JP2003525840A - アポリポタンパク質ａ−１アゴニストおよび異常脂肪血障害を治療するためのその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ヒトＡｐｏＡ−１の構造および薬理特性を模擬するペプチドおよびペプチド類似体を提供する。これらのペプチドおよびペプチド類似体は異常脂肪血と関連したさまざまな障害を治療するのに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

１．序 本発明は、異常リポタンパク血症に関連する疾患、例えば、高コレステロール
血症、心臓血管疾患、アテローム性動脈硬化症、再発狭窄症、および敗血症性シ
ョックのような他の疾患を治療するためのアポリポタンパク質Ａ−Ｉ（ＡｐｏＡ
−Ｉ）アゴニスト組成物に関する。 ２．発明の背景 循環コレステロールは、血液中で脂質を輸送する脂質・タンパク質複合組成物
粒子である血漿リポタンパク質によって運ばれる。低密度リポタンパク質（ＬＤ
Ｌ）および高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）は、主要なコレステロール担体であ
る。ＬＤＬは、生体中において肝臓（ここで、コレステロールが食物源から合成
されるかまたは取り出される）から肝外組織へコレステロールを送達する役割を
担っていると考えられる。「逆コレステロール輸送」という用語は、肝外組織か
ら、コレステロールが異化および除去される肝臓へ、コレステロールを輸送する
ことを意味する。血漿ＨＤＬ粒子は、組織コレステロールのスカベンジャーとし
て作用し、逆輸送過程における主要な役割を果たすと考えられる。 血清コレステロールの増加を冠状動脈性心疾患に関連づける証拠は、決定的な
ものである。例えば、アテローム性動脈硬化症は、動脈壁中へのコレステロール
の蓄積によって特性付けられる進行の遅い疾患である。アテローム性動脈硬化病
巣に沈着する脂質は主として血漿ＬＤＬに由来するという考え方を支持する有力
な証拠がある。従って、ＬＤＬは「悪玉」コレステロールとして一般に知られる
ようになった。これとは対照的に、ＨＤＬ血清レベルは、冠状動脈性心疾患と逆
相関関係にある。実際に、ＨＤＬの高血清レベルは、ネガティブな（ｎｅｇａｔ
ｉｖｅ）危険因子と見なされる。血漿ＨＤＬのレベルが高いと冠状動脈疾患が防
止されるだけでなく、実際にアテローム性動脈硬化斑の退縮を誘発しうるという
仮説が立てられている（例えば、Ｂａｄｉｍｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｃ
ｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ８６（Ｓｕｐｐｌ．ＩＩＩ）：８６−９４を参照された
い）。このため、ＨＤＬは、「善玉」コレステロールとして一般に知られている
。 ２．１．コレステロール輸送 脂肪輸送系は、２つの経路：すなわち、腸から吸収されるコレステロールおよ
びトリグリセリドのための外因性経路と、肝臓および他の非肝臓組織から血流中
に入るコレステロールおよびトリグリセリドのための内因性経路と、に分割する
ことができる。 外因性経路では、食物脂肪は、キロミクロンと呼ばれるリポタンパク質粒子中
にパッケージ化される。このキロミクロンは、血流中に入ってそれらのトリグリ
セリドを脂肪組織（貯蔵するため）および筋肉（酸化させてエネルギーを供給す
るため）に送達する。キロミクロンの残りの部分（コレステリルエステルが含ま
れる）は、肝細胞上にのみ見出される特異的受容体によって循環系から除去され
る。次に、このコレステロールは、細胞代謝のためにまたは血漿リポタンパク質
として肝外組織へ再循環させるために再び利用可能となる。 内因性経路では、肝臓は、大きな超低密度リポタンパク質粒子（ＶＬＤＬ）を
血流中に分泌する。ＶＬＤＬのコアは、ほとんど、肝臓で合成されたトリグリセ
リドから成り、そのほかに、より小量のコレステリルエステル（肝臓で合成され
るかまたはキロミクロンから再循環される）を含む。ＶＬＤＬの表面上には、２
種の主要タンパク質、すなわち、アポタンパク質Ｂ−１００およびアポタンパク
質Ｅがディスプレイされる。ＶＬＤＬが脂肪組織のまたは筋肉の毛細管に達する
と、そのトリグリセリドが抽出されて、新しい種類の粒子が生成する。この粒子
は、サイズが減少してコレステリルエステルが富化されるが、中間密度リポタン
パク質（ＩＤＬ）と呼ばれるその２種のアポタンパク質は保持される。 ヒトでは、ＩＤＬ粒子の約半分は循環系から迅速に除去される（それらが形成
されてから２〜６時間以内）。なぜなら、それらのコレステロールを抽出して新
しいＶＬＤＬおよび胆汁酸を形成する肝細胞にＩＤＬ粒子が強く結合するからで
ある。肝臓に吸収されないＩＤＬ粒子は、循環系中に、より長く残存する。やが
て、アポタンパク質Ｅは、循環粒子から解離し、その結果、該粒子は、それらの
唯一のタンパク質としてアポタンパク質Ｂ−１００を有するＬＤＬに変化する。 主として、肝臓は、コレステロールの大部分を吸収して分解し、コレステロー
ル代謝の最終産物である胆汁酸を生成する。コレステロール含有粒子の吸収は、
肝細胞上に高濃度で存在するＬＤＬ受容体によって媒介される。ＬＤＬ受容体は
、アポタンパク質Ｅとアポタンパク質Ｂ−１００の両方に結合し、ＩＤＬとＬＤ
Ｌの両方に結合してそれらを循環系から除去する役割を担っている。しかしなが
ら、ＬＤＬ受容体に対する親和力は、アポタンパク質Ｅの方がアポタンパク質Ｂ
−１００よりも大きい。その結果、ＬＤＬ粒子は、ＩＤＬ粒子よりもはるかに長
い循環寿命を有する。すなわち、ＬＤＬ粒子は、平均で２日半にわたり循環した
後、肝臓および他の組織に結合する。ＬＤＬ（「悪玉」コレステロール）の血清
レベルが高いことは、冠状動脈性心疾患と明確に関連づけられる。例えば、アテ
ローム性動脈硬化症では、循環ＬＤＬに由来するコレステロールが動脈の壁に蓄
積することにより、血液の流れを妨害する嵩高いプラークが形成され、結果とし
て、血餅を生じて動脈が遮断され、心臓発作または拍動を引き起こす。 最終的には、ＬＤＬから放出される細胞内コレステロールの量によって、細胞
コレステロール代謝が制御される。ＶＬＤＬおよびＬＤＬに由来する細胞コレス
テロールの蓄積は、３つのプロセスを制御する。第１に、こうした蓄積が起こる
と、コレステロールの生合成経路における中心的な酵素であるＨＭＧＣｏＡレダ
クターゼの合成を停止させることによって、細胞コレステロールの合成が抑制さ
れる。第２に、ＬＤＬ由来のコレステロールが流入すると、コレステロールを貯
蔵小滴中に沈着するコレステリルエステルに変換する細胞酵素であるＡＣＡＴを
活性化させることによって、コレステロールの貯蔵が促進される。第３に、細胞
内にコレステロールが蓄積すると、新しいＬＤＬ受容体の細胞合成を妨害するフ
ィードバック機構が作動する。従って、代謝の要求に合わせて負荷をかけすぎる
ことなく十分なコレステロールを取り込めるように、細胞はＬＤＬ受容体のそれ
らの補体を調節する。（レビューに関しては、Ｂｒｏｗｎ ＆ Ｇｏｌｄｓｔｅ
ｉｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ Ｏｆ Ｔｈｅｒ
ａｐｅｕｔｉｃｓ， ８ｔｈ Ｅｄ．， Ｇｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｍａｎ，
Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９９０，Ｃｈ．３６，ｐｐ．８７４−
８９６を参照されたい）。 ２．２．逆コレステロール輸送 要するに、末梢（非肝）細胞は、ＶＬＤＬおよびＬＤＬに由来するプレフォー
ム型ステロールの局所合成と吸収とを組み合わせて、それらのコレステロールを
獲得する。これとは対照的に、逆コレステロール輸送（ＲＣＴ）は、肝外組織へ
再循環させるために、または改変された形または胆汁酸のような酸化された形で
胆汁として腸中に分泌するために、末梢細胞コレステロールを肝臓に戻すことの
できる経路である。ＲＣＴ経路は、ほとんどの肝外組織からコレステロールを除
去する唯一の手段であり、生体中のほとんどの細胞の構造および機能を維持する
うえで極めて重要である。 ＲＣＴは、主に３つのステップ：すなわち、末梢細胞の種々のプールからコレ
ステロールを最初に除去するステップであるコレステロール流出ステップと、（
ｂ）レシチン：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）の作用に
よりコレステロールをエステル化し、流出したコレステロールが再び細胞中に流
入するのを防止するステップと、（ｃ）肝細胞中へのＨＤＬコレステリルエステ
ルの吸収／送達を行うステップと、から成る。ＲＣＴ経路は、ＨＤＬによって媒
介される。ＨＤＬは、高密度であることによって特性付けられるリポタンパク質
粒子に対する一般的な用語である。ＨＤＬ複合体の主な脂質成分は、種々のリン
脂質、コレステロール（エステル）、およびトリグリセリドである。最も目立つ
アポリポタンパク質成分は、ＨＤＬの機能特性を決定するＡ−ＩおよびＡ−ＩＩ
である。更に、少量のアポリポタンパク質Ｃ−Ｉ、Ｃ−ＩＩ、Ｃ−ＩＩＩ、Ｄ、
Ｅ、Ｊなども観測されている。代謝ＲＣＴカスケード中のリモデリング状態にも
よるが、ＨＤＬは、上記の成分の種々の混合物として多種多様な異なるサイズで
存在することができる。 ＲＣＴ経路に関与する中心的な酵素は、ＬＡＣＴである。ＬＡＣＴは、主に肝
臓で産生され、ＨＤＬ画分と会合して血漿中を循環する。ＬＡＣＴは、除去を目
的として、細胞由来のコレステロールを、ＨＤＬ中に隔離されるコレステリルエ
ステルに変換する。コレステリルエステル運搬タンパク質（ＣＥＴＰ）およびリ
ン脂質運搬タンパク質（ＰＬＴＰ）は、循環ＨＤＬ集団の更なるリモデリングに
寄与する。ＣＥＴＰは、ＬＡＣＴによって形成されたコレステリルエステルを、
他のリポタンパク質、特に、ＡｐｏＢ含有リポタンパク質、例えば、ＶＬＤＬお
よびＬＤＬに移動することができる。ＰＬＴＰは、レシチンをＨＤＬに供給する
。ＨＤＬトリグリセリドは、細胞外肝臓トリグリセリドリパーゼにより異化可能
であり、リポタンパク質コレステロールは、いくつかの機構を介して肝臓により
除去される。 各ＨＤＬ粒子には、ＡｐｏＡ−Ｉの少なくとも１つのコピー（通常、２つ〜４
つのコピー）が含まれる。ＡｐｏＡ−Ｉは、急速に開裂して２４３個のアミノ酸
残基を有する成熟ポリペプチドを発生させるプロタンパク質として分泌されるプ
レプロアポリポタンパク質として肝臓および小腸により合成される。ＡｐｏＡ−
Ｉは、主に、プロリンであることの多いリンカー部分で区切られた異なる２２ア
ミノ酸リピート６〜８個から成り、いくつかの場合、数個の残基から構成された
ストレッチから成る。ＡｐｏＡ−Ｉは、脂質との３つのタイプの安定な複合体：
すなわち、プレβ１ＨＤＬと呼ばれる、脂質の少ない小さな複合体と、プレβ２
ＨＤＬと呼ばれる、極性脂質（リン脂質およびコレステロール）を含有する平た
い円盤状粒子と、球状ＨＤＬまたは成熟ＨＤＬ（ＨＤＬ３およびＨＤＬ２）と呼
ばれる、極性および非極性脂質の両方を含有する球状粒子と、を形成する。循環
集団中の大部分のＨＤＬは、ＡｐｏＡ−ＩとＡｐｏＡ−ＩＩ（第２の主要なＨＤ
Ｌタンパク質）の両方を含んでおり、本明細書中ではＨＤＬのＡＩ／ＡＩＩ−Ｈ
ＤＬ画分と記す．しかしながら、ＡｐｏＡ−Ｉだけを含むＨＤＬの画分（本明細
書中ではＡＩ−ＨＤＬ画分と記す）は、ＲＣＴにより効果的であると思われる。
ＡＩ−ＨＤＬ画分は抗アテローム性であるという仮説は、特定の疫学的研究によ
って支持される。（Ｐａｒｒａ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃ
ｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．１２：７０１−７０７； Ｄｅｃｏｓｓｉｎ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９７，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２７：２９９−３０７
）。 細胞の表面からのコレステロールの運搬（すなわち、コレステロールの流出）
に対する機構については分かっていないが、脂質の少ない複合体であるプレβ１
ＨＤＬは、ＲＣＴに関与する末梢組織から運搬されるコレステロールに対する好
ましい受容体であると考えられる。（Ｄａｖｉｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９
４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２２９７５−２２９８２；Ｂｉｅｌｉｃ
ｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．３３：１６９９−１
７０９；Ｒｏｔｈｂｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ
．３３：１０９１−１０９７；およびＫａｗａｎｏ ｅｔ ａｌ．，１９９３，
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３２：５０２５−５０２８；Ｋａｗａｎｏ ｅｔ
ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３６：９８１６−９８２５を参
照されたい）。細胞の表面からコレステロールを補う過程の間、プレβ１ＨＤＬ
はプレβ２ＨＤＬに迅速に変換される。ＰＬＴＰは、プレβ２円盤の形成速度を
増大させる可能性があるが、ＲＣＴにおけるＰＬＴＰの役割を示唆するデータは
不足している。ＬＡＣＴは、円盤状および球状のＨＤＬと優先的に反応し、レシ
チンまたは他のリン脂質の２−アシル基をコレステロールの遊離ヒドロキシル残
基に転移し、コレステリルエステル（ＨＩＬ中に保持される）およびリゾレシチ
ンを生成する。ＬＡＣＴ反応には、アクチベーターとしてＡｐｏＡ−Ｉが必要で
ある。すなわち、ＡｐｏＡ−Ｉは、ＬＣＡＴに対する天然の補因子である。コレ
ステロールを、ＨＤＬ中に隔離されるそのエステルに変換すると、細胞中へのコ
レステロールの再流入が防止され、結果として、コレステリルエステルが除去さ
れることになる。ＡＩ−ＨＤＬ画分（すなわち、ＡｐｏＡ−Ｉは含まれるがＡｐ
ｏＡ−ＩＩは含まれない画分）中の成熟ＨＤＬ粒子に含まれるコレステリルエス
テルは、ＡｐｏＡ−ＩとＡｐｏＡ−ＩＩの両方を含有するＨＤＬ（ＡＩ／ＡＩＩ
−ＨＤＬ画分）に由来するコレステリルエステルよりも効果的に、肝臓によって
除去および処理されて胆汁に変換される。この原因の一部分として、ＡＩ−ＨＤ
Ｌがより効果的に肝細胞膜に結合することが考えられる。ＨＤＬ受容体が存在す
るという仮説が立てられ、更に、最近、スカベンジャー受容体ＳＲ−ＢＩがＨＤ
Ｌ受容体として同定された（Ａｃｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２７１：５１８−５２０； Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｌｉｐｉｄ
Ｒｅｓ．３８：１２８９−１２９８）。ＳＲ−ＢＩは、ステロイド産生組織（
例えば、副腎）中および肝臓中で最も多く発現される（Ｌａｎｄｓｈｕｌｚ ｅ
ｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９８：９８４−９９５；
Ｒｉｇｏｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１
：３３５４５−３３５４９）。 ＣＥＴＰは、ＲＣＴで主要な役割を果たすとは思われないが、その代わりに、
ＶＬＤＬおよびＬＤＬ由来の脂質の代謝に関与する。しかしながら、ＣＥＴＰ活
性の変化またはそのアクセプターであるＶＬＤＬおよびＬＤＬは、ＨＤＬ集団を
「リモデリング」するという役割を果たす。例えば、ＣＥＴＰの不在下において
、ＨＤＬは、排除されない増大粒子になる。（ＲＣＴおよびＨＤＬに関するレビ
ューについては、Ｆｉｅｌｄｉｎｇ ＆ Ｆｉｅｌｄｉｎｇ，１９９５，Ｊ．Ｌ
ｉｐｉｄ Ｒｅｓ．３６：２１１−２２８； Ｂａｒｒａｎｓ ｅｔ ａｌ．，
１９９６，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１３００：７３−８５
；Ｈｉｒａｎｏ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．
Ｔｈｒｏｍｂ． Ｖａｓｃ． Ｂｉｏｌ．１７（６）：１０５３−１０５９を参
照されたい）。 ２．３．異常リポタンパク血症に対する現在の治療法 血清コレステロールおよびトリグリセリドを低減させるために、現在、多数の
治療法が利用可能である（例えば、前述のブラウン＆ Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎの文
献を参照されたい）。しかしながら、いずれの方法にも、効力、副作用、および
患者集団の適性に関して、それぞれに特有な欠点および制限がある。 胆汁酸結合樹脂は、腸から肝臓への胆汁酸のリサイクルを阻害する薬剤のクラ
スであり、具体的には、コレスチラミン（Ｑｕｅｓｔｒａｎ Ｌｉｇｈｔ（登録
商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）および塩酸コレスチポー
ル（Ｃｏｌｅｓｔｉｄ（登録商標）、Ｔｈｅ Ｕｐｊｏｈｎ Ｃｏｍｐａｎｙ）
が挙げられる。経口投与した場合、これらの正に帯電した樹脂は、腸中において
負に帯電した胆汁酸に結合する。樹脂が腸から吸収されることはありえないので
、樹脂は、胆汁酸を伴って排泄される。しかしながら、このような樹脂を使用し
た場合、せいぜい、血清コレステロールレベルが約２０％低下するにすぎず、し
かも、胃腸の副作用、例えば、便秘症および特定のビタミン欠乏症を併発する。
更に、樹脂が他の薬剤に結合するため、樹脂摂取の少なくとも１時間前または４
〜６時間後、他の経口薬を服用しなければならない。従って、心臓病患者の薬剤
療法が複雑になる。 スタチンは、コレステロール減少剤であり、コレステロール生合成経路に関与
する中心的な酵素であるＨＭＧＣｏＡレダクターゼを阻害することによってコレ
ステロール合成をブロックする。スタチン、例えば、ロバスタチン（Ｍｅｖａｃ
ｏｒ（登録商標）， Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．）およびプラバスタチ
ン（Ｐｒａｖａｃｈｏｌ（登録商標）， Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕ
ｉｂｂ Ｃｏ．）は、胆汁酸結合樹脂と併用される。スタチンは、血清コレステ
ロールレベルおよびＬＤＬ血清レベルを著しく減少させ、アテローム性冠状動脈
硬化症の進行を遅らせる。しかしながら、血清ＨＤＬコレステロールレベルは、
中程度にすぎないが増加する。ＬＤＬ減少作用の機構には、ＶＬＤＬ濃度の低下
とＬＤＬ受容体の細胞発現の誘発の両方が関与し、結果として、ＬＤＬ産生の低
下および／またはＬＤＬ異化の増大が起こるものと考えられる。肝臓および腎臓
の機能不全などの副作用は、これらの薬剤の使用と関連づけられる（Ｐｈｙｓｉ
ｃｉａｎｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉ
ｃｓ Ｃｏ．， Ｉｎｃ．，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．，１９９７）。最近、
ＦＤＡは、稀ではあるが急を要する家族性高コレステロール血症患者を治療する
ために、アトルバスタチン（Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓにより開発されたＨＭＧＣ
ｏＡレダクターゼ阻害剤）（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ）の市販を承認した
（１９９５，Ｓｃｒｉｐ ２０（１９）：１０）。 ナイアシンすなわちニコチン酸は、栄養補給食品および抗高脂質血症薬として
使用される水溶性ビタミンＢ複合体である。ナイアシンは、ＶＬＤＬの産生を減
少させ、かつ効果的にＬＤＬを低減させる。場合により、ナイアシンは、胆汁酸
結合樹脂と併用される。ナイアシンは、適切な用量で使用した場合、ＨＤＬを増
大させることができるが、このような高用量で使用した場合、重度の副作用によ
りその有用性は制限される。 フィブレートは、高コレステロール血症とも関連づけることのできる種々の形
態の高脂質血症（すなわち、血清トリグリセリドの増大）を治療するために使用
される脂質減少薬剤のクラスである。フィブレートは、ＶＬＤＬ画分を減少させ
、ＨＤＬを中程度に増大させると思われるが、これらの薬剤が血清コレステロー
ルに及ぼす作用は様々である。米国において、フィブレートは、抗高脂血症薬と
して使用することが認められているが、高コレステロール血症薬としては認可さ
れていない。例えば、クロフィブレート（Ａｔｒｏｍｉｄ−Ｓ（登録商標），
Ｗｙｅｔｈ−Ａｙｅｒｓｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）は、ＶＬＤＬ画分を減
少させることによって血清トリグリセリドを低減させる働き（その機構は分かっ
ていない）をする抗高脂血症薬である。特定の患者の小集団で血清コレステロー
ルを減少させることは可能であるが、薬剤に対する生化学的反応は様々であり、
必ずしも、好ましい結果がどの患者に現れるかを予測できるわけではない。Ａｔ
ｒｏｍｉｄ−Ｓ（登録商標）が冠状動脈性心疾患の予防に有効であることは実証
されていない。化学的および薬理学的関連薬剤であるジェムフィブロジル（Ｌｏ
ｐｉｄ（登録商標）， Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ）は、脂質調節薬であり、血清
トリグリセリドおよびＶＬＤＬコレステロールを中程度に減少させ、ＨＤＬコレ
ステロール、すなわち、ＨＤＬ２およびＨＤＬ３サブ画分ならびにＡｐｏＡ−Ｉ
およびＡ−ＩＩの両方（すなわち、ＡＩ／ＡＩＩ−ＨＤＬ画分）を中程度に増大
させる。しかしながら、特に患者集団が異なると、脂質応答は様々に変化する。
更に、既存の冠状動脈性心疾患の病歴または徴候のない４０〜５５歳の男性患者
で冠状動脈性心疾患の防止が観測されたが、これらの知見がどの程度まで他の患
者集団（例えば、女性、より老年および若年の男性）に適用できるかは明確でな
い。実際のところ、冠状動脈性心疾患であることが立証された患者では、効力は
まったく観測されなかった。毒性などの重度の副作用、例えば、悪性疾患、（特
に、胃腸癌）、胆嚢疾患、および冠状動脈以外の原因による死亡率の増加は、フ
ィブレートの使用と関連付けられる。これらの薬剤は、高ＬＤＬまたは低ＨＤＬ
が唯一の脂質異常である患者には必要でない（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓ
ｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，１９９７，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃ
ｏ．，Ｉｎｃ．Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．）。 閉経後の女性の中程度の高コレステロール血症に対して、経口エストロゲン代
償療法を適用することも考えられる。しかしながら、ＨＤＬを増加させるとそれ
に伴ってトリグリセリドも増加する可能性がある。エストロゲン療法は、もちろ
ん、特定の患者集団（閉経後の女性）に限定され、しかも、悪性新生物、胆嚢疾
患、血栓閉塞疾患、肝細胞腺種、高血圧症、ブドウ糖不耐症、および高カルシウ
ム血症の誘発などの重度の副作用を伴う。 従って、血清コレステロールを低減しＨＤＬ血清レベルを増加させて、冠状動
脈性心疾患の予防および／または既存の疾患、特にアテローム性動脈硬化症の治
療を行うのに有効であるより安全な薬剤の開発が必要である。 ２．４．目標物としてのＡｐｏＡ−Ｉ コレステロールを安全に低減させるための現用の薬剤の中には、ＨＤＬレベル
を増大させ、ＲＣＴを刺激するものはまったくなく、ほとんどは、コレステロー
ル輸送経路に作用して、コレステロールの食物摂取、再循環、および合成、なら
びにＶＬＤＬ集団を調節するものと考えられる。 コレステロールの流出および除去を刺激する薬剤を探索することが望ましく、
ＲＣＴにおいていくつかの有望な目標物、すなわち、ＬＡＣＴ、ＨＤＬ、その種
々の成分（ＡｐｏＡ−Ｉ、ＡｐｏＡ−ＩＩ、およびリン脂質）、ＰＬＴＰ、なら
びにＣＥＴＰが存在するが、どの目標物が、所望のリポタンパク質プロフィルお
よび予防効果を得るのに最も有効であるかは分かっていない。ＲＣＴにおいて、
いずれかの成分１つが変化させると、最終的に、循環リポタンパク質集団の組成
およびＲＣＴの効率が影響を受ける。 ｉｎ ｖｉｖｏで得られたデータに基づくいくつかの系統の証拠から、ＨＤＬ
およびその主要タンパク質成分であるＡｐｏＡ−Ｉが、アテローム性動脈硬化症
を予防し、場合によりプラークを退縮させることが示唆される。従って、これら
の魅力的な目標物は治療に役立てることができると考えられる。第１に、ヒトに
おいて、血清ＡｐｏＡ−Ｉ（ＨＤＬ）濃度とアテローム形成との間には、逆相関
関係がある（Ｇｏｒｄｏｎ ＆ Ｒｉｆｋｉｎｄ，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．
Ｍｅｄ．３２１：１３１１−１３１６； Ｇｏｒｄｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８
９，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ７９：８−１５）。実際に、ヒトにおいて、ＨＤ
Ｌの特定の小集団が、アテローム性動脈硬化症の危険率の低減と関連付けられた
（Ｍｉｌｌｅｒ，１９８７，Ａｍｅｒ．Ｈｅａｒｔ １１．３：Ｓ８９−５９７
； Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．３２：３８
３−３９４；Ｆｒｕｃｈａｒｔ ＆ Ａｉｌｂａｕｄ，１９９２，Ｃｌｉｎ．Ｃ
ｈｅｍ．３８：７９）。 第２に、動物実験から、ＡｐｏＡ−Ｉ（ＨＤＬ）の予防的役割が支持される。
コレステロールを摂取したウサギをＡｐｏＡ−ＩまたはＨＤＬで処置したところ
、プラークの発生および進行が軽減した。（Ｋｏｉｚｕｍｉ ｅｔ ａｌ．，１
９８８，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ． ２９：１４０５−１４１５； Ｂａｄｉｍ
ｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９８９， Ｌａｂ． Ｉｎｖｅｓｔ．６０：４５５−
４６１； Ｂａｄｉｍｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９９０， Ｊ． Ｃｌｉｎ．
Ｉｎｖｅｓｔ． ８５：１２３４−１２４１）。しかしながら、その効力は、Ｈ
ＤＬの供給源に依存して変化した（Ｂｅｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒ
ｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ，Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ ａｎｄ Ｅｓｓｅｎｔ
ｉａｌ Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄｓ ４７：１４９−１５２； Ｍｅｚｄｏｕｒ
ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ１１３：２３７
−２４６）。 第３に、トランスジェニック動物を関与させた実験から、ＡｐｏＡ−Ｉの役割
の直接の証拠が得られた。マウスに転移させたＡｐｏＡ−Ｉのためのヒト遺伝子
の発現は、食事性アテローム動脈硬化症について大動脈の損傷の発症に対して防
御する素因を遺伝的に与えた（Ｒｕｂｉｎら、１９９１，Ｎａｔｕｒｅ ３５３
：２６５−２６７）。このＡｐｏＡ−ＩトランスジーンはＡｐｏＥ欠失マウスお
よびＡｐｏ（ａ）トランスジェニックマウスにおいてアテローム動脈硬化症を抑
制することもまた示された（Ｐａｓｚｔｙら、１９９４，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖ
ｅｓｔ．９４：８９９−９０３；Ｐｌｕｍｐら、１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：９６０７−９６１１；Ｌｉｕら、１９９４
，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．３５：２２６３−２２６６）。同様の結果が、ヒト
ＡｐｏＡ−Ｉを発現するトランスジェニックラビット（Ｄｕｖｅｒｇｅｒ，１９
９６，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９４：７１３−７１７；Ｄｕｖｅｒｇｅｒら、
１９９６，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．１
６：１４２４−１４２９）およびアテローム動脈硬化症を防御するヒトＡｐｏＡ
−Ｉレベルが上昇し、そしてバルーン血管形成術後の再狭窄が阻害されたトラン
スジェニックラット（Ｂｕｒｋｅｙら、１９９２，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，Ｓ
ｕｐｐｌｅｍｅｎｔ Ｉ，８６：Ｉ−４７２，Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．１８７
６；Ｂｕｒｋｅｙら、１９９５，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．３６：１４６３−１
４７３）において、観察された。 ＡＩ−ＨＤＬはＡＩ／ＡＩＩ−ＨＤＬ画分よりもＲＣＴにおいてより効果的で
あるようである。ヒトＡｐｏＡ−ＩまたはＡｐｏＡ−ＩおよびＡｐｏＡ−ＩＩ（
ＡＩ／ＡＩＩ）で形質転換したマウスによる研究から、ＨＤＬのタンパク質組成
がその役割に顕著に影響する、すなわちＡＩ−ＨＤＬの方がＡＩ／ＡＩＩ−ＨＤ
Ｌよりも抗アテローム誘発性であることが示された（Ｓｃｈｕｌｔｚら、１９９
３，Ｎａｔｕｒｅ ３６５：７６２−７６４）。ヒトＬＣＡＴ遺伝子を発現する
トランスジェニックマウスに関連した類似の研究で、ＬＣＡＴ活性の適度の上昇
がリポタンパク質コレステロールレベルを顕著に変化させること、およびＬＣＡ
ＴがＡｐｏＡ−Ｉを含有するＨＤＬに対して顕著な優先性を有することが証明さ
れている（Ｆｒａｎｃｏｎｅら、１９９５，Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃ．Ｉｎｖｅｓｔ．
９６：１４４０−１４４８；Ｂｅｒａｒｄら、１９９７，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ
ｉｃｉｎｅ ３（７）：７４４−７４９）。これらのデータはＬＣＡＴの活性化
およびＲＣＴの刺激におけるＡｐｏＡ−Ｉの顕著な役割を支持するものであるが
、その他の研究からさらに複雑なシナリオが証明されている。すなわち、細胞コ
レステロールの流出をモジュレートするＨＤＬの主要成分はリン脂質である（Ｆ
ｏｕｒｎｉｅｒら、１９９６，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．３７：１７０４−１７
１１）。 アテローム動脈硬化症に対する防御におけるＨＤＬ、すなわちＡｐｏＡ−Ｉお
よびこれに結合するリン脂質の両方の潜在的な役割の面から、組み換え産生され
たＡｐｏＡ−Ｉを利用するヒトの臨床試験がＵＣＢ Ｂｅｌｇｉｕｍによって開
始され、終了され、そして再開された模様であり（Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔ
ｓ，Ｏｃｔ．２７，１９９５；ＩＭＳ Ｒ＆Ｄ Ｆｏｃｕｓ，Ｊｕｎｅ ３０，
１９９７；Ｄｒｕｇ Ｓｔａｔｕｓ Ｕｐｄａｔｅ，１９９７，Ａｔｈｅｒｏｓ
ｃｌｅｒｏｓｉｓ ２（６）：２６１−２６５；Ｃｏｎｇｒｅｓｓ，”疾病予防
におけるＨＤＬの役割（Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ ＨＤＬ ｉｎ Ｄｉｓｅａｓ
ｅ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）”，Ｎｏｖ．７−９，１９９６，Ｆｏｒｔ Ｗｏｒ
ｔｈにおけるＭ．Ｅｒｉｋｓｓｏｎ；Ｌａｃｋｏ ＆ Ｍｉｌｌｅｒ，１９９７
，Ｊ．Ｌｉｐ．Ｒｅｓ．３８：１２６７−１２７３；およびＷＯ９４／１３８１
９も参照されたい）、そしてＢｉｏ−Ｔｅｃｈによって開始され終了された（Ｐ
ｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ａｐｒｉｌ ７，１９８９）。敗血症性ショック
を治療するために、ＡｐｏＡ−Ｉを使用する試験も試みられた（Ｏｐａｌ，”敗
血症の治療戦略としての再構築ＨＤＬ（Ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ ＨＤＬ
ａｓ ａ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｓｔｒａｔｅｇｙ ｆｏｒ Ｓｅｐｓｉｓ），
”ＩＢＣ’ｓ ７ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ
ｏｎ Ｓｅｐｓｉｓ，Ａｐｒｉｌ ２８−３０，１９９７，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏ
ｎ，Ｄ．Ｃ．；Ｇｏｕｎｉら、１９９３，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．９４：１３
９−１４６；Ｌｅｖｉｎｅ，ＷＯ９６／０４９１６）。しかし、ＡｐｏＡ−Ｉの
製造および使用に関しては、薬剤としての理想から遠ざけるような多くの落し穴
がある。例えば、ＡｐｏＡ−Ｉは大きなタンパク質であるので製造するのは困難
で費用がかかり、保存中の安定性、活性な製品の送達およびｉｎ ｖｉｖｏでの
半減期に関して、多くの製造上および再現性の問題を克服しなければならない。 これらの欠点の見地から、ＡｐｏＡ−Ｉを模倣するペプチドを調製する試みが
行なわれてきた。ＡｐｏＡ−Ｉのキィとなる活性はこのタンパク質の独特の二次
構造特性の多数の反復の存在、すなわちクラスＡの両親媒性αヘリックスによっ
てもたらされたもの（Ｓｅｇｒｅｓｔ，１９７４，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３８：
２４７−２５３）なので、ＡｐｏＡ−Ｉの活性を模倣するペプチドの設計のため
の大部分の努力はクラスＡ型の両親媒性αヘリックスを形成するペプチドの設計
に焦点が当てられた。 クラスＡ型の両親媒性αヘリックスは陽性荷電アミノ酸残基が疎水性−親水性
界面に集まり、そして陰性荷電アミノ酸残基が親水性面の中心に集まっている点
において独特である。さらに、クラスＡαヘリックスペプチドは疎水性角が１８
０°未満である（Ｓｅｇｒｅｓｔら、１９９０，ＰＲＯＴＥＩＮＳ：Ｓｔｒｕｃ
ｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ８：１０３−１１７
）。ＡｐｏＡ−Ｉ模倣体の設計のための初期の新規な戦略は天然に生起するアポ
リポタンパク質の一次構造ではなく、むしろペプチド類似体の配列中にこれらの
独特のクラスＡヘリックスの特徴およびＡｐｏＡ−Ｉドメインのいくつかの特性
を取り込むことに基づいていた（例えば、Ｄａｖｉｄｓｏｎら、１９９６，Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：１３６０５−１３６１０；
Ｒｏｇｅｒｓら、１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３６：２８８−３００
；Ｌｉｎｓら、１９９３，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ Ｂｉｏ
ｍｅｍｂｒａｎｅｓ １１５１：１３７−１４２；Ｊｉ ａｎｄ Ｊｏｎａｓ，
１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１１２９０−１１２９７；Ｃｏｌ
ｌｅｔら、１９９７，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，
３８：６３４−６４４；Ｓｐａｒｒｏｗ ａｎｄ Ｇｏｔｔｏ，１９８０，Ａｎ
ｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３４８：１８７−２１１；Ｓｐａｒｒｏｗ ａ
ｎｄ Ｇｏｔｔｏ，１９８２，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１
３：８７−１０７；Ｓｏｒｃｉ−Ｔｈｏｍａｓら、１９９３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２６８：２１４０３−２１４０９；Ｗａｎｇら、１９９６，Ｂｉｏｃｈ
ｉｍ．Ｂｉｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １７４−１８４；Ｍｉｎｎｉｃｈら、１９９２
，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１６５５３−１６５６０；Ｈｏｌｖｏｅｔ
ら、１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３４：１３３３４−１３３４２；Ｓ
ｏｒｃｉ−Ｔｈｏｍａｓら、１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１１
）：７２７８−７２８４；およびＦｒａｎｋら、１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ ３６：１７９８−１８０６、を参照されたい）。 研究の１つにおいて、Ｆｕｋｕｓｈｉｍａらは等しい親水性および疎水性面を
有する両親媒性αヘリックス（「ＥＬＫペプチド」）を形成させるために、周期
的に配列され、完全にＧｌｕ、ＬｙｓおよびＬｅｕ残基で構成される２２残基ペ
プチドを合成した（Ｆｕｋｕｓｈｉｍａら、１９７９，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ
．Ｓｏｃ．１０１（１３）：３７０３−３７０４；Ｆｕｋｕｓｈｉｍａら、１９
８０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５５：１０６５１−１０６５７）。このＥＬ
ＫペプチドはＡｐｏＡ−Ｉの１９８−２１９断片と４１％の配列相同性を共有し
ている。定量用限外ろ過、ゲルパーミエーションクロマトグラフィーおよび円二
色性による研究から、このＥＬＫペプチドはリン脂質と効果的に結合してＡｐｏ
Ａ−Ｉのいくつかの物理的および化学的特性を模倣することが示された（Ｋａｉ
ｓｅｒら、１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：
１１３７−１１４０；Ｋａｉｓｅｒら、１９８４，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２３：２
４９−２５５；Ｆｕｋｕｓｈｉｍａら、１９８０，上記；Ｎａｋａｇａｗａら、
１９８５，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０７：７０８７−７０９２）。Ｙｏ
ｋｏｙａｍａらはこうした研究から、ＬＣＡＴ活性化のための決定的な因子は単
純に十分大きな両親媒性構造の存在にあると結論した（Ｙｏｋｏｙａｍａら、１
９８０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５５（１５）：７３３３−７３３９）。こ
の２２残基ペプチドの二量体がモノマーよりも密接にＡｐｏＡ−Ｉを模倣するこ
とが後にわかった。これらの結果を基礎として、ヘリックスブレーカー（Ｇｌｙ
またはＰｒｏのいずれか）で中間で区切られた４４残基体がＡｐｏＡ−Ｉの最小
の機能性ドメインに相当することが示唆された（Ｎａｋａｇａｗａら、１９８５
，上記）。 別の研究には「ＬＡＰペプチド」と称されるモデル両親媒性ペプチドが関与し
た（Ｐｏｗｎａｌｌら、１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ７７（６）：３１５４−３１５８；Ｓｐａｒｒｏｗら、１９８１，Ｉｎ：
Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ−Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｆｕｎｃｔｉｏ
ｎ，Ｒｏｃｈ ａｎｄ Ｇｒｏｓｓ，Ｅｄｓ．，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ
．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，２５３−２５６）。天然のアポリポタンパク質の
断片との脂質の結合の研究に基づいて、いくつかのＬＡＰペプチドを設計し、Ｌ
ＡＰ−１６、ＬＡＰ−２０およびＬＡＰ−２４と命名した（それぞれ１６、２０
および２４アミノ酸残基を含有する）。これらのモデル両親媒性ペプチドはアポ
リポタンパク質と配列相同性を共有せず、アポリポタンパク質と結合するクラス
Ａ型両親媒性ヘリックスドメインとは異なる様相で組織された親水性面を有する
ように設計された（Ｓｅｇｒｅｓｔら、１９９２，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．３
３：１４１−１６６）。これらの研究から、著者らはモデル両親媒性ペプチドに
脂質結合特性を与えるためには最少で２０残基の長さが必要であると結論した。 配列中の別の位置にプロリン残基を１つ有するＬＡＰ２０の変異体の研究で、
脂質の結合とＬＣＡＴ活性化との間には直接の関係があるが、ペプチドのヘリッ
クス化能力のみではＬＣＡＴ活性が導かれないことが示された（Ｐｏｎｓｉｎら
、１９８６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１（２０）：９２０２−９２０５）
。さらに、このペプチドの中央部に近いヘリックスブレーカー（Ｐｒｏ）の存在
はリン脂質表面との親和性およびＬＣＡＴを活性化する能力を減退させた。ＬＡ
Ｐペプチドのあるものはリン脂質と結合することが示された（Ｓｐａｒｒｏｗら
、上記）が、脂質の存在下でどの程度のＬＡＰペプチドがヘリックス状にあるか
についての論争が存在している（Ｂｕｃｈｋｏら、１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２７１（６）：３０３９−３０４５；Ｚｈｏｎｇら、１９９４，Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ７（２）：９９−１０６）。 ＳｅｇｒｅｓｔらはＡｐｏＡ−Ｉのヘリックスと何ら配列相同性を共有しない
１８から２４アミノ酸残基で構成されるペプチドを合成した（Ｋａｎｎｅｌｉｓ
ら、１９８０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５５（３）：１１４６４−１１４７
２；Ｓｅｇｒｅｓｔら、１９８３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５８：２２９０
−２２９５）。その配列はクラスＡ交換性アポリポタンパク質の両親媒性ヘリッ
クスドメインに疎水性モーメント（Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇら、１９８２，Ｎａｔｕ
ｒｅ ２９９：３７１−３７４）および電荷分布（Ｓｅｇｒｅｓｔら、１９９０
，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ８：１０３−１１７；米国特許第４，６４３，９８８号）
の点で模倣するように特別に設計された。１８残基ペプチドの１つ、「１８Ａ」
ペプチドはモデルクラスＡαヘリックスとなるように設計された（Ｓｅｇｒｅｓ
ｔら、１９９０，上記）。これらのペプチドおよび「１８Ｒ」ペプチドのような
逆荷電分布を有する別のペプチドによる研究で、活性のために電荷分布が重要で
あることが矛盾なく示された。逆電荷分布を有するペプチドは１８ＡクラスＡ模
倣体に比較して減少した脂質親和性および脂質の存在下でのより低いヘリックス
含有量を示した（Ｋａｎｎｅｌｉｓら、１９８０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２
５５：１１４６４−１１４７２；Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈら、１９８５，
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：１０２４８−１０２５５；Ｃｈｕｎｇら、１
９８５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：１０２５６−１０２６２；Ｅｐａｎ
ｄら、１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：９３８９−９３９６；Ａｎ
ａｎｔｈａｒａｍａｉａｈら、１９９１，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．
２８５：１３１−１４０）。 ある程度成功したものとして提案されたアポリポタンパク質と配列相同性を共
有しないその他の合成ペプチドとして、１８Ａペプチドの二量体および三量体（
Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈら、１９８６，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｂｉｏ
ｌｏｇｉｃａｌ Ｆｌｕｉｄｓ ３４：６３−６６）、ＧＡＬＡおよびＥＡＬＡ
ペプチド（Ｓｕｂｂａｒａｏら、１９８８，ＰＲＯＴＥＩＮＳ：Ｓｔｒｕｃｔｕ
ｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ３：１８７−１９８）お
よびＩＤペプチド（Ｌａｂｅｕｒら、１９９７，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓ
ｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １
７：５８０−５８８）、そして１８ＡＭ４ペプチド（Ｂｒａｓｓｅｕｒら、１９
９３，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１７０：１−７）が含ま
れる。 ヒトＡｐｏＡ−Ｉのヘリックスの配列に基づいた２２アミノ酸残基を含有する
「共通」ペプチドもまた設計された（Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈら、１９９
０，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ １０（１）：９５−１０５；Ｖｅｎｋ
ａｔａｃｈａｌａｐａｔｈｉら、１９９１，Ｍｏｌ．Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ
ａｎｄ Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，Ｉｎｄｉａｎ Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．Ｂ：５８５−５９６）。この配列はヒトＡｐｏＡ−Ｉの仮定上のヘリック
スの各位置の最も優勢な残基を同定することによって構築された。上記のペプチ
ドのように、このペプチドによって形成されるヘリックスは親水性−疎水性界面
に集まった陽性荷電アミノ酸、親水性面の中心に集まった陰性荷電アミノ酸を有
し、疎水性角は１８０°未満である。このペプチドの二量体はＬＣＡＴを活性化
する効果がいくらかはあるが、モノマーは脂質結合特性が弱い（Ｖｅｎｋａｔａ
ｃｈａｌａｐａｔｈｉら、１９９１，上記）。 主として上記のペプチドのｉｎ ｖｉｔｒｏ研究に基づいて、ＡｐｏＡ−Ｉの
機能を模倣するペプチドを設計するための一連の「基準」が生まれた。顕著なこ
とは、脂質親和性およびＬＣＡＴ活性化のためには、親水性−疎水性界面に集ま
った陽性荷電アミノ酸および親水性面の中心に集まった陰性荷電アミノ酸を有す
る両親媒性αヘリックスが必要なことである（Ｖｅｎｋａｔａｃｈａｌａｐａｔ
ｈｉら、１９９１，上記）。Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈらはαヘリックスの
疎水性面内に位置する共通２２残基ペプチドの１３番位置の陰性荷電Ｇｌｕ残基
がＬＣＡＴ活性化に重要な役割を持つことをも示した（Ａｎａｎｔｈａｒａｍａ
ｉａｈら、１９９１，上記）。さらに、Ｂａｓｓｅｕｒは最適の脂質−アポリポ
タンパク質複合体の安定性のためには１８０°未満の疎水性角（ｐｈｏ角）が必
要であり、そして脂質二重層の端部のまわりにペプチドを有する平円盤状粒子の
形成の説明がつくことを示した（Ｂｒａｓｓｅｕｒ，１９９１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．６６（２４）：１６１２０−１６１２７）。ＲｏｓｓｅｎｅｕらもＬ
ＣＡＴの活性化のために１８０°未満の疎水性角が必要であることを主張した（
ＷＯ９３／２５５８１）。 しかし、今日までのこうした「基準」にもかかわらず、ＡｐｏＡ−Ｉと同様に
活性なペプチドを設計または製造したものはいない。最良のものでも本明細書に
記載したＬＣＡＴ活性化アッセイによって測定してＡｐｏＡ−Ｉの活性の４０％
未満である。文献中に記載されたペプチド「模倣体」のいずれも薬剤として有用
であると証明されていない。 前記の観点から、ＡｐｏＡ−Ｉの活性を模倣し、製造するのが比較的簡単でし
かも安価である、安定なＡｐｏＡ−Ｉアゴニストの開発の必要がある。しかし、
効果的なＡｐｏＡ−Ｉ模倣体を設計するための「基準」は解明されておらず、ま
たＡｐｏＡ−Ｉの機能を有する有機分子を設計するための原理も未知である。 ３．発明の概要 本発明はＡｐｏＡ−Ｉの活性を模倣し、天然分子の活性に近いか若しくはそれ
を超える比活性、すなわち活性単位（ＬＣＡＴの活性化／質量単位）を有する、
両親媒性αヘリックスを形成する能力があるＡｐｏＡ−Ｉアゴニストに関する。
特に、本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは（脂質存在下で）両親媒性ヘリックス
を形成し、脂質と結合し、プレβ様若しくはＨＤＬ様複合体を形成し、ＬＣＡＴ
を活性化し、ＨＤＬ画分の血清レベルを上昇させ、そしてコレステロールの流出
を促進するペプチドまたはペプチド類似体である。 本発明は、部分的には、ＡｐｏＡ−Ｉの機能を模倣するペプチドの、出願人ら
の設計および発見に基づいている。本発明のペプチドはＡｐｏＡ−Ｉのヘリック
ス反復から誘導された２２アミノ酸共通配列の推定上のヘリックス構造および両
親媒性特性に基づいて設計された。驚くべきことに、本発明のペプチドは文献中
に記載されたＡｐｏＡ−Ｉから誘導されたペプチドについて報告されたものより
も十分高い比活性を有する。実際、本発明のいくつかの実施形態では天然Ａｐｏ
Ａ−Ｉの活性の１００％まで到達し、一方本明細書に記載するスーパーアゴニス
トはＡｐｏＡ−Ｉの比活性を超えるものである。 本発明の一態様はまた、部分的には、Ｓｅｇｒｅｓｔの共通２２−ｍｅｒのア
ミノ酸残基１４−１７がＬＣＡＴ活性化の喪失なしに欠失し得るという本発明者
等の発見に基づいている。場合によっては、アミノ酸残基の欠失はＬＣＡＴ活性
化を増大させる。本発明の別の態様において、共通配列の他の残基を欠失させて
活性を増大させることもできる。更に、ある実施形態においては、欠失をアミノ
酸残基の変更と組み合わせて用いることができる。好ましい実施形態において、
Ｓｅｇｒｅｓｔの共通２２−ｍｅｒペプチドからの４残基の欠失を、残基５、９
及び１３の疎水性ロイシンへの変更と組み合わせて使用する。 （脂質存在下で）ヘリックスを形成し、脂質と結合し、複合体を形成し、そし
てＬＣＡＴ活性を増大させる特定の両親媒性ペプチドの構造、調製および使用に
ついて記載する実際の例によって、本発明を説明する。代表的な実施形態の構造
および活性に基づいて、出願人は変更されたまたは変異した形態を設計するため
に使用することができる一連の「基準」を創案した。これらの形態も本発明の範
囲内である。 本発明は活性成分として（ペプチドまたはペプチド−脂質複合体のいずれかの
）こうしたＡｐｏＡ−Ｉアゴニストを含有する医薬製剤、ならびにこうした製剤
の調製方法、およびリポタンパク質不全症（例えば、心血管疾患、アテローム動
脈硬化症、代謝性症候群）、再狭窄またはエンドトキセミア（ｅｎｄｏｔｏｘｅ
ｍｉａ）（例えば敗血性ショック）に関連する疾病を治療するための使用に関す
る。 ３．１．省略語 本明細書で使用する、遺伝子にコードされたＬ−鏡像体アミノ酸のための省略
語は通常のものであり、以下の通りである： 遺伝子にコードされたアミノ酸のＤ−鏡像体のために使用する省略語は１文字
記号と同記号の小文字である。例えば、「Ｒ」はＬ−アルギニンを表し、「ｒ」
はＤ−アルギニンを表す。 ３．２．定義 本明細書で使用する以下の用語は以下の意味を有するものとする。 「アルキル：」は、飽和分枝、直鎖または環状炭化水素ラジカルを称する。典
型的なアルキル基として、限定するわけではないが、メチル、エチル、プロピル
、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、
ヘキシル、などが含まれる。好ましい実施形態において、アルキル基は（Ｃ１−
Ｃ６）アルキルである。 「アルケニル：」は、１以上の炭素−炭素二重結合を有する不飽和分枝、直鎖
または環状炭化水素ラジカルを称する。このラジカルは二重結合（群）について
ｃｉｓまたはｔｒａｎｓのいずれの立体配置でもよい。典型的なアルケニル基と
して、限定するわけではないが、エテニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテ
ニル、イソブテニル、ｔｅｒｔ−ブテニル、ペンテニル、ヘキセニルなどが含ま
れる。好ましい実施形態において、アルケニル基は（Ｃ１−Ｃ６）アルケニルで
ある。 「アルキニル：」は、１以上の炭素−炭素三重結合を有する不飽和分枝、直鎖
または環状炭化水素ラジカルを称する。典型的なアルキニル基として、限定する
わけではないが、エチニル、プロピニル、ブチニル、イソブチニル、ペンチニル
、ヘキシニルなどが含まれる。好ましい実施形態において、アルキニル基は（Ｃ
１−Ｃ６）アルキニルである。 「アリール：」は、共役π電子系を有する不飽和環状炭化水素ラジカルを称す
る。典型的なアリール基として、限定するわけではないが、ペンタ−２，４−ジ
エン、フェニル、ナフチル、アントラシル、アズレニル、クリセニル、コロネニ
ル、フルオロアンテニル、インダセニル、イデニル、オバレニル、ペリレニル、
フェナレニル、フェナントレニル、ピセニル、プレイアデニル、ピレニル、ピラ
ントレニル、ルビセニルなどが含まれる。好ましい実施形態において、アリール
基は（Ｃ５−Ｃ２０）アリールであり、（Ｃ５−Ｃ１０）が特に好ましい。 「アルカリール：」は、末端炭素に結合した水素原子の１つがアリール部分分
子で置換された、直鎖アルキル、アルケニルまたはアルキニル基を称する。典型
的なアルカリール基として、限定するわけではないが、ベンジル、ベンジリデン
、ベンジリジン、ベンゼノベンジル、ナフテノベンジルなどが含まれる。好まし
い実施形態において、アルカリール基は（Ｃ６−Ｃ２６）アルカリールであり、
すなわち、アルカリール基のアルキル、アルケニルまたはアルキニル部分分子が
（Ｃ１−Ｃ６）で、アリール部分分子が（Ｃ５−Ｃ２０）である。特に好ましい
実施形態において、アルカリール基は（Ｃ６−Ｃ１３）アルカリールであり、す
なわち、アルカリール基のアルキル、アルケニルまたはアルキニル部分分子が（
Ｃ１−Ｃ３）で、アリール部分分子が（Ｃ５−Ｃ１０）である。 「ヘテロアリール：」は１以上の炭素原子がＮ、Ｐ、Ｏ、Ｓ、Ａｓ、Ｓｅ、Ｓ
ｉ、Ｔｅその他などの別の原子で置換されたアリール部分分子を称する。典型的
なヘテロアリール基として、限定するわけではないが、アクリダルシン、アクリ
ジン、アルサントリジン、アルシンドール、アルシンドリン、カルバゾール、β
−カルボリン、クロメン、シンノリン、フラン、イミダゾール、インダゾール、
インドール、インドリジン、イソアルシンドール、イソアルシノリン、イソベン
ゾフラン、イソクロメン、イソインドール、イソホスホインドール、イソホスフ
ィノリン、イソキノリン、イソチアゾール、イソキサゾール、ナフチリジン、ペ
リミジン、フェナントリジン、フェナントロリン、フェナジン、ホスホインドー
ル、ホスフィノリン、フタラジン、プテリジン、プリン、ピラン、ピラジン、ピ
ラゾール、ピリダジン、ピリジン、ピリミジン、ピロール、ピロリジン、キナゾ
リン、キノリン、キノリジン、キノキサリン、セレノフェン、テルロフェン、チ
オフェンおよびキサンテンが含まれる。好ましい実施形態において、ヘテロアリ
ール基は５−２０員ヘテロアリールであり、５−１０員ヘテロアリールが特に好
ましい。 「アルクヘテロアリール：」は、末端炭素原子に結合した水素原子の１つがヘ
テロアリール部分分子で置換された、直鎖アルキル、アルケニルまたはアルキニ
ル基を称する。好ましい実施形態において、アルクヘテロアリール基は６−２６
員アルクヘテロアリール、すなわち、アルクヘテロアリールのアルキル、アルケ
ニルまたはアルキニル部分分子が（Ｃ１−Ｃ６）で、ヘテロアリールが５−２０
員ヘテロアリールである。特に好ましい実施形態において、アルクヘテロアリー
ルは６−１３員アルクヘテロアリールであり、すなわち、アルキル、アルケニル
またはアルキニル部分分子が５−１０員ヘテロアリールである。 「置換されたアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルカリール、
ヘテロアリールまたはアルクヘテロアリール：」は、１以上の水素原子が別の置
換基で置換されたアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルカリール
、ヘテロアリールまたはアルクヘテロアリールを称する。好ましい置換基として
、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲＲ、−ＮＯ_２、−ＣＮ、ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−
Ｃ（Ｏ）ＯＲおよび−Ｃ（Ｏ）ＮＲが含まれ、ここで各Ｒは独立して水素、アル
キル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルカリール、ヘテロアリールまた
はアルクヘテロアリールである。５．発明の詳細な説明 本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、ＡｐｏＡ−Ｉの機能および活性に非常に
近いものである。それらは（脂質の存在下で）両親媒性のヘリックスを形成し、
脂質を結合し、プレーβ様またはＨＤＬ様の複合体を形成し、ＬＣＡＴを活性化
し、血清中ＨＤＬ濃度を増大させ、コレステロールの流出を促進する。このペプ
チドの生物学的機能は、脂質存在下での該ペプチドのヘリックス構造またはヘリ
ックス構造体への変換と相関関係にある。 本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、ｉｎ ｖｉｖｏでの使用前に再調製され
得る、あるいは再製剤化され得る安定なバルク剤形または単回投与剤形（例えば
凍結乾燥物）に調製できる。本発明は、医薬製剤、ならびに高脂血症、高コレス
テロール血症、冠動脈性心臓病、アテローム性動脈硬化症、および敗血症性ショ
ックを引き起こす内毒素血症のような他の症状の治療におけるそのような製剤の
使用を包含する。 本発明は、実施例により説明されるが、そこでは、本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴ
ニストがＬＣＡＴの活性化に極めて有効であり、そのことによりＲＣＴを促進す
る。本発明のＡｐｏＡ−Ｉを動物モデルにおいてｉｎ ｖｏｖｏで使用すると、
血清中ＨＤＬ濃度が増大する。 本発明を、以下のサブセクションにおいてさらに詳細に述べる。サブセクショ
ンでは次のことについて記載する：ＡｐｏＡ−Ｉペプチドアゴニストの組成およ
び構造；構造的および機能的な特性決定；バルク製剤および単回投与製剤の調製
方法；および使用方法。５．１ ペプチドの構造および機能 本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、概して、脂質の存在下で両親媒性αヘリ
ックスを形成でき、かつＡｐｏＡ−Ｉの活性に非常に近いペプチドまたはその類
似体である。このアゴニストは、その主な特徴として、１５〜２９個のアミノ酸
残基、好ましくは２２個のアミノ酸残基からなる「コア」ペプチド、またはペプ
チド内の少なくとも１つのアミド結合が置換アミド、アミドの同配体（ｉｓｏｓ
ｔｅｒｅ）もしくはアミド疑似体で置き換えられている該コアペプチドの類似体
を有する。 本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、活性にとって重要であると思われるＶｅ
ｎｋａｔａｃｈａｌａｐａｔｈｉ ら ， １９９１， Ｍｏｌ． Ｃｏｎｆｏ
ｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ， Ｉｎｄｉａ
ｎ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｂ：５８５−５９６の２２−ｍｅｒの共通配列（ＰＶＬ
ＤＥＦＲＥＫＬＮＥＥＬＥＡＬＫＱＫＬＫ；配列番号７５；以後、「Ｓｅｇｒｅ
ｓｔの共通２２−ｍｅｒ」または「共通２２−ｍｅｒ」と呼ぶ）の一次配列中の
特定のアミノ酸残基を変える及び／又は欠失させることにより、天然のＡｐｏＡ
−Ｉの活性に近い、あるいはある実施形態においてはそれを上回る活性を示す合
成ペプチドが得られる、という本出願人らの驚くべき知見に一部基づくものであ
る。本発明の１つの態様において、共通２２−ｍｅｒの４個のアミノ酸残基（例
えば残基１４−１７）を欠失させてＬＣＡＴ活性化が可能な１８ｍｅｒを形成さ
せる。別の更なる態様において、４個の他の残基を欠失させる。いくつかの態様
において、活性化に重要と考えられる３個の荷電アミノ酸残基（Ｇｌｕ−５，Ｌ
ｙｓ−９及びＧｌｕ−１３）を、Ｌｅｕなどの疎水性残基で置換する。 いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、本発明のＡｐｏＡ−Ｉア
ゴニストにより形成されるヘリックスは、文献に記載されているＡｐｏＡ−Ｉ疑
似ペプチドによって形成されるα−ヘリックスよりも、天然のＡｐｏＡ−Ｉの両
親媒性ヘリックス領域（これは脂質との結合、コレステロールの流出およびＬＣ
ＡＴ活性化を生じるのに重要である）の構造的および機能的特性に近いものであ
り、そのため、これらの他のペプチドよりも有意に高いＡｐｏＡ−Ｉ様活性を示
すペプチドを生じると思われる。事実、本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストの多く
はＡｐｏＡ−Ｉの活性に近く、幾つかの実施形態ではそれを上回っているのに対
して、現在までの文献に記載されている最良のペプチドＡｐｏＡ−Ｉ疑似体であ
るペプチド１８ＡＭ４（ＥＷＬＥＡＦＹＫＫＶＬＥＫＬＫＥＬＦ；配列番号２４
６）（Ｃｏｒｉｎｊｎら， １９９３，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃ
ｔａ １１７０：８−１６；Ｌａｂｅｕｒら，Ｏｃｔ．１９９４，Ａｒｔｅｒｉ
ｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．１８６および１８７）および
Ｎ−アセチル化Ｃ−アミド化ペプチド１８ＡＭ４（配列番号２３９）（Ｂｒａｓ
ｓｅｕｒ，１９９３，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ１１７０：１
−７）は、本明細書中に記載のＬＣＡＴ活性化アッセイにより測定した場合に、
それぞれＡｐｏＡ−Ｉの活性の４％未満および１１％未満しか示さない。 本発明の例示的態様において、本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストを構成するコ
アペプチド（またはその類似体）は、以下の構造式（Ｉ）を有する： Ｘ_１−Ｘ_２−Ｘ_３−Ｘ_４−Ｘ_５−Ｘ_６−Ｘ_７−Ｘ_８−Ｘ_９−Ｘ_１０−Ｘ_１１−Ｘ
_１２−Ｘ_１３−Ｘ_１４−Ｘ_１５−Ｘ_１６−Ｘ_１７−Ｘ_１８ （式中、 Ｘ_１はＰｒｏ（Ｐ）、Ａｌａ（Ａ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ
（Ｑ）またはＤ−Ｐｒｏ（ｐ）であり； Ｘ_２は脂肪族アミノ酸であり； Ｘ_３はＬｅｕ（Ｌ）であり； Ｘ_４は酸性アミノ酸であり； Ｘ_５はＬｅｕ（Ｌ）またはＰｈｅ（Ｆ）であり； Ｘ_６はＬｅｕ（Ｌ）またはＰｈｅ（Ｆ）であり； Ｘ_７は塩基性アミノ酸であり； Ｘ_８は酸性アミノ酸であり； Ｘ_９はＬｅｕ（Ｌ）またはＴｒｐ（Ｗ）であり； Ｘ_１０はＬｅｕ（Ｌ）またはＴｒｐ（Ｗ）であり； Ｘ_１１は酸性アミノ酸またはＡｓｎ（Ｎ）であり； Ｘ_１２は酸性アミノ酸であり； Ｘ_１３はＬｅｕ（Ｌ）、Ｔｒｐ（Ｗ）またはＰｈｅ（Ｆ）であり； Ｘ_１４は塩基性アミノ酸またはＬｅｕ（Ｌ）であり； Ｘ_１５はＧｌｎ（Ｑ）またはＡｓｎ（Ｎ）であり； Ｘ_１６は塩基性アミノ酸であり； Ｘ_１７はＬｅｕ（Ｌ）であり；そして Ｘ_１８は塩基性アミノ酸である。 構造（Ｉ）のコアペプチドは、一部、指定クラス（ｄｅｓｉｇｎａｔｅｄ ｃ
ｌａｓｓｅｓ）のアミノ酸で規定される。各種の指定クラスの定義は、構造（Ｉ
）の変異型または改変型の具体例の説明と関連させて下記に示す。 構造（Ｉ）のコアペプチドにおいて、アミノ酸残基Ｘ_ｎ間の「−」という記号
は一般に主鎖の構成的結合機能を表わす。したがって、「−」という記号は通常
、ペプチド結合またはアミド結合［−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−］を表わす。しかし、本発
明は、１つ以上のアミド結合が場合によってはアミド以外の別の結合、好ましく
は置換アミド、またはアミドの同配体によって置換されているペプチド類似体を
包含する、と理解すべきである。したがって、構造（Ｉ）中の各種のＸ_ｎ残基は
一般にアミノ酸として記載され、本発明の好ましい実施形態はペプチドとして例
示されるが、当業者であれば、非アミド結合を有する実施形態において、本明細
書中で用いられる「アミノ酸」または「残基」なる用語は構造的にアミノ酸の側
鎖と類似する基を有する他の二官能性部分を意味するものと理解するであろう。 置換アミドとしては一般に、式−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−［式中、Ｒは（Ｃ_１〜Ｃ_６）
アルキル、置換（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルケニル、置換（Ｃ
_１〜Ｃ_６）アルケニル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキニル、置換（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキ
ニル、（Ｃ_５〜Ｃ_２０）アリール、置換（Ｃ_５〜Ｃ_２０）アリール、（Ｃ_５〜Ｃ
_２０）アルカリール、置換（Ｃ_５〜Ｃ_２０）アルカリール、５〜２０員ヘテロア
リール、置換５〜２０員ヘテロアリール、６〜２６員アルクヘテロアリールおよ
び置換６〜２６員アルクヘテロアリール］の基が挙げられるが、これに限定され
ない。 アミドの同配体としては一般に、−ＣＨ_２ＮＨ−、−ＣＨ_２Ｓ−、−ＣＨ_２Ｃ
Ｈ_２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シス型およびトランス型）、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２−、−
ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２−および−ＣＨ_２ＳＯ−が挙げられるが、これらに限定され
ない。そのような非アミド結合を有する化合物およびそのような化合物の製造方
法は当業界では周知である［例えば、Ｓｐａｔｏｌａ，Ｍａｒｃｈ １９８３，
Ｖｅｇａ Ｄａｔａ Ｖｏｌ．１，Ｉｓｓｕｅ ３；Ｓｐａｔｏｌａ，１９８３
，“Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｂａｃｋｂｏｎｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ” Ｉｎ
： Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｍｉｎ
ｏ Ａｃｉｄｓ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｅｉｎｓｔ
ｅｉｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐ．２６７
（概説）；Ｍｏｒｌｅｙ，１９８０，Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１：
４６３−４６８；Ｈｕｄｓｏｎら，１９７９，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｒｏｔ．Ｒｅｓ．
１４：１７７−１８５（−ＣＨ_２ＮＨ−、−ＣＨ_２ＣＨ_２−）；Ｓｐａｔｏｌａ
ら，１９８６，Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．３８：１２４３−１２４９（−ＣＨ_２−Ｓ）
；Ｈａｎｎ，１９８２，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．
Ｉ．１：３０７−３１４（−ＣＨ＝ＣＨ−、シス型およびトランス型）；Ａｌｍ
ｑｕｉｓｔら，１９８０，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２３：１３９２−１３９８（
−ＣＯＣＨ_２−）；Ｊｅｎｎｉｎｇｓ−Ｗｈｉｔｅら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ
．Ｌｅｔｔ，２３：２５３３（−ＣＯＣＨ_２−）；欧州特許出願ＥＰ４５６６５
号（１９８２），カナダ特許第９７：３９４０５号（−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２−）
；Ｈｏｌｌａｄａｙら，１９８３，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２４：
４４０１−４４０４（−Ｃ（ＯＨ）ＣＨ_２−）；およびＨｒｕｂｙ，１９８２，
Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．３１：１８９−１９９（−ＣＨ_２−Ｓ−）を参照］。 さらに、１つ以上のアミド結合が、ペプチドの構造および活性に有意に干渉し
ないペプチド疑似成分またはアミド疑似成分で置換されていてもよい。好適なア
ミド疑似成分は、例えばＯｌｓｏｎら，１９９３，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３６
：３０３９−３０４９に記載されている。 構造（Ｉ）のコアペプチドの重要な特徴は、脂質の存在下で両親媒性α−ヘリ
ックスを形成するそれらの能力である。両親媒性とは、α−ヘリックスが、その
長軸に沿って配向している向かい合った親水性面と疎水性面とを有すること、す
なわち、ヘリックスの一方の面には主に親水性の側鎖が突き出しており、反対の
面には主に疎水性の側鎖が突き出していることを意味する。図１Ａおよび１Ｂは
、例示の概念化した両親媒性α−ヘリックスの向かい合った親水性面と疎水性面
の２種の説明図を示すものである。図１Ａは、Ｓｃｈｉｆｆｅｒ−Ｅｄｍｕｎｄ
ｓｏｎのヘリックスホイールの図（ＳｃｈｉｆｆｅｒおよびＥｄｍｕｎｄｓｏｎ
，１９６７，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．７：１２１−１３５）である。このホイール
において、ヘリックスの長軸はこの頁に対して垂直である。Ｎ−末端から始まっ
て、連続したアミノ酸残基（丸で示す）が円の周囲の周りに１００°の間隔で放
射状に配されている。したがって、アミノ酸残基ｎ＋１は残基ｎから１００°の
位置に位置し、残基ｎ＋２は残基ｎ＋１から１００°の位置に位置し、…となっ
ている。この１００°間隔の配置により１ターン当たり３．６個の残基があるこ
とになり、これは概念的したα−ヘリックスにおいて典型的に見られるものであ
る。図１Ａでは、ヘリックスの向かい合う親水性面と疎水性面を明確に見ること
ができる（親水性アミノ酸は白丸で表わされ、疎水性アミノ酸残基は陰影入りの
丸で表わされている）。 図１Ｂは、図１Ａの概念化した両親媒性ヘリックスのヘリックスネット（ｎｅ
ｔ：網目）の図を示すものである。（Ｌｉｍ，１９７８，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．
８９：１０−１４）。典型的なヘリックスネットの図において、α−ヘリックス
は、その親水性面の中心に沿って切って平らにしたシリンダー（ｃｙｌｉｎｄｅ
ｒ：円柱状体）として表わされる。したがって、疎水性面の中心は、ヘリックス
の疎水性モーメント（Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇら，１９８２，Ｎａｔｕｒｅ，２９９
：３７１−３７４）によって求めた場合、この図の中心にあり、この頁の面から
浮かび上がるようにして配向している。切って平らにする前のヘリックスシリン
ダーの図を図１Ｃに示す。このシリンダーを別の面に沿って切ることにより、そ
の同じ両親媒性ヘリックスの別の部分を見ることができ、該ヘリックスの特性に
ついての別の情報が得られる。 構造（Ｉ）のコアペプチドによって形成されるα−ヘリックスの、脂質存在下
における両親媒性の性質を図２に示す。図２ＡはＳｃｈｉｆｆｅｒ−Ｅｄｍｕｎ
ｄｓｏｎのヘリックスホイールの図を示すものであり、図２Ｂは疎水性面を説明
するヘリックスネットの図を示すものであり、図２Ｃは親水性面を説明するヘリ
ックスネットの図を示すものである。図２Ａ、２Ｂ、２Ｃのそれぞれにおいて、
親水性残基は白丸で表わし、疎水性残基は陰影入りの丸で表わし、そして親水性
又は疎水性のいずれかとなり得る残基を一部斜線入りの丸で表す。後記で構造（
Ｉ）のペプチドの改変型または変異型に関連してさらに詳細に述べるように、あ
る特定のアミノ酸残基を他のアミノ酸残基で置換して、該ペプチドによって形成
されるヘリックスの親水性面および疎水性面がそれぞれ完全に親水性アミノ酸お
よび疎水性アミノ酸で構成されなくてもいいようにしてもよい。したがって、本
発明のコアペプチドによって形成される両親媒性α−ヘリックスについていう場
合、「親水性面」という用語は、ヘリックスの、全体として正味の親水性特性を
有する面を意味する、と理解すべきである。「疎水性面」という用語は、ペプチ
ドの、全体として正味の疎水性特性を有する面を意味する。 どのような特定の理論にも束縛されるものではないが、構造（Ｉ）のコアペプ
チドによって形成される両親媒性ヘリックスの特定の構造的および／または物理
的特性が活性にとって重要であると考えられる。これらの特性としては、α−ヘ
リックスの両親媒性度、全体の疎水性度、平均疎水性度、疎水性および親水性角
、疎水性モーメント、平均疎水性モーメント、ならびに正味の電荷が挙げられる
。 図２Ａのヘリックスホイールの図は構造（Ｉ）のコアペプチドの両親媒性の性
質を視覚化する通常の手段であるが、両親媒性度（疎水性度の非対称の程度）ば
通常、ヘリックスの疎水性モーメント（μ_Ｈ）を算出することによって定量化で
きる。特定のペプチド配列についてのμ_Ｈの算出方法は当業界では周知であり、
例えばＥｉｓｅｎｂｅｒｇ，１９８４，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５３
：５９５−６２３に記載されている。特定のペプチドについて得られる実際のμ
_Ｈは、そのペプチドを構成するアミノ酸残基の総数に依存する。したがって、長
さの異なるペプチドについてμ_Ｈを直接比較するのは概して有益ではない。 異なる長さのペプチドの両親媒性は平均疎水性モーメント（〈μ_Ｈ〉）によっ
て直接的に比較することができる。平均疎水性モーメントはμＨをヘリックス中
の残基数で割ることによって求めることができる（すなわち、〈μ_Ｈ〉＝μ_Ｈ／
Ｎ）。通常、μ_ＨをＥｉｓｅｎｂｅｒｇの標準化共通疎水性度スケール（ｎｏｒ
ｍａｌｉｚｅｄ ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｔｙ ｓｃａ
ｌｅ、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ，１９８４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７９：１２５
−１４２）で測定したとき０．５５から０．６５の範囲を示すコアペプチドが、
本発明の範囲内にあるものとみなされ、〈μ_Ｈ〉が０．５８から０．６２の範囲
のものが好ましい。 ペプチドの総合的な、もしくは合計の疎水性度（Ｈ_０）は、そのペプチド その式でＮはペプチド中のアミノ酸残基の数であり、Ｈ_ｉはｉ番目のアミノ酸残
基の疎水性度である）を用いて便利に計算することができる。平均疎水性度（〈
Ｈ_０〉）はその合計の疎水性度をアミノ酸残基数で割ったものである（すなわち
、〈Ｈ_０〉＝Ｈ_０／Ｎ）。通常、μ_ＨをＥｉｓｅｎｂｅｒｇの標準化共通疎水性
度スケール（Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ，１９８４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７９：
１２５−１４２）を用いて測定したとき−０．１５０から−０．０７０の範囲を
示すコアペプチドが、本発明の範囲内にあるものとみなされ、平均疎水性度が−
０．１３０から−０．０５０までの範囲のものが好ましい。 両親媒性ヘリックスの疎水面の合計疎水性度（Ｈ_０ ^ｐｈｏ）は疎水角（ｈｙｄ
ｒｏｐｈｏｂｉｃ ａｎｇｌｅ）に落ち込む疎水性アミノ酸残基の疎水性度を合
計することによって得られ、それは次に定義するとおりである（すなわち、 面中の疎水性アミノ酸の総数である）。疎水面の平均疎水性度（〈Ｈ_０ ^ｐｈｏ〉
）はＨ_０ ^ｐｈｏ／Ｎ_Ｈで示され、その式でＮ_Ｈは上述の定義のとおりである。通
常、〈Ｈｏ^ｐｈｏ〉をＥｉｓｅｎｂｅｒｇの共通疎水性度スケール（Ｅｉｓｅｎ
ｂｅｒｇ，１９８４，同上、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ，１９８２，同上）を用いて測
定したとき０．９０から１．２０の範囲を示すコアペプチドが、本発明の範囲内
にあるものとみなされ、〈Ｈ_０ ^ｐｈｏ〉が０．９５０から１．１０までの範囲の
ものが好ましい。 疎水角（ｐｈｏ角）は、通常、ペプチドがＳｃｈｉｆｆｅｒ−Ｅｄｍｕｎｄｓ
ｏｎヘリックスホイール構造をとるように配置された場合に疎水性アミノ酸の最
長の連続的な一続きによってカバーされる角もしくは弧と定義される（すなわち
ホイール上の連続した疎水性残基数に２０°をかけたものである）。親水性角（
ｐｈｉ角）とは３６０°とｐｈｏ角との差である（すなわち、３６０°−ｐｈｏ
角）。当業者であればｐｈｏおよびｐｈｉ角が、部分的にはそのペプチドのアミ
ノ酸残基数に依存していることが理解できるであろう。例えば、図５Ａおよび５
Ｂをみれば、Ｓｃｈｉｆｆｅｒ−Ｅｄｍｕｎｄｓｏｎのヘリックスホイールの１
ターンに沿ってはめ込むことのできるアミノ酸は１８個にすぎないことがわかる
。より少ないアミノ酸ではそのホイールの中に隙間をもたらし；より多くのアミ
ノ酸ではそのホイールの特定の位置が２個以上のアミノ酸残基で占められること
になる。 構造（Ｉ）のコアペプチドのような１８個を超えるアミノ酸残基を有するペプ
チドの場合には、疎水性アミノ酸残基の”連続的”一続きとは、２個以上のアミ
ノ酸によって占められるホイールに沿った位置で少なくとも１個のアミノ酸が疎
水性アミノ酸であることを意味する。 典型的には、１２０°から１６０°の範囲のｐｈｏ角を有する１８個以下のア
ミノ酸で構成されるコアペプチドは本発明の範囲に含まれるものとみなされ、１
３０°から１５０°の範囲のｐｈｏ角が好ましい。１８個以上のアミノ酸を含有
する態様は、典型的には１６０°から２２０°の範囲のｐｈｏ角を有し、１８０
°から２００°のものが好ましい。 構造（Ｉ）のコアペプチドの構造的および／または物理的特性をいくつか図３
および４に示す。図３Ｂは本発明の典型的なコアペプチドであるペプチド２１０
（ＰＶＬＤＬＦＲＥＬＬＥＥＬＫＱＫＬＫ；配列番号２１０）のヘリックスネッ
トダイアグラム（ｈｅｌｉｃａｌ ｎｅｔ ｄｉａｇｒａｍ）を示し、その図は
ヘリックスの親水性面に沿う電荷の分布を示している。図３Ｂではヘリックスシ
リンダーを疎水性面の中心に沿って切断し平らにしたものである。Ｓｅｇｒｅｓ
ｔのコンセンサス２２量体中（残基５、９及び１３）（図３Ｃ）の親水性残基と
置換した３つの疎水性ロイシン（Ｌ）残基には影を付けてある。図３Ｂにみられ
るとおり、陽性に荷電したアミノ酸残基はヘリックスの最後のＣ末端の１ターン
でクラスター化されている（Ｃ末端はそのページの上部である）。特定の理論に
結びつけられることは意図していないが、Ｃ末端の塩基性残基のクラスター（残
基１４、１６及び１８）が、電荷（ＮＨ_３ ^＋）−ヘリックスダイポール静電的相
互作用によって安定化されるものと考えられている。また、安定化はリジン側鎖
とヘリックスコアとの疎水性相互作用によっても行われると考えられている（Ｇ
ｒｏｅｂｋｅら，１９９６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．
Ａ．９３；４０２５−４０２９； Ｅｓｐｏｓｉｔｏら，１９９７，Ｂｉｏｐｏ
ｌｙｍｅｒｓ ４１：２７−３５参照）。 陽性に荷電したＣ末端クラスター（残基１４、１６及び１８）を除いては、陰
性荷電は親水性面の残りの部分に分布しており、１ターンあたりに少なくとも１
個の陰性荷電（酸性）アミノ酸残基があり、その結果ヘリックスの親水性面に沿
って陰性荷電の連続的な一続きが生じる。 図４Ｂは、典型的なコアペプチド４（配列番号４）によって形成される両親媒
性ヘリックスの疎水性面を図示したヘリックスネットダイアグラムを示している
。図４Ｂでは、ヘリックスシリンダーを親水性面の中央に沿って切断し平らに拡
げている。コアペプチドの疎水性面は、最後のＣ末端のターン、そこでは塩基性
残基が支配的であるが、そのターンを除いては１ターンあたり２個の疎水性残基
からなっている。ＮＭＲで調べた結果、類似体２２ｍｅｒペプチド（ＰＶＬＤＬ
ＦＲＥＬＬＮＥＬＬＥＡＬＫＱＫＬＫ；配列番号４）のアミノ酸残基３，６，９
，および１０はヘリックスのＮ末端付近で疎水性クラスターを形成していること
が示されている。Ｐｈｅ−６はこのクラスターの中心にあり、その疎水性クラス
ターの安定化に重要な役割を果たしていると考えられている。 特定の理論に結びつけられることは意図していないが、残基３，６，９，およ
び１０によって形成される疎水性クラスターは脂質結合およびＬＣＡＴ活性化を
行うために非常に重要であると考えられている。両親媒性ペプチドは その疎水
性面を脂質部分のアルキル鎖に対して向けることによってリン脂質と結合するも
のと予測される。この高度に疎水性のクラスターが、本発明のコアペプチドに認
められる強力な脂質との親和性に寄与しているものと考えられる。脂質との結合
はＬＣＡＴ活性化の前提条件であるので、この疎水性クラスターがＬＣＡＴ活性
化にも必須であると考えられる。 芳香族残基はしばしばペプチドおよびタンパク質を脂質につなぎ止めるために
重要であるとされている（Ｄｅ Ｋｒｕｉｊｆｆ，１９９０，Ｂｉｏｓｃｉ．Ｒ
ｅｐ．１０：１２７−１３０； Ｏ’ｎｅｉｌとＤｅ Ｇｒａｄｏ， １９９０
， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５０：６４５−６５１；Ｂｌｏｎｄｅｌｌｅら，１９９
３，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １２０２：３３１−３３６）
。さらに、疎水性クラスターの中心に位置するＰｈｅ−６もまた構造（Ｉ）のコ
アペプチドを脂質につなぎ止めるために重要な役割を果たすものと考えられてい
る。 本発明のコアペプチドと脂質との相互作用によってペプチド−脂質複合体が形
成される。図１１Ａに示すとおり、得られる複合体のタイプ（共ミセル（ｃｏｍ
ｉｃｅｌｌｅ）、ディスク、小胞状、もしくは多層状）は脂質：ペプチドのモル
比によって変わるが、共ミセルは通常は脂質：ペプチドのモル比が低いときに形
成され、ディスク状および小胞状もしくは多層状の複合体は脂質：ペプチドのモ
ル比が増加するにつれて形成される。この様な特徴は両親媒性ペプチドについて
（Ｅｐａｎｄ，Ｔｈｅ Ａｍｐｈｉｐａｔｈｉｃ Ｈｅｌｉｘ，１９９３）およ
びＡｐｏＡ−Ｉについて（Ｊｏｎｅｓ，１９９２，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ
Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ，第８章，ｐｐ．
２１７−２５０）、既に報告されている。また、脂質：ペプチドのモル比は複合
体の大きさおよび組成をも決定する（後記第５．３．１節を参照せよ）。 構造（Ｉ）のコアペプチドによって形成されるαヘリックスの長軸は全体とし
てカーブした形状となっている。典型的な両親媒性のヘリックスでは、親水性お
よび疎水性面の水素結合の長さは、ヘリックスの疎水性側が凹形となるように変
わることが見出されている（ＢａｒｌｏｗとＴｈｏｒｎｔｏｎ，１９８８，Ｊ．
Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１：６０１−６１９； Ｚｈｏｕら， １９９２，Ｊ．
Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．３３：１１１７４−１１１８３； Ｇｅｓｅｌｌら，
１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．ＮＭＲ ９：１２７−１３５）。特定の理論に結
びつけられることは意図していないが、ヘリックスの疎水性面の総合的な湾曲形
はおそらくディスク状複合体の結合に重要なものであろうと考えられる−−湾曲
したヘリックスはペプチドがディスク状の粒子のエッジのまわりにより良く”は
め込まれる”ことができ、それによってペプチド−ディスク複合体の安定性を増
大させる。 ＡｐｏＡ−Ｉの一般的に受け容れられている構造モデルにおいては、両親媒性
のαヘリックスはディスク状ＨＤＬのエッジのまわりに充填される（図８Ｂ参照
）。このモデルにおいてば、ヘリックスはその疎水性面を脂質のアシル鎖に対し
て向けた状態で整列しているものと考えられている（Ｂｒａｓｓｅｕｒら，１９
９０，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １０４３：２４５−２５２
）。このヘリックスは逆平行様式に配置されており、ヘリックス間の協調効果が
ディスク状ＨＤＬ複合体の安定性に寄与していると考えられている（Ｂｒａｓｓ
ｅｕｒら，同上）。ＨＤＬディスク状複合体の安定性に寄与している１つの因子
として、酸性残基と塩基性残基の間のイオン性相互作用が存在してそれが分子間
塩架橋を形成すること、もしくは隣接する逆平行のヘリックス状の残基間の水素
結合が提案されている。このモデルでは、ペプチドは単一なものとしてはみなさ
れておらず、少なくとも２つの他の近接するペプチド分子と相互作用しているも
のとして考えられている（図８Ｂ）。 また、分子間水素結合、もしくは酸性残基と塩基性残基との間の塩架橋の形成
はヘリックスのそれぞれｉの位置およびｉ＋３の位置であるが、それらがヘリッ
クス構造を安定化すると一般的には考えられている（Ｍａｒｇｕｓｅｅら，１９
８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４（２４）：８８９
８−８９０２）。１個の陽性電荷は、１ターン離れた酸性残基と塩架橋を形成す
ることによってヘリックスの安定性に潜在的に寄与する残基７に位置する。 構造（Ｉ）のコアペプチドの別の重要な特徴としては、そのペプチドが脂質と
結合する際にみられるように疎水性面を同じ方向に向けて逆平行様式に整列した
場合に分子間水素結合をお互いに形成する能力、およびヘリックスのＮ末端およ
びＣ末端の近傍で分子内水素結合もしくは塩架橋を形成する能力である。構造（
Ｉ）のコアペプチドが逆平行様式で脂質と結合する際に、密に充填してイオン的
相互作用によって分子内および／または分子間塩架橋および／または水素結合を
形成する能力があることは本発明のコアペプチドの重要な特徴であると考えられ
る。 脂質のない状態において、そのコアペプチドが、好都合な分子間ペプチド−ペ
プチド相互作用を形成する能力を有することもまた適切なものであると考えられ
る。本発明のコアペプチドは、部分的にはその高い〈μ_Ｈ〉、〈Ｈ_０〉、および
疎水角のために自己会合性である（後記の表Ｉを参照せよ）。自己会合現象はｐ
Ｈ、ペプチド濃度、およびイオン強度に依存し、単量体から数種の多量体の形状
までの数種の会合状態を作り出すことができる（図１０Ａ）。ペプチド凝集体の
疎水性コアは脂質と疎水性相互作用を生ずるために好都合である。ペプチドが非
常に低い濃度であっても凝集する能力は、そのペプチドの脂質への結合に好都合
であろう。ペプチド凝集物のコアの中ではペプチド−ペプチド相互作用も生じ、
脂質−ペプチド相互作用と競合している可能性がある。 上述の特性に加えて、疎水性残基の総数、荷電残基の総数、およびペプチドの
正味の電荷などのその他のパラメーターも同様に活性には重要であると考えられ
る。 構造（Ｉ）のコアペプチドの好ましい物理的および構造的特性の要約を下記の
表Ｉに示す： 本発明のコアペプチドによって形成される両親媒性のαヘリックスの特性は、
クラスＡ両親媒性αヘリックス、特にＳｅｇｒｅｓｔの１８ＡのクラスＡαヘリ
ックス及びコンセンサス２２量体ペプチドとは著しく異なる。これらの相異は典
型的なコアペプチド２１０（配列番号２１０）とともに図３−５に示している。 図４Ａ−４Ｃから、ペプチド２１０の疎水性面はＳｅｇｒｅｓｔの１８Ａペプ
チド又はコンセンサス２２量体の疎水性面に比べはるかに大きな疎水性を有して
いることが認められる。とりわけ、９および１３の残基（図４Ｂで影を付した領
域）はペプチド２１０（配列番号２１０）中の疎水性Ｌｅｕ（Ｌ）残基であり、
これに対して１８Ａペプチド（配列番号２４４）及びコンセンサス２２量体（配
列番号７５）中では荷電した残基である。Ｓｅｇｒｅｓｔの１８Ａ及びコンセン
サス２２量体ペプチド中のこれらの２個の荷電した残基を疎水性のＬｅｕ（Ｌ）
残基と置換すると、そのヘリックスの両親媒性、疎水性、ｐｈｏ角、およびその
他の特性に顕著な相異をもたらす。 ペプチド２１０（配列番号２１０）およびＳｅｇｒｅｓｔの１８Ａペプチド（
配列番号２４４）およびコンセンサス２２量体ペプチド（配列番号７５）の物理
的および構造的特性の比較は下記の表ＩＩに示している： これらの特性の相異によって活性の顕著な相異が生ずる。本明細書に記載のア
ッセイ法で、Ｓｅｇｒｅｓｔの１８Ａペプチド（配列番号２４４）及びコンセン
サス２２量体ペプチド（配列番号７５）が、天然のＡｐｏＡ−Ｉと比較してそれ
ぞれ５％及び１０％のＬＣＡＴ活性化しか示さないのに対し、同じアッセイ法で
ペプチド２１０（配列番号２１０）は天然のＡｐｏＡ−Ｉと比較して４６％の活
性化を示す。ペプチド２１０のＮ末端アセチル化及びＣ末端アミド化型であるペ
プチド１９３（配列番号１９３）は、同じアッセイ法で９６％のＬＣＡＴ活性化
を示す。 構造（Ｉ）のコアペプチド中の一定のアミノ酸残基はペプチドの活性を著しく
損なうことなく、多くの場合にはむしろ増強するように他のアミノ酸残基と置換
することができる。また、構造（Ｉ）のコアペプチドに変更を加えた、もしくは
変異させた形のもので、その構造中の少なくとも１個の定められたアミノ酸残基
を別のアミノ酸残基で置き換えたものも本発明に包含される。本発明のコアペプ
チドの活性に影響を及ぼす非常に重要な特徴の１つは、脂質の存在下での上述の
両親媒性およびその他の特性を示すαヘリックスの形成能であると考えられ、本
発明の好ましい実施形態においては、アミノ酸の置換は保存的、すなわち置換に
よって新たに入るアミノ酸残基がもとのアミノ酸残基と類似の物理的および化学
的特性を有するものであることであると考えられる。 保存的な置換を行うアミノ酸を定めるために、主としてアミノ酸の側鎖の物理
化学的特性によってアミノ酸を２つの主要なカテゴリー、つまり親水性および疎
水性に都合良く分けることができる。これら２つの主要なカテゴリーはさらに、
アミノ酸側鎖の特性をより明確に定義するサブカテゴリーに分類することができ
る。例えば、親水性のアミノ酸のクラスはさらに酸性、塩基性および極性アミノ
酸に分けることができる。疎水性のアミノ酸のクラスはさらに無極性および芳香
族アミノ酸に分けることが出来る。構造（Ｉ）を定義するアミノ酸の各カテゴリ
ーの定義は下記のとおりである： 「親水性アミノ酸」とは、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，
１７９（１９８４）１２５−１４２）の標準化コンセンサス疎水性スケール（ｎ
ｏｒｍａｌｉｚｅｄ ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｔｙ ｓ
ｃａｌｅ）に従ってゼロ未満の疎水性を示すアミノ酸をいう。遺伝的にコードさ
れる親水性アミノ酸としては、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｈｉｓ（Ｈ）、Ｇ
ｌｕ（Ｅ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｌｙｓ（Ｋ）及びＡ
ｒｇ（Ｒ）が挙げられる。 「酸性アミノ酸」とは、側鎖ｐＫ値が７未満の親水性アミノ酸をいう。酸性ア
ミノ酸は、典型的には、水素イオンの欠失により、生理学的ｐＨにおいて負電荷
をもつ側鎖を有する。遺伝的にコードされる酸性アミノ酸としては、Ｇｌｕ（Ｅ
）及びＡｓｐ（Ｄ）が挙げられる。 「塩基性アミノ酸」とは、側鎖ｐＫ値が７よりも大きい親水性アミノ酸をいう
。塩基性アミノ酸は、典型的には、ヒドロニウムイオンとの結合により、生理学
的ｐＨにおいて正電荷をもつ側鎖を有する。遺伝的にコードされる塩基性アミノ
酸としては、Ｈｉｓ（Ｈ）、Ａｒｇ（Ｒ）及びＬｙｓ（Ｋ）が挙げられる。 「極性アミノ酸」とは、生理学的ｐＨにおいて電荷をもたない側鎖を有する親
水性アミノ酸であって、２つの原子が共有する電子対がそのうちの１つにより近
づいている結合を少なくとも１つ有するものをいう。遺伝的にコードされる極性
アミノ酸としては、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）及びＴｈｒ（Ｔ
）が挙げられる。 「疎水性アミノ酸」とは、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，
１７９（１９８４）１２５−１４２）の標準化コンセンサス疎水性スケールに従
ってゼロより大きい疎水性を示すアミノ酸をいう。遺伝的にコードされる疎水性
アミノ酸としては、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｖａｌ（Ｖ）
、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）、Ａｌａ（Ａ）、Ｇｌｙ（Ｇ）及
びＴｙｒ（Ｙ）が挙げられる。 「芳香族アミノ酸」とは、少なくとも１つの芳香環又はヘテロ芳香環をもつ側
鎖を有する疎水性アミノ酸をいう。該芳香環又はヘテロ芳香環は、１以上の置換
基を含有していてもよく、このような置換基としては、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＮ
、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＯ_２、−ＮＯ、−ＮＨ_２、−ＮＨＲ、−Ｎ
ＲＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ
（Ｏ）ＮＨＲ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ（ここで、各々のＲは、独立に、（Ｃ_１−Ｃ_６
）アルキル、置換（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルケニル、置換（
Ｃ_１−Ｃ_６）アルケニル、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキニル、置換（Ｃ_１−Ｃ_６）アル
キニル、（Ｃ_５−Ｃ_２０）アリール、置換（Ｃ_５−Ｃ_２０）アリール、（Ｃ_６−
Ｃ_２６）アルカリール、置換（Ｃ_６−Ｃ_２６）アルカリール、鎖員数５〜２０の
ヘテロアリール、置換された鎖員数５〜２０のヘテロアリール、鎖員数６〜２６
のアルクヘテロアリール又は置換された鎖員数６〜２６のアルクヘテロアリール
である）などが挙げられる。遺伝的にコードされる芳香族アミノ酸としては、Ｐ
ｈｅ（Ｆ）、Ｔｙｒ（Ｙ）及びＴｒｐ（Ｗ）が挙げられる。 「非極性（ｎｏｎｐｏｌａｒ）アミノ酸」とは、生理学的ｐＨにおいて電荷を
もたない側鎖を有する疎水性アミノ酸であって、２つの原子が共有する電子対が
これらの各原子により概して等しく保持される結合を有する（すなわち、側鎖が
極性でない）ものをいう。遺伝的にコードされる非極性（ａｐｏｌａｒ）アミノ
酸としては、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｍｅｔ（Ｍ）、Ｇｌ
ｙ（Ｇ）及びＡｌａ（Ａ）が挙げられる。 「脂肪族アミノ酸」とは、脂肪族炭化水素側鎖を有する疎水性アミノ酸をいう
。遺伝的にコードされる脂肪族アミノ酸としては、Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）
、Ｌｅｕ（Ｌ）及びＩｌｅ（Ｉ）が挙げられる。 アミノ酸残基Ｃｙｓ（Ｃ）は、他のＣｙｓ（Ｃ）又は他のスルファニル含有ア
ミノ酸とジスルフィド結合を形成する点で、通常のアミノ酸とは異なる。Ｃｙｓ
（Ｃ）残基（及び−ＳＨ含有側鎖を有する他のアミノ酸）の、ペプチド中におい
て還元された遊離−ＳＨ型又は酸化されたジスルフィド結合型で存在する能力に
よって、Ｃｙｓ（Ｃ）がペプチドに全体として親水性を与えるか疎水性を与える
かが決まる。Ｃｙｓ（Ｃ）がＥｉｓｅｎｂｅｒｇ（Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ，１９８
４、上掲）の標準化コンセンサススケールに従って０．２９の疎水性を示す場合
には、本発明の目的に照らし、上記の一般的な分類とは異なって、Ｃｙｓ（Ｃ）
は極性親水性アミノ酸とされるものと理解すべきである。 当業者には明らかなように、上述のカテゴリーは相互に排他的なものではない
。従って、２以上の物理・化学的特性を示す側鎖を有するアミノ酸は、複数のカ
テゴリーに含まれる可能性がある。例えば、極性の置換基でさらに置換された芳
香族部分をもつ側鎖を有するアミノ酸、例えばＴｙｒ（Ｙ）は、芳香族疎水性の
特性及び極性若しくは親水性の特性の両方を示すことができ、従って、芳香族及
び極性の両方のカテゴリーに含まれ得る。あらゆるアミノ酸の適切な分類は、特
に本明細書の詳細な開示に照らせば、当業者には明らかであろう。 「ヘリックス破壊」アミノ酸と称されるある種のアミノ酸残基は、そのヘリッ
クス内の内部に含まれると、α−ヘリックスの構造を破壊する性質を有する。こ
のようなヘリックス破壊特性を示すアミノ酸残基は当技術分野で周知であり（例
えば、Ｃｈｏｕ ａｎｄ Ｆａｓｍａｎ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４
７：２５１−２７６を参照されたい）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｙ（Ｇ）及び潜在的
には全てのＤ−アミノ酸（Ｌ−ペプチドに含まれる場合；逆に、Ｌ−アミノ酸は
、Ｄ−ペプチドに含まれると、ヘリックス構造を破壊する）が挙げられる。これ
らのヘリックス破壊アミノ酸残基は上述のカテゴリーに含まれるが、これらの残
基は、ヘリックス内部のアミノ酸残基の置換には用いるべきでなく、ペプチドの
Ｎ末端及び／又はＣ末端の１〜３個のアミノ酸残基を置換するためだけに用いる
べきである。 上述のカテゴリーでは遺伝的にコードされるアミノ酸について例示したが、ア
ミノ酸置換は遺伝的にコードされるアミノ酸に制限される必要はなく、ある一定
の実施形態ではそうでないことが好ましい。実際に、構造（Ｉ）の好ましいペプ
チドの多くは、遺伝的にコードされていないアミノ酸を含有する。従って、天然
の遺伝的にコードされるアミノ酸に加えて、構造（Ｉ）のコアペプチド中のアミ
ノ酸残基は、天然の非コードアミノ酸及び合成アミノ酸で置換してもよい。 構造（Ｉ）のコアペプチドの有用な置換を与える一定の一般的なアミノ酸とし
ては、β−アラニン（β−Ａｌａ）、及び３−アミノプロピオン酸、２，３−ジ
アミノプロピオン酸（Ｄｐｒ）、４−アミノ酪酸などの他のオメガ−アミノ酸；
α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）；ε−アミノヘキサン酸（Ａｈａ）；δ−アミノ
吉草酸（Ａｖａ）；Ｎ−メチルグリシン又はサルコシン（ＭｅＧｌｙ）；オルニ
チン（Ｏｒｎ）；シトルリン（Ｃｉｔ）；ｔ−ブチルアラニン（ｔ−ＢｕＡ）；
ｔ−ブチルグリシン（ｔ−ＢｕＧ）；Ｎ−メチルイソロイシン（ＭｅＩｌｅ）；
フェニルグリシン（Ｐｈｇ）；シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）；ノルロイシ
ン（Ｎｌｅ）；ナフチルアラニン（Ｎａｌ）；４−クロロフェニルアラニン（Ｐ
ｈｅ（４−Ｃｌ））；２−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（２−Ｆ））；３
−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３−Ｆ））；４−フルオロフェニルアラ
ニン（Ｐｈｅ（４−Ｆ））；ペニシラミン（Ｐｅｎ）；１，２，３，４−テトラ
ヒドロイソキノリン−３−カルボン酸（Ｔｉｃ）；β−２−チエニルアラニン（
Ｔｈｉ）；メチオニンスルホキシド（ＭＳＯ）；ホモアルギニン（ｈＡｒｇ）；
Ｎ−アセチルリジン（ＡｃＬｙｓ）；２，４−ジアミノ酪酸（Ｄｂｕ）；２，３
−ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）；ｐ−アミノフェニルアラニン（Ｐｈｅ（ｐＮＨ_２）
）；Ｎ−メチルバリン（ＭｅＶａｌ）；ホモシステイン（ｈＣｙｓ）；ホモフェ
ニルアラニン（ｈＰｈｅ）及びホモセリン（ｈＳｅｒ）；ヒドロキシプロリン（
Ｈｙｐ）、ホモプロリン（ｈＰｒｏ）、Ｎ−メチル化アミノ酸及びペプトイド（
Ｎ−置換グリシン）が挙げられるが、これらに限定されない。 上述のカテゴリーに従う、遺伝的コードアミノ酸及び一般的非コードアミノ酸
の分類は、下記の表３にまとめられている。表３は単に説明のためのものであり
、本明細書に記載のコアペプチドを置換するのに使用することのできるアミノ酸
残基の限定的なリストではないことを理解すべきである。本明細書において特に
記載されていない他のアミノ酸残基も、観察されるそれらの物理的及び化学的特
性に基づいて、本明細書に記載の定義の下で容易に分類することができる。 ほとんどの場合において、構造（Ｉ）のコアペプチドのアミノ酸はＬ体のアミ
ノ酸で置換されるであろうが、置換はＬ体のアミノ酸に限定されない。従って、
「変異」型又は「改変」型という定義には、Ｌ−アミノ酸が同一のＤ−アミノ酸
（例えば、Ｌ−ＡｒｇからＤ−Ａｒｇへの置換）又は同じカテゴリー若しくはサ
ブカテゴリーのＤ−アミノ酸（例えば、Ｌ−ＡｒｇからＤ−Ｌｙｓへの置換）へ
置換される場合、及びその逆の場合も含まれる。実際に、動物被験体への経口投
与に適した好ましい実施形態では、ペプチドは少なくとも１つのＤ体アミノ酸で
構成されることが有利であり得る。このようなＤ−アミノ酸を含有するペプチド
は、口腔、腸又は血清中での分解に対して、Ｌ−アミノ酸のみで構成されるペプ
チドよりも安定であると考えられる。 上記のように、Ｄ−アミノ酸は、α−ヘリックスＬ−ペプチドの内部に含まれ
ると、α−ヘリックス構造を破壊する傾向がある。結論として、Ｄ−アミノ酸は
内部Ｌ−アミノ酸を置換するのに使用すべきでなく、Ｄ−アミノ酸置換は、ペプ
チドのＮ末端及び／又はＣ末端の１〜３個のアミノ酸に限定されるべきである。
好ましくは、Ｎ末端及び／又はＣ末端のアミノ酸のみがＤ−アミノ酸で置換され
る。 上記のアミノ酸残基分類を、構造（Ｉ）のコアペプチドのＳｃｈｉｆｆｅｒ−
Ｅｄｍｕｎｄｓｏｎヘリックスボイール（ｈｅｌｉｃａｌ ｗｈｅｅｌ）及びヘ
リックスネットダイアグラム表示（ｈｅｌｉｃａｌ ｎｅｔ ｄｉａｇｒａｍ
ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）、並びに本明細書に記載された望ましい特性の詳細
な説明とともに用いることにより、ヘリックスの両親媒性その他の特性を実質的
に保持し、従って本発明の範囲内であると考えられる構造（Ｉ）のコアペプチド
の改変型又は変異型を容易に得ることができる。 本発明の好ましい実施形態では、構造（Ｉ）のコアペプチドの改変型又は変異
型は、構造（Ｉ）に従って親水性又は疎水性残基を固定化し、少なくとも１つの
非固定化残基を他のアミノ酸、好ましくは、保存的に、すなわち同じカテゴリー
又はサブカテゴリーの他のアミノ酸で置換することにより得る。塩基性及び／又
は疎水性クラスターを構成する残基を構造（Ｉ）に従って固定化し、少なくとも
１つの非固定化残基を、好ましくは保存的に置換することもできる。 他の好ましい実施形態では、構造（Ｉ）のコアペプチドの改変型又は変異型は
、構造（Ｉ）に従ってヘリックスの親水性表面内に位置する親水性アミノ酸残基
を固定化し、少なくとも１つの非固定化アミノ酸残基を他のアミノ酸、好ましく
は同じカテゴリー又はサブカテゴリーの他のアミノ酸で置換することにより得る
。図２Ａを参照すれば、残基１、４、７、８、１１、１２、１４、１５及び１８
が、構造（Ｉ）のコアペプチドにより形成される両親媒性ヘリックスの親水性表
面内に位置することがわかる。これらの残基のうち、残基１以外の全てが親水性
であり、残基１は親水性又は疎水性のどちらかであり得る。従って、１つの好ま
しい実施形態では、残基４、７、８、１１、１２、１４、１５及び１８が構造（
Ｉ）に従って固定化され、残基１、２、３、５、６、９、１０、１３、１６及び
１７の少なくとも１つが、同じカテゴリーの他のアミノ酸、好ましくは同じサブ
カテゴリーの他のアミノ酸で置換される。あるいは、残基１も構造（Ｉ）に従っ
て固定化し、残基２、３、５、６、９、１０、１３、１６及び１７の少なくとも
１つを上記のように置換する。 特に好ましい実施形態では、Ｃ末端塩基性クラスター（残基１４、１６及び１
８）も構造（Ｉ）に従って固定化し、残基２、３、５、６、９、１０、１３及び
／又は１７だけを置換する。 他の特に好ましい実施形態では、疎水性クラスター（残基３、６、９及び１０
）も構造（Ｉ）に従って固定化し、残基２、５、１３、１６及び／又は１７だけ
を置換する。 さらに他の特に好ましい実施形態では、塩基性クラスター及び疎水性クラスタ
ーの両方を固定化し、残基２、５、１３及び／又は１７だけを置換する。 本発明の他の好ましい実施形態では、本発明のコアペプチドの改変型又は変異
型は、ヘリックスの疎水性表面内に位置する疎水性アミノ酸残基を固定化し、少
なくとも１つの非固定化アミノ酸残基を他のアミノ酸残基、好ましくは同じカテ
ゴリー又はサブカテゴリーの他の残基で置換することにより得る。 図２Ａを参照すれば、残基２、３、５、６、９、１０、１３、１６及び１７が
、疎水性表面内に位置することがわかる。これらのうち、親水性である残基１６
以外の全てが疎水性である。従って、１つの好ましい実施形態では、残基２、３
、５、６、９、１０、１３及び１７が構造（Ｉ）に従って固定化され、残基１、
４、７、８、１１、１２、１４、１５、１６及び１８の少なくとも１つが、他の
アミノ酸残基、好ましくは同じカテゴリー又はサブカテゴリーの他のアミノ酸で
置換される。 特に好ましい実施形態では、Ｃ末端塩基性クラスター（残基１４、１６及び１
８）も固定化し、残基１、４、７、８、１１、１２及び／又は１５だけを置換す
る。 他の実施形態では、構造（Ｉ）のペプチドの改変型又は変異型は、ヘリックス
の親水性又は疎水性表面内に存在する全アミノ酸残基を固定化し、好ましくは保
存的に、他方の表面内に存在する少なくとも１つのアミノ酸残基を他のアミノ酸
残基で置換することによって得る。疎水性クラスター及び／又は塩基性クラスタ
ーを構成する残基もまた、上記のように、構造（Ｉ）に従って任意で固定化して
もよい。 本発明の他の実施形態では、構造（Ｉ）の改変型又は変異型は、少なくとも１
つのアミノ酸を非保存的アミノ酸で置換することにより得る。当業者であれば、
このような置換が実質的に上記のヘリックスの両親媒性及び／又は構造的特性を
変更すべきでないことを認識するであろう。従って、一定の場合には、１以上の
アミノ酸対を置換してヘリックスの全体的特性を保存することが望ましい。適切
なアミノ酸置換を選択する上でのさらなる手引きは、表Ｘに掲げられたペプチド
配列により与えられる（後述の第８．３節を参照されたい）。 本発明のさらに他の実施形態では、構造（Ｉ）のコアペプチドのＮ末端及び／
又はＣ末端における最初の第１〜４アミノ酸残基は、α−ヘリックス２次構造の
領域に安定性を付与することが知られている１以上のアミノ酸残基又は１以上の
ペプチドセグメント（「エンド−キャップ」残基又はセグメント）で置換される
。このようなエンド−キャップ残基及びセグメントは当技術分野において周知で
ある（例えば、Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ ａｎｄ Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，１９８
８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０： １６４８−１６５２； Ｈａｒｐｅｒら、１９
９３，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３２（３０）： ７６０５−７６０９； Ｄ
ａｓｇｕｐｔａ ａｎｄ Ｂｅｌｌ，１９９３，Ｉｎｔ． Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．４１： ４９９−５１１； Ｓｅａｌｅら、１９９
４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３： １７４１−１７４５； Ｄｏｉｇ
ら、１９９４，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３： ３３９６−３４０３；Ｚｈ
ｏｕら、１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １８： １−７； Ｄｏｉｇ ａｎｄ
Ｂａｌｄｗｉｎ，１９９５，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ４： １３２５
−１３３６； Ｏｄａｅｒｔら、１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３４：
１２８２０−１２８２９； Ｐｅｔｒｕｋｈｏｖら、１９９６，Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ ３５： ３８７−３９７； Ｄｏｉｇら、１９９７，Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６： １４７−１５５を参照されたい）。あるいは、構
造（Ｉ）の最初の第１〜４のＮ末端及び／又はＣ末端アミノ酸残基を、エンド−
キャップ残基又はセグメントの構造及び／又は特性を模倣したペプチド模倣体部
分で置き換えることができる。適切なエンド−キャップ模倣体は当技術分野で周
知であり、例えば、Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ ａｎｄ Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，１
９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０： １６４８−１６５２； Ｈａｒｐｅｒら、
１９９３，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３２（３０）： ７６０５−７６０９；
Ｄａｓｇｕｐｔａ ａｎｄ Ｂｅｌｌ，１９９３，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄ
ｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．４１： ４９９−５１１； Ｓｅａｌｅら、１９
９４， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３： １７４１−１７４５； Ｄｏ
ｉｇら、１９９４，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３： ３３９６−３４０３；
Ｚｈｏｕら、１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １８： １−７； Ｄｏｉｇ ａ
ｎｄ Ｂａｌｄｗｉｎ，１９９５，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ４： １
３２５−１３３６； Ｏｄａｅｒｔら、１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
３４： １２８２０−１２８２９； Ｐｅｔｒｕｋｈｏｖら、１９９６，Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３５： ３８７−３９７； Ｄｏｉｇら、１９９７，Ｐｒ
ｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６： １４７−１５５に記載されている。 構造（Ｉ）は１８個の特定のアミノ酸残基位置を含有するが、本発明のコアペ
プチドは１８個よりも少ないアミノ酸残基を含有してもよいものと理解すべきで
ある。実際に、１４−１５個程度のアミノ酸残基しか含有しない構造（Ｉ）の末
端切断型又は内部欠失型であっても、構造（Ｉ）のコアペプチドにより形成され
る両親媒性ヘリックスの全体的な特徴及び特性を実質的に保持するものであれば
、本発明の範囲内であると考えられる。 構造（Ｉ）のペプチドの末端切断型は、構造（Ｉ）のＮ末端及び／又はＣ末端
から１以上のアミノ酸を欠失させることにより得る。構造（Ｉ）の内部欠失型は
、構造（Ｉ）のペプチドの内部から１以上のアミノ酸を欠失させることにより得
る。欠失する内部アミノ酸残基は、連続残基であっても、そうでなくてもよい。 当業者であれば、構造（Ｉ）のコアペプチドから内部アミノ酸残基を欠失させ
ることによって、ヘリックスの親水性−疎水性界面の平面が欠失箇所で１００°
回転することが分かるであろう。このような回転によって、得られるヘリックス
の両親媒性の特性が有意に変化するため、本発明の好適な実施形態では、ヘリッ
クスの長軸全長にわたる親水性−疎水性界面の平面の配列が実質的に保持される
ようにアミノ酸残基を欠失させる。 このことは、１つの完全なヘリックスターンが欠失するように十分な数の連続
または非連続アミノ酸残基を欠失させることで簡便に達成できる。理想化された
α−ヘリックスには１ターン当たり３．６個残基が含まれる。従って、好適な実
施形態では、３〜４個の連続または非連続のアミノ酸残基のグループを欠失させ
る。３アミノ酸または４アミノ酸のいずれを欠失させるかは、欠失させる最初の
残基のヘリックス中における位置に依存する。両親媒性ヘリックス中の任意の特
定の出発点から、１つの完全なヘリックスターンを構成する連続または非連続ア
ミノ酸残基の適切な数を決定することは、十分に当業者の能力の範囲内のことで
ある。 ヘリックスを安定化させる上で構造（Ｉ）のコアペプチドのＣ末端にある塩基
性クラスターが重要であると推定され、かつ脂質結合およびＬＣＡＴ活性化を行
う上で疎水性クラスターが重要であるため、本発明の好適な実施形態では、塩基
性および疎水性のクラスターを含んでなる残基は欠失させない。従って、好適な
実施形態では、残基１４、１６および１８（塩基性クラスター）並びに残基３、
６、９および１０（疎水性クラスター）は欠失させない。 構造（Ｉ）のコアペプチドはまた、一方もしくは両方の末端で、またはペプチ
ドの内部にて、ペプチドの構造および／または機能に関する特性を実質的に妨害
しない別のアミノ酸残基、また、ある実施形態ではこれらの特性を強化する別の
アミノ酸残基で伸長することができる。実際に、１９、２０、２１、２２個また
はそれ以上もの数のアミノ酸残基を含む伸長コアペプチドは、本発明の範囲内に
あると考えられる。好ましくは、このような伸長ペプチドは、構造（Ｉ）のペプ
チドの正味の両親媒性および他の特性を実質的に保持するであろう。当然のこと
ながら、アミノ酸をペプチド内部に付加すれば、疎水性−親水性界面の平面が挿
入箇所で上述の内部欠失の場合と同様に回転することは明らかであろう。従って
、内部欠失に関する上述の考察は、同様に内部付加にも当てはまる。 １つの実施形態では、コアペプチドを、Ｎおよび／またはＣ末端で最低でもヘ
リックスターン１個分伸長させる。好ましくは、このような伸長によって、脂質
の存在下ではヘリックスの二次構造（例えば、上述の末端キャップアミノ酸およ
びセグメント）が安定化するであろう。 特に好適な実施形態では、構造（Ｉ）のコアペプチドをＣ末端で塩基性アミノ
酸残基（好ましくはＬｙｓ（Ｋ））１個分伸長させる。 また、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストの「ブロック」体（即ち、Ｎおよび／またはＣ
末端が、Ｎ末端の−ＮＨ_２またはＣ末端の−Ｃ（Ｏ）ＯＨと反応可能な基によっ
てブロックされたＡｐｏＡ−Ｉアゴニストの形態）も本発明の範囲内に含まれる
。１８以下のアミノ酸残基を含む本発明のＡｐｏＡ−ＩアゴニストのＮおよび／
またはＣ末端の電荷を（Ｎ−アシル化ペプチドアミド／エステル／ヒドラジド／
アルコールおよびその置換体を合成することで）除去すると、アゴニストの未ブ
ロック体の活性に等しいアゴニスト、また、ある実施形態ではその活性を超える
アゴニストが得られることが判明している。例えば、ペプチド２１０（配列番号
２１０）が天然のＡｐｏＡ−Ｉと比較して４６％のＬＣＡＴ活性化を示すのに対
し、このペプチドのＮ末端及びＣ末端をブロックした型であるペプチド１９３（
配列番号１９３）は、同じアッセイ法において９６％のＬＣＡＴ活性化を示す。
２２個のアミノ酸を含有するある実施形態では、ＮまたはＣ末端をブロックする
ことで、未ブロック体よりも活性の低下したＡｐｏＡ−Ｉアゴニストが得られる
。しかしながら、２２個以上のアミノ酸から構成されるＡｐｏＡ−Ｉアゴニスト
のＮおよびＣ末端の両方をブロックすれば、活性が回復すると予測される。従っ
て、本発明の好適な実施形態では、１８個以下のアミノ酸を含有するコアペプチ
ドのＮおよび／またはＣ末端のいずれか（好ましくは両末端）をブロックするの
に対し、１８個以上のアミノ酸を含有するペプチドのＮおよびＣ末端は両方とも
ブロックするか、または両方ともブロックしない。典型的なＮ末端ブロッキング
基としては、ＲＣ（Ｏ）−（式中、Ｒは−Ｈ、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_{１
−Ｃ ６}）アルケニル、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキニル、（Ｃ_５〜Ｃ_２０）アリール、
（Ｃ_６〜Ｃ_２６）アルクアリール（ａｌｋａｒｙｌ）、５〜２０員ヘテロアリー
ルまたは６〜２６員アルクヘテロアリール（ａｌｋｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ）が挙
げられる。好適なＮ末端ブロッキング基としては、アセチル、ホルミルおよびダ
ンシルが挙げられる。典型的なＣ末端ブロッキング基としては、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ
Ｒおよび−Ｃ（Ｏ）ＯＲ（式中、各Ｒは独立に上記の通りである）が挙げられる
。好適なＣ末端ブロッキング基としては、各Ｒが独立にメチルである基が挙げら
れる。特定の理論に拘束させるつもりはないが、このような末端ブロッキング基
は、脂質の存在下でα−ヘリックスを安定化させると考えられる（例えば、 Ｖｅｎｋａｔａｃｈｅｌａｐａｔｈｉら，１９９３，ＰＲＯＴＥＩＮＳ： Ｓｔ
ｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：３４９
−３５９を参照）。 ＡｐｏＡ−Ｉの天然の構造には、一斉に脂質に結合するように働くと考えられ
る８個のヘリックス単位が含まれる（Ｎａｋａｇａｗａら，１９８５，Ｊ．Ａｍ
．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０７：７０８７−７０９２； Ａｎａｎｔｈａｒａｍａ
ｉａｈら，１９８５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：１０２４８−１０２６
２； Ｖａｎｌｏｏら，１９９１，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．３２：１２５３−
１２６４； Ｍｅｎｄｅｚら，１９９４，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４：
１６９８−１７０５； Ｐａｌｇｕｎａｒｉら，１９９６，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃ
ｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．１６：３２８−３３８； Ｄｅｍ
ｏｏｒら，１９９６，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２３９：７４−８４）。従
って、本明細書に記載のコアペプチドの二量体、三量体、四量体およびそれ以上
の高次の重合体（「多量体」）より構成されるＡｐｏＡ−Ｉアゴニストも本発明
に含まれる。このような多量体は、縦列反復配列、分枝網状構造体、またはこれ
らの組み合わせの形態であってよい。コアペプチドは、互いに直接結合してもよ
く、１つ以上のリンカーで隔てられていてもよい。 多量体を含んでなるコアペプチドは、構造（Ｉ）のペプチド、構造（Ｉ）の類
似体、構造（Ｉ）の突然変異体、構造（Ｉ）の末端切断体もしくは内部欠失体、
構造（Ｉ）の伸長体および／またはこれらの組み合わせであってよい。コアペプ
チドは、頭−尾型（即ち、Ｎ末端をＣ末端へ）、頭−頭型（即ち、Ｎ末端をＮ末
端へ）、尾−尾型（即ち、Ｃ末端をＣ末端へ）、またはこれらの組み合わせの型
で結合することができる。 本発明の一つの実施形態では、多量体は、２、３、４および約１０個までのコ
アペプチドの縦列反復配列である。好ましくは、多量体は、２〜８個のコアペプ
チドの縦列反復配列である。従って、一実施形態では、本発明のＡｐｏＡ−Ｉア
ゴニストは、以下の構造式： （ＩＩ） ＨＨ−［−ＬＬ_ｍ−ＨＨ−］_ｎ−ＬＬ_ｍ−ＨＨ （式中、 各ｍは独立に０〜１の整数であり、好ましくは１であり、 ｎは０〜１０の整数であり、好ましくは０〜８であり、 各「ＨＨ」は独立に構造（Ｉ）のコアペプチドもしくはペプチド類似体、また
は本明細書に記載のこれらの突然変異体、末端切断体、内部欠失体もしくは伸長
体を表し、 各「ＬＬ」は独立にリンカーを表し、 各「−」は独立に共有結合を表す） を有する多量体を含んでなる。 構造（ＩＩ）では、リンカーＬＬは、２個のペプチドを互いに共有結合し得る
任意の二官能性分子であってよい。従って、適切なリンカーは、官能基がペプチ
ドのＮおよび／またはＣ末端に共有結合可能な二官能性分子である。ペプチドの
ＮまたはＣ末端への結合に適した官能基は、このような共有結合を形成するのに
適した化学的性質と同様に、当該技術分野で周知である。 リンカーは、多量体の所望の特性に応じて、柔軟、硬質または半硬質であって
よい。適切なリンカーとしては、例えば、ＰｒｏまたはＧｌｙ等のアミノ酸残基
、または約２〜約５、１０、１５もしくは２０またはそれ以上のアミノ酸を含有
するペプチドセグメント、Ｈ_２Ｎ（ＣＨ_２）_ｎＣＯＯＨ（式中、ｎは１〜１２の
整数である）等の二官能性有機化合物などが挙げられる。このようなリンカーの
例、並びにこのようなリンカーおよびこのようなリンカーを組込んだペプチドの
作製方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｈｕｎｉｇら，１９７４，Ｃ
ｈｅｍ．Ｂｅｒ．１００：３０３９−３０４４； Ｂａｓａｋら，１９９４，Ｂ
ｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．５（４）：３０１−３０５を参照）。 本発明の好適な実施形態では、縦列反復配列は、１個のプロリン残基によって
内部で区切られている。このため、コアペプチドがそのＮもしくはＣ末端にてプ
ロリンで終結している場合（例えば、構造（Ｉ）のＸ_１がＰｒｏ（Ｐ）もしくは
Ｄ−Ｐｒｏ（ｐ）の場合）には、構造（ＩＩ）のｍは好ましくは０である。コア
ペプチドがＮもしくはＣ末端プロリンを含まない場合には、ＬＬは好ましくはＰ
ｒｏ（Ｐ）またはＤ−Ｐｒｏ（ｐ）であり、ｍは好ましくは１である。 本発明のある実施形態では、一定の条件下で１個以上のヘリックスセグメント
（ＨＨ）を放出し得る開裂可能なリンカーを使用するのが望ましい。適切な開裂
可能なリンカーとしては、プロテアーゼによって認識されるアミノ酸配列を有す
るペプチド、エンドヌクレアーゼによって開裂されるオリゴヌクレオチド、およ
び化学的手段（例えば、酸性、塩基性もしくは他の条件下）によって開裂可能な
有機化合物が挙げられる。好ましくは、開裂条件は、多量体ＡｐｏＡ−Ｉアゴニ
ストを構成するヘリックスセグメントおよび／または非開裂リンカーを変性また
は分解しないような比較的穏和なものである。 選択的に開裂し得るペプチドリンカーおよびオリゴヌクレオチドリンカー、並
びにリンカーを開裂する手段は周知であり、当業者には直ちに明らかであろう。
選択的に開裂し得る適切な有機化合物リンカーは、当業者には明らかであり、例
えば、ＷＯ９４／０８０５１並びにこれに引用されている参考文献に記載のもの
が挙げられる。 好適な実施形態では、使用するリンカーは内在性の循環酵素に対する基質であ
るペプチドであり、これにより多量体ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストのｉｎｖｉｖｏに
おける選択的開裂が可能になる。リンカーの開裂に適した内在性の酵素としては
、例えば、プロアポリポタンパク質Ａ−Ｉプロペプチダーゼが挙げられる。適切
な酵素、並びにこのような酵素の基質として働くペプチドセグメントは、当該技
術分野で周知である（例えば、Ｅｄｅｌｓｔｅｉｎら，１９８３，Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２５８：１１４３０−１１４３３； Ｚａｎｉｓ，１９８３，Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：２５７４−２５７８を参照
）。 上述したように、本発明のコアペプチドの重要な特徴は、逆平行の状態で配置
された場合に分子間水素結合または塩橋を形成する能力である。従って、本発明
の好適な実施形態でば、構造（ＩＩ）のヘリックスセグメント（ＨＨ）が逆平行
の状態に並んで、かつ脂質の存在下にて分子間水素結合もしくは塩橋を形成する
よう、十分な長さと柔軟性を有するリンカーを使用する。 十分な長さと柔軟性を有するリンカーとしては、限定するものではないが、Ｐ
ｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｃｙｓ−Ｃｙｓ、Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_ｎ−ＣＯＯＨ
（式中、ｎは１〜１２であり、好ましくは４〜６である）、Ｈ_２Ｎ−アリール−
ＣＯＯＨおよび炭水化物が挙げられる。 あるいは、天然のアポリポタンパク質は、逆平行ヘリックスセグメント間の協
同的結合を許容するため、一次配列において天然のアポリポタンパク質（例えば
、ＡｐｏＡ−Ｉ、ＡｐｏＡ−ＩＩ、ＡｐｏＡ−ＩＶ、ＡｐｏＣ−Ｉ、ＡｐｏＣ−
ＩＩ、ＡｐｏＣ−ＩＩＩ、ＡｐｏＤ、ＡｐｏＥおよびＡｐｏＪ）の隣接ヘリック
スを結合するペプチドセグメントに相当するペプチドリンカーは、コアペプチド
を結合するのに簡便に使用することができる。これらの配列は当該技術分野で周
知である（例えば、Ｒｏｓｓｅｎｅｕら，“Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ
Ｐｒｉｍａｒｙ ａｎｄ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ Ｓｔｒｕｃｔｕ
ｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ”， Ｓｔｒｕｃｔｕｒ
ｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｃｈ．６，
１５９−１８３，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．， １９９２を参照）。 逆平行ヘリックスセグメントの縦列反復配列間に分子間水素結合または塩橋を
形成し得る他のリンカーとしては、ペプチドの逆ターン（例えば、β−ターンお
よびγ−ターン）、並びにペプチドのβ−ターンおよび／またはγ−ターン構造
を模倣する有機分子が挙げられる。通常、逆ターンは、１本のポリペプチド鎖に
逆平行β−シートまたは逆平行α−ヘリックス構造の領域が含まれるよう、ポリ
ペプチド鎖の方向を逆転させるペプチドのセグメントである。β−ターンは通常
４個のアミノ酸残基から構成され、γ−ターンは、通常３個のアミノ酸残基から
構成される。 多くのペプチドのβ−ターンのコンホメーションおよび配列は、当該技術分野
で十分に記載されており、例としては、限定するものではないが、タイプＩ、タ
イプＩ’、タイプＩＩ、タイプＩＩ’、タイプＩＩＩ、タイプＩＩＩ’、タイプ
ＩＶ、タイプＶ、タイプＶ’、タイプＶＩａ、タイプＶＩｂ、タイプＶＩＩおよ
びタイプＶＩＩＩが挙げられる（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，１９８１，Ａｄｖ．Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍ．３４：１６７−３３９； Ｒｏｓｅら，１９８５，Ａ
ｄｖ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍ．３７：１−１０９； Ｗｉｌｍｏｔら，１９
８８，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０３：２２１−２３２； Ｓｉｂａｎｄａら，
１９８９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０６：７５９−７７７； Ｔｒａｍｏｎｔ
ａｎｏら，１９８９，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔ．Ｆｕｎｃｔ．Ｇａｎｅ
ｔ．６：３８２−３９４を参照）。 β−ターン等の短鎖ペプチドターンの特異的なコンホメーションは、主として
、ターン中における一定のアミノ酸残基の位置に依存する（通常は、Ｇｌｙ、Ａ
ｓｎまたはＰｒｏ）。一般に、タイプＩのβ−ターンでは、ターンの位置１〜４
はいずれのアミノ酸残基でも可能である（但し、Ｐｒｏが位置３に存在すること
はない）。タイプＩおよびタイプＩＩのターンとも、Ｇｌｙは位置４を優先的に
占め、Ｐｒｏは位置２を優先的に占める。Ａｓｐ、Ａｓｎ、ＳｅｒおよびＣｙｓ
残基は位置１に存在することが多く、その側鎖は残基３のＮＨに水素結合するこ
とが多い。 タイプＩＩのターンでは、ＧｌｙおよびＡｓｎは位置３に存在することが最も
多い。これは、ＧｌｙおよびＡｓｎであれば、必要なバックボーンの角度が最も
容易に得られるためである。理想的には、タイプＩ’のターンはＧｌｙを位置２
および３に有し、タイプＩＩ’のターンはＧｌｙを位置２に有する。タイプＩＩ
Ｉのターンは一般にほとんどのアミノ酸残基を有することができるが、タイプＩ
ＩＩ’のターンは通常位置２および３にＧｌｙが必要である。タイプＶＩａおよ
びＶＩｂのターンは、通常ｃｉｓペプチド結合と内部残基としてのＰｒｏを有す
る。タンパク質およびペプチド中に含まれるβ−ターンの個々のタイプおよび配
列の概説については、Ｗｉｌｍｏｔら，１９８８，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０
３：２２１−２３２を参照されたい。 多くのペプチドのγ−ターンのコンホメーションおよび配列も、当該技術分野
で十分に記載されている（例えば、Ｒｏｓｅら，１９８５，Ａｄｖ．Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｃｈｅｍ． ３７：１−１０９； Ｗｉｌｍｅｒ−Ｗｈｉｔｅら，１９８
７，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１２：１８９−１９２； Ｗｉｌ
ｍｏｔら，１９８９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０３：２２１−２３２；Ｓｉｂ
ａｎｄａら，１９８９， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０６：７５９−７７７；
Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏら，１９８９，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ： Ｓｔｒｕｃｔ．Ｆｕ
ｎｃｔ．Ｇｅｎｅｔ． ６：３８２−３９４を参照）。これら全てのタイプのβ
−ターンおよびγ−ターン構造並びにその対応配列、並びに後から発見されるペ
プチドのβ−ターンおよびγ−ターン構造並びに配列は、特に本発明の範囲内と
する。 あるいは、リンカー（ＬＬ）は、ペプチドのβ−ターンまたはγ−ターンの構
造を模倣する有機分子または成分を含んでいてもよい。このようなβ−ターンお
よび／またはγ−ターン模倣成分、並びにこのような成分を含有するペプチドを
合成する方法は、当該技術分野で周知であり、特に、ＧｉａｎｎｉｓおよびＫｏ
ｌｔｅｒ，１９９３ Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇ．３２：
１２４４−１２６７； Ｋａｈｎら，１９８８，Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅ
ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ １：７５−７９；並びにＫａｈｎら，１９８７，Ｔｅｔｒ
ａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２８：１６２３−１６２６に記載のものが挙げられ
る。 本発明のさらに別の実施形態では、多量体は分枝網状構造体の形態である（例
えば、図７参照）。このような網状構造体は、３個以上のヘリックス単位を一つ
の結合基に結合させる多官能性結合基を使用することにより簡便に得られる。こ
のように、分枝網状構造体は、ペプチドのＮおよび／またはＣ末端に共有結合可
能な官能基を３個、４個またはそれ以上有する分子を利用する。適切な結合基と
しては、例えば、ヒドロキシル、スルファニル（ｓｕｌｆａｎｙｌ）、アミノ、
カルボキシル、アミドおよび／またはエステル官能基を有する側鎖を有するアミ
ノ酸残基、例えば、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）
、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｏｒｎ、Ａｓｐ
（Ｄ）およびＧｌｕ（Ｅ）、またはこのような官能基を含む他の有機分子が挙げ
られる。 １個の結合基に結合したヘリックスセグメントは、末端を介して結合する必要
はない。実際に、ある実施形態では、ヘリックスセグメントは、逆平行の状態に
並ぶように（即ち、ヘリックスのいくつかはＮ末端を介して結合し、他のものは
Ｃ末端を介して結合するように）１個の結合基に結合する。 ヘリックスセグメントは、結合基に直接結合できるか、または上述のような１
個以上の二官能性リンカー（ＬＬ）によって結合基から離れていてもよい。 図７Ａおよび７Ｂを参照すれば明らかなように、各多官能性結合基がノードを
構成する場合には、分枝網状構造体を、該網状構造体を形成する「ノード」の数
について記載することができる。図７Ａおよび７Ｂでは、ヘリックスセグメント
（即ち、本発明のコアペプチド）を円柱で表し、多官能性結合基（またはノード
）を丸（●）で表し、丸から延びる線の数で多官能性結合基の「次数（ｏｒｄｅ
ｒ）」（または官能基の数）を示している。 網状構造体中のノードの数は、通常ヘリックスセグメントの所望の総数に依存
し、典型的には約１〜２である。当然のことながら、所望のヘリックスセグメン
トの数が決まっている場合には、より次数の高い結合基を有する網状構造体の方
が少ないノードを有することは明らかであろう。例えば、図７Ａおよび７Ｂを参
照すると、７個のヘリックス単位を有する三次網状構造体（即ち、三官能性結合
基を有する網状構造体）はノードを３個有するのに対し（図７Ａ）、７個のヘリ
ックス単位を有する四次網状構造体（即ち、四官能性結合基を有する網状構造体
）はわずか２個のノードを有する（図７Ｂ）。 網状構造体は均一の次数（即ち、全てのノードが、例えば三官能性または四官
能性の結合基である網状構造体）であってもよく、または次数が揃っていなくて
もよい（例えば、ノードが、例えば三官能性および四官能性の結合基が混在した
ものである網状構造体）。当然のことながら、均一な次数の網状構造体であって
も、結合基は同一である必要はないことは理解すべきである。例えば、２、３、
４個またはそれ以上の異なる三官能性結合基を有する三次網状構造体を使用して
もよい。 線状の多量体と同様、分枝網状構造体を含んでなるヘリックスセグメントは同
一である必要はないが、同一であってもよい。 このような次数の揃っていない分枝網状構造体の例を図７Ｃに示す。図７Ｃで
は、ヘリックスセグメント（即ち、本発明のコアペプチド）を円柱で表し、多官
能性結合基を丸（●）で表し、丸から延びる線の数で多官能性結合基の「次数」
（または官能基の数）を示している。ヘリックスセグメントをつなぐ線は、上述
したように二官能性リンカー（ＬＬ）を表す。分枝網状構造体を形成するヘリッ
クスセグメントは、上述したようにコアペプチドの縦列反復配列であってもよい
。 一つの具体例では、本発明の分枝網状構造体は式： （ＩＩＩ） Ｘ−Ｎ_ｙａ−Ｘ_{（ｙａ−１）}−（−Ｎ_ｙｂ−Ｘ_{（ｙｂ−１）}）_ｐ
（式中、 各Ｘは独立にＨＨ−（−ＬＬ_ｍ−ＨＨ−）_ｎ−ＬＬ_ｍ−ＨＨであり、 各ＨＨは、独立に構造（Ｉ）のコアペプチドまたはその類似体、または本明細
書中に記載のこれらの突然変異体、末端切断体、内部欠失体もしくは伸長体であ
り、 各ＬＬは独立に二官能性リンカーであり、 各ｍは独立に０〜１の整数であり、 各ｎは独立に０〜８の整数であり、 Ｎ_ｙａおよびＮ_ｙｂは各々独立に多官能性結合基であって、ｙ_ａおよびｙ_ｂは
それぞれＮ_ｙａおよびＮ_ｙｂ上の官能基の数を表し、 各ｙ_ａまたはｙ_ｂは独立に３〜８の整数を表し、 ｐは０〜７の整数であり、 各「−」は独立に共有結合を表す） で表される。 好適な実施形態では、分枝網状構造体は「Ｌｙｓ−樹構造（Ｌｙｓ−ｔｒｅｅ
）」を形成する、即ち、多官能性結合基が１個以上のＬｙｓ（Ｋ）残基である網
状構造体である（例えば、図７Ｄ参照）。 一つの具体例では、本発明の「Ｌｙｓ−樹構造」分枝網状構造体は式： （式中、 各Ｘは独立にＨＨ−（−ＬＬ_ｍ−ＨＨ−）_ｎ−ＬＬ_ｍ−ＨＨであり、 各ＨＨは、独立に構造（Ｉ）のコアペプチドまたはペプチド類似体、または本
明細書中に記載のこれらの突然変異体、末端切断体、内部欠失体もしくは伸長体
であり、 各ＬＬは独立に二官能性リンカーであり、 各ｎは独立に０〜８の整数であり、 各ｍは独立に０〜１の整数であり、 Ｒ_１は−ＯＲまたは−ＮＲＲであり、 各Ｒは独立に−Ｈ、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルケニル、（
Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキニル、（Ｃ_５〜Ｃ_２０）アリール、（Ｃ_６〜Ｃ_２６）アルク
アリール、５〜２０員ヘテロアリールまたは６〜２６員アルクヘテロアリールで
ある） で表わされる。 ５．１．１． 構造および機能の分析 本発明のコアペプチドまたはペプチド類似体の構造および機能、並びにこのよ
うなコアペプチドから構成されるＡｐｏＡ−Ｉアゴニスト（上述のような多量体
形態を含む）の構造および機能は、活性なアゴニストまたはＡｐｏＡ−Ｉ模倣体
を選別するためにアッセイすることができる。例えば、コアペプチドまたはペプ
チド類似体は、脂質の存在下でα−ヘリックスを形成する能力、脂質に結合する
能力、脂質と複合体を形成する能力、ＬＣＡＴを活性化する能力、コレステロー
ルの流出を促進する能力などについてアッセイすることができる。 ペプチドの構造および／または機能を分析する方法およびアッセイは、当該技
術分野で周知である。好適な方法を後述の実施例に示す。例えば、後述の第７節
に記載する円二色性（ＣＤ）アッセイおよび核磁気共鳴（ＮＭＲ）アッセイを使
用して、ペプチドまたはペプチド類似体の構造（特に、脂質の存在下でのらせん
度）を分析することができる。脂質に結合する能力は、後述の第７節に記載する
蛍光分光法アッセイを使用して判定できる。ＬＣＡＴを活性化するペプチドおよ
び／またはペプチド類似体の能力は、後述の第８節に記載するＬＣＡＴ活性化を
用いて容易に判定できる。後述の第９、１０および１１節に記載するｉｎ ｖｉ
ｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏアッセイを使用して、半減期、分布、コレステロー
ルの流出およびＲＣＴに対する作用を評価することができる。 通常、下記の表ＩＶに列挙した特性を示す本発明のコアペプチドおよび／また
はペプチド類似体は、活性であるとみなす。 後述の実施例に示すように、高度のＬＣＡＴ活性化（３８％以上）を示すコア
ペプチドは、通常、小型の脂質単層小胞（ｌｉｐｉｄｉｃ ｓｍａｌｌ ｕｎｉ
ｌａｍｅｌｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅ； ＳＵＶ）の存在下では有意なα−ヘリッ
クス構造をとり（２２個以上のアミノ酸残基を含有する未ブロックのペプチドと
１８個以下のアミノ酸残基を含有するブロックされたペプチドの場合には６０％
以上のヘリックス構造であり、１８個以下のアミノ酸を含有する未ブロックのペ
プチドの場合には４０％以上のヘリックス構造である）、ＬＣＡＴ活性化を殆ど
示さないか、または全く示さないペプチドは、α−ヘリックス構造を殆どとらな
い。しかしながら、脂質の存在下で有意なヘリックス構造を示すペプチドであっ
ても、ＬＣＡＴに有意な影響を与えない場合もある。 同様に、有意なＬＣＡＴ活性化を示すコアペプチドは典型的には脂質に結合す
るが、脂質結合を示すペプチドであってもＬＣＡＴ活性化に有意な影響を与えな
い場合もある。 そのため、当業者であれば、脂質の存在下でα−ヘリックスを形成し、脂質に
結合する本明細書に記載のコアペプチドの能力が活性にとって重要である一方、
多くの場合においてこれらの特性で十分とは言えないことも理解できるであろう
。従って、好適な実施形態では、本発明のコアペプチドを一連のスクリーニング
にかけ、有意な薬理活性を示すコアペプチドについて選別を行う。 第一の段階では、後述の第７節に記載するＣＤアッセイを用いて、脂質の存在
下でα−ヘリックスを形成する能力についてコアペプチドをスクリーニングする
。次いで、脂質の存在下（約５μＭの濃度、約３０の脂質：ペプチドモル比）で
、少なくとも４０％がヘリックスであるペプチド（１８個以下のアミノ酸を含有
する未ブロックのペプチド）または少なくとも６０％がヘリックスであるペプチ
ド（１８個以下のアミノ酸を含有するブロックされたペプチドおよび２２個以上
のアミノ酸を含有する未ブロックのペプチド）を、後述の第７節に記載する蛍光
アッセイを用いて、脂質に結合する能力についてスクリーニングする。当然のこ
とながら、蛍光Ｔｒｐ（Ｗ）またはＮａｌ残基を含むコアペプチドに限って、蛍
光によって脂質結合をスクリーニングする。しかしながら、蛍光残基を含まない
ペプチドの場合でも、脂質の存在下でらせん度が増加すれば脂質へ結合すること
は明らかである。 次いで、ＳＵＶの存在下（０．５〜１０μＭのペプチド、１〜５０の範囲の脂
質：ペプチドモル比）で脂質結合を示すコアペプチドを薬理活性についてスクリ
ーニングする。当然のことながら、スクリーニング対象の薬理活性は、ＡｐｏＡ
−Ｉアゴニストの所望の用途に依存するものである。好適な実施形態では、本明
細書に記載の方法においてＬＣＡＴを活性化するペプチドが特に有用であるため
、ＬＣＡＴを活性化する能力についてコアペプチドをスクリーニングする。天然
のヒトＡｐｏＡ−Ｉと比べて少なくとも約３８％のＬＣＡＴ活性化を示すコアペ
プチド（後述の第８節に記載するＬＣＡＴ活性化アッセイを用いて判定）が好適
であり、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％以上のＬＣＡＴ活性化を
示すコアペプチドが特に好適である。 ５．１．２ 好ましい実施様態 本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、好ましい実施様態の方法によってさらに
定義することができる。 １つの好ましい実施様態では、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、構造（Ｉ）、また
はそのＮ末端アシル化および／またはＣ末端アミド化もしくはエステル化型によ
る、２２個のアミノ酸残基ペプチドである。 他の好ましい実施様態では、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、構造（Ｉ）、または
そのＮ末端アシル化および／またはＣ末端アミド化もしくはエステル化型による
、１８個のアミノ酸残基ペプチドであって、ここで： Ｘ_２はＡｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）またはＬｅｕ（Ｌ）であり； Ｘ_４はＡｓｐ（Ｄ）またはＧｌｕ（Ｅ）であり； Ｘ_７はＡｒｇ（Ｒ）、Ｌｙｓ（Ｋ）またはＯｒｎであり； Ｘ_８はＡｓｐ（Ｄ）またはＧｌｕ（Ｅ）であり； Ｘ_１１はＧｌｕ（Ｅ）またはＡｓｎ（Ｎ）であり； Ｘ_１２はＧｌｕ（Ｅ）であり； Ｘ_１４はＡｒｇ（Ｒ）、Ｌｙｓ（Ｋ）、ＯｒｎまたはＬｅｕ（Ｌ）であり； Ｘ_１６はＡｒｇ（Ｒ）、Ｌｙｓ（Ｋ）またはＯｒｎであり；および／または Ｘ_１８はＡｒｇ（Ｒ）、Ｌｙｓ（Ｋ）またはＯｒｎであり、 そしてＸ_１、Ｘ_３、Ｘ_５、Ｘ_６、Ｘ_９、Ｘ_１０、Ｘ_１３、Ｘ_１５およびＸ_１７は
先に構造（Ｉ）で定義されたとおりである。 他の好ましい実施様態では、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、構造（Ｉ）、または
そのＮ末端アシル化型および／もしくはＣ末端アミド化型もしくはエステル化型
による、１８個のアミノ酸残基ペプチドであって、ここで、Ｘ_１１がＡｓｎ（Ｎ
）である場合にばＸ_１４はＬｅｕ（Ｌ）であり、Ｘ_１１がＡｓｎ（Ｎ）以外のも
のである場合にはＸ_１４はＬｅｕ（Ｌ）以外である。本発明のこの態様に従う特
に好ましい実施態様は、これらのペプチド、又はそのＮ末端アシル化型及び／若
しくはＣ末端アミド化型若しくはエステル化型であって、ここで、構造（Ｉ）中
の様々なＸ_ｎは先の段落において定義されたとおりである。本発明のこの態様に
従う特に好ましい例示的な実施態様は、ペプチド２０９（ＰＶＬＤＬＦＲＥＬＬ
ＮＥＬＬＱＫＬＫ，配列番号２０９）、ならびにそのＮ末端アシル化型及び／若
しくはＣ末端アミド化型若しくはエステル化型である。 さらに他の好ましい実施様態では、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、構造（Ｉ）に
従うペプチドの改変型もしくは変異型、またはそのＮ末端アシル化型および／も
しくはＣ末端アミド化型もしくはエステル化型であって、ここで： Ｘ_１はＡｓｐ（Ｄ）でなく； Ｘ_９はＧｌｙ（Ｇ）でなく； Ｘ_１０はＧｌｙ（Ｇ）でなく； Ｘ_１２はＬｅｕ（Ｌ）でなく；および Ｘ_１３はＧｌｙ（Ｇ）でない。 さらに他の好ましい実施様態では、本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、以下
に挙げるペプチドの群： （Ｎ末端および／またはＣ末端保護化型又は非保護化型のいずれか）から選択さ
れる。 さらに他の好ましい実施様態では、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、以下に挙げる
ペプチドの群： （Ｎ末端および／またはＣ末端保護化型又は非保護化型のいずれか）から選択さ
れる。 さらに他の好ましい実施様態では、該ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは構造ＩＩ、Ｉ
ＩＩおよび／またはＩＶによる多量体型であり、ここで各ＨＨは、構造（Ｉ）、
またはそのＮ末端アシル化および／もしくはＣ末端アミド化もしくはエステル化
型によるペプチド、または本明細書に記載の構造（Ｉ）による任意の好ましいペ
プチドである。 さらに他の好ましい実施様態では、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストを構成するコアペ
プチドは、以下のペプチド： のいずれでもない。 最後の好ましい実施様態では、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、元来のヒトＡｐｏ
Ａ−Ｉと比較して３８％より低いＬＣＡＴ活性化活性しか発現しない表Ｘ（第８
．３節、後掲）に掲げたペプチドのいずれでもない。５．２ ＡｐｏＡ−Ｉペプチドアゴニストの合成および精製 事実上あらゆる公知のペプチド調製技法を用いて、本発明のコアペプチドを調
製することができる。例えば、従来の段階的溶液（ｓｔｅｐ−ｗｉｓｅ ｓｏｌ
ｕｔｉｏｎ）または固相ペプチド合成を用いて、または遺伝子組換え技法により
、前記ペプチドを合成することができる。５．２．１ 化学合成 従来の段階的溶液または固相合成を用いて、コアペプチドを調製することがで
きる（例えば、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌ
ｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，１９９７，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃ
ａ Ｒａｔｏｎ Ｆｌｏｒｉｄａ，および当該文献中に引用されている文献；Ｓ
ｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ： Ａ Ｐｒａｃ
ｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ａｔｈｅｒｏｎ ＆ Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｅｄ
ｓ．，１９８９， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ、およ
び当該文献中に引用されている文献を参照のこと）。 あるいは、本発明のペプチドは、例えば、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，１９９６，
Ｔｅｔａｒｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３７（７）：９３３−９３６； Ｂａｃａ
，ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１７：１８８１−
１８８７； Ｔａｍ，ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ
Ｐｒｏｔ ｅｉｎ Ｒｅｓ．４５： ２０９−２１６； Ｓｃｈｎｏｌｚｅｒ
ａｎｄ Ｋｅｎｔ，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６： ２２１−２２５；
Ｌｉｕ ａｎｄ Ｔａｍ，１９９４，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１６（１
０）： ４１４９−４１５３；Ｌｉｕ ａｎｄ Ｔａｍ，１９９４，Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１： ６５８４−６５８８；Ｙａｍａ
ｓｈｉｒｏ ａｎｄ Ｌｉ，１９８８，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔ
ｅｉｎ Ｒｅｓ．３１： ３２２−３３４に記載されたセグメント濃縮により、
調製することができる。これは、特にグリシン含有ペプチドの場合に当てはまる
。本発明のペプチドを合成するのに有用な他の方法は、Ｎａｋａｇａｗａ ｅｔ
ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０７： ７０８７−７０
９２に記載されている。 Ｎ−および／またはＣ−末端ブロッキング基を含有するＡｐｏＡ−Ｉアゴニス
トは、有機化学の標準的な技法を用いて調製することができる。例えば、ペプチ
ドのＮ末端をアシル化する方法、またはペプチドのＣ末端をアミド化もしくはエ
ステル化する方法は、当分野において周知である。Ｎ末端および／またはＣ末端
で他の修飾を行う方法は、当業者であれば容易に思いつくであろう。例えば、末
端ブロッキング基を付着するのに必要であれば、任意の側鎖官能基を保護する方
法がある。 薬学的に許容可能な塩（対イオン）は、イオン交換クロマトグラフィーまたは
当分野で周知である他の方法により、都合よく作成することができる。 タンデム多量体形態の本発明の化合物は、合成中の適切な段階でペプチド鎖に
リンカーを加えることにより、都合よく作成することができる。あるいは、ヘリ
ックスセグメントを合成し、各セグメントをリンカーと反応させることができる
。実際的な合成方法は、リンカーの組成に依存する。適切な保護化方法および化
学は周知であり、当業者にとってみれば明らかであろう。 分岐網状構造体の本発明の化合物を、３量体樹脂および４量体樹脂、ならびに
Ｔａｍ，１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：
５４０９−５４１３およびＤｅｍｏｏｒ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｅｕｒ．Ｊ
．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２３９： ７４−８４に記載された化学法を用いて都合よく
合成することができる。高次または低次の分岐網状構造体を合成する方法および
合成樹脂の改良（または異なるコアペプチドヘリックスセグメントの組合せを含
む）は、ペプチド化学および／または有機化学の分野における当業者の能力の範
囲内である。 ジスルフィド結合の形成が望ましい場合、該形成は、穏やかな酸化剤の存在化
において一般に行われる。化学酸化剤を使用してもよいし、または該化合物を単
に大気中の酸素に暴露してこれらの結合を行わせてもよい。当分野ではさまざま
な方法が公知であり、例えばＴａｍ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｓｙｎｔｈｅｓ
ｉｓ ９５５−９５７； Ｓｔｅｗａｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｓｏｌｉ
ｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｄ Ｅｄ．，Ｐｉｅ
ｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ； Ａｈ
ｍｅｄ ｅｔ ａｌ．，１９７５，Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２５０： ８４７
７−８４８２；およびＰｅｎｎｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１ Ｐｅｐ
ｔｉｄｅｓ １９９０ １６４−１６６，Ｇｉｒａｌｔ ａｎｄ Ａｎｄｒｅｕ
，Ｅｄｓ．，ＥＳＣＯＭ Ｌｅｉｄｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓに記
載された方法が挙げられる。更に他の方法は、Ｋａｍｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，１
９８０，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ ６３： ８９９−９１５に記載されて
いる。固相支持体上で行う方法は、Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ，１９８５，Ｉｎｔ．Ｊ
．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．２６−９２−２７に記載されてい
る。これらの方法のうち任意のものを用いて、本発明のペプチドにジスルフィド
結合を形成することができる。５．２．２． 組換え合成 また、前記ペプチドが遺伝子によりコードされたアミノ酸から全て構成されて
いる場合、または前記ペプチドの一部がそのように構成されている場合、通常の
遺伝子組換え工学技法を用いて該ペプチドまたは当該部分を合成することもでき
る。 組換え産生法では、該ペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を、適切な
発現ビヒクル（即ち挿入されたコード配列の転写および翻訳に必要なエレメント
、または、ＲＮＡウイルスベクターの場合は、複製および翻訳に必要なエレメン
トを含むベクター）の中に挿入する。つぎにこの発現ビヒクルを、該ペプチドを
発現する適切な標的細胞にトランスフェクトする。つぎに、使用する発現系によ
って、発現したペプチドを、当分野で確立された方法により単離する。幾つかの
組換えタンパク質およびペプチド産生方法が、当技術において周知である（例え
ば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏ
ｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎ．Ｙ．； およびＡｕｓｕｂｅｌ
ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓ
ｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．を
参照のこと。これらの各々は、本明細書中に参考としてその全体が組み込まれる
）。 産生効率を上げるために、該ポリヌクレオチドを、酵素切断部位により分割さ
れるペプチドからなる複数ユニットをコードするように設計することができる。
または、ホモポリマー（反復ペプチドユニット）またはヘテロポリマー（異なる
ペプチドが共につながっている）を、このように遺伝子操作することができる。
得られたポリペプチドを（例えば適当な酵素を用いた処理により）切断し、ペプ
チドユニットを回収することができる。これにより、１つのプロモーターにより
駆動されるペプチドの収量を増やすことができる。好適な実施態様において、ポ
リシストロン性ポリヌクレオチドを、各コード領域がｃａｐ依存性翻訳調節配列
（例えば内部リボソーム入り込み部位（ＩＲＥＳ））に機能しうる形で結合され
ている複数のペプチドをコードする１つのｍＲＮＡ（すなわちホモポリマーまた
はヘテロポリマー）が転写されるように設計することができる。適当なウイルス
発現系で使用する場合、ｍＲＮＡによりコードされる各ペプチドの翻訳は、転写
産物の内側に向けて、例えばＩＲＥＳにより指令される。従って、ポリシストロ
ン性構築物は、単一の大きなポリシストロン性ｍＲＮＡの転写を指令し、次いで
このポリシストロン性ｍＲＮＡは複数の個々のペプチドの翻訳を指令する。この
方法は、ポリタンパク質の産生および酵素処理の必要がなく、１つのプロモータ
ーにより駆動されるペプチドの産生量を有意に増大させる。 種々の宿主発現ベクター系を使用して、本明細書中に記載されたペプチドを発
現させることができる。これらには、適切なコード配列を含む組換えバクテリオ
ファージＤＮＡまたはプラスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌など
の微生物；適切なコード配列を含む組換え酵母または菌類発現ベクターで形質転
換された酵母または糸状菌類；適切なコード配列を含む組換えウイルス発現ベク
ター（例えばバキュロウイルス）で感染させた昆虫細胞系；適切なコード配列を
含む組換えウイルス発現ベクター（例えばカリフラワーモザイクウイルスもしく
はタバコモザイクウイルス）または組換えプラスミド発現ベクター（例えばＴｉ
プラスミド）で感染させた植物細胞系；または動物細胞系が含まれるが、これら
に限定されない。 発現系の発現エレメントの強度および特異性は異なる。使用する宿主／ベクタ
ー系によって、任意の数の好適な転写および翻訳エレメント（構成的プロモータ
ーおよび誘導プロモーターを含む）を、発現ベクターに使用することができる。
例えば、細菌系においてクローニングを行う場合は、バクテリオファージλ、ｐ
ｌａｃ、ｐｔｒｐ、ｐｔａｃ（ｐｔｒｐ−ｌａｃハイブリッドプロモーター）の
ｐＬなどの誘導プロモーターなどを使用することができる。昆虫細胞系において
クローニングを行う場合は、バキュロウイルスポリヘドロンプロモーターなどの
プロモーターを使用することができる。植物細胞系においてクローニングを行う
場合は、植物細胞のゲノム由来のプロモーター（例えば熱ショックプロモーター
；ＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニットのプロモーター；クロロフィルａ／ｂ結合タ
ンパク質のプロモーター）または植物ウイルス（例えばＣａＭＶの３５Ｓ ＲＮ
Ａプロモーター；ＴＭＶのコートタンパク質プロモーター）由来のプロモーター
を使用することができる。哺乳動物細胞系においてクローニングを行う場合、哺
乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えばメタロチオネインプロモー
ター）または哺乳動物ウイルス（例えばアデノウイルス後期プロモーター；ワク
シニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を使用することができる。発現産物の複
数のコピーを含む細胞系を作製する場合、ＳＶ４０−、ＢＰＶ−およびＥＢＶ−
をベースとするベクターを、適当な選択マーカーと共に使用することができる。 植物発現ベクターを使用する場合、本発明のペプチドをコードする配列の発現
は、任意の数のプロモーターにより駆動することができる。例えば、ＣａＭＶの
３５Ｓ ＲＮＡおよび１９Ｓ ＲＮＡプロモーター（Ｂｒｉｓｓｏｎ ｅｔ ａ
ｌ．，１９８７，Ｎａｔｕｒｅ ３１０： ５１１−５１４）またはＴＭＶのコ
ートタンパク質プロモーター（Ｔａｋａｍａｔｓｕ ｅｔ ａｌ．，１９８７，
ＥＭＢＯ Ｊ．６： ３０７−３１１）などのウイルスプロモーターを使用する
ことができる。あるいは、ＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニット（Ｃｏｒｕｚｚｉ
ｅｔ ａｌ．，１９８４，ＥＭＢＯ Ｊ．３： １６７１−１６８０； Ｂｒｏ
ｇｌｉｅ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２４： ８３８−８４
３）または熱ショックプロモーター（例えば、大豆ｈｓｐ１７．５−Ｅまたはｈ
ｓｐ１７．３−Ｂ（Ｇｕｒｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ
．Ｂｉｏｌ．６： ５５９−５６５））などの植物プロモーターを使用すること
もできる。これらの構築物を、Ｔｉプラスミド、Ｒｉプラスミド、植物ウイルス
ベクター、直接的なＤＮＡ形質転換、マイクロインジェクションおよびエレクト
ロポレーションなどを用いて植物細胞内に導入することができる。これらの技法
の概要については、例えば、Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ ＆ Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ，１
９８８，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ
ｏｇｙ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， ＮＹ， Ｓｅｃｔｉｏｎ ＶＩＩ
Ｉ，ｐｐ．４２１−４６３； およびＧｒｉｅｒｓｏｎ ＆ Ｃｏｒｅｙ，１９
８８， Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２ｄ Ｅｄ．，Ｂ
ｌａｃｋｉｅ，Ｌｏｎｄｏｎ， Ｃｈ．７−９を参照されたい。 本発明のペプチドを産生させるのに使用することができる１つの昆虫発現系に
おいて、外来遺伝子を発現させるベクターとして、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａ
ｌｉｆｏｒｎｉｃａ 核多角体病ウイルス群（ＡｃＮＰＶ）が使用される。該ウ
イルスはＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞中で増殖する。コー
ド配列を、該ウイルスの必須でない領域（例えば多角体遺伝子）にクローニング
し、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば該多角体プロモーター）の制御下に置くこ
とができる。コード配列を首尾良く挿入することにより、多角体遺伝子が不活性
化され、非閉塞（ｎｏｎ−ｏｃｃｌｕｄｅｄ）組換えウイルス（即ち多角体遺伝
子によりコードされるタンパク質コートを持たないウイルス）が産生される。つ
ぎに、これらの組換えウイルスを使用してＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐ
ｅｒｄａ細胞を感染させ、この感染細胞中で該挿入遺伝子を発現させる（例えば
Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４６： ５８４； Ｓ
ｍｉｔｈの米国特許第４，２１５，０５１号を参照のこと）。この発現系のさら
なる例は、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２，Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｇｒ
ｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈ．Ａｓｓｏｃ．＆ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅ
ｎｃｅに記載されている。 哺乳動物宿主細胞において、いくつかのウイルスベースの発現系を使用するこ
とができる。アデノウイルスを発現ベクターとして使用する場合、コード配列を
アデノウイルス転写／翻訳調節複合体（例えば後期プロモーターおよび３部に分
かれたリーダー配列）に連結させることができる。つぎに、このキメラ遺伝子を
ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏ組換えによりアデノウイルスゲノム中に
挿入することができる。該ウイルスゲノムの非必須領域（例えばＥ１またはＥ３
領域）への挿入により、感染宿主内で生存可能で且つペプチドを発現することが
できる組換えウイルスが得られる（例えばＬｏｇａｎ ＆ Ｓｈｅｎｋ，１９８
４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８１： ３６５５−３
６５９）。あるいは、ワクシニア７．５Ｋプロモーターを使用することができる
（例えばＭａｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ） ７９： ７４１５−７４１９； Ｍａｃｋｅｔｔ
ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４８： ８５７−８６４； Ｐａｎ
ｉｃａｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．７９： ４９２７−４９３１を参照のこと）。 本発明のペプチドを産生させるための他の発現系は、当業者にとっては自明で
あろう。５．２．３ ペプチドの精製 本発明のペプチドは、逆相クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー
、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニティー・クロマトグ
ラフィー等などの当業界で公知の技法により、精製することができる。特定のペ
プチドを精製するために使用する実際の条件は、合成方法、および正味電荷、疎
水性、親水性などの要因に一部依存し、当業者にとっては自明であろう。多量体
として分岐したペプチドを、例えばイオン交換クロマトグラフィーまたはサイズ
排除クロマトグラフィーにより精製することができる。 アフィニティークロマトグラフィー精製のために、該ペプチドに特異的に結合
する任意の抗体を使用することができる。抗体の産生のために、種々の宿主動物
（ウサギ、マウス、ラットなどを含むがこれらに限定されない）を、ペプチドを
注射して免疫することができる。側鎖官能基または側鎖官能基に結合したリンカ
ーにより、該ペプチドを好適な担体（例えばＢＳＡ）に結合させることができる
。宿主の種に応じて、種々のアジュバントを使用して、免疫応答を増加させるこ
とができる。アジュバントとしては、フロイントの（完全および不完全）アジュ
バント、鉱物ゲル、例えば水酸化アルミニウム、界面活性物質、例えばリソレシ
チン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマルジョン
、キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、および潜在的に有
用なヒトアジュバント（例えばｂａｃｉｌｌｉ Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉ
ｎ，ＢＣＧ）およびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍが挙げられ
るが、これらに限定されない。 ペプチドに対するモノクローナル抗体は、連続培養細胞系による抗体分子を産
生する任意の技法を用いて調製することができる。このような技法としては、Ｋ
ｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：
４９５−４９７、またはＫａｐｒｏｗｓｋｉの米国特許第４，３７６，１１０号
に最初に記載されたハイブリドーマ技法（これらは本明細書中に参考として組み
込まれる）、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法（Ｋｏｓｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，１
９８３，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２； Ｃｏｔｅ ｅｔ ａ
ｌ．，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ． ８０
： ２０２６−２０３０）；およびＥＢＶ−ハイブリドーマ技法（Ｃｏｌｅ ｅ
ｔ ａｌ．，１９８５，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ
Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．， ｐｐ
．７７−９６（１９８５））が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、
適切な抗原特異性を有するマウス抗体分子由来の遺伝子を、適切な生物学的活性
を有するヒト抗体分子由来の遺伝子とつなぎ合わせることにより「キメラ抗体」
を産生するために開発された技術（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４
，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１： ６８５１−６
８５５； Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ ３１
２： ６０４−６０８； Ｔａｋｅｄａ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｎａｔｕｒ
ｅ ３１４：４５２−４５４，Ｂｏｓｓ，米国特許第４，８１６，３９７号；Ｃ
ａｂｉｌｌｙ、米国特許第４，８１６，５６７号（これらは本明細書中に参考と
して組み込まれる））を使用することができる。あるいは、「ヒト化」抗体を調
製することができる（例えばＱｕｅｅｎの米国特許第５，５８５，０８９号、本
明細書中に参考として組み込まれる）。あるいは、一本鎖抗体の産生について記
載された技術（米国特許第４，９４６，７７８号）を、ペプチド特異的一本鎖抗
体を産生するように適合させることもできる。 特異的結合部位の欠失を含む抗体断片は、公知の技法により作製することがで
きる。例えば、このような断片には、Ｆ（ａｂ’）_２断片（抗体分子のペプシン
消化により産生することができる）およびＦａｂ断片（Ｆ（ａｂ’）_２断片のジ
スルフィド結合を還元することにより産生することができる）が含まれるが、こ
れらに限定されない。あるいは、目的のペプチドに対して所望の特異性を有する
モノクローナルＦａｂ断片を速やか且つ簡単に同定できるようなＦａｂ発現ライ
ブラリー（Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６： １
２７５−１２８１）を構築することができる。 所望のペプチドに特異的な抗体または抗体断片を、例えばアガロースに結合さ
せることができ、この抗体−アガロース複合体を、イムノクロマトグラフィーに
使用して本発明のペプチドを精製する。Ｓｃｏｐｅｓ，１９８４，Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔ
ｉｃｅ， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｉｎｃ．，
ＮＹ， Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ， １９７４， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅ
ｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：Ｉｍｍｕｎｏａｆｆｉｎｉｔｙ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａ
ｐｈｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ３４： ７２３−７３１を参照のこと。 ５．３ 医薬製剤および治療方法 本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、動物、特にヒトを含む哺乳動物における
任意の障害を治療するのに使用でき、このためには血清ＨＤＬ濃度の上昇、ＬＣ
ＡＴの活性化、およびコレステロール流出およびＲＣＴの促進が有用である。こ
のような症状には、高脂血症、特に高コレステロール血症、およびアテローム硬
化症などの心臓血管疾患（アテローム硬化症の治療および予防を含む）；再狭窄
（例えば、バルーン式血管形成などの医療処置の結果発達するアテローム硬化性
プラークの予防または治療）；ならびに内毒血症（これはしばしば敗血症性ショ
ックを生じる）などのその他の障害、が挙げられるがこれらに限定されない。 上記症状を治療するために、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは単独で、または他の薬
剤での治療と組み合わせて使用できる。このような治療には、関与する薬剤の同
時投与または連続投与が含まれるが、これらに限定されない。 例えば、高コレステロール血症またはアテローム硬化症の治療において、Ａｐ
ｏＡ−Ｉアゴニスト製剤は、現在使用されている１つ以上のコレステロール低下
用治療薬（例えば、胆汁酸樹脂、ナイアシン、および／またはスタチン）と共に
投与できる。このような組み合わせた養生法は、特に有利な治療効果を生み出し
うる。なぜなら、それぞれの薬剤は、コレステロール合成および輸送において異
なる標的に対して作用し（すなわち、胆汁酸樹脂はコレステロール再利用（ｒｅ
ｃｙｃｌｉｎｇ）、カイロミクロンおよびＬＤＬ集団に影響し；ナイアシンはＶ
ＬＤＬおよびＬＤＬ集団に主に影響し；スタチンはコレステロール合成を阻害し
てＬＤＬ集団を減少させる（そしておそらくＬＤＬ受容体発現を高める））、そ
の一方でＡｐｏＡ−ＩアゴニストはＲＣＴに影響を及ぼし、ＨＤＬを高め、ＬＣ
ＡＴ活性を高め、コレステロール流出を促進するからである。 別の実施態様において、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、繊維（ｆｉｂｒａｔｅ）
と共に用いて、高脂血症、高コレステロール血症、および／または心臓血管疾患
（アテローム硬化症）を治療しうる。 また別の実施態様において、本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、内毒素によ
って引き起こされる敗血症性ショックを治療するために現在使用されている抗菌
剤および抗炎症剤と組み合わせて使用できる。 本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、ペプチドまたはペプチド−脂質複合体と
して製剤化でき、これは、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストを循環系に送達するための様
々な手法によって患者に投与できる。製剤および治療養生法の例を以下に記載す
る。 ５．３．１ 活性成分としてのＡｐｏＡ−Ｉアゴニストおよびペプチド／脂質複
合体 ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストペプチドは、第５．２節およびその小節に記載されて
いる技法によって合成または製造できる。長期の貯蔵寿命を有する安定した調製
物は、ペプチドを凍結乾燥させる（これにより、再製剤用のバルクを調製するか
、または患者に投与する前に滅菌水もしくは適切な滅菌緩衝溶液で再度水和して
再構築できる個別のアリコートまたは用量単位を調製する）ことによって作られ
る。 特定の実施態様において、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、ペプチド−脂質複合体
の形で製剤化して投与することが好ましい。このアプローチは、複合体が（特に
複合体がＨＤＬ（特に前−β−１または前−β−２ＨＤＬ集団）と同様の大きさ
および密度である場合に）循環系における半減期が増大されているため、いくつ
かの利点を有する。ペプチド−脂質複合体は、以下に記載するいくつかの方法の
いずれによっても便宜的に調製できる。長期の貯蔵寿命を有する安定した調製物
は、凍結乾燥によって作製することができ、以下に記載する同時凍結乾燥法が好
ましいアプローチである。凍結乾燥されたペプチド−脂質複合体は、医薬再製剤
用のバルクを調製するため、または患者に投与する前に滅菌水もしくは適切な滅
菌緩衝溶液で再度水化して再構築できる個別のアリコートもしくは用量単位を調
製するために使用できる。 ペプチド−脂質小胞体または複合体を調製するために、当業者に周知の様々な
方法が使用できる。この目的のために、リポソームまたはプロテオリポソームを
調製するための多くの既存の方法を使用できる。例えば、ペプチドを適切な脂質
と同時超音波処理（浴槽または針を用いる超音波処理器を使用）して、複合体を
形成できる。あるいはまた、ペプチドを前もって形成された脂質小胞体と組み合
わせて、ペプチド−脂質複合体の自発的形成を促してもよい。さらに別の代替的
方法として、界面活性剤透析（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ ｄｉａｌｙｓｉｓ）法によ
ってペプチド−脂質複合体を形成してもよい（例えば、ペプチド、脂質および界
面活性剤の混合物を透析して、界面活性剤を除去し、ペプチド−脂質複合体を再
構築または形成する）（例えば、Ｊｏｎａｓら、１９８６，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１２８：５５３−５８２を参照）。 上記アプローチは許容可能であるが、各方法はコスト、収率、再現性および安
全性の点でそれぞれ特有の製造上の問題を有している。本出願人は、ＨＤＬと同
様の特徴を有するペプチドまたはタンパク質−リン脂質複合体を調製するための
簡易な方法を開発した。この方法は、ＡｐｏＡ−Ｉペプチド−脂質複合体を調製
するために使用でき、以下の利点を有している。（１）ほとんどまたは全ての含
有成分が設計された複合体を形成するために使用されるので、他の方法に共通す
る出発材料の無駄がない。（２）貯蔵中に非常に安定な凍結乾燥化合物が形成さ
れる。得られた複合体は使用直前に再構築できる。（３）得られた複合体は通常
、形成後および使用前にそれ以上精製する必要がない。（４）毒性化合物（コー
ル酸塩などの界面活性剤）を回避できる。さらに、製造方法を容易にスケールア
ップすることができ、ＧＭＰ製造に適している（すなわち、内毒素を含まない環
境）。 好適な方法において、ペプチドおよび脂質は、それぞれの成分を同時に可溶化
し、凍結乾燥によって完全に除去できる溶媒系において組み合わされる。この目
的のためには、両親媒性ペプチドおよび脂質の両方の同時可溶度を確実にするた
めに、溶媒対は注意深く選択しなければならない。１つの実施態様において、粒
子に取り込まれるタンパク質またはペプチドは、水性溶媒、有機溶媒または溶媒
混合物（溶媒１）中に溶解できる。（リン）脂質成分は、溶媒１と混和性である
、水性溶媒、有機溶媒または溶媒混合物（溶媒２）中に溶解して、２つの溶液を
混合する。あるいはまた、ペプチドおよび脂質を、同時溶媒系（すなわち、混和
性溶媒の混合物）に取り込むことができる。得られる複合体が適切な物理的およ
び化学的特性（つまり、必須ではないが通常ＨＤＬと同様の大きさ）を有するよ
うに、ペプチド（タンパク質）対脂質の適切な割合をまず実験的に決定する。得
られた混合物を冷凍し、凍結乾燥させる。場合によって、凍結乾燥し易くするた
めに、混合物に追加溶媒を添加しなければならない。この凍結乾燥物は、長期に
わたって貯蔵可能であり、安定したままである。 以下に記載する実施例において、ペプチド２１０（配列番号２１０）およびリ
ン脂質を、メタノールに別々に溶解し、組み合わせ、凍結乾燥の前にキシレンと
混合した。ペプチドおよび脂質の両方を、２つの溶媒の混合物に添加してもよい
。あるいはまた、メタノールに溶解したペプチドの溶液は、キシレンに溶解した
脂質溶液と混合できる。ペプチドの塩析を避けるために溶媒系から塩を取り除く
ことに注意しなければならない。結果得られた、メタノール／キシレン中で同時
可溶化されたペプチドおよび脂質を含む溶液を凍結乾燥して粉末を形成する。 凍結乾燥物を、再構築して、ペプチド−脂質複合体の溶液または懸濁液を得る
ことができる。これに関して、凍結乾燥粉末は、水溶液で適切な容量まで（通常
静脈内注射に便利な５ｍｇペプチド／ｍｌ）再度水化される。 好ましい実施態様において、凍結乾燥した粉末は、リン酸緩衝食塩水または生
理食塩溶液で再度水化される。混合物は、攪拌またはボルテックスして再度水化
し易くする必要があるかもしれない。多くの場合、再構築ステップは、複合体の
脂質成分の相遷移温度と同じかまたはそれより高い温度において行わなければな
らない。数分の内に、再構築脂質−タンパク質複合体がはっきりと調製される。 結果的に得られた、再構築された調製物のアリコートを特徴決定して、調製物
中の複合体が所望のサイズ分布（例えば、ＨＤＬのサイズ分布）を有しているか
確認した。これに関してはゲル濾過クロマトグラフィーが利用できる。以下に記
載する実施例では、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｓｕｐｅｒｏｓｅ ６ ＦＰＬＣゲル
濾過クロマトグラフィー系を使用した。使用した緩衝液は、５０ｍＭリン酸緩衝
液中に１５０ｍＭ ＮａＣｌを含有した（ｐＨ７．４）。典型的なサンプル容量
は、５ｍｇペプチド／ｍｌを含有する２０〜２００ｍｌの複合体である。カラム
流速は０．５ｍｌ／分である。既知の分子量およびストークス直径（Ｓｔｏｋｅ
ｓ’ｄｉａｍｅｔｅｒ）を有する一連のタンパク質、ならびにヒトＨＤＬを標準
として用いてカラムを検定した。タンパク質およびリポタンパク質複合体を、２
５４または２８０ｎｍの波長の光の吸収または拡散によってモニターした。 本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、様々な脂質（飽和、不飽和、天然および
合成の脂質および／またはリン脂質を含む）と結合できる。適した脂質としては
、小アルキル鎖（ｓｍａｌｌ ａｌｋｙｌ ｃｈａｉｎ）リン脂質、卵ホスファ
チジルコリン、ダイズホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコ
リン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコ
リン１−ミリストイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン、１−パルミト
イル−２−ミリストイルホスファチジルコリン、１−パルミトイル−２−ステア
ロイルホスファチジルコリン、１−ステアロイル−２−パルミトイルホスファチ
ジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン・ジオレオホスファチジルエタ
ノールアミン、ジラウロイルホルファチジルグリセロール・ホスファチジルコリ
ン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジル
イノシトール、スフィンゴミエリン、スフィンゴ脂質、ホスファチジルグリセロ
ール、ジホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロ
ール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチ
ジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイル
ホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジン酸、ジミリストイルホスファ
チジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジ
ミリストイルホスファチジルセリン、ジパルミトイルホスフアチジルセリン、脳
ホスファチジルセリン、脳スフィンゴミエリン、ジパルミトイルスフィンゴミエ
リン、ジステアロイルスフィンゴミエリン、ホスファチジン酸、ガラクトセレブ
ロシド、ガングリオシド、セレブロシド、ジラウリルホスファチジルコリン、（
１，３）−Ｄ−マンノシル−（１，３）ジグリセリド、アミノフェニルグリコシ
ド、３−コレステリル−６’−（グリコシルチオ）ヘクシルエーテル糖脂質、お
よびコレステロール、ならびにこれらの誘導体が挙げられるがこれらに限定され
ない。 本出願人は、本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストがスフィンゴミエリンと結合し
た場合、前−β−様粒子の全ＨＤＬが除去されることを発見した。従って、本発
明の好ましい実施態様において、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、スフィゴミエリン
との複合体として投与される。 ５．３．２ 処置方法 本発明のＡｐｏＡ−Ｉペプチドアゴニストまたはペプチド脂質複合体は、循環
において生物学的利用能が確実に得られる任意の適切な経路で投与されうる。こ
れは、非経口投与経路（静脈内（ＩＶ）、筋内（ＩＭ）、皮内、皮下（ＳＣ）お
よび腹腔内（ＩＰ）注射が挙げられる）によって最も確実に得られる。しかし、
その他の投与経路を用いてもよい。例えば、胃腸管を介した吸収が、例えば口腔
粘膜、胃および／または小腸の苛酷な環境において活性成分の分解が無いかまた
は分解を最小にする適切な製剤（例えば、腸溶性被覆）が使用されるのであれば
、経口投与経路（摂取、頬および舌下経路が挙げられるがこれらに限定されない
）によって達成できる。あるいはまた、膣式投与または直腸式投与などの粘膜組
織を介した投与を利用して、胃腸管における分解を回避するか最小にできる。さ
らに別の代替例として、本発明の製剤は、経皮的に（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏ
ｕｓｌｙ）（例えば、経皮的に（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｌｙ））、または吸入
によって投与できる。受容者の症状、年齢、およびコンプライアンスに応じて好
ましい経路が異なることが理解されよう。 ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストまたはペプチド脂質複合体の実際の使用用量は、投与
経路によって異なり、１００ｍｇ／ｌ〜２ｇ／ｌの循環血漿濃度が得られるよう
に調整されなければならない。本明細書中に記載した動物モデル系で得られたデ
ータによれば、本発明のＡｐｏＡ−ＩアゴニストはＨＤＬ成分と会合し、ヒトに
おける推定半減期が約５日であった。従って、１つの実施態様において、Ａｐｏ
Ａ−Ｉアゴニストは、週に１度０．５ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの用量の注
射で投与できる。別の実施態様において、所望の血清値を、約０．５ｍｇ／ｋｇ
／時間〜１００ｍｇ／ｋｇ／時間で連続注入または間欠注入することによって維
持しうる。 種々のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストの毒性および治療効力は、細胞培養物または実
験動物において、ＬＤ_５０（集団の５０％に対して致命的となる用量）およびＥ
Ｄ_５０（集団の５０％に対して治療上有効な用量）を標準的な薬学方法によって
決定できる。毒性と治療効果との用量比は治療指標であり、ＬＤ_５０／ＥＤ_５０
比として表すことができる。高い治療指標を示すＡｐｏＡ−Ｉペプチドアゴニス
トが好ましい。 ５．３．３ 医薬製剤 本発明の医薬製剤は、ｉｎ ｖｉｖｏでの投与および送達に適した製薬上許容
される担体中にＡｐｏＡ−Ｉペプチドアゴニストまたはペプチド−脂質複合体を
活性成分として含む。ペプチドは酸性および／もしくは塩基性の末端および／も
しくは側鎖を含みうるので、ペプチドは遊離酸もしくは遊離塩基のいずれかの形
態、または製薬上許容される塩の形態で含まれうる。 注射可能な調製物としては、水性または油性ビヒクルに活性成分が含まれる滅
菌懸濁液、溶液またはエマルジョンが挙げられる。組成物は、懸濁剤、安定剤お
よび／または分散剤などの調合剤も含んでもよい。注射用の製剤は、例えば、ア
ンプルまたは多用量容器に入れられた単位用量形態で提供され、さらに添加物を
含んでいてもよい。 あるいはまた、注射可能な製剤は、粉末形態で提供されて、使用前に適切なビ
ヒクル（発熱物質を含まない滅菌水、緩衝液、デキストロース溶液などが挙げら
れるがこれらに限定されない）で再構築してもよい。これに関連して、ＡｐｏＡ
−Ｉアゴニストは凍結乾燥されてもよく、または同時凍結乾燥したペプチド−脂
質複合体を調製してもよい。貯蔵調製物は、単位用量形態で供給されてよく、ｉ
ｎ ｖｉｖｏでの使用前に再構築できる。 持続した送達のために、活性成分を貯蓄調製物（ｄｅｐｏｔ ｐｒｅｐａｒａ
ｔｉｏｎ）として製剤化して、移植、例えば、皮下、皮内、または筋内注射によ
る投与のために使用できる。従って、例えば、活性成分は、適切な高分子または
疎水性材料（例えば、許容される油中でエマルジョンとして）またはイオン交換
樹脂と共に製剤化してもよいし、またはわずかに（ｓｐａｒｉｎｇｌｙ）可溶な
誘導体（例えば、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストのわずかに可溶な塩形態）として製剤
化してもよい。 あるいはまた、経皮吸収のために活性成分をゆっくりと放出する接着性ディス
クまたはパッチとして製造される経皮送達系も使用できる。これに関連して、浸
透増強剤を使用して、活性成分の経皮浸透を容易にしてもよい。本発明のＡｐｏ
Ａ−Ｉアゴニストまたはペプチド−脂質複合体をニトログリセリンパッチに取り
込ませることによって、虚血性心臓疾患および高コレステロール血症を患う患者
に対して使用する際に特定の利点が得られる。 経口投与のために、医薬組成物は、例えば、結合剤（例えば、ゲル化前トウモ
ロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、もしくはヒドロキシプロピル・メチル
セルロース）、充填剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロースまたはリン酸水
素カルシウム）、界面活性剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、も
しくはシリカ）、崩壊剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｎｔ）（例えば、ジャガイモデ
ンプンもしくはナトリウムデンプングリコレート）、または湿潤剤（例えば、ラ
ウリル硫酸ナトリウム）などの製薬上許容される賦形剤と共に、従来の手段によ
って調製された錠剤またはカプセルの形態にされてもよい。錠剤は、当該分野で
周知の方法によって被覆されてもよい。経口投与のための液体調製物は、例えば
、溶液、シロップまたは懸濁液の形態にされてもよいし、または乾燥製品として
提供されて使用前に水もしくはその他の適切なビヒクルで構築されてもよい。そ
のような液体調製物は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘
導体または水素添加食用脂肪）、乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）、
非水性ビヒクル（例えば、扁桃油、油性エステル、エチルアルコール、もしくは
分留植物油）、および防腐剤（例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシ
ベンゾエートまたはソルビン酸）などの製薬上許容される添加物と共に従来の手
法によって調製され得る。調製物は、緩衝塩、香味料、着色剤および甘味料を適
量含んでいてもよい。経口投与用の調製物は、活性化合物の制御された放出を得
るように適切に製剤化されることができる。 頬投与のために、組成物は、従来の手法によって製剤化された錠剤またはロゼ
ンジの形態にされうる。直腸および膣の投与経路のために、活性成分は、溶液、
（維持性浣腸のための）坐剤、または軟膏として製剤化されてもよい。 吸入による投与のために、適切な推進薬（例えば、ジクロロジフルオロメタン
、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素もし
くはその他の適切なガス）を使用して、圧縮パックまたは噴霧器から供給される
エアロゾールスプレーの形態で活性成分を適宜送達してもよい。圧縮エアロゾー
ルの場合、弁を設けて投与用量単位を決定して、一定量を送達できる。例えば吸
入器または注入器において使用するゼラチンなどのカプセルおよびカートリッジ
は、化合物および適切な粉末基剤（ラクトースまたはデンプンなど）の粉末混合
物を含んで製剤化され得る。 組成物は、所望であれば、活性成分を含む単位用量形態を１つ以上含むパック
またはディスペンサー器で供給されてもよい。パックは、例えば、発砲パックな
どの金属またはプラスチック箔からなっていてもよい。パックまたはディスペン
サー器には、投与指示書を付けてもよい。 ５．４ その他の使用 本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストは、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて血清
ＨＤＬを測定するために使用できる（例えば、診断目的のため）。ＡｐｏＡ−Ｉ
アゴニストは、血清のＨＤＬ成分と会合するため、アゴニストをＨＤＬ集団につ
いての「マーカー」として使用できる。さらに、アゴニストは、ＲＣＴにおいて
有効なＨＤＬの亜集団についてのマーカーとして使用できる。これに関連して、
アゴニストは患者の血清サンプルに添加または混合できる。適切な時間のインキ
ュベーションの後、取り込まれたＡｐｏＡ−Ｉアゴニストを検出することによっ
てＨＤＬ成分をアッセイできる。これは、標識されたアゴニスト（例えば、放射
標識、蛍光標識、酵素標識、染料など）を使用して、またはアゴニストに特異的
な抗体（もしくは抗体断片）を使用したイムノアッセイにより達成できる。 あるいはまた、標識されたアゴニストを、画像処置（例えば、ＣＡＴスキャン
、ＭＲＩスキャン）に使用して、循環系を可視化したり、ＲＣＴをモニターした
り、脂肪線条（ｆａｔｔｙ ｓｔｒｅａｋ）、アテローム硬化病巣など（コレス
テロール流出においてＨＤＬ活性であると考えられる場所）でのＨＤＬの蓄積を
可視化できる。 ６．実施例：ＡｐｏＡ−Ｉのペプチドアゴニストの合成 表Ｘ（以下の第８．３節）に記載のペプチドを、以下の小節に記載にように合
成し、特徴決定した。ペプチドは、以下の第７節および第８節に記載のように構
造的分析および機能的分析も行った。 ６．１ コアペプチドの合成 Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄの技法（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，１９６９，Ｊ．Ａｍ．
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５４）に従って、０．２５ ｍｍｏｌ
ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂（ＨＭＰ樹脂）（Ｗａｎｇ，１９７３
，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９５：１３２８−１３３３）およびＦｍｏｃ化
学を用いてペプチドを合成した。全ての合成を、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓ
ｔｅｍｓ ＡＢＩモデル４３０Ａ自動ペプチド合成器（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅ
ｒ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）で行った。それぞれの結合サイクルのため
の溶媒和および活性の時間は、以下の表Ｖに示す。 各結合ステップ間で、樹脂をＮＭＰで洗浄した。１合成サイクルのプロトコー
ルを以下の表ＶＩに示す。 Ｆｍｏｃ−β−（１−ナフチル）アラニンを除く全てのアミノ酸を、上記のよ
うに結合した。Ｆｍｏｃ−β−（１−ナフチル）アラニンは手動操作で結合した
。手動結合のために、１ｍｍｏｌ Ｆｍｏｃ−β−（１−ナフチル）アラニンお
よび１ｍｍｏｌ２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３
−テトラメチルロニウム・テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）を５ｍｌ ＮＭ
Ｐに溶解し、ペプチド−樹脂と混合した。 その後、２ｍｍｏｌのＮ−エチルジイソプロピルアミンを添加し、混合物を２
時間振盪し、ペプチド−樹脂を１０ｍｌ ＮＭＰで６回洗浄した。Ｋａｉｓｅｒ
検査（Ｋａｉｓｅｒ，１９７０，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３４：５９５７７
）を用いて結合効率をモニターし、必要に応じて結合を繰り返した。ナフチルア
ラニンの結合後、残りの合成は上記したように自動的に行った。 ６．２ ペプチドアミドの合成 表Ｘ（下記の８．３節）に示されているように、Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋアミドハ
ンドル４−（２’，４’−ジメチルフェニル）−Ｆｍｏｃ−フェノキシメチル（
Ｒｉｎｋ，１９８７，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２８：３７８７−３
７９０）を含むＲｉｎｋアミド樹脂と、上記の６．１節に記載した合成プロトコ
ルを用いてペプチドアミドを合成した。 ６．３ Ｎ−末端アシル化ペプチドの合成 表Ｘ（下記の８．３節）に示されているように、上記の６．１節および６．２
節に記載されたようにして調製した樹脂結合ペプチドを適当なアシル化剤に曝す
ことによってＮ−末端アシル化型のペプチドを調製した。 Ｎ−末端アシル化ペプチドを得るために、１５ｍｌの無水酢酸溶液（ＮＭＰ中
、１０％ｖ／ｖ）をそれぞれ１ｇの樹脂結合ペプチドに加え、混合物を５分間振
とうし、樹脂をろ過によって回収した。回収した樹脂をＮＭＰ（１５ｍｌ）で３
回、エタノール（１５ｍｌ）で３回洗浄した。 ６．４ 切断および脱保護 合成後、上記の６．１節、６．２節および６．３節に記載したペプチドを樹脂
から切断し、９２．５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／３．７５％アニソール／
３．７５％ドデカチオール（ｖ／ｖ／ｖ）を含む切断溶液で脱保護した。切断を
生じさせるために、１０ｍｌの切断溶液を０．２５ｍｍｏｌのペプチド樹脂に加
え、室温で１．５時間撹拌した。樹脂をろ過により除去し、切断／脱保護したペ
プチドをジエチルエーテルで沈殿させ、エーテルで洗浄して減圧乾燥した。 Ｔｒｐ（Ｗ）を含むペプチド、ならびにペプチドアミドについての切断カクテ
ルには、８６．５％のＴＦＡ、４．５％のＨ_２Ｏ、４．５％の１，２−エタンジ
チオール、４．５％のアニソールおよび３％のフェノールが含まれていた。 ６．５ 精製 ６．４節の切断した粗ペプチドを逆相ＨＰＬＣで精製した。各ペプチドの純度
を、種々の分析技術（分析ＨＰＬＣ、キャピラリー電気泳動）によって確認した
。長さ７０ｃｍ、内径７５μｍの溶融シリカキャピラリー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｅ
ｐａｒａｔｉｏｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）上でキャピラリー電気泳動を行った。２
種の異なる緩衝液系：緩衝液１（２０ｍＭ Ｎａ_２Ｂ_４Ｏ_７、ｐＨ９．２）およ
び緩衝液２（１０ｍＭ Ｎａ_２ＨＰＯ_４、ｐＨ２．５）中で２５℃、１５ｋＶ、
運転時間３５分にて分離を行った。２５０×２１ｍｍのＮｕｃｌｅｏｓｉｌ ７
Ｃ１８またはＮｕｃｌｅｏｓｉｌ ７Ｃ４カラム（ＭａｃｈｅｒｅｙおよびＮａ
ｇｅｌ，ドイツ）上で、流量８ｍｌ／分にてＨＰＬＣ分離を行った。ＴＦＡの０
．１％水溶液（溶媒Ａ）とＴＦＡの０．１％アセトニトリル溶液（溶媒Ｂ）の混
合物を用いて勾配溶離を行った。用いた勾配は各ペプチドの要求に合うように調
整した。 ６．６ 特性付け ６．５節に記載した精製ペプチドの質量およびアミノ酸分析を、それぞれ下記
に示したような質量分析法およびアミノ酸分析法によって確認した。配列決定に
はエドマン分解を用いた。 ６．６．１ ＬＣ−ＭＳ 質量測定には標準的な市販の３段階４重極 （ｔｒｉｐｌｅ ｓｔａｇｅ ｑ
ｕａｄｒｕｐｌｅ）質量分析計（モデルＴＳＱ７００；Ｆｉｎｎｉｇａｎ ＭＡ
Ｔ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ ＣＡ、ＵＳＡ）を用いた。質量分析計の大気圧イオン化
源への試料導入には圧搾空気補助型エレクトロスプレー（ｐｎｅｕｍａｔｉｃａ
ｌｌｙ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ）（ＥＳＩ）インターフ
ェースを用いた。インターフェース噴霧器は４．５ｋＶの陽電位で作動させた。
スチールキャピラリーの温度は２００℃に保持し、マニホールドは７０℃に保持
した。このイオン蒸着プロセスにより発生した陽イオンは質量分析計のアナライ
ザーに入った。マルチプライヤー（ｍｕｌｔｉｐｌｉｅｒ）を１０００Ｖに調節
した。質量分析計のアナライザーコンパートメントは４Ｅ−６であった。収集は
すべて分解能１ｕ未満で行った。 シリンジポンプ（モデル１４０Ｂ）、ＵＶ検出器（モデル７８５Ａ）およびオ
ーブン／インジェクター（モデル１１２Ａ）からなるＡＢＩ（Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）マイクロ口径システムを用いて精製ペプチドの直接注入
によりペプチドを分析した。溶媒系は、０．１％ＴＦＡをそれぞれ含む水（溶媒
Ａ）およびアセトニトリル（溶媒Ｂ）からなっていた。勾配または無勾配条件の
いずれかでペプチドを注入し、Ａｑｕａｐｏｒｅ Ｃ１８カラムから溶出した。
流量は典型的には３００μｌ／分であった。各ペプチドの濃度は約０．０３ｍｇ
／ｍｌであり、その２０μｌ（例えば３０ｐｍｏｌ）を注入した。 ４重極１を４ｓにおいてｍ／ｚ ５００−１５００からスキャンすることによ
りフルスキャンＭＳを得た。データをαＤＥＣステーションを用いて取得し、Ｆ
ｉｎｎｉｇａｎ ＭＡＴ（ＢＩＯＷＯＲＫＳ）により提供されたソフトウェアパ
ッケージを用いて処理した。 ６．６．２ アミノ酸分析 ＡＢＩ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）４２０アミノ酸アナライザ
ーにてアミノ酸分析を行った。このシステムは３つのモジュール：加水分解およ
び誘導体化装置、逆相ＨＰＬＣならびにデータシステムからなる。ペプチド試料
を多孔質ガラススライド上に加え（３回を３組）、その後気相条件下で加水分解
した（１５５℃、９０分）。ＨＣＬ除去後、得られたアミノ酸をＰＩＴＣ（フェ
ニルイソチオシアネート）を用いてＰＴＣ−ＡＡ（フェニルイソカルバモイル−
アミノ酸）に転換した。ＨＰＣ試料ループに移送した後、得られた混合物を勾配
モード（溶媒Ａ：５０ｍｍｏｌ酢酸アンモニウム（ＮＨ_４Ａｃ）を水に溶かした
溶液、ｐＨ５．４、；溶媒Ｂ：３２ｍｍｏｌの酢酸ナトリウム（ＮａＯＡｃ）を
アセトニトリル水溶液に溶かした溶液）を用いて温度制御の条件下でＡｑｕａｐ
ｏｒｅ Ｃ１８カラムにて分画した。ＨＰＬＣデータはＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏ
ｓｙｓｔｅｍｓによって提供されたソフトウェアパッケージにより処理した。Ａ
ｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓによって供給されたペプチド標準に対して
定量化を行った。 ６．７ 分岐ネットワーク（ｂｒａｎｃｈｅｄ ｎｅｔｗｏｒｋ）の合成 テトラマーコアペプチジル樹脂およびトリマーコアペプチジル樹脂をＤｅｍｏ
ｏｒら，１９９６，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２３９：７４−８４に記載さ
れたようにして合成する。次いで、４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂に結合
したままのテトラマーおよびトリマーコアマトリックスを以前に記載されたよう
にコアペプチドの自動合成用の開始ペプチジル樹脂として用いた。 種々のアミノ酸組成のヘリックスセグメントを含む分岐ネットワークは直交（
ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ）合成および当技術分野で周知の保護方法を用いて合成す
ることができる。 ７．実施例：アポＡ−Ｉペプチドの構造および脂質結合分析 上記の第６節に記載したようにして合成した精製ペプチドの構造特性および脂
質結合特性を、円偏光二色性（ＣＤ）、蛍光分光法および核磁気共鳴（ＮＭＲ）
によって測定した。 ７．１円偏光二色性 本実施例は、緩衝液中で遊離状態の本発明のコアペプチドおよび脂質の存在下
での本発明のコアペプチドのらせん性の程度を測定するための好ましい方法を記
載する。 ７．１．１ 実験方法 遠ＵＶ円偏光二色性スペクトルを熱電式セルホルダーおよび試料チェンジャー
を備えたＡＶＩＶ６２ＤＳ分光計（ＡＶＩＶ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｌａｋｅ
ｗｏｏｄ，ＮＪ，ＵＳＡ）を用いて１９０〜２６０ｎｍ間（０．５ｎｍまたは０
．２ｎｍ刻み）で記録した。装置は（＋）−１０−ショウノウ酸で較正した。各
試料について、それぞれ１０ｃｍ、５ｃｍ、１ｃｍおよび０．１ｃｍの経路長の
石英Ｓｕｐｒａｓｉｌセルを用いて１０^−７Ｍ〜１０^−４Ｍのペプチド濃度に対
して１〜３スキャンを集めた。バンド幅は１．５ｎｍに固定し、スキャンスピー
ドは波長１ステップあたり１ｓに固定した。報告したデータは少なくとも２個ま
たは３個の別個の測定値の平均である。 バックグラウンドを引き算（ｓｕｂｓｔｒａｃｔｉｏｎ）した後、スペクトル
を残基あたりのモル楕円率（ｍｏｌａｒ ｅｌｌｉｐｔｉｃｉｔｙ）（θ）（度
ｃｍ^−２ｄｍｏｌ^−１）に変換した。 ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定
し、またペプチドが発色団（トリプトファン、ダンシル、ナフチルアラニン）を
含む場合、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ λ１７ＵＶ／可視分光光度計による吸収
光度分析によっても測定した。 遊離の非結合ペプチド（５ｍＭのリン酸緩衝液中５μＭ、ｐＨ７．４）、ペプ
チド−ＳＵＶ複合体（２０：１ ＥＰＣ：Ｃｈｏｌ．、Ｒｉ＝３０およびＲｉ＝
５０）、ペプチド−ミセル複合体（１−ミリストイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−
グリセロ−３−ホスファチジルコリン、Ｒｉ＝１００）、ならびに２，２，２−
トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）の存在下での遊離の非結合ペプチド（５μＭ
のペプチド、９０容量％ ＴＦＥ）についてのＣＤスペクトルを得た。 Ｎ_２を吹き込みながら脂質をリン酸緩衝液に５分間かけて分散させ、その後、
浴超音波処理器で超音波処理する（１．５時間）ことによりＳＵＶを得た。調製
物の均質性をＦＰＬＣでチェックした。 脂質（６ｍＭの１−ミリストイル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホ
スファチジルコリン、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ、 ＡＬ）をリ
ン酸緩衝液にＮ_２を吹き込みながら５分間かけて分散させ、撹拌することにより
ミセルを得た。 ペプチド−ＳＵＶ複合体を得るために、ＳＵＶをペプチド（５ｍＭのリン酸緩
衝液中５μＭ、ｐＨ７．４）にリン脂質−ペプチドモル比（Ｒｉ）３０または５
０で加えた。 ペプチド−ミセル複合体を得るために、ミセルをペプチドにＲｉ １００で加
えた。 スペクトルはすべて３７℃で記録した。温度の関数としてのペプチド２１０（
配列番号２１０）の安定性（緩衝液中で遊離状態のもの、およびミセル状態のも
の）を一連の異なる温度でスペクトルを記録することにより測定した。 ペプチド２１０（配列番号２１０）のらせん性の程度も濃度の関数として測定
した。 ７．１．２ らせん性測定 種々の条件におけるペプチドのらせん性の程度を、２２２ｎｍにおける平均残
基楕円率（ｍｅａｎ ｒｅｓｉｄｕｅ ｅｌｌｉｐｔｉｃｉｔｙ）（Ｃｈｅｎら
，１９７４，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １３：３３５０−３３５９）から、あ
るいはデータベース（Ｐｒｏｖｅｎｃｈｅｒ ＆ Ｇｌｏｃｋｎｅｒ，１９８１
，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０：３３−３７の１６ヘリックス参照スペクト
ル；Ｖｅｎｙａｍｉｎｏｖら，１９９３，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２１４：
１７−２４の変性タンパク質参照スペクトル）で入手可能な参照スペクトルに対
して得たＣＤスペクトルをＣＯＮＴＩＮ曲線当嵌めアルゴリズムバージョン２Ｄ
Ｐ、ＣＤ−１パック（１９８２年８月）（Ｐｒｏｖｅｎｃｈｅｒ，１９８２，Ｃ
ｏｍｐｕｔ．Ｐｈｙｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２７：２１３−２２７，２２９−２４２
）を用いて比較することにより測定した。許容できる適合を、ＣＯＮＴＩＮアル
ゴリズムによって得られた統計学的分析法を用いて決定した。全方法の誤差は±
５％のらせん性であった。 ７．１．３ 結果 遊離の非結合ペプチド（遊離）、ペプチド−ＳＵＶ複合体（ＳＵＶ）、ペプチ
ド−ミセル複合体（ｍｉｃｓ）およびペプチド−ＴＦＥ溶液（ＴＦＥ）のらせん
の程度（％）を下記の８．３節の表Ｘに報告する。 ペプチド２１０（配列番号２１０）はミセル中で有意なαらせん構造（６３％
ヘリシティ）を含む。さらに、αヘリックス構造は５〜４５℃の温度範囲にわた
って完全に安定している（データは示さず）。 ペプチド２１０（配列番号２１０）のらせん性は、またＴＦＥの存在下でも増
大する。このＴＦＥは、水（ε＝７８．４）の誘電率を有意に低下させる（ε＝
２６．７）ことにより、５〜９０％（ｖ／ｖ）の間の濃度におけるαヘリックス
およびペプチド間の水素結合を安定化する溶媒である。 下記の８．３節の表Ｘに関し、高度のＬＣＡＴ活性化（≧３８％）を示すペプ
チドは、一般的に脂質の存在下で有意なαヘリックス構造を有するが（２２個以
上のアミノ酸を含む非ブロック化ペプチドまたは１８個以下のアミノ酸を含むブ
ロック化ペプチドの場合にはらせん構造６０％以上；１８個以下のアミノ酸を含
む非ブロック化ペプチドの倍にはらせん構造４０％以上）、ほとんどあるいは全
くＬＣＡＴ活性化を示さないペプチドはほとんどαヘリックス構造を持たない。
しかしながら、いくつかの場合には、脂質の存在下で有意なαヘリックス構造を
含むペプチドは有意なＬＣＡＴ活性化を示さない。したがって、本発明のコアペ
プチドが脂質の存在下でαヘリックス構造を採用する能力は、本発明のコアペプ
チドの重要な特徴であると考えられる。というのは、脂質の存在下でαヘリック
スを形成する能力は、ＬＣＡＴ活性化のための必要条件であると考えられるから
である。 ７．２ 蛍光分光法 上記の第６節で合成したペプチドの脂質結合特性を、トリプトファン（Ｔｒｐ
またはＷ）またはナフチルアラニン（Ｎａｌ）が存在する場合、標識ペプチドに
よる蛍光測定により試験した。蛍光スペクトルは、１５０Ｗのキセノンランプ、
２個のモノクロメーター（励起および発光）、最大８５０ｎｍまでの赤色に検出
感度を有する光電子増倍管Ｒ−９２８、および熱電式磁気撹拌セルホルダーを備
えたＳｐｅｘ（Ｊｏｂｉｎ−Ｙｖｏｎ）製のＦｌｕｏｒｏｍａｘにて記録した。
石英Ｓｕｐｒａｓｉｌキュベットをマイクロモル濃度レンジの測定に用いた。可
変スリット（０．４〜５ｎｍ）の装置により、用いたペプチドの濃度にしたがっ
て付帯（ｉｎｃｉｄｅｎｔ）および発光強度の調節をすることができる。報告し
た値は一般的に２〜４スペクトルの平均である。ペプチド濃度はＴｒｐ（トリス
緩衝液中ε_{２８０ｎｍ}＝５，５５０Ｍ^−１ｃｍ^−１）またはＮａｌ（メタノール
中ε_{２２４ｎｍ}＝９２，７７０Ｍ^−１ｃｍ^−１）の吸収バンドを用いてＰｈｉｌ
ｉｐｓ ＰＵ ８８００での吸収光度分析により決定する。 ペプチドの蛍光スペクトルをトリスＨＣｌ緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ＝７．５）
中で脂質小胞の存在下および不存在下にて２９０ｎｍ〜４５０ｎｍで記録した。
凍結乾燥したリン脂質を緩衝液中で再水和し、分散し、Ｎ_２流下でチップ超音波
処理した後、小さい単層小胞が形成された。用いた脂質は卵のＰＣ／Ｃｈｏｌ．
（２０：１）またはＰＯＰＣ／Ｃｈｏｌ．（２０：１）のいずれかであった。ス
ペクトルを２μＭのペプチド濃度、３７℃の温度にて記録した。Ｔｒｐの場合に
は蛍光参照標準はＮ−アセチルトリプトファニルアミド（ＮＡＴＡ）であった。 ２μＭのペプチド溶液に脂質小胞を徐々に加えることにより脂質結合試験を行
った（スリット：励起では５ｎｍ、発光では１．５ｎｍ）。蛍光強度測定につい
て希釈効果を考慮に入れた。脂質濃度を１０〜６００μＭで変化させ、脂質とペ
プチドのモル比（Ｒｉ）を５〜３００で変化させた。励起の波長をＴｒｐとＮａ
ｌの両方について２８０ｎｍにセットした。 ７．２．１ 蛍光スペクトル分析 分光蛍光計に接続したＩＢＭ−ＰＣによりＳｐｅｘ製のＤＭ３００Ｆソフトウ
ェアを通してデータを直接記録し、処理した。スペクトルを溶媒寄与を引き算す
ることにより、そして波長に対する光電子増倍管応答の変化量を考慮したコンス
トラクタによって付与された係数の適用により補正した。 ペプチドの蛍光スペクトルを、その蛍光発光の最大値における波長およびトリ
プトファンで標識したペプチドの場合にはＮＡＴＡと比較したその量子収量によ
り特性付けた。脂質への結合のプロセスを、蛍光発光の最大値（λ_ｍａｘ）の波
長のシフト、ならびに脂質濃度に対する発光の相対蛍光強度の変化量を計算する
ことにより分析した。相対蛍光強度を下記の比：（Ｉ−Ｉ_０）λ_ｍａｘ／Ｉ_０λ
_ｍａｘと定義する。ＩおよびＩ_０の両方はペプチドの初期遊離状態、すなわち脂
質を含まない状態に対応する（λ_ｍａｘ）で決定される。Ｉは脂質とペプチドの
規定の比における強度であり、Ｉ_０は脂質の不存在下で測定した同パラメーター
である。これらのばらつきが無いのは、脂質を有するペプチドの相互作用が無い
ことに関連している。 ７．２．２ 結果および考察 ペプチド１９９（配列番号１９９）（これは１０位にＷ（Ｔｒｐ）残基を含む
ことを除いてペプチド２１０（配列番号２１０）のプライマリー配列と類似して
いる）の脂質結合特性を表ＶＩＩＩに示す。 緩衝液中２μＭの濃度で、ペプチド１９９（配列番号１９９）のトリプトファ
ンの最大蛍光発光（λｍａｘ）は、３４８ｎｍである。これは、ＮＡＴＡと比較
すると比較的水性環境に曝されているトリプトファンに対応している（λｍａｘ
＝３５０ｎｍ）。ペプチド１９９（配列番号１９９）は、トリプトファンの埋蔵
（ｂｕｒｙｉｎｇ）（トリプトファンの最大蛍光発光の波長は、３４８ｎｍから
３２５ｎｍへとシフト）および高蛍光強度エキサルテーション（表ＶＩＩ参照）
により示されているように、ＥＰＣ／Ｃｈｏｌ（２０：１）の小さな単ラメラ小
胞に大変効果的に結合している。トリプトファン残基の埋蔵は、脂質／ペプチド
モル比が１００の時が最大である。 上記の７．１節に開示したような円偏光二色性によって測定した場合に脂質の
存在下で高度のらせん性（２２個以上のアミノ酸の非ブロック化ペプチドまたは
１８個以下のアミノ酸のブロック化ペプチドについては６０％以上；１８個以下
のアミノ酸の非ブロック化ペプチドについては４０％以上）を示したその他のペ
プチドも良好な脂質結合性を示した。もちろん、円偏光二色性スクリーニングに
よって選択したペプチドすべての中で、その後蛍光分析を行うことができたもの
のみをその脂質結合特性について試験した。 ７．３ 核磁気共鳴（ＮＭＲ） 本実施例は本発明のコアペプチドの構造を分析するためのＮＭＲ法を記載する
。 ７．３．１ ＮＭＲ試料調製 化学シフト内部基準として痕跡量の２，２−ジメチル−２−シリア−５−ペン
タンスルホネート（ＤＳＳ）を含む９０％Ｈ_２Ｏ／１０％Ｄ_２Ｏに５ｍｇのペプ
チドを溶解することによって試料を調製した。試料のいくつかにはトリフルオロ
エタノール（ＴＦＥ）が含まれていた（容量％で示す）。試料の総容量は５００
μｌであり、ペプチドの濃度は約５ｍＭであった。 ７．３．２ ＮＭＲ分光法 Ｂ−ＶＴ２０００温度制御ユニットを備えたＢｒｕｋｅｒ ＤＲＸ５００分光
計を用いて５００ＭＨｚで^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを得た。１次元および２次元
実験を標準パルスシーケンスを用いて記録した（二次元ＮＭＲ分光法、Ｗ．Ｒ．
ＣｒｏａｓｍｕｎおよびＲＭＫ Ｃａｒｌｓｏｎ編，１９９４，ＶＣＨ Ｐｕｂ
ｌｉｓｈｅｒｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＵＳＡ）。２秒間の低パワー予備飽和（ｌｏ
ｗ ｐｏｗｅｒ ｐｒｅｓａｔｕｒａｔｉｏｎ）により水抑制（ｗａｔｅｒ ｓ
ｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ）を得た。二次元実験を時間比例位相増加（ｔｉｍｅ ｐ
ｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ ｐｈａｓｅ ｉｎｃｒｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ）（ＴＰ
ＰＩ）を用いて相感受性（ｐｈａｓｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅ）モードで行い、いず
れの次元においてもスペクトル幅は６０００Ｈｚであった。典型的には、２０４
８データ点を有する４００ｔ_１増加に対して４０スキャンを同時に加えた。デー
タをＩＮＤＩＧＯ２ワークステーション（Ｓｉｌｉｃｏｎ Ｇｒａｐｈｉｃｓ）
上でＦＥＬＩＸ９５ソフトウェア（分子シミュレーション）を用いて処理した。
データをゼロにして２Ｋ×２Ｋデータマトリックスを得て、４５°シフト平方サ
イン−ベル関数（４５° ｓｈｉｆｔｅｄ ｓｑｕａｒｅｄ ｓｉｎｅ−ｂｅｌ
ｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）によってアポダイゼーションした（ａｐｏｄｉｚｅｄ）
。 ７．３．３ ＮＭＲ帰属（ａｓｓｉｇｎｍｅｎｔ） 文献（Ｗｕｔｈｒｉｃｈ，ＮＭＲ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｎｕｃ
ｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，１９８６，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅ
ｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ）に記載されたようにＤＱＦＣＯＳＹ、ＴＯＣＳＹおよび
ＮＯＥＳＹスペクトルを用いて連続帰属技術（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ａｓｓｉ
ｇｎｍｅｎｔ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）を適用することにより完全プロトン共鳴帰
属を得た。対応する実験値から平面になった（ｔａｂｕｌａｔｅｄ）ランダムコ
イル化学シフト（ＷｉｓｈａｒｔおよびＳｙｋｅｓ，１９９４，Ｍｅｔｈｏｄ．
Ｅｎｚ．２３９：３６３−３９２）を引き算することによって二次化学シフトを
ＨＮおよびＨαプロトンについて計算した。 ７．３．４ 結果および考察 一般的考察 両親媒性ヘリックスペプチドはＮＭＲ分光法に必要な高い濃度で
は水溶液中で凝集する傾向があるので、高分解能スペクトルを得るのは困難であ
る。ＴＦＥはペプチドを可溶化することが知られており、さらにらせん性傾向を
有するペプチドのヘリックスコンホメーションを安定化する。ＮＭＲ分光法から
の知見は代表的な実施例としてペプチド２１０（配列番号２１０）について示さ
れている。Ｓｅｇｒｅｓｔのコンセンサス２２マー（配列番号７５）を比較で試
験した。 二次化学シフト アミノ酸のプロトン化学シフトは残基のタイプとペプチドま
たはタンパク質内の局所的な二次構造の両方に依存する（Ｓｚｌａｇｙｉ， １
９９５， Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅ
ｓｏｎａｎｃｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ２７：３２５−４４３）。したが
って、規則的な二次構造の同定は、実験シフトをランダムコイルコンホメーショ
ンについての平面になった値と比べることによって可能である。 αヘリックスの形成により、典型的にはＨα共鳴に対してアップフィールド（
ｕｐ−ｆｉｅｌｄ）（ネガティブ）シフトが生じる。数個の連続する残基に対す
るアップフィールドＨαシフトが観察された場合、これは一般的にヘリックス構
造の証拠と考えられる。２９５Ｋにおける２５％ＴＦＥ中でのペプチド２１０（
配列番号２１０）のＨα二次シフトは、残基４〜１５に対して有意なネガティブ
シフトを示し（図７Ａ）、これはらせん性が高いコンホメーションを証明するも
のである。コンセンサス２２マー（配列番号７５）のＨα化学シフトにおいては
ペプチド２１０（配列番号２１０）と比べた場合に小さな相違が観察される。 αヘリックスの領域に存在するアミノ酸残基のアミド水素の化学シフトもラン
ダムコイルに対して観察された化学シフトに関してアップフィールドにシフトす
る。さらに、ＨＮシフトの周期性が観察され得るものであり、これはヘリックス
ターン（ｈｅｌｉｃａｌ ｔｕｒｎｓ）の周期を反映するものである。配列に沿
ったシフト変化の振幅はヘリックスペプチドの両親媒性に関連している。高疎水
性モーメントにより顕著な振動が生じる（Ｚｈｏｕら，１９９２，Ｊ．Ａｍ．Ｃ
ｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４：４３２０−４３２６）。２９５Ｋにおける２５％ＴＦ
Ｅ中でのペプチド２１０（配列番号２１０）についてのＨＮ二次シフトは、ヘリ
ックスの両親媒性と一致した振動挙動を示す（図７Ｂ）。アミノ酸の置換は配列
全体を通してより明白な周期性に導く（図７Ｂ）。パターンは、Ｓｅｇｒｅｓｔ
のコンセンサス２２マーペプチド（配列番号７５）と比べて、ペプチド２１０（
配列番号２１０）の両親媒性がより強いということを明確に反映するものである
。４−５ヘリックスターンの存在が認められる。 アミドプロトンの二次シフトはヘリックスから１ターン離れたカルボニル酸素
への水素結合の長さにより影響される。したがって、観察される化学シフト値の
周期性は種々の水素結合長を反映する。この相違はヘリックス骨格鎖のカーブし
たらせん形状全体と関連している。疎水性残基は凹側に位置する。ペプチド２１
０（配列番号２１０）の二次シフトはカーブしたαヘリックスコンホメーション
を示すものである。 ８．実施例： ＬＣＡＴ活性化アッセイ 上記第６節に記載したように合成したペプチドを、そのＬＣＡＴ活性化能につ
いてｉｎ ｖｉｔｒｏで分析した。ＬＣＡＴアッセイにおいては、卵ホスファチ
ジルコリン（ＥＰＣ）または１−パルミトイル−２−オレイル−ホスファチジル
コリン（ＰＯＰＣ）および放射性標識コレステロールから構成した基質小胞（小
さな単ラメラ小胞またはＳＵＶ）を等しい質量のペプチドまたはＡｐｏＡ−１（
ヒト血漿から単離したもの）とプレインキュベートした。ＬＣＡＴ（ヒト血漿か
ら精製したもの）を添加して反応を開始させる。陽性対照として用いた天然Ａｐ
ｏＡ−１は１００％の活性化活性を示す。ペプチドの「比活性」（すなわち、活
性（ＬＣＡＴ活性化）単位／質量単位）は最大ＬＣＡＴ活性化を達成するペプチ
ドの濃度として計算することができる。例えば、一連の濃度のペプチド（例えば
、限界希釈）をアッセイして、ペプチドの「比活性」−−アッセイの特定の時点
（例えば、１時間）で最大ＬＣＡＴ活性化（すなわち、コレステロールのコレス
テロールエステルへの転化率）を達成する濃度−−を調べることができる。使用
したペプチドの濃度に対して、例えば１時間の、コレステロールの転化率をプロ
ットするとき、「比活性」はプロットした曲線上にプラトーを達成するペプチド
の濃度として確認することができる。 ８．１ 基質小胞の調製 ＬＣＡＴアッセイで用いる小胞は卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）または１
−パルミトイル−２−オレイル−ホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）およびコレ
ステロールを２０：１のモル比で含むＳＵＶである。４０回のアッセイに十分な
小胞ストック溶液を調製するために、７．７ｍｇのＥＰＣ（または７．６ｍｇの
ＰＯＰＣ；１０μｍｏｌ）、７８μｇ（０．２μｍｏｌ）の４−^１４Ｃ−コレス
テロール、１１６μｇのコレステロール（０．３μｍｏｌ）を５ｍｌのキシレン
に溶解し、凍結乾燥する。その後、４ｍｌのアッセイ緩衝液を乾燥粉末に加え、
窒素雰囲気下に４℃で音波処理する。音波処理条件：Ｂｒａｎｓｏｎ２５０ソニ
ケーター、１０ｍｍチップ、６ｘ５分；アッセイ緩衝液：１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、
０．１４Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４。音波処理した混合物を
１４，０００ｒｐｍ（１６，０００ｘｇ）で各回５分ずつ６回遠心分離してチタ
ン粒子を分離する。得られる透明な溶液を酵素アッセイに使用する。 ８．２ ＬＣＡＴの精製 ＬＣＡＴを精製するために、ヒト血漿のデキストラン硫酸／Ｍｇ^２＋処理を行
ってリポタンパク質欠乏血清（ＬＰＤＳ）を取得し、これを順次フェニルセファ
ロース、アフィゲルブルー（Ａｆｆｉｇｅｌｂｌｕｅ）、コンカナバリンＡ セ
ファロースおよび抗ＡｐｏＡ−１アフィニティークロマトグラフィーでクロマト
グラフにかけた。代表的な精製を以下の表ＩＸにまとめて示す。 ８．２．１ ＬＰＤＳの調製 ＬＰＤＳを調製するために、５００ｍｌの血漿を５０ｍｌのデキストラン硫酸
（ＭＷ＝５０００００）溶液に加える。２０分攪拌する。３０００ｒｐｍ（１６
，０００ｘｇ）、４℃で３０分遠心分離する。さらなる精製のために上清（ＬＰ
ＤＳ）を用いる（約５００ｍｌ）。 ８．２．２ フェニルセファロースクロマトグラフィー フェニルセファロースクロマトグラフィーのために次の材料および条件を使用
した。 固相： フェニルセファロース・ファースト・フロー、高置換グレード、Ｐｈ ａｒｍａｃｉａ カラム： ＸＫ２６／４０、ゲル床の高さ： ３３ｃｍ、Ｖ＝約１７５ｍｌ 流速： ２００ｍｌ／ｈｒ（サンプル） 洗浄： ２００ｍｌ／ｈｒ（緩衝液） 溶出： ８０ｍｌ／ｈｒ（蒸留水） 緩衝液： １０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ ｐ Ｈ７．４、 ０．０１％ アジ化ナトリウム Ｔｒｉｓ緩衝液でカラムを平衡化し、５００ｍｌのＬＰＤＳに２９ｇのＮａＣ
ｌを加えてカラムにアプライする。波長２８０ｎｍでの吸収がほぼ基底線になる
まで数倍容量のＴｒｉｓ緩衝液で洗浄する。その後蒸留水で溶出する。タンパク
質を含む画分をプールし（プールのサイズ：１８０ｍｌ）、アフィゲルブルーク
ロマトグラフィーに使用する。 ８．２．３ アフィゲルブルークロマトグラフィー フェニルセファロースからのプールを２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．
４、 ０．０１％アジ化ナトリウムに対して４℃で一夜透析する。プール容量を
限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ ＹＭ３０）で５０〜６０ｍｌにまで減らし、アフィゲ
ルブルーカラムにローディングする。 固相： アフィゲルブルー、Ｂｉｏｒａｄ、１５３〜７３０１カラム、ＸＫ２ ６／２０、ゲル床の高さ： 約１３ｃｍ；カラム体積： 約７０ｍｌ 流速： ローディング： １５ｍｌ／ｈ 洗浄： ５０ｍｌ／ｈ Ｔｒｉｓ緩衝液でカラムを平衡化する。フェニルセファロースからのプールを
カラムにアプライする。同時に画分を集め始める。Ｔｒｉｓ緩衝液で洗浄する。
プールした画分（１７０ｍｌ）をＣｏｎＡクロマトグラフィーに使用した。 ８．２．４ ＣｏｎＡクロマトグラフィー アフィゲルブルーからのプールをＡｍｉｃｏｎ（ＹＭ３０）で３０〜４０ｍｌ
に減らし、ＣｏｎＡ出発緩衝液（１ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．４、１ｍ
Ｍ ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ ＭｎＣｌ_２、１ｍＭ ＣａＣｌ_２、０．０１％アジ化
ナトリウム）に対して４℃で一夜透析した。 固相： ＣｏｎＡセファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ） カラム： ＸＫ２６／２０、ゲル床の高さ： １４ｃｍ（７５ｍｌ） 流速： ローディング： ４０ｍｌ／ｈ 洗浄（出発緩衝液による）： ９０ｍｌ／ｈ 溶出： ５０ｍｌ／ｈ、０．２Ｍ メチル−α−Ｄ−マンノシドを１ ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．４に溶解したもの マンノシド溶出のタンパク質画分を集め（１１０ｍｌ）、限外濾過（ＹＭ３０
）により容量を４４ｍｌにまで減らした。ＣｏｎＡプールを２ｍｌのアリコート
に分割し、−２０℃で保存する。 ８．２．５ 抗ＡｐｏＡ−１アフィニティークロマトグラフィー 抗ＡｐｏＡ−１アフィニティークロマトグラフィーはＡｆｆｉｇｅｌ−Ｈｚ材
料（Ｂｉｏｒａｄ）で行ったが、この材料には抗ＡｐｏＡ−１が共有結合されて
いる。 カラム： ＸＫ１６／２０、Ｖ＝１６ｍｌ。カラムをＰＢＳ ｐＨ７．４で平衡 化した。カラムにローディングする前に２ｍｌのＣｏｎＡプールをＰ ＢＳに対して２時間透析した。 流速： ローディング：１５ｍｌ／ｈ 洗浄（ＰＢＳ） ４０ｍｌ／ｈ プールしたタンパク質画分（Ｖ＝１４ｍｌ）をＬＣＡＴアッセイに使用する。 カラムを０．１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４．５）で再生して、結合されたＡ−
Ｉを溶出し（１００ｍｌ）、この手順の後すぐにＰＢＳで再平衡化する。 ８．３ 結果 ＬＣＡＴ活性化アッセイの結果を以下の表Ｘに示す。 表Ｘにおいて、＊はＮ末端アセチル化およびＣ末端アミド化されているペプチ
ドを示す。＋はＮ末端ダンシル化されているペプチドを示す。ｓｐは実験条件下
で溶解性に問題があったペプチドを示す。ＸはＡｉｂ、ＺはＮａｌ、ＯはＯｒｎ
である。Ｈｅ（％）はらせん性のパーセントを示す。ｍｉｃｓはミセルを示す。
〜は欠失されたアミノ酸を示す。 ９． 実施例： ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストの薬物速度論 以下の実験は、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストが循環中に安定しており、血漿のＨＤ
Ｌ成分と結合することを実証する。 ９．１．放射標識ペプチドの合成 放射標識ペプチドを、^１４Ｃ標識アミノ酸をＮ末端アミノ酸として結合するこ
とにより合成した。この合成は、Ｌ．Ｌａｐａｔｓａｎｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉ
ｓ，１９８３，６７１−１７３に準じて実施された。簡単に説明すると、２５０
μＭの非標識Ｎ末端アミノ酸を２２５μｌの９％Ｎａ_２ＣＯ_３溶液に溶解し、９
．２５ＭＢｑ（２５０μＭ）の^１４Ｃ標識Ｎ末端アミノ酸の溶液（９％Ｎａ_２Ｃ
Ｏ_３）に加えた。この液体を０℃まで冷却し、０．７５ｍｌ ＤＭＦ中の６００
μＭ（２０２ｍｇ）の９−フルオレニルメチル−Ｎ−スクシンイミジルカーボネ
ート（Ｆｍｏｃ−Ｏｓｕ）と混合し、室温で４時間振とうした。その後、混合物
をジエチルエーテル（２ｘ５ｍｌ）とクロロホルム（１ｘ５ｍｌ）を用いて抽出
し、残った水相を３０％ＨＣｌで酸性にしクロロホルム（５ｘ８ｍｌ）で抽出し
た。有機相をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濾過し、窒素流で体積を５ｍｌまで減少
させた。純度をＴＬＣ （ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈａｃ，９：１：０．１ｖ／
ｖ／ｖ、固定相ＲＰＴＬＣシリカゲル６０、Ｍｅｒｃｋ、ドイツ国）により推定
した。 ^１４Ｃ−Ｆｍｏｃプロリンを含有するクロロホルム溶液をペプチド合成に直接
使用した。第６節で記載したように自動合成された。ペプチドの配列はエドマン
分解で決定し、カップリングは、第６．１節で記載したようにして行った。 ９．２．マウスにおける薬物動態 各実験において、２．５ｍｇ／ｋｇの放射標識ペプチドを、マウス正常食また
はじゅく腫形成性のＴｈｏｍａｓ−Ｈａｒｃｒｏｆｔ改変食（ＶＬＤＬ及びＩＤ
Ｌコレステロールの極度な上昇に到る）を与えられたマウスに腹腔内注射した。
血液サンプルは、血清中の放射活性の評価のために時間をおいて複数回採取した
。 ９．３．ヒト血清中の安定性 ヒト血清中の本発明のＡｐｏＡ−Ｉの安定性は以下に記載するように実証され
た。 ９．３．１．実験方法 上記９．１節に記載のようにして調製した１００μｇの^１４Ｃ−標識ペプチド
４（上記第９．１節に記載したとおりに調製される。））を２ｍＬの新鮮なヒト
血清と混合し（３７℃）、直ちに（対照サンプル）、または３７℃で８日間イン
キュベーションした後に（試験サンプル）脱脂した。脱脂は、等量の２：１（ｖ
／ｖ）クロロホルム：メタノールで脂質を抽出することによって行った。 サンプルを逆相Ｃ_１８ＨＰＬＣカラムにのせ、直線勾配（３３分間で２５−５
８％）のアセトニトリル（０．１％ＴＦＡ含有）で溶出させた。溶出プロファイ
ルは吸光度（２２０ｎｍ）及び放射活性で追跡した。 ９．４．プレ−β様粒子の形成 プレ−β様粒子を形成するための本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストの能力は以
下に記載するように実証された。 ９．４．１．実験方法 ヒトＨＤＬを、密度ｄ＝１．２１ｇ／ｍｌでのＫＢｒ密度超遠心によって最上
層画分を得、次にＳｕｐｅｒｏｓｅ６ゲル濾過クロマトグラフィーでＨＤＬを他
のリポタンパク質と分離することによって単離した。単離されたＨＤＬを、Ｂｒ
ａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイによって測定したタンパク質濃度に基づき、生
理的食塩水で最終濃度１．０ｍｇ／ｍｌに調整した。３００μｌのアリコートを
単離されたＨＤＬ調製物からとり、１００μｌの^１４Ｃ−標識ペプチドと共に３
７℃で２時間インキュベートした。１００μｌの生理的食塩水を含有するブラン
ク、及び４種の^１４Ｃ−標識ペプチド希釈物：（ｉ）０．２０μｇ／μｌペプチ
ド：ＨＤＬ比＝１：１５；（ｉｉ）０．３０μｇ／μｌペプチド：ＨＤＬ比＝１
：１０；（ｉｉｉ）０．６０μｇ／μｌペプチド：ＨＤＬ比＝１：５；及び（ｉ
ｖ）１．００μｇ／μｌペプチド：ＨＤＬ比＝１：３を含む、５種の別々のイン
キュベーション物を分析した。２時間のインキュベーション後、サンプルの２０
０μｌアリコート（全量＝４００μｌ）を、リポタンパク質分離及び分析のため
にＳｕｐｅｒｏｓｅ６ゲル濾過カラムにのせ、１００μｌを用いてカラムにのせ
た全放射活性を決定した。 ９．５．Ａｐｏ−Ａ−Ｉアゴニストのヒトリポタンパク質との結合 ９．５．１．実験方法 本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストのヒトリポタンパク質画分と結合する能力を
、^１４Ｃ−標識ペプチドを各リポタンパク質クラス（ＨＤＬ、ＬＤＬ及びＶＬＤ
Ｌ）及び異なるリポタンパク質クラスの混合物と共にインキュベートすることに
よって測定した。 ＨＤＬ ＬＤＬ及びＶＬＤＬは、ｄ＝１．２１ｇ／ｍｌにおけるＫＢｒ密度勾
配超遠心分離によって単離し、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６Ｂカラムサイズ排除カラム上
でのＦＰＬＣによって精製した（クロマトグラフィーは、流速０．７ｍｌ／分、
バッファー１０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ８）、１１５ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤ
ＴＡ及び０．０１％ ＮａＮ_３で実施した）。^１４Ｃ−標識ペプチド４を、ペプ
チド：リン脂質比１：５（質量比）でＨＤＬ、ＬＤＬ及びＶＬＤＬと３７℃で２
時間インキュベートした。必要量のリポタンパク質（１０００μｇの収量に必要
な量に基づいた量）を０．２ｍｌのペプチドストック溶液（１ｍｇ／ｍｌ）と混
合し、表ＸＩＩＩに従って０．９％のＮａＣｌを使用して２．２ｍｌにした。 ３７℃で２時間インキュベートした後、液体シンチレーション計数のためにア
リコート（０．１ｍｌ）をとって全放射活性を決定し、残りのインキュベーショ
ン混合液の密度をＫＢｒで１．２１ｇ／ｍｌに調整し、Ｂｅｃｋｍａｎ ｔａｂ
ｌｅｔｏｐ ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅを使用して、ＴＬＡ１００．３ロ
ーター中で、サンプルを４℃で２４時間、１００，０００ｒｐｍ（３００，００
０ｇ）で遠心分離した。得られた上清を、計５画分の各サンプルの最上層から０
．３ｍｌのアリコートをとることによって分画し、それぞれの画分の０．０５ｍ
ｌを液体シンチレーション計数に使用した。最上層の２画分は浮かぶリポタンパ
ク質を含有しており、他方（３−５）は溶液中のタンパク質／ペプチドに相当し
ている。 ９．６．本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストはヒト血漿中のＨＤＬ脂質に選択的に
結合する ９．６．１．実験方法 本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストがヒト血漿中のＨＤＬタンパク質と選択的に
結合することを実証するために、ヒト血漿（２ｍｌ）を、２０、４０、６０、８
０、及び１００μｇの^１４Ｃ−標識ペプチドと３７℃で２時間インキュベートし
た。密度を１．２１ｇ／ｍｌに調整し、ＴＬＡ １００．３ローター中で１００
，０００ｒｐｍ（３００，０００ｇ）で３６時間、４℃で遠心分離してリポタン
パク質を分離した。最上層の９００μｌ（３００μｌ画分中）を分析のためにと
った。各３００μｌ画分からとった５０μｌの放射活性を計数し、各画分からと
った２００μｌをＦＰＬＣ（Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６／Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２コンビ
ネーションカラム）で分析した。 １０．実施例：ＡｐｏＡ−Ｉアゴニストはコレステロールの流出を促進する 本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストがコレステロール流出を促進することを実証
するために、ＨｅｐＧ２ヘパトーマ細胞を６ウェル培養皿中にまき、コンフルエ
ントになるまで増殖させた。細胞を、コレステロールを乾燥し、次いでリン酸緩
衝食塩水（ＰＢＳ）中１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を添加し、溶液を超音
波処理し、０．２ｍｌのこの標識溶液及び１．８ｍｌの増殖培地を細胞に添加す
ることによって、^３Ｈ−コレステロールで標識し、それぞれのウェルが２μＣｉ
の放射活性を有するようにした。細胞を標識用培地と共に２４時間インキュベー
トした。 ペプチド（またはタンパク質）：ＤＭＰＣ複合体は、１：２のペプチド（また
はタンパク質）：ＤＭＰＣ比（ｗ：ｗ）で調製した。複合体を調製するために、
ペプチドまたは天然のヒトＡｐｏＡ−Ｉタンパク質をＰＢＳ中のＤＭＰＣ溶液に
添加し、室温で一晩インキュベートした。その間に溶液は澄明になった。最終溶
液におけるペプチドまたはタンパク質濃度は１ｍｇ／ｍｌであった。 標識用培地を細胞から除去し、複合体添加前にＰＢＳで細胞を洗浄した。それ
ぞれのウェルに１．６ｍｌの増殖培地を添加し、次いでペプチド（またはタンパ
ク質）：ＤＭＰＣ複合体及び十分量のＰＢＳを添加して最終体積をウェル当たり
２ｍｌとした。ペプチドまたはＡｐｏＡ−Ｉの最終濃度は１、２．５、５、７．
５及び２５μｇ／ｍｌ培地であった。３７℃で２４時間インキュベーションした
後、培地を除去し、細胞を２ｍｌの１％ ＢＳＡ／ＰＢＳで、次に各２ｍｌのＰ
ＢＳで２回、洗浄した。培地中に流出した^３Ｈ−コレステロールの量を、液体シ
ンチレーション計数で決定した。 １１．実施例：動物モデル系におけるＡｐｏＡ−Ｉアゴニストの使用 下記のプロトコールを用いて本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストの効率を、ウサ
ギにおいて証明した。 １１．１．リン脂質／ペプチド複合体の調製 コール酸透析法により、リン脂質（ＤＰＰＣ）及びペプチドからなる円板上小
粒子を調製した。リン脂質をクロロホルムに溶解し、窒素流下で乾燥した。ペプ
チドを、１−２ｍｇ／ｍｌの濃度で緩衝液（食塩水）に溶解した。脂質のフィル
ムをコール酸を含有する緩衝液に再溶解し（４３℃）、３：１のリン脂質／ペプ
チド重量比でペプチド溶液を添加した。混合液を４３℃で一晩インキュベートし
、次いで、温度を変えるごとに緩衝液（大量）を３回交換して４３℃（２４時間
）、室温（２４時間）及び４℃（２４時間）で透析した。複合体を注射のために
滅菌濾過（０．２２μｍ）し、４℃で保存した。 １１．２．ペプチド／リン脂質粒子の単離及び性状解析 粒子をゲル濾過カラム（Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６ＨＲ）上で分離した。粒子を含む
ピークの位置を、各画分におけるリン脂質濃度を測定することによって同定した
。溶出量から、Ｓｔｒｏｋｅｓ ｒａｄｉｕｓを決定した。複合体中のペプチド
濃度は、１６時間の酸加水分解後のフェニルアラニン含量を（ＨＰＬＣによって
）測定することによって決定した。 １１．３．ウサギへの注射 雄のニュージーランド白色ウサギ（２．５−３ｋｇ）に投与量のリン脂質／ペ
プチド複合体（５〜１０ｍｇ／ｋｇ体重のペプチド、または１０ｍｇ／ｋｇ体重
のＡｐｏＡ−Ｉ（対照））を１０−１５ｍｌを超えない一回のボーラス注射によ
り、静脈注射した。操作前に動物にわずかに鎮静剤を与えた。注射前、及び注射
後５、１５、３０、６０、２４０及び１４４０分に血液サンプル（ＥＤＴＡ存在
下で回収）をとった。各サンプルについてヘマトクリット（Ｈｃｔ）を決定した
。サンプルをアリコートに分け、分析まで−２０℃に保存した。 １１．４．ウサギ血清の分析 血漿脂質 血漿コレステロール、血漿トリグリセリド及び血漿リン脂質の総量
を、製造者のプロトコル（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｍａｎｎ
ｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ，６９２８０，Ｍａ
ｒｃｙ−Ｌ’ｅｔｏｉｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）に従い、市販のアッセイを使用して
酵素的に測定した。 リポタンパク質プロファイル リポタンパク質画分中に血漿を分離した後に得
られた画分の血漿リポタンパク質プロファイルを、ショ糖密度勾配中で遠心分離
することによって決定した。画分を回収し、それぞれ個々の画分におけるリン脂
質及びコレステロール含量を酵素的に測定した。 １２．実施例：同時凍結乾燥法によるペプチド−脂質複合体の調製 以下のプロトコルを使用してペプチド−脂質複合体を調製した。 １ｍｇのペプチド２１０（配列番号２１０）ペプチドを、キャップを有する１
ｍｌの透明なガラスバイアル（Ｗａｔｅｒｓ ＃ＷＡＴ００２５０５４）中の２
５０μｌのＨＰＬＣグレードのメタノール（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）に溶解
した。室温で１０分間、時々攪拌することによって、ペプチドの溶解を促進させ
た。この混合液に、３ｍｇのジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ；
Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，９９％純度、製品＃８５０３５５
）を含有するアリコートを１００ｍｇ／ｍｌの保存用メタノール溶液から添加し
た。メタノールの添加によって混合液の量を４００μｌとし、室温で更に１０分
間、混合液を断続的に攪拌した。チューブに２００μｌのキシレン（Ｓｉｇｍａ
−Ａｌｄｒｉｃｈ ９９％純度、ＨＰＬＣグレード）を添加し、チューブを１０
秒間渦巻き攪拌した。それぞれのチューブの先端に２０ゲージの注射針で２個の
小さな穴を開け、チューブを液体窒素中でそれぞれ１５秒間凍結させ、真空下で
一晩凍結乾燥した。それぞれのチューブに２００ｍｌの０．９％ＮａＣｌ溶液を
添加した。チューブを２０秒間渦巻き攪拌した。この時点で、チューブ内の溶液
の外観は乳白色であつた。次いでチューブを水浴上で３０分間、４１℃でインキ
ュベートした。４１℃で数分間インキュベーションした後、溶液は透明になった
（すなわち、外観上水と同様になった）。 １２．１．Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６ゲル濾過クロマトグラフィーによる複合体の性状
解析 ペプチド２１０（配列番号２１０）を含有するペプチド−リン脂質複合体を上
述したとおり同時凍結乾燥によって調製した。調製物は重量で１ｍｇのペプチド
と３ｍｇのＤＰＰＣを含んでいた。２００μｌの０．９％ＮａＣｌ中で複合体を
再構成した後、２０μｌ（１００μｇのペプチド２１０を含有する）の複合体を
、液相として０．９％ＮａＣｌを用い、また０．５ｍｌ／分の流速でＰｈａｒｍ
ａｃｉａ Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６カラムにアプライした。波長２８０ｎｍの光の吸
収または散乱によりクラマトグラフィーを監視した。１ｍｌずつ画分を集めた。
２０μｌの画分を含むアリコートを、ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ Ｐｈｏｓｐｈｏｌ
ｉｐｉｄｅｓ Ｅｎｚｙｍａｔｉｑｕｅ ＰＡＰ １５０キット（＃６１４９１
）を用い、製造業者が提供する指示に従い、リン脂質含量についてアッセイした
。ほぼ大部分のリン脂質とＵＶ吸光度がともに、約１５．１ｍｌのところにピー
クをもつ数個の画分中に一緒に回収された。この溶出容量は１０６オングストロ
ームのＳｔｏｋｅｓ直径に相当する。 比較のために、２０μｌのヒトＨＤＬ_２の別個のクロマトグラムを、同一条件
のもとでペプチド２１０（配列番号２１０）と同じカラムを用いて実施し得た。
ＨＤＬ_２は以下のように調製した。３００ｍｌの凍結ヒト血漿（Ｍａｎｎｈｅｉ
ｍ Ｂｌｕｔｓｐｅｎｄｚｅｎｔｒａｌｅ ＃１１８５１９０）を解凍し、固体
臭化カリウムを用いて１．２５の密度に調整し、Ｔｉ４５ローター（Ｂｅｃｋｍ
ａｎ）を用いて２０℃、４０，０００ＲＰＭで４５時間遠心分離した。浮遊する
層を回収し、蒸留水に対し透析し、固体臭化カリウムを用いて１．０７の密度に
調整し、上記のとおり７０時間遠心分離した。底層（チューブの底から１ｃｍ上
部のレベル）を回収し、０．０１％アジ化ナトリウムに加えてクロマトグラフィ
ーまで４日間４℃で保存した。カラム溶出物を２５４ｎｍの波長の光の吸収また
は散乱により監視した。既知の分子量とＳｔｏｋｅｓ直径をもつ一連のタンパク
質を標準として用いて、粒子のＳｔｏｋｅｓ直径の計算のためにカラムを較正し
た（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｇｅｌ Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ Ｃａｌｉｂｒａｔｉ
ｏｎ Ｋｉｔ Ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ Ｍａｎｕａｌ，Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ，
１９８５年４月改訂）。１４．８ｍｌの保持容量に溶出されるＨＤＬ_２は１０８
ｎｍのＳｔｏｋｅｓ直径に相当する。 １３．実施例：抗体の調製 本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストに対する抗体を作製するために、ペプチドを
キーホールリンペットヘモシアニンに結合させた（ＫＬＨ； １０ｍｇのＫＬＨ
に対して１ｍｇのペプチド）。ＫＬＨコンジュゲート（ＬＭＧ）を完全フロイン
ドアジュバントに懸濁し、時間０でウサギに注射し、４週間後、そして５週間後
に０．２５ｍｇのＫＬＨコンジュゲートをブースター注射した。瀉血前及び６週
間後の瀉血後に、ＥＬＩＳＡによって真正（ａｕｔｈｅｎｔｉｃ）抗原に対する
抗体価について試験した。 得られた瀉血はウサギ２匹毎にプールした。もっぱらペプチド抗原に対する抗
体を以下のようにして単離した。 １．遊離ペプチドを、製造者のプロトコルに従い、臭化シアンで活性化したＳ
ｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に結合させた。 ２．抗血清を、関連しないペプチドのカラム、及び関連しないヒト及びマウス
の血清タンパク質のカラム上に予め吸着させた。 ３．予め吸着させた抗血清を、対応するペプチドカラムに通した（ポイント１
を参照のこと）。 ４．カラムを０．１Ｍホウ酸緩衝食塩水（ｐＨ８．２）で洗浄し、結合した抗
体を、ｐＨ４．０からｐＨ３．０、ｐＨ２．０（０．１Ｍグリシン緩衝液）の低
ｐＨ勾配段階を使用し、最終的には０．１Ｍ ＨＣｌで溶出させた。 ５．溶出した物質を過剰のホウ酸食塩水で中和し、限外濾過（Ａｍｉｃｏｎ、
ＹＭ３０）によって濃縮し、ホウ酸食塩水に対して透析した。 ６．タンパク質濃度を２８０ｎｍの吸光度によって測定した。 得られた抗体に対し、精製ヒトＡｐｏＡ−Ｉまたは精製マウスＡｐｏＡ−Ｉを
用い、直接ＥＬＩＳＡ結合アッセイで種特異性を調べた。 本発明は、本発明の個々の態様の単なる例示として意図される記載の特定の実
施形態によってその範囲を制限されるべきものではなく、機能的に等価な方法及
び成分は本発明の範囲内に含まれる。実際、本発明の種々の改変は、本明細書に
示し、また記載されたものに加えて、上記明細書及び添付の図面から当業者に明
らかであろう。こうした改変は請求の範囲内にあることが意図される。 本明細書で引用した全ての参考文献は、全ての目的のために参照により本明細
書に組み入れる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１Ａは、概念化した両親媒性αヘリックスのＳｃｈｉｆｆｅｒ−Ｅｄｍｕｎ
ｄｓｏｎのヘリックスホイールの図であり、図中、白丸は親水性アミノ酸残基を
表わし、陰影（ｓｈａｄｅｄ）入りの丸は疎水性アミノ酸残基を表わす。 図１Ｂは、図１Ａの概念化した両親媒性ヘリックスのヘリックスネットの図で
ある。 図１Ｃは、図１Ａの概念化した両親媒性ヘリックスのヘリックスシリンダーの
図である。

【図２】 図２Ａは、ヘリックスの両親媒性を説明する、構造（Ｉ）のコアペプチドのＳ
ｃｈｉｆｆｅｒ−Ｅｄｍｕｎｄｓｏｎのヘリックスホイールの図である（白丸は
親水性アミノ酸残基を表わし、陰影入りの丸は疎水性アミノ酸残基を表わし、部
分的に斜線入りの丸は親水性アミノ酸残基または疎水性アミノ酸残基のいずれか
を表わす。）。 図２Ｂは、ヘリックスの疎水性面を説明する、構造（Ｉ）のコアペプチドのヘ
リックスネットの図である。 図２Ｃは、ヘリックスの親水性面を説明する、構造（Ｉ）のコアペプチドのヘ
リックスネットの図である。

【図３】 図３Ａは、Ｓｅｇｒｅｓｔの１８Ａペプチド（ＤＷＬＫＡＦＹＤＫＶＡＥＫＬ
ＫＥＡＦ；配列番号２４４）の親水性面を説明するヘリックスネットの図である
。 図３Ｂは、例示のコアペプチド２１０（ＰＶＬＤＬＦＲＥＬＬＥＥＬＫＱＫＬ
Ｋ；配列番号２１０）の親水性面を説明するヘリックスネットの図である。 図３Ｃは、Ｓｅｇｒｅｓｔの共通２２−ｍｅｒペプチド （ＰＶＬＤＥＦＲＥＫＬＮＥＥＬＥＡＬＫＱＫＬＫ；配列番号７５）の親水性面
を説明するヘリックスネットの図である。

【図４】 図４Ａは、Ｓｅｇｒｅｓｔの１８Ａペプチド（配列番号２４４）の疎水性面を
説明するヘリックスネットの図である。 図４Ｂは、例示のコアペプチド２１０（配列番号２１０）の疎水性面を説明す
るヘリックスネットの図である。 図４Ｃは、Ｓｅｇｒｅｓｔの共通２２−ｍｅｒペプチド（配列番号７５）の疎
水性面を説明するヘリックスネットの図である。

【図５】 図５Ａは、Ｓｅｇｒｅｓｔの１８Ａペプチド（配列番号２４４）のＳｃｈｉｆ
ｆｅｒ−Ｅｄｍｕｎｄｓｏｎのヘリックスホイールの図である。 図５Ｂは、例示のコアペプチド２１０（配列番号２１０）のＳｃｈｉｆｆｅｒ
−Ｅｄｍｕｎｄｓｏｎのヘリックスホイールの図である。

【図６】 図６Ａは、本発明の３次分枝ネットワークを説明するものである。 図６Ｂは、本発明の４次分枝ネットワークを説明するものである。 図６Ｃは、本発明の混合次分枝ネットワークを説明するものである。 図６Ｄは、本発明の例示の「Ｌｙｓ−ツリー」分枝ネットワークを説明するも
のである。

【図７】 図７Ａは、ペプチド２１０（配列番号２１０）およびＳｅｇｒｅｓｔの共通２
２−ｍｅｒペプチド（配列番号７５）についての、観察されたＨα化学シフトと
平面化（ｔａｂｕｌａｔｅｄ）ランダムコイルのＨα化学シフトとの差を説明す
るグラフである。 図７Ｂは、ペプチド２１０（配列番号２１０）およびＳｅｇｒｅｓｔの共通２
２−ｍｅｒペプチド（配列番号７５）についての、観察されたアミドプロトン化
学シフトと平面化ランダムコイルのアミドプロトン化学シフトとの差を説明する
グラフである。

【図８】 図８Ａは、本発明のＡｐｏＡ−Ｉアゴニストを用いて得られる各種の凝集状態
およびペプチド−脂質複合体を示す模式図である。左：所定のペプチド濃度、ｐ
Ｈおよびイオン強度の条件におけるペプチドの多量体化プロセス（数個のペプチ
ドヘリックス同士の相互作用から始まり、オリゴマーの形成へと導かれる。中心
：（これらの凝集状態のいずれかにある）該ペプチドと脂質物（ｌｉｐｉｄｉｃ
ｅｎｔｉｔｉｅｓ）（例えばＳＵＶ）との相互作用により脂質再編成が起こる
。右：脂質：ペプチドのモル比を変えることにより異なるタイプのペプチド−脂
質複合体が得られる（低い脂質−ペプチド比では脂質−ペプチド・コミセルであ
り、脂質：ペプチド比を徐々に高くするにつれて円盤状複合体、最終的には大き
な多重膜複合体となる）。 図８Ｂは、所定の範囲の脂質：ペプチド比において形成される円盤状ペプチド
−脂質複合体の一般的に受け入れられているモデルを説明するものである。円盤
状の縁部を包囲する各ペプチドは２つの直隣接物と密着した状態にある。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 47/44 Ａ６１Ｋ 47/48 47/48 Ａ６１Ｐ 3/00 Ａ６１Ｐ 3/00 3/06 3/06 9/00 9/00 9/10 9/10 １０１ １０１ 31/04 31/04 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｋ 14/47 // Ｃ０７Ｋ 14/47 Ａ６１Ｋ 37/02 ＺＮＡ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，Ｕ Ｚ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (71)出願人 コルナット，イサベル ドイツ連邦共和国 ディー−68535 エデ ィンゲン−ネッカーハウゼン，メイゼンヴ ェグ 10 (71)出願人 メッツ，グンテル ドイツ連邦共和国 ディー−68535 エデ ィンゲン−ネッカーハウゼン，レシンクシ ュトラーセ 14 (72)発明者 ダシュー，ジーン−ルイス アメリカ合衆国 47401 インディアナ州， ブルーミントン，シェルウッド ヒルズ ドライブ 777 (72)発明者 セクル，リネート ドイツ連邦共和国 ディー−68526 ラデ ンバーク，ヴィケムシュトラーセ 13 (72)発明者 バトナー，クラウス ドイツ連邦共和国 ディー−74925 エフ ェンバッハ，イーチェンドルフシュトラー セ ６ (72)発明者 コルナット，イサベル ドイツ連邦共和国 ディー−68535 エデ ィンゲン−ネッカーハウゼン，メイゼンヴ ェグ 10 (72)発明者 メッツ，グンテル ドイツ連邦共和国 ディー−68535 エデ ィンゲン−ネッカーハウゼン，レシンクシ ュトラーセ 14 Ｆターム(参考） 4C076 AA11 AA19 AA29 CC21 DD63 EE51 EE59 FF27 FF63 4C084 AA02 BA01 BA09 BA18 CA59 DB01 MA05 MA16 MA24 MA43 MA44 NA14 ZA36 ZA45 ZC33 ZC41 4H045 AA10 AA30 BA17 BA55 CA40 EA24 FA74

Claims (52)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ＡｐｏＡ−１アゴニストであって、 （ｉ）脂質の存在下で両親媒性αヘリックスを形成し、次の構造式（Ｉ）： Ｚ_１−Ｘ_１−Ｘ_２−Ｘ_３−Ｘ_４−Ｘ_５−Ｘ_６−Ｘ_７−Ｘ_８−Ｘ_９−Ｘ_１０−Ｘ_{１
   １}−Ｘ_１２−Ｘ_１３−Ｘ_１４−Ｘ_１５−Ｘ_１６−Ｘ_１７−Ｘ_１８−Ｚ_２ からなる１４〜２２残基ペプチドもしくはペプチド類似体： 上記式中、 Ｘ_１はＰｒｏ（Ｐ）、Ａｌａ（Ａ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（
   Ｑ）またはＤ−Ｐｒｏ（ｐ）であり； Ｘ_２は脂肪族アミノ酸であり； Ｘ_３はＬｅｕ（Ｌ）であり； Ｘ_４は酸性アミノ酸であり； Ｘ_５はＬｅｕ（Ｌ）またはＰｈｅ（Ｆ）であり； Ｘ_６はＬｅｕ（Ｌ）またはＰｈｅ（Ｆ）であり； Ｘ_７は塩基性アミノ酸であり； Ｘ_８は酸性アミノ酸であり； Ｘ_９はＬｅｕ（Ｌ）またはＴｒｐ（Ｗ）であり； Ｘ_１０はＬｅｕ（Ｌ）またはＴｒｐ（Ｗ）であり； Ｘ_１１は酸性アミノ酸またはＡｓｎ（Ｎ）であり； Ｘ_１２は酸性アミノ酸であり； Ｘ_１３はＬｅｕ（Ｌ）、Ｔｒｐ（Ｗ）またはＰｈｅ（Ｆ）であり； Ｘ_１４は塩基性アミノ酸またはＬｅｕ（Ｌ）であり； Ｘ_１５はＧｌｎ（Ｑ）またはＡｓｎ（Ｎ）であり； Ｘ_１６は塩基性アミノ酸であり； Ｘ_１７はＬｅｕ（Ｌ）であり； Ｘ_１８は塩基性アミノ酸であり； Ｚ_１はＨ_２Ｎ−またはＲＣ（Ｏ）ＮＨ−であり； Ｚ_２は−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲもしくは−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたはその
   塩であり； 各Ｒは独立して−Ｈ、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルケニル、
   （Ｃ_１−Ｃ_６）アルキニル、（Ｃ_５−Ｃ_２０）アリール、（Ｃ_６−Ｃ_２６）アル
   カリール、５〜２０員のヘテロアリール、６〜２６員のアルクヘテロアリール、
   または１〜４残基ペプチドもしくはペプチド類似体であり； 残基Ｘ_ｎ間の「−」は、それぞれ独立して、アミド結合、置換アミド結合、ア
   ミドの同配体（ｉｓｏｓｔｅｒｅ）またはアミド疑似体を表す；または （ｉｉ）残基Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４、Ｘ_５、Ｘ_６、Ｘ_７、Ｘ_８、Ｘ_９、Ｘ_{１
   ０}、Ｘ_１１、Ｘ_１２、Ｘ_１３、Ｘ_１４、Ｘ_１５、Ｘ_１６、Ｘ_１７およびＸ_１８の
   うち１個以上８個までが欠失されている構造式（Ｉ）の欠失型；または （ｉｉｉ）残基Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_４、Ｘ_５、Ｘ_６、Ｘ_７、Ｘ_８、Ｘ_９、Ｘ
   _１０、Ｘ_１１、Ｘ_１２、Ｘ_１３、Ｘ_１４、Ｘ_１５、Ｘ_１６、Ｘ_１７またはＸ_１８
   のうち少なくとも１個が他の残基で保存的に置換されている構造式（Ｉ）の改変
   型； からなるＡｐｏＡ−１アゴニスト。
2. 【請求項２】 ヒトＡｐｏＡ−１と比べて少なくとも約３８％のＬＣＡＴ活
   性化活性を示す、請求項１記載のＡｐｏＡ−１アゴニスト。
3. 【請求項３】 構造式（Ｉ）の改変型である、請求項１記載のＡｐｏＡ−１
   アゴニスト。
4. 【請求項４】 疎水性残基が構造式（Ｉ）に従って確定されており、少なく
   とも１個の非確定残基が他の残基で保存的に置換されている、請求項３記載のＡ
   ｐｏＡ−１アゴニスト。
5. 【請求項５】 Ｘ_１がＰｒｏ（Ｐ）、Ｄ−Ｐｒｏ（ｐ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ａｓｎ（Ｎ）または
   Ａｌａ（Ａ）であり； Ｘ_２がＡｌａ（Ａ）、Ｌｅｕ（Ｌ）またはＶａｌ（Ｖ）であり； Ｘ_３がＬｅｕ（Ｌ）であり； Ｘ_５がＬｅｕ（Ｌ）またはＰｈｅ（Ｆ）であり； Ｘ_６がＬｅｕ（Ｌ）またはＰｈｅ（Ｆ）であり； Ｘ_９がＬｅｕ（Ｌ）またはＴｒｐ（Ｗ）であり； Ｘ_１０がＬｅｕ（Ｌ）またはＴｒｐ（Ｗ）であり； Ｘ_１３がＬｅｕ（Ｌ）、Ｔｒｐ（Ｗ）またはＰｈｅ（Ｆ）であり； Ｘ_１７がＬｅｕ（Ｌ）であり；そして Ｘ_４、Ｘ_７、Ｘ_８、Ｘ_１１、Ｘ_１２、Ｘ_１４、Ｘ_１５、Ｘ_１６およびＸ_１８の
   うち少なくとも１個が他の残基で保存的に置換されている、請求項４記載のＡｐ
   ｏＡ−１アゴニスト。
6. 【請求項６】 親水性残基が構造式（Ｉ）に従って確定されており、少なく
   とも１個の非確定残基が他の残基で保存的に置換されている、請求項３記載のＡ
   ｐｏＡ−１アゴニスト。
7. 【請求項７】 Ｘ_４がＡｓｐ（Ｄ）またはＧｌｕ（Ｅ）であり； Ｘ_７がＡｒｇ（Ｒ）、Ｌｙｓ（Ｋ）またはＯｒｎであり； Ｘ_８がＡｓｐ（Ｄ）またはＧｌｕ（Ｅ）であり； Ｘ_１１がＡｓｎ（Ｎ）またはＧｌｕ（Ｅ）であり； Ｘ_１２がＧｌｕ（Ｅ）であり； Ｘ_１４がＬｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）またはＯｒｎであり； Ｘ_１５がＧｌｎ（Ｑ）またはＡｓｎ（Ｎ）であり； Ｘ_１６がＬｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）またはＯｒｎであり； Ｘ_１８がＡｓｎ（Ｎ）またはＧｌｎ（Ｑ）であり；そして Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３、Ｘ_５、Ｘ_６、Ｘ_９、Ｘ_１０、Ｘ_１３およびＸ_１７のうち少
   なくとも１個が他の残基で保存的に置換されている、請求項６記載のＡｐｏＡ−
   １アゴニスト。
8. 【請求項８】 Ｘ_３がＬｅｕ（Ｌ）であり、Ｘ_６がＰｈｅ（Ｆ）であり、Ｘ
   _９がＬｅｕ（Ｌ）またはＴｒｐ（Ｗ）であり、Ｘ_１０がＬｅｕ（Ｌ）またはＴｒ
   ｐ（Ｗ）であり、そしてＸ_１、Ｘ_２、Ｘ_５、Ｘ_１３およびＸ_１７のうち少なくと
   も１個が他の残基で保存的に置換されている、請求項６記載のＡｐｏＡ−１アゴ
   ニスト。
9. 【請求項９】 置換する残基が置換される残基と同じサブカテゴリーに分類
   される、請求項５または７記載のＡｐｏＡ−１アゴニスト。
10. 【請求項１０】 構造式（Ｉ）の欠失型である、請求項１記載のＡｐｏＡ−
    １アゴニスト。
11. 【請求項１１】 ペプチドまたはペプチド類似体の１個のヘリックスターン
    が欠失されている、請求項１０記載のＡｐｏＡ−１アゴニスト。
12. 【請求項１２】 構造式（Ｉ）の１８残基ペプチドまたはペプチド類似体で
    ある、請求項１記載のＡｐｏＡ−１アゴニスト。
13. 【請求項１３】 残基間の「−」が−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−を表し、Ｚ_１がＨ_２Ｎ
    −であり、そしてＺ_２が−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたはその塩である、請求項１２記載の
    ＡｐｏＡ−１アゴニスト。
14. 【請求項１４】 Ｘ_１がＰｒｏ（Ｐ）、Ａｌａ（Ａ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ａｓｎ（Ｎ）またはＤ−
    Ｐｒｏ（ｐ）であり； Ｘ_２がＡｌａ（Ａ）、Ｌｅｕ（Ｌ）またはＶａｌ（Ｖ）であり； Ｘ_３がＬｅｕ（Ｌ）であり； Ｘ_４がＡｓｐ（Ｄ）またはＧｌｕ（Ｅ）であり； Ｘ_５がＬｅｕ（Ｌ）またはＰｈｅ（Ｆ）であり； Ｘ_６がＬｅｕ（Ｌ）またはＰｈｅ（Ｆ）であり； Ｘ_７がＡｒｇ（Ｒ）、Ｌｙｓ（Ｋ）またはＯｒｎであり； Ｘ_８がＡｓｐ（Ｄ）またはＧｌｕ（Ｅ）であり； Ｘ_９がＬｅｕ（Ｌ）またはＴｒｐ（Ｗ）であり； Ｘ_１０がＬｅｕ（Ｌ）またはＴｒｐ（Ｗ）であり； Ｘ_１１がＧｌｕ（Ｅ）またはＡｓｎ（Ｎ）であり； Ｘ_１２がＧｌｕ（Ｅ）であり； Ｘ_１３がＬｅｕ（Ｌ）、Ｔｒｐ（Ｗ）またはＰｈｅ（Ｆ）であり； Ｘ_１４がＡｒｇ（Ｒ）、Ｌｙｓ（Ｋ）またはＯｒｎであり； Ｘ_１５がＧｌｎ（Ｑ）またはＡｓｎ（Ｎ）であり； Ｘ_１６がＡｒｇ（Ｒ）、Ｌｙｓ（Ｋ）またはＯｒｎであり； Ｘ_１７がＬｅｕ（Ｌ）であり；そして Ｘ_１８がＡｒｇ（Ｒ）、Ｌｙｓ（Ｋ）またはＯｒｎである、 請求項１３記載のＡｐｏＡ−１アゴニスト。
15. 【請求項１５】 Ｎおよび／またはＣ末端がブロックされたまたはブロック
    されていない形態の次のペプチド： からなる群より選択される、請求項１記載のＡｐｏＡ−１アゴニスト。
16. 【請求項１６】 ヒトＡｐｏＡ−１と比べて少なくとも約３８％のＬＣＡＴ
    活性化活性を示し、次の構造式（ＩＩ）： を有する多量体ＡｐｏＡ−１アゴニストまたはその薬学的に許容される塩： 上記式中、 各ｍは独立して０〜１の整数であり、 ｎは０〜１０の整数であり、 各「ＨＨ」は独立して請求項１記載のペプチドまたはペプチド類似体であり、 各「ＬＬ」は独立して二官能性リンカーであり、そして 各「−」は独立して共有結合を表す。
17. 【請求項１７】 ヒトＡｐｏＡ−１と比べて少なくとも約３８％のＬＣＡＴ
    活性化活性を示し、次の構造式（ＩＩＩ）： を有する多量体ＡｐｏＡ−１アゴニストまたはその薬学的に許容される塩： 上記式中、 各ＨＨは独立して構造式（Ｉ）のコアペプチド、本明細書中に記載するその類
    似体、変異型、末端切断型、内部欠失型または伸長型であり、 各ＬＬは独立して二官能性リンカーであり、 各ｍは独立して０〜１の整数であり、 各ｎは独立して０〜８の整数であり、 Ｎ_ｙａおよびＮ_ｙｂはそれぞれが独立して多官能性結合成分であり、ここでｙ
    _ａおよびｙ_ｂはそれぞれＮ_ｙａおよびＮ_ｙｂ上の官能基の数を表し、 ｙ_ａおよびｙ_ｂはそれぞれが独立して３〜８の整数であり、 ｐは０〜７の整数であり、そして 各「−」は独立して共有結合を表す。
18. 【請求項１８】 ヒトＡｐｏＡ−１と比べて少なくとも約３８％のＬＣＡＴ
    活性化活性を示し、次の構造式（ＩＶ）または（Ｖ）： を有する多量体ＡｐｏＡ−１アゴニストまたはその薬学的に許容される塩： 上記式中、 各ＨＨは独立して請求項１記載のペプチドまたはペプチド類似体であり、 各ＬＬは独立して二官能性リンカーであり、 各ｎは独立して０〜１の整数であり、 各ｍは独立して０〜８の整数であり、 Ｒ_１は−ＯＲまたは−ＮＲＲであり、そして 各Ｒは独立して−Ｈ、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_６）アルケニル、
    （Ｃ_１−Ｃ_６）アルキニル、（Ｃ_５−Ｃ_２０）アリール、（Ｃ_６−Ｃ_２６）アル
    カリール、５〜２０員のヘテロアリール、６〜２６員のアルクヘテロアリールで
    ある。
19. 【請求項１９】 二官能性リンカーが開裂可能である、請求項１６、１７ま
    たは１８記載の多量体ＡｐｏＡ−１アゴニスト。
20. 【請求項２０】 ｎが０である、請求項１６、１７または１８記載の多量体
    ＡｐｏＡ−１アゴニスト。
21. 【請求項２１】 ｍが０である、請求項２０記載の多量体ＡｐｏＡ−１アゴ
    ニスト。
22. 【請求項２２】 各ＨＨが独立して請求項１３記載のペプチドである、請求
    項１６、１７または１８記載の多量体ＡｐｏＡ−１アゴニスト。
23. 【請求項２３】 各ＨＨが独立して請求項１４記載のペプチドである、請求
    項１６、１７または１８記載の多量体ＡｐｏＡ−１アゴニスト。
24. 【請求項２４】 各ＨＨが独立して請求項１５記載のペプチドである、請求
    項１６、１７または１８記載の多量体ＡｐｏＡ−１アゴニスト。
25. 【請求項２５】 ＡｐｏＡ−１アゴニストおよび脂質からなるＡｐｏＡ−１
    アゴニスト−脂質複合体であって、ＡｐｏＡ−１アゴニストが請求項１記載のペ
    プチドまたはペプチド類似体、請求項１６記載の多量体ＡｐｏＡ−１アゴニスト
    、請求項１７記載の多量体ＡｐｏＡ−１アゴニスト、または請求項１８記載の多
    量体ＡｐｏＡ−１アゴニストである、上記複合体。
26. 【請求項２６】 ＡｐｏＡ−１アゴニストが請求項１２記載のペプチドであ
    る、請求項２５記載のＡｐｏＡ−１アゴニスト−脂質複合体。
27. 【請求項２７】 ＡｐｏＡ−１アゴニストが請求項１３記載のペプチドであ
    る、請求項２５記載のＡｐｏＡ−１アゴニスト−脂質複合体。
28. 【請求項２８】 ＡｐｏＡ−１アゴニストが請求項１４記載のペプチドであ
    る、請求項２５記載のＡｐｏＡ−１アゴニスト−脂質複合体。
29. 【請求項２９】 ＡｐｏＡ−１アゴニストが請求項１５記載のペプチドであ
    る、請求項２５記載のＡｐｏＡ−１アゴニスト−脂質複合体。
30. 【請求項３０】 脂質がスフィンゴミエリンである、請求項２５記載のＡｐ
    ｏＡ−１アゴニスト−脂質複合体。
31. 【請求項３１】 凍結乾燥粉末の形状である、請求項２５記載のＡｐｏＡ−
    １アゴニスト−脂質複合体。
32. 【請求項３２】 溶液の形状である、請求項２５記載のＡｐｏＡ−１アゴニ
    スト−脂質複合体。
33. 【請求項３３】 ＡｐｏＡ−１アゴニストおよび製薬上許容される担体、賦
    形剤または希釈剤を含有する医薬組成物であって、ＡｐｏＡ−１アゴニストが請
    求項１記載のペプチドまたはペプチド類似体、請求項１６記載の多量体ＡｐｏＡ
    −１アゴニスト、請求項１７記載の多量体ＡｐｏＡ−１アゴニスト、または請求
    項１８記載の多量体ＡｐｏＡ−１アゴニストである、上記医薬組成物。
34. 【請求項３４】 ＡｐｏＡ−１アゴニストが請求項１２記載のペプチドであ
    る、請求項３３記載の医薬組成物。
35. 【請求項３５】 ＡｐｏＡ−１アゴニストが請求項１３記載のペプチドであ
    る、請求項３３記載の医薬組成物。
36. 【請求項３６】 ＡｐｏＡ−１アゴニストが請求項１４記載のペプチドであ
    る、請求項３３記載の医薬組成物。
37. 【請求項３７】 ＡｐｏＡ−１アゴニストが請求項１５記載のペプチドであ
    る、請求項３３記載の医薬組成物。
38. 【請求項３８】 ＡｐｏＡ−１アゴニストがＡｐｏＡ−１アゴニストと脂質
    からなるＡｐｏＡ−１アゴニスト−脂質複合体の形をしている、請求項３３、３
    ４、３５、３６または３７記載の医薬組成物。
39. 【請求項３９】 ＡｐｏＡ−１アゴニスト−脂質複合体が凍結乾燥粉末の形
    状をしている、請求項３８記載の医薬組成物。
40. 【請求項４０】 異常脂肪血と関連した障害をもつ被験体に有効量の請求項
    １記載のＡｐｏＡ−１アゴニストを投与することを含んでなる、該被験体の治療
    方法。
41. 【請求項４１】 ＡｐｏＡ−１アゴニストが医薬組成物の形をしており、該
    組成物がＡｐｏＡ−１アゴニストと製薬上許容される担体、賦形剤または希釈剤
    を含有する、請求項４０記載の方法。
42. 【請求項４２】 ＡｐｏＡ−１アゴニストがＡｐｏＡ−１アゴニストと脂質
    からなるＡｐｏＡ−１アゴニスト−脂質複合体の形をしている、請求項４０記載
    の方法。
43. 【請求項４３】 異常脂肪血と関連した障害が高コレステロール血症である
    、請求項４０記載の方法。
44. 【請求項４４】 異常脂肪血と関連した障害が心血管性の疾病である、請求
    項４０記載の方法。
45. 【請求項４５】 異常脂肪血と関連した障害がアテローム硬化症である、請
    求項４０記載の方法。
46. 【請求項４６】 異常脂肪血と関連した障害が再狭窄である、請求項４０記
    載の方法。
47. 【請求項４７】 異常脂肪血と関連した障害がＨＤＬまたはＡｐｏＡ−１不
    全症である、請求項４０記載の方法。
48. 【請求項４８】 異常脂肪血と関連した障害が高トリグリセリド血症である
    、請求項４０記載の方法。
49. 【請求項４９】 異常脂肪血と関連した障害が代謝症候群である、請求項４
    ０記載の方法。
50. 【請求項５０】 敗血症性ショックの被験体に有効量の請求項１記載のＡｐ
    ｏＡ−１アゴニストを投与することを含んでなる、該被験体の治療方法。
51. 【請求項５１】 前記被験体がヒトである、請求項４０または５０記載の方
    法。
52. 【請求項５２】 前記被験体に約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇの
    ＡｐｏＡ−１アゴニストを投与する、請求項４０または５０記載の方法。