JP2003520763A - 炎症症状を治療するためのｈｍｇ１のアンタゴニスト - Google Patents
炎症症状を治療するためのｈｍｇ１のアンタゴニストInfo
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Abstract
(57)【要約】
敗血症性ショックおよびＡＲＤＳ（急性呼吸促進症候群）を含めた敗血症を治療するための医薬組成物および方法であって、有効量のＨＭＧ１アンタゴニストを投与することを含む医薬組成物および方法が開示される。敗血症または敗血症性ショックの重症度または考え得る致死率をモニタリングするための診断方法であって、敗血症または敗血症性ショック症状を示しているかまたは示す危険性のある患者におけるＨＭＧ１の血清濃度を測定することを含む方法も開示される。最後に、体重損失をもたらすか、または肥満症を治療するための医薬組成物および方法であって、有効量のＨＭＧ１または治療的活性ＨＭＧ１断片を投与することを含む医薬組成物および方法が開示される。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、炎症性サイトカインカスケードの活性化を特徴とする、特に敗血症
性ショックおよびＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫症候群）を含めた敗血症疾患を治療す
るための医薬組成物および方法であって、高移動度グループ１タンパク質（ＨＭ
Ｇ１）に対する有効量のアンタゴニストを投与することを含む組成物および方法
を提供する。本発明はさらに、敗血症および関連症状の重症度をモニタリングす
るための診断方法であって、炎症性サイトカインカスケードの活性化を特徴とす
る疾患の症状を示している患者におけるＨＭＧ１の血清濃度を測定することを含
む方法を提供する。最後に、本発明は、体重損失をもたらすか、または肥満症を
治療するための医薬組成物および方法であって、有効量のＨＭＧ１タンパク質ま
たはＨＭＧ１遺伝子の遺伝子産物の治療的活性断片を投与することを含む医薬組
成物および方法を提供する。 【０００２】 ［発明の背景］ 敗血症は、感染または損傷後に発症するしばしば致命的となる臨床症候群であ
る。敗血症は、入院患者における最多死因である。細菌内毒素（リポ多糖、ＬＰ
Ｓ）の投与を基礎にしたグラム陰性敗血症の実験モデルは、共通した根元的炎症
性サイトカインカスケードの活性化による致死的敗血症および敗血症に関連した
症状の病因メカニズムの理解の改良をもたらした。宿主応答性メディエータのこ
のカスケードは、重症内毒素血症における終局的致死性の急性初期メディエータ
として広範に研究されてきたＴＮＦ、ＩＬ−１、ＰＡＦおよびその他のマクロフ
ァージ由来因子を含む（Zhang and Tracey, In The Cytokine Handbook, 3rd ed
. Ed. Thompson（Academic Press Limited, USA）.515-547, 1998）。 【０００３】 残念ながら、内毒素血症のこれらの個々の「初期」メディエータの阻害を基礎
にした療法的アプローチは、ヒト患者における敗血症に対する大規模予測臨床試
験における限定成功例にのみ応じただけである。これらの期待はずれの結果から
、宿主応答における後期出現因子が、敗血症および関連疾患における病因および
／または致死性を決定するのに重要であり得ると推論できる。したがって、特に
内毒素血症が臨床的敗血症および関連臨床疾患を代表することから、重症内毒素
血症の広範な多系病因の一部または全部に関してあるいは致死性に関して、必要
なおよび／または十分なこのような推定「後期」メディエータを発見することが
必要である。 【０００４】 ＨＭＧ１は、急に出現する高移動度群（ＨＭＧ）の非ヒストンクロマチン関連
タンパク質に属する３０ｋＤａ染色体核タンパク質である。一群として、ＨＭＧ
タンパク質は、独特のＤＮＡ構造を認識し、ヌクレオソーム構造および安定性の
確定を含めた多様な細胞機能に、ならびに転写および／または複製に関連づけら
れてきた。ＨＭＧタンパク質は、ポリアクリルアミドゲル中での高い電気泳動移
動度を有するクロマチン構成成分としてJohnsとGoodwinにより最初に性状解析さ
れた（The HMG Chromosomal Proteins, E.W. Johns, Academic Press, London,
1982参照）。高等真核生物は、ＨＭＧタンパク質の３つのファミリー、即ちＨＭ
Ｇ−１／−２ファミリー、ＨＭＧ−１４／−１７ファミリーおよびＨＭＧ−１／
−Ｙファミリーを示す。ファミリーはサイズおよびＤＮＡ結合特性により区別可
能であるが、しかしそれらはその物理的特性において類似する。ＨＭＧタンパク
質は、種を通して高度に保存され、遍く分布されて、非常に豊富であり、そして
０．３５ＭのＮａＣｌ中のクロマチンから抽出可能であり、５％過塩素酸または
トリクロロ酢酸中に可溶性である。一般に、ＨＭＧタンパク質は、ＤＮＡを折り
曲げて、種々の転写因子とそれらのコグネイト配列（例えばプロゲステロン受容
体、エストロゲン受容体、ＨＯＸタンパク質、ならびにＯｃｔ１、Ｏｃｔ２およ
びＯｃｔ６）との結合を促すと考えられる。近年、いくつかの転写因子およびそ
の他のＤＮＡ相互作用タンパク質を含めたタンパク質の大きい非常に多様な群が
、ＨＭＧ１に類似した１つまたはそれ以上の領域を含有する、ということが明ら
かになってきて、この特徴はＨＭＧ１ボックスまたはＨＭＧ１ドメインとして知
られるようになった。ＨＭＧ１をコードするｃＤＮＡは、ヒト、ラット、マス、
ハムスター、ブタおよび仔ウシ細胞からクローン化されており、ＨＭＧ１はすべ
ての脊椎動物細胞核中に豊富に存在すると考えられる。本タンパク質は、８０％
範囲の種間配列同一性で高度に保存されている。クロマチン中では、ＨＭＧ１は
、ヌクレオソーム間のリンカーＤＮＡと、そして種々の非β−ＤＮＡ構造、例え
ばパリンドローム、十字形およびステム−ループ構造、ならびにシスプラチン修
飾ＤＮＡと結合する。ＨＭＧ１により結合されるＤＮＡは、一般に、配列非感受
性であると考えられる。ＨＭＧ１は洗浄済み核またはクロマチンから最も高頻度
に調製されるが、しかし、当該タンパク質はまた細胞質中でも検出されている（
Landsman and Bustin, BioEssays 15:539-546, 1993; Baxevams and Landsman,
Nucleic Acids Research 23:514-523, 1995で再検討）。今日まで、ＨＭＧタン
パク質といずれかの臨床症状または疾患との間に関連は確立されていない。 【０００５】 あるいはＨＭＧ１は、発生中の脳において豊富に発現されるヘパリン結合タン
パク質として同定され、その高度な二極性配列のため「アンホテリン」と称され
ており、これは約８０アミノ酸正荷電ドメイン（ＨＭＧ１ボックス）と一続きの
約３０の連続したグルタミン酸またはアスパラギン酸残基を含む酸性Ｃ末端ドメ
インとの２つの内部反復を有する。アンホテリン／ＨＭＧ１は上皮、特にニュー
ロン細胞の形質膜の外表面に局在化されており、この場合、それは神経細胞のフ
ィリポジア（filipodia）に特異的に局在化されている。アンホテリン／ＨＭＧ
１は突起（神経突起）伸長に必要であり、アンホテリン／ＨＭＧ１はまたニュー
ロン−グリア相互作用にも関与し得る、ということを阻害試験は示唆した（Mere
nmies et al., J. Biol. Chem. 266:16722-16729, 1991; Merenmies et al., J.
Biol. Chem. 266:16722-16729, 1991; Milev et al., J. Biol. Chem. 273:699
8-7005, 1998;およびSalmivirta et al., Exp. Cell Res. 200:444-451, 1992）
。アンホテリン／ＨＭＧ１は、化学誘導物質ヘキサメチレンビスアセトアミドに
よる刺激後にマウス赤白血病細胞から放出され得る（Melloni et al., Biochem.
Biophys. Res. Commun. 210:82-89, 1995）。ＨＭＧ１遺伝子の遺伝子産物は、
α−ＰＫＣを刺激することにより分化促進因子として機能する、ということを過
去の研究は示唆している（Melloni et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 2
10:82-89, 1995;およびMelloni et al., FEBS Lett. 368:466-470, 1995）。 【０００６】 ＨＭＧ１遺伝子産物は、プラスミノーゲンおよび組織型プラスミノーゲン活性
化因子（ｔ−ＰＡ）と相互作用し、細胞侵襲および組織再造形中の細胞外タンパ
ク質分解に一役を演じることが知られている系である細胞表面でのプラスミン生
成を有効に促進する、ということが示されている。アンホテリン／ＨＭＧ１は、
進行性グリコシル化最終生成物（ＲＡＧＥ）の受容体と相互作用することも示さ
れている（Mohan et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 182:689-696, 1992
; Yamawaki et al., J. Neurosci. Res. 44:586-593, 1996; Salmivirta et al.
, Exp. Cell Res. 200:444-451, 1992;およびVassalli et al., J. Clin. Inves
t. 88:1067-1072, 1991）、（Redlitz and Plow, Baillieres Clin. Haematol.
8:313-327, 1995;およびParkkinen et al., J. Biol. Chem. 266:16730-16735,
1991）。 【０００７】 サイトカイン媒介性炎症カスケードを防止し、広範な種々のサイトカイン媒介
性炎症性疾患における療法的活性を有し得る改良された作用物質を発見すること
が当業界では長きに亘って必要とされている。本発明は、敗血症および炎症性サ
イトカインカスケードの一般的活性化により関連づけられるその他の疾患におけ
る毒性、病因および／または致死性を媒介する作用物質を同定するための研究調
査の経過中になされた。 【０００８】 炎症性サイトカインカスケードにより媒介される疾患および症状は、多数ある
。このような症状としては、以下に群別された疾患カテゴリーが含まれる： 全身性炎症性応答症候群、これには以下が含まれる： 敗血症症候群 グラム陽性敗血症 グラム陰性敗血症 培養陰性敗血症 真菌性敗血症 好中球減少性発熱 尿路性敗血症 髄膜炎菌血症 外傷性出血 唸音 電離放射線曝露 急性膵炎 成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ） 再還流傷害、これには以下が含まれる： 後ポンプ症候群 虚血再還流傷害 心臓血管性疾患、これには以下が含まれる： 心臓性昏倒症候群 心筋梗塞 うっ血性心不全 感染性疾患、これには以下が含まれる： ＨＩＶ感染／ＨＩＶニューロパシー 髄膜炎 肝炎 敗血症性関節炎 腹膜炎 肺炎喉頭蓋炎 大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７ 溶血性尿毒症症候群／血栓崩壊性血小板減少性紫斑病 マラリア デング出血熱 リーシュマニア症 らい病 トキシックショック症候群 連鎖球菌性筋炎 ガス壊疸 Mycobacterium結核（ヒト型結核） Mycobacterium aviun Intracellulare（鳥型結核菌細胞内物質感染） Pneumocystis Carinii（ニューモシスティスカリニ）肺炎 骨盤炎症性疾患 睾丸炎／精巣上体炎 レジオネラ ライム病 Ａ型インフルエンザ エプスタイン−バーウイルス ウイルス関連血球貪食(hemiaphagocytic)症候群 ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎 産科学／婦人科学的症状、これは以下を含む： 早産 流産 不妊症 炎症性疾患／自己免疫疾患、これには以下が含まれる： 慢性関節炎／セロネガティブ関節症 変形性関節症 炎症性腸疾患 全身性エリトマトーデス 虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎視神経炎 特発性肺繊維症 全身性脈管炎／ウェーゲナー肉芽腫症 サルコイドーシス 睾丸炎／精管切除反転術 アレルギー性／アトピー性疾患、これには以下が含まれる： 喘息 アレルギー性鼻炎 湿疹 アレルギー性接触性皮膚炎 アレルギー性結膜炎 過敏性肺炎 悪性疾患、これには以下が含まれる： ＡＬＬ ＡＭＬ ＣＭＬ ＣＬＬ ホジキン病、非ホジキンリンパ腫 カポジ肉腫 結腸直腸癌 鼻咽頭癌 悪性組織球増殖症 新生物随伴症候群／悪性疾患の高カルシウム血症 移植片、これは以下を含む： 器官移植片拒絶 移植片対宿主疾患 悪液質 先天性、これは以下を含む： 嚢胞性繊維症 家族性血液食細胞性リンパ組織球増殖症 鎌状赤血球貧血 皮膚科学的、これは以下を含む： 乾癬 脱毛症 神経学的、これは以下を含む： 多発性硬化症 片頭痛 腎臓性、これは以下を含む： ネフローゼ症候群 血液透析 尿毒症 毒性、これは以下を含む： ＯＫＴ３療法 抗ＣＤ３療法 サイトカイン療法 化学療法 放射線療法 慢性サリチレート中毒 代謝性／特発性、これは以下を含む： ウィルソン病 血液色素症 α−１アンチトリプシン欠損症 糖尿病 橋本甲状腺炎 骨粗鬆症 視床下部−下垂体−副腎軸評価 原発性胆汁性肝硬変 【０００９】 ［発明の概要］ 本発明は、炎症性サイトカインカスケードにより媒介される症状（疾患）を治
療するための医薬組成物であって、有効量の、ＨＭＧ１のアンタゴニストまたは
阻害剤を含む組成物を提供する。好ましくは、ＨＭＧ１アンタゴニストは、ＨＭ
Ｇ１タンパク質と結合する抗体、ＨＭＧ１遺伝子アンチセンス配列およびＨＭＧ
１受容体アンタゴニストから成る群から選択される。本発明は、炎症性サイトカ
インカスケードにより媒介される症状の治療方法であって、有効量のＨＭＧ１ア
ンタゴニストを投与することを含む方法を提供する。別の実施形態では、本発明
の方法は、ＨＭＧ１アンタゴニストと組合せて第二作用物質を投与することをさ
らに含み、この場合、第二作用物質は、ＴＮＦ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＭＩ
ＦまたはＩＬ−６のような初期敗血症メディエータのアンタゴニストである。最
も好ましくは、第二作用物質は、ＴＮＦに対する抗体、あるいはＩＬ−１受容体
アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）である。 【００１０】 本発明はさらに、炎症性カスケードにより媒介される症状に伴うショック様症
状を示しているかまたはその症状を示す危険性のある患者に関する敗血症および
関連症状の重症度をモニタリングし、そして起こり得る臨床経過を予測するため
の診断および予後判定方法を提供する。本発明の診断および予後判定方法は、試
料中の、好ましくは血清試料中のＨＭＧ１の濃度を測定し、その濃度を、同様の
試料中のＨＭＧ１の正常濃度範囲を代表するＨＭＧ１に関する標準と比較し、そ
れにより高レベルのＨＭＧ１が乏しい予後または毒性反応の可能性を示すことを
包含する。本診断方法はまた、他の組織、または流体区画、例えば脳脊髄液また
は尿にも適用され得る。最後に、本発明は、体重損失をもたらすか、または肥満
症を治療するための医薬組成物および方法であって、有効量のＨＭＧ１またはそ
の治療的活性断片を投与することを含む医薬組成物および方法を提供する。 【００１１】 ［発明の詳細な説明］ 本発明は、ＬＰＳ、ＴＮＦまたはＩＬ−１による刺激後の培養マウスマクロフ
ァージ様細胞（ＲＡＷ２６４．７）により放出され、そしてこの細胞により調整
された培地中に蓄積する高誘導性３０ｋＤａタンパク質の発見および単離に基づ
いている。この単離ポリペプチドの部分的アミノ酸配列は、アンホテリンとして
も知られているＨＭＧ１タンパク質の配列と同一であり、このタンパク質はこれ
までにいずれもの疾患の病原に連結されていない。この情報を用いてＨＭＧ１を
コードするｃＤＮＡをクローン化し、その配列を発現させて、組換え体タンパク
質を得て、そのタンパク質を用いて特異的抗ＨＭＧ１抗体を生成した。 【００１２】 一連の予測的in vitroおよびin vivo実験で、治療的および診断的効力を確定
した。実験は、実施例の項に詳述する。例えば、マウスへの内毒素（ＬＤ100）
の投与後、血清ＨＭＧ１レベルは、敗血症の周知の「初期」メディエータ（例え
ばＴＮＦおよびＩＬ−１）より遅れて（１６時間で）増大し、ＨＭＧ１のプラト
ーレベルは１６〜３２時間保持された。致死的敗血症を有する患者は、正常健常
有志においては検出されない高血清ＨＭＧ１レベルを有した。さらに、被験動物
へのｒＨＭＧ１の急性実験的投与は、単独であっても亜致死量のＬＰＳと組合せ
ても、顕著な病理学的応答を、そして死さえも生じた。より低量のｒＨＭＧ１の
更なる分布投与スケジュールは、処置動物における有意の体重損失をもたらした
。これらの結果は、既知の「初期」メディエータ、例えばＴＮＦおよびＩＬ−１
と対照的に、ＨＭＧ１が内毒素血症のメディエータ、特に後期メディエータであ
るという証拠を示す。これらのデータはさらに、敗血症および関連症状の重症度
または考え得る致死性に対するマーカーとしての血清ＨＭＧ１の重要性を示す。 【００１３】 さらに、抗ＨＭＧ１抗体による治療は、マウスにおけるＬＤ100用量のＬＰＳ
からの最大限の防御を提供した。ＨＭＧ１はＴＮＦおよびＩＬ−１βによって誘
導可能であり、ｈｕＰＢＭＣからのＴＮＦ放出を用量依存的に刺激する。ＴＮＦ
はマクロファージ活性化のマーカーであり、したがって（暗示されるメカニズム
に限定されることなく、または理論に縛られずに）、ＨＭＧ１はサイトカインカ
スケードの下流再活性化を促し、これが次に、前炎症性サイトカイン応答の活性
化を伴う敗血症および関連症状における後期病因および致死性を媒介すると考え
られる。したがって、ＨＭＧ１は、感染および損傷に対する炎症性応答を媒介す
る場合に中心的役割を占め、ＨＭＧ１のアンタゴニストは炎症性カスケード活性
化の敗血症および関連症状における治療的利点を有すると思われる。炎症性サイ
トカインカスケードにおけるＨＭＧ１の出現は、後期の宿主応答を伝播するのに
適しており、毒性および致死性に関与する。本明細書中に記載される予測データ
は、ＨＭＧ１アンタゴニストの治療的効力を支持し、作用メカニズムに関する前
記の理論に支持される証拠を提供する。in vivo治療データは、概して炎症性サ
イトカインカスケードにより媒介される症状を、特に敗血症症状、例えば敗血症
ショック、敗血症症候群または炎症性サイトカインにより媒介されるその他の「
敗血症様」症状等を治療するための、概してＨＭＧ１アンタゴニストの効力、そ
して特に抗ＨＭＧ１抗体の効力を示した。さらに、ＨＭＧ１の個々の病原性およ
び毒性／致死性は、ＴＮＦ、ＭＩＦ、ＩＬ−１およびＩＬ−６のような「初期」
炎症性メディエータのアンタゴニストと同時投与した場合に、ＨＭＧ１アンタゴ
ニストが特に有効であることを示す。 【００１４】 要するに、１）ＨＭＧ１は細菌毒素による、または前炎症性サイトカイン（Ｔ
ＮＦまたはＩＬ−１β）による刺激後にマクロファージおよび下垂体細胞から放
出され、２）ＨＭＧ１はＬＰＳに曝露された動物の血清中および敗血症患者中に
蓄積し、そして３）ＨＭＧ１特異的抗体は臨床的敗血症および関連症状の予測的
致死内毒素血症動物モデルにおける死亡に対して防御することから、ＨＭＧ１は
炎症性反応のサイトカインメディエータである。 【００１５】 医薬組成物および投与方法 本発明の医薬組成物または本発明の製剤組合せは、それ自体（複合物または組
合せ）で、またはそれが適切な担体および賦形剤と混合される医薬組成物中で、
患者に投与され得る。本発明の医薬組成物または本発明の製剤組合せは、非経口
的に、例えば静脈内注射または注入、腹腔内注射、皮下注射または筋内注射によ
り投与され得る。本発明の医薬組成物または本発明の製剤組合せは、錠剤、ピル
、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー(slurries)、懸濁液等を形成する
ために担体および賦形剤を用いた適切な処方物により経口的にまたは直腸に投与
され得る。本発明の医薬組成物または本発明の製剤組合せは、局所的に、例えば
皮膚パッチにより投与されて、活性作用物質の一貫した全身レベルを達成する。
本発明の医薬組成物または本発明の製剤組合せは、局所用クリーム、皮膚または
粘膜パッチ、皮膚または粘膜表面への局所適用に適した液体またはゲル中に処方
され得る。本発明の医薬組成物または本発明の製剤組合せは、局所的または全身
的治療のために吸入器により気道に投与され得る。 【００１６】 本発明の医薬組成物または本発明の製剤組合せの用量は、本開示から当業者に
より確定され得る。上記医薬組成物または本発明の製剤組合せは、有効用量（投
与経路および活性作用物質の薬物動態による）の本発明の医薬組成物または製剤
組合せならびに、処方物の特定の投与経路（即ち、経口、非経口、局所または吸
入による）に適した適切な製剤担体および賦形剤を含有する。活性作用物質は、
混合、溶解、造粒、糖衣作製、乳化、カプセル封入、エントラッピングまたは凍
結乾燥法によって、製剤処方物に混合される。非経口投与のための製剤処方物と
しては、活性作用物質の水性溶液または水溶性形態の組合せが挙げられる。さら
に、活性作用物質の懸濁液は、油性注射懸濁液として調製されてもよい。適切な
親油性溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油、例えばゴマ油、または合成脂肪酸
エステル、例えばエチルオレエートまたはトリグリセリド、あるいはリポソーム
が挙げられる。水性注射懸濁液は、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソ
ルビトールまたはデキストランのような懸濁液の粘度を増大させる物質を含有し
てもよい。懸濁液は、安定剤または、活性作用物質の溶解度を増大させる作用物
質あるいはそれらの組合せを任意に含有して、より濃縮された溶液にさせてもよ
い。 【００１７】 経口投与のための製剤処方物は、活性作用物質と、固体賦形剤、例えば糖（例
えばラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトール）、セルロース
調製物（例えばデンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロ
ースおよびナトリウムカルボキシメチルセルロース）、ゼラチン、ガムまたはポ
リビニルピロリドンとを組合せることにより得られ得る。さらに、崩壊剤が付加
されてもよく、安定剤が付加されてもよい。 【００１８】 アンチセンスオリゴマー 本発明は、ＨＭＧ１遺伝子またはｍＲＮＡ配列の発現を抑制または遮断するの
に有効な配列を有するアンチセンスオリゴマーを提供する。標的遺伝子産物の発
現を抑制するための特異的オリゴヌクレオチドを用いるアンチセンス技術は、ヒ
ト疾患のための治療様式として開発中である。アンチセンスオリゴヌクレオチド
アンタゴニストの最適化に寄与するいくつかの選別判断基準が利用可能である。
例えば、５０％またはそれ以上のＧＣ含量を有する配列を選択するのが得策であ
る。好ましい配列は、標的タンパク質のＡＵＧ開始コドンに及ぶが、しかしコー
ド領域における部位および５’ＵＴＲも等しく十分に成し遂げ得る。このような
配列は、一般に約１８〜３０ヌクレオチド長であり、タンパク質発現を抑制する
ためにＨＭＧ１ ｃＤＮＡ配列からのＡＴＧ開始コドンと重複するよう選択され
る。より長いオリゴマーがしばしば、より大きい程度に標的を抑制するとわかっ
ているが、これは、アンチセンス試薬として選択される一次オリゴヌクレオチド
のための好ましい長さが約２５マーであることを示す。これらの判断基準に関し
て、典型的には、３つのオリゴヌクレオチド配列が選択され、オリゴヌクレオチ
ド配列、例えば「逆」オリゴヌクレオチドまたは、アンチセンス配列のほぼすべ
ての第四塩基が無作為化されるオリゴヌクレオチドを制御するアンタゴニストの
活性に関して比較される。したがって、ＨＭＧ１に対するアンチセンスオリゴマ
ー配列を作製するための好ましい配列は、ＨＭＧ１ ｃＤＮＡ配列からのＡＴＧ
開始コドン（下線）を重複するよう選択された２５マー配列： ＧＡＧＧＡＡＡＡＡＴＡＡＣＴＡＡＡＣＡＴＧＧＧＣＡＡＡＧＧＡＧＡＴＣＣＴ
ＡＡＧＡＡＧ［配列番号５］ であり、このような好ましいアンチセンス配列は、ＨＭＧ１のアンタゴニストと
してin vitro比較のためのアンチセンスオリゴヌクレオチド剤（および適切なコ
ントロール）を構築するために用いられる。これらのin vitroデータは、匹敵す
る設計のアンチセンス剤を用いたヒト臨床実用性を予測する。 【００１９】 ＨＭＧ１特異的抗体 本明細書中に開示された抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであっ
てもよく、多数のヒト、非ヒト真核生物、細胞、真菌または細菌供給源のいずれ
かからのものであってもよい。抗体は、ゲノムまたはベクター保有コード配列に
よりコードされてもよく、アジュバントを用いても用いない場合も、生来のまた
は組換え体のＨＭＧ１またはその断片に対して引き出されてもよい。抗体の作製
方法は、抗体を生成および産生するための当業界で周知の方法および手法である
。一般に、ＨＭＧ１に対する中和抗体（即ち、特にその前炎症性サイトカイン様
役割に関してＨＭＧ１の生物学的活性を抑制するもの）が、治療的適用のために
好ましいが、一方、非中和抗体も診断用途に適切でありうる。このような有用な
抗体の例としては、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、一本鎖および種
々のヒトまたはヒト化型の抗体、ならびに種々のそれらの断片、例えばＦａｂ断
片および特殊化発現系から産生される断片が挙げられるが、これらに限定されな
い。 【００２０】 診断アッセイ ここで提供される診断アッセイは、ポリクローナル若しくはモノクローナルま
たはその両方であり得る抗ＨＭＧ１抗体を使用する。診断手法は、生物学的流体
中のＨＭＧ１遺伝子の遺伝子産物の濃度を測定するための標準抗体ベースの技術
を利用することができる。好ましい標準診断手法は、ＥＬＩＳＡアッセイおよび
ウエスタン技法である。 【００２１】 実施例１：内毒素血症の「後期」メディエータとしてのＨＭＧ１の同定 本実施例は、敗血症において、ならびに炎症性サイトカイン活性により特性化
される関連症状において一役を演じる後期放出マクロファージ由来因子を同定し
、単離するための実験の結果を提供する。本実施例で報告される実験は、ＴＮＦ
による培養物の刺激後のマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７細胞−調整培地
を試験した。マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７細胞は、アメリカン・タイ
プ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ、Rockville, MD, USA）から入手し、
１０％ウシ胎仔血清および１％グルタミンを補充したＤＭＥＭ下での培養中で増
殖させた。集密性が７０〜８０％に達したら、培地を無血清ＯＰＴ１−ＭＥＭ
Ｉ培地に取り換えて、培養物を前炎症性サイトカイン（例えばＴＮＦαまたはＩ
Ｌ−１）あるいは細菌内毒素（ＬＰＳ）で刺激した。 【００２２】 前記の刺激化マクロファージ培養物から放出されたタンパク質を測量した。特
に、異なる時点で、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）により細胞および細
胞調整培地を別々に回収した。１０ｋＤａのＭｒカットオフを用いたアミコン(A
micon)膜（Amicon Inc., Beverly, MA, USA）上での限外濾過により、調整培地
中のタンパク質を濃縮し、その後、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分別して、クーマシ
ーブルー（３０％メタノール／１０％酢酸中の１．２５％クーマシーブルーＲ２
５０）で染色した。３０％メタノール／７％酢酸で脱色して、対象タンパク質（
単数または複数）（即ち、刺激化培養物の調整培地中に優先的に蓄積したもの）
をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルから切り取って単離し、Ｎ末端シーケンシング分析（Co
mmonwealth Biotechnologies, Inc., Richmond, VA, USA）を施した。 【００２３】 コントロール（ＴＮＦα刺激なし）対ＴＮＦ刺激化ＲＡＷ２６４．７細胞にお
ける蓄積タンパク質のプロフィールのＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル分析の比較で、細胞
−調整培地中のその濃度が１６時間の刺激後に有意に増大された強誘導性３０ｋ
Ｄａタンパク質が明示された。この単離タンパク質のアミノ酸配列分析は、その
Ｎ末端配列をＧｌｙ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒ
ｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ［配列番号１］として明
示した。関連遺伝子データベースの検討は、ＨＭＧ１のＮ末端アミノ酸配列との
１００％の同一性が見出された。 【００２４】 これらのデータは、ＨＭＧ１をＬＰＳ刺激化マクロファージ培養物の「後期出
現」生成物として、したがって、前炎症性メディエータの候補として同定した。
ヒト臨床症状を予測する細胞および動物モデルシステムにおける組換え的生成Ｈ
ＭＧ１および／または抗ＨＭＧ１抗体の投与により、この活性を確証した。 【００２５】 実施例２：ＨＭＧ１の細胞性供給源 本実施例は、細胞供給源がＴＮＦ、ＩＬ−１および／またはＬＰＳに応答にお
けるＨＭＧ１放出能を示す。試験した細胞は、ＧＨ3下垂体細胞、マウスマクロ
ファージＲＡＷ２６４．７細胞、ヒト一次末梢血単核細胞（ｈｕＰＢＭＣ）、ヒ
ト一次Ｔ細胞、ラット副腎ＰＣ−１２細胞およびラット一次腎臓細胞を含む（表
１）。ラット下垂体ＧＨ3細胞株をアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクシ
ョン（ＡＴＣＣ、Rockville, MD, USA）から入手して、１０％ウシ胎仔血清およ
び１％グルタミンを補充したＤＥＭＥ中で培養した。ヒトＰＢＭＣおよびＴ細胞
を健常ドナーの全血から新たに単離して、前記と同様に１０％ヒト血清を補充し
たＲＰＭＩ１６４０中で培養した（Zhang et al., J. Exp. Med. 185:1759-1768
, 1997）。集密性が７０〜８０％に達したら、培地を無血清ＯＰＴ１−ＭＥＭ
Ｉ培地に取り換えて、培養を前炎症性サイトカイン（例えばＴＮＦαまたはＩＬ
−１）あるいは細菌内毒素（ＬＰＳ）で刺激した。 【００２６】 ヒトＴ細胞、ラット副腎（ＰＣ−１２）細胞およびラット一次腎細胞は、ＨＭ
Ｇ１特異的抗体を用いた全細胞溶解物のウエスタンブロット分析により実証した
場合、細胞関連ＨＭＧ１を含有したが、ＨＭＧ１は、ＴＮＦ、ＩＬ−１βまたは
ＬＰＳで刺激後、これらの培養物の培地中に有意に蓄積しなかった（表１）。 【００２７】 【表１】 【００２８】 ＴＮＦ、ＩＬ−１β（各々の最小有効濃度＝５ｎｇ／ｍｌ）および細菌内毒素
（ＬＰＳ、最小有効濃度＝１０ｎｇ／ｍｌ）は、時間−および用量−依存性様式
でヒトＰＢＭＣからのＨＭＧ１の放出を誘導した（表１）。ＩＦＮ−γ単独（０
〜２００Ｕ／ｍｌ）は前記の細胞のいずれからもＨＭＧ１放出を誘導しなかった
が、しかし、ＴＮＦまたはＩＬ−１βとの組合せで付加した場合には、ＩＦＮ−
γはマクロファージから用量依存的にＨＭＧ１放出を増強し、１００Ｕ／ｍｌの
濃度のＩＦＮ−γにより最大３倍増強した。トリパンブルー排除により判定した
場合、細胞生存能(viability)はＴＮＦ、ＩＬ−１βまたはＬＰＳによる影響を
受けなかったため（コントロールに関しては９０〜９２±５％の生存、これに対
して１００ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ、ＩＬ−１βまたはＬＰＳの存在下では８８〜９
５±４％）、ＨＭＧ１の放出は細胞死のためではなかった。ウエスタンブロット
分析により確定した場合、下垂体細胞およびマクロファージにより放出されたＨ
ＭＧ１の量は、ＨＭＧ１の細胞内濃度と逆相関したが、これは、放出物質が、一
部は、前成形の細胞関連ＨＭＧ１タンパク質に由来することを示す。 【００２９】 種々の正常ヒト組織から調製されたｍＲＮＡに対するＨＭＧ１特異的プローブ
のハイブリダイゼーション（ブロット基質は商業的供給元から入手可能）により
、in vivoでの循環ＨＭＧ１の考え得る供給源を査定した。その結果を図５に要
約した。いくつかの冨マクロファージ組織（肺、肝臓、腎臓、膵臓および脾臓）
は、最も豊富なＨＭＧ１ ｍＲＮＡ発現を示した。低い発現は、下垂体、骨髄、
胸腺、リンパ節および副腎で観察された。ＨＭＧ１発現の相対的組織分布に関す
る情報を提供する他に、本試験は、組織試料中のＨＭＧ１特異的核酸配列に関す
るアッセイの実際的可能性および実益を示す。 【００３０】 実施例３：in vitroおよびin vivoでの組換え体ＨＭＧ１投与 本実施例は、周知の組換えＤＮＡ技法によりＨＭＧ１を生成するための手法を
詳述する。ＰＣＲによりＨＭＧ１開放読取り枠を増幅し、発現ベクター（ｐＣＡ
Ｌ−ｎ）中でサブクローニングした。要するに、 以下の配列：５’−ＣＣＣ
ＧＣＧ ＧＡＴ ＣＣＡ ＴＣＧ ＡＧＧ ＧＡＡ ＧＧＡ ＴＧＧ ＧＣＡ
ＡＡＧ ＧＡＧ ＡＴＣ ＣＴＡ−３’［配列番号２］および５’−ＣＣＣ Ｇ
ＣＡ ＡＧＣ ＴＴＡ ＴＴＣ ＡＴＣ ＡＴＣ ＡＴＣ ＡＴＣ ＴＴＣ Ｔ
−３’［配列番号３］を含有するプライマーを用いて、５ｎｇラット脳クイック
クローンｃＤＮＡ（カタログ番号＃７１５０−１、Clontech, Palo Alto, CA, U
SA）から、ＨＭＧ１ ｃＤＮＡの６４８ｂｐ開放読取り枠をＰＣＲ増幅した（９
４℃１’、５６℃２’、７２℃４５”、３０サイクル）。６８０ｂｐＰＣＲ生成
物（４μｇ）をＢａｍＨＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化して、ｐＣＡＬ−ｎベク
ター（Stratagene, La Jolla, CA, USA）のＢａｍＨＩ／ＨｉｎｄＩＩＩクロー
ニング部位にクローニングした。組換え体プラスミドを大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３
）ｐＬｙｓＳ（Novagen, Madison, WI, USA）にトランスフォームさせ、陽性ク
ローンをスクリーニングして、ＡＢＩ３７３Ａ自動蛍光シーケンサー（Applied
Biosystems, Foster City, CA, USA）上でのTag DyeDeoxyターミネーターサイク
ルシーケンシングキットを用いて、両鎖におけるＤＮＡシーケンシングにより確
証した。 【００３１】 組換え体ＨＭＧ１を発現するために、ＩＰＴＧ（１ｍＭ）を付加した場合、Ｏ
Ｄ600が０．６に達するまで激しく振盪しながら（２５０ｒｐｍ）３７℃で陽性
クローンを培養した。ＩＰＴＧ誘導の１２時間後、遠心分離（６５００ｒｐｍ、
１５分間）により細菌細胞を収穫し、凍結−解凍サイクルで溶解した。水溶性分
画を遠心分離（３０分間、１２，０００ｒｐｍ）後に収集し、製造元（Stratage
ne）の指示通りに、カルモジュリン結合樹脂カラム上で組換え体ＨＭＧ１を精製
した。Detoxi-Gel内毒素除去ゲル（Pierce, Rockford, IL, USA、カタログ番号
＃２０３４４）を用いて細菌内毒素を組換え体ＨＭＧ１から除去し、リムラス・
アメボサイト細胞溶解物試験（ＬＡＬ試験、カタログ番号＃５０−６４８Ｕ、Ｑ
ＣＬ−１０００色原性ＬＡＬ、Bio-Whittaker, Inc., Walkersville, MD, USA）
により、残留ＬＰＳ含量を確定した。精製組換え体ＨＭＧ１をヒト末梢血単核球
（ＨｕＰＢＭＣ）の培養物に付加し、刺激後４時間目にＥＬＩＳＡによりＴＮＦ
に関して上清をアッセイした。ＬＰＳ−中和剤ポリミキシンＢ（１０μｇ／ｍｌ
）を組換え体ＨＭＧ１と同時に付加して、ＴＮＦ放出に及ぼす如何なる夾雑ＬＰ
Ｓの作用も排除した。さらに、外因性ＬＰＳの付加的内毒素血症チャレンジを用
いてまたは用いずに、組換え的に得られたＨＭＧ１を被験動物に投与して、in v
ivoでの高レベルのＨＭＧ１の病原可能性を調べた（図２Ｂおよび２Ｃ参照）。
いくつかの実験では、本明細書中に詳述したように、ＴＮＦに関してアッセイさ
れるＨＭＧ１処置動物から血清試料を確保した（図１Ｂ参照）。 【００３２】 前記の手法は、ＨＭＧ１ペプチド配列に見合ったアミノ酸末端延長としての３
．０ｋＤａカルモジュリン結合ドメインおよびトロンビン切断部位を包含する融
合ペプチドとして組換え体ＨＭＧ１を提供する。いくつかの実験では、融合タグ
を少量の組換え体タンパク質から除去し、完全融合タンパク質の生物活性を切断
ＨＭＧ１ペプチドと比較した。生物学的活性の有意差は認められず、付加的実験
（特に組換え的産生ＨＭＧ１の動物への投与を要するもの）を、典型的には（非
切断）融合タンパク質を用いて実施した。 【００３３】 図３Ａおよび３Ｂで実証したように、組換え的に得られたＨＭＧ１のin vitro
またはin vivo投与は活発なＴＮＦ応答を誘導したが、これは、前炎症性活性を
有する後期出現ＬＰＳ誘導性マクロファージ由来内因性メディエータとしてのＨ
ＭＧ１の同一性を確証する。 【００３４】 実施例４：抗ＨＭＧ１抗体および免疫検出 本実施例は、ＨＭＧ１に対するポリクローナル抗体を作出し、使用する実験の
結果を提供する。要するに、ＨＭＧ１のＮ末端アミノ酸配列に対応するオリゴペ
プチドに対する、または精製組換えＨＭＧ１に対するポリクローナル抗体を当業
界で周知の標準手法により、ウサギにおいて作出した。要するに、配列ＧＫＧＤ
ＰＫＫＰＲＧＫＭＳＳＣ［配列番号４］を有するオリゴペプチドの８つのコピー
を、放射状分枝リシン樹状突起（小免疫原的不活性コア）に固定した。これらの
大型高分子物質を、０日目の予備採血後１、２および４週間目に、皮下および皮
内（０．５〜１０ｍｇ／注射）の両方でウサギに３回注射した。最終免疫感作後
２週間目に、ウサギを採血し、１．０ｍｇの抗原を用いて筋内追加免疫し、その
後２週間後に二次採血した。あるいは、組換え体ＨＭＧ１に対するポリクローナ
ル抗体を生成させるために、同様のプロトコールにしたがって、組換え体ＨＭＧ
１融合ペプチド（１００μｇ／注射）でウサギを免疫感作した。ＨＭＧ１に対し
て反応性である（即ち、ＨＭＧ１の生物学的活性を結合し、いくつかの場合には
、中和し、または相殺する）モノクローナル抗体は、本明細書中に記載したＨＭ
Ｇ１抗原、または免疫原のようなその他のＨＭＧ１ペプチド断片を用いて、当業
界で周知の方法により調製するのが便利である。このようなモノクローナル抗体
、および／またはそれらを生成するハイブリドーマは、ＨＭＧ１に対して反応性
である種々の「ヒト化」抗体（すべて、当業界で既知の方法による）を生成する
のに有用であり、このヒト化抗体は本明細書中で教示されるように有用である。 【００３５】 ＨＭＧ１特異的抗体を用いて、ウエスタンブロッティング分析により、ＴＮＦ
またはＬＰＳでの処置後のＲＡＷ２６４．７細胞からのＨＭＧ１の誘導性放出を
測定した（図１）。要するに、４〜２０％勾配ゲル上でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによ
りタンパク質を分別し、ＰＶＤＦ膜に移して、Ｎ末端合成ＨＭＧ１抗原に対して
、または組換え体ＨＭＧ１に対して生じたウサギ抗血清でブロットした。製造元
（Amersham Life Science Inc., Arlington Heights, IL, USA）の指示通りにＥ
ＣＬキットを用いてシグナルを検出し、精製組換え体ＨＭＧ１の標準曲線を基準
に、ＮＩＨ１．５９画像ソフトウエアを用いて分析のためにデジタル化したウエ
スタンブロット上の帯域の光学強度を測定することにより、ＨＭＧ１のレベルを
確定した。 【００３６】 ＴＮＦまたはＬＰＳ処置の非存在下では、ＲＡＷ２６４．７細胞−調整培地中
にＨＭＧ１タンパク質は検出されなかったが、しかし、ＨＭＧ１は、このような
刺激後、高レベルで調整培地中に蓄積し、刺激後８〜２８時間目にプラトーに達
した（図１Ａ）。要するに、実施例１、３および図１Ａに示したデータは、マク
ロファージからのＨＭＧ１の放出は刺激特異的、ならびに時間−および用量−依
存性で、最大蓄積は、５ｎｇ／ｍｌという低い濃度でのＴＮＦによる刺激後８時
間以内に観察された、ということを示す。敗血症、敗血症ショックおよび関連症
状は、この予測モデルに用いられる単一大量致死的ＬＰＳボーラスとは定性的ま
たは定量的に異なる刺激に応答するヒトにおいて起こり得る、ということは十分
理解される。それにもかかわらず、実験的内毒素血症は、炎症性サイトカインカ
スケードの重要な構成成分を同定するための、そして予測される臨床的実用性を
有する特定のアンタゴニストを同定するための有益且つ予測的モデル系であった
。この点で、ＨＭＧ１アンタゴニストはおそらく、内毒素に対する応答における
ＴＮＦに対するＨＭＧ１の後期出現にかんがみて、ＴＮＦアンタゴニストより治
療的に魅力的である。 【００３７】 実施例５：in vivo動物モデルにおけるＨＭＧ１の検出 本実施例は、亜致死用量のＬＰＳ（ＬＤ50）の投与後の血清ＨＭＧ１を測定す
る、齧歯類におけるin vivo実験を説明する。マウスまたはラットをＬＰＳで処
置し、異なる時点で血清を収集して、ウエスタンブロッティング分析によりＨＭ
Ｇ１のレベルに関してアッセイした。精製ＨＭＧ１の標準曲線を基準に光学帯域
強度を測定することにより、ＨＭＧ１の血清濃度を概算した。ＬＰＳ後１６時間
までに血清レベルは有意に増大し、少なくとも３２時間、高い値を保持した（図
１Ｂ）が、ビヒクル処置コントロール動物においては検出されなかった。これら
のデータは、ＨＭＧ１が、炎症性サイトカインカスケードにおける後期出現メデ
ィエータであるために、敗血症およびサイトカイン毒性の関連疾患の診断のため
の、ならびにそれらの病気に対する製剤的介入のための特に魅力的な標的を代表
する、ということを示す。 【００３８】 実施例６：ＨＭＧ１に対する防御の利点 本実施例は、敗血症およびサイトカイン媒介性毒性の関連症状の治療に関連し
たＨＭＧ１のアンタゴニストの治療活性を測定するための予測in vivoアッセイ
の結果を提供する。本実施例では、ＨＭＧ１アンタゴニストは抗ＨＭＧ１抗体調
製物であった。前免疫血清で処置したコントロールは、４８時間以内に嗜眠、立
毛、下痢および死亡を生じた。内毒素血症のこれらの臨床的徴候は、抗ＨＭＧ１
抗体の投与により有意に防止された。雄Ｂａｌｂ／Ｃマウス（６〜７週、２０〜
２３グラム）を無作為に群別し（１０匹／群）、致死用量のＬＰＳ（１ｘＰＢＳ
中で５０ｍｇ／ｋｇ）の投与（腹腔内）前３０分に、コントロール（前免疫）ま
たは抗ＨＭＧ１血清（実施例４で作製したのと同様）で前処置した。他の実験群
には、ＬＰＳ投与後＋１２または＋１２および＋３６時間に、付加的用量の抗Ｈ
ＭＧ１血清を投与した。少なくとも２週間、外観および生存に関して、動物を観
察した。 【００３９】 組換え体ＨＭＧ１に対するポリクローナル抗体をウサギで作出し、ＥＬＩＳＡ
およびウエスタンブロッティング手法により特異性および力価に関して抗血清を
アッセイした。ポリクローナル抗血清は、例えばウエスタンブロット分析におけ
る組換え体ＨＭＧ１を免疫特異的に認識し（結合し）、そして粗製細菌溶解物中
のおよびマウス血清中に稀釈されていた精製タンパク質としての双方で、他のタ
ンパク質からｒＨＭＧ１を区別した。ウエスタンブロッティング分析において化
学発光増幅検出法を用いて、１：１０００までの稀釈でのポリクローナル抗ＨＭ
Ｇ１抗血清は、５０ｐｇという少ないｒＨＭＧ１タンパク質を検出するのに有用
であった。ＬＰＳチャレンジ（０時間）に比して、−０．５（１回投与の場合）
、−０．５および１２（２回投与の場合）または−０．５、１２および３６（３
回投与の場合）時間での指示（図２Ａ）量の抗ＨＭＧ１抗血清の投与は、ＬＰＳ
誘導性致死性に対して防御的であり、反復投与スケジュールは良好な防御を提供
した。 【００４０】 図２Ｂは、ｒＨＭＧ１が内毒素マウスにおける用量依存性致死性を引き起こし
たことを説明する。雄Ｂａｌｂ／Ｃマウス（２０〜２３グラム）を１０群に無作
為にわけて、ＬＰＳ（３．１５ｍｇ／ｋｇ；非致死量）を単独でまたは精製組換
え体ＨＭＧ１タンパク質と組合せて投与した。指示用量でのＬＰＳ試験後２、１
６、２８および４０時間目のＨＭＧ１の投与により、根元的内毒素血症の致死性
が有意に増大した。 【００４１】 図２Ｃは、用量の一関数としてのＨＭＧ１の個々の致死性毒性を説明する。精
製ｒＨＭＧ１を、指示用量での１回腹腔内ボーラス投与として、雄Ｂａｌｂ／Ｃ
マウス（５匹／処置群）に投与した。少なくとも４８時間マウスを観察した結果
、５００μｇ／マウスの用量でｒＨＭＧ１で処置したマウスの６０％がｒＨＭＧ
１試験の２４時間以内に死亡したが、これは、５００μｇ／マウス未満の１回投
与ＬＤ50を示す。 【００４２】 ウエスタンブロットでＨＭＧ１に対する免疫特異的反応性を示さなかった前免
疫血清の投与は、被験者にＬＰＳ媒介性死亡を被らせなかったため、抗ＨＭＧ１
抗体により付与される防御は特異的であった（図２Ａ）。さらに、ＨＭＧ１特異
的抗体は他のマクロファージ由来サイトカイン（例えば、ＩＬ−１およびＴＮＦ
）と交差反応せず、抗体が結合により防御を付与し、それによりこれらのメディ
エータを中和するという可能性を排除した。前炎症性サイトカインカスケードの
活性化を伴う敗血症、敗血症関連病原および敗血症関連疾患に対する防御は、サ
イトカインカスケードの１つよりも多い構成成分を標的とする組合せ療法により
改良し得る。ＨＭＧ１のアンタゴニストは、この点では、ＴＮＦ、ＩＬ−１，Ｍ
ＩＦおよびその他の炎症性メディエータの特異的アンタゴニストと、または炎症
性カスケードの多構成成分（例えば、アスピリン、ＮＳＡＩＤＳ、抗炎症性ステ
ロイド等）を抑制する炎症性応答のより広範な活性アンタゴニストと併合されて
、より有効な治療様式性を提供する。ＬＰＳ毒性に対する防御は、抗体用量関連
性であり、より多量の抗体のよる頻繁な投与は、死亡率を７０％まで下げた（図
２Ａ）。すべての実験において少なくとも２週間、マウスを観察した結果、後期
死亡は起きなかったが、これは、抗ＨＭＧ１抗体治療がＬＰＳ致死性に対する残
りの防御を付与し、死亡の時間をほとんど遅らせないことを示す。 【００４３】 実施例７：ヒト疾患におけるＨＭＧ１ 本実施例は、ＨＭＧ１およびヒト敗血症間の関連を確立し、それにより、ヒト
敗血症およびサイトカイン毒性の関連症状において一般的にＨＭＧ１アンタゴニ
ストを、特に抗ＨＭＧ１抗体を用いるための指標を支持する、というデータを提
供する。ｒＨＭＧ１の標準曲線を基準として、ウエスタンブロットフォーマット
で実施例４の場合と同様に生成したポリクローナル抗体を用いて、正常健常個体
および重症患者における血清ＨＭＧ１レベルを測定した。ＨＭＧ１は、正常コン
トロールにおいては観察できなかったが、重症敗血症患者においては高レベルに
蓄積した（表２）。 【００４４】 【表２】 【００４５】 これらのデータは、敗血症患者において血清ＨＭＧ１レベルの上昇が観察され
、血清ＨＭＧ１の最高レベルは致死症例で観察されることを示す（表２）。これ
らのデータはさらに、敗血症におけるＨＭＧ１アンタゴニストの治療的重要性を
示し、ＨＭＧ１の血清濃度を測定することにより敗血症についてのおよび敗血症
の重症度（即ち、潜在致死性）についてのアッセイの診断的実用性の証拠も提供
する。この診断アッセイは、炎症性サイトカインカスケードの活性化を伴う類似
の症状の重症度を診断するためにも有用である。 【００４６】 致死性対非致死性敗血症に関連した血清ＨＭＧ１レベルに関して、さらに被験
者をスクリーニングして、図６に記載したような結果（表２と累積的）を得た。
図６に要約したデータは、健常被験者８名、ならびにグラム陽性菌［バチルス属
のBacillus fragilis（１名）、エンテロコッカス属のEnterococcus facecalis
（１名）、連鎖球菌属の肺炎連鎖球菌（４名）、リステリア属のListeria monoc
ytogenes（１名）またはブドウ球菌属の黄色ブドウ球菌（２名）］、グラム陰性
菌［大腸菌（７名）、クレブシエラ属の肺炎桿菌（１名）、アシネトバクター属
のAcinetobacter calcoaceticus（１名）、シュードモナス属の緑膿菌（１名）
、フゾバクテリウム属のFusobacterium nucleatum（１名）、シトロバクター属
のCitrobacter freundii（１名）］または非同定病原体（５名）に感染した敗血
症患者２５名から得た血清試料を代表するものである。ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル電
気泳動により血清を分別し、正常ヒト血清中に稀釈した精製ｒＨＭＧ１の標準曲
線を基準に、ウエスタンブロッティング分析によりＨＭＧ１レベルを確定した。
ウエスタンブロッティングによる検出限界は、５０ｐｇである。ＨＭＧ１は正常
コントロールにおいては検出されないが、敗血症患者においては有意に増大した
、ということに留意されたい。非生存敗血症患者の血清中のＨＭＧ１の平均レベ
ル（Ｎ＝１３患者、平均ＨＭＧ１レベル＝８３．７±２２．３ｎｇ／ｍｌ）は、
生存者（Ｎ＝１２、平均ＨＭＧ１レベル＝２５．２±１５．１ｎｇ／ｍｌ、Ｐ＜
０．０５）より有意に高い。これらのデータは、敗血症およびサイトカイン活性
化の関連疾患の存在の、そしてこのような疾患および症状の重症度およびありそ
うな臨床的経過の診断および予後指標として、ＨＭＧ１配列（タンパク質または
核酸）に対する組織（制限血液または血清なしを含む）試料のスクリーニングの
実用性の直接的な証拠を提供する。 【００４７】 実施例８：ＨＭＧ１は前炎症性メディエータおよび重量損失を誘導する 本発明の結果は、ＨＭＧ１が炎症性サイトカインカスケードの後期放出メディ
エータ因子であるという証拠を提供する。一次ヒト末梢血単核球への組換え体Ｈ
ＭＧ１の付加は、刺激後４時間以内のＴＮＦの用量依存性誘導をもたらした（図
３Ａ）。ＨｕＰＢＭＣによるＴＮＦ放出の組換え体ＨＭＧ１による刺激は、ｉ）
精製組換え体ＨＭＧ１はＬＡＬ内毒素アッセイにより判定した場合、ＬＰＳが夾
雑せず、ｉｉ）ＬＰＳ中和剤ポリミキシンＢの付加はＨＭＧ１誘導性ＴＮＦ放出
に影響を及ぼさず、そしてｉｉｉ）トリプシンによる組換え体ＨＭＧ１調製物の
タンパク質分解的切断はＰＢＭＣ培養物に対するＴＮＦ放出活性を完全に無くし
たために、ＬＰＳ夾雑によるものではなかった。ＨＭＧ１刺激はまた、マクロフ
ァージを誘導し一酸化窒素（ＮＯ）を放出させた。 【００４８】 ＨＭＧ１がin vivoで血清ＴＮＦ放出を誘導したことを確証するために、精製
組換え体ＨＭＧ１をＢａｌｂ／Ｃマウスに腹腔内投与して、血液試料を収集して
、Ｌ９２９アッセイによりＴＮＦについてアッセイした。図３Ｂに示したように
、ＴＮＦはコントロール動物の血清中では検出可能でなかったが、組換え体ＨＭ
Ｇ１タンパク質の投与後２時間目に有意に増大された。 【００４９】 ＨＭＧ１遺伝子の組換え遺伝子産物の反復投与（１００μｇ／マウス／日）は
、マウスにおける有意の体重損失を引き起こした（図４）。メカニズムに関する
限定を伴わず、理論に縛られずに、これらのデータは、ＨＭＧ１が、in vitroお
よびin vivoの両方の条件下で前炎症性カスケードのフィードフォワード刺激物
として作用するという仮説と一致する。重量損失の予測モデルにおけるこれらの
in vivoデータも、ＨＭＧ１を含有する製剤処方物またはその治療的活性断片が
有効な重量損失療法であるという予測的証拠を提供する。 【００５０】 実施例９：ＨＭＧ１のin vivo供給源 前述のようにウエスタンブロット強度の定量により、下垂体切除とコントロー
ルとのラットにおける血清ＨＭＧ１レベルも測定した。コントロール（約２５ｎ
ｇ／ｍｌ）と比較した場合、下垂体切除ラット（約７５ｎｇ／ｍｌ）において、
内毒素チャレンジ（１．０ｍｇ／ｋｇでのＬＰＳ）後１２時間以内に有意に高い
ＨＭＧ１レベルが認められた。これらの結果は、下垂体細胞は血清ＨＭＧ１レベ
ルの主要供給源ではなく、マクロファージが定量的により重要な役割を演じ得る
、ということを示す。 【配列表】 【図面の簡単な説明】 【図１】 in vitro（図１Ａ）およびin vivo（図１Ｂ）でのＬＰＳによる
ＨＭＧ１放出の誘導をプロファイルする２つのグラフを示す。特に図１Ａは、Ｌ
ＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）で刺激後のマクロファージＲＡＷ２６４．７細胞の培
養上清中のＨＭＧ１の蓄積を示す。挿入図は、ＴＮＦによる誘導後のＲＡＷ２６
４．７細胞からのＨＭＧ１放出の誘導を示すウエスタンブロット（組換え体ＨＭ
Ｇ１に対して生じた抗体を使用）である。図１Ｂは、ＬＰＳ処理マウスの血清中
のＨＭＧ１の誘導を示す。ＬＰＳ投与後の種々の時点でＢａｌｂ／Ｃマウスから
の血清を収集し、組換え体ＨＭＧ１に対して生じた抗体を用いたウエスタンブロ
ットによりＨＭＧ１についてアッセイした。 【図２】 ＨＭＧ１が内毒素血症における病因および致死性のメディエータ
であることを説明する。図２Ａは、マウスに処置したＬＰＳ致死性に対する抗Ｈ
ＭＧ１抗体の防御作用を示す。ＬＰＳチャレンジ（０時間）に比して−０．５（
１回投与の場合）、−０．５および１２（２回投与の場合）または−０．５、１
２および３６（３回投与の場合）時間での指示量の抗ＨＭＧ１抗血清の投与は、
ＬＰＳ誘導性致死性に対して防御的であり、反復投与スケジュールは良好な防御
を提供した。図２Ｂは、ｒＨＭＧ１が内毒素マウスにおける用量依存性致死性を
引き起こしたことを説明する。雄Ｂａｌｂ／Ｃマウス（２０〜２３グラム）を、
１０群に無作為に分けて、ＬＰＳ（３．１５ｍｇ／ｋｇ；非致死量）を単独でま
たは精製組換え体ＨＭＧ１タンパク質と組合せて投与した。指示用量でのＬＰＳ
チャレンジ後、２、１６、２８および４０時間目のＨＭＧ１の投与は、根元的内
毒素血症の致死性を有意に増大した。図２Ｃは、用量の一関数としてのＨＭＧ１
の個々の致死性毒性を説明する。精製ｒＨＭＧ１を、指示用量での１回腹腔内ボ
ーラス投与として、雄Ｂａｌｂ／Ｃマウス（５匹／処置群）に投与した。少なく
とも４８時間マウスを観察した結果、５００μｇ／マウスの用量でｒＨＭＧ１で
処置したマウスの６０％がｒＨＭＧ１試験の２４時間以内に死亡したが、これは
、５００μｇ／マウス未満の１回投与ＬＤ50を示す。 【図３】 ＨＭＧ１がin vitro（図３Ａ）およびin vivo（図３Ｂ）の両方
でＴＮＦ放出を誘導したことを示す。特に図３Ａは、ＨＭＧ１が用量依存様式で
ｈｕＰＰＢＭＣｓからのＴＮＦ放出を誘導することを示す。新たに単離したｈｕ
ＰＢＭＣ培養物を指示用量の精製組換え体ＨＭＧ１タンパク質で刺激し、培地を
４時間後にサンプリングして、既知の免疫学的方法（ＥＬＩＳＡ）によりＴＮＦ
に関してアッセイした。図３Ａは、２つの実験（３連）における誘導性ＴＮＦ応
答の平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を示す。図３Ｂは、ＨＭＧ１の投与が処置マウスの血清
中のＴＮＦの蓄積を誘導したことを示す。Ｂａｌｂ／Ｃマウス（２０〜２３グラ
ム）を指示用量の精製組換え体ＨＭＧ１で腹腔内処置して、Ｌ９２９生物アッセ
イによるＴＮＦアッセイのために、血液試料を２時間後に採取した（ＴＮＦレベ
ルは平均±Ｓ．Ｅ．Ｍとして表される。Ｎ＝３）。 【図４】 ＨＭＧ１がマウスにおける体重損失を引き起こしたことを示す。
１００μｇ／マウス／日で３日間、精製ＨＭＧ１をマウスに腹腔内投与して、体
重をモニタリングした。図４は、３匹／群のマウスの正味体重変化の平均±Ｓ．
Ｅ．Ｍ．を示す。 【図５】 ＨＭＧ１ ｍＲＮＡの組織分布を示す。種々の組織のポリ（Ａ）+ ＲＮＡを含有するヒトＲＮＡマスターブロット（Clontech, Palo Alto, CA, USA
）を、すべて、当業界で周知の方法にしたがって、ＨＭＧ１ ｃＤＮＡインサー
トを含有する組換え体プラスミドを用いたＰＣＲにより合成された０．６ｋｂジ
ゴキシゲニン−１ １−ｄＵＴＰ標識化ＨＭＧ１ ｃＤＮＡプローブとハイブリ
ダイズさせた。要するに、１０ｎｇ／ｍｌのプローブ濃度で６５℃１６時間、ハ
イブリダイゼーション緩衝液（５×ＳＳＣ／２％ブロッキング試薬／０．１％Ｓ
ＤＳ／５０％ホルムアミド、Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN）中でハ
イブリダイゼーションを実施した。ハイブリダイゼーション後、フィルターを室
温で、０．５×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳで５分間、２回洗浄して、０．２×ＳＳ
Ｃ／０．１％ＳＤＳで１０分間、２回洗浄した。標準的方法により、ホスファタ
ーゼに結合された抗ジゴキシゲニン抗体と、検出試薬、約４−ニトロブルーテト
ラゾリウムクロリド（ＮＢＴ）および５−クロモ−４−クロロ−３−インドリル
−ホスフェート（ＢＣＩＰ）（Boehringer-Mannheim）を用いて、シグナルを検
出した。シルバー画像スキャナー（シルバースキャナーＩＩ、Lacie Limited, B
eaverton, OR）でブロットを走査して、相対光学濃度（恣意単位ＡＵで）をＮＩ
Ｈ１．５９イメージソフトウエアを用いて定量した。最高レベルは冨マクロファ
ージ組織で観察されたことに留意されたい。 【図６】 図６は、正常コントロール被験者の群と比較した場合、敗血症を
有する入院ヒト被験者において検出された血清ＨＭＧ１レベルの増大が検出し、
この場合、敗血症患者は、患者が死亡したかまたは生存したかに関してさらに分
類されたことを示す。
性ショックおよびＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫症候群）を含めた敗血症疾患を治療す
るための医薬組成物および方法であって、高移動度グループ１タンパク質（ＨＭ
Ｇ１）に対する有効量のアンタゴニストを投与することを含む組成物および方法
を提供する。本発明はさらに、敗血症および関連症状の重症度をモニタリングす
るための診断方法であって、炎症性サイトカインカスケードの活性化を特徴とす
る疾患の症状を示している患者におけるＨＭＧ１の血清濃度を測定することを含
む方法を提供する。最後に、本発明は、体重損失をもたらすか、または肥満症を
治療するための医薬組成物および方法であって、有効量のＨＭＧ１タンパク質ま
たはＨＭＧ１遺伝子の遺伝子産物の治療的活性断片を投与することを含む医薬組
成物および方法を提供する。 【０００２】 ［発明の背景］ 敗血症は、感染または損傷後に発症するしばしば致命的となる臨床症候群であ
る。敗血症は、入院患者における最多死因である。細菌内毒素（リポ多糖、ＬＰ
Ｓ）の投与を基礎にしたグラム陰性敗血症の実験モデルは、共通した根元的炎症
性サイトカインカスケードの活性化による致死的敗血症および敗血症に関連した
症状の病因メカニズムの理解の改良をもたらした。宿主応答性メディエータのこ
のカスケードは、重症内毒素血症における終局的致死性の急性初期メディエータ
として広範に研究されてきたＴＮＦ、ＩＬ−１、ＰＡＦおよびその他のマクロフ
ァージ由来因子を含む（Zhang and Tracey, In The Cytokine Handbook, 3rd ed
. Ed. Thompson（Academic Press Limited, USA）.515-547, 1998）。 【０００３】 残念ながら、内毒素血症のこれらの個々の「初期」メディエータの阻害を基礎
にした療法的アプローチは、ヒト患者における敗血症に対する大規模予測臨床試
験における限定成功例にのみ応じただけである。これらの期待はずれの結果から
、宿主応答における後期出現因子が、敗血症および関連疾患における病因および
／または致死性を決定するのに重要であり得ると推論できる。したがって、特に
内毒素血症が臨床的敗血症および関連臨床疾患を代表することから、重症内毒素
血症の広範な多系病因の一部または全部に関してあるいは致死性に関して、必要
なおよび／または十分なこのような推定「後期」メディエータを発見することが
必要である。 【０００４】 ＨＭＧ１は、急に出現する高移動度群（ＨＭＧ）の非ヒストンクロマチン関連
タンパク質に属する３０ｋＤａ染色体核タンパク質である。一群として、ＨＭＧ
タンパク質は、独特のＤＮＡ構造を認識し、ヌクレオソーム構造および安定性の
確定を含めた多様な細胞機能に、ならびに転写および／または複製に関連づけら
れてきた。ＨＭＧタンパク質は、ポリアクリルアミドゲル中での高い電気泳動移
動度を有するクロマチン構成成分としてJohnsとGoodwinにより最初に性状解析さ
れた（The HMG Chromosomal Proteins, E.W. Johns, Academic Press, London,
1982参照）。高等真核生物は、ＨＭＧタンパク質の３つのファミリー、即ちＨＭ
Ｇ−１／−２ファミリー、ＨＭＧ−１４／−１７ファミリーおよびＨＭＧ−１／
−Ｙファミリーを示す。ファミリーはサイズおよびＤＮＡ結合特性により区別可
能であるが、しかしそれらはその物理的特性において類似する。ＨＭＧタンパク
質は、種を通して高度に保存され、遍く分布されて、非常に豊富であり、そして
０．３５ＭのＮａＣｌ中のクロマチンから抽出可能であり、５％過塩素酸または
トリクロロ酢酸中に可溶性である。一般に、ＨＭＧタンパク質は、ＤＮＡを折り
曲げて、種々の転写因子とそれらのコグネイト配列（例えばプロゲステロン受容
体、エストロゲン受容体、ＨＯＸタンパク質、ならびにＯｃｔ１、Ｏｃｔ２およ
びＯｃｔ６）との結合を促すと考えられる。近年、いくつかの転写因子およびそ
の他のＤＮＡ相互作用タンパク質を含めたタンパク質の大きい非常に多様な群が
、ＨＭＧ１に類似した１つまたはそれ以上の領域を含有する、ということが明ら
かになってきて、この特徴はＨＭＧ１ボックスまたはＨＭＧ１ドメインとして知
られるようになった。ＨＭＧ１をコードするｃＤＮＡは、ヒト、ラット、マス、
ハムスター、ブタおよび仔ウシ細胞からクローン化されており、ＨＭＧ１はすべ
ての脊椎動物細胞核中に豊富に存在すると考えられる。本タンパク質は、８０％
範囲の種間配列同一性で高度に保存されている。クロマチン中では、ＨＭＧ１は
、ヌクレオソーム間のリンカーＤＮＡと、そして種々の非β−ＤＮＡ構造、例え
ばパリンドローム、十字形およびステム−ループ構造、ならびにシスプラチン修
飾ＤＮＡと結合する。ＨＭＧ１により結合されるＤＮＡは、一般に、配列非感受
性であると考えられる。ＨＭＧ１は洗浄済み核またはクロマチンから最も高頻度
に調製されるが、しかし、当該タンパク質はまた細胞質中でも検出されている（
Landsman and Bustin, BioEssays 15:539-546, 1993; Baxevams and Landsman,
Nucleic Acids Research 23:514-523, 1995で再検討）。今日まで、ＨＭＧタン
パク質といずれかの臨床症状または疾患との間に関連は確立されていない。 【０００５】 あるいはＨＭＧ１は、発生中の脳において豊富に発現されるヘパリン結合タン
パク質として同定され、その高度な二極性配列のため「アンホテリン」と称され
ており、これは約８０アミノ酸正荷電ドメイン（ＨＭＧ１ボックス）と一続きの
約３０の連続したグルタミン酸またはアスパラギン酸残基を含む酸性Ｃ末端ドメ
インとの２つの内部反復を有する。アンホテリン／ＨＭＧ１は上皮、特にニュー
ロン細胞の形質膜の外表面に局在化されており、この場合、それは神経細胞のフ
ィリポジア（filipodia）に特異的に局在化されている。アンホテリン／ＨＭＧ
１は突起（神経突起）伸長に必要であり、アンホテリン／ＨＭＧ１はまたニュー
ロン−グリア相互作用にも関与し得る、ということを阻害試験は示唆した（Mere
nmies et al., J. Biol. Chem. 266:16722-16729, 1991; Merenmies et al., J.
Biol. Chem. 266:16722-16729, 1991; Milev et al., J. Biol. Chem. 273:699
8-7005, 1998;およびSalmivirta et al., Exp. Cell Res. 200:444-451, 1992）
。アンホテリン／ＨＭＧ１は、化学誘導物質ヘキサメチレンビスアセトアミドに
よる刺激後にマウス赤白血病細胞から放出され得る（Melloni et al., Biochem.
Biophys. Res. Commun. 210:82-89, 1995）。ＨＭＧ１遺伝子の遺伝子産物は、
α−ＰＫＣを刺激することにより分化促進因子として機能する、ということを過
去の研究は示唆している（Melloni et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 2
10:82-89, 1995;およびMelloni et al., FEBS Lett. 368:466-470, 1995）。 【０００６】 ＨＭＧ１遺伝子産物は、プラスミノーゲンおよび組織型プラスミノーゲン活性
化因子（ｔ−ＰＡ）と相互作用し、細胞侵襲および組織再造形中の細胞外タンパ
ク質分解に一役を演じることが知られている系である細胞表面でのプラスミン生
成を有効に促進する、ということが示されている。アンホテリン／ＨＭＧ１は、
進行性グリコシル化最終生成物（ＲＡＧＥ）の受容体と相互作用することも示さ
れている（Mohan et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 182:689-696, 1992
; Yamawaki et al., J. Neurosci. Res. 44:586-593, 1996; Salmivirta et al.
, Exp. Cell Res. 200:444-451, 1992;およびVassalli et al., J. Clin. Inves
t. 88:1067-1072, 1991）、（Redlitz and Plow, Baillieres Clin. Haematol.
8:313-327, 1995;およびParkkinen et al., J. Biol. Chem. 266:16730-16735,
1991）。 【０００７】 サイトカイン媒介性炎症カスケードを防止し、広範な種々のサイトカイン媒介
性炎症性疾患における療法的活性を有し得る改良された作用物質を発見すること
が当業界では長きに亘って必要とされている。本発明は、敗血症および炎症性サ
イトカインカスケードの一般的活性化により関連づけられるその他の疾患におけ
る毒性、病因および／または致死性を媒介する作用物質を同定するための研究調
査の経過中になされた。 【０００８】 炎症性サイトカインカスケードにより媒介される疾患および症状は、多数ある
。このような症状としては、以下に群別された疾患カテゴリーが含まれる： 全身性炎症性応答症候群、これには以下が含まれる： 敗血症症候群 グラム陽性敗血症 グラム陰性敗血症 培養陰性敗血症 真菌性敗血症 好中球減少性発熱 尿路性敗血症 髄膜炎菌血症 外傷性出血 唸音 電離放射線曝露 急性膵炎 成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ） 再還流傷害、これには以下が含まれる： 後ポンプ症候群 虚血再還流傷害 心臓血管性疾患、これには以下が含まれる： 心臓性昏倒症候群 心筋梗塞 うっ血性心不全 感染性疾患、これには以下が含まれる： ＨＩＶ感染／ＨＩＶニューロパシー 髄膜炎 肝炎 敗血症性関節炎 腹膜炎 肺炎喉頭蓋炎 大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７ 溶血性尿毒症症候群／血栓崩壊性血小板減少性紫斑病 マラリア デング出血熱 リーシュマニア症 らい病 トキシックショック症候群 連鎖球菌性筋炎 ガス壊疸 Mycobacterium結核（ヒト型結核） Mycobacterium aviun Intracellulare（鳥型結核菌細胞内物質感染） Pneumocystis Carinii（ニューモシスティスカリニ）肺炎 骨盤炎症性疾患 睾丸炎／精巣上体炎 レジオネラ ライム病 Ａ型インフルエンザ エプスタイン−バーウイルス ウイルス関連血球貪食(hemiaphagocytic)症候群 ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎 産科学／婦人科学的症状、これは以下を含む： 早産 流産 不妊症 炎症性疾患／自己免疫疾患、これには以下が含まれる： 慢性関節炎／セロネガティブ関節症 変形性関節症 炎症性腸疾患 全身性エリトマトーデス 虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎視神経炎 特発性肺繊維症 全身性脈管炎／ウェーゲナー肉芽腫症 サルコイドーシス 睾丸炎／精管切除反転術 アレルギー性／アトピー性疾患、これには以下が含まれる： 喘息 アレルギー性鼻炎 湿疹 アレルギー性接触性皮膚炎 アレルギー性結膜炎 過敏性肺炎 悪性疾患、これには以下が含まれる： ＡＬＬ ＡＭＬ ＣＭＬ ＣＬＬ ホジキン病、非ホジキンリンパ腫 カポジ肉腫 結腸直腸癌 鼻咽頭癌 悪性組織球増殖症 新生物随伴症候群／悪性疾患の高カルシウム血症 移植片、これは以下を含む： 器官移植片拒絶 移植片対宿主疾患 悪液質 先天性、これは以下を含む： 嚢胞性繊維症 家族性血液食細胞性リンパ組織球増殖症 鎌状赤血球貧血 皮膚科学的、これは以下を含む： 乾癬 脱毛症 神経学的、これは以下を含む： 多発性硬化症 片頭痛 腎臓性、これは以下を含む： ネフローゼ症候群 血液透析 尿毒症 毒性、これは以下を含む： ＯＫＴ３療法 抗ＣＤ３療法 サイトカイン療法 化学療法 放射線療法 慢性サリチレート中毒 代謝性／特発性、これは以下を含む： ウィルソン病 血液色素症 α−１アンチトリプシン欠損症 糖尿病 橋本甲状腺炎 骨粗鬆症 視床下部−下垂体−副腎軸評価 原発性胆汁性肝硬変 【０００９】 ［発明の概要］ 本発明は、炎症性サイトカインカスケードにより媒介される症状（疾患）を治
療するための医薬組成物であって、有効量の、ＨＭＧ１のアンタゴニストまたは
阻害剤を含む組成物を提供する。好ましくは、ＨＭＧ１アンタゴニストは、ＨＭ
Ｇ１タンパク質と結合する抗体、ＨＭＧ１遺伝子アンチセンス配列およびＨＭＧ
１受容体アンタゴニストから成る群から選択される。本発明は、炎症性サイトカ
インカスケードにより媒介される症状の治療方法であって、有効量のＨＭＧ１ア
ンタゴニストを投与することを含む方法を提供する。別の実施形態では、本発明
の方法は、ＨＭＧ１アンタゴニストと組合せて第二作用物質を投与することをさ
らに含み、この場合、第二作用物質は、ＴＮＦ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＭＩ
ＦまたはＩＬ−６のような初期敗血症メディエータのアンタゴニストである。最
も好ましくは、第二作用物質は、ＴＮＦに対する抗体、あるいはＩＬ−１受容体
アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）である。 【００１０】 本発明はさらに、炎症性カスケードにより媒介される症状に伴うショック様症
状を示しているかまたはその症状を示す危険性のある患者に関する敗血症および
関連症状の重症度をモニタリングし、そして起こり得る臨床経過を予測するため
の診断および予後判定方法を提供する。本発明の診断および予後判定方法は、試
料中の、好ましくは血清試料中のＨＭＧ１の濃度を測定し、その濃度を、同様の
試料中のＨＭＧ１の正常濃度範囲を代表するＨＭＧ１に関する標準と比較し、そ
れにより高レベルのＨＭＧ１が乏しい予後または毒性反応の可能性を示すことを
包含する。本診断方法はまた、他の組織、または流体区画、例えば脳脊髄液また
は尿にも適用され得る。最後に、本発明は、体重損失をもたらすか、または肥満
症を治療するための医薬組成物および方法であって、有効量のＨＭＧ１またはそ
の治療的活性断片を投与することを含む医薬組成物および方法を提供する。 【００１１】 ［発明の詳細な説明］ 本発明は、ＬＰＳ、ＴＮＦまたはＩＬ−１による刺激後の培養マウスマクロフ
ァージ様細胞（ＲＡＷ２６４．７）により放出され、そしてこの細胞により調整
された培地中に蓄積する高誘導性３０ｋＤａタンパク質の発見および単離に基づ
いている。この単離ポリペプチドの部分的アミノ酸配列は、アンホテリンとして
も知られているＨＭＧ１タンパク質の配列と同一であり、このタンパク質はこれ
までにいずれもの疾患の病原に連結されていない。この情報を用いてＨＭＧ１を
コードするｃＤＮＡをクローン化し、その配列を発現させて、組換え体タンパク
質を得て、そのタンパク質を用いて特異的抗ＨＭＧ１抗体を生成した。 【００１２】 一連の予測的in vitroおよびin vivo実験で、治療的および診断的効力を確定
した。実験は、実施例の項に詳述する。例えば、マウスへの内毒素（ＬＤ100）
の投与後、血清ＨＭＧ１レベルは、敗血症の周知の「初期」メディエータ（例え
ばＴＮＦおよびＩＬ−１）より遅れて（１６時間で）増大し、ＨＭＧ１のプラト
ーレベルは１６〜３２時間保持された。致死的敗血症を有する患者は、正常健常
有志においては検出されない高血清ＨＭＧ１レベルを有した。さらに、被験動物
へのｒＨＭＧ１の急性実験的投与は、単独であっても亜致死量のＬＰＳと組合せ
ても、顕著な病理学的応答を、そして死さえも生じた。より低量のｒＨＭＧ１の
更なる分布投与スケジュールは、処置動物における有意の体重損失をもたらした
。これらの結果は、既知の「初期」メディエータ、例えばＴＮＦおよびＩＬ−１
と対照的に、ＨＭＧ１が内毒素血症のメディエータ、特に後期メディエータであ
るという証拠を示す。これらのデータはさらに、敗血症および関連症状の重症度
または考え得る致死性に対するマーカーとしての血清ＨＭＧ１の重要性を示す。 【００１３】 さらに、抗ＨＭＧ１抗体による治療は、マウスにおけるＬＤ100用量のＬＰＳ
からの最大限の防御を提供した。ＨＭＧ１はＴＮＦおよびＩＬ−１βによって誘
導可能であり、ｈｕＰＢＭＣからのＴＮＦ放出を用量依存的に刺激する。ＴＮＦ
はマクロファージ活性化のマーカーであり、したがって（暗示されるメカニズム
に限定されることなく、または理論に縛られずに）、ＨＭＧ１はサイトカインカ
スケードの下流再活性化を促し、これが次に、前炎症性サイトカイン応答の活性
化を伴う敗血症および関連症状における後期病因および致死性を媒介すると考え
られる。したがって、ＨＭＧ１は、感染および損傷に対する炎症性応答を媒介す
る場合に中心的役割を占め、ＨＭＧ１のアンタゴニストは炎症性カスケード活性
化の敗血症および関連症状における治療的利点を有すると思われる。炎症性サイ
トカインカスケードにおけるＨＭＧ１の出現は、後期の宿主応答を伝播するのに
適しており、毒性および致死性に関与する。本明細書中に記載される予測データ
は、ＨＭＧ１アンタゴニストの治療的効力を支持し、作用メカニズムに関する前
記の理論に支持される証拠を提供する。in vivo治療データは、概して炎症性サ
イトカインカスケードにより媒介される症状を、特に敗血症症状、例えば敗血症
ショック、敗血症症候群または炎症性サイトカインにより媒介されるその他の「
敗血症様」症状等を治療するための、概してＨＭＧ１アンタゴニストの効力、そ
して特に抗ＨＭＧ１抗体の効力を示した。さらに、ＨＭＧ１の個々の病原性およ
び毒性／致死性は、ＴＮＦ、ＭＩＦ、ＩＬ−１およびＩＬ−６のような「初期」
炎症性メディエータのアンタゴニストと同時投与した場合に、ＨＭＧ１アンタゴ
ニストが特に有効であることを示す。 【００１４】 要するに、１）ＨＭＧ１は細菌毒素による、または前炎症性サイトカイン（Ｔ
ＮＦまたはＩＬ−１β）による刺激後にマクロファージおよび下垂体細胞から放
出され、２）ＨＭＧ１はＬＰＳに曝露された動物の血清中および敗血症患者中に
蓄積し、そして３）ＨＭＧ１特異的抗体は臨床的敗血症および関連症状の予測的
致死内毒素血症動物モデルにおける死亡に対して防御することから、ＨＭＧ１は
炎症性反応のサイトカインメディエータである。 【００１５】 医薬組成物および投与方法 本発明の医薬組成物または本発明の製剤組合せは、それ自体（複合物または組
合せ）で、またはそれが適切な担体および賦形剤と混合される医薬組成物中で、
患者に投与され得る。本発明の医薬組成物または本発明の製剤組合せは、非経口
的に、例えば静脈内注射または注入、腹腔内注射、皮下注射または筋内注射によ
り投与され得る。本発明の医薬組成物または本発明の製剤組合せは、錠剤、ピル
、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー(slurries)、懸濁液等を形成する
ために担体および賦形剤を用いた適切な処方物により経口的にまたは直腸に投与
され得る。本発明の医薬組成物または本発明の製剤組合せは、局所的に、例えば
皮膚パッチにより投与されて、活性作用物質の一貫した全身レベルを達成する。
本発明の医薬組成物または本発明の製剤組合せは、局所用クリーム、皮膚または
粘膜パッチ、皮膚または粘膜表面への局所適用に適した液体またはゲル中に処方
され得る。本発明の医薬組成物または本発明の製剤組合せは、局所的または全身
的治療のために吸入器により気道に投与され得る。 【００１６】 本発明の医薬組成物または本発明の製剤組合せの用量は、本開示から当業者に
より確定され得る。上記医薬組成物または本発明の製剤組合せは、有効用量（投
与経路および活性作用物質の薬物動態による）の本発明の医薬組成物または製剤
組合せならびに、処方物の特定の投与経路（即ち、経口、非経口、局所または吸
入による）に適した適切な製剤担体および賦形剤を含有する。活性作用物質は、
混合、溶解、造粒、糖衣作製、乳化、カプセル封入、エントラッピングまたは凍
結乾燥法によって、製剤処方物に混合される。非経口投与のための製剤処方物と
しては、活性作用物質の水性溶液または水溶性形態の組合せが挙げられる。さら
に、活性作用物質の懸濁液は、油性注射懸濁液として調製されてもよい。適切な
親油性溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油、例えばゴマ油、または合成脂肪酸
エステル、例えばエチルオレエートまたはトリグリセリド、あるいはリポソーム
が挙げられる。水性注射懸濁液は、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソ
ルビトールまたはデキストランのような懸濁液の粘度を増大させる物質を含有し
てもよい。懸濁液は、安定剤または、活性作用物質の溶解度を増大させる作用物
質あるいはそれらの組合せを任意に含有して、より濃縮された溶液にさせてもよ
い。 【００１７】 経口投与のための製剤処方物は、活性作用物質と、固体賦形剤、例えば糖（例
えばラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトール）、セルロース
調製物（例えばデンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロ
ースおよびナトリウムカルボキシメチルセルロース）、ゼラチン、ガムまたはポ
リビニルピロリドンとを組合せることにより得られ得る。さらに、崩壊剤が付加
されてもよく、安定剤が付加されてもよい。 【００１８】 アンチセンスオリゴマー 本発明は、ＨＭＧ１遺伝子またはｍＲＮＡ配列の発現を抑制または遮断するの
に有効な配列を有するアンチセンスオリゴマーを提供する。標的遺伝子産物の発
現を抑制するための特異的オリゴヌクレオチドを用いるアンチセンス技術は、ヒ
ト疾患のための治療様式として開発中である。アンチセンスオリゴヌクレオチド
アンタゴニストの最適化に寄与するいくつかの選別判断基準が利用可能である。
例えば、５０％またはそれ以上のＧＣ含量を有する配列を選択するのが得策であ
る。好ましい配列は、標的タンパク質のＡＵＧ開始コドンに及ぶが、しかしコー
ド領域における部位および５’ＵＴＲも等しく十分に成し遂げ得る。このような
配列は、一般に約１８〜３０ヌクレオチド長であり、タンパク質発現を抑制する
ためにＨＭＧ１ ｃＤＮＡ配列からのＡＴＧ開始コドンと重複するよう選択され
る。より長いオリゴマーがしばしば、より大きい程度に標的を抑制するとわかっ
ているが、これは、アンチセンス試薬として選択される一次オリゴヌクレオチド
のための好ましい長さが約２５マーであることを示す。これらの判断基準に関し
て、典型的には、３つのオリゴヌクレオチド配列が選択され、オリゴヌクレオチ
ド配列、例えば「逆」オリゴヌクレオチドまたは、アンチセンス配列のほぼすべ
ての第四塩基が無作為化されるオリゴヌクレオチドを制御するアンタゴニストの
活性に関して比較される。したがって、ＨＭＧ１に対するアンチセンスオリゴマ
ー配列を作製するための好ましい配列は、ＨＭＧ１ ｃＤＮＡ配列からのＡＴＧ
開始コドン（下線）を重複するよう選択された２５マー配列： ＧＡＧＧＡＡＡＡＡＴＡＡＣＴＡＡＡＣＡＴＧＧＧＣＡＡＡＧＧＡＧＡＴＣＣＴ
ＡＡＧＡＡＧ［配列番号５］ であり、このような好ましいアンチセンス配列は、ＨＭＧ１のアンタゴニストと
してin vitro比較のためのアンチセンスオリゴヌクレオチド剤（および適切なコ
ントロール）を構築するために用いられる。これらのin vitroデータは、匹敵す
る設計のアンチセンス剤を用いたヒト臨床実用性を予測する。 【００１９】 ＨＭＧ１特異的抗体 本明細書中に開示された抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであっ
てもよく、多数のヒト、非ヒト真核生物、細胞、真菌または細菌供給源のいずれ
かからのものであってもよい。抗体は、ゲノムまたはベクター保有コード配列に
よりコードされてもよく、アジュバントを用いても用いない場合も、生来のまた
は組換え体のＨＭＧ１またはその断片に対して引き出されてもよい。抗体の作製
方法は、抗体を生成および産生するための当業界で周知の方法および手法である
。一般に、ＨＭＧ１に対する中和抗体（即ち、特にその前炎症性サイトカイン様
役割に関してＨＭＧ１の生物学的活性を抑制するもの）が、治療的適用のために
好ましいが、一方、非中和抗体も診断用途に適切でありうる。このような有用な
抗体の例としては、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、一本鎖および種
々のヒトまたはヒト化型の抗体、ならびに種々のそれらの断片、例えばＦａｂ断
片および特殊化発現系から産生される断片が挙げられるが、これらに限定されな
い。 【００２０】 診断アッセイ ここで提供される診断アッセイは、ポリクローナル若しくはモノクローナルま
たはその両方であり得る抗ＨＭＧ１抗体を使用する。診断手法は、生物学的流体
中のＨＭＧ１遺伝子の遺伝子産物の濃度を測定するための標準抗体ベースの技術
を利用することができる。好ましい標準診断手法は、ＥＬＩＳＡアッセイおよび
ウエスタン技法である。 【００２１】 実施例１：内毒素血症の「後期」メディエータとしてのＨＭＧ１の同定 本実施例は、敗血症において、ならびに炎症性サイトカイン活性により特性化
される関連症状において一役を演じる後期放出マクロファージ由来因子を同定し
、単離するための実験の結果を提供する。本実施例で報告される実験は、ＴＮＦ
による培養物の刺激後のマウスマクロファージＲＡＷ２６４．７細胞−調整培地
を試験した。マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７細胞は、アメリカン・タイ
プ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ、Rockville, MD, USA）から入手し、
１０％ウシ胎仔血清および１％グルタミンを補充したＤＭＥＭ下での培養中で増
殖させた。集密性が７０〜８０％に達したら、培地を無血清ＯＰＴ１−ＭＥＭ
Ｉ培地に取り換えて、培養物を前炎症性サイトカイン（例えばＴＮＦαまたはＩ
Ｌ−１）あるいは細菌内毒素（ＬＰＳ）で刺激した。 【００２２】 前記の刺激化マクロファージ培養物から放出されたタンパク質を測量した。特
に、異なる時点で、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）により細胞および細
胞調整培地を別々に回収した。１０ｋＤａのＭｒカットオフを用いたアミコン(A
micon)膜（Amicon Inc., Beverly, MA, USA）上での限外濾過により、調整培地
中のタンパク質を濃縮し、その後、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分別して、クーマシ
ーブルー（３０％メタノール／１０％酢酸中の１．２５％クーマシーブルーＲ２
５０）で染色した。３０％メタノール／７％酢酸で脱色して、対象タンパク質（
単数または複数）（即ち、刺激化培養物の調整培地中に優先的に蓄積したもの）
をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルから切り取って単離し、Ｎ末端シーケンシング分析（Co
mmonwealth Biotechnologies, Inc., Richmond, VA, USA）を施した。 【００２３】 コントロール（ＴＮＦα刺激なし）対ＴＮＦ刺激化ＲＡＷ２６４．７細胞にお
ける蓄積タンパク質のプロフィールのＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル分析の比較で、細胞
−調整培地中のその濃度が１６時間の刺激後に有意に増大された強誘導性３０ｋ
Ｄａタンパク質が明示された。この単離タンパク質のアミノ酸配列分析は、その
Ｎ末端配列をＧｌｙ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｐｒ
ｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ［配列番号１］として明
示した。関連遺伝子データベースの検討は、ＨＭＧ１のＮ末端アミノ酸配列との
１００％の同一性が見出された。 【００２４】 これらのデータは、ＨＭＧ１をＬＰＳ刺激化マクロファージ培養物の「後期出
現」生成物として、したがって、前炎症性メディエータの候補として同定した。
ヒト臨床症状を予測する細胞および動物モデルシステムにおける組換え的生成Ｈ
ＭＧ１および／または抗ＨＭＧ１抗体の投与により、この活性を確証した。 【００２５】 実施例２：ＨＭＧ１の細胞性供給源 本実施例は、細胞供給源がＴＮＦ、ＩＬ−１および／またはＬＰＳに応答にお
けるＨＭＧ１放出能を示す。試験した細胞は、ＧＨ3下垂体細胞、マウスマクロ
ファージＲＡＷ２６４．７細胞、ヒト一次末梢血単核細胞（ｈｕＰＢＭＣ）、ヒ
ト一次Ｔ細胞、ラット副腎ＰＣ−１２細胞およびラット一次腎臓細胞を含む（表
１）。ラット下垂体ＧＨ3細胞株をアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクシ
ョン（ＡＴＣＣ、Rockville, MD, USA）から入手して、１０％ウシ胎仔血清およ
び１％グルタミンを補充したＤＥＭＥ中で培養した。ヒトＰＢＭＣおよびＴ細胞
を健常ドナーの全血から新たに単離して、前記と同様に１０％ヒト血清を補充し
たＲＰＭＩ１６４０中で培養した（Zhang et al., J. Exp. Med. 185:1759-1768
, 1997）。集密性が７０〜８０％に達したら、培地を無血清ＯＰＴ１−ＭＥＭ
Ｉ培地に取り換えて、培養を前炎症性サイトカイン（例えばＴＮＦαまたはＩＬ
−１）あるいは細菌内毒素（ＬＰＳ）で刺激した。 【００２６】 ヒトＴ細胞、ラット副腎（ＰＣ−１２）細胞およびラット一次腎細胞は、ＨＭ
Ｇ１特異的抗体を用いた全細胞溶解物のウエスタンブロット分析により実証した
場合、細胞関連ＨＭＧ１を含有したが、ＨＭＧ１は、ＴＮＦ、ＩＬ−１βまたは
ＬＰＳで刺激後、これらの培養物の培地中に有意に蓄積しなかった（表１）。 【００２７】 【表１】 【００２８】 ＴＮＦ、ＩＬ−１β（各々の最小有効濃度＝５ｎｇ／ｍｌ）および細菌内毒素
（ＬＰＳ、最小有効濃度＝１０ｎｇ／ｍｌ）は、時間−および用量−依存性様式
でヒトＰＢＭＣからのＨＭＧ１の放出を誘導した（表１）。ＩＦＮ−γ単独（０
〜２００Ｕ／ｍｌ）は前記の細胞のいずれからもＨＭＧ１放出を誘導しなかった
が、しかし、ＴＮＦまたはＩＬ−１βとの組合せで付加した場合には、ＩＦＮ−
γはマクロファージから用量依存的にＨＭＧ１放出を増強し、１００Ｕ／ｍｌの
濃度のＩＦＮ−γにより最大３倍増強した。トリパンブルー排除により判定した
場合、細胞生存能(viability)はＴＮＦ、ＩＬ−１βまたはＬＰＳによる影響を
受けなかったため（コントロールに関しては９０〜９２±５％の生存、これに対
して１００ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ、ＩＬ−１βまたはＬＰＳの存在下では８８〜９
５±４％）、ＨＭＧ１の放出は細胞死のためではなかった。ウエスタンブロット
分析により確定した場合、下垂体細胞およびマクロファージにより放出されたＨ
ＭＧ１の量は、ＨＭＧ１の細胞内濃度と逆相関したが、これは、放出物質が、一
部は、前成形の細胞関連ＨＭＧ１タンパク質に由来することを示す。 【００２９】 種々の正常ヒト組織から調製されたｍＲＮＡに対するＨＭＧ１特異的プローブ
のハイブリダイゼーション（ブロット基質は商業的供給元から入手可能）により
、in vivoでの循環ＨＭＧ１の考え得る供給源を査定した。その結果を図５に要
約した。いくつかの冨マクロファージ組織（肺、肝臓、腎臓、膵臓および脾臓）
は、最も豊富なＨＭＧ１ ｍＲＮＡ発現を示した。低い発現は、下垂体、骨髄、
胸腺、リンパ節および副腎で観察された。ＨＭＧ１発現の相対的組織分布に関す
る情報を提供する他に、本試験は、組織試料中のＨＭＧ１特異的核酸配列に関す
るアッセイの実際的可能性および実益を示す。 【００３０】 実施例３：in vitroおよびin vivoでの組換え体ＨＭＧ１投与 本実施例は、周知の組換えＤＮＡ技法によりＨＭＧ１を生成するための手法を
詳述する。ＰＣＲによりＨＭＧ１開放読取り枠を増幅し、発現ベクター（ｐＣＡ
Ｌ−ｎ）中でサブクローニングした。要するに、 以下の配列：５’−ＣＣＣ
ＧＣＧ ＧＡＴ ＣＣＡ ＴＣＧ ＡＧＧ ＧＡＡ ＧＧＡ ＴＧＧ ＧＣＡ
ＡＡＧ ＧＡＧ ＡＴＣ ＣＴＡ−３’［配列番号２］および５’−ＣＣＣ Ｇ
ＣＡ ＡＧＣ ＴＴＡ ＴＴＣ ＡＴＣ ＡＴＣ ＡＴＣ ＡＴＣ ＴＴＣ Ｔ
−３’［配列番号３］を含有するプライマーを用いて、５ｎｇラット脳クイック
クローンｃＤＮＡ（カタログ番号＃７１５０−１、Clontech, Palo Alto, CA, U
SA）から、ＨＭＧ１ ｃＤＮＡの６４８ｂｐ開放読取り枠をＰＣＲ増幅した（９
４℃１’、５６℃２’、７２℃４５”、３０サイクル）。６８０ｂｐＰＣＲ生成
物（４μｇ）をＢａｍＨＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化して、ｐＣＡＬ−ｎベク
ター（Stratagene, La Jolla, CA, USA）のＢａｍＨＩ／ＨｉｎｄＩＩＩクロー
ニング部位にクローニングした。組換え体プラスミドを大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３
）ｐＬｙｓＳ（Novagen, Madison, WI, USA）にトランスフォームさせ、陽性ク
ローンをスクリーニングして、ＡＢＩ３７３Ａ自動蛍光シーケンサー（Applied
Biosystems, Foster City, CA, USA）上でのTag DyeDeoxyターミネーターサイク
ルシーケンシングキットを用いて、両鎖におけるＤＮＡシーケンシングにより確
証した。 【００３１】 組換え体ＨＭＧ１を発現するために、ＩＰＴＧ（１ｍＭ）を付加した場合、Ｏ
Ｄ600が０．６に達するまで激しく振盪しながら（２５０ｒｐｍ）３７℃で陽性
クローンを培養した。ＩＰＴＧ誘導の１２時間後、遠心分離（６５００ｒｐｍ、
１５分間）により細菌細胞を収穫し、凍結−解凍サイクルで溶解した。水溶性分
画を遠心分離（３０分間、１２，０００ｒｐｍ）後に収集し、製造元（Stratage
ne）の指示通りに、カルモジュリン結合樹脂カラム上で組換え体ＨＭＧ１を精製
した。Detoxi-Gel内毒素除去ゲル（Pierce, Rockford, IL, USA、カタログ番号
＃２０３４４）を用いて細菌内毒素を組換え体ＨＭＧ１から除去し、リムラス・
アメボサイト細胞溶解物試験（ＬＡＬ試験、カタログ番号＃５０−６４８Ｕ、Ｑ
ＣＬ−１０００色原性ＬＡＬ、Bio-Whittaker, Inc., Walkersville, MD, USA）
により、残留ＬＰＳ含量を確定した。精製組換え体ＨＭＧ１をヒト末梢血単核球
（ＨｕＰＢＭＣ）の培養物に付加し、刺激後４時間目にＥＬＩＳＡによりＴＮＦ
に関して上清をアッセイした。ＬＰＳ−中和剤ポリミキシンＢ（１０μｇ／ｍｌ
）を組換え体ＨＭＧ１と同時に付加して、ＴＮＦ放出に及ぼす如何なる夾雑ＬＰ
Ｓの作用も排除した。さらに、外因性ＬＰＳの付加的内毒素血症チャレンジを用
いてまたは用いずに、組換え的に得られたＨＭＧ１を被験動物に投与して、in v
ivoでの高レベルのＨＭＧ１の病原可能性を調べた（図２Ｂおよび２Ｃ参照）。
いくつかの実験では、本明細書中に詳述したように、ＴＮＦに関してアッセイさ
れるＨＭＧ１処置動物から血清試料を確保した（図１Ｂ参照）。 【００３２】 前記の手法は、ＨＭＧ１ペプチド配列に見合ったアミノ酸末端延長としての３
．０ｋＤａカルモジュリン結合ドメインおよびトロンビン切断部位を包含する融
合ペプチドとして組換え体ＨＭＧ１を提供する。いくつかの実験では、融合タグ
を少量の組換え体タンパク質から除去し、完全融合タンパク質の生物活性を切断
ＨＭＧ１ペプチドと比較した。生物学的活性の有意差は認められず、付加的実験
（特に組換え的産生ＨＭＧ１の動物への投与を要するもの）を、典型的には（非
切断）融合タンパク質を用いて実施した。 【００３３】 図３Ａおよび３Ｂで実証したように、組換え的に得られたＨＭＧ１のin vitro
またはin vivo投与は活発なＴＮＦ応答を誘導したが、これは、前炎症性活性を
有する後期出現ＬＰＳ誘導性マクロファージ由来内因性メディエータとしてのＨ
ＭＧ１の同一性を確証する。 【００３４】 実施例４：抗ＨＭＧ１抗体および免疫検出 本実施例は、ＨＭＧ１に対するポリクローナル抗体を作出し、使用する実験の
結果を提供する。要するに、ＨＭＧ１のＮ末端アミノ酸配列に対応するオリゴペ
プチドに対する、または精製組換えＨＭＧ１に対するポリクローナル抗体を当業
界で周知の標準手法により、ウサギにおいて作出した。要するに、配列ＧＫＧＤ
ＰＫＫＰＲＧＫＭＳＳＣ［配列番号４］を有するオリゴペプチドの８つのコピー
を、放射状分枝リシン樹状突起（小免疫原的不活性コア）に固定した。これらの
大型高分子物質を、０日目の予備採血後１、２および４週間目に、皮下および皮
内（０．５〜１０ｍｇ／注射）の両方でウサギに３回注射した。最終免疫感作後
２週間目に、ウサギを採血し、１．０ｍｇの抗原を用いて筋内追加免疫し、その
後２週間後に二次採血した。あるいは、組換え体ＨＭＧ１に対するポリクローナ
ル抗体を生成させるために、同様のプロトコールにしたがって、組換え体ＨＭＧ
１融合ペプチド（１００μｇ／注射）でウサギを免疫感作した。ＨＭＧ１に対し
て反応性である（即ち、ＨＭＧ１の生物学的活性を結合し、いくつかの場合には
、中和し、または相殺する）モノクローナル抗体は、本明細書中に記載したＨＭ
Ｇ１抗原、または免疫原のようなその他のＨＭＧ１ペプチド断片を用いて、当業
界で周知の方法により調製するのが便利である。このようなモノクローナル抗体
、および／またはそれらを生成するハイブリドーマは、ＨＭＧ１に対して反応性
である種々の「ヒト化」抗体（すべて、当業界で既知の方法による）を生成する
のに有用であり、このヒト化抗体は本明細書中で教示されるように有用である。 【００３５】 ＨＭＧ１特異的抗体を用いて、ウエスタンブロッティング分析により、ＴＮＦ
またはＬＰＳでの処置後のＲＡＷ２６４．７細胞からのＨＭＧ１の誘導性放出を
測定した（図１）。要するに、４〜２０％勾配ゲル上でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによ
りタンパク質を分別し、ＰＶＤＦ膜に移して、Ｎ末端合成ＨＭＧ１抗原に対して
、または組換え体ＨＭＧ１に対して生じたウサギ抗血清でブロットした。製造元
（Amersham Life Science Inc., Arlington Heights, IL, USA）の指示通りにＥ
ＣＬキットを用いてシグナルを検出し、精製組換え体ＨＭＧ１の標準曲線を基準
に、ＮＩＨ１．５９画像ソフトウエアを用いて分析のためにデジタル化したウエ
スタンブロット上の帯域の光学強度を測定することにより、ＨＭＧ１のレベルを
確定した。 【００３６】 ＴＮＦまたはＬＰＳ処置の非存在下では、ＲＡＷ２６４．７細胞−調整培地中
にＨＭＧ１タンパク質は検出されなかったが、しかし、ＨＭＧ１は、このような
刺激後、高レベルで調整培地中に蓄積し、刺激後８〜２８時間目にプラトーに達
した（図１Ａ）。要するに、実施例１、３および図１Ａに示したデータは、マク
ロファージからのＨＭＧ１の放出は刺激特異的、ならびに時間−および用量−依
存性で、最大蓄積は、５ｎｇ／ｍｌという低い濃度でのＴＮＦによる刺激後８時
間以内に観察された、ということを示す。敗血症、敗血症ショックおよび関連症
状は、この予測モデルに用いられる単一大量致死的ＬＰＳボーラスとは定性的ま
たは定量的に異なる刺激に応答するヒトにおいて起こり得る、ということは十分
理解される。それにもかかわらず、実験的内毒素血症は、炎症性サイトカインカ
スケードの重要な構成成分を同定するための、そして予測される臨床的実用性を
有する特定のアンタゴニストを同定するための有益且つ予測的モデル系であった
。この点で、ＨＭＧ１アンタゴニストはおそらく、内毒素に対する応答における
ＴＮＦに対するＨＭＧ１の後期出現にかんがみて、ＴＮＦアンタゴニストより治
療的に魅力的である。 【００３７】 実施例５：in vivo動物モデルにおけるＨＭＧ１の検出 本実施例は、亜致死用量のＬＰＳ（ＬＤ50）の投与後の血清ＨＭＧ１を測定す
る、齧歯類におけるin vivo実験を説明する。マウスまたはラットをＬＰＳで処
置し、異なる時点で血清を収集して、ウエスタンブロッティング分析によりＨＭ
Ｇ１のレベルに関してアッセイした。精製ＨＭＧ１の標準曲線を基準に光学帯域
強度を測定することにより、ＨＭＧ１の血清濃度を概算した。ＬＰＳ後１６時間
までに血清レベルは有意に増大し、少なくとも３２時間、高い値を保持した（図
１Ｂ）が、ビヒクル処置コントロール動物においては検出されなかった。これら
のデータは、ＨＭＧ１が、炎症性サイトカインカスケードにおける後期出現メデ
ィエータであるために、敗血症およびサイトカイン毒性の関連疾患の診断のため
の、ならびにそれらの病気に対する製剤的介入のための特に魅力的な標的を代表
する、ということを示す。 【００３８】 実施例６：ＨＭＧ１に対する防御の利点 本実施例は、敗血症およびサイトカイン媒介性毒性の関連症状の治療に関連し
たＨＭＧ１のアンタゴニストの治療活性を測定するための予測in vivoアッセイ
の結果を提供する。本実施例では、ＨＭＧ１アンタゴニストは抗ＨＭＧ１抗体調
製物であった。前免疫血清で処置したコントロールは、４８時間以内に嗜眠、立
毛、下痢および死亡を生じた。内毒素血症のこれらの臨床的徴候は、抗ＨＭＧ１
抗体の投与により有意に防止された。雄Ｂａｌｂ／Ｃマウス（６〜７週、２０〜
２３グラム）を無作為に群別し（１０匹／群）、致死用量のＬＰＳ（１ｘＰＢＳ
中で５０ｍｇ／ｋｇ）の投与（腹腔内）前３０分に、コントロール（前免疫）ま
たは抗ＨＭＧ１血清（実施例４で作製したのと同様）で前処置した。他の実験群
には、ＬＰＳ投与後＋１２または＋１２および＋３６時間に、付加的用量の抗Ｈ
ＭＧ１血清を投与した。少なくとも２週間、外観および生存に関して、動物を観
察した。 【００３９】 組換え体ＨＭＧ１に対するポリクローナル抗体をウサギで作出し、ＥＬＩＳＡ
およびウエスタンブロッティング手法により特異性および力価に関して抗血清を
アッセイした。ポリクローナル抗血清は、例えばウエスタンブロット分析におけ
る組換え体ＨＭＧ１を免疫特異的に認識し（結合し）、そして粗製細菌溶解物中
のおよびマウス血清中に稀釈されていた精製タンパク質としての双方で、他のタ
ンパク質からｒＨＭＧ１を区別した。ウエスタンブロッティング分析において化
学発光増幅検出法を用いて、１：１０００までの稀釈でのポリクローナル抗ＨＭ
Ｇ１抗血清は、５０ｐｇという少ないｒＨＭＧ１タンパク質を検出するのに有用
であった。ＬＰＳチャレンジ（０時間）に比して、−０．５（１回投与の場合）
、−０．５および１２（２回投与の場合）または−０．５、１２および３６（３
回投与の場合）時間での指示（図２Ａ）量の抗ＨＭＧ１抗血清の投与は、ＬＰＳ
誘導性致死性に対して防御的であり、反復投与スケジュールは良好な防御を提供
した。 【００４０】 図２Ｂは、ｒＨＭＧ１が内毒素マウスにおける用量依存性致死性を引き起こし
たことを説明する。雄Ｂａｌｂ／Ｃマウス（２０〜２３グラム）を１０群に無作
為にわけて、ＬＰＳ（３．１５ｍｇ／ｋｇ；非致死量）を単独でまたは精製組換
え体ＨＭＧ１タンパク質と組合せて投与した。指示用量でのＬＰＳ試験後２、１
６、２８および４０時間目のＨＭＧ１の投与により、根元的内毒素血症の致死性
が有意に増大した。 【００４１】 図２Ｃは、用量の一関数としてのＨＭＧ１の個々の致死性毒性を説明する。精
製ｒＨＭＧ１を、指示用量での１回腹腔内ボーラス投与として、雄Ｂａｌｂ／Ｃ
マウス（５匹／処置群）に投与した。少なくとも４８時間マウスを観察した結果
、５００μｇ／マウスの用量でｒＨＭＧ１で処置したマウスの６０％がｒＨＭＧ
１試験の２４時間以内に死亡したが、これは、５００μｇ／マウス未満の１回投
与ＬＤ50を示す。 【００４２】 ウエスタンブロットでＨＭＧ１に対する免疫特異的反応性を示さなかった前免
疫血清の投与は、被験者にＬＰＳ媒介性死亡を被らせなかったため、抗ＨＭＧ１
抗体により付与される防御は特異的であった（図２Ａ）。さらに、ＨＭＧ１特異
的抗体は他のマクロファージ由来サイトカイン（例えば、ＩＬ−１およびＴＮＦ
）と交差反応せず、抗体が結合により防御を付与し、それによりこれらのメディ
エータを中和するという可能性を排除した。前炎症性サイトカインカスケードの
活性化を伴う敗血症、敗血症関連病原および敗血症関連疾患に対する防御は、サ
イトカインカスケードの１つよりも多い構成成分を標的とする組合せ療法により
改良し得る。ＨＭＧ１のアンタゴニストは、この点では、ＴＮＦ、ＩＬ−１，Ｍ
ＩＦおよびその他の炎症性メディエータの特異的アンタゴニストと、または炎症
性カスケードの多構成成分（例えば、アスピリン、ＮＳＡＩＤＳ、抗炎症性ステ
ロイド等）を抑制する炎症性応答のより広範な活性アンタゴニストと併合されて
、より有効な治療様式性を提供する。ＬＰＳ毒性に対する防御は、抗体用量関連
性であり、より多量の抗体のよる頻繁な投与は、死亡率を７０％まで下げた（図
２Ａ）。すべての実験において少なくとも２週間、マウスを観察した結果、後期
死亡は起きなかったが、これは、抗ＨＭＧ１抗体治療がＬＰＳ致死性に対する残
りの防御を付与し、死亡の時間をほとんど遅らせないことを示す。 【００４３】 実施例７：ヒト疾患におけるＨＭＧ１ 本実施例は、ＨＭＧ１およびヒト敗血症間の関連を確立し、それにより、ヒト
敗血症およびサイトカイン毒性の関連症状において一般的にＨＭＧ１アンタゴニ
ストを、特に抗ＨＭＧ１抗体を用いるための指標を支持する、というデータを提
供する。ｒＨＭＧ１の標準曲線を基準として、ウエスタンブロットフォーマット
で実施例４の場合と同様に生成したポリクローナル抗体を用いて、正常健常個体
および重症患者における血清ＨＭＧ１レベルを測定した。ＨＭＧ１は、正常コン
トロールにおいては観察できなかったが、重症敗血症患者においては高レベルに
蓄積した（表２）。 【００４４】 【表２】 【００４５】 これらのデータは、敗血症患者において血清ＨＭＧ１レベルの上昇が観察され
、血清ＨＭＧ１の最高レベルは致死症例で観察されることを示す（表２）。これ
らのデータはさらに、敗血症におけるＨＭＧ１アンタゴニストの治療的重要性を
示し、ＨＭＧ１の血清濃度を測定することにより敗血症についてのおよび敗血症
の重症度（即ち、潜在致死性）についてのアッセイの診断的実用性の証拠も提供
する。この診断アッセイは、炎症性サイトカインカスケードの活性化を伴う類似
の症状の重症度を診断するためにも有用である。 【００４６】 致死性対非致死性敗血症に関連した血清ＨＭＧ１レベルに関して、さらに被験
者をスクリーニングして、図６に記載したような結果（表２と累積的）を得た。
図６に要約したデータは、健常被験者８名、ならびにグラム陽性菌［バチルス属
のBacillus fragilis（１名）、エンテロコッカス属のEnterococcus facecalis
（１名）、連鎖球菌属の肺炎連鎖球菌（４名）、リステリア属のListeria monoc
ytogenes（１名）またはブドウ球菌属の黄色ブドウ球菌（２名）］、グラム陰性
菌［大腸菌（７名）、クレブシエラ属の肺炎桿菌（１名）、アシネトバクター属
のAcinetobacter calcoaceticus（１名）、シュードモナス属の緑膿菌（１名）
、フゾバクテリウム属のFusobacterium nucleatum（１名）、シトロバクター属
のCitrobacter freundii（１名）］または非同定病原体（５名）に感染した敗血
症患者２５名から得た血清試料を代表するものである。ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル電
気泳動により血清を分別し、正常ヒト血清中に稀釈した精製ｒＨＭＧ１の標準曲
線を基準に、ウエスタンブロッティング分析によりＨＭＧ１レベルを確定した。
ウエスタンブロッティングによる検出限界は、５０ｐｇである。ＨＭＧ１は正常
コントロールにおいては検出されないが、敗血症患者においては有意に増大した
、ということに留意されたい。非生存敗血症患者の血清中のＨＭＧ１の平均レベ
ル（Ｎ＝１３患者、平均ＨＭＧ１レベル＝８３．７±２２．３ｎｇ／ｍｌ）は、
生存者（Ｎ＝１２、平均ＨＭＧ１レベル＝２５．２±１５．１ｎｇ／ｍｌ、Ｐ＜
０．０５）より有意に高い。これらのデータは、敗血症およびサイトカイン活性
化の関連疾患の存在の、そしてこのような疾患および症状の重症度およびありそ
うな臨床的経過の診断および予後指標として、ＨＭＧ１配列（タンパク質または
核酸）に対する組織（制限血液または血清なしを含む）試料のスクリーニングの
実用性の直接的な証拠を提供する。 【００４７】 実施例８：ＨＭＧ１は前炎症性メディエータおよび重量損失を誘導する 本発明の結果は、ＨＭＧ１が炎症性サイトカインカスケードの後期放出メディ
エータ因子であるという証拠を提供する。一次ヒト末梢血単核球への組換え体Ｈ
ＭＧ１の付加は、刺激後４時間以内のＴＮＦの用量依存性誘導をもたらした（図
３Ａ）。ＨｕＰＢＭＣによるＴＮＦ放出の組換え体ＨＭＧ１による刺激は、ｉ）
精製組換え体ＨＭＧ１はＬＡＬ内毒素アッセイにより判定した場合、ＬＰＳが夾
雑せず、ｉｉ）ＬＰＳ中和剤ポリミキシンＢの付加はＨＭＧ１誘導性ＴＮＦ放出
に影響を及ぼさず、そしてｉｉｉ）トリプシンによる組換え体ＨＭＧ１調製物の
タンパク質分解的切断はＰＢＭＣ培養物に対するＴＮＦ放出活性を完全に無くし
たために、ＬＰＳ夾雑によるものではなかった。ＨＭＧ１刺激はまた、マクロフ
ァージを誘導し一酸化窒素（ＮＯ）を放出させた。 【００４８】 ＨＭＧ１がin vivoで血清ＴＮＦ放出を誘導したことを確証するために、精製
組換え体ＨＭＧ１をＢａｌｂ／Ｃマウスに腹腔内投与して、血液試料を収集して
、Ｌ９２９アッセイによりＴＮＦについてアッセイした。図３Ｂに示したように
、ＴＮＦはコントロール動物の血清中では検出可能でなかったが、組換え体ＨＭ
Ｇ１タンパク質の投与後２時間目に有意に増大された。 【００４９】 ＨＭＧ１遺伝子の組換え遺伝子産物の反復投与（１００μｇ／マウス／日）は
、マウスにおける有意の体重損失を引き起こした（図４）。メカニズムに関する
限定を伴わず、理論に縛られずに、これらのデータは、ＨＭＧ１が、in vitroお
よびin vivoの両方の条件下で前炎症性カスケードのフィードフォワード刺激物
として作用するという仮説と一致する。重量損失の予測モデルにおけるこれらの
in vivoデータも、ＨＭＧ１を含有する製剤処方物またはその治療的活性断片が
有効な重量損失療法であるという予測的証拠を提供する。 【００５０】 実施例９：ＨＭＧ１のin vivo供給源 前述のようにウエスタンブロット強度の定量により、下垂体切除とコントロー
ルとのラットにおける血清ＨＭＧ１レベルも測定した。コントロール（約２５ｎ
ｇ／ｍｌ）と比較した場合、下垂体切除ラット（約７５ｎｇ／ｍｌ）において、
内毒素チャレンジ（１．０ｍｇ／ｋｇでのＬＰＳ）後１２時間以内に有意に高い
ＨＭＧ１レベルが認められた。これらの結果は、下垂体細胞は血清ＨＭＧ１レベ
ルの主要供給源ではなく、マクロファージが定量的により重要な役割を演じ得る
、ということを示す。 【配列表】 【図面の簡単な説明】 【図１】 in vitro（図１Ａ）およびin vivo（図１Ｂ）でのＬＰＳによる
ＨＭＧ１放出の誘導をプロファイルする２つのグラフを示す。特に図１Ａは、Ｌ
ＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）で刺激後のマクロファージＲＡＷ２６４．７細胞の培
養上清中のＨＭＧ１の蓄積を示す。挿入図は、ＴＮＦによる誘導後のＲＡＷ２６
４．７細胞からのＨＭＧ１放出の誘導を示すウエスタンブロット（組換え体ＨＭ
Ｇ１に対して生じた抗体を使用）である。図１Ｂは、ＬＰＳ処理マウスの血清中
のＨＭＧ１の誘導を示す。ＬＰＳ投与後の種々の時点でＢａｌｂ／Ｃマウスから
の血清を収集し、組換え体ＨＭＧ１に対して生じた抗体を用いたウエスタンブロ
ットによりＨＭＧ１についてアッセイした。 【図２】 ＨＭＧ１が内毒素血症における病因および致死性のメディエータ
であることを説明する。図２Ａは、マウスに処置したＬＰＳ致死性に対する抗Ｈ
ＭＧ１抗体の防御作用を示す。ＬＰＳチャレンジ（０時間）に比して−０．５（
１回投与の場合）、−０．５および１２（２回投与の場合）または−０．５、１
２および３６（３回投与の場合）時間での指示量の抗ＨＭＧ１抗血清の投与は、
ＬＰＳ誘導性致死性に対して防御的であり、反復投与スケジュールは良好な防御
を提供した。図２Ｂは、ｒＨＭＧ１が内毒素マウスにおける用量依存性致死性を
引き起こしたことを説明する。雄Ｂａｌｂ／Ｃマウス（２０〜２３グラム）を、
１０群に無作為に分けて、ＬＰＳ（３．１５ｍｇ／ｋｇ；非致死量）を単独でま
たは精製組換え体ＨＭＧ１タンパク質と組合せて投与した。指示用量でのＬＰＳ
チャレンジ後、２、１６、２８および４０時間目のＨＭＧ１の投与は、根元的内
毒素血症の致死性を有意に増大した。図２Ｃは、用量の一関数としてのＨＭＧ１
の個々の致死性毒性を説明する。精製ｒＨＭＧ１を、指示用量での１回腹腔内ボ
ーラス投与として、雄Ｂａｌｂ／Ｃマウス（５匹／処置群）に投与した。少なく
とも４８時間マウスを観察した結果、５００μｇ／マウスの用量でｒＨＭＧ１で
処置したマウスの６０％がｒＨＭＧ１試験の２４時間以内に死亡したが、これは
、５００μｇ／マウス未満の１回投与ＬＤ50を示す。 【図３】 ＨＭＧ１がin vitro（図３Ａ）およびin vivo（図３Ｂ）の両方
でＴＮＦ放出を誘導したことを示す。特に図３Ａは、ＨＭＧ１が用量依存様式で
ｈｕＰＰＢＭＣｓからのＴＮＦ放出を誘導することを示す。新たに単離したｈｕ
ＰＢＭＣ培養物を指示用量の精製組換え体ＨＭＧ１タンパク質で刺激し、培地を
４時間後にサンプリングして、既知の免疫学的方法（ＥＬＩＳＡ）によりＴＮＦ
に関してアッセイした。図３Ａは、２つの実験（３連）における誘導性ＴＮＦ応
答の平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を示す。図３Ｂは、ＨＭＧ１の投与が処置マウスの血清
中のＴＮＦの蓄積を誘導したことを示す。Ｂａｌｂ／Ｃマウス（２０〜２３グラ
ム）を指示用量の精製組換え体ＨＭＧ１で腹腔内処置して、Ｌ９２９生物アッセ
イによるＴＮＦアッセイのために、血液試料を２時間後に採取した（ＴＮＦレベ
ルは平均±Ｓ．Ｅ．Ｍとして表される。Ｎ＝３）。 【図４】 ＨＭＧ１がマウスにおける体重損失を引き起こしたことを示す。
１００μｇ／マウス／日で３日間、精製ＨＭＧ１をマウスに腹腔内投与して、体
重をモニタリングした。図４は、３匹／群のマウスの正味体重変化の平均±Ｓ．
Ｅ．Ｍ．を示す。 【図５】 ＨＭＧ１ ｍＲＮＡの組織分布を示す。種々の組織のポリ（Ａ）+ ＲＮＡを含有するヒトＲＮＡマスターブロット（Clontech, Palo Alto, CA, USA
）を、すべて、当業界で周知の方法にしたがって、ＨＭＧ１ ｃＤＮＡインサー
トを含有する組換え体プラスミドを用いたＰＣＲにより合成された０．６ｋｂジ
ゴキシゲニン−１ １−ｄＵＴＰ標識化ＨＭＧ１ ｃＤＮＡプローブとハイブリ
ダイズさせた。要するに、１０ｎｇ／ｍｌのプローブ濃度で６５℃１６時間、ハ
イブリダイゼーション緩衝液（５×ＳＳＣ／２％ブロッキング試薬／０．１％Ｓ
ＤＳ／５０％ホルムアミド、Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN）中でハ
イブリダイゼーションを実施した。ハイブリダイゼーション後、フィルターを室
温で、０．５×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳで５分間、２回洗浄して、０．２×ＳＳ
Ｃ／０．１％ＳＤＳで１０分間、２回洗浄した。標準的方法により、ホスファタ
ーゼに結合された抗ジゴキシゲニン抗体と、検出試薬、約４−ニトロブルーテト
ラゾリウムクロリド（ＮＢＴ）および５−クロモ−４−クロロ−３−インドリル
−ホスフェート（ＢＣＩＰ）（Boehringer-Mannheim）を用いて、シグナルを検
出した。シルバー画像スキャナー（シルバースキャナーＩＩ、Lacie Limited, B
eaverton, OR）でブロットを走査して、相対光学濃度（恣意単位ＡＵで）をＮＩ
Ｈ１．５９イメージソフトウエアを用いて定量した。最高レベルは冨マクロファ
ージ組織で観察されたことに留意されたい。 【図６】 図６は、正常コントロール被験者の群と比較した場合、敗血症を
有する入院ヒト被験者において検出された血清ＨＭＧ１レベルの増大が検出し、
この場合、敗血症患者は、患者が死亡したかまたは生存したかに関してさらに分
類されたことを示す。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｐ 3/04
Ａ６１Ｐ 3/04 29/00
29/00 31/04
31/04 43/00 １１１
43/00 １１１ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ
Ｇ０１Ｎ 33/15 33/50 Ｚ
33/50 Ａ６１Ｋ 37/02
(72)発明者 トレイシー、ケヴィン・ジェイ
アメリカ合衆国、コネティカット州、オー
ルド・グリーニッチ、ハイヴュー・アベニ
ュー 17
(72)発明者 ウォン、ハイチャオ
アメリカ合衆国、ニュージャージー州、エ
ディソン、ホウソーン・ドライブ ４
Ｆターム(参考） 2G045 BB20 CA26 DA12 DA13 DA36
FB03 GC22 JA20
4C084 AA02 AA06 AA13 AA17 AA20
BA44 ZA02 ZA03 ZA08 ZA36
ZA37 ZA40 ZA51 ZA53 ZA59
ZA66 ZA75 ZA81 ZA85 ZA89
ZA90 ZA92 ZA96 ZA97 ZB07
ZB08 ZB11 ZB13 ZB26 ZB32
ZB33 ZB35 ZB37 ZC11 ZC21
ZC35 ZC37 ZC41 ZC42 ZC55
4C085 AA13 BB01 BB11 BB17 DD62
EE03
4C086 AA01 AA02 EA16 MA01 MA02
MA04 NA14 ZA01 ZA02 ZA03
ZA08 ZA33 ZA36 ZA37 ZA38
ZA40 ZA51 ZA53 ZA55 ZA59
ZA66 ZA75 ZA81 ZA85 ZA89
ZA90 ZA92 ZA96 ZA97 ZB07
ZB08 ZB11 ZB13 ZB26 ZB32
ZB33 ZB35 ZB37 ZC11 ZC21
ZC35 ZC37 ZC41 ZC55
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 【請求項１】 炎症性サイトカインカスケードの活性化を特徴とする症状（
疾患）を治療するための医薬組成物であって、有効量の、ＨＭＧ１のアンタゴニ
ストまたは阻害剤を含む組成物。 【請求項２】 敗血症および関連症状を治療するための医薬組成物であって
、有効量のＨＭＧ１アンタゴニストを含む組成物。 【請求項３】 前記ＨＭＧ１アンタゴニストは、ＨＭＧ１と結合する抗体、
ＨＭＧ１アンチセンス配列およびＨＭＧ１受容体アンタゴニストから成る群から
選択される請求項１または２記載の医薬組成物。 【請求項４】 炎症性サイトカインカスケードの活性化を特徴とする症状の
治療方法であって、有効量のＨＭＧ１アンタゴニストを投与することを含む方法
。 【請求項５】 炎症性サイトカインカスケード症候群の活性化を伴う敗血症
および関連症状の治療方法であって、有効量のＨＭＧ１アンタゴニストを投与す
ることを含む方法。 【請求項６】 前記ＨＭＧ１アンタゴニストと組合せて第二作用物質を投与
することをさらに含み、該第二作用物質は、初期敗血症メディエータのアンタゴ
ニストである請求項４または５記載の方法。 【請求項７】 前記第二作用物質は、ＴＮＦ、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、Ｍ
ＩＦおよびＩＬ−６から成る群から選択されるサイトカインのアンタゴニストで
ある請求項６記載の方法。 【請求項８】 前記第二作用物質は、ＴＮＦまたはＭＩＦに対する抗体、あ
るいはＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）である請求項７記載の方
法。 【請求項７】 炎症性カスケードの活性化を特徴とする症状に伴うショック
様症状を示しているかまたはその症状を示す危険性のある患者に関する敗血症お
よび関連症状の重症度をモニタリングし、そして起こり得る臨床経過を予測する
ための診断および予後判定方法であって、試料中のＨＭＧ１の濃度を測定し、該
濃度を、同様の試料中のＨＭＧ１の正常濃度範囲を代表するＨＭＧ１に関する標
準と比較し、それにより高レベルのＨＭＧ１が、乏しい予後または毒性反応の可
能性を示すことを含む方法。 【請求項８】 前記試料は、血清試料である請求項７記載の診断または予後
判定方法。 【請求項９】 敗血症または敗血症性ショックの重症度の診断またはモニタ
リングをモニタリングするための診断方法であって、敗血症または敗血症性ショ
ック様症状を示す危険性のあるまたは示している患者におけるＨＭＧ１の血清濃
度を測定し、それにより高レベルのＨＭＧ１が敗血症または敗血症性ショックの
診断あるいは乏しい予後を示すことを含む方法。 【請求項１０】 体重損失をもたらすか、または肥満症を治療するための医
薬組成物であって、有効量の、ＨＭＧ１またはその治療的活性断片を含む組成物
。 【請求項１１】 体重損失をもたらすか、または肥満症を治療するための方
法であって、有効量のＨＭＧ１またはその治療的活性断片を投与することを含む
方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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|---|---|---|---|
| JP2011058031A Division JP5745299B2 (ja) | 1999-02-11 | 2011-03-16 | 炎症症状を治療するためのｈｍｇ１のアンタゴニスト |
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Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007049468A1 (ja) | 2005-10-24 | 2007-05-03 | National University Corporation Okayama University | 脳梗塞抑制剤 |
| JP2007518062A (ja) * | 2003-09-29 | 2007-07-05 | バイオサイト インコーポレイテッド | 敗血症を診断する方法および診断するための組成物 |
| WO2007135992A1 (ja) | 2006-05-19 | 2007-11-29 | National University Corporation Okayama University | 脳血管攣縮抑制剤 |
| JP2008511300A (ja) * | 2004-09-03 | 2008-04-17 | クレアビリス・セラピューティクス・エスピーエー | プロテアーゼ抵抗性ヒトおよび非ヒトＨＭＧＢ１Ｂｏｘ−Ａ変異体、ならびにそれらの治療／診断への使用 |
| JP2008520552A (ja) * | 2004-10-22 | 2008-06-19 | メディミューン，インコーポレーテッド | Ｈｍｇｂ１に対する高親和性の抗体およびその使用法 |
| JP2009096739A (ja) * | 2007-10-15 | 2009-05-07 | Okayama Univ | Ｂ細胞悪性リンパ腫治療薬 |
| JP2013521511A (ja) * | 2010-03-10 | 2013-06-10 | アンスティテュ・パストゥール | 神経学的障害の予後判定のためのｈｍｇｂ１および抗ｈｍｇｂ１抗体 |
| JP2020148557A (ja) * | 2019-03-12 | 2020-09-17 | 株式会社シノテスト | 試料中のｈｍｇｂ１の測定方法及び測定試薬 |
Families Citing this family (119)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6387639B1 (en) * | 1998-11-10 | 2002-05-14 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Ma family polypeptides and anti-Ma antibodies |
| US7151082B2 (en) * | 1999-02-11 | 2006-12-19 | The Feinstein Institute For Medical Research | Antagonists of HMG1 for treating inflammatory conditions |
| US6303321B1 (en) | 1999-02-11 | 2001-10-16 | North Shore-Long Island Jewish Research Institute | Methods for diagnosing sepsis |
| US20060154319A1 (en) * | 1999-04-29 | 2006-07-13 | Flodgaard Hans J | Inhibition of bradykinin release |
| US6610713B2 (en) * | 2000-05-23 | 2003-08-26 | North Shore - Long Island Jewish Research Institute | Inhibition of inflammatory cytokine production by cholinergic agonists and vagus nerve stimulation |
| US8914114B2 (en) | 2000-05-23 | 2014-12-16 | The Feinstein Institute For Medical Research | Inhibition of inflammatory cytokine production by cholinergic agonists and vagus nerve stimulation |
| ITMI20010562A1 (it) | 2001-03-16 | 2002-09-16 | Marco E Bianchi | Inibitori o antagonisti della proteina hmg1 per il trattamento di disordini vascolari |
| US7304034B2 (en) | 2001-05-15 | 2007-12-04 | The Feinstein Institute For Medical Research | Use of HMGB fragments as anti-inflammatory agents |
| US7220723B2 (en) * | 2001-05-15 | 2007-05-22 | The Feinstein Institute For Medical Research | Inhibitors of the interaction between HMGB polypeptides and toll-like receptor 2 as anti-inflammatory agents |
| US20030060410A1 (en) * | 2001-05-15 | 2003-03-27 | North Shore Long Island Jewish Research Institute | Use of HMG fragments as anti-inflammatory agents |
| US7026121B1 (en) | 2001-06-08 | 2006-04-11 | Expression Diagnostics, Inc. | Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection |
| US7235358B2 (en) | 2001-06-08 | 2007-06-26 | Expression Diagnostics, Inc. | Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection |
| US6905827B2 (en) | 2001-06-08 | 2005-06-14 | Expression Diagnostics, Inc. | Methods and compositions for diagnosing or monitoring auto immune and chronic inflammatory diseases |
| JP5055598B2 (ja) * | 2001-07-13 | 2012-10-24 | 株式会社シノテスト | ヒトｈｍｇ−１に特異的に結合する抗体を用いるヒトｈｍｇ−１の免疫学的測定方法及び免疫学的測定試薬 |
| ITMI20011986A1 (it) * | 2001-09-25 | 2003-03-25 | San Raffaele Centro Fond | Metodo e composizione per l'attivazione di cellule presentanti l'antigene |
| US7465555B2 (en) * | 2002-04-02 | 2008-12-16 | Becton, Dickinson And Company | Early detection of sepsis |
| CN1671742A (zh) | 2002-07-03 | 2005-09-21 | 塔博尔山圣拉弗尔基金中心 | Hmgb1在治疗组织损伤和/或促进组织修复中的用途 |
| CA2491026A1 (en) * | 2002-07-05 | 2004-01-15 | The University Of British Columbia | Diagnosis of sepsis using mitochondrial nucleic acid assays |
| GB0226251D0 (en) * | 2002-11-11 | 2002-12-18 | San Raffaele Centro Fond | Acetylated protein |
| MXPA05005031A (es) | 2002-11-12 | 2005-11-17 | Becton Dickinson Co | Diagnostico de la sepsis o sirs usando perfiles de biomarcadores. |
| CA2505843A1 (en) * | 2002-11-12 | 2004-05-27 | Becton, Dickinson And Company | Diagnosis of sepsis or sirs using biomarker profiles |
| MXPA05005073A (es) * | 2002-11-12 | 2005-11-17 | Becton Dickinson Co | Diagnostico de la sepsis o sirs usando perfiles de biomarcadores. |
| US20040156851A1 (en) * | 2002-11-20 | 2004-08-12 | Critical Therapeutics, Inc. | HMGB1 combination therapies |
| CA2505682A1 (en) * | 2002-11-20 | 2004-06-03 | Kevin J. Tracey | Use of hmgb polypeptides for increasing immune responses |
| US20040141948A1 (en) * | 2002-11-20 | 2004-07-22 | Critical Therapeutics, Inc. | Use of HMGB fragments as anti-inflammatory agents |
| CA2506328A1 (en) * | 2002-11-20 | 2004-06-03 | Critical Therapeutics, Inc. | Use of hmgb fragments as anti-inflammatory agents |
| EP1581223B2 (en) | 2002-12-06 | 2016-05-25 | The Feinstein Institute for Medical Research | Inhibition of inflamation using alpha 7 receptor-binding cholinergic agonists |
| WO2004079368A2 (en) | 2003-03-08 | 2004-09-16 | Auvation Ltd | Markers for colorectal cancer |
| US7892745B2 (en) | 2003-04-24 | 2011-02-22 | Xdx, Inc. | Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection |
| US20090069227A9 (en) * | 2003-04-29 | 2009-03-12 | Capogrossi Maurizio C | Use of HMGB1 to promote stem cell migration and/or proliferation |
| FR2855832B1 (fr) * | 2003-06-03 | 2007-09-14 | Biomerieux Sa | Procede de diagnostic et/ou de pronostic d'un syndrome septique |
| US7696169B2 (en) * | 2003-06-06 | 2010-04-13 | The Feinstein Institute For Medical Research | Inhibitors of the interaction between HMGB polypeptides and toll-like receptor 2 as anti-inflammatory agents |
| AU2004272607B2 (en) | 2003-09-11 | 2008-11-06 | Cornerstone Therapeutics Inc. | Monoclonal antibodies against HMGB1 |
| US20070269437A1 (en) * | 2003-09-19 | 2007-11-22 | Leukotech A/S | Pro-Inflammatory and Anti-Inflammatory Antibodies Against the Heparin-Binding Protein (Hbp) |
| US20050148029A1 (en) * | 2003-09-29 | 2005-07-07 | Biosite, Inc. | Methods and compositions for determining treatment regimens in systemic inflammatory response syndromes |
| US20050196817A1 (en) * | 2004-01-20 | 2005-09-08 | Molecular Staging Inc. | Biomarkers for sepsis |
| US8729129B2 (en) | 2004-03-25 | 2014-05-20 | The Feinstein Institute For Medical Research | Neural tourniquet |
| US10912712B2 (en) | 2004-03-25 | 2021-02-09 | The Feinstein Institutes For Medical Research | Treatment of bleeding by non-invasive stimulation |
| EP1768698A4 (en) * | 2004-06-17 | 2009-01-28 | Medimmune Inc | IMMUNOGENIC COMPOSITIONS COMPRISING HMGB1 POLYPEPTIDES |
| EP1814576A2 (en) * | 2004-07-20 | 2007-08-08 | Critical Therapeutics, Inc. | Combination therapies of hmgb and complement inhibitors against inflammation |
| US7645575B2 (en) | 2004-09-08 | 2010-01-12 | Xdx, Inc. | Genes useful for diagnosing and monitoring inflammation related disorders |
| US8129130B2 (en) | 2004-10-22 | 2012-03-06 | The Feinstein Institute For Medical Research | High affinity antibodies against HMGB1 and methods of use thereof |
| US20080050832A1 (en) * | 2004-12-23 | 2008-02-28 | Buechler Kenneth F | Methods and compositions for diagnosis and/or prognosis in systemic inflammatory response syndromes |
| US11207518B2 (en) | 2004-12-27 | 2021-12-28 | The Feinstein Institutes For Medical Research | Treating inflammatory disorders by stimulation of the cholinergic anti-inflammatory pathway |
| AU2005323463B2 (en) | 2004-12-27 | 2009-11-19 | The Feinstein Institutes For Medical Research | Treating inflammatory disorders by electrical vagus nerve stimulation |
| US20060157647A1 (en) * | 2005-01-18 | 2006-07-20 | Becton, Dickinson And Company | Multidimensional liquid chromatography/spectrometry |
| ITRM20050032A1 (it) * | 2005-01-21 | 2006-07-22 | Marco E Bianchi | Inibitori ed antagonisti di hmgb1 in grado di inibire la patogenesi e la progressione della malattia aterosclerotica. |
| FR2881437B1 (fr) | 2005-01-31 | 2010-11-19 | Biomerieux Sa | Procede pour le diagnostic/pronostic d'un syndrome septique |
| CA2605143A1 (en) | 2005-04-15 | 2006-10-26 | Becton, Dickinson And Company | Diagnosis of sepsis |
| EP1907003A2 (en) * | 2005-05-13 | 2008-04-09 | The Feinstein Institute for Medical Research | Combination therapy with inhibitors of hmgb and caspase for the treatment of inflammatory diseases |
| WO2006138429A2 (en) | 2005-06-16 | 2006-12-28 | The Feinstein Institute For Medical Research | Antibodies against hmgb1 and fragments thereof |
| KR20080025174A (ko) | 2005-06-23 | 2008-03-19 | 메디뮨 인코포레이티드 | 응집 및 단편화 프로파일이 최적화된 항체 제제 |
| EP1909834A2 (en) * | 2005-07-18 | 2008-04-16 | Critical Therapeutics, Inc. | Use of hmgb1 antagonists for the treatment of inflammatory skin conditions |
| WO2007031100A1 (en) * | 2005-09-14 | 2007-03-22 | Ostini, Marco | Active immunotherapy of life-threatening systemic inflammation |
| US20100172909A1 (en) * | 2005-10-24 | 2010-07-08 | Masahiro Nishibori | Cerebral edema suppressant |
| EP1959997A4 (en) * | 2005-11-28 | 2009-12-23 | Medimmune Llc | ANTAGONISTS OF HMGB1 AND / OR RAGE AND METHOD OF USE THEREOF |
| WO2007130725A2 (en) | 2006-02-06 | 2007-11-15 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | Use of hmgb1 for protection against ischemia reperfusion injury |
| US7986727B2 (en) * | 2006-03-28 | 2011-07-26 | Globalfoundries Inc. | In-band method to configure equalization levels |
| US8570881B2 (en) * | 2006-03-28 | 2013-10-29 | Advanced Micro Devices, Inc. | Transmitter voltage and receiver time margining |
| US7993832B2 (en) | 2006-08-14 | 2011-08-09 | Xdx, Inc. | Methods and compositions for diagnosing and monitoring the status of transplant rejection and immune disorders |
| WO2008035674A1 (fr) † | 2006-09-20 | 2008-03-27 | Asahi Kasei Chemicals Corporation | Membrane microporeuse en polyoléfine et séparateur pour batteries à électrolyte non aqueux |
| WO2008140484A2 (en) | 2006-11-09 | 2008-11-20 | Xdx, Inc. | Methods for diagnosing and monitoring the status of systemic lupus erythematosus |
| JP5225109B2 (ja) * | 2007-02-15 | 2013-07-03 | 国立大学法人 熊本大学 | ヒトｈｍｇｂ−１に特異的に結合する抗体を有効成分として含有する治療剤 |
| JP5241518B2 (ja) * | 2007-02-15 | 2013-07-17 | 国立大学法人九州大学 | 抗ｈｍｇｂ−１抗体を含む間質性肺疾患治療剤 |
| EP2123298A4 (en) * | 2007-02-15 | 2011-09-28 | Univ Fukuoka | MEANS FOR SUPPRESSING THE SLIP IN ORGAN TRANSPLANTATIONS WITH ANTI-HMGB-1 ANTIBODIES |
| US20090004755A1 (en) * | 2007-03-23 | 2009-01-01 | Biosite, Incorporated | Methods and compositions for diagnosis and/or prognosis in systemic inflammatory response syndromes |
| US8221995B2 (en) * | 2007-03-23 | 2012-07-17 | Seok-Won Lee | Methods and compositions for diagnosis and/or prognosis in systemic inflammatory response syndromes |
| US20100255513A1 (en) * | 2007-03-30 | 2010-10-07 | Denson Lee A | Serological markers of inflammatory bowel disease phenotype and disease progression |
| GB0711327D0 (en) * | 2007-06-12 | 2007-07-25 | Hansa Medical Ab | Diagnostic method |
| US8470966B2 (en) | 2007-08-10 | 2013-06-25 | Protelica, Inc. | Universal fibronectin type III binding-domain libraries |
| US8391970B2 (en) | 2007-08-27 | 2013-03-05 | The Feinstein Institute For Medical Research | Devices and methods for inhibiting granulocyte activation by neural stimulation |
| WO2009033050A1 (en) * | 2007-09-07 | 2009-03-12 | University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth Sys Tem Of Higher Education | Diagnostic and therapeutic uses of augmenter of liver regeneration in inflammatory conditions |
| US9662490B2 (en) | 2008-03-31 | 2017-05-30 | The Feinstein Institute For Medical Research | Methods and systems for reducing inflammation by neuromodulation and administration of an anti-inflammatory drug |
| WO2009146030A1 (en) | 2008-03-31 | 2009-12-03 | The Feinstein Institute For Medical Research | Methods and systems for reducing inflammation by neuromodulation of t-cell activity |
| WO2009123737A2 (en) | 2008-04-03 | 2009-10-08 | Becton, Dickinson And Company | Advanced detection of sepsis |
| EP2355893B1 (en) | 2008-11-18 | 2013-12-25 | Setpoint Medical Corporation | Devices for optimizing electrode placement for anti-inflamatory stimulation |
| EP2376923A4 (en) * | 2008-12-22 | 2012-08-15 | Children S Res Inst | SEPSIE DETECTION METHOD |
| US8996116B2 (en) | 2009-10-30 | 2015-03-31 | Setpoint Medical Corporation | Modulation of the cholinergic anti-inflammatory pathway to treat pain or addiction |
| US9211410B2 (en) | 2009-05-01 | 2015-12-15 | Setpoint Medical Corporation | Extremely low duty-cycle activation of the cholinergic anti-inflammatory pathway to treat chronic inflammation |
| EP2440284B1 (en) | 2009-06-09 | 2018-09-12 | Setpoint Medical Corporation | Nerve cuff with pocket for leadless stimulator |
| US11051744B2 (en) | 2009-11-17 | 2021-07-06 | Setpoint Medical Corporation | Closed-loop vagus nerve stimulation |
| US9833621B2 (en) | 2011-09-23 | 2017-12-05 | Setpoint Medical Corporation | Modulation of sirtuins by vagus nerve stimulation |
| US20110123483A1 (en) * | 2009-11-23 | 2011-05-26 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Hmgb1 for cancer treatment |
| CN105126248B (zh) | 2009-12-23 | 2018-06-12 | 赛博恩特医疗器械公司 | 用于治疗慢性炎症的神经刺激设备和系统 |
| CN103097399A (zh) | 2010-03-29 | 2013-05-08 | 南加利福尼亚大学 | 用于去除生物膜的组合物及方法 |
| WO2011127176A2 (en) * | 2010-04-06 | 2011-10-13 | The Children's Research Institute | Methods for treating or screening for compounds for the treatment of sepsis |
| JP5786020B2 (ja) | 2010-04-16 | 2015-09-30 | アボットジャパン株式会社 | 関節リウマチを診断する方法および試薬 |
| IT1406051B1 (it) * | 2010-08-05 | 2014-02-06 | D M G Italia S R L | Uso di hmgb1 come marcatore biologico di infiammazione intestinale umana, metodo non invasivo per la sua rilevazione in campioni fecali e kit relativo. |
| EP2613797B1 (en) | 2010-09-09 | 2015-11-04 | University Of Southern California | Compositions and methods for the removal of biofilms |
| GB201016161D0 (en) | 2010-09-24 | 2010-11-10 | Hansa Medical Ab | Diagnostic method |
| GB201102108D0 (en) | 2011-02-07 | 2011-03-23 | Hansa Medical Ab | Diagnostic method |
| WO2012154865A2 (en) | 2011-05-09 | 2012-11-15 | Setpoint Medical Corporation | Single-pulse activation of the cholinergic anti-inflammatory pathway to treat chronic inflammation |
| WO2012170742A2 (en) | 2011-06-07 | 2012-12-13 | University Of Hawaii | Treatment and prevention of cancer with hmgb1 antagonists |
| WO2012170740A2 (en) | 2011-06-07 | 2012-12-13 | University Of Hawaii | Biomarker of asbestos exposure and mesothelioma |
| ES2683035T3 (es) * | 2011-10-05 | 2018-09-24 | The Rockefeller University | Lisinas de bacteriófago diméricas |
| US20130171659A1 (en) * | 2011-12-28 | 2013-07-04 | Abbott Japan Co., Ltd. | Methods of prognosis and diagnosis of rheumatoid arthritis |
| US9572983B2 (en) | 2012-03-26 | 2017-02-21 | Setpoint Medical Corporation | Devices and methods for modulation of bone erosion |
| WO2014110225A1 (en) * | 2013-01-09 | 2014-07-17 | The Feinstein Institute For Medical Research | Hmgb1-binding beads and uses thereof |
| WO2014115430A1 (ja) | 2013-01-28 | 2014-07-31 | 株式会社イーベック | ヒト化抗ｈｍｇｂ１抗体もしくはその抗原結合性断片 |
| US11274144B2 (en) | 2013-06-13 | 2022-03-15 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Compositions and methods for the removal of biofilms |
| US9745366B2 (en) | 2013-09-23 | 2017-08-29 | University Of Southern California | Compositions and methods for the prevention of microbial infections |
| US11248040B2 (en) | 2013-09-26 | 2022-02-15 | Trellis Bioscience, Llc | Binding moieties for biofilm remediation |
| US10233234B2 (en) | 2014-01-13 | 2019-03-19 | Trellis Bioscience, Llc | Binding moieties for biofilm remediation |
| US9840555B2 (en) | 2013-11-04 | 2017-12-12 | Li-Te Chin | Method for producing human monoclonal antibodies that binds to at least one part of HMGB1 |
| US11311725B2 (en) | 2014-10-24 | 2022-04-26 | Setpoint Medical Corporation | Systems and methods for stimulating and/or monitoring loci in the brain to treat inflammation and to enhance vagus nerve stimulation |
| WO2016126807A1 (en) | 2015-02-03 | 2016-08-11 | Setpoint Medical Corporation | Apparatus and method for reminding, prompting, or alerting a patient with an implanted stimulator |
| CA2993009A1 (en) | 2015-07-31 | 2017-02-09 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Peptides and antibodies for the removal of biofilms |
| US11274132B2 (en) | 2015-12-11 | 2022-03-15 | Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg | Combined preparations of PKM2 modulators and HMGB1 |
| US10596367B2 (en) | 2016-01-13 | 2020-03-24 | Setpoint Medical Corporation | Systems and methods for establishing a nerve block |
| EP3405255A4 (en) | 2016-01-20 | 2019-10-16 | Setpoint Medical Corporation | IMPLANTABLE MICROSTIMULATORS AND INDUCTION RECHARGE SYSTEMS |
| WO2017127756A1 (en) | 2016-01-20 | 2017-07-27 | Setpoint Medical Corporation | Control of vagal stimulation |
| US11471681B2 (en) | 2016-01-20 | 2022-10-18 | Setpoint Medical Corporation | Batteryless implantable microstimulators |
| US10583304B2 (en) | 2016-01-25 | 2020-03-10 | Setpoint Medical Corporation | Implantable neurostimulator having power control and thermal regulation and methods of use |
| WO2018170178A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Composition and methods for disruption of bacterial biofilms without accompanying inflammation |
| EP3668402A4 (en) | 2017-08-14 | 2021-05-19 | Setpoint Medical Corporation | VAGUS NERVOUS STIMULATION PRE-SCREENING TEST |
| US11260229B2 (en) | 2018-09-25 | 2022-03-01 | The Feinstein Institutes For Medical Research | Methods and apparatuses for reducing bleeding via coordinated trigeminal and vagal nerve stimulation |
| WO2020227603A1 (en) | 2019-05-09 | 2020-11-12 | The Feinstein Institutes For Medical Research | Hmgb1 antagonist |
| WO2021236977A1 (en) | 2020-05-21 | 2021-11-25 | The Feinstein Institutes For Medical Research | Systems and methods for vagus nerve stimulation |
| JP7207772B2 (ja) | 2021-04-23 | 2023-01-18 | 株式会社タイセン工業 | 仮設橋ユニット |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62166897A (ja) * | 1986-01-20 | 1987-07-23 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | 核内非ヒストン蛋白質に対するモノクロ−ナル抗体 |
Family Cites Families (86)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4678772A (en) | 1983-02-28 | 1987-07-07 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Compositions containing glycyrrhizin |
| JPS6032714A (ja) | 1983-08-01 | 1985-02-19 | Teijin Ltd | 鼻腔粘膜に適用するための安定化された粉末状薬学的組成物 |
| US5585344A (en) | 1984-03-19 | 1996-12-17 | The Rockefeller University | Liver-derived receptors for advanced glycosylation endproducts and uses thereof |
| JPS63135351A (ja) | 1986-11-28 | 1988-06-07 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | グリチルレチン酸誘導体、その製法及び該化合物を有効成分とする抗潰瘍剤 |
| GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
| US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| US5605690A (en) | 1989-09-05 | 1997-02-25 | Immunex Corporation | Methods of lowering active TNF-α levels in mammals using tumor necrosis factor receptor |
| US5859205A (en) | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
| US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| JP2998287B2 (ja) | 1991-03-13 | 2000-01-11 | 千寿製薬株式会社 | グリチルレチン酸誘導体 |
| US5656272A (en) | 1991-03-18 | 1997-08-12 | New York University Medical Center | Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies |
| ES2341666T3 (es) | 1991-12-02 | 2010-06-24 | Medimmune Limited | Produccion de autoanticuerpos de repertorios de segmentos de anticue rpos expresados en la superficie de fagos. |
| IT1253431B (it) | 1991-12-02 | 1995-08-08 | Valetudo S R L | Preparati farmaceutici per uso topico destinati al trattamento della psoriasi e della dermatite atopica |
| IT1254321B (it) | 1992-04-10 | 1995-09-14 | Kemiprogress S R L | Composizione farmaceutica per il trattamento e la prevenzione delle infiammazioni cutanee e della mucosa orale. |
| GB9217316D0 (en) * | 1992-08-14 | 1992-09-30 | Ludwig Inst Cancer Res | Schwann cell mitogenic factor,its preparation and use |
| EP0727487A1 (en) † | 1995-02-17 | 1996-08-21 | K.U. Leuven Research & Development | Multiple-tumor aberrant growth genes |
| JP3472048B2 (ja) | 1995-10-09 | 2003-12-02 | 鐘淵化学工業株式会社 | 自己免疫疾患の診断薬 |
| US6323329B1 (en) * | 1995-12-21 | 2001-11-27 | Jorn Bullerdiek | Nucleic acid sequences of genes encoding high mobility group proteins |
| DE19548122A1 (de) | 1995-12-21 | 1997-06-26 | Joern Prof Dr Bullerdiek | Nukleinsäuresequenzen von Genen der High Mobility Group Proteine sowie Verwendungen derselben |
| US5864018A (en) | 1996-04-16 | 1999-01-26 | Schering Aktiengesellschaft | Antibodies to advanced glycosylation end-product receptor polypeptides and uses therefor |
| US6171779B1 (en) | 1996-07-12 | 2001-01-09 | University Of Medicine & Dentistry Of New Jersey | HMGI proteins in cancer |
| US6720472B2 (en) | 1996-07-12 | 2004-04-13 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | HMGI proteins in cancer and obesity |
| EP1577671A1 (en) * | 1996-07-17 | 2005-09-21 | Kaneka Corporation | Diagnostic drugs for autoimmune diseases |
| US7258857B2 (en) | 1996-11-22 | 2007-08-21 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Rage-related methods for treating inflammation |
| US20030032090A1 (en) | 1997-05-07 | 2003-02-13 | Schering Corporation, A New Jersey Corporation | Human receptor proteins; related reagents and methods |
| EP1798288B1 (en) | 1997-05-07 | 2009-09-16 | Schering Corporation | Human Toll-like receptor proteins, related reagents and methods |
| IT1291366B1 (it) | 1997-05-14 | 1999-01-07 | Angelini Ricerche Spa | Composizione farmaceutica antivirale comprendente acido glicirrizico ed almeno una proteina dotata di attivita' antivirale |
| US20030027260A1 (en) | 1997-10-17 | 2003-02-06 | Genentech, Inc. | Human Toll homologues |
| AU1070399A (en) | 1997-10-17 | 1999-05-10 | Genentech Inc. | Human toll homologues |
| ES2137125B1 (es) | 1997-11-18 | 2000-08-16 | Vinyals S A Lab Dr | La utilizacion de la sal de zinc del acido glicirretico en preparados contra el acne y las composiciones que contienen dicha sal. |
| US6783961B1 (en) | 1999-02-26 | 2004-08-31 | Genset S.A. | Expressed sequence tags and encoded human proteins |
| IT1299583B1 (it) | 1998-05-19 | 2000-03-16 | Vander Way Limited | Uso di proteine hmg-i per la preparazione di medicamenti ad attivita' citotossica |
| ATE378418T1 (de) | 1998-10-06 | 2007-11-15 | Univ Columbia | Extrazelluläres, neues rage-bindendes protein (en-rage) und dessen verwendungen |
| US6303321B1 (en) | 1999-02-11 | 2001-10-16 | North Shore-Long Island Jewish Research Institute | Methods for diagnosing sepsis |
| US7151082B2 (en) * | 1999-02-11 | 2006-12-19 | The Feinstein Institute For Medical Research | Antagonists of HMG1 for treating inflammatory conditions |
| US6177077B1 (en) | 1999-02-24 | 2001-01-23 | Edward L. Tobinick | TNT inhibitors for the treatment of neurological disorders |
| AU3395900A (en) | 1999-03-12 | 2000-10-04 | Human Genome Sciences, Inc. | Human lung cancer associated gene sequences and polypeptides |
| TWI221082B (en) | 1999-04-14 | 2004-09-21 | Sumitomo Chemical Co | Pesticidal compositions |
| WO2000075358A2 (en) | 1999-06-04 | 2000-12-14 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Mammalian toll homologues and uses thereof |
| US6794132B2 (en) | 1999-10-02 | 2004-09-21 | Biosite, Inc. | Human antibodies |
| GB9927332D0 (en) | 1999-11-18 | 2000-01-12 | Leiv Eiriksson Nyfotek As | Novel antibody and uses thereof |
| US6677321B1 (en) | 1999-12-09 | 2004-01-13 | Bruce Levin | Methods and compositions for treatment of inflammatory disease |
| GB0001704D0 (en) | 2000-01-25 | 2000-03-15 | Glaxo Group Ltd | Protein |
| US6436703B1 (en) | 2000-03-31 | 2002-08-20 | Hyseq, Inc. | Nucleic acids and polypeptides |
| EP1275713A4 (en) | 2000-03-31 | 2004-06-30 | Mochida Pharm Co Ltd | BINDING INHIBITOR BETWEEN THE TOLL-TYPE RECEPTOR AND CD14 |
| JP2001322276A (ja) * | 2000-05-15 | 2001-11-20 | Fuji Xerox Co Ltd | インクジェット記録ヘッド、インクジェット記録装置及びヘッド作製方法 |
| EP1714980A1 (en) | 2000-05-25 | 2006-10-25 | Schering Corporation | Human receptor proteins, related reagents and methods |
| GB0015325D0 (en) | 2000-06-22 | 2000-08-16 | Danionics As | Electrochemical cells |
| MXPA03007878A (es) | 2001-03-02 | 2004-07-08 | Medimmune Inc | Metodos de prevencion o tratamiento de alteraciones inflamatorias o autoinmunes mediante la administracion de los antagonistas alfav, beta3 de integrina. |
| CA2440042C (en) | 2001-03-05 | 2011-09-27 | Transtech Pharma, Inc. | Carboxamide derivatives as therapeutic agents |
| JP2004523565A (ja) | 2001-03-05 | 2004-08-05 | トランス テック ファーマ，インコーポレイテッド | 治療因子としてのベンゾイミダゾール誘導体 |
| CA2440480A1 (en) | 2001-03-15 | 2002-09-26 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | Method of using pyruvate and/or its derivatives for the treatment of cytokine-mediated inflammatory conditions |
| ITMI20010562A1 (it) | 2001-03-16 | 2002-09-16 | Marco E Bianchi | Inibitori o antagonisti della proteina hmg1 per il trattamento di disordini vascolari |
| JP2004536585A (ja) | 2001-05-09 | 2004-12-09 | エール・ユニバーシティ | トル／インターロイキン−１受容体アダプタータンパク質（ｔｉｒａｐ） |
| WO2002089743A2 (en) | 2001-05-09 | 2002-11-14 | The Regents Of The University Of Michigan | Use of compositions for treating rosacea |
| US20030060410A1 (en) | 2001-05-15 | 2003-03-27 | North Shore Long Island Jewish Research Institute | Use of HMG fragments as anti-inflammatory agents |
| US7304034B2 (en) | 2001-05-15 | 2007-12-04 | The Feinstein Institute For Medical Research | Use of HMGB fragments as anti-inflammatory agents |
| US7220723B2 (en) | 2001-05-15 | 2007-05-22 | The Feinstein Institute For Medical Research | Inhibitors of the interaction between HMGB polypeptides and toll-like receptor 2 as anti-inflammatory agents |
| JP4823465B2 (ja) | 2001-07-13 | 2011-11-24 | 株式会社シノテスト | ヒトｈｍｇ−１に特異的に結合する抗体並びにこの抗体を用いるヒトｈｍｇ−１の免疫学的測定方法及び免疫学的測定試薬 |
| US20030032674A1 (en) | 2001-08-13 | 2003-02-13 | Hwang Daniel H. | Use of unsaturated fatty acids to treat severe inflammatory diseases |
| WO2003022296A1 (en) | 2001-09-07 | 2003-03-20 | The Trustees Of Boston University | Method and composition for treating immune complex associated disorders |
| JP2003088388A (ja) | 2001-09-14 | 2003-03-25 | Herikkusu Kenkyusho:Kk | 新規な全長ｃＤＮＡ |
| EP1293566A1 (en) | 2001-09-17 | 2003-03-19 | Societe Des Produits Nestle S.A. | A soluble toll-like receptor |
| AU2002364607A1 (en) | 2001-12-28 | 2003-07-24 | The Burnham Institute | Novel ligand involved in the transmigration of leukocytes . |
| ATE529110T1 (de) | 2002-03-05 | 2011-11-15 | Transtech Pharma Inc | Mono- und bicyclische azolderivate die die interaktion von liganden mit rage hemmen |
| CN1671742A (zh) | 2002-07-03 | 2005-09-21 | 塔博尔山圣拉弗尔基金中心 | Hmgb1在治疗组织损伤和/或促进组织修复中的用途 |
| GB0226251D0 (en) | 2002-11-11 | 2002-12-18 | San Raffaele Centro Fond | Acetylated protein |
| US20040141948A1 (en) | 2002-11-20 | 2004-07-22 | Critical Therapeutics, Inc. | Use of HMGB fragments as anti-inflammatory agents |
| CA2506328A1 (en) | 2002-11-20 | 2004-06-03 | Critical Therapeutics, Inc. | Use of hmgb fragments as anti-inflammatory agents |
| CA2505682A1 (en) | 2002-11-20 | 2004-06-03 | Kevin J. Tracey | Use of hmgb polypeptides for increasing immune responses |
| US7696169B2 (en) | 2003-06-06 | 2010-04-13 | The Feinstein Institute For Medical Research | Inhibitors of the interaction between HMGB polypeptides and toll-like receptor 2 as anti-inflammatory agents |
| AU2004272607B2 (en) | 2003-09-11 | 2008-11-06 | Cornerstone Therapeutics Inc. | Monoclonal antibodies against HMGB1 |
| US7807696B2 (en) | 2003-10-07 | 2010-10-05 | The Feinstein Institute For Medical Research | Isoxazole and isothiazole compounds useful in the treatment of inflammation |
| EP1768698A4 (en) | 2004-06-17 | 2009-01-28 | Medimmune Inc | IMMUNOGENIC COMPOSITIONS COMPRISING HMGB1 POLYPEPTIDES |
| EP1768693A1 (en) | 2004-07-20 | 2007-04-04 | Provincia Italiana Della Congregazione Dei Figli Dell'Immacolata Concezione - Istituto Dermopatico Dell'Immacolata | Use of hmgb1 for wound healing |
| US7470521B2 (en) | 2004-07-20 | 2008-12-30 | Critical Therapeutics, Inc. | RAGE protein derivatives |
| WO2006017647A1 (en) | 2004-08-03 | 2006-02-16 | Transtech Pharma, Inc. | Rage fusion proteins and methods of use |
| MX2007002557A (es) | 2004-09-03 | 2007-10-10 | Creabilis Therapeutics Spa | Uso de polipeptidos obtenidos a traves de mutaciones sistematicas de aminoacidos unicos de bloque-a humano y no humano de hmgb1 para prevenir y/o antagonizar las patologias inducidas por hmgb1. |
| US8129130B2 (en) | 2004-10-22 | 2012-03-06 | The Feinstein Institute For Medical Research | High affinity antibodies against HMGB1 and methods of use thereof |
| CA2585043A1 (en) | 2004-10-22 | 2007-01-04 | Medimmune, Inc. | High affinity antibodies against hmgb1 and methods of use thereof |
| EP1909834A2 (en) | 2005-07-18 | 2008-04-16 | Critical Therapeutics, Inc. | Use of hmgb1 antagonists for the treatment of inflammatory skin conditions |
| AU2006312847A1 (en) | 2005-11-09 | 2007-05-18 | Pharmexa A/S | Therapeutic vaccines targeting HMGB1 |
| EP1959997A4 (en) | 2005-11-28 | 2009-12-23 | Medimmune Llc | ANTAGONISTS OF HMGB1 AND / OR RAGE AND METHOD OF USE THEREOF |
| CN101512008B (zh) | 2006-09-08 | 2015-04-01 | 艾伯维巴哈马有限公司 | 白介素-13结合蛋白 |
| US8173405B2 (en) * | 2006-12-13 | 2012-05-08 | William Marsh Rice University | Nerolidol, terpene, and terpene deriviative synthesis |
| US20100249038A1 (en) | 2007-06-12 | 2010-09-30 | Board Of Regents, University Of Texas System | Antagonists of the receptor for advanced glycation end-products (rage) |
-
1999
- 1999-02-11 US US09/248,574 patent/US6303321B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-02-11 CA CA2359926A patent/CA2359926C/en not_active Expired - Lifetime
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- 2000-02-11 JP JP2000598059A patent/JP4812166B2/ja not_active Expired - Lifetime
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- 2000-02-11 AU AU36983/00A patent/AU782984B2/en not_active Expired
- 2000-02-11 EP EP00915762.9A patent/EP1165110B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-11 EP EP05077852A patent/EP1707214A1/en not_active Withdrawn
- 2000-02-11 AT AT00915762T patent/ATE327764T1/de active
- 2000-02-11 EP EP20100075469 patent/EP2362221A1/en not_active Ceased
- 2000-02-11 PT PT00915762T patent/PT1165110E/pt unknown
- 2000-02-11 ES ES00915762.9T patent/ES2269118T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-11 WO PCT/US2000/003583 patent/WO2000047104A2/en active IP Right Grant
- 2000-02-14 US US09/503,632 patent/US6468533B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-08-15 US US09/929,962 patent/US6448223B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-07-31 US US10/210,747 patent/US7097838B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-11 US US10/242,056 patent/US7060504B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-12-01 US US11/292,320 patent/US7537908B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2006
- 2006-06-29 US US11/477,835 patent/US7572446B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-04-13 US US12/386,053 patent/US8053206B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2009-07-01 US US12/496,333 patent/US8138141B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-03-16 JP JP2011058031A patent/JP5745299B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2012
- 2012-02-22 US US13/402,057 patent/US8822169B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-11-22 JP JP2013241528A patent/JP2014031386A/ja active Pending
-
2014
- 2014-08-29 US US14/473,333 patent/US20150322140A1/en not_active Abandoned
-
2016
- 2016-01-21 US US15/002,688 patent/US20170129946A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62166897A (ja) * | 1986-01-20 | 1987-07-23 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | 核内非ヒストン蛋白質に対するモノクロ−ナル抗体 |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007518062A (ja) * | 2003-09-29 | 2007-07-05 | バイオサイト インコーポレイテッド | 敗血症を診断する方法および診断するための組成物 |
| JP2008511300A (ja) * | 2004-09-03 | 2008-04-17 | クレアビリス・セラピューティクス・エスピーエー | プロテアーゼ抵抗性ヒトおよび非ヒトＨＭＧＢ１Ｂｏｘ−Ａ変異体、ならびにそれらの治療／診断への使用 |
| JP2008520552A (ja) * | 2004-10-22 | 2008-06-19 | メディミューン，インコーポレーテッド | Ｈｍｇｂ１に対する高親和性の抗体およびその使用法 |
| WO2007049468A1 (ja) | 2005-10-24 | 2007-05-03 | National University Corporation Okayama University | 脳梗塞抑制剤 |
| WO2007135992A1 (ja) | 2006-05-19 | 2007-11-29 | National University Corporation Okayama University | 脳血管攣縮抑制剤 |
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| JP2009096739A (ja) * | 2007-10-15 | 2009-05-07 | Okayama Univ | Ｂ細胞悪性リンパ腫治療薬 |
| JP2013521511A (ja) * | 2010-03-10 | 2013-06-10 | アンスティテュ・パストゥール | 神経学的障害の予後判定のためのｈｍｇｂ１および抗ｈｍｇｂ１抗体 |
| JP2016029397A (ja) * | 2010-03-10 | 2016-03-03 | アンスティテュ・パストゥール | 神経学的障害の予後判定のためのｈｍｇｂ１および抗ｈｍｇｂ１抗体 |
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