胤中村; Takashi Nagano; 敬長野
Original assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd; Yamaguchi University NUC
Current assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd; Yamaguchi University NUC
Priority date: 2004-10-20
Filing date: 2004-10-20
Publication date: 2006-05-11

Abstract

【課題】インシュリン様成長因子−Ｉの最小活性発現単位であるアミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチド（ＳＳＳＲ）の医薬としての効果的な利用を探求すること。
【解決手段】ＳＳＳＲの濃度が１×１０^−９Ｍ、１×１０^−８Ｍ程度では角膜障害および皮膚創傷の治癒効果が認められないのに対し、ＳＳＳＲの濃度を１×１０^−７Ｍ以上とすれば濃度依存的に角膜障害および皮膚創傷の治癒効果を発揮する。
【選択図】なし

Description

本発明は、有効成分として、アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチドまたはその医薬として許容される塩類をSer−Ser−Ser−Arg重量に換算したとき少なくとも５×１０^−６％の濃度で含有する角結膜障害治療剤または皮膚創傷治癒促進剤に関する。

角膜は、直径約１ｃｍ、厚さ約１ｍｍの透明な無血管の組織であり、また、結膜は、角膜縁より後方の眼球表面と眼瞼の裏面を覆っている粘膜であるが、角膜や結膜は、視機能に重要な影響を及ぼすことが知られている。角膜潰瘍、角膜炎、結膜炎、ドライアイ等の種々の疾患により引き起こされる角結膜障害は、何らかの理由で修復が遅延したり、あるいは修復が行われずに遷延化すれば、角膜と結膜は連なった組織であるため、上皮の正常な構築に悪影響を及ぼし、さらには、角膜実質や内皮の構造や機能まで害されることがある。近年、細胞生物学の発展に伴い、細胞の分裂・移動・接着・伸展・分化等に関与する因子が解明されており、角膜障害の修復には、これらの因子が重要な役割を担っていることが報告されている（非特許文献１、非特許文献２）。

また、皮膚創傷は、裂傷、擦過傷、外科的切開、皮膚潰瘍、火傷などの表面組織の損傷である。かかる皮膚創傷の治療は、受傷部位に応急処置を施した後、生体自身の回復力によって自然に治癒するのを待つのが一般であるが、このような自然治癒では回復までに長期間を要し、また、痛みも継続することから、受傷部位に創傷治療剤を投与するなどして積極的に創傷治癒を促進させることが望ましい。

このような角膜障害や皮膚創傷を治療するために、サブスタンスＰおよび正常ヒト細胞の成長を調節している成長因子であるインシュリン様成長因子−Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）の作用が研究されてきた。

特許文献１には、サブスタンスＰの最小活性発現単位はアミノ酸配列がPhe-Gly-Leu-Met-NH₂で表されるペプチド（ＦＧＬＭ）であることを見出すと共に、そのＦＧＬＭとＩＧＦ−Ｉとを併用すると優れた角膜障害治癒効果を発現することが報告されている。

特許文献２には、ＦＧＬＭ等のサブスタンスＰフラグメントとＩＧＦ−Ｉとを併用すると優れた皮膚創傷治癒効果を発現することが報告されている。

特許文献３には、ＩＧＦ−Ｉの最小活性発現単位はアミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチド（以下、「ＳＳＳＲ」という。）であることを見出すと共に、そのＳＳＳＲを必須構成要件とするペプチドとサブスタンスＰまたはそのフラグメントであるＦＧＬＭ等とを併用すると、優れた角膜障害または皮膚創傷治癒効果を発現することが報告されている。

しかしながら、これらの先行技術に報告されているのは、いずれもＩＧＦ−ＩまたはそのフラグメントであるＳＳＳＲとサブスタンスＰまたはそのフラグメントとの併用による効果である。特に特許文献３には、ＳＳＳＲ単独では効果を発現せず、サブスタンスＰまたはそのフラグメントとの併用によってはじめて効果を発現することが報告されている。
特開平１０−１７４８９号公報特開２００２−２２６３９５号公報特開２００３−２３１６９５号公報臨眼，46, 738-743 (1992) 眼科手術，5, 719-727 (1992)

ＩＧＦ−Ｉは７０個ものアミノ酸からなる長鎖ペプチドであるのに対し、ＳＳＳＲは僅か４個のアミノ酸からなるペプチドであるので、精製や製剤のし易さ、安定性等の観点からその医薬としての利用価値は極めて高い。しかしながら、ＳＳＳＲは、サブスタンスＰまたはそのフラグメントであるＦＧＬＭ等との併用によってはじめて角膜障害等の治療効果を発現することが知られているに留まり、その医薬としての利用には大きな制約があった。

本発明者等は、このＳＳＳＲの医薬としての利用をより効果的にすべく鋭意研究したところ、後述する薬理試験の結果より、驚くべきことにＳＳＳＲの濃度が１×１０^−９Ｍ、１×１０^−８Ｍ程度では角膜障害および皮膚創傷の治癒効果が認められなかったのに対し、１×１０^−７Ｍ（≒５×１０^−６％）以上ではＳＳＳＲ単独でも濃度依存的に治癒効果を発揮することを見出した。

すなわち、本発明は、
（１）有効成分としてアミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチドまたはその医薬として許容される塩類をSer−Ser−Ser−Arg重量に換算したとき５×１０^−６％（ｗ／ｖ）以上の濃度で含有することを特徴とする角結膜障害治療剤、
（２）Ser−Ser−Ser−Argまたはその医薬として許容される塩類の濃度が５×１０^−５〜１０％（ｗ／ｖ）である前（１）記載の角結膜障害治療剤、
（３）角結膜障害が角膜潰瘍、角膜上皮剥離、角膜炎、結膜炎またはドライアイである前（１）または（２）記載の角結膜障害治療剤、
（４）局所投与眼科用組成物の剤型が点眼剤または眼軟膏である前（１）〜前（３）記載の角結膜障害治療剤、
（５）有効成分としてアミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチドまたはその医薬として許容される塩類をSer−Ser−Ser−Arg重量に換算したとき５×１０^−６％（ｗ／ｗ）以上の濃度で含有することを特徴とする皮膚創傷治癒促進剤、
（６）Ser−Ser−Ser−Argまたはその医薬として許容される塩類の濃度が１０^−５〜１０％（ｗ／ｗ）である前（５）記載の皮膚創傷治癒促進剤、
（７）皮膚創傷が裂傷、擦過傷、外科的切開、皮膚潰瘍または火傷である前（５）または（６）記載の皮膚創傷治癒促進剤、
（８）局所投与皮膚科用組成物の剤型が軟膏剤または貼付剤である前（５）〜前（７）記載の皮膚創傷治癒促進剤、に関する。

本発明の角結膜障害治療剤または皮膚創傷治癒促進剤の有効成分である、アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチド（ＳＳＳＲ）は、そのＮ末端がアセチル基やベンゾイル基等のアシル基、ベンジル基等の、ペプチドに汎用される保護基で保護されたものでもよく、またそのＣ末端がエステルやアミド等の、ペプチドに汎用される保護基で保護されたものでもよい。また、本発明は、ＩＧＦ−Ｉの最小活性発現単位であるＳＳＳＲが単独でも効果を発揮することを見出したところに特徴があるので、本発明の効果に実質的な影響を及ぼさないＩＧＦ−Ｉの構成アミノ酸がＳＳＳＲに結合していてもよい。

医薬として許容される塩類としては、例えば塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、シュウ酸塩、メタンスルホン酸塩、パラトルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩等が挙げられる。

本発明の角結膜障害治療剤または皮膚創傷治癒促進剤は、ＳＳＳＲまたはその医薬として許容される塩類（以下、これらを「ＳＳＳＲ等」と総称する。）を５×１０^−６％以上の濃度で、より好ましくは５×１０^−５〜１０％の濃度範囲で用いることを特徴とする。本発明は、ＳＳＳＲ等の濃度が一定以上になると、それ単独でも角膜障害等の治療効果を発揮することを見出したところに特徴があるので、その濃度下限値が重要な意味を持つ。そのＳＳＳＲ等の濃度の下限値は、薬理試験の項で詳述するが、１×１０^−７Ｍ（≒５×１０^−６％）以上の濃度において濃度依存的に角膜障害および皮膚創傷の治癒作用を発現することに基づく。薬理試験の項ではモル濃度での結果を示しているが、その試験に用いたＳＳＳＲのdi-トリフルオロ酢酸塩の分子量約６６３から換算すると、１×１０^−７Ｍは約７×１０^−６％に相当する。ＳＳＳＲは医薬として許容される種々の塩の形をとることができるが、塩の種類によって分子量は変動する。そこで、本発明ではＳＳＳＲの重量を基準にして濃度を規定した。ＳＳＳＲの分子量４３５からすると、１×１０^−７Ｍは約５×１０^−６％に相当する。また、ＳＳＳＲ等の濃度の上限値は、上述のように特段の意義はなく、特に制限されないが、濃度が濃くなると角膜等の組織に悪影響を与え、また過剰に投与しても治癒効果が向上しなくなるので、１０％以下の濃度とすることが望ましい。

本発明の角結膜障害治療剤に用いる局所投与眼科用組成物および皮膚創傷治癒促進剤に用いる局所投与皮膚科用組成物は、汎用されている技術を用いて調製することができる。

局所投与眼科用組成物の代表的な剤型としては、点眼剤および眼軟膏等が挙げられる。これらは汎用されている技術を用いて調製することができる。例えば、点眼剤は、塩化ナトリウム等の等張化剤、リン酸ナトリウム等の緩衝化剤、塩化ベンザルコニウム等の防腐剤等を用いて、調製することができる。ｐＨは眼科製剤に許容される範囲内にあればよく、４〜８の範囲が好ましい。

角結膜障害治療を目的とする場合、ＳＳＳＲ等の投与量は症状、年令、剤型等によって適宜選択できるが、例えば点眼剤では、５×１０^−６（ｗ／ｖ）以上の濃度、より好ましくは５×１０^−５〜１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲のものを１日１〜数回点眼すればよい。

また、局所投与皮膚科用組成物の代表的な剤型としては、軟膏剤、ゼリー剤、パップ剤、貼付剤、ローション剤、クリーム剤、スプレー剤、エアゾール剤、硬膏剤、懸濁剤、乳剤などを例示でき、また、適当な溶剤を使用して液剤を調製することもでき、それらの製剤を皮膚などの所要部位（患部）に直接塗布、噴霧または貼付することが望ましい。また、局所投与皮膚科用組成物を調製するために、その剤形に応じて充填剤、賦形剤、基剤、増量剤、ｐＨ調整剤、可溶化剤、懸濁化剤、緩衝剤、安定化剤、保存剤、界面活性剤、抗酸化剤、分散剤、乳化剤、溶解剤、溶解補助剤などを添加できる。

上記製剤用の担体としては、例えば、白色ワセリン、流動パラフィン、ゲル化炭化水素、セチルアルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、コーンスターチ、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、プラスティベースハイドロフィリック、ゼラチン、デキストリン、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、メトキシエチレン−無水マレイン酸共重合体、ポリビニルエーテル、ビニルピロリドンを構成成分とする重合体・共重合体、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、塩化ベンザルコニウム、オリーブ油、ツバキ油、ダイズ油等の油脂類、乳糖、水などが挙げられる。

皮膚創傷治癒促進を目的とする場合、ＳＳＳＲ等の投与量は、症状、年令、剤型等を考慮して適宜選択できるが、例えば軟膏剤では、５×１０^−６％（ｗ／ｗ）以上の濃度、より好ましくは５×１０^−５〜１０％（ｗ／ｗ）の濃度範囲のものを通常１日１回〜数回塗布すればよい。

後述する薬理試験の結果より、アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチド（ＳＳＳＲ）は、１×１０^−９Ｍ、１×１０^−８Ｍ程度の濃度で使用しても角膜上皮は伸展促進されないのに対し、１×１０^−７Ｍ（≒５×１０^−６％）以上の濃度で使用すれば濃度依存的に角膜上皮の伸展を促進する。したがって、ＳＳＳＲまたはその医薬として許容される塩類を５×１０^−６％以上の濃度で含有させることにより、角膜潰瘍、角膜上皮剥離、角膜炎、結膜炎、ドライアイ等の角結膜障害に対する治療効果を発揮すると共に、角膜上皮と近似した性質を有する皮膚上皮にも同様な効果が期待でき、裂傷、擦過傷、外科的切開、皮膚潰瘍、火傷等の皮膚創傷やそれに起因する壊疽などの疾患に対する治癒効果を発揮する。

以下に、薬理試験の結果および製剤例を示すが、これらの例は本発明をよりよく理解するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。

［薬理試験］
（１）角膜上皮伸展に対する作用（in vitro）
雄性日本白色ウサギの角膜を用い、Nishida らの方法（J. Cell Biol., 97, 1653-1657 (1983)）に準じ、角膜片の組織培養系での角膜上皮伸展長を指標にして角膜上皮伸展に対する影響を検討した。

（実験方法）
ウサギ角膜片より切り出した角膜ブロック（１群６個）を、アミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチド（ＳＳＳＲ）のdi-トリフルオロ酢酸塩を含む培養液（ＴＣ−１９９）中、３７℃・５％ＣＯ_２の条件下で２４時間培養した。培養後、角膜ブロックをエタノール−氷酢酸（容積比９５：５）混合液中で固定し、パラフィンで包埋して切片を作製した。切片を脱パラフィンした後、ヘマトキシリン−エオジン染色し、顕微鏡下で上皮細胞層の伸展長を測定した。ＳＳＳＲのdi-トリフルオロ酢酸塩の濃度を変えて、上記と同様の操作を行った。

コントロールとして、ＳＳＳＲを含まない培養液を用い、上記と同様の操作を行った。

（結果）
１×１０^−９Ｍから１×１０^−４Ｍの濃度のＳＳＳＲのdi-トリフルオロ酢酸塩を被験物質として含む培養液で培養したときの結果を図１に示す。なお、図中の角膜上皮伸展促進率（％）は、各６例の平均値で示した。

図１より、ＳＳＳＲ・di-トリフルオロ酢酸塩の濃度が１×１０^−９Ｍ、１×１０^−８Ｍ程度では角膜上皮は伸展促進されないのに対し、ＳＳＳＲ・di-トリフルオロ酢酸塩の濃度を１×１０^−７Ｍ以上とすれば濃度依存的に角膜上皮の伸展促進効果が認められた。

（２）皮膚創傷治癒に対する作用
皮膚創傷治癒効果は以下に示す方法で試験することができる
ラットをジエチルエーテル吸入麻酔下で背部の体毛をバリカンで剃毛し，脱毛用クリームで除毛する。２４時間後に５ｍｍ径の皮膚生検用トレパンを用いて背部皮膚に表皮・真皮の全層性の創傷を等間隔で５箇所作成し、止血の確認後にＳＳＳＲを含有する軟膏を１日１回塗布する。軟膏塗布前にラットの背部創傷を写真撮影しその面積を測定する。ＳＳＳＲを含有する軟膏を塗布後の各創傷面積を比較することにより皮膚創傷治癒効果を検討できる。

［製剤例］
本発明に用いられる代表的な製剤例を以下に示す。

１．点眼剤
以下の処方の点眼剤を汎用される方法を用いて調製した。

処方例１
１００ｍｌ中
ＳＳＳＲ１ｍｇ
塩化ナトリウム９００ｍｇ
水酸化ナトリウム適量
塩酸適量
滅菌精製水適量

処方例１と同様にして、ＳＳＳＲを１００ｍｌ中に０．００１ｍｇ、０．０１ｍｇ、０．１ｍｇ、１ｍｇ、１０ｍｇ、１００ｍｇ、１ｇ、１０ｇ含有する点眼液を調製することができる。

２．軟膏剤
処方例２
１００ｇ中
ＳＳＳＲ１００ｍｇ
流動パラフィン１０ｇ
白色ワセリン適量

処方例２と同様にして、ＳＳＳＲの添加量を適宜変えることにより、種々の濃度の軟膏を調製できる。

図１は、ＳＳＳＲ濃度（Ｍ）と角膜上皮伸展促進率（％）の関係を示すグラフである。

Claims

有効成分としてアミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチドまたはその医薬として許容される塩類をSer−Ser−Ser−Arg重量に換算したとき５×１０^−６％（ｗ／ｖ）以上の濃度で含有する角結膜障害治療剤。
Ser−Ser−Ser−Argまたはその医薬として許容される塩類の濃度が５×１０^−５〜１０％（ｗ／ｖ）である請求項１記載の角結膜障害治療剤。
角結膜障害が角膜潰瘍、角膜上皮剥離、角膜炎、結膜炎またはドライアイである請求項１または請求項２記載の角結膜障害治療剤。
局所投与眼科用組成物の剤型が点眼剤または眼軟膏である請求項１〜請求項３のいずれかに記載の角結膜障害治療剤。
有効成分としてアミノ酸配列がSer−Ser−Ser−Argで表されるペプチドまたはその医薬として許容される塩類をSer−Ser−Ser−Arg重量に換算したとき５×１０^−６％（ｗ／ｗ）以上の濃度で含有する局所投与皮膚科用組成物を投与することを特徴とする皮膚創傷治癒促進剤。
Ser−Ser−Ser−Argまたはその医薬として許容される塩類の濃度が５×１０^−５〜１０％（ｗ／ｗ）である請求項５記載の皮膚創傷治癒促進剤。
皮膚創傷が裂傷、擦過傷、外科的切開、皮膚潰瘍または火傷である請求項５または請求項６記載の皮膚創傷治癒促進剤。
局所投与皮膚科用組成物の剤型が軟膏剤または貼付剤である請求項５〜請求項７のいずれかに記載の皮膚創傷治癒促進剤。