JP2004511426A5

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Publication number: JP2004511426A5
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Filing date: 2001-05-03
Publication date: 2005-02-03

Description

【０１６５】
実施例６．中性および陽イオン性のローダミン（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ）標識リポソームのヒト内皮細胞培養物（ＨＵＶＥＣ）による取り込み
ＨＵＶＥＣを、２ × １０ ^４細胞／ｃｍ ^２の細胞密度になるようにゼラチンコーティングされた２４穴培養プレートに添加し、２％ウシ胎児血清を含む内皮成長培地中で３７ ℃で４８時間、５％ＣＯ _２を含む加湿雰囲気中で培養した。培地を除いて細胞をＰＢＳで洗浄し、５００ μ ｌの無血清内皮基礎培地を添加した。ローダミンで標識したリポソーム（０．５ｍＭのローダミン標識）を総脂質濃度が１００ μ Ｍになるように培地に加えた。培養を始めてから４時間後に培地を除去し、培養物を５００ μ ｌのＰＢＳで２回洗浄した。細胞を、１．５ｍｌの１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００のＰＢＳ溶液で３０分間かけて室温で溶解した。蛍光強度を、励起波長５６０ｎｍと放出波長５８０ｎｍで、ＳＰＥＸＦｌｕｏｒｏＭａｘ−２で測定した。

【０１６６】
実験の結果を表４に示す。

【０１６７】
【表４】ローダミン標識リポソームのＨＵＶＥＣによる取り込み（総脂質濃度１０ｍＭ、リポソーム組成物はｍｏｌ％で示す）

ζ電位は、表３に記載した条件で測定された。

【０１６８】
実施例７．リポソーム性陽イオン性画像化剤の調製
（ｉ）画像化剤の調製
細胞用画像化剤は、陽イオン性脂質（例えばＤＯＴＡＰ）からなる陽イオン性リポソームに封入する。例えば、磁鉄鉱（Ｆｅ _３Ｏ _４）は、陽イオン性リポソームに封入されて、高熱症の造影または治療にそれぞれ用いられることが当技術分野で知られている。このような酸化鉄は、上述の一般的な方法、または例えば米国特許第５，０８８，４９９号に記載された方法で陽イオン性リポソームの内部に含めることができる。高熱症の治療では、癌患者の静脈内に酸化鉄粒子を投与する。この粒子は腫瘍内に蓄積する。患者を磁界の中に置くと酸化鉄粒子が加熱され、結果的に固体腫瘍が破壊される。

【０１６９】
特定の実施例として、Ｈ ^＋イオンで静電気的に安定化された超常磁性酸化鉄粒子（ＢｅｒｌｉｎＨｅａｔＡＧから購入可能）を、ＤＯＴＡＰとＤＯＰＣを５０：５０の比で含み、初期の総脂質濃度が１５ｍＭのリポソームに封入する。このような製剤は以下の手順で調製される：ＤＯＴＡＰ（０．０７５ｍｍｏｌ）とＤＯＰＣ（０．０７５ｍｍｏｌ）を２０ｍｌのクロロホルムに溶解して、５００ｍｌの丸底フラスコ内に静置する。クロロホルムを真空中で蒸発させ、５ｍｂａｒの減圧下で９０分間かけてフィルムを乾燥させる。次に脂質フィルムを１０ｍｌの酸化鉄粒子の水溶液（２８６ｍＭ）で再水和する。リポソーム懸濁物を穏やかに混合し、冷蔵庫内で保存する。２４時間後、この懸濁物を１２，０００Ｇで１０ ℃で３０分間遠心する。この結果、混合物が二相に分離する。上層には、酸化鉄を封入したリポソームの大部分が含まれ、下層には、リポソームに含まれずに封入されなかった酸化鉄が含まれる。上層画分（１０ｍｌ）を４００ｎｍのポリカーボネートメンブレン（ＯｓｍｏｉｃｓＩｎｃ．）に５回にわたって通す（Ｌｉｐｅｘｅｘｔｒｕｄｅｒ、容量１０ｍｌのバレル）。押し出された産物の脂質成分はＨＰＬＣで、また鉄は光度測定法（チオシアナート法）で分析した。

【０１７０】
（ｉｉ）画像化剤の投与
動物実験では、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに１０ ^６個のルイス肺癌（ＬｅｗｉｓＬｕｎｇＣａｒｃｉｎｏｍａ；ＬＬＣ）細胞を接種した。接種から約１０日後にマウスに触知可能な腫瘍が発生した。腫瘍が約５ｎｍ〜８ｎｍの大きさ（２次元測定）になったら、動物を２ＴＭＲトモグラフ（Ｂｒｕｋｅｒ）に据え、麻酔（イソフルラン注入）して、解剖学的配置でスキャンする。このスキャンの間、Ｔ１緩和率およびＴ２緩和率を記録して比較した。次にマウスの体重１ｇあたり１４ μ ｌの画像化剤製剤（上述の手順で調製）を尾静脈に注射した。このマウスをトモグラフに再び据え、注入後のさまざまな時点でスキャンした。上述の製剤を注入した動物の腫瘍を対象とした代表的な実験で測定した緩和率データを表５にまとめる。正常組織（例えば筋肉）のＴ２緩和率に変化は認められなかった（データは示していない）。

【０１７１】
【表５】リポソーム性陽イオン性造影剤の投与前後における腫瘍組織のＴ２値

【０１７２】
実施例８．陽イオン性画像化剤としてのマグネトソーム（ｍａｇｎｅｔｏｓｏｍｅ）
マグネトソームは、脂質二重層に包まれたナノメートルサイズの磁鉄鉱コアからなる。陽イオン性外層を用いたマグネトソームの調製は、負に帯電したリン脂質または中性のリン脂質の用途について記載された様式（ＤｅＣｕｙｐｅｒら、１９９０）と同様の様式で生じる。マグネトソームのインビボ試験法は、１０ ^６個のルイス肺癌細胞を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスで実施した。画像化する際は、複数の組織のＴ２緩和率をＭＲで測定した。

【０１７３】
１．正に帯電したマグネトソームの調製
脂質二重層に包まれた磁鉄鉱コアは、例えば酸化鉄粒子のラウリン酸単層を脂質と置換することで調製することができる。層の交換は、ラウリン酸でコーティングしたマグネタイト粒子を、３０ｍｏｌ％〜７０ｍｏｌ％のリン脂質および７０ｍｏｌ％〜３０ｍｏｌ％の陽イオン性脂質からなるリポソームとインキュベートすると自然に生じる。リン脂質は、Ｆｅ _３Ｏ _４の酸素原子に結合することで、ラルリン酸と置き換わると想定されている。陽イオン性成分はマグネトソームの外層に選択的に蓄積し、それを電気的に安定化させる。過剰なラウリン酸は混合液から透析を行って除かれる。産物を次に精製する。

【０１７４】
特定の例として、ラウリン酸でコーティングされた超常磁性酸化鉄粒子（鉄濃度は２Ｍ）を含む１５０ μ ｌの懸濁物を３７ ℃で、ＤＯＴＡＰおよびＤＯＰＣ（ＡｖａｎｔｉＰｏｌａｒＬｉｐｉｄｓ、Ｉｎｃ．、Ａｌａｂａｓｔｅｒ）を３０／７０ｍｏｌ％のモル比で含む１０ｍｌの１０ｍＭリポソーム製剤（実施例４記載の手順で合成）とともにインキュベートした。次に、この混合物を、５％グルコース溶液に対して５日間かけて透析を行った。透析過程におけるラウリン酸の減少は、臭化フェナシル（ｐｈｅｎａｃｙｌｂｒｏｍｉｄｅ）（Ｂｏｒｃｈら、１９７５）でラウリン酸誘導体を形成させた後にＨＰＬＣでモニタリングした（ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒＲＰ−ｓｅｌｅｃｔＢ５ μ ｍ２５０−４（Ｍｅｒｃｋ）、アセトニトリル／水＝７５：２５、流速＝１ｍｌ／分、λ ＝２５４ｎｍ、ｋ’＝３．０、ｋ’＝（ｔ _ｒ −ｔ _０）／ｔ _０）。

【０１７５】
封入化されなかった酸化鉄粒子をマグネトソームから分離し、過剰の空リポソームをセファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ）Ｓ−３００ＨＲ上でゲルクロマトグラフィーで分離した。マグネトソームは、強い永久磁石（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃＧｍｂＨ、ＢｅｒｇｉｓｃｈＧｌａｄｂａｃｈ）を用いて超常磁性ＭＡＣＳマイクロビーズ上で空リポソームと分離した。表６に、マグネトソームに関する分析結果をまとめる。

【０１７６】
【表６】粒子精製前後に測定したマグネトソームの分析データ

【０１７７】
２．ルイス（Ｌｅｗｉｓ）肺癌をもつＣ５７ＢＬ／６マウスの画像化
動物実験では、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＬＬＣ細胞（リン酸緩衝生理食塩水中に約１０ ^６個の細胞）を皮下に接種した。接種の約１０日後に触知可能な腫瘍がマウスに発生した。この腫瘍の大きさが約５ｍｍ〜８ｍｍ（２次元測定）となったら、マウスを麻酔し（イソフルラン吸入）、２ＴＭＲトモグラフ（Ｂｕｒｋｅｒ）のサーモスタットパッド上に据え、解剖学的配置でスキャンした。このスキャンの間、Ｔ１およびＴ２の緩和率（ｒｅｌａｘｉｖｉｔｙ）を記録して比較した。次に、マウスの体重１ｇあたり１４ μ ｌの画像化剤製剤（上述の手順で調製）を尾静脈に注射した。このマウスをトモグラフに再び据え、注入後のさまざまな時点でスキャンした。表７に、上述の製剤を接種したさまざまなマウスで測定された緩和率データをまとめる。

【０１７８】
【表７】代表的な動物実験における、陽イオン性マグネトソーム投与前後における腫瘍組織のＴ２値

【０１７９】
実施例９．水に不溶性の薬剤の担体として脂質親和性薬剤パクリタキセルを含む陽イオン性マグネトソーム
脂質親和性薬剤（例えばパクリタキセル）の適切な担体としての安定な水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルジョンを、電気スターラーまたは超音波処理器でホモジナイズして得た（Ｔｕｃｈｉｄａら、１９９２、Ｃａｖａｌｌｉら、２０００）。複数の脂質を含む油層は、その結晶化を数か月間にわたって防ぐ薬剤の約２．１ｍｏｌ％の可溶化剤として作用する。インビボにおける応用に関しては、疎水性マトリックスの主成分は、トリグリセリド（ＴＧ）のような生体適合性のある生分解性脂質を選択した。標的化する目的では、最大５ｍｏｌ％のＤＯＴＡＰまたはＤＤＡＢが、陽イオン性乳化剤として必要とされるだけである。これは、外層中の陽イオン性両親媒性物質の５０％に対応する。粒子の大きさは、脂質親和性物質（ＴＧ）と両親媒性物質の重量比（ＴＧ／Ａ）の影響を受け、ＴＧの増量と相関する。

【０１８０】
パクリタキセル（１０ｍｇ）を５６０ｍｇのトリオクタデシルグリセリドに溶解した。次に２５ｍｇのＤＯＴＡＰ、２５ｍｇのＤＯＰＣ（ＴＧ／Ａ＝１１）を含む脂質混合物を、ＴＧ／パクリタキセル混合物中に室温で１０分間ホモジナイズして（ＩＫＡＵｌｔｒａ−ＴｕｒｒａｘＴ８、１００００ｒｐｍ）分散させた。次に７ｍｌの５％グルコース溶液を、ホモジナイズを続けながら１５分かけて油層混合物に滴下して添加した。表８のデータは、陽イオン化の原理が、薬剤の添加／非添加を問わずマイクロエマルジョンに等しく適用可能で、血管新生の標的化に対して十分高いζ電位をもつ安定な製剤が結果的に得られることを示している。この方法で、高い比の薬剤 − 陽イオン性成分を達成して（この場合は重量％で１：２．５）、薬剤輸送系の寛容性の有意な改善がみられる。

【０１８１】
【表８】トリグリセリド（ＴＧ）、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＰＣ、およびパクリタキセルからなる陽イオン性マイクロエマルジョンの遠心後（５００ｇ、１０分）の分析データ

【０１８２】
実施例１０．他の封入化画像化剤の調製
代表的な画像化剤製剤には、リポソーム性磁鉄鉱粒子（実施例７に記載）で封入された陽イオン性リポソーム、陽イオン性リポソーム（磁鉄鉱粒子が脂質二重層に共有結合されたもの）、Ｇｄ錯体を封入したＧｄ−ＤＴＰＡとの陽イオン性リポソーム、Ｇｄを脂質二重層と共有結合した陽イオン性リポソーム、内部封入、または膜結合のいずれか、またはその両方のＸ線減弱性複合体／分子（ＣＴまたはＸ線画像試験用）を含む陽イオン性リポソームが含まれる。代表的な数を以下に示す既知の手法で、また上記のζ電位の範囲を達成する製剤を調製することで、当業者であれば広範囲の画像化剤を製剤化して投与することができる。

【０１８３】
Ｇｄ−ＤＴＰＡを封入化する方法は当技術分野で周知である（Ｕｎｇｅｒ、Ｅ．Ｃ．、Ｐ．ＭａｃＤｏｕｇａｌｌ、Ｐ．ＣｕｌｌｉｓおよびＣ．Ｔｉｌｃｏｃｋ、「リポソームＧｄ−ＤＴＰＡ：ＭＲＩによるヘパトーマモデルの増強における封入化の効果（ＬｉｐｏｓｏｍａｌＧｄ−ＤＴＰＡ：ｅｆｆｅｃｔｏｆｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎｏｎｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆｈｅｐａｔｏｍａｍｏｄｅｌｂｙＭＲＩ）」、ＭａｇｎｅｔｉｃＲｅｓｏｎａｎｃｅＩｍａｇｉｎｇ７：４１７〜２３、（１９８９）を参照）。

【０１８４】
米国特許第６，００１，３３３号では、ＣＴによる画像化による腫瘍検出用のリポソーム性造影剤の調製法が説明されている。この方法は以下の段階を含む：（ａ）マルトースと水を約２０ｇのマルトース：１００ｍｌの水の比で混合して、マルトースが溶解して水溶液となるまで攪拌する段階；（ｂ）卵黄ホスファチジルコリンと９９．６％エタノールを、約４．２ｇの卵黄ホスファチジルコリン：５ｍｌのエタノールの比で混合して、溶解してアルコール溶液を形成するまで攪拌する段階；（ｃ）ＢＨＴをこの水溶液に、約６．２ｍｇのＢＨＴ：２０ｇのマルトースの比で添加する段階；（ｄ）このアルコール溶液を、各４５０ｍｌの水に対して５ｍｌのエタノールを含む溶液が得られるまで連続的に混合しながら水溶液に滴下して添加することで封入化溶液を形成させる段階；（ｅ）この物質を攪拌して、封入化用溶液中に封入化する段階；（ｆ）段階（ｅ）の混合物をマイクロフッ素化（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｉｎｇ）装置に通して清澄溶液を形成させる段階；（ｇ）段階（ｆ）の混合物を凍結乾燥する段階。

【０１８５】
適量の卵黄ホスファチジルコリンを陽イオン性脂質と置換して、対象薬剤を含み、所望のζ電位および／または等電点をもつリポソーム成分を得てその薬剤を選択的に腫瘍に向けるように上記の方法を変更することは当業者の能力の範囲内である。

【０１８６】
リポソーム製剤の他の調製法は当技術分野で周知である。調整法には例えば、脂質フィルムの水和、溶媒注入、逆相蒸発、およびこれらの方法と凍結融解サイクルの組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。超音波処理、ｐＨ誘導によるベシクル形成、または界面活性剤による可溶化によってリポソームを調製することも当業者の能力の範囲に含まれる。また封入化分子と非封入化分子の分離にも、ゲルろ過法、超遠心法、クロスフローろ過法、密度勾配遠心法、透析法を含むがこれらに限定されないさまざまな方法を利用することができる。

【０１８７】
実施例１１：ヌードマウスにおける腫瘍の縮小
一般に実施例４によってジフテリア毒素を含むように作製されるリポソーム組成物を、腫瘍をもつ試験用ヌードマウスに注射する。腫瘍をもつ対照ヌードマウスへの平行注射を、そのζ電位を調節する目的で誘導体化されていない同様の組成物を用いて行う。２日間の間隔をおいた２ラウンドの注射の１４日後に試験マウスおよび対照マウスを殺して解剖して調べる。試験マウスで腫瘍塊の統計学的に有意な縮小が示されれば、組成物が腫瘍の縮小を引き起すのに治療上有効であることを意味する。

【０１８８】
腫瘍の縮小を引き起すのに有用な他の組成物には、パクリタキセル、ドセタキセル、または他のタキサン系、ビンクリスチン、ナベルビン、および他のビンカアルカロイド系、ゲムシタビンおよび他のヌクレオシド類似体、シスプラチンおよび他の白金系化合物を含むリポソーム組成物が含まれる。以上の組成物は、実施例４の手順で製剤化することができる。

【０１８９】
実施例１２：癌患者の膀胱腫瘍の画像化
蛍光画像化剤を実施例４に記載されたプロトコルで調製し、膀胱癌（尿路上皮癌）患者に全身投与した。投与する蛍光画像化剤は、５０ｍｏｌ％ＤＯＴＡＰ、４５ｍｏｌ％ＤＯＰＣ、および５ｍｏｌ％ローダミン −ＤＯＰＥ（溶媒は５％グルコース）を含むリポソーム懸濁物として製剤化した（総脂質量は１０ｍＭ）。この製剤を、患者の体重１ｋｇあたりの総脂質が０．５ｍｇになる用量で、２ｍｌ／分の速度で患者に全身投与した。

【０１９０】
治療中および治療後に、蛍光性画像化剤の蓄積を、リポソーム性蛍光色素に特異的な蛍光フィルターセットに接続した膀胱手術用の従来の内視鏡を用いて検出した。腫瘍組織中の蛍光色素の蓄積は、画像化法ならびに色素の分光光度的同定法で画像化した。腫瘍縁が蛍光標識されるため、腫瘍組織を正常膀胱上皮と明瞭に識別することが可能であり、腫瘍を完全に切除することができた。

【０１９１】
実施例１３：固形腫瘍の癌患者の画像化
ＭＲＩ画像化剤は一般に、実施例４および実施例７に記載されたプロトコルで調製されて癌患者に投与される。ＭＲＩ画像化剤は、４０ｍｏｌ％ＤＯＴＡＰ、６０ｍｏｌ％ＤＯＰＣ（総脂質濃度４０ｍＭ）、および９ｍＭのＦｅ濃度を含むリポソーム製剤として製剤化される。１０ｍｌの製剤を、患者１人あたり約５ｍｇのＦｅとなるように、または約０．０６ｍｇＦｅ／ｋｇ体重（Ｆｅの現行投与量の約１０％）になるように８０ｋｇの患者に投与する。

【０１９２】
実施例１４：固形腫瘍をもつ癌患者の治療
実施例８の手順で調製された治療薬を、腫瘍治療用に調製してヒト患者に投与する。この製剤の治療的有効量を、一種またはそれ以上の固形腫瘍の増殖がみられる患者に静脈経由で投与する。治療は、循環性腫瘍抗原の減少および／または身体再吸収を含む一種または複数の縮小マーカーで判定される腫瘍縮小がみられるまで続けられる。次に製剤を用いる連続治療または間欠治療が、予防法、または総腫瘍縮小を確実なものとする方法として任意選択で行われる。

【０１９３】
実施例１５：後水晶体線維形成症患者の治療
後水晶体線維形成症の患者は、寒冷療法による切除（ｃｒｙｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｂｌａｔｉｏｎ）で治療される。また実施例１０に記載された治療用製剤も患者に投与される。除去域の血管再生は減少または予防される。

【０１９４】
実施例１６：併用療法
一種または複数の固形腫瘍をもつ患者は実施例１０の手順で治療を受ける。初期治療後に、患者は従来の化学療法、および／または放射線療法を受ける。治療の進行は、一般的な腫瘍学プロトコルによって必要に応じてモニタリングする。併用療法を行うことで、放射線または化学療法薬に対する患者の曝露を減らすことができる。

【０１９５】
実施例１７：治療用組成物と二次活性成分の供投与
実施例１０に記載されたリポソーム製剤を、ソープ（Ｔｈｏｒｐｅ）らによる米国特許第５，９６５，１３２号に記載された免疫毒素と同時に製剤化する。治療的有効量の同時製剤化リポソームを、一種または複数の腫瘍をもつ患者に投与する。腫瘍の縮小を観察する。

【０１９６】
実施例１８：創傷治癒
ｂＦＧＦまたはＶＥＧＦを含む、米国特許第５，８７９，７１３号に記載されたリポソーム組成物を、患者の創傷治癒の促進用に製剤化する。ｂＦＧＦまたはＶＥＧＦの治療的有効量を、ＤＯＴＡＰ：ＤＯＰＣ（４０：６０）を含むリポソーム組成物に添加する。治療的有効量のリポソーム製剤を、創傷治癒を必要とする患者に投与する。創傷治癒を観察する。

【０１９７】
前述の考察および実施例が単に一つの好ましい態様の詳細な説明を示していることは明らかである。したがって、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、さまざまな変更および同等物が可能であることは当業者には明らかである。本特許出願で示されるすべての学術論文記事、他の参照、特許、特許出願は、その全体が参照として組み入れられる。

【０１９８】
参照

Claims

（ａ）ｐＨが約７．５の約０．０５ｍＭＫＣｌ溶液中における約＋２５ｍＶから＋１００ｍＶの範囲のζ（ゼータ）電位、および（ｂ）７．５を上回る等電点からなる群より選択される一つまたは複数の特徴を有するように組成物を修飾する段階を含む、組成物が活性化血管部位に選択的に標的化して診断的有効レベルで動物の活性化血管部位の近傍に蓄積する能力を増強する方法であり、以下の群より選択される組成物をもたらす方法：
（ａ）ｐＨが約７．５の約０．０５ｍＭＫＣｌ溶液中における約＋２５ｍＶから＋１００ｍＶの範囲のζ電位を有する、リポソームを除く粒子；
（ｂ）７．５を上回る等電点をもつ分子；
（ｃ）約２５ｍｏｌ％から５０ｍｏｌ％の範囲の陽イオン性脂質を含み、かつｐＨが約７．５の約０．０５ｍＭＫＣｌ溶液中における約＋２５ｍＶから＋１００ｍＶの範囲のζ電位を有するリポソーム；
（ｄ）ｐＨが約７．５の約０．０５ｍＭＫＣｌ溶液中における約＋２５ｍＶから＋１００ｍＶの範囲のζ電位を有する陽イオン性脂質層をもつ磁性体（ｍａｇｎｅｔｏｓｏｍｅ）；および
（ｅ）外層において約２５ｍｏｌ％から６０ｍｏｌ％の範囲で、二本の脂肪酸鎖かアルキル鎖を有することに特徴付けられる陽イオン性両親媒性物質を含むか、もしくはｐＨが約７．５の約０．０５ｍＭＫＣｌ溶液中における約＋２５ｍＶから＋１００ｍＶの範囲のζ電位を有する、水中油型のエマルジョンもしくはマイクロエマルジョン。
組成物が、ｐＨが約７．５の約０．０５ｍＭＫＣｌ溶液中における約＋２５ｍＶから＋６０ｍＶの範囲のζ電位、好ましくはｐＨが約７．５の約０．０５ｍＭＫＣｌ溶液中における約＋３０ｍＶから＋５０ｍＶの範囲のζ電位を有する、請求項１記載の方法。
組成物が、画像化剤または治療的活性成分を含む画像化用組成物または治療用組成物であり、かつ好ましくは、酸化鉄粒子、色素、蛍光色素、ＮＭＲ標識、シンチグラフィ標識、金粒子、ＰＥＴ標識、超音波造影剤（ｃｏｎｔｒａｓｔｍｅｄｉａ）、およびＣＴ造影剤からなる群より選択される、またはタキサン、エポシロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）Ａ、エポシロンＢ、エポシロンＤおよびそれらの誘導体、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｅｃｉｎ）、無機錯体、有糸分裂阻害剤、ホルモン、アントラサイクリン、抗体、トポイソメラーゼ阻害剤、抗炎症薬、アルカロイド、インターロイキン、サイトカイン、成長因子、タンパク質、ペプチド、ならびにテトラサイクリンなどの細胞増殖抑制剤ならびに細胞毒性剤からなる群より選択される、請求項１または２記載の方法。
組成物が、非修飾薬剤に対して薬剤の等電点を７．５を上回る値まで上昇させる、エチレンジアミン、ヘキサメチレンジアミン、トリエチレンテトラアミン、４− ジメチルアミノブチルアミン、Ｎ，Ｎ− ジメチルアミノエチルアミン、ジメチルアミノベンズアルデヒド、ポリリシン、およびキトサンなどの陽イオン生成試薬による反応を介して修飾される、請求項１から３のいずれか一項記載の方法。
活性化血管部位が血管新生関連部位を示して（ａ）血管新生部位；（ｂ）炎症部位；（ｃ）創傷治癒部位；および（ｄ）血液脳関門からなる群より選択される、かつ好ましくは、血管新生関連疾患が糖尿病性網膜症、慢性炎症性疾患、慢性関節リウマチ、皮膚炎、乾癬、胃潰瘍、血液（ｈｅｍａｔｏｇｅｎｏｕｓ）腫瘍および固形腫瘍ならびにそれらの転移からなる群より選択される、請求項１から４のいずれか一項記載の方法。
動物が哺乳動物である、請求項１から５のいずれか一項記載の方法。
組成物が、ｐＨが約７．５の約０．０５ｍＭＫＣｌ溶液中における約＋２５ｍＶから＋１００ｍＶの範囲のζ電位、または７．５を上回る等電点をもち、さらに組成物が随意に（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）、血管新生関連疾患を治療するための組成物の投与に関してラベル表示されるまたは説明書とともに包装される、血管新生関連疾患の治療および／または炎症の阻害および／または骨修復もしくは創傷治癒の促進のための治療的に有効な活性成分を含む、請求項１から６のいずれか一項記載の方法によって作製される治療用組成物。
活性成分が、エーテル脂質、アルキルリゾレシチン、アルキルリゾリン脂質、リゾ脂質、アルキルリン脂質からなる群より選択され、好ましくはエーテル脂質が、１−Ｏ− オクタデシル −２−Ｏ− メチル −ｒａｃ− グリセロ −３− ホスホコリン、１−Ｏ− ヘキサデシル −２−Ｏ− メチル −ｓｎ− グリセロール、ヘキサデシルホスホコリン、オクタデシルホスホコリンからなる群より選択される、請求項７記載の組成物。
組成物が、ｐＨが約７．５の約０．０５ｍＭＫＣｌ溶液中における約＋２５ｍＶから＋１００ｍＶの範囲のζ電位、または７．５を上回る等電点をもち、さらに組成物が随意に、血管新生関連疾患を診断または画像化するための組成物の投与に関してラベル表示されるまたは説明書とともに包装される、血管新生関連疾患の診断または画像化に診断的に有効な活性成分を含む、請求項１から６のいずれか一項記載の方法によって作製される診断用組成物。
以下を含む、請求項７または９記載の組成物：
（ａ）ｐＨが約７．５の約０．０５ｍＭＫＣｌ溶液中における約＋２５ｍＶから＋１００ｍＶの範囲のζ電位を有する、リポソームを除く粒子；
（ｂ）７．５を上回る等電点をもつ分子；
（ｃ）約２５ｍｏｌ％から５０ｍｏｌ％の範囲の陽イオン性脂質を含み、かつｐＨが約７．５の約０．０５ｍＭＫＣｌ溶液中における約＋２５ｍＶから＋１００ｍＶの範囲のζ電位を有するリポソーム；
（ｄ）ｐＨが約７．５の約０．０５ｍＭＫＣｌ溶液中における約＋２５ｍＶから＋１００ｍＶの範囲のζ電位を有する陽イオン性脂質層をもつ磁性体；または
（ｅ）外層において約２５ｍｏｌ％から６０ｍｏｌ％の範囲で二本の脂肪酸鎖かアルキル鎖を有することに特徴付けられる陽イオン性両親媒性物質を含むか、もしくはｐＨが約７．５の約０．０５ｍＭＫＣｌ溶液中における約＋２５ｍＶから＋１００ｍＶの範囲のζ電位を有する、水中油型のエマルジョンもしくはマイクロエマルジョン。
哺乳動物などの動物の活性化血管部位の近傍に選択的に標的化して治療的有効レベルまで蓄積する薬剤を作製するための、請求項７から１０のいずれか一項記載の組成物の使用。
特定部位を標的とする組成物の最適ζ電位を決定するための方法であり、以下の段階を含む方法：
（ｉ）陽イオン性組成物の濃度を変化させながら組成物のζ電位を測定する段階；
（ｉｉ）ζ電位の値をｙ軸に、陽イオン性成分の濃度をｘ軸にプロットして双曲線を得る段階；および
（ｉｉｉ）双曲線が曲がった領域が組成物の最適ζ電位を示す、双曲線が曲がった領域における陽イオン性組成物のζ電位および濃度を決定する段階。
請求項７から１０のいずれか一項記載の組成物を動物に投与する段階、および組成物を有効なレベルまで血管新生部位の近傍に選択的に蓄積させる段階を含む、組成物を哺乳動物などの動物の血管新生部位に選択的に標的化する方法。
経口投与、静脈内投与、経皮投与、皮下投与、腹腔内投与、腫瘍内投与、動脈内投与、筋肉内投与、点眼およびエアロゾル投与からなる群より選択される経路によって組成物を投与する、請求項１３記載の方法。