JP2003523999A5

JP2003523999A5 -

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Publication number: JP2003523999A5
Application number: JP2001561737A
Authority: JP
Filing date: 2001-02-23
Publication date: 2008-04-17

Description

【特許請求の範囲】
【請求項１】一般式
【化１】

（Ｉ’’）
［式中、
Ｒは、基
【化２】

である；
ｍは、０、１、２又は３である；
それぞれのＲ^１は、独立的に、ハロゲン、シアノ、ニトロ、カルボキシル、ヒドロキシル、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシカルボニル、Ｃ_１−Ｃ_６ハロアルキル、Ｃ_１−Ｃ_６ハロアルコキシ、−ＮＲ^９Ｒ^１０、Ｃ_３−Ｃ_６シクロアルキルアミノ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキルチオ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキルカルボニル、Ｃ_１−Ｃ_６アルキルカルボニルアミノ、スルフォンアミド、Ｃ_１−Ｃ_６アルキルスルフォニル、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１１Ｒ^１２、−ＮＲ^１３Ｃ（Ｏ）−（ＮＨ）_ｐＲ^１４、フェニル、又はカルボキシル又はＣ_１−Ｃ_６アルコキシカルボニルによって所望により置換されるＣ_１−Ｃ_６アルキルである；
ｐは、０又は１である；
Ｘは、酸素又は硫黄原子又はＣＨ_２、ＣＨ（ＣＨ_３）、ＯＣＨ_２、ＣＨ_２Ｏ、ＣＨ_２ＮＨ、ＮＨ又はカルボニル基であり、そしてＹは、窒素原子又はＣＨ又はＣ（ＯＨ）基である。ただし、Ｘが、酸素又は硫黄原子又はＣＨ_２Ｏ、ＣＨ_２ＮＨ又はＮＨ基であるとき、Ｙは、ＣＨ基である；
Ｚ^１は、結合又は基（ＣＨ_２）_ｑであり、ここでｑは、１又は２である；
Ｚ^２は、結合又は基ＣＨ_２である。ただし、Ｚ^１及びＺ^２は、両方同時には結合ではない；
Ｑは、酸素又は硫黄原子又は基ＣＨ_２又はＮＨである；
Ｒ^２は、基
【化３】

である；
ｎは、０、１又は２である；
それぞれのＲ^３は独立的に、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシカルボニル、−ＣＨ_２ＯＨ又はカルボキシル基である；
Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６及びＲ^７はそれぞれ独立的に水素原子又はＣ_１−Ｃ_６アルキル基であり、又はＲ^４、Ｒ^５、Ｒ^６及びＲ^７は一体となってそれらが結合されている２炭素原子を連結するＣ_１−Ｃ_４アルキレン鎖を表し、４−ないし７−員飽和炭素環を形成し、又はＲ^５、Ｒ^６及びＲ^７はそれぞれ水素原子であり、そしてＲ^４及びＲ^８はそれらが結合されている炭素原子と一体となって５−ないし６−員飽和炭素環を形成する；
Ｒ^８は、水素原子、Ｃ_１−Ｃ_６アルキル基であるか、又は前に定義したようにＲ^４に連結されている；
Ｒ^９及びＲ^１０はそれぞれ独立的に水素原子又はＣ_１−Ｃ_６アルキル基であり、又はＲ^９及びＲ^１０はそれらが結合されている窒素原子と一体となって４−ないし７−員飽和ヘテロ環を形成する；
Ｒ^１１及びＲ^１２はそれぞれ独立的に水素原子又はＣ_１−Ｃ_６アルコキシカルボニルによって所望により置換されるＣ_１−Ｃ_６アルキル基である；
Ｒ^１３は、水素原子又はＣ_１−Ｃ_６アルキル基であり；そして
Ｒ^１４は、水素原子、又はカルボキシル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ又はＣ_１−Ｃ_６アルコキシカルボニルによって所望により置換されるＣ_１−Ｃ_６アルキル基である；
ただし、Ｘが酸素原子又は基ＣＨ_２であり、Ｙが、ＣＨであり、Ｚ^１及びＺ^２がそれぞれ基ＣＨ_２であり、そしてＱが、酸素原子であるとき、Ｒ ^２は、非置換インドリル基ではない］
又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物。
【請求項２】Ｘが酸素原子又はＣＨ_２、ＯＣＨ_２、ＣＨ_２Ｏ、ＮＨ又はカルボニル基である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】Ｙが窒素原子又はＣＨ基である、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項４】Ｑが酸素原子である、請求項１ないし３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】Ｒ^２が下記式の基である、請求項１ないし４のいずれかに記載の化合物。
【化４】

【請求項６】請求項１に定義される、式 (I'')の化合物、又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物であって:
１−［３−（３，４−ジクロロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−３−（１Ｈ−インドール−７−イルオキシ）−プロパン−２−オール、
１−（７−｛３−［３−（３，４−ジクロロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ｝−インドール−１−イル）−エタノン、
１−［３−（４−クロロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−３−（１Ｈ−インドール−７−イルオキシ）−プロパン−２−オール、
１−（７−｛３−［３−（４−クロロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ｝−インドール−１−イル）−エタノン、
１−［３−（４−フルオロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−３−（１Ｈ−インドール−７−イルオキシ）−プロパン−２−オール、
１−（７−｛３−［３−（４−フルオロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ｝−インドール−１−イル）−エタノン、
１−［３−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−３−（１Ｈ−インドール−７−イルオキシ）−プロパン−２−オール、
１−（７−｛３−［３−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ｝−インドール−１−イル）−エタノン、
１−（７−｛３−［４−（３，４−ジクロロ−フェノキシ）−ピペリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ｝−インドール−１−イル）−エタノン、
１−（７−｛３−［４−（４−クロロ−フェノキシ）−ピペリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ｝−インドール−１−イル）−エタノン、
Ｎ−（３−｛３−［３−（３，４−ジクロロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ｝−ナフタレン−２−イル）−アセトアミド、及び
Ｎ−（３−｛３−［３−（４−クロロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ｝−ナフタレン−２−イル）−アセトアミド、
から選択される、化合物。
【請求項７】請求項１に定義の、式（Ｉ’’）の化合物の製造方法であって、
（ａ）一般式
Ｒ−Ｈ（ＩＩ’’）
の化合物であって、式中、Ｒは、（Ｉ’’）の定義と同様である、化合物を、一般式
【化５】

（ＩＩＩ’’）
の化合物であって、式中、Ｑ、Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７及びＲ^８は式（Ｉ’’）での定義と同様である化合物と反応させること；又は
（ｂ）一般式
【化６】

（ＩＶ’’）
の化合物であって、式中、Ｒ、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７及びＲ^８は式（Ｉ’’）での定義と同様である、化合物を、一般式
Ｌ^１−Ｑ−Ｒ^２（Ｖ’’）
の化合物であって、式中、Ｌ^１は、水素原子又は活性化基であり、そしてＱ及びＲ^２は式（Ｉ’’）での定義と同様である、化合物と反応させること；
を含み、そして所望によりその後該式（Ｉ）の化合物をさらなる式（Ｉ’’）の化合物に変換し；そして要すれば、式（Ｉ’’）の化合物の薬学的に許容される塩又は溶媒和物を形成させる、方法。
【請求項８】請求項１ないし６のいずれかに記載の、式（Ｉ’’）の化合物、又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物を、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤又は担体と組み合わせて含む、医薬組成物。
【請求項９】請求項１ないし６のいずれかに記載の、式（Ｉ’’）の化合物、又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物を、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤又は担体と混合することを含む、請求項８に記載の医薬組成物の製造方法。
【請求項１０】治療における使用のための、請求項１ないし６のいずれかに記載の、式（Ｉ’’）の化合物、又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物。
【請求項１１】治療における使用のための医薬の製造における請求項１ないし６のいずれかに記載の、式（Ｉ’’）の化合物、又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物の使用。
【請求項１２】ケモカインレセプター活性の調節が有益である、ヒトの疾患又は状態の処置のための医薬の製造における、請求項１ないし６のいずれかに記載の、式（Ｉ’’）の化合物、又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物の使用。
【請求項１３】リウマチ様関節炎の処置における使用のための医薬の製造における、請求項１ないし６のいずれかに記載の、式（Ｉ’’）の化合物、又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物の使用。
【請求項１４】慢性閉塞性肺疾患の処置における使用のための医薬の製造における、請求項１ないし６のいずれかに記載の、式（Ｉ’’）の化合物、又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物の使用。
【請求項１５】喘息の処置における使用のための医薬の製造における、請求項１ないし６のいずれかに記載の、式（Ｉ’’）の化合物、又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物の使用。
【請求項１６】多発性硬化症の処置における使用のための医薬の製造における、請求項１ないし６のいずれかに記載の、式（Ｉ’’）の化合物、又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物の使用。
【請求項１７】炎症性疾患に罹患している、又はそのリスクのある患者における炎症性疾患を処置する方法であって、当該患者に、請求項１ないし６のいずれかに記載の、治療有効量の式（Ｉ’’）の化合物、又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物を投与することを含む、方法。
【請求項１８】気道疾患に罹患している、又はそのリスクのある患者における気道疾患を処置する方法であって、当該患者に、請求項１ないし６のいずれかに記載の、治療有効量の式（Ｉ’’）の化合物、又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物を投与することを含む、方法。

ＵＳ５７８９４０２はある種のインドール誘導体であってセロトニン作用神経系の障害によって引き起こされ、又は影響される疾患、特にセロトニン１_Ａレセプターに関連するものの処置のために有用であるといわれるもの及びセロトニンの取り込みに関連するものを記載している。

ケモカインは、喘息及びアレルギー性疾患、及び自己免疫性病理、例えば、リウマチ様関節炎及びアテローム性動脈硬化症を含む、種々の疾患及び障害の免疫性及び炎症性応答において重要な役割を演ずる。これらの小分泌分子は、保存４システインモチーフによって特徴付けられる８−１４ｋＤａタンパク質の増大している（ｇｒｏｗｉｎｇ）スーパーファミリーである。ケモカインスーパーファミリーは特徴的な構造的モチーフを示す２つの主要なグループ、Ｃｙｓ−Ｘ−Ｃｙｓ（Ｃ−Ｘ−Ｃ）及びＣｙｓ−Ｃｙｓ（Ｃ−Ｃ）ファミリーに分割することができる。これらは、システイン残基の隣接するＮＨ対の間の単一アミノ酸挿入、及び配列類似性に基づいて区別される。

Ｃ−Ｘ−Ｃケモカインは、幾つかの有力な化学誘引物質及び好中球のアクチベーター、例えば、インターロイキン−８（ＩＬ−８）及び好中球活性化ペプチド２（ＮＡＰ−２）を含む。
Ｃ−Ｃケモカインは、好中球のではなく、単球及びリンパ球の有力な化学誘引物質、例えば、ヒト単球ケモタキシスタンパク質１−３（ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２及びＭＣＰ−３）、ＰＡＮＴＥＳ（Regulated on Activation, Normal T Expressed and Secreted）、エオタキシン、及びマクロファージ炎症性タンパク質１α及び１β（ＭＩＰ―１α及びＭＩＰ−１β）を含む。

ケモカインの作用は、Ｇタンパク質に結合したレセプターであって、とりわけＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ２Ａ、ＣＣＲ２Ｂ、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３及びＣＸＣＲ４と呼ばれるもののサブファミリーによって介在されることが、研究により実証された。これらのレセプターは、薬物開発のためのよい標的を表す。なぜなら、これらのレセプターを調節する薬剤は、前記のような障害及び疾患の処置において有用であるからである。

ｐは、０又は１である；
Ｘは、酸素又は硫黄原子又はＣＨ_２、ＣＨ（ＣＨ_３）、ＯＣＨ_２、ＣＨ_２Ｏ、ＣＨ_２ＮＨ、ＮＨ又はカルボニル基であり、そしてＹは、窒素原子又はＣＨ又はＣ（ＯＨ）基である。ただし、Ｘが、酸素又は硫黄原子又はＣＨ_２Ｏ、ＣＨ_２ＮＨ又はＮＨ基であるとき、Ｙは、ＣＨ基である；
Ｚ^１は、結合又は基（ＣＨ_２）_ｑであり、ここでｑは、１又は２である；
Ｚ^２は、結合又は基ＣＨ_２である。ただし、Ｚ^１及びＺ^２は、両方同時には結合ではない；
Ｑは、酸素又は硫黄原子又は基ＣＨ_２又はＮＨである；

Ｒ^２４は、水素原子、又はカルボキシル、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ又はＣ_１−Ｃ_６アルコキシカルボニルによって所望により置換されるＣ_１−Ｃ_６アルキル基である。
ただし、Ｘが、酸素原子又は基ＣＨ_２であり、Ｙが、ＣＨであり、Ｚ^１及びＺ^２がそれぞれ基ＣＨ_２であり、そしてＱが、酸素原子であるとき、Ｒ ^２は、非置換インドリル基ではない、化合物；
又はその薬学的に許容される塩又は溶媒和物を提供する。
本明細書の文脈では、アルキル置換基又は置換基におけるアルキル部分は直鎖又は分枝鎖であり得る。

Ｘは、酸素又は硫黄原子又はＣＨ_２、ＣＨ（ＣＨ_３）、ＯＣＨ_２、ＣＨ_２Ｏ、ＣＨ_２ＮＨ、ＮＨ又はカルボニル基であり、そしてＹは、窒素原子又はＣＨ又はＣ（ＯＨ）基である。ただし、Ｘが、酸素又は硫黄原子又はＣＨ_２Ｏ、ＣＨ_２ＮＨ又はＮＨ基であるとき、Ｙは、ＣＨ基である；
Ｚ^１は、結合又は基（ＣＨ_２）_ｑであり、ここでｑは、１又は２である；
Ｚ^２は、結合又は基ＣＨ_２である。ただし、Ｚ^１及びＺ^２が、同時に結合であることはない；
Ｑは、酸素又は硫黄原子又は基ＣＨ_２又はＮＨである；
Ｒ^２は、基；

である；

最も好ましくは、それぞれのＲ^１は独立的に、ハロゲン（特に塩素又はフッ素）、シアノ、ニトロ、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ（特にメトキシ）、Ｃ_１−Ｃ_６アルキルカルボニル（特にメチルカルボニル）又はＣ_１−Ｃ_６アルキルカルボニルアミノ（特にメチルカルボニルアミノ）である。
好ましくはＸは、酸素原子又はＣＨ_２、ＯＣＨ_２、ＣＨ_２Ｏ、ＮＨ又はカルボニル基である。
好ましくはＹは、窒素原子又はＣＨ基である。

Ｒ^２３は、水素原子又はＣ_１−Ｃ_６、好ましくはＣ_１−Ｃ_４、アルキル基（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル又はｎ−ヘキシル）である。
Ｒ^２４は、水素原子、又はカルボキシル、Ｃ_１−Ｃ_６、好ましくはＣ_１−Ｃ_４、アルコキシ又はＣ_１−Ｃ_６、好ましくはＣ_１−Ｃ_４、アルコキシカルボニルによって所望により置換されるＣ_１−Ｃ_６、好ましくはＣ_１−Ｃ_４、アルキル基（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル又はｎ−ヘキシル）である。

なおさらなる側面では、本発明は、前記の式（Ｉ’’）の製造方法を提供し、当該方法は
（ａ）一般式
Ｒ−Ｈ（ＩＩ’’）
の化合物であって、式中、Ｒは、式（Ｉ’’）での定義と同じ意味である、化合物を、一般式

（ＩＩＩ’’）
の化合物であって、式中、Ｑ、Ｒ^２、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７及びＲ^８は式（Ｉ’’）での定義と同じ意味である、化合物と反応させること；又は

本発明の方法は、通常は、溶媒、例えば、有機溶媒、例えば、アルコール（例えば、メタノール又はエタノール）、炭化水素（例えば、トルエン）又はアセトニトリル中で、例えば１５℃以上、例えば２０ないし１２０℃の範囲の温度で実施し得る。

本発明の製造方法において、出発物質又は中間体化合物中のある種の官能基、例えば、ヒドロキシル又はアミノ基が、保護基によって保護される必要があり得ることが当業者によって認識される。こうして、式（Ｉ）、（Ｉ’）、（Ｉ’’）又は（Ｉ’’’）の化合物の製造は、適当なステージで１又は２以上の保護基の除去を含み得る。

前記の式（Ｉ）、（Ｉ’）、（Ｉ’’）又は（Ｉ’’’）の化合物を、その薬学的に許容される塩又は溶媒和物、好ましくは酸付加塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、燐酸塩、酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸、酒石酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、メタンスルフォン酸塩、又はｐ−トルエンスルフォン酸塩に変換し得る。

式（Ｉ）、（Ｉ’）、（Ｉ’’）又は（Ｉ’’’）の化合物は、医薬としての活性、特に、ケモカインレセプター（特にＭＩＰ−１αケモカインレセプター）の調節剤としての活性を有し、そして自己免疫性、炎症性、増殖性及び過増殖性疾患及び自己免疫介在疾患であって移植臓器又は組織の拒絶及び後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を含むものの処置に有用であり得る。

これらの状態の例は以下の通りである：
（１）（気道）気道疾患であって慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、例えば、付加逆性ＣＯＰＤを含むもの；喘息、例えば、気管支性、アレルギー性、内因性、外因性及び塵埃喘息、特に慢性又は常習性喘息（例えば、遅発性喘息及び気道過敏感）；気管支炎；急性、アレルギー性、萎縮性鼻炎、慢性鼻炎であって乾酪性鼻炎(rhinitis caseosa)、肥厚性鼻炎、化膿性鼻炎、乾燥性鼻炎及び薬物性鼻炎を含むもの；膜性鼻炎であってクループ性、フィブリン性及び偽膜性鼻炎を含むもの及び腺病性鼻炎；季節性鼻炎であって神経性鼻炎（hay fever）及び血管神経性鼻炎を含むもの；サルコイドーシス、農夫肺及び関連疾患、肺繊維症及び特発性間質性肺炎；

（２）（骨及び関節）リウマチ様関節炎、血清反応陰性脊椎関節症（強直性脊椎炎、乾癬性関節炎及びライター病を含む）、ベーチェット病、シェーグレン症候群及び全身性硬化症；

（５）（他の組織及び全身性疾患）多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、紅斑性狼瘡、全身性狼瘡、エリトマトーデス、橋本甲状腺炎、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ネフローゼ症候群、好中球性筋膜炎(eosinopohilia fascitis)、超ＩｇＥ症候群、らい腫型ハンセン病、セザリー症候群及び特発性血小板減少性紫斑病；

（６）（移植片拒絶）例えば、腎臓、心臓、肝臓、肺、骨髄、皮膚及び角膜の移植後の急性及び慢性拒絶；及び慢性移植片対宿主疾患；
（７）癌、特に非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）及び扁平上皮乳頭腫肉腫；

（８）血管形成が上昇したＣＸＣＲ２ケモカインレベルと関連する疾患（例えばＮＳＣＬＣ）；及び
（９）嚢胞性線維症、卒中、心臓、脳、末梢肢の再還流障害及び敗血症。

前記の治療的使用のための、投与すべき用量は、もちろん、使用される化合物、投与の様式、望まれる処置及び適応される障害で変化する。式（Ｉ）、（Ｉ’）、（Ｉ’’）又は（Ｉ’’’）の化合物の１日用量は０．００１ｍｇ／ｋｇないし３０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。

式（Ｉ）、（Ｉ’）、（Ｉ’’）又は（Ｉ’’’）の化合物及び薬学的に許容されるその塩及び溶媒和物を、それ自体投与し得るが、式（Ｉ）、（Ｉ’）、（Ｉ’’）又は（Ｉ’’’）の化合物／塩／溶媒和物（活性成分）を薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤又は担体と組み合わせている医薬組成物の形態で一般に投与する。投与の様式に依存して、好ましくは該医薬組成物は０．０５ないし９９％／ｗ(重量％)、そしてなおより好ましくは０．０５ないし８０％ｗ、なおより好ましくは０．１０ないし７０％ｗ、そしてなおより好ましくは０．１０ないし５０％ｗ、の活性成分を含み、すべて総組成物に基づく重量によるパーセンテージである。

該医薬組成物を、溶液、懸濁、ヘプタフルオロアルカンエアロゾール及び乾燥粉末製剤の形態で、局所的に（例えば肺及び／又は気道に又は皮膚に）；又は全身的に、例えばタブレット、カプセル、シロップ、粉末又は顆粒の形態で経口投与によって、又は溶液又は懸濁液の形態で非経腸投与によって、又は皮下投与によって又は坐薬の形態で直腸投与によって又は経皮的に投与し得る。

実施例１
Ｎ−（２−｛３−［３Ｒ，Ｓ−（４−クロロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−２Ｒ，Ｓ−ヒドロキシ−プロポキシ｝−フェニル）−アセトアミドヒドロクロリド
（ｉ）３−ヒドロキシ−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ピロリジン−３−オール（１６．２５ｇ、１８６．５ｍｍｏｌ）及びジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカルボネート（４０．７ｇ、１８６．５ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の溶液を窒素下で終夜撹拌した。減圧濃縮及びシリカのフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘプタン７：３）の精製によって、サブタイトル化合物の３１．９ｇ（９１％）を得た。
¹H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 4.87 (d, 1H, J = 3.4 Hz), 4.21 (bs, 1H), 3.31-3.22
(m, 3H), 3.10 (d, 1H, J = 11.5 Hz), 1.83 (m, 1H), 1.72 (m, 1H), 1.39 (s, 9H).
APCI-MS: m/z 132 [MH⁺-56]

（ｉｉ）３−（４−クロロ−フェノキシ）−ピロリジン
３−ヒドロキシ−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔブチルエステル（２．１ｇ、９．９ｍｍｏｌ）及びトリフェニルフォスフィン（２．５９ｇ、９．９ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（３５ｍｌ）中に窒素下で溶解した。溶液を０℃に冷却し、そして乾燥ＴＨＦ（１０ｍｌ）中に溶解した４−クロロフェノール（１．２８ｇ、９．９ｍｍｏｌ）、次いでジエチルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ）（１．５５ｍｌ、９．９ｍｍｏｌ）を添加した。１５分後、アイスバスを除去し、そして反応物を終夜撹拌した。反応混合物を減圧で濃縮し、そして残渣をエーテルと攪拌した。固体酸化トリフェニルホスフィンを濾取した。溶液を水酸化ナトリウム（１Ｍ）で３回洗浄し、そして濃縮した。ＢＯＣ保護生成物を、溶離剤としてＥｔＯＡｃ／ヘプタンを使用するシリカのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。それをジクロロメタン（３５ｍｌ）及びトリフルオロ酢酸（１７ｍｌ）中に溶解した。反応混合物を室温で終夜撹拌し、濃縮し、そしてシリカ（ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ_３：ＮＨ_３、１００：１００：１）のフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、サブタイトル化合物を得た（１．７２ｇ、８８％）。
¹H-NMR (400MHz, DMSO-d6):δ 7.30 (d, 2H, J = 8.9 Hz), 6.91 (d, 2H, J = 8.9 Hz), 4.82 (m, 1H), 3.03 (dd, 1H, J = 12.3, 5.4 Hz), 2.82 (m, 3H), 1.99 (m, 1H), 1.72 (m, 1H).
APCI-MS: m/z 198 [MH⁺]

（ｉｉｉ）Ｎ−（２−｛３−［３Ｒ，Ｓ−（４−クロロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−２Ｒ，Ｓ−ヒドロキシ−プロポキシ｝−フェニル）−アセトアミドヒドロクロリド
３−（４−クロロ−フェノキシ）−ピロリジン（０．０５９ｇ、０．２９８ｍｍｏｌ）及びＮ−アセチル−２−（２，３−エポキシプロポキシ）アニリン（０．０６２ｇ、０．２９９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１．５ｍｌ、９９．５％）中の溶液を、シールしたバイアル中で７５℃で３時間撹拌した。溶媒を反応完了後に蒸発させそして残渣をシリカ（ＣＨ_２Ｃｌ_２：ＭｅＯＨ，９８：２ないし９７：３）で精製し、タイトル化合物の遊離アミンの８８ｍｇを得た。該アミンをＭｅＯＨ：水１：１に溶解し、そして溶液を２Ｍ塩酸で酸性化した。メタノールを蒸発させ、残りの水溶液を凍結乾燥し、９２ｍｇ（７０％）のタイトル化合物を白色固体として得た。
APCI-MS: m/z 405.2, 407.2 [MH⁺,アイソトープパターン]

（ｉｉ）２−｛３−［４−（４−フルオロ−フェノキシ）−ピペリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ｝−安息香酸メチルエステル
を実施例１、ステップ（ｉｉ）に記載の方法にしたがって製造した。遊離アミンとして単離した。
¹H-NMR: (400 MHz, CDCl₃):δ 7.81 (1H, dd, J 8.1 , 1.8 Hz); 7.46 (1H, dt, J 7.8 , 1.7 Hz); 7.03-6.91 (4H, m); 6.86-6.82 (2H, m); 4.28-4.10 (3H, m); 4.08-4.00 (1H, m); 3.88 (3H, s); 2.92-2-84 (1H, m); 2.83-2.76 (1H, m); 2.66-2.53 (2H, m); 2.46 (1H, t, J 10.2 Hz); 2.36 (1H, t, J 10.2 Hz); 2.02-1.92 (2H, m); 1.86-1.74 (2H, m); 1.63 (1H, bs)
APCI-MS: m/z 404.2 [MH⁺]

２−（クロロカルボニル）フェニルアセテート（２０ｍｍｏｌ、３．９６ｇ）のトルエン（５０ｍｌ）中の溶液に、Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（２２ｍｍｏｌ、２．８４ｇ）及び２−メチルアラニン（２２ｍｍｏｌ、２．２７ｇ）を添加した。室温で終夜反応混合物を撹拌した後、混合物を２５０ｍｌのトルエンで希釈し、そして１．８％のＨＣｌ水溶液（２５０ｍｌ）及び飽和ＮａＣｌ水溶液（２５０ｍｌ）で洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。残渣をＭｅＯＨ（５０ｍｌ）中に溶解し、そして濃Ｈ_２ＳＯ_４の３滴を添加した。混合物を２時間還流し、減圧で濃縮した。残渣を２５０ｍｌのＥｔＯＡｃに溶解し、そして飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２５０ｍｌ）及び飽和ＮａＣｌ水溶液（２５０ｍｌ）で洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、そして減圧で濃縮した。得られた粗産物をさらなる精製なくして使用した。
APCI-MS m/z: 238 [MH+]

（ｉｉ）メチル２−メチル−２−｛［２−（２−オキシラニルメトキシ）ベンゾイル］アミノ｝プロパノエート
メチル２−[（２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ]−２−メチルプロパノエート、Ｋ_２ＣＯ_３（２０ｍｍｏｌ、２．６８ｇ）及び２−（クロロメチル）オキシラン（２２ｍｍｏｌ、２.０３ｇ）のアセトニトリル（６０ｍｌ）中の溶液を還流温度で終夜撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして１．８％のＨＣｌ水溶液（２５０ｍｌ）及び飽和ＮａＣｌ水溶液（２５０ｍｌ）で洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ _４で乾燥し、減圧で濃縮した。残渣をＣ１８−カラム（Ｈ_２Ｏ：ＣＨ_３ＣＮ、０．１ＭＮＨ_４ＯＡｃバッファー、１０％ないし９５％勾配のＣＨ_３ＣＮ）で精製し、サブタイトル化合物を得た（２４４ｍｇ、５％収率、２ステップ）。
APCI-MS m/z: 294 [MH+]
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) :δ 8.40(s, 1H), 8.14 (dd, 1H), 7,41 (dt, 1H), 7.07 (t, 1H), 6.90 (d, 1H), 4,44 (dd, 1H), 4.07 (dd, 1H), 3.74 (s, 3H) , 3.45 (m, 1H) , 2.94 (dd, 1H), 2.84 (dd, 1H), 1.64 (d, 6H)

（ｉｉｉ）２−（２−｛３−［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−ピペリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ｝−ベンゾイルアミノ）−２−メチル−プロピオン酸メチルエステル
４−（３，４−ジフルオロフェノキシ）ピペリジン（０．０３ｍｌ、０．５Ｍ）のトルエン溶液をメチル２−メチル−２−｛［２−（２−オキシラニルメトキシ）ベンゾイル］アミノ｝−プロパノエート（０．０３ｍｌ、０．５Ｍ）と混合した。混合物を０．２０ｍｌのトルエン及び０．０５ｍｌのメタノールで希釈した。反応混合物をシールしたバイアルで１００℃で終夜攪拌した。生成物を減圧で濃縮し、そして何らの精製なくして使用した。
APCI-MS m/z: 507 [MH+]
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) :δ 8.13(s, 1H) , 7.90 (dd, 1H), 7.33 (dt, 1H), 7.07-6.96
(m, 2H), 6.89 (d, 1H), 6.73-6.68 (m, 1H), 6.58-6.55 (m, 1H), 4.77-4.72 (m, 1H), 4.49 (bs, 1H), 4.20-4.13 (m, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.58-3.44 (m, 2H), 3.39-3.26 (m, 4H),
2.54-2.40 (m, 2H), 2.13-2.04 (m, 2H), 1.60 (d, 6H)

実施例８
Ｎ−［２−（｛（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）^＊−３−［４−（３，４−ジクロロフェノキシ）−１−ピペリジニル）−２−ヒドロキシシクロペンチル｝オキシ）フェニル］アセトアミド及び
Ｎ−［２−（｛（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ）^＊−３−［４−（３，４−ジクロロフェノキシ）−１−ピペリジニル）−２−ヒドロキシシクロペンチル｝オキシ）フェニル］アセトアミド
（ｉ）Ｎ−［２−（２−シクロペンテン−１−イルオキシ）フェニル］アセトアミド
水酸化ナトリウムの（パラフィン中の６０ｐｒｏｃ；２９７ｍｇ、７．４３ｍｍｏｌ、１．１当量）のＤＭＦ（３ｍｌ）中の懸濁液に、２−アセトアミド−フェノール（１．０２ｇ、６．７５ｍｍｏｌ、１．０当量）のＤＭＦ（１２ｍｌ）中の溶液を０℃で滴下した。３０分後、クロロ−２−シクロペンテン（R. Moffett, Oeganic Synthesis, Wiley: New York 1963, Collect. VolIV,p238-241)（７６２ｍｌ、７．４３ｍｍｏｌ、１．１当量）をシリンジによって添加し、そして撹拌を終夜継続した。水性のワークアップ次いでシリカゲル（ヘプタン／酢酸エチル、２：１から１：１）のフラッシュクロマトグラフィーによって、サブタイトル化合物の９９２ｍｇ（６８％）を暗黄色オイルとして得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃):δ 8.35 (1H, d, J 8.0Hz), 7.73 (1H, bs), 7.00 (1H, td, J 7.9, 1.5Hz), 6.90-6.95 (2H, m), 6.17 (1H, m), 5.95 (1H, m), 5.36 (1H, d, J 5.9Hz), 2.59
(1H, m), 2.38 (2H, m), 2.17 (3H, s), 1.97 (1H, m).
MS-ESI+ : m/z 218.1 [MH+].

（ｉｉ）Ｎ−｛２−（６−オキサビシクロ［３．１．０］ヘキサ−２−イルオキシ）フェニル｝アセトアミド
Ｎ−［２−（２−シクロペンテン−１−イルオキシ）フェニル］アセトアミド（１４９ｍｇ、６８６μｍｏｌ、１．０当量）のジクロロメタン（４ｍｌ）中のアイスバス冷却溶液に、ｍ−クロロ過安息香酸（８５ｐｒｏｃ；１４６μｍｏｌ、１．１当量）を添加した。環境温度にゆっくりと暖めながら撹拌後、反応混合物をｔｅｒｔブチル（メチル）エステルによって希釈し、飽和重硫酸ナトリウム溶液、５ｐｒｏｃ水酸化ナトリウム及び塩水によって首尾よく洗浄し、そして硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒の蒸発及びシリカゲル（酢酸エチル／ヘプタン、２：３から酢酸エチルへ）のフラッシュクロマトグラフィーによって、サブタイトル化合物の９３ｍｇ（５８％）をトランス、（少）及びシス（多）ジアステレオマー鏡像体の混合物として淡黄色オイルとして得た。シス／トランス比率は^１Ｈ−ＮＭＲによって２：１として決定した。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃):δ 8.39 (1H [A], m), 8.34 (1H [B], d, J 8.2Hz), 7.91 (1H [A], bs), 7.59 (1H, [B], bs), 6.92-7.25 (3H [A] + 3H [B], m), 4.89 (1H [B], d, J 5.2Hz), 4.77 (1H [A], td, J 8.0, 1.3Hz), 3.66 (1H [B], m), 3.64 (1H [B], m), 3.60 (1H, [A], m), 3.54
(1H [A], m), 2.23 (1H [B], d, J 8.4Hz), 2.21 (3H [A], s), 2.19 (3H [B], s), 2.10 (2H [A], m), 1.72-1.92 (m), 1.53-1.63 (m) (2H [A] + 3H [B]). (A=トランス, B=シス)
MS-ESI+: m/z 234.1 [MH+].

（ｉｉｉ）Ｎ−［２−（｛（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）^＊−３−［４−（３，４−ジクロロフェノキシ）−１−ピペリジニル）−２−ヒドロキシシクロペンチル｝オキシ）フェニル］アセトアミド及び
Ｎ−［２−（｛（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ）^＊−３−［４−（３，４−ジクロロフェノキシ）−１−ピペリジニル）−２−ヒドロキシシクロペンチル｝オキシ）フェニル］アセトアミド
Ｎ−｛２−（６−オキサビシクロ［３．１．０］−２−ヘキシルオキシ）フェニル｝アセトアミド（トランス及びシスジアステレオマーのラセミ混合物）（８７ｍｇ、３７３μｇ、１．０当量）及び４−（３，４−ジクロロフェノキシ）ピペリジン（９２ｍｇ、３９４μｍｏｌ、１．０６当量）をアセトニトリル（３ｍｌ）中の２Ｍのリチウムパークロレートに溶解し、そして８５℃で終夜シールした管で加熱した。水性ワークアップ及びシリカゲルの粗生成物のフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル／メタノール／アンモニア＝１：３：０：０から０：９０：１０：１から０：８０：２０：３）によって２つのジアステレオマー付加産物を分離し、２４ｍｇ（１４％）の（１Ｓ、２Ｓ，３Ｒ）ジアステレオマー（第１溶出）及び７５ｍｇ（４２％）の第２溶出（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ）ジアステレオマーを得た。

実施例９
Ｎ−［２−（｛（２，３−トランス）−３−［４−（３，４−ジクロロフェノキシ）−１−ピペリジニル］−２−ヒドロキシシクロヘキシル｝オキシ）フェニル］アセトアミド
（ｉ）Ｎ−［２−（２−シクロヘキセン−１−イルオキシ）フェニル］アセトアミド
２−シクロヘキサノール（４９１ｍｇ、０．４９ｍｌ、５．００ｍｍｏｌ、１当量）及びトリフェニルフォスフィン（１．４４ｇ、５．５０ｍｍｏｌ、１．１当量）をＴＨＦ（１０ｍｌ）中に溶解し、そしてウォーターバスで環境温度で保持した。ジエチルアゾジカルボン酸（８７１ｍｇ、０．７８ｍｌ、５．００ｍｍｏｌ、１．０当量）の滴下後、ＴＨＦ（３ｍｌ）中に溶解し、反応混合物を終夜撹拌した。抽出ワークアップ及びシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ｔｅｒｔブチル（メチル）エーテル＝１：１）によって２２４ｍｇの（１９％）のタイトル化合物を黄色オイルとして得た。
MS-ESI+: m/z 232.2 [MH+].

（ｉｉｉ）Ｎ−［２−（｛（２，３−トランス）−３−［４−（３，４−ジクロロフェノキシ）−１−ピペリジニル］−２−ヒドロキシシクロヘキシル｝オキシ）フェニル］アセトアミド
Ｎ−［２−（７−オキサビシクロ［４．１．０］−２−ヘプチルオキシ）フェニル］アセトアミド（５９ｍｇ、２３９μｍｏｌ、１．０当量）及び４−（３，４−ジクロロフェノキシ）ピペリジン（５６ｍｇ、２３９μｍｏｌ、１．０当量）のジアステレオマー混合物をアセトニトリル（２ｍｌ）中の２Ｍのリチウムパークロリドに溶解し、そしてシールした管中で終夜８５℃で加熱した。水性ワークアップ及びシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル／メタノール＝５０：１００：３）によって、８６ｍｇ（７５％）の黄色固体をジアステレオ比率の６９：３１＝Ａ：Ｂ（^１Ｈ−ＮＭＲ）で得た。逆相カラムでジアステレオマーの分離は観察されなかった。それぞれ多及び少の相対立体化学は、混合物の複雑なスペクトルのため与えられない。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃):δ 9.48 (1H [A], bs), 9.25 (1H [B], bs), 8.46 (1H [A] + 1H [B], t, J 9.1Hz), 7.22-7.32 (2H [A] + 1H [B], m), 6.93-7.08 (4H [A] + 5H [B], m),
6.72-6.76 (1H [A] + 1H [B], m), 4.08-4.30 (3H [A] + 3H [B], m), 3.55-3.64 (2H [A] + 1H [B], m), 2.96-3.07 (2H [A] + 2H [B], m), 2.71 (2H [A] + 3H [B], m), 2.19 (3H [A], s),
2.16 (3H [B], s), 1.47-2.37 (10 H [A] + 10H [B], m).
MS-ESI+: m/z 493.1 [MH+ (A, B)].
以下の化合物を先の実施例に記載したものと類似するような経路によって製造した。

実施例１７９−１８９
出発物質：
Ａ）（３，４−ジクロロ−フェニル）−ピペリジン−４イル−アミン
窒素充填反応容器において、４−オキソ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．４６ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）及び３，４−ジクロロ−フェニルアミン（１．０ｇ、６．１７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２８ｍｍｏｌ）及び酢酸（２．１２ｍｌ）中に溶解した。ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（３．６７ｇ、１７．３ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応物を終夜撹拌し、それから炭酸水素ナトリウム溶液（５％）に注いだ。水相を酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）で３回振とうした。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させ、そしてフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘプタン３：７）によって精製し、１．７ｇ、８１％の純粋化合物を得た。ＢＯＣ保護したタイトル化合物をジクロロメタン（２６ｍｌ）及びトリフルオロ酢酸（１３ｍｌ）中に溶解し室温で３時間撹拌し、蒸発させ、そしてジエチルエーテル及び水酸化ナトリウム（１Ｍ）に溶解した。有機相を分離させ、そして水相をエーテルで２回洗浄した。合わせた有機相を塩水の小部分で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして蒸発させ１．１５ｇ（７６％）のタイトル化合物を得た。
¹H-NMR (400MHz, DMSO-d6):δ 7.20 (d, 1H, J = 8.9 Hz), 6.73 (d, 1H, J = 2.7 Hz), 6.54 (dd, 1H, J = 8.8, 2.7 Hz), 5.95 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 3.22 (m, 1H), 2.91 (bd, 2H, J = 12.6 Hz), 2.51 (m, 2H), 2.02 (bs, 1H), 1.81 (bd, 2H, J = 12.4 Hz), 1.18 (m).
APCI-MS: m/z 245 [M+]

実施例１９７
Ｎ−（２−｛３−［３−（４−クロロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ｝−４，５−ジフルオロ−フェニル）−アセトアミド
ｉ）４，５−ジフルオロ−２−ニトロ−フェノール
フラスコで、３，４−ジフルオロフェノール（３．１０ｇ、２３．７ｍｍｏｌ）を酢酸（１５ｍｌ）中に溶解した。それぞれの攪拌溶液に、フューム状ＨＮＯ_３（１．２５ｇ、２９．７ｍｍｏｌ）の酢酸（６ｍｌ）中の溶液を滴下した。すべての撹拌の間温度を５０℃以下に保持した。添加完了後、混合物をさらに１時間撹拌した。反応混合物を次いで氷水に注ぎ、黄色がかった固体の沈殿を得た。固体を濾過によって収集し、そして乾燥した。固体をシリカで精製し（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ５：１）、黄色オイルとしてサブタイトル化合物（２．０５ｇ、５０％）を得、静かに置いて結晶化させた。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃)δ: 10.61 (1H, s); 8.00 (1H, dd, J 9.6 8.2 Hz); 7.00 (1H, dd, J 10.4 6.8Hz)

ｉｉ）Ｎ−（４，５−ジフルオロ−２−ヒドロキシ−フェニル）−アセトアミド
フラスコにおいて、ｉ）で取得した生成物（０．５９ｇ、３．３７ｍｍｏｌ）、及び酢酸（１０ｍｌ）を添加した。溶液を９０℃に撹拌しつつ加熱し、そしてスズ（粉末、１．６０ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコをシールし、そしてさらに１時間撹拌しつつ加熱し、そして熱い溶液をセライトを経由して濾過した。フィルターを次いでさらなる１０ｍｌの熱い酢酸で洗浄した。ろ液に、水（２５ｍｌ）及び無水酢酸（０．５ｍｌ、５．２９ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を２０分間６０℃で撹拌しつつ加熱した。混合物を冷却するに任せ、そしてＥｔＯＡｃ及び水の間で分配させた。有機相を収集し、そして水及び塩水で洗浄した。有機相を蒸発させ、０．６３ｇ（１００％）のサブタイトル化合物を固体として得た。
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)δ: 10.25 (1H, s); 9.31 (1H, bs); 7.88 (1H, dd, J 12.8 7.9 Hz); 6.83 (1H, dd, J 12.1 7.7 Hz); 2.08 (3H, s)

ｉｉｉ）Ｎ−（４，５−ジフルオロ−２−オキシラニルメトキシ−フェニル）−アセトアミド
バイアルにおいて、ｉｉ）で得た化合物（０．４ｇ、２．１３７ｍｍｏｌ）、エピブロモヒドリン（０．３５ｇ、２．５５ｍｍｏｌ）、Ｋ_２ＣＯ_３（０．６ｇ、４．４ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（２ｍｌ）を添加した。バイアルをシールし、そして撹拌しつつ加熱した（２時間、６０℃）。混合物を次いで、ＥｔＯＡｃ及び水の間で分配させ、そして有機相を水で２回及び塩水で１回洗浄し、そして最終的に蒸発させ、褐色固体を得た。粗エポキシドをシリカで精製し、そして０．２７ｇ（５２％）のサブタイトル化合物をわずかに桃色の固体として得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃)δ: 8.37 (1H, dd, J 12.2 8.8 Hz); 7.85 (1H, bs); 6.78 (1H, dd, J 11.2 7.1 Hz); 4.34 (1H, dd, 11.5 2.2 Hz); 3.90 (1H, dd, 11.6 6.3 Hz); 3.40-3.36 (1H, m); 2.98 (1H t, J 4.5 Hz); 2.81 (1H, dd, J 4.7 6.3 Hz); 2.22 (3H, s)

ｉｖ）Ｎ−（２−｛３−［３−（４−クロロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ｝−４，５−ジフルオロ−フェニル）−アセトアミド
バイアルにおいて、ｉｉｉ）で取得した化合物（０．０５９ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、３−（４−クロロフェノキシ）−ピロリジン（０．０４８ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）及びエタノール（２ｍｌ、９９．５％）を添加した。バイアルをシールし、そして内容物を２時間７５℃で撹拌しつつ加熱した。粗溶液を蒸発させ、そして得られたオイルをシリカで精製し、タイトル化合物を得、塩酸塩として凍結乾燥した。タイトル化合物を白色固体として取得した（０．０７５ｇ、６５％）。化合物は４種の立体異性体の混合物であり、これらはＮＭＲスペクトルに影響を有した。
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)δ: 10.78-10.30 (1H, m); 9.30 (1H, s); 8.07 (1H, dd, J 12.8 9.3 Hz); 7.40-7.34 (2H, m); 7.23 (1H, dd, J 12.7 7.5 Hz); 7.05-6.99 (2H, m); 6.19 (1H, bs); 5.23-5.11 (1H, m); 4.35 (1H, bs); 4.08-3.97 (1.5H, m), 3.96-3.90 (1H, m); 3.84-3.70 (1.5H, m); 3.63-3.23 (4H, m); 2.66-2.00 (5H, m)
APCI-MS: m/z 411.1 [MH+]

実施例２０９
Ｎ−（５−アセチル−２−｛３−［３−（４−クロロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ｝−フェニル）−アセトアミドトリフルオロアセテート
ｉ）Ｎ−（５−アセチル−２−オキシラニルメトキシ−フェニル）−アセトアミド
４−アセチル−２−ニトロフェノール（０．５０ｇ、２．７６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）中の溶液に、１０％のＰｄ／Ｃ（０．１５ｇ）を添加した。得られた混合物をＨ_２で１気圧で５時間水素化し、それから、セライト濾過し、そして蒸発させ赤色オイルの０．６３ｇを得た。水（２０ｍｌ）及び無水酢酸（０．３５ｇ、３．４４ｍｍｏｌ）を添加し、そして混合物を強く５分間撹拌した。反応混合物を次いで、３０分間、６０℃に撹拌しながら加熱し、それから冷却に任せた。赤色固体を形成し、そして沈殿を濾過によって収集し、水で洗浄し、そして０．２７ｇ（１．４０ｍｍｏｌ）のＮ−（５−アセチル−２−ヒドロキシ−フェニル）−アセトアミドを得た。これをＤＭＦ（５ｍｌ）中に溶解した。Ｋ_２ＣＯ_３（０．３４ｇ、２．４５ｍｍｏｌ）及びエピブロモヒドリン（０．２１ｇ、１．５４ｍｍｏｌ）を添加し、そして得られた混合物を３時間、５０℃で撹拌しつつ加熱した。混合物をＥｔＯＡｃ及び水４０＋４０ｍｌで分配させた。有機相を水で２回洗浄し、そして塩水で１回洗浄し、そして最終的に減圧で濃縮し、赤色オイルを得た。組成生物をシリカ（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ、１：２−１：４）で精製し、１１０ｍｇ（１６％）のサブタイトル化合物を得た。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃):δ 9.03 (1H, d, J1.9Hz), 7.81 (1H, bs), 7.74 (1H, dd, J8.6, 2.3Hz), 6.96 (1H, d, J8.6Hz), 4.48 (1H, dd, J11.3, 2.4Hz) 4.00 (1H, dd, J11.4, 6.4Hz), 3.45-3.40 (1H, m), 2.99 (1H, t, J4.4Hz), 2.79 (1H, dd, J4.7, 2.6 Hz), 2.59 (3H, s), 2.26 (3H, s).

実施例２１０
Ｎ−（２−｛３−［３−（４−クロロフェノキシ）−１−ピロリジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ｝フェニル）メタンスルフォンアミド
ｉ）１−（２−アミノフェノキシ）−３−［３−（４−クロロフェノキシ）−１−ピロリジニル］−２−プロパノールジヒドロクロリド
Ｎ−（２−｛３−［３−（４−クロロフェノキシ）−１−ピロリジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ｝フェニル］アセトアミド（０．９５ｇ、２．３４ｍｍｏｌ）及び濃塩酸（２５ｍｌ）の混合物を３時間加熱し（１００−１０５℃）、次いで室温で終夜静かに置いた。混合物を減圧でその体積の３分の１に濃縮し、飽和炭酸水素ナトリウムで塩基性化した。得られた懸濁液を酢酸エチルで２回抽出した。有機抽出物を乾燥し、溶媒を減圧で蒸発させ、淡褐色オイルを得た。このオイルを最小量のメタノール中に溶解し、エチルエーテルで希釈し、そして生成物をＨＣｌ飽和エチルエーテルの添加によって沈殿させた。生成物を濾過し、サブタイトル生成物を得た（０．９３ｇ、９１．２％）。
遊離塩基について、APCI-MS: m/z 363 [MH⁺] .

実施例２１１
Ｎ−（５−クロロ−２−［３−［３，４−ジクロロフェノキシ）−１−ピロジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ］−フェニル）ウレア
ｉ）Ｎ−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）ウレア
シアン酸カリウム（６．１４ｇ、７５．６ｍｍｏｌ）の水（５０ｍｌ）中の溶液を、２−アミノ−４−クロロフェノール（５．００ｇ、３４．８ｍｍｏｌ）の酢酸（３５０ｍｌ）及び水（２５０ｍｌ）の混合物中の撹拌懸濁液に滴下し、そして得られた溶液を室温で３時間撹拌した。反応混合物をエチルエーテルで３回抽出した。エーテル抽出物を合わせそして濃オイルに濃縮した。１０％の炭酸水素ナトリウムの溶液（２５０ｍｌ）を前記オイルに添加した。固体生成物を濾過し、水で数回洗浄し、そして再結晶化し（小量のメタノールを含むトルエン）、サブタイトル化合物を得た（３．２７ｇ、５０．４％）。
¹H-NMR (400MHz, DMSO-d6):δ 10.1 (s, 1H), 8.07 (d, 1H, J=2.2 Hz), 8.04 (s, 1H), 6.75-6.78 (m, 2H), 6.29 (bs, 2H).
¹³C-NMR: δ156.0, 144.1, 130.0, 122.5, 120.2, 117.5, 115.2.

ii) N-[5-クロロ-2-(2-オキシラニルメトキシ)フェニル]ウレア
Ｎ−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）ウレア（５３ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（９２ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）及びエピブロモヒドリン（４９ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（０．６ｍｌ）中の懸濁液を２４時間室温で撹拌した。混合物を次いで、酢酸エチル及び水の間で分配させた。有機相を水で３回洗浄し、乾燥し、そして固体残渣に濃縮した。この粗生成物を再結晶させ（エチルエーテル及びヘプタン）サブタイトル化合物（１８ｍｇ、２６．５％）を得た。
¹H-NMR (400MHz, DMSO-d6):δ 8.20 (d, 1H, J=2.2 Hz), 8.00 (s, 1H), 7.00 (d, 1H, J=8.8 Hz), 6.88 (dd, 1H, J= 2.4及び8.6 Hz), 6.40 (bs, 2H), 4.40 (dd, 1H, J= 2.2及び12.0 Hz), 3.90 (dd, 1H, J= 6.6及び12.0 Hz), 3.37 (m, 1H), 2.88 (t, 1H, H= 4.8 Hz), 2.74 (m, 1H).

ｉｉｉ）Ｎ−（５−クロロ−２−［３−［３，４−ジクロロフェノキシ）−１−ピロジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ］−フェニル）ウレア
サブタイトル化合物（ｉｉ）（１６ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び３−（３，４−ジクロロフェノキシ）ピロリジン（１７ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）の無水エタノール（１ｍｌ）中の溶液を２時間。溶媒を減圧で除去し、そして残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン−メタノール、１５：１）によって精製し、タイトル化合物（１１ｍｇ、３３％）を得た。
¹H-NMR (400MHz, DMSO-d6):δ 8.18 (d, 1H, J= 2.6 Hz), 7.94 (s, 1H), 7.5 (d, 1H, J= 0.0Hz), 7.16 (d, 1H, J= 2.1 Hz), 6.82-6.98 (m, 3H), 6.33 (bs, 2H), 4.98 (m, 1H), 4.90 (m, 1H), 3.85-4.07 (m, 3H), 2.63-2.93 (m, 5H), 2.21-2.30 (m, 1H), 1.74 (m, 1H).
APCI-MS: m/z 198 [MH⁺]

実施例２１２
１−（３−｛２−［（アミノカルボニル）アミノ］フェノキシ｝−２−ヒドロキシプロピル）−３−（４−クロロフェノキシ）ピロリジニウム２，２，２−トリフルオロアセテート
ｉ）Ｎ−（２−ヒドロキシフェニル）ウレア
シアン酸カリウム（３．９４ｇ、４８．６ｍｍｏｌ）の水（３０ｍｌ）溶液を１５分の間、２−アミノフェノール（２．４１ｇ、２２．１ｍｍｏｌ）の５０％酢酸水溶液（１６０ｍｌ）中の懸濁液に添加した。得られる溶液を室温で静かに終夜置いて、それから酢酸エチルで抽出した（３回）。合わせた有機抽出物を、小量に濃縮し、冷飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に注いだ。固体を濾過し、そして水で洗浄し、サブタイトル化合物（１．６１ｇ、４７．９％）を得た。
¹H-NMR (400MHz, DMSO-d₆):δ 9.88 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.80 (bd, 1H), 6.77 (m, 1 H), 6.68 (m, 1H), 6.17 (s, 2H),

ｉｉ）Ｎ−［２−（２−オキシラニルメトキシ）フェニル］ウレア
エピブロモヒドリン（０．９４ｇ、６．８４ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（２ｍｌ）中の溶液を、撹拌Ｎ−（２−ヒドロキシフェニル）ウレア（０．６５ｇ、４．２７ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（２．２２ｇ、６．８４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８ｍｌ）中の懸濁液に滴下した。２時間後、混合物を水及び酢酸エチルの間で分配させた。水相を酢酸エチルで抽出し、そして合わせた有機相を水で洗浄し（３回）、乾燥し、そして濃縮した。半固体残渣をジクロロメタン／エチルエーテル中に溶解し、濾過し、そしてヘプタンを混濁液に添加した。室温で終夜撹拌後、固体を濾過し、サブタイトル化合物（０．２８ｇ、３２％）得た。
¹H-NMR (400MHz, DMSO-d₆):δ 8.07(m, 1H), 7.82 (s, 1H), 6.97 (m, 1H), 6.85 (m, 2H), 6.24 (bs, 2H), 4.37 (dd, 1H, J=2,5及び11.6 Hz), 3.89 (dd, 1H, J=6.4及び11.6 Hz), 3.38 (m, 1H), 2.87 (t, 1H, J=4.6 Hz), 2.75 (dd, 1H, J=2.6及び5.2 Hz).
APCI-MS: m/z 209 [MH⁺].

ｉｉｉ）１−（３−｛２−［（アミノカルボニル）アミノ］フェノキシ｝−２−ヒドロキシプロピル）−３−（４−クロロフェノキシ）ピロリジニウム２，２，２−トリフルオロアセテート
Ｎ−［２−（２−オキシラニルメトキシ）フェニル］ウレア（７８ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）及び３−（４−クロロフェノキシ）ピロリジン（７０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）の純粋エタノール（４ｍｌ）中の溶液を還流で２．５時間加熱した。混合物を次いで濃縮し、そして残渣をＨＰＬＣで精製しタイトル化合物を得た（１０２ｍｇ、５４．５％）。
¹H-NMR (400MHz, DMSO-d₆ + D₂O):δ 7.98 (bd, 1H, J=7.2 Hz), 7.36 (d, 2H, J=8.8 Hz), 6.95-7.02 (m, 3H), 6.88 (m, 2H), 5.15 (bd, 1H). 4.26 (m, 1H)。残りの10脂肪族プロトンはδ2.04及び4.04の間の複雑なオーバーラップ多重状態のようにみえる。
遊離塩基についてAPCI-MS: m/z 406 [MH⁺]及び408 [MH⁺+2].

実施例２１３
１−（３−｛２−［（アミノカルボニル）アミノ］フェノキシ｝−２−ヒドロキシプロピル）−３−（３，４−ジクロロフェノキシ）ピロリジニウム２，２，２−トリフルオロアセテート
Ｎ−［２−（２−オキシラニルメトキシ）フェニル］ウレア（実施例２２、ステップｉｉに記載、６９ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）及び３−（３，４−ジクロロフェノキシ）ピロリジン（７７ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）の純粋エタノール（４．５ｍｌ）中の溶液を２時間７０℃で加熱した。残渣を溶媒の蒸発後、ＨＰＬＣによって精製し、タイトル化合物（１３３ｍｇ、７２．３％）を得た。
¹H-NMR (400MHz, DMSO-d₆ + D₂O):δ 7.96 (bd, 1H, J=7.4 Hz), 7.54 (bd, 1H, J=9.0 Hz), 7.27 (bs, 1H), 6.84-7.00 (m, 4H), 5.20 (bd, 1H), 4.26 (m, 1H). 残りの10脂肪族プロトンはδ2.05及び4.03の間の複雑なオーバーラップ多重状態のようにみえる。
遊離塩基についてAPCI-MS: m/z 439.9 [M]及び442 [M+2]。

実施例２１５
Ｎ−（２−｛３−［３−（４−クロロフェノキシ）−１−ピロリジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ｝フェニル）−Ｎ’−エチルウレアヒドロクロリド
Ｎ−（２−｛３−［３−（４−クロロフェノキシ）−１−ピロリジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ｝フェニル）ウレア［塩酸塩から（１１０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）から１ＭのＮａＯＨでの処理及びエーテルでの抽出によって取得］をエチルイソシアネート（１６μｌ、０．２ｍｍｏｌ）でシールしたバイアル中で１５時間環境温度で処理した。蒸発とシリカのフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ１００／５）による精製後、適当なフラクションを１ＭのＨＣｌで酸性化し、酢酸から凍結乾燥し、タイトル化合物を白色不定形固体（３５ｍｇ、３７％）として得た。物質は２種のジアステレオマー対の混合物である。
APCI-MS: m/z 434 [MH⁺]

実施例２１６
Ｎ−（２−｛３−［３−（４−クロロフェノキシ）−１−ピロリジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ｝フェニル）−Ｎ’−メチルウレアヒドロクロリド
Ｎ−（２−｛３−［４−クロロフェノキシ）−１−ピロリジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ｝フェニル）ウレア［塩酸塩（４４ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）から１ＭのＮａＯＨでの処理及びエーテルでの抽出によって得られる］のＤＣＭ（３ｍｌ）中の溶液にジ（ｔｅｒｔ−ブチル）トリカルボネート（２６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、そして溶液を１５分間保留した。メチルアミン（ＤＣＭ中の２Ｍ、１００μｌ、０．２ｍｍｏｌ）を添加し、そして溶液を静かに終夜置いた。蒸発後、粗生成物を、移動相として０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル及び水を使用し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。適当なフラクションを減圧で濃縮し、そして１ＭのＮａＯＨ及びエーテルで抽出した。有機相からの残渣を１ＭのＨＣｌで酸性化しそして酢酸から凍結乾燥し、タイトル化合物を白色不定形固体として得た（１５ｍｇ、３０％）。物質は２種のジアステレオマー対の混合物である。
APCI-MS: m/z 420 [MH⁺]

実施例２１７
（２Ｓ，４Ｓ）−１−｛３−［２−（アセチルアミノ）フェノキシ］−２−ヒドロキシプロピル｝−４−（４−クロロフェノキシ）−２−ピロリジンカルボン酸；トリフルオロ酢酸との化合物
（ｉ）メチル（２Ｓ，４Ｓ）−１−｛３−［２−（アセチルアミノ）フェノキシ］−２−ヒドロキシプロピル｝−４−（４−クロロフェノキシ）−２−ピロリジンカルボキシレートヒドロクロリド
メチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−クロロフェノキシ）−２−ピロリジンカルボキシレート（３７０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＮ−［２−（２−オキシラニルメトキシ）フェノル］アセトアミド（２０７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）であってｔｅｒｔ−ブタノール（７ｍｌ）中に溶解したものを、シールしたバイアルで１００℃で終夜撹拌した。シリカのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ１００／２）の粗物質のワークアップ、１ＭのＨＣｌでの適当なフラクションの酸性化及び酢酸からの凍結乾燥により、サブタイトル化合物を白色不定形固体として得た（３６０ｍｇ、７２％）。物質はジアステレオマー混合物である。
APCI-MS: m/z 463 [MH⁺]

ｉｉ）（２Ｓ，４Ｓ）−１−｛３−［２−（アセチルアミノ）フェノキシ］−２−ヒドロキシプロピル｝−４−（４−クロロフェノキシ）−２−ピロリジンカルボン酸；トリフルオロ酢酸との化合物
化合物（ｉ）（５０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２ｍｌ）及び水（３ｍｌ）中に溶解した。水（０．５ｍｌ）中に溶解した水酸化リチウム水和物（８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応を分析ＨＰＬＣによって決定されたように０．５時間後に完了した。混合物を、ＴＦＡで酸性化しそして移動相として０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル及び水を使用して、分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。適当なフラクションを減圧で濃縮し、そして酢酸から残渣を凍結乾燥し、タイトル化合物を白色不定形固体として得た（２７ｍｇ、４８％）。物質はジアステレオマー混合物である。
APCI-MS: m/z 449 [MH⁺], 431 [MH⁺, ラクトン,小量]

実施例２１９
Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−３−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−クロロフェノキシ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジニル］−２−ヒドロキシプロピル｝オキシ）フェニル］アセトアミド；トリフルオロ酢酸塩及び
Ｎ−［２−（｛（２Ｒ）−３−［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−クロロフェノキシ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジニル］−２−ヒドロキシプロピル｝オキシ）フェニル］アセトアミド；トリフルオロ酢酸塩
ｉ）［（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−クロロフェノキシ）ピロリジニル］メタノール
メチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−クロロフェノキシ）−２−ピロリジンカルボキシレート
乾燥ＴＨＦ（２０ｍｌ）中のメチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−クロロフェノキシ）−２−ピリリジンカルボキシレート（シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンメチルエステルから実施例２１７ｉｉにしたがって製造される）（８５０ｍｇ、３．３２ｍｍｏｌ）を、４０分間でリチウムアルミニウムヒドリド（５０５ｍｇ、１３．３ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の混合物に０℃でアルゴン雰囲気下で添加した。室温で終夜撹拌後、硫酸ナトリウム１０水和物（１ｇ）を添加し、次いで水（０．５ｍｌ）、水酸化ナトリウム（１５％ｗ／ｖ、０．５ｍｌ）及び水（１．５ｍｌ）を滴下した。濾過及び蒸発により、シロップを得、これをシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール／濃アンモニア１００／２０／１）によって精製し、サブタイトル化合物（０．６０ｇ、７９％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ 7.22 (m, 2H), 6.78 (m, 2H), 4.79 (m, 1H), 3.62 (m, 2H), 3.39 (m, 1H), 3.23 (bd, 1H), 3.14 (dd, 1H, J 5.0 Hz, 12.2 Hz), 2.28 (m, 1H), 1.72 (m, 1H).
MS-APCI+: m/z 228 [MH⁺]

ｉｉ）Ｍ−クロロ過安息香酸（７０−ｐｒｏｚ；２７０ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ、２．０当量）を、ジクロロメタン（３ｍｌ）に溶解した化合物ｉ）（１１２ｍｇ、５４６μｍｏｌ）アイスバス冷却溶液に添加し、そしてさらなる冷却なくして終夜撹拌した。酢酸エチルの添加後、混合物を飽和硫酸ナトリウム、５−ｐｒｏｚ水酸化ナトリウム及び塩水で洗浄した。硫酸ナトリウムでの乾燥、溶媒の蒸発、及びシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって８６ｍｇ（７１％）の生成物をベージュ色固体として、^１Ｈ−ＮＭＲによって決定されるようなトランス：シス比率８３：１７で得た。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃; 主要な異性体のシグナルのみを与える):δ 8.35 (1H, m), 7.90 (1H, br.s), 7.00 (2H, m), 6.88 (1H, m), 4.30 (1H, dd, J 11.4, 2.5Hz), 3.96 (1H, dd, J 11.4, 5.7Hz), 3.08 (2H, m), 2.21 (3H, s), 1.40 (3H, d, J 5.2Hz).
MS-APCI+ : m/z 222.1 [MH+].

ｉｉ）Ｎ−｛２−［（Ｚ）−２−ブテニルオキシ］フェニル｝アセトアミド
アルキンｉ）（３５７ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）及び５％Ｐｄ／ＢａＳＯ_４（２２ｍｇ）のピリジン（２．０ｍｌ）中の混合物を室温で大気圧で２時間３０分水素化した。この時点で、出発物質は完全に消費されたが、対応するアルカンヘのある種の過剰還元がＬＣ／ＭＳによって観察された。反応混合物をセライト濾過し、酢酸エチルで完全に洗浄した。その後濾液を１ＮのＨＣｌで酸性反応に洗浄し、そして最終的に塩水で中性に洗浄した。硫酸ナトリウムでの乾燥、溶媒の蒸発により、３１８ｍｇ（８８％）組成生物を得、これは望まれるＺ−オレフィンに加えて、またある種のＥ−オレフィン及び対応するアルカンをバイプロダクトとして含んだ。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）によって決定されるような比率は、Ｅ：Ｚ：アルカン＝８３：１０：７であった。粗生成物をさらなる精製なくして次のステップで使用した。
MS-APCI+ : m/z 206.1 [MH+].

Ｃ）Ｎ−｛２−［（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）^＊−６−オキサビシクロ［３．１．０］ヘキサ−２−イルオキシ］フェニル｝アセトアミド
ｉ）（２−シクロペンテン−１−イルオキシ）（トリイソプロピル）シラン
２−シクロペンテノール（K. Alder, F.H. Flock, Chem. Ber. 1956, 89, 1732)（２．３１ｇ、２７．５ｍｍｏｌ）、（トリイソプロピル）クロロシラン（５．３０ｇ、５．９ｍｌ、２７．５ｍｍｏｌ）、イミダゾール（２．０６ｇ、３０．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍｌ）中の溶液を室温で３時間撹拌し、そしてさらに１時間５０℃で撹拌した。次いで溶液を酢酸エチルで希釈し、水で４回洗浄しそして硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒の蒸発により６．３２ｇ（９６％）のシリルエーテル５１３／１３を無色液体として得た。^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルには多い不純物は見られない。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃):δ 5.88 (1H, m), 5.76 (1H, m), 4.98 (1H, m), 2.48 (1H, m), 2.27-2.17 (2H, m), 1.70 (1H, m), 1.12-1.05 (21H, m).

ｉｉ）トリイソプロピル［（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）^＊−６−オキサビシクロ［３．１．０］ヘキサ−２−イルオキシ］シラン
Ｍ−クロロ過安息香酸（７０％；５．４１ｇ、２１．９ｍｍｏｌ、１．７当量）を、ジクロロメタン（２５ｍｌ）中に溶解した化合物ｉ）（３．１０ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）アイスバス冷却溶液に添加し、そしてさらなる冷却なくしてさらに９０分間撹拌した。反応混合物の濾過後、濾液の蒸発、残渣を酢酸エチルに溶解し、飽和亜硫酸ナトリウム、５−ｐｒｏｚ水酸化ナトリウム及び塩水で洗浄し、そして硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒の蒸発により、粗生成物を７８：２２のトランス：シス比率の（^１Ｈ−ＮＭＲ）ジアステレオマーエポキシドの混合物として得た。シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／酢酸エチル＝９５：５から９０：１０へ）によって分離し、１．６５ｇ（５０％）の望まれるトランスエポキシド（１Ｒ，２Ｒ，５Ｒ）^＊を第１溶出ジアステレオマーとして得た。両方のジアステレオマーエポキシドのトータル収率は２．８６ｇ（８７％）であった。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃):δ 4.39 (1H, d, J 3.4Hz), 3.54 (1H, d, J 2.5Hz), 3.37 (1H, d, J 2.5Hz), 1.94 (1H, m), 1.84 (dtd, J 13.7, 9.3, 1.1Hz), 1.60-1.55 (2H, m), 1.13-1.04 (21H, m).

Ｎ−｛２−［（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）^＊−６−オキサビシクロ［３．１．０］ヘキサ−２−イルオキシ］フェニル｝アセトアミドの製造のための一般プロトコル（Ｉ）
ステップ１−ミツノブカップリング：
エポキシアルコール５４６／１６（１．０当量）、トリフェニルフォスフィン（１．２当量）及び２−ニトロフェノール（１．０当量）の乾燥ＴＨＦ（２ｍｌ／ｍｍｏｌ）中のアイスバス冷却溶液に、ジエチルジアゾジカルボン酸（１．２当量）を滴下した。撹拌を終夜さらなる冷却なくして続けた。水性、塩基性ワークアップ、次いでシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（典型的な溶離剤：ヘプタン／酢酸エチル＝１：１）によって、２−ニトロフェノール性エステルを得、これはしばしば等モル量のバイプロダクト、ジエチル１，２−ヒドラジンジカルボキシレートを含んだ。

置換２−（アリールオキシメチル）オキシランへのアミノ環の付加のための一般プロトコル（ＩＩ）
アセトニトリル中のＬｉＣｌＯ_４の飽和溶液中（１ｍｌ／１００μｍｏｌ）に溶解した、当モル量のアミノ環及びエポキシドを、シールした管中で１００℃に加熱した。典型的な反応時間は、開鎖エポキシドについて３時間からオキサビシクロ［３．１．０］ヘキサンについて１８時間の範囲であった。環境温度へ冷却後、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水性ワークアップに付した。粗生成物を通常は定量的収率で取得し、そしてシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した（典型的な溶離剤：酢酸エチル／メタノール＝８０：２０）。
以下の実施例２２１−２３０を一般プロトコル（Ｉ）及び（ＩＩ）にしたがって製造した。

実施例２３１−２４８のための出発物質の製造
Ａ）（Ｓ ^＊Ｒ ^＊）−１−（３，４−ジクロロ−ベンジル）−２，５−ジメチル−ピペラジン
１，２−ジクロロ−４−クロロメチル−ベンゼン（１．１ｍｌ、７．８９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍｌ）中の溶液を、ＤＭＦ（２５ｍｌ）中に溶解した２，５−ジメチル−ピペラジン（１．０ｇ、８．７７ｍｍｏｌ）に添加した。反応物を終夜撹拌し、ＥｔＯＡｃ及び炭酸ナトリウムの混合物（５％）に注いだ。水相をＥｔＯＡｃで２回洗浄し、そして合わせた有機相を１回塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。蒸発後、粗生成物をメタノール中に溶解した。ジベンシル化（dibensylated）ピペラジンは溶解しない。濾液を短いシリカカラムを経由して濾過し、溶離剤としてメタノールを使用し、そして蒸発させ純粋生成物を得た。収率８１２ｍｇ、３８％。
¹H-NMR (400MHz, DMSO-d6):δ 7.56 (d, 1H, J = 8.1 Hz), 7.52 (d, 1H, J = 1.8 Hz), 7.20 (dd, 1H, J = 8.2, 1.8 Hz), 3.97 (d, 1H, J = 14.1 Hz), 3.04 (d, 1H, J = 14.2 Hz), 2.76 (dd, 1H, J = 11.9, 3.0 Hz), 2.59 (m), 2.48 (dd, 1H, J = 11.9, 2.6 Hz), 2.37 (t, 1H, J = 10.8 Hz), 2.12 (m), 1.89 (s), 1.57 (t, 1H, J = 10.4 Hz), 1.00 (d, 1H, J = 6.1 Hz), 0.82 (d, 1H, J = 6.3 Hz).
APCI-MS: m/z 273 [M⁺]

実施例２３２−２４８を、前記の出発物質Ａ）ないしＤ）を用いて実施例２３１にしたがって合成した。
実施例２３２
Ｎ−（２−｛３−［４−（３，４−ジクロロベンジル）−１−ピペラジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ｝−４−フルオロフェニル）アセトアミド
APCI-MS: m/z 470[MH⁺]
実施例２３３
Ｎ−（２−｛３−［４−（３，４−ジクロロベンジル）−２，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ｝フェニル）アセトアミド
APCI-MS: m/z 480[MH⁺]
実施例２３４
Ｎ−（５−クロロ−２−｛３−［４−（３，４−ジクロロベンジル）−１−ピペラジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ｝フェニル）アセトアミド
APCI-MS: m/z 486[MH⁺]
実施例２３５
Ｎ−（５−クロロ−２−｛３−［４−（３，４−ジクロロベンジル）−２，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ｝フェニル）アセトアミド
APCI-MS: m/z 480[MH⁺]

ｉｉ）（２Ｓ）−１−［３−（４−クロロベンジル）−１−ピロリジニル］−３−（２−ニトロフェノキシ）−２−プロパノール
化合物（ｉ）（３８７ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ）−２−［（２−ニトロフェノキシ）−メチル］オキシラン（３９０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のエタノール（６ｍｌ）中の溶液を、ＬＣＭＳによって決定されるように、反応が完了するまで（２時間）還流した。溶媒を蒸発させ、オレンジ色オイルを得（６５０ｍｇ、８３％）これをさらなる精製なくして使用した。
APCI-MS: m/z 391, 393 [MH⁺]

ｉｉｉ）（２Ｓ）−１−（２−アミノフェノキシ）−３−［３−（４−クロロベンジル）−１−ピロリジニル］−２−プロパノール
化合物（ｉｉ）（６５０ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）のエタノール（１０ｍｌ）中の溶液に、６０℃で塩化スズ（ＩＩ）２水和物（２．２５ｇ、１０ｍｍｏｌ）及び３５％塩酸（２．５ｍｌ）の混合物を添加した。温度を急速に７５℃に増加させた。混合物を６０℃でさらに３０分間撹拌した。溶媒の蒸発後、残渣を５ＭのＮａＯＨ及びエーテルで抽出した。有機相を水で洗浄し、乾燥し、そして蒸発させた。残渣を移動相として０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル及び水でのＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。適当なフラクションを蒸発させそして残渣を１ＭのＮａＯＨ及びエーテルで抽出した。サブタイトル化合物を無色オイルとして有機相から取得した（４００ｍｇ、６６％）。
APCI-MS: m/z 361, 363 [MH⁺]

ｉｖ）化合物（ｉｉｉ）（４００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍｌ）中の溶液に、無水酢酸（２００μｌ、２．１ｍｍｏｌ）を添加し、そして混合物を終夜放置した。蒸発後、残渣をメタノールに溶解し、そしてメタノール（２ｍｌ）中の１．５Ｍのメトキシ化ナトリウムを添加した。混合物を２時間放置し、蒸発させ、そしてエーテル及び水において取得した。２種のジアステレオマーの混合物を有機相から取得した。ジアステレオマーを移動相としてイソヘキサン、２−プロパノール及びメタノールの混合物を使用するキラルカラムのＨＰＬＣによって分離した。単離したエナンチオマーをメタノール（１ｍｌ）中に溶解し、１Ｍの塩酸（１ｍｌ）で酸性化し、水で希釈し、そして凍結乾燥し、白色不定形固体としてタイトル化合物を得た（１５６ｍｇ及び１７３ｍｇ）。純粋なステレオイソメリズムは得られなかった。
APCI-MS: m/z 403, 405 [MH⁺]

実施例２５２
Ｎ−（５−クロロ−２−｛３−［３−（４−クロロ−ベンジル）−ピロリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ｝−フェニル）−アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
ｉ）３−（４−クロロ−ベンジル）−ピロリジン−２−オン
フラスコに、ジイソプロピルアミン（３．２２ｇ、３１．８ｍｍｏｌ）及び乾燥ＴＨＦ（６０ｍｌ）を添加した。フラスコの内容物を窒素下で保持し、次いで−７６℃に冷却した。冷溶液にｎ−ブチルリチウム（ｎ−ＢｕＬｉ、３２ｍｍｏｌ、２０ｍｌ、ヘキサン中の１．６Ｍ）を滴下した。添加完了後、溶液を１０分間撹拌し、そして１−トリメチルシラニル−ピロリジン−２−オン（５．００ｇ、３１．８ｍｍｏｌ、文献の方法にしたがって製造した）の乾燥ＴＨＦ（５ｍｌ）中の溶液を滴下した。次いで溶液をさらに２０分間撹拌し、そして４−クロロベンジルクロリド（５．１３ｇ、３２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍｌ）中の溶液をシリンジを介して５分間で添加した。得られた混合物を−７６℃で１時間撹拌し、それから環境温度に達するに任せ、そして終夜撹拌した。水（４０ｍｌ）を添加し、そして混合物を強く６０分間撹拌した。相を分離しそして有機相を塩水で洗浄しそして最終的に蒸発させ、オイルを得て、静かに置いて結晶化させた。固体をヘプタンＥｔＯＡｃ２：１で磨砕しそして濾過し、部分的に精製された固体を得た。固体をシリカで精製し（ＤＣＭないしＤＣＭ：ＭｅＯＨ９９：１ないし９８：２ないし９７：３勾配）、１．３ｇ（２０％）のサブタイトル化合物を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃)δ: 7.27 (2H, d, J 8.4Hz); 7.16 (2H, d, J 8.4Hz); 5.43 (1H, bs); 3.31-3.13 (3H, m); 2.74-2.61 (2H, m); 2.20 -2.12 (1H, m); 1.88-1.77 (1H, m)

ｉｉ）３−（４−クロロ−ベンジル）−ピロリジン
フラスコに、ａ）で取得した化合物（０．２０ｇ、０．９５ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（１０ｍｌ）中に溶解した。ＬｉＡＬＨ_４（０．１７ｇ、４．５３ｍｍｏｌ）を小量１０分間にわたり添加した。添加完了後、混合物をおよそ３時間窒素下で６０℃に加熱し、そして反応をＬＣ−ＭＳによって監視し、そして反応完了後にクエンチした。クエンチの前に、反応物を環境温度に達するに任せ、そして水（０．１６０ｍｌ）を１滴ずつ注意深く添加した。ＮａＯＨ（１０％水溶液、０．１６ｍｌ）を滴下し、最後にさらに水（０．４８ｍｌ）を加えた。混合物を１時間攪拌し、それから濾過した。濾液を減圧で濃縮し、サブタイトル化合物を無色オイルとして得た（０．１８ｇ、９７％）。
APCI-MS: m/z 196.1 [M+H]
ｉｉｉ）Ｎ−（５−クロロ−２−｛３−［３−（４−クロロ−ベンジル）−ピロリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ｝−フェニル）−アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
タイトル化合物をｉｉ）で取得した化合物から実施例１ｉｉｉ）に記載の方法にしたがって製造した。
¹H-NMR (400 MHz, DMSO)δ: 9.93-9.62 (1H, m); 9.12 (1H, s); 8.11 (1H, s); 7.38 (2H, d, J 8.9 Hz); 7.29-7.23 (2H, m); 7.13-7.02 (2H, m); 6.11-6.02 (1H, m); 4.29-4.16 (1H, bs); 4.05-3.95 (1H, m); 3.95-3.87 (1H, m); 3.75-3.50 (2H, m); 3.40-3.22 (3H, m); 2.91-2.65 (3H, m); 2.62-2.52 (1H, m); 2.13 (3H, s); 2.11-1.94 (1H, m); 1.81-1.55 (1H, m)
実施例２５３
Ｎ−（２−｛３−［３−（４−クロロフェノキシ）−１−ピロリジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ｝−４−メチルフェニル）−１−ピロリジンカルボキサミドトリフルオロアセテート
ｉ）２−［（５−メチル−２−ニトロフェノキシ）メチル］オキシラン
５−メチル−２−ニトロフェノール（７．７ｇ、５０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１３．８ｇ、０．１ｍｍｏｌ）及びエピブロモヒドリン（８．２５ｍＬ、０．１ｍｍｏｌ）の混合物をＤＭＦ（１００ｍＬ）中に溶解し、そして２−３時間１００℃で窒素雰囲気下で撹拌した。混合物をエーテル（０．５Ｌ）で希釈しそしてｐＨ＝７まで水で抽出した。有機相を蒸発させ、そして残渣をシリカ（ＤＣＭ）のフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、サブタイトル化合物を黄色固体として得た（８．６５ｇ、８３％）。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃):δ 7.80 (d,1H); 6.91 (s,1H); 6.86 (d,1H); 4.39 (dd,1H); 4.15 (dd,1H); 3.43-3.37 (m, 1H); 2.93 (dd,1H); 2.89 (dd,1H); 2.42 (s,3H)

ｉｉ）１−［３−（４−クロロフェノキシ）−１−ピロリジニル］−３−（５−メチル−２−ニトロフェノキシ）−２−プロパノール
化合物ｉ）（１．０５ｇ、５．０ｍｍｏｌ）及び３−（４−クロロフェノキシ）ピロリジン（９８８ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）のエタノール（１２ｍｌ）中の混合物を２時間還流した。溶媒を蒸発させ粗成生物をオレンジ色オイルとして得、これをさらなる精製なくして使用した。
APCI-MS: m/z 407, 409 [MH⁺]

ｉｉｉ）１−（２−アミノ−５−メチルフェノキシ）−３−［３−（４−クロロフェノキシ）−１−ピロリジニル］−２−プロパノール
化合物ｉｉ）（２．１ｇ、５．０ｍｍｏｌ）のエタノール（１０ｍｌ）中の撹拌溶液に、塩化スズ（ＩＩ）２水和物（５．６ｇ、２５ｍｍｏｌ）の３５％塩酸（６ｍｌ）を５０℃で添加した。発熱反応が開始し、そして温度は急速に７５℃に増加した。混合物を６０℃で０．５時間維持した。冷却混合物を１Ｍ水酸化ナトリウム（１８０ｍｌ）でアルカリ化し、そしてエーテルで抽出し、有機相を水で洗浄し、乾燥し、そして蒸発させ、サブタイトル化合物を淡黄色オイルとして得た（１．３４ｇ、７１％）。
ＮＭＲ：２種のジアステレオマー対の混合物のためインテグレーションはプロトンの比となる
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃):δ 7.23 (d, 2H); 6.77 (d, 2H); 6.67-6.65 (m, 1H);6.64-6.63 (m, 1H); 4.83-4.76 (m, 1H); 4.14-4.06 (m, 1H); 4.01 (d, 2H); 3.71 (bs, 2H); 3.41 (bs, 1H); 3.10 (dd, 0.5H); 3.01-2.90 (m, 1.75H); 2.87-2.70 (m, 2.7H);
2.66-2.57 (m, 1.5H); 2.28 (h, 1H); 2.25 (s, 3H); 2.06-1.95 (m, 1H)
APCI-MS: 377, 379 [MH⁺]

ｉｖ）Ｎ−（２−｛３−［３−（４−クロロフェノキシ）−１−ピロリジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ｝−４−メチルフェニル）−１−ピロリジンカルボキサミドトリフルオロアセテート
化合物（ｉｉｉ）（７５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びジ（ｔｅｒｔ−ブチル）トリカルボネート（５３ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍｌ）中の溶液を１時間環境温度で撹拌した。ピロリジン（３３μＬ、０．４ｍｍｏｌ）を添加し、そして撹拌を１時間継続した。反応をＬＣＭＳによって決定されるように完了させた。ＴＦＡ（１ｍｌ）を添加し、そして溶液を１時間放置した。揮発成分を蒸発させ、そして粗生成物を移動相として０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル及び水を使用して分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。適当なフラクションを減圧で濃縮し、そして残渣を凍結乾燥し、タイトル化合物を白色無水固体として（８５ｍｇ、７２％）得た。
ＮＭＲ：２種のジアステレオマー対の混合物のためインテグレーションはプロトンの比となる。データは遊離塩基からである。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃):δ 8.03 (dd, 1H); 7.24 (d, 2H); 6.94 (bs, 1H);
6.82-6.74 (m, 2H); 6.78 (d, 2H); 6.73-6.68 (m, 1H); 4.85-4.76 (m, 1H);
4.11-3.94 (m, 3H); 3.52-3.42 (m, 5.6H); 3.11 (dd, 0.5H); 3.05-2.92 (m, 0.45H);
2.95 (d, 1H); 2.87-2.72 (m, 2.5H); 2.62-2.52 (m, 1.4H); 2.37-2.21 (m, 0.7H);
2.29 (s, 3H); 2.08-1.90(m, 4.6H)
APCI-MS: m/z 474, 476 [MH⁺]

実施例２５４
Ｎ−（２−｛３−［３−（４−クロロフェノキシ）−１−ピロリジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ｝−４−ヒドロキシフェニル）アセトアミドトリフルオロアセテート
以下の実施例２６５ｉｉｉ）化合物の遊離塩基（１２８ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４ｍｌ）中の撹拌溶液に、Ｎ_２下で１ＭのＤＣＭ中の三臭化ホウ素（０．５８ｍｌ、０．５８ｍｍｏｌ）を環境温度で添加した。不均質混合物を終夜撹拌し、そしてメタノールに注いだ。蒸発後、粗生成物を移動相として０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル及び水を使用するＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。適当なフラクションを凍結乾燥し、タイトル化合物を白色不定形固体として得た（１１３ｍｇ、７３％）。
APCI-MS: m/z 421, 423 [MH⁺]

実施例２５５
Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−３−［４−（３，４−ジクロロフェノキシ）−１−ピペリジニル］−２−ヒドロキシプロピル｝オキシ）−４−フルオロフェニル］アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
ｉ）（２Ｓ）−２−［（５−フルオロ−２−ニトロフェノキシ）メチル］オキシラン
フラスコに、（Ｒ）−グリシドール（０．９９４ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）及びトリフェニルフォスフィン（３．５２ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ（２０ｍｌ、モレキュラーシーブで乾燥した）を添加した。混合物を均質溶液が取得されるまで撹拌した。溶液をアイスバスで冷却し、そしてジエチルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ，２．１１ｍｌ、１３．４ｍｍｏｌ）を数分で滴下した。添加完了後、フラスコを室温に達するに任せ、そしてさらに２時間撹拌した。溶媒を減圧で除去し、そして残渣にクロロホルム（５−１０ｍｌ）を添加した。沈殿（ＰＰｈ_３Ｏ）を濾過によって除去し、そして固体をさらなる量のクロロホルム（５−１０ｍＬ）で洗浄した。濾液をフラッシュカラム（ＳｉＯ_２、ヘプタン：酢酸エチル４：１）に添加し、そして精製し、純粋フラクションの濃縮後に、２．０２ｇ（７１％）のサブタイトル化合物を結晶物質として得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃)δ: 7.97 (1H, dd, J 9.3, 6.0 Hz); 6.86 (1H, dd, J 10.0, 2.5 Hz); 6.80-6.74 (1H, m); 4.44 (1H, dd, J 11.4, 2.6 Hz); 4.12 (1H, dd, J 11.2, 5.1 Hz); 3.44-3.38 (1H, m); 2.95 (1H, t, J 4.5 Hz); 2.90 (1H, dd, J 4.8, 2.6)

実施例２５６
Ｎ−（２−（３−（４−クロロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル）−２−ヒドロキシ−プロポキシ）−４，６−ジフルオロ−フェニル）−アセトアミドヒドロクロリド
ｉ）３，５−ジフルオロ−６−ニトロフェノール
乾燥メタノール（７０ｍｌ）中の２，３，４−トリフルオロニトロベンゼン（５ｇ、２８．２３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、乾燥メタノール（３０ｍｌ）中のナトリウム（０．６８，２９．４６）の溶液を添加した。溶液を出発物質が消費されるまで撹拌した（〜２時間）。濃縮後、水を添加し溶液をエーテルで抽出し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、そして濃縮し、黄色残渣（４．６５ｇ）を得た。ジクロロメタン（１４０ｍｌ）中の黄色残渣の溶液に、三臭化ホウ素（ジクロロメタン中の１Ｍ、４０ｍｌ）を添加し、そして室温で終夜撹拌した。水を次いで添加しそして溶液をさらに３０分間撹拌した。有機相を分離し、そして水相をエーテルで抽出した。合わせた有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、そして減圧で濃縮し、そして茶色がかった残渣を得た。残渣をエーテルで取得し、そして２Ｍの水酸化ナトリウム及び水で洗浄した。水及び水酸化ナトリウム洗浄物を合わせ、そして６ＭＨＣｌで中和し、そしてエーテルで抽出しＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、そして蒸発させ、黄色残渣を得、これを溶離剤としてＥｔＯＡｃ：ヘプタン；１：２のシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、望まれる生成物２ｇ、１１．４２ｍｍｏｌを得た。
GC-MS: m/z 175(M+)
¹HNMR (400MHz, CD₃OD)δppm, 6.63-6.68(1H,m),6.60-6.67(1H, dt)

ｉｉ）２−［（３，５−ジフルオロ−２−ニトロフェノキシ）メチル］オキシラン
３，５−ジフルオロ−６−ニトロフェノール（１００ｍｇ、０．５７１ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（３９４ｍｇ）のＤＭＦ（５ｍｌ）中の混合物に、エピブロモヒドリン（８０ｍｇ、０．５８２ｍｍｏｌ）を添加し、７０℃で３時間撹拌した。水及び酢酸エチルを添加し、有機相を分離し、乾燥しそして濃縮した。得られた残渣をクロマトグラフィーによって精製し（酢酸エチル：ヘプタン１：３）、望まれる生成物を固体１６１ｍｇ（０．６９６ｍｍｏｌ）として得た。
GC-MS: m/z 231 (M+)

実施例２６０
Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−３−［（２Ｒ，４Ｓ）−４−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルピロリジニル］−２−ヒドロキシプロピル｝オキシ）フェニル］アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
ｉ）１−（ｔｅｒｔ−ブチル）２−メチル（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−１，２−ピロリジンジカルボキシレート
フラスコにおいて、（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシ−プロリンヒドロクロリド（５．４ｇ、３０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２００ｍｌ）、水（１７０ｍＬ）及びＮａＯＨ（３０ｍｌ、水中の２Ｍ、６０ｍｍｏｌ）の混合物中に溶解した。この乳化液にジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（Ｂｏｃ_２Ｏ，６．５４ｇ、３０ｍｍｏｌ）を添加し、そして混合物を強く１時間撹拌した。エーテル（１００ｍｌ）を添加し、そして相を分離するに任せた。水相を付加的な１００ｍｌのエーテルで抽出した。水相を廃棄し、そして合わせた有機相を１ＭのＨＣｌ（水溶液）及び炭酸カリウム（飽和水溶液）及び塩水で洗浄した。抽出物をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、そして減圧で濃縮し、残渣を得、これをシリカ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ５：１ないし３：１ないし１：１の段階的な勾配、Ｉ_２／ＭｅＯＨで可視化されたスポット）で精製した。純粋フラクションの蒸発物を減圧で濃縮し、４．２ｇ（５７％）のサブタイトル化合物を無色オイルとして得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃)δ: 4.50 (1H, bs); 4.45-4.35 (1H, m); 3.74 (3H, s); 3.64 (1H, dd, J 11.7, 4.3 Hz); 3.59-3.42 (1H, m); 2.35-2.20 (1H, m); 2.14-2.03 (1H, m); 1.97 (1H, dd, J 23.3, 3.7 Hz); 1.44 (9H, d, J 18.9 Hz)

ｉｉ）１−（ｔｅｒｔ−ブチル）２−メチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−クロロフェノキシ）−１，２ピロリジンジカルボキシレート
フラスコにおいて、ｉ）で取得した化合物（２．５４ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）、トリフェニルフォスフィン（２．７１ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）及び４−クロロフェノール（１．３３ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍｌ、モレキュラーシーブで乾燥）中にマグネチックスターラーで溶解した。フラスコをアイスバスで冷却し、この撹拌溶液に、ジエチルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ，１．８ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）を数分で滴下した。反応物を終夜静かにおいて、氷が溶け、そして反応物が室温に達するに任せた。溶媒を蒸発させそして残渣をエーテル（３０ｍｌ）で処理し、フォスフィンオキシドが沈殿するに任せた。固体を濾過によって除去し、そして濾液を減圧で濃縮した。残渣をシリカで（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ８：１ないし６：１ないし３：１、段階的な勾配、ＴＬＣ上のスポットをＳｅｅｂａｃｈの試薬で可視化した）精製した。純粋フラクションの濃縮により、２．５１ｇ（６８％）のサブタイトル化合物を無色粘凋性オイルとして得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃)δ: 7.26-7.20 (2H, m); 6.77-6.70 (2H, m); 4.86 (1H, bs); 4.55 (¹/₂ H, dd, J 8.6, 2.6 Hz); 4.43 (¹/₂ H, dd, J 7.6, 3.9 Hz); 3.84-3.60 (5H, m); 2.53-2.36 (2H, m); 1.47 (9H, d, J 18.2 Hz)

ｉｉｉ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−クロロフェノキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−１−ピロリジンカルボキシレート
フラスコにおいてｉｉ）で取得した化合物（０．９５１ｇ、２．６７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍｌ、シーブで乾燥）中に溶解した。溶液をアイスバスで冷却し、そしてＬｉＢＨ_４（０．０９ｇ、４．０７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を終夜撹拌し、アイスに冷却し、そして溶液が室温に達するに任せた。粗混合物を次いでＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）及び水（１００ｍｌ）の間で分配させた。水相を廃棄しそして有機溶液を０．５ＭのＨＣｌ（水溶液）、ＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）及び塩水で洗浄した。溶液を蒸発させ、オイルを得、これは無機塩で汚染しているようであった。ＤＣＭ中に溶解及びセライト（登録商標）濾過により、０．８２ｇ（９４％）のサブタイトル化合物を無色オイルとして得た。
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)δ: 7.33 (2H, d, J 9.5 Hz); 6.95 (2H, d, J 9.5); 4.96 (1H, bs); 4.71 (1H, bs); 3.84-3.55 (3H, m); 3.32 (2H, bs); 2.29-2.07 (2H, m); 1.41 (9H, s)

ｉｖ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−（４−クロロフェノキシ）−２−｛［（メチルスルフォニル）オキシ］メチル｝−１−ピロリジンカルボキシレート
フラスコにおいてｉｉｉ）で取得した化合物（０．８２ｇ、２．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍｌ、モレキュラーシーブで乾燥）中に溶解した。フラスコをアイスで冷却し、そしてトリエチルアミン（０．６９ｍｌ、５．０ｍｍｏｌ）をシリンジから添加した。メタンスルフォニルクロリド（０．３０ｍｌ、３．８６ｍｍｏｌ）を数分にわたり添加し、得られた混合物を終夜撹拌し、アイスを溶かした。混合物にＤＣＭ（６０ｍｌ）を添加し、そして溶液を１ＭのＨＣｌ（水溶液）、ＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）、及び塩水で洗浄した。溶液を蒸発させ、０．８７６ｇ（８６％）のサブタイトル化合物を黄色オイルとして得、これを次のステップにさらなる精製なくして使用した。
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)δ: 7.35 (2H, d, J 9.4 Hz); 6.99 (2H, d, J 9.4 Hz); 5.07-5.01 (1H, m); 4.37 (1H, dd, J 8.9, 4.2 Hz); 4.20-4.05 (2H, m); 3.71 (1H, dd, J 11.8, 5.0 Hz); 3.32 (2H, s); 3.15 (3H, s); 2.07 (1H, d, J 14.4 Hz); 1.41 (9H, s)

ｖ）ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｒ，４Ｓ）−４−（４−クロロフェノキシ）−２−メチル−１−ピロリジンカルボキシレート
フラスコにおいて、ｉｖ）で取得した化合物（０．８７６ｇ、２．１６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍｌ、モレキュラーシーブで乾燥）中に溶解した。反応混合物を不活性雰囲気下で保持し、次いでアイスバスで冷却した。ＬｉＢ（Ｅｔ）_３Ｈ（ＴＨＦ中の１Ｍのリチウムトリエチルボロヒドリド、９ｍｌ、９ｍｍｏｌ）をシリンジで１５分にわたり添加した。アイスバスを除去しそして混合物を終夜撹拌した。粗混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）及び水（１００ｍｌ）の間で分配させた。水相を除去し、そして有機相を１ＭのＨＣｌ（水溶液）、ＮａＨＣＯ_３（飽和水溶液）及び塩水で洗浄した。溶液を蒸発させ、そして残渣をシリカで精製し（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ１０：１ないし５：１ないし４：１ないし２：１勾配。ＴＬＣスポットをＳｅｅｂａｃｈの試薬で可視化した）、０．４０１ｇ（６０％）のサブタイトル化合物を無色オイルとして得た。
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)δ: 7.33 (2H, d, J 8.7 Hz); 6.96 (2H, d, J 8.7 Hz); 5.00-4.94 (1H, m); 3.89 (1H, bs); 3.64 (1H, dd, J 12.5, 5.2 Hz); 3.38 (1H, d, J 12.2 Hz); 2.41-2.28 (1H, m); 1.79 (1H, d, J 13.7 Hz); 1.40 (9H, s); 1.23 (3H, d, J 6.6 Hz)

ｖｉ）（２Ｒ，４Ｓ）−４−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルピロリジントリフルオロ酢酸塩
フラスコにおいてｖ）で取得した化合物（０．３９０ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（ＤＣＭ，１５ｍＬ）中に溶解した。この溶液に、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸、６ｍｌ）を添加し、そして混合物を３時間静かに置き、その後揮発成分を減圧で除去した。残渣をＤＣＭと２回共蒸発させ、サブタイトル化合物をオイルとして得た。
APCI-MS (m/z): 212 [M+H]
ｖｉｉ）Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−３−［（２Ｒ，４Ｓ）−４−（４−クロロフェノキシ）−２−メチルピロリジニル］−２−ヒドロキシプロピル｝オキシ）フェニル］アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
タイトル化合物を実施例２５５に概説した方法にしたがって、ｖｉ）で取得した物質及び（２Ｓ）−２−［（２−ニトロフェノキシ）メチル］オキシランから出発して製造した。化合物は２５％収率で取得した。
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆)δ: 9.88 (1H, bs); 9.02 (1H, s); 7.89 (1H, d, J 7.7 Hz); 7.37 (2H, d, J 7.7 Hz); 7.09-6.88 (5H, m); 6.02 (1H, bs); 5.18-5.11 (1H, m); 4.34-4.22 (1H, m); 4.02 (1H, dd, J 10.2, 4.3 Hz); 3.94 (1H, dd, J 9.8, 5.7 Hz); 3.77-3.30 (4H, m); 3.19 (1H, t, J 10.7 Hz); 2.84 (1H, p, J 6.7 Hz); 2.09 (3H, s); 1.91-1.81 (1H, m); 1.43 (3H, d, J 6.4 Hz)
APCI-MS (m/z): 419.2 [M+H]

ｉｉ）ｔｅｒｔ−ブチル−２−オキソ−１−ピロリジンカルボキシレート
クロミウム（ｖｉ）オキシド（８００ｍｇ、８．０ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍｌ）中のピリジン（１．６ｍｌ）に添加し、そして得られた溶液を室温で１５分間撹拌した。ＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）中のｔｅｒｔブチル−３−ヒドロキシ−１−ピロリジンカルボキシレート（３７４．５ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）溶液を添加し、すぐに無水酢酸を添加し、そして反応混合物を室温で１５分間維持した。酢酸エチルの添加後、デカンテーションし、そしてシリカゲルの短いカラムを経由して濾過した。濾液を濃縮し、サブタイトル生成物を得（１９３ｍｇ）そして次のステップに直接的に使用した。

ｉｉｉ）Ｎ−（２−｛３−［３−（４−クロロフェノキシ）−１−ピロリジニル］−２−ヒドロキシプロポキシ｝−４−メトキシフェニル）アセトアミドヒドロクロリド
化合物（ｉｉ）（１５７ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）のピリジン（３ｍｌ）中の溶液に、無水酢酸（１ｍｌ）を添加した。混合物を環境温度で１時間撹拌した。蒸発後、残渣をメタノール（ｍｌ）中に溶解し、そしてメタノール（１ｍｌ）中の１．５Ｍナトリウムメトキシドを添加した。混合物を環境温度で終夜放置した。蒸発後、残渣をエーテル及び水中に取得した。タイトル化合物の遊離塩基を有機相から無色オイルとして取得した（１７１ｍｇ、９８％）。遊離塩基（４３ｍｇ）をメタノール（５ｍｌ）中に溶解し、ｐＨ＜２となるまで１Ｍ塩酸で酸性化し、水（５０ｍｌ）で希釈し、そして凍結乾燥した。タイトル化合物を白色不定形固体として取得した（３０ｍｇ、６４％）。
APCI-MS: m/z 435, 437 [MH⁺]

実施例２６６
Ｎ−（２−［３−（４−クロロ−ベンジルオキシ）−ピロリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ）−フェニル）−アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
ｉ）３−（４−クロロ−ベンジルオキシ）−ピロリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
乾燥ＴＨＦ（４ｍｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル３−ヒドロキシ−１−ピロリジンカルボン酸（０．２７ｇ、１．４４ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の水素化ナトリウム（０．０７８ｇ、２．１７ｍｍｏｌ、オイル中の約５０％懸濁液）の冷（０℃）、撹拌懸濁液に添加した。３０分後、４−クロロベンジルブロミド（０．３６ｇ、１．７４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍｌ）中の溶液を添加し、そして得られた懸濁液を室温で終夜撹拌した。反応混合物を水及び酢酸エチルの間で分配した。水相を酢酸エチルで抽出し、そして合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥し、そして濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィーに付し（ヘプタン−酢酸エチル、６：１）、サブタイトル化合物３−（４−クロロ−ベンジルオキシ）−ピロリジンー１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルをオイルとして得た（０．３０ｇ、６６．８％）。
¹H-NMR (CDCl₃):δ 7.30 (m, 4H), 4.49 (bs, 2H), 4.11 (m, 1H), 3.45 (m, 4H), 1.90-2.08 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).

ｉｉｉ）Ｎ−（２−［３−（４−クロロ−ベンジルオキシ）−ピロリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロポキシ）−フェニル）−アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
３−（４−クロローベンジルオキシ）−ピロリジン）（０．０５０ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）及びＮ−（２−オキシラニルメトキシ−フェニル）−アセトアミド（０．０４９ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の純粋エタノール（３ｍｌ）中の溶液を閉鎖バイアル中で７０℃で２時間加熱した。生成物をＨＰＬＣによって精製し、タイトル化合物（０．６０ｇ、４７％）を得た。
¹H-NMR (CD₃OD):δ 7.85 (m, 1H), 7.35 (m, 4H), 7.12 (m, 1H), 7.02 (d, 1H, J= 8 Hz), 6.96 (m, 1H), 4.56 (m, 2H), 4.39 (m, 2H), 4.05 (d, 2H, J = 5.9 Hz), 3.85 (m, 2h), 3.48 (m, 4H), 2.10-2.55 (m, 5H).
APCI-MS: m/z 419 [MH⁺]及び421 [MH+2⁺].

実施例２７０
Ｎ−｛２−［（３−｛４−［（３，４−ジクロロフェニル）オキシ］−１−ピペリジニル｝−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）オキシ］−４−フルオロフェニル｝アセトアミドヒドロクロリド
ｉ）Ｎ−［４−フルオロ−２−（２−メチル−アロイルオキシ）−フェニル］−アセトアミド
３−クロロ−２−メチルプロパン（１．３６ｇ、１５ｍｍｏｌ）を５−フルオロ−２−ニトロフェノール（１．５７ｇ、１０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２．７６ｇ、２０ｍｍｏｌ）、硫酸水素テトラブチルアンモニウム（０．０６８ｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル（３０ｍｌ）の混合物に添加し、そして混合物を還流で１８時間加熱した。冷反応混合物をトルエンで希釈し、そして５％炭酸カリウム水溶液で洗浄し、乾燥し、そして蒸発させた。残渣の一部（０．６３１ｇ、３ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ−ＴＨＦ−Ｈ_２Ｏ（２：１：１，３ｍｌ）中の亜ジチオン酸ナトリウム（１．０４ｇ、６ｍｍｏｌ）を７５℃で４時間加熱した。混合物をジクロロメタン及び１５％炭酸カリウム水溶液の間で分配させ、そして有機溶液を乾燥し、そして濃縮した。得られた残渣をメタノール（１．５ｍｌ）で希釈し、無水酢酸（１．５ｍｌ）と５０℃で２分間反応させ、室温に２０分間置き、次いでピリジン（４ｍｌ）を添加し、そして溶液を再び５０℃で３分間加熱し、冷却及び濃縮した。その物質をシリカゲルクロマトグラフィー（薄い石油−酢酸エチル２：１）によって精製し、９５ｍｇのサブタイトル化合物を得た。
¹H-NMR (300MHz, CDCl₃):δ 8.28 (dd, 1H,), 7.62 (bs, 1H), 6.70-6.60 (m, 2H), 5.07 (dd, 2H), 4.49 (s, 2H), 2.20 (s, 3H), 1.84 (s, 3H).
ｉｉ）Ｎ−（４−フルオロ−２−｛［（２−メチル−２−オキシラニル）メチル］オキシ｝フェニル）アセトアミド
該サブタイトル化合物をＮ−［４−フルオロ−２−（２−メチル−アロイルオキシ）−フェニル］−アセトアミドから実施例８ｉｉ）の記載と類似の方法によって製造した。
¹H-NMR (300MHz, CDCl₃):δ 8.31-8.26 (dd, 1H,), 7.79 (bs, 1H), 6.75-6.65 (m, 2H), 4.14 (d, 1H), 3.97 (d, 1H), 2.93 (d, 1H), 2.80 (d, 1H), 2.21 (s, 3H), 1.50 (s, 3H).
APCI-MS: m/z 240 [MH⁺]

実施例２７５
Ｎ−（４−ヒドロキシ−２−｛（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ）^＊−３−［（３Ｓ）−３−（４−クロロ−フェノキシ）−ピロリジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−シクロシクロペンチルオキシ｝−フェニル）−アセトアミド（ジアステレオマー混合物）
ｉ）Ｎ−｛４−メトキシ−２−［（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）^＊−６−オキサビシクロ［３．１．０］−２−ヘキシルオキシ］フェニル｝アセトアミド（３２ｍｇ、１２２μｍｏｌ）及び（３Ｓ）−３−（４−クロロ−フェノキシ）−ピロリジン（２４ｍｇ、１２２μｍｏｌ）をアセトニトリル（１ｍｌ）中のＬｉＣｌＯ_４の２Ｍ溶液中に溶解し、そしてシールした管で１００℃に加熱した。酢酸エチルによる希釈、中性水性ワークアップ、及び溶媒の蒸発により、６２ｍｇ（１１０％）の粗付加生成物を得、これをジクロロメタン（１ｍｌ）中のボルトリブロミド（ＣＨ_２Ｃｌ_２中の１Ｍ、０．３７ｍｌ、３７１μｍｏｌ）と室温で終夜反応させた。反応物をメタノール（１．０ｍｌ）でクエンチし、そしてすべての揮発成分を蒸発させた。残りの粗生成物を逆相ＨＰＬＣに付し、３０ｍｇ（５４％）のタイトル化合物をジアステレオマー混合物として得た。
MS-APCI+ : m/z 447.1 [MH+].

ｖ）Ｎ−［２−（｛（２Ｓ）−３−［（３Ｓ）−３−（４−クロロフェノキシ）ピロリジニル］−２−ヒドロキシプロピル｝オキシ）−４−ヒドロキシフェニル］アセトアミド
タイトル化合物を実施例２５４と類似する方法によって、ｉｖ）から製造した（１５０ｍｇ）。凍結乾燥後の取得した生成物は、白色無定形固体であった（１０１ｍｇ、５７％）。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃+1 drop DMSO-d₆):δ 8.7 (bs, 1H); 8.34 (s, 1H);
8.73 (d, 1H); 7.18 (d, 2H); 6.73 (d, 2H); 6.40-6.31 (m, 2H); 4.99-4.93 (m, 1H);
4.4-1.9 (bm, 6H); 4.31-4.23 (m, 1H); 3.88-3.78 (m, 2H); 3.39-3.25 (m, 2H);
2.4-2.2 (m, 2H); 2.07 (s, 3H)
APCI-MS: m/z 421, 423 [MH⁺]

方法
ＴＨＰ−１細胞の培養
細胞を凍結アリコートから３７℃で急速に融解し、そしてGlutamax及び１０％熱不活性化ウシ胎児血清を添加し、抗生物質を添加していない、５ｍｌのＲＰＭＩ−１６４０培地（ＲＰＭＩ＋１０％ＨＩＦＣＳ）を含む２５ｃｍフラスコに再懸濁した。第３日で、培地を廃棄しそして新鮮培地と交換した。