JP2003517579A

JP2003517579A - 癌の血清マーカーとしてのｓ１００タンパク質および自己抗体

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Publication number: JP2003517579A
Application number: JP2000579998A
Authority: JP
Inventors: ハナシュ、サミール、エム; ミゼク、デビッド; プラサナン、ラサ
Original assignee: University of Michigan
Current assignee: University of Michigan
Priority date: 1998-11-05
Filing date: 1999-11-05
Publication date: 2003-05-27
Anticipated expiration: 2019-11-05
Also published as: IL142971A0; DE69941627D1; EP1125134B1; CA2349593A1; AU1714300A; JP4820003B2; WO2000026668A2; ATE447713T1; US20020034773A1; AU773265B2; EP1125134A2; WO2000026668A3

Abstract

(57)【要約】本発明は、被験者の血清および他の生物学的液体中のＳ１００タンパクの増加した水準を検出する手段により、被験者におけるガンの診断および予後のためのスクリーニング方法に関する。本発明の方法は、ガンが進行するリスクにある被験者を同定するためにも用いることができる。本発明の方法は、被験者から誘導された血清サンプル、または他の生物学的液体サンプルの、循環のＳ１００タンパクの発生および水準を決定するための使用を包含する。本発明はまた、被験者由来の血清中の特定のＳ１００タンパク抗原に対する血清自己抗体の存在を検出する手段により、被験者におけるガンの診断、予後および罹りやすさのためのスクリーニング方法を提供する。本発明はさらに、上記のスクリーニング方法を行うためのキットを提供する。そのようなキットは、疾患の診断または予後の指標として、Ｓ１００タンパクの増加した水準について、またはＳ１００タンパクに対する自己抗体の検出について、患者のスクリーニングのために用いられる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（緒論）本発明は、被験者の血清および他の生物学的流体中のＳ１００タンパク質濃度
の増加を検出することにより被験者における癌の診断および予後のためのスクリ
ーニング法に関する。本発明の方法は、癌を発症する危険性のある被験者を同定
する目的で用いることもできる。本発明の方法は、被験者由来の血清試料または
他の生物学的流体試料を用いる特異的循環Ｓ１００タンパク質の存在および濃度
の測定を包含する。本発明は、被験者の血清中の特異的Ｓ１００タンパク質抗原
に対する血清自己抗体の存在を検出することによるこの被験者の癌の診断、予後
または感受性のスクリーニング法も提供する。本発明は、上記スクリーニング法
を行うためのキットも提供する。このようなキットは、Ｓ１００タンパク質の濃
度増加、または癌の診断、予測または予後指標としてのＳ１００タンパク質に対
する自己抗体の検出の目的で被験者をスクリーニングするのにも用いられる。本
発明は、癌の被験者由来の血清試料における特異的Ｓ１００タンパク質の濃度増
加を確認する例によって示される。更に、幾つかのＳ１００タンパク質に対して
反応性の循環自己抗体の濃度増加も、癌被験者の血清中で検出した。

【０００２】（発明の背景）多数の細胞タンパク質の濃度が、様々な種類の癌の被験者の体液中では増加す
ることが示されている。癌被験者におけるこのようなタンパク質の濃度増加によ
り、癌の存在についての診断および予後分析法が提供される。例えば、前立腺特
異抗原（ＰＳＡ）は、患者に前立腺癌があることの指示薬として用いられること
が多い。突然変異体ｐ５３の場合のように腫瘍由来タンパク質に対する抗体の存
在も、幾つかの癌で見られることも注目されている。しかしながら、腫瘍中のど
のタンパク質が抗原性でありまたは体液中で濃度増加することがあるかについて
予測できる知見はほとんどない。

【０００３】Ｓ１００タンパク質は、細胞骨格／膜相互作用、細胞分割および分化などの様
々な細胞過程で重要な役割を演じると考えられている低分子量の結合タンパク質
である。Ｓ１００ファミリーのタンパク質は、少なくとも１７個のファミリー成
員からなり、このファミリーのタンパク質をコードする遺伝子はヒト染色体１ｑ
２１に局在していた。Ｓ１００タンパク質は、高親和性でカルシウムと結合する
特徴的なＥＦ−ハンドドメインを有する。Ｓ１００タンパク質という名称はオリ
ジナルタンパク質を表し、他のＳ１００タンパク質は例えばＳ１００−Ａ７、Ｓ
１００−Ａ８などと具体的に表される。

【０００４】２個の特異的Ｓ１００タンパク質、Ｓ１００−Ａ８およびＳ１００−Ａ９であ
って、骨髄関連タンパク質−８（ＭＲＰ−８）および骨髄関連タンパク質−１４
（ＭＲＰ−１４）とも表されるものは、中央のヒンジ領域によって分離された両
端に疎水性領域が隣接した２個の明確なＥＦ−ハンドからなっている。Ｓ１００
−Ａ８はマクロファージに対する走化性を伝達することが示されており、（２個
のＥＦ−ハンドの間の）ヒンジ領域によってコードされるペプチドはこの効果を
特異的に伝達することが示されている。Ｓ１００−Ａ８およびＳ１００−Ａ９は
、いずれも顆粒球および単球から分泌されることが示されているが、これらのタ
ンパク質は古典的なシグナルペプチドを持たないので、どのようにして分泌され
るかは現在のところ明らかになっていない。カルシウム結合によって疎水性ドメ
インが暴露され、これが膜と相互作用できることによって、これらの分子が分泌
されることが考えられる。Ｓ１００−Ａ８およびＳ１００−Ａ９はいずれも、ホ
モ二量体化および互いにヘテロ二量体化し、様々な分子量の複合体を形成する。
嚢胞性繊維症抗原（Ｓ１００−Ａ８とＳ１００−Ａ９のヘテロ二量体化によって
形成されるエピトープ）に対する抗体は、Ｓ１００−Ａ９であることが示されて
いる１４ｋＤａの抗原に対しても積極的に反応する。

【０００５】Ｓ１００タンパク質の発現は、様々な疾患で評価されている。例えば、Ｓ１０
０タンパク質は潰瘍性大腸炎、クローン病のような炎症性疾患の被験者の血清マ
ーカーとして、およびＡＩＤＳおよびマラリアなどの伝染病の被験者および血液
疾患の被験者の血清マーカーとして評価されている。幾つかのＳ１００タンパク
質は癌の細胞侵襲および転移による展開を変更することができることを示してい
る証拠が蓄積されてきている。例えば、Ｓ１００タンパク質は、膀胱のヒト移行
上皮癌の樹状細胞で発現し、これらの腫瘍の潜在侵襲力はＳ１００タンパク質発
現細胞の存在と相関することが示されている（Ｉｎｏｕｅｅｔａｌ．，１９
９３，ＶｉｒｃｈｏｗｓＡｒｃｈＡ４２２：３５１−３５５）。更に、Ｓ
１００Ａ４の発現は、グリオーム細胞のイン・ビトロでの潜在侵襲力と相関する
（Ｍｅｒｚａｋ，ｅｔａｌ．，１９９４，Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ａｐｐ．
Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．，２０：６１４−６１９）。

【０００６】Ｓ１００タンパク質の発現は、黒色腫の血清マーカーとしても評価されている
（Ｈｅｎｚｅｅｔａｌ．１９９，Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ１９４：２０
８−２１２；Ｂｕｅｒｅｔａｌ．，１９９７，Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅ
ｒ７５：１３７３−１３７６；Ｓｈｅｒｂｅｔｅｔａｌ．，１９９
８，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒｒｅｓｅａｒｃｈ１８：２４１５−２４２２）。
しかしながら、Ｓ１００タンパク質は、以前は一般に癌の血清マーカーであると
も、また血清中でのそれらの検出可能性が癌における予後または治療的意義を有
するとも考えられていなかった。更に、癌におけるＳ１００タンパク質に対する
自己抗体の選考知見もなかった。

【０００７】（発明の概要）本発明の目的は、被験者の生物学的流体試料におけるＳ１００タンパク質発現
の濃度増加を検出することによる、癌の診断および予後評価、癌の疾病素質を有
する被験者の同定、および癌の治療を受けている患者の観察法を提供することで
ある。本発明は、癌の診断または予後指示薬としての個々のＳ１００タンパク質
の過剰発現および／またはＳ１００タンパク質の群の過剰発現を検出する方法を
提供する。

【０００８】本発明は、被験者の血清試料中のＳ１００タンパク質の濃度を検出する目的で
開発された分析法である。このような分析法は、Ｓ１００タンパク質を抗Ｓ１０
０特異抗体とのそれらの相互作用によって検出するイムノアッセイを包含する。
例えば、Ｓ１００抗体または抗体の断片を用いて、血清試料中のＳ１００タンパ
ク質の存在を定量的に検出することができる。

【０００９】本発明は、癌または前癌病巣を有する被験者の血清中のＳ１００タンパク質抗
原に対する自己抗体を検出することによる癌の診断評価および予後にも関する。
Ｓ１００タンパク質に対する自己抗体の血清濃度の増加を検出することにより、
癌のスクリーニング、診断および予後の新たな方法が得られる。

【００１０】本発明は、Ｓ１００タンパク質抗原に対する血清自己抗体の存在を検出するよ
うにデザインされたイムノアッセイにおけるＳ１００タンパク質抗原の使用に関
する。このようなイムノアッセイは、癌の診断および予後に利用することができ
る。本発明によれば、被験者の血清中のＳ１００自己抗体濃度の測定を用いて、
癌の早期診断を行うことができる。更に、血清自己抗体濃度の観察を用いて、疾
病の進行を予知することができる。

【００１１】本発明は、Ｓ１００タンパク質を抗原として用いて、Ｓ１００タンパク質抗原
の発現を特徴とする疾患に罹っている患者を免疫することにも関する。このよう
な抗原に対する免疫応答の刺激は、取り分け腫瘍細胞増殖の阻害または腫瘍細胞
の死滅を促進するなどの腫瘍細胞の更に効果的な攻撃を誘導しようとするもので
ある。特定の癌と関連したＳ１００タンパク質抗原に対する自己抗体を同定する
ことによって、この疾病の免疫療法の基礎が得られる。

【００１２】本発明は、癌または癌を発生させる疾病素質を有する患者を診断するための臨
床的セットで好都合に用いられる予めパッケージになった診断キットをも提供す
る。このキットは、癌の治療に用いられる化合物の有効性を観察する目的でも用
いられる。

【００１３】本明細書記載の本発明の具体的態様では、特異的Ｓ１００タンパク質の濃度増
加は、肺癌並びに結腸癌の被験者由来の血清試料で検出した。更に、多数のＳ１
００ファミリー成員が乳癌細胞から分泌されることが示され、体液試料中でのこ
れらの特異タンパク質の検出を、乳癌の被験者の診断および予後に用いることが
できることを示していた。更にもう一つの具体的態様では、特異的Ｓ１００タン
パク質に対する自己抗体が、癌の被験者の血清中で検出された。Ｓ１００タンパ
ク質およびＳ１００自己抗体の濃度が癌被験者の血清中で増加するという知見に
より、癌の様々な治療処置の効果を観察するための診断および予後の方法並びに
手段を開発するための基礎が得られる。

【００１４】（発明の詳細な説明）本発明は、格別に望ましい目的、すなわち癌を有する被験者を診断および予後
分析し、また癌発生の素因を示す患者を確認する方法を提供するという目的を達
成する。本発明による分析法は、被験者の血清またはその他の生物学的液体中の
Ｓ１００タンパク質またはＳ１００自己抗体の水準の増加が検出されるようにデ
ザインされている方法を包含する。

【００１５】詳細に言えば、本発明は、被験者における癌を診断し、および予後する方法を
包含し、この方法は、（ａ）被験者から採取した生物学的液体試料中のＳ１００−ＡＧ、Ｓ１００−
Ａ７、Ｓ１００−Ａ８およびＳ１００−Ａ９からなる群から選択される少なくと
も１種のＳ１００タンパク質を検出し、次いで（ｂ）被験者の試料で検出されたタンパク質水準を、対照試料で検出されたタ
ンパク質水準と比較する、ことを包含し、ここで対照試料と比較として、対照試料で検出されたＳ１００タ
ンパク質水準の増加を、被験者が癌を有することの指標または癌を発生する危険
性が増大していることの指標とする方法である。

【００１６】Ｓ１００タンパク質を含有することができる広く種々のタンパク質混合物を調
製することができ、またはタンパク質発現水準について分析することができる。
好適態様において、分泌されたタンパク質が局在する血清またはその他の生物学
的液体を使用し、増加した水準のタンパク質発現を識別することができる。本発明は癌を有する被験者の診断および予後方法を包含し、この方法は、（ａ）被験者から採取した血清試料を、特異的抗原−抗体結合を生じさせるこ
とができるような条件下に、Ｓ１００タンパク質抗原を含有する試料と接触させ
、次いで（ｂ）被験者の血清試料中に存在する自己抗体のＳ１００タンパク質に対する
免疫特異的結合の存在を検出する、ことを包含する方法であって、この方法では当該自己抗体の存在が癌の存在を指
示する。

【００１７】本発明の特定の態様において、Ｓ１００タンパク質一族の全員を精製すること
ができ、また敏感で、迅速な免疫吸着分析法によりまたはその他の方法により、
このようなタンパク質抗原に対する循環している自己抗体の存在について、被験
者の血清の鑑別に使用することができる。

【００１８】本発明はまた、前記方法を行うためのキットを提供する。一例として、抗−Ｓ
１００抗体などのＳ１００タンパク質を検出するための少なくとも１種の試薬を
包含する予め包装された診断キットを利用することによって、上記方法を行うこ
とができる。別法として、この診断キットは被験者由来の試料中のＳ１００自己
抗体を検出するＳ１００ペプチドを包含する。

【００１９】本発明は、血清中のＳ１００タンパク質水準が、肺癌または結腸癌などの癌を
有する被験者において増加するという発見に基づいている。さらに、乳癌細胞が
Ｓ１００タンパク質を分泌することが証明されており、従って循環するＳ１００
タンパク質の検出を、乳癌の被験者の診断方法および予後評価方法に使用するこ
とができる。さらにまた、Ｓ１００タンパク質に対して反応性である循環する自
己抗体水準の増加が癌を有する被験者の血清で検出されている。

【００２０】５．１Ｓ１００タンパク質発現検出のためのアッセイ本発明に従い、血清または体液中のＳ１００タンパク質水準の測定を、癌など
の疾病の早期診断に使用することができる。さらにまた、Ｓ１００タンパク質水
準の走査は、当該疾病の進行段階を予後的に評価し、また癌の被験者の処置に使
用される化合物の効力を評価するために使用することができる。

【００２１】被験者からの体液中のＳ１００タンパク質の検出は、多くの方法のいずれかに
よって行うことができる。患者の血清中のＳ１００タンパク質を検出する好適診
断方法は、例えばＳ１００タンパク質をＳ１００タンパク質抗体とのそれらの相
互反応により検出するイムノアッセイを包含することができる。本発明に有用な
抗体は、Ｓ１００タンパク質の存在の定量的または定性的検出に使用することが
できる。さらに、抗体以外の試薬、例えばＳ１００タンパク質に特異的に結合す
るポリペプチドを使用し、Ｓ１００タンパク質発現水準を検出することもできる
。

【００２２】本発明の実施に使用されるイムノアッセイには、これらの名前に制限されない
ものとして、ウエスターンブロッティング法、放射性イムノアッセイ、ＥＬＩＳ
Ａ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈
降アッセイ、沈殿反応、ゲル拡散沈殿反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、
補体固定アッセイ、免疫放射線アッセイ、蛍光イムノアッセイ、プロテインＡイ
ムノアッセイなどの技法を用いる検定方式が包含される。

【００２３】Ｓ１００タンパク質を含有することがある生物学的試料、例えば血清または分
泌されたタンパク質を局限化できるその他の生物学的液体は、特定の癌を有する
恐れがあるか、または癌の危険性を有する被験者から得る。Ｓ１００タンパク質
の発現を検出するためのイムノアッセイは代表的に、生物学的試料、例えば被験
者から採取した血清試料を、特異的抗原−抗体結合を生じさせることができる条
件下に、抗−Ｓ１００抗体と接触させ、次いで抗体による免疫特異的結合量を測
定することを包含する。特定の態様において、例えばこのような抗体の結合を使
用し、Ｓ１００タンパク質の存在および増加した発現が検出される。この場合、
増加したＳ１００タンパク質発現の検出が疾病状態の指標となる。血清試料中の
Ｓ１００タンパク質水準を、各種癌について無癌段階または前癌疾病段階にある
正常な個人で確立されている基準と比較する。

【００２４】本発明の一態様において、血清試料などの生物学的試料を、試料中に存在する
全部のタンパク質を不動化する目的で、ニトロセルロースなどの固体相支持体ま
たは担体と接触させる。この支持体を次いで、緩衝液で洗浄し、引き続いて検出
可能に標識したＳ１００特異性抗体により処理する。この固体相支持体を次いで
、緩衝液で２回洗浄し、未結合抗体を除去する。固体支持体上の結合した抗体の
量を、周知の方法に従い測定する。当業者は、常習的試験法を採用することによ
って各測定に適する検定条件を決定することができる。

【００２５】Ｓ１００抗体を検出可能に標識する方法の一つでは、当該抗体を酵素、例えば
酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）に使用されるもののような酵素に結合させる［Ｖ
ｏｉｌｅｒ，Ａ．による「酵素標識した免疫吸着アッセイ」（“ＴｈｅＥｎｚ
ｙｍｅＬｉｎｋｅｄＩｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔＡｓｓａｙ）（ＥＬＩＳ
Ａ），１９７８，ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＨｏｒｉｚｏｎｓ，２：１〜７，Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌＡｓｓｏｃｉａｔｅｓＱｕａｒｔｅｒｌｙＰ
ｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ．ＭＤ；Ｖｏｉｌｅｒ，Ａ
．によるＪ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．，３１：５０７〜５２０，１９７８：Ｂ
ｕｔｉｅｒ，Ｊ．Ｅ．によるＭｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，７３：４８２〜５２
３，１９８１］。抗体に結合する酵素を、例えば分光光度測定により、可視手段
による蛍光測定により検出することができる化学分子が生成されるような方法で
、適当な基質、好ましくは色素原性基質と反応させる。抗体に検出可能な標識を
付けるために使用することができる酵素は、これらに制限されないものとして、
ペルオキシダーゼおよびアルカリ性ホスファターゼを包含する。この検出はまた
、酵素に対する色素原性基質を用いる比色法により達成することができる。

【００２６】Ｓ１００抗体の検出はまた、その他の種々の方法を用いて行うことができる。
一例として、抗体または抗体断片を放射線活性に標識することによって、放射線
イムノアッセイ（ＲＩＡ）の使用によりＳ１００タンパク質発現を検出すること
ができる［例えば、Ｗｅｉｎｔｒｓｕｂ，Ｂ．による放射線免疫検定の原理、ラ
ジオリガンド検定技術に関する第７回トレーニングコース（Ｐｒｉｎｃｉｐｌ
ｅｓｏｆＲａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ，ＳｅｖｅｎｔｈＴｒａｉ
ｎｉｎｇＣｏｕｒｓｅｏｎＲａｄｉｏｌｉｇａｎｄＡｓｓａｙＴｅｃ
ｈｎｉｑｕｅｓ），ＴｈｅＥｎｄｏｃｒｉｎｅＳｏｃｉｅｔｙ，１９８６年
３月参照］。放射性同位元素は、ガンマカウンターまたはシンチレーションカウ
ンターのような手段の使用により、もしくはオートラジオグラフイにより検出す
ることができる。

【００２７】抗体はまた、蛍光化合物により標識することができる。最も慣用の蛍光標識化
合物の中には、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリト
リン（ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ）およびフルオレスカミン（ｆｌｕｏｒｅｓ
ｃａｍｉｎｅ）がある。同様に、生体発光性化合物を用いて、Ｓ１００抗体を標
識することもできる。生体発光性タンパク質の存在は、蛍光の存在を検出するこ
とによって測定される。この標識目的に重要な生体発光性化合物は、ルチフェリ
ン（ｌｕｔｉｆｅｒｉｎ）、ルシフェラーゼ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）およびア
エクオリン（ａｅｑｕｏｒｉｎ）である。

【００２８】本発明の特定の態様において、生物学的試料中のＳ１００タンパク質の発現水
準は、二段階電気泳動法により分析することができる。二段階ゲル電気泳動法は
、当業者に知られている。血清試料などの生物学的試料を、第一段階で電荷に基
づいてタンパク質を分離する等電点焦点化分離用電気泳動用ゲル上に装填する。
不動化した勾配に基づく分離用のゲルストリップまたは担体両性電解質に基づく
分離用の管状ゲルを包含する多数の第一段階ゲル標本を使用することができる。
第一次分離後、タンパク質を第二段階ゲル上に移し、次いで平衡化し、次いでタ
ンパク質をその分子量に基づいて分離するＳＤＳＰＡＧＥを用いて分離する。
相違する被験者から採取した血清試料を比較する場合、複数のゲルを各血清試料
から調製する。

【００２９】分離後、この第二段階ゲルからウエスターンブロティッング法に慣用の膜上に
タンパク質を移す。ウエスターンブロティッング法および引き続くタンパク質の
可視化はまた、当業者に周知である［Ｓａｍｂｒｏｏｋらによる「分子クローニ
ング。実験指針」（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ．Ａｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙｍａｎｕａｌ），２版、３巻、１９８９，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨ
ａｒｂｏｒ］。標準的方法を用いることができ、またはこの方法を特定の種類の
タンパク質、例えば高度に塩基性または酸性、もしくは脂質可溶性などの種類の
タンパク質の同定にかかわり当該技術で知られているように修正することもでき
る［例えば、Ａｕｓｕｂｅｌらによる「分子生物学における現在の方法」（Ｃｕ
ｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ
），ＧｒｅｅｎＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅｓａｎｄＷｉ
ｌｅｙＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．参照］。Ｓ１００タンパク質に結
合する抗体を、ウエスターンブロッティング分析法におけるようなインキュベー
ション工程に用いる。第一の抗体に対して特異性の第二の抗体をウエスターンブ
ロッティング分析法で使用し、第一抗体と反応するタンパク質を可視化する。

【００３０】Ｓ１００タンパク質発現の検出を用いて、処置中の強力な抗癌化合物の効力を
走査することもできる。一例として、Ｓ１００タンパク質発現水準は、処置前お
よび処置中に測定することができる。次いで、処置全体にわたるＳ１００タンパ
ク質発現を比較することによって、この化合物の効力を測定することができる。
効果を示す化合物は、化合物による処置の進行に従い、Ｓ１００タンパク質発現
水準を減少させる化合物である。

【００３１】本発明は、上昇したＳ１００タンパク質水準が癌の被験者から採取した血清中
で検出されたという例により証明される。特に、上昇したＳ１００−Ａ９水準が
、結腸癌および肺癌患者から採取された血清試料中で検出された。さらに、Ｓ１
００−Ａ７およびＳ１００−Ａ９タンパク質が、乳癌細胞により分泌されること
が証明され、これに基づいて、乳癌の診断および予後方法が提供される。血清ま
たはその他の体液中のＳ１００タンパク質の検出および／または定量測定を使用
して、或る種の癌を発症する危険性を有する被験者またはＳ１００タンパク質が
過剰に発現するその他の増殖性障害を有する被験者を識別することができる。さ
らにまた、血清または生物学的液体中のＳ１００タンパク質一族の相違する一員
の発生パターンの定性的差異を使用して、癌発症または癌発症の危険性の診断的
指標または予後的指標とすることもできる。

【００３２】５．２．抗−Ｓ１００自己抗体の検出のためのアッセイ本発明は、被験者における循環Ｓ１００自己抗体の検出に基づく、癌のような
疾患の診断および予知方法を提供する。この方法は、癌を有する被験者および癌
のないコントロールからの生物学的試料の使用により確認される。自己抗体を含
有する可能性のある生物学的試料、たとえば血清は、特定の癌の存在が疑われる
被験者または癌を発症する素因が疑われる被験者から得られる。同じ体液が、癌
をもたないコントロールから得られる。

【００３３】本発明によれば、Ｓ１００タンパク質抗原に対して反応性の自己抗体の測定を
疾患たとえば癌の初期診断に使用することができる。さらに、自己抗体レベルの
モニタリングは疾患の進行を予知的に明らかにするために使用することができる
。患者からの血清試料中の自己抗体の検出は任意の多くの方法で実行することが
できる。このような方法にはイムノアッセイがあり、これにはそれらに限定する
ものではないが、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（固
相酵素免疫測定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈
降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセ
イ、イムノラジオメトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイ、プロテインＡイム
ノアッセイ等が包含される。

【００３４】このようなイムノアッセイは、被験者由来の試料を、Ｓ１００タンパク質抗原
を含む試料と特異的な抗原−抗体結合が起こる条件下に接触させ、自己抗体によ
る免疫特異的結合を検出またはその量を測定することからなる方法によって実施
される。特定の態様においては、組織切片によるこのような自己抗体の結合を、
たとえば自己抗体の存在を検出するために使用することが可能であり、この場合
、自己抗体の検出は疾患状態の指示である。血清試料中における自己抗体のレベ
ルを、障害をもたない被験者からの同種の血清試料中に存在するレベルと比較す
る。

【００３５】イムノアッセイは様々な方法で実施することができる。たとえば、このような
アッセイを実施するための一方法は、Ｓ１００タンパク質の固体支持体上への繋
留およびそれに特異的に結合する抗−Ｓ１００抗体の検出を包含する。本発明の
アッセイに用いられるＳ１００タンパク質は、本技術分野において周知の組換え
ＤＮＡ技術によって調製できる。たとえば、Ｓ１００タンパク質をコードするヌ
クレオチド配列が利用できる場合は、Ｓ１００タンパク質の大規模な調製のため
にＤＮＡを適当な発現ベクター中に遺伝子操作することができる。Ｓ１００の標
識、固定化または検出を容易にすることができる融合タンパク質を遺伝子操作す
るのが有利である。たとえば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ
ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂ
ｏｒ，Ｎ．Ｙ．に記載された技術を参照されたい。別法として、Ｓ１００タンパ
ク質は天然のソースから精製することができる。たとえば、細胞から本技術分野
において周知のタンパク質分離技術を用いて精製する。このような精製技術には
、それらに限定されるものではないが、分子シーブクロマトグラフィーおよび／
またはイオン交換クロマトグラフィーが包含される。実際にはＳ１００タンパク
質の固体支持体としてはマイクロタイタープレートが便利に使用される。表面は
前もって調製し保存する。

【００３６】本発明はたとえば、数種のＳ１００タンパク質抗原に対して反応性の循環自己
抗体の高いレバルが癌患者の血清中で検出されたことにより確認される。血清中
の循環抗−Ｓ１００自己抗体の検出および／または定量的測定は、癌またはＳ１
００タンパク質が発現される他の増殖性障害の危険にある被験者のスクリーニン
グに使用することができる。加えて、本発明はさらに、腫瘍細胞に対する宿主の
免疫応答を刺激する免疫原として、同定されたタンパク質抗原の使用に関する。
このようなアプローチは、特定の癌を有する個体における腫瘍細胞の増殖阻害お
よび腫瘍細胞殺滅の促進方法としての使用が期待される。

【００３７】５．３．免疫療法本発明はまた、Ｓ１００タンパク質抗原の発現を特徴とする疾患に罹患してい
る患者を免疫処置するための抗原としてのＳ１００タンパク質の使用に関する。
このような抗原に対する免疫学的応答の刺激は腫瘍細胞のさらに効果的な攻撃た
とえばとくに腫瘍細胞の増殖阻害または腫瘍細胞の殺滅の促進を誘導する意図で
ある。特定の癌に関連するＳ１００タンパク質抗原に対する抗体の同定は疾患の
免疫療法の基礎を提供する。

【００３８】患者は、腫瘍細胞の殺滅を促進しまた腫瘍細胞の増殖を阻害する免疫応答を誘
発するためにＳ１００タンパク質抗原で免疫処置される。Ｓ１００タンパク質抗
原は、タンパク質の精製のために上述した方法を用いて調製することができる。

【００３９】本発明の一実施態様においては、Ｓ１００タンパク質抗原に対する抗体を発生
した癌患者に精製Ｓ１００タンパク質抗原からなる免疫原を用いて免疫応答を誘
発させる。投与のためには、Ｓ１００タンパク質抗原を、そのタンパク質抗原に
対する免疫学的応答を増大させるために適当なアジュバントとともに製剤化しな
ければならない。適当なアジュバントには、それらに限定されるものではないが
、鉱質ゲルたとえば水酸化アルミニウム、界面活性剤たとえばリゾレシチン、プ
ルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマルジョン、および
有用な可能性のあるヒトアジュバント、たとえばＢＣＧ（ｂａｃｉｌｌｉＣａ
ｌｍｅｔｔ−Ｇｕｅｒｉｎ）および（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）が包
含される。上述の製剤を導入するには多くの方法が用いられ、それらに限定され
るものではないが、経口、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下投与が包含
される。

【００４０】５．４．キット本発明はさらに、上述のアッセイを実施するためのキットを提供する。本明細
書に記載されたアッセイは、たとえば、癌のような障害を診断するための臨床的
セッティングにおいて簡便に使用できる、少なくとも１種のＳ１００ペプチド（
Ｓ１００自己抗体の検出用）またはＳ１００抗体試薬（Ｓ１００タンパク質の検
出用）からなる予めパッケージされた診断キットを利用して実施することができ
る。

【００４１】第一シリーズの非限定的実施態様においては、本発明のキットは、Ｓ１００抗
原に向けられたヒトＩｇＧ抗体を検出および／または測定するための成分からな
る。抗体が固相酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）によって検出および／または測定
される場合の一例として、このような成分は、固相に連結した少なくとも１種、
好ましくは複数種の異なるＳ１００抗原またはそれらのエピトープの形態におけ
る標的抗原、および標的抗原に結合するヒト抗体抗体を検出するための手段から
なる。このような検出手段は、たとえば、ヒトＩｇＧの定常部領域に向けられた
抗体（たとえばウサギ抗−ヒトＩｇＧ抗体）であり、それ自体で検出可能なよう
に標識（たとえば、放射能、蛍光、比色または酵素標識）されているか、または
標識された二次抗体（たとえば、ヤギ抗−ウサギ抗体）によって検出される。

【００４２】第二のシリーズの非限定的実施態様においては、本発明のキットは被験者の生
物学的試料中のＳ１００抗原を検出および／または測定する成分からなる。たと
えば、Ｓ１００タンパク質が固相酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）で検出および／
または測定される場合、このような成分は、生物学的試料中におけるＳ１００発
現のレベルを検出および／または定量するために使用できるＳ１００タンパク質
のエピトープに向けられた抗体からなる。抗体それ自体が検出可能な放射能、蛍
光、比色または酵素標識で標識されてもよい。別法として、キットは標識された
二次抗体を含有していてもよい。

【００４３】６．例：癌を有する被験者から単離された血清を用いる腫瘍抗原の検出肺癌および結腸癌を有する被験者で、Ｓ１００タンパク質のレベルの上昇を検
出するためのアッセイを実施した。腫瘍組織および正常組織コントロールを以下
のタイプの癌を有する被験者から得た。すなわち、小細胞肺癌、肺の扁平上皮細
胞癌、肺の腺癌、食道癌およびバレットの化生、結腸癌、膵臓癌、乳癌および前
立腺癌である。全組織のアリコートを二次元電気泳動の前に可溶化カクテルを用
いて可溶化した。

【００４４】可溶化したタンパク質を、電荷に基づく第一次元における分離のために電気泳
動ゲル上に置いた。２つの異なる第一次元ゲル調製物を担体両性電解質に基づく
等電点電気泳動（ＩＥＦ）のためのいわゆるチューブゲルおよび固定化されたｐ
Ｈ勾配に基づく分離（ＩＰＧ）のためのゲルストリップに使用した。１次元分離
後に、タンパク質を第二次元ゲルに移し、平衡化操作に続いて分子量に基づく第
二のディメンションで分離した。場合によっては、各血清試料について多重ゲル
を調製した。タンパク質パターンは銀染色によって可視化し、正常および腫瘍組
織の間の差異および／または異なる腫瘍タイプ間の差異をコンピューター化した
マッチプロセスおよびスポット強度の定量によって分析した。

【００４５】コントロールに比較して特定の腫瘍において、多くのタンパク質の強度が増大
して存在した。コントロールでは検出できない４種のタンパク質のセットが腫瘍
パターン中では高い強度で存在した。のちにＳ１００−Ａ８として同定されたタ
ンパク質の一つについて肺癌における定量的なデータを表１に示す。

【００４６】このタンパク質を２−Ｄゲルから抽出し、アミノ酸配列決定に付した。それは
Ｎ−末端アミノ酸配列ＭＩＬＴＥＬＥＫＡＬＮを与え、これはタンパク質データ
ベースの検索により見出されたＳ１００−Ａ８タンパク質のアミノ酸配列の報告
と１００％同一であった。セット中における他の３つのタンパク質もＳ１００タ
ンパク質ファミリーに属するものと一致した。２つは４つのアミノ酸とは離れて
位置する２つの翻訳開始部位をもつＳ１００−Ａ９と一致し、１つはモノクロー
ナル抗体との反応性による決定および二次元タンパク質分離の発表された図との
比較から、他のＳ１００関連タンパク質であるカルギゼリンと一致した。これら
のタンパク質の様々な腫瘍タイプの２−Ｄパターンにおける位置は図１および図
２に示す。

【００４７】Ｓ１００−Ａ９に対する商業的に入手できる抗体（ＤＡＫＯ；Ｃａｒｐｉｎｔ
ｅｒｉａ，ＣＡ）を免疫組織化学およびウエスタンブロットのために用いた。肺
癌を有する同一の患者由来の腫瘍組織および対応する正常な組織の切片において
免疫組織化学を行った。分析した組織切片は、正常な肺組織において、最小のＳ
１００−Ａ９免疫反応性を示した。腫瘍組織において観察された反応性の増加は
、非浸透性細胞の存在に起因した。腫瘍に直接隣接した正常な組織の領域におい
ても、腫瘍へ補給される非浸透性細胞（即ち、顆粒球、単球および／またはマク
ロファージ）により、目立った免疫反応性があった。

【００４８】Ｓ１００−Ａ９抗体が、正常な個人の血清中に存在するかもしれない水準より
高い水準にある、腫瘍患者の血清中の特定のバンドを認識するかどうか決定する
ために、アッセイを行った。１４人の肺腫瘍患者および１４人の正常な個人の血
清中に含まれるタンパク質を１次元ゲル電気泳動により分離し、当該タンパク質
をＰＶＤＦ膜へ移し、Ｓ１００−Ａ９タンパクに対し反応性である市販の抗体（
ＤＡＫＯ；Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）でプローブした。１４ｋＤａにおい
て可視化したバンドにおける反応性の融合強度分析により、正常な個人由来の血
清中（ｎ＝１４、平均強度０．０９）と比較して、腫瘍患者からの血清において
、目立って増加した反応性が観られた（ｎ＝１４、平均強度０．４６）（表ＩＩ
）。幾つかの腫瘍において、２２ｋＤａにおける他のバンドが観られ、これはＳ
１００タンパクの他の免疫反応性形態による結果であると推測された。結腸癌を
有する患者からの血清を用いても同様の結果が観られた。

【００４９】

【００５０】血清および他の生物学的液体中に検出される、腫瘍により合成されるタンパク
質の可能性の主な決定因要素はその分泌される性質である。タンパク質が細胞に
より分泌されるのか否かを決定するタンパク質の特徴はあまり理解されていない
ままである。分泌過程に影響を及ぼす要因は、タンパク質における翻訳後の修飾
の発生、および一定のシグナル経路の活性化に依存し得る。分泌性タンパク質の
同定を容易にするため、培養腫瘍細胞により分泌されるタンパク質を精製する方
法が開発され、クーマシーまたは銀染色により２次元ゲルでタンパク質を可視化
し、それらの構成ペプチドのＮ−末端配列決定または質量分析により、分泌され
たタンパク質スポットを分析する。この方法を用いて、Ｓ１００ファミリーの３
つのメンバーを、乳癌における分泌されるタンパク質であると同定した。二つの
分泌タンパク質のＮ−末端配列決定により、それらは以下の配列に基づく、ＭＲ
Ｐ８およびＭＲＰ１４として同定された：アミノ酸配列同定ＭＬＴＥＬＥＫＡＬＮＭＲＰ８ＭＣＫＭＳＱＥＣＲＮＭＲＰ１４。

【００５１】さらに、質量分析により、Ｓ１００Ａ７が乳癌における分泌タンパク質である
と同定された。質量分析により得られた７つのペプチドはＳ１００７Ａのため予
想された質量と一致した。これらは、１２９１．６５；１３０７．６６；１３２
３．６５；１３８４．６９；１４５５．６６；１５８３．６５および１７１１．
９１であった。

【００５２】７．例：癌患者の血清中のＳ１００タンパクに対して特異的な自己抗体の検出本発明の方法を用いて、肺癌を有する患者からの血清をＳ１００タンパクに対
する反応性についてスクリーニングした。肺癌組織のアリコートを尿素カクテル（１リットルあたり：８Ｍ尿素、２０ｍ
ｌノニデット（Ｎｏｎｉｄｅｔ）Ｐ−４０界面活性剤、２０ｍｌの両性電解質（
ｐＨ３．５〜１０）、２０ｍｌの２−メルカプトエタノールおよび０．２ｍｌの
フェニルメチルスルホニルフロリド（ＰＭＳＦ）、蒸留非イオン化Ｈ_２Ｏ中）中
に可溶化し、そして４０μｇの可溶化タンパク質をキャリアー両性電解質ベース
（ｐＨ３．８）チューブゲル用に充填し、１２，０００ボルト時間１次元で分離
した。平衡段階に続いて、１次元チューブゲルを２次元ゲルを含有するカセット
上に充填した。２次元における電気泳動は、１次元ゲルについて、平衡緩衝液中
に存在する追跡染色が２次元ゲルの反対側に到達した時に完了する。電気泳動に
続いて、分離したタンパク質をポリビニリデンフロリド（ＰＶＤＦ）膜（ミリポ
ア（ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上に移した。膜をブロッキング緩衝液と共にプレイン
キュベートし、次いで、緩衝溶液（無脂肪乾燥ミルク１０ｍｍｌ当たり２０から
１．８ｇｍの間、０．０１％を含有するＴｒｉｓ−緩衝−食塩水）中１：１００
で希釈された、肺腺癌を有する患者から得られた血清とともに１時間室温でイン
キュベートした。緩衝液で３回洗浄した後、膜をホースラディッシュペルオキシ
ダーゼ結合ウサギ抗−ヒト抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍより入手可能）と共に１時間
インキュベートした。反応性タンパク質を化学発光法により明らかにした。癌患
者からの血清試料が、マイクロシーケシングによりＳ１００−Ａ９およびカルギ
ゼリン（ｃａｌｇｉｚｚｅｒｉｎ）として同定されたＳ１００タンパクのセット
に対し反応性であることが解った。

【００５３】本発明は、本発明の一面の例証として意図された例において開示された態様に
より、範囲に限定されるべきではなく、機能的に等価のいかなる組成物または方
法も本発明の範囲に包含される。まさに、上記説明により、本明細書に開示また
は記載のものに加え、本発明の種々の改変が当業者にとって明らかになる。その
ような改変は、特許請求の範囲に入るものといとされる。本明細書に引用されて
いる種々の刊行物の内容は、引用により、全体として組み込まれる。

【図面の簡単な説明】

【図１】同一の患者由来の正常な結腸（図１Ａ）及び結腸腫瘍（図１Ｂ）
の２次元電気泳動ゲルパターン。幾つかのＳ１００タンパクの位置は、矢印を用
いて同定されている。ＭＲＰ−１４はＳ１００−Ａ９に対応し、ＭＲＰ−８はＳ
１００−Ａ８に対応する。

【図２】Ｓ１００タンパク質の位置を同定する、乳癌細胞からの分泌タン
パク質の２次元パターン。

【図３】肺癌患者の血清中の、Ｓ１００−Ａ９に対応するタンパク質バン
ドの検出。

【図４Ａ】肺腺癌性腫瘍を有する患者由来の血清で処理した肺癌のウエス
タンブロット。

【図４Ｂ】正常な患者由来の血清で処理した肺癌のウエスタンブロット。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者プラサナン、ラサアメリカ合衆国ミシガン、アンアーバー、ウエストスタジアムブールバード 1230 Ｆターム(参考） 4B064 AG26 CA10 CC24 DA14

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】（ａ）被験者から誘導される生物学的液体試料中の、Ｓ１０
０−ＡＧ、Ｓ１００−Ａ７、Ｓ１００−Ａ８およびＳ１００−Ａ９からなる群か
ら選択される少なくとも一種のＳ１００タンパク質の検出、（ｂ）被験者の試料中の検出されたタンパク質水準の対照試料中で検出された水
準との比較、を包含し、対照試料と比較して被験者の試料中に検出されるＳ１００タンパク
質の水準の増加が、癌を有する被験者の指標である、被験者における癌の診断および予後のための方法。
【請求項２】Ｓ１００タンパク質がイムノアッセイを用いて検出される、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】イムノアッセイが免疫沈降アッセイである、請求項２に記載
の方法。
【請求項４】試料が血清試料である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】癌が肺癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】癌が乳癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】癌が結腸癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】（ａ）被験者から誘導される血清の、特定の抗原−抗体反応
が生じるような条件下での、Ｓ１００タンパク質抗原を含有する試料との接触、
（ｂ）被験者の血清試料中の自己抗体のＳ１００タンパク質への免疫特異的な結
合の検出を包含し、自己抗体の存在が癌の存在を示す、癌を有する被験者の診断方法。
【請求項９】被験者の血清試料中の自己抗体の検出工程が、被験者の血清
試料中の抗体に特異的な抗体に結合されたシグナル発生成分の使用を包含する、
請求項８に記載の方法。
【請求項１０】血清試料中の自己抗体の存在を、（ａ）膜または基質上への一またはそれ以上のＳ１００タンパク質の固定、（ｂ）膜または基質の被験者の血清試料への接触；および（ｃ）被験者の血清試料中のＳ１００タンパク質に特異的な自己抗体の存在の検
出、を包含するイムノアッセイにより行い、自己抗体の存在が癌の存在を示す、請
求項９に記載の方法。
【請求項１１】癌が肺癌である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】癌が乳癌である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】癌が結腸癌である、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】生物学的試料中のＳ１００タンパク質の存在を検出するた
めの成分を含有する、被験者中の癌の診断または予後のためのキット。
【請求項１５】Ｓ１００タンパク質検出のための成分が、抗−Ｓ１００抗
体である、請求項１４に記載のキット。
【請求項１６】抗−Ｓ１００抗体が標識されている、請求項１５に記載の
方法。
【請求項１７】標識が、放射性、蛍光性、比色性、または酵素標識である
、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】抗−Ｓ１００抗体に免疫特異的に結合する標識した第二の
抗体をさらに含む、請求項１５に記載のキット。
【請求項１９】試料中のＳ１００自己抗体の存在を検出するための成分を
含む、被験者中の癌の診断または予後のためのキット。
【請求項２０】当該成分がＳ１００抗原である、請求項１９に記載のキッ
ト。
【請求項２１】Ｓ１００抗原が標識されている、請求項２０に記載のキッ
ト。
【請求項２２】Ｓ１００抗原が固体相に結合している、請求項２０に記載
のキット。
【請求項２３】Ｓ１００自己抗体の検出のための成分をさらに含む、請求
項１９に記載のキット。
【請求項２４】生理学的に許容される担体中のＳ１００抗原でホストを接
種することを包含する、Ｓ１００タンパク質、Ｓ１００誘導ペプチド、または、
特異的に修飾したＳ１００タンパク質に対してホストを免疫する方法であって、
免疫が該Ｓ１００抗原に対する抗体の生産を与える、上記方法。
【請求項２５】ホストがＳ１００タンパク質の過剰生産により特徴付けら
れる疾患を患っている、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】疾患が癌である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】癌が肺癌である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】癌が乳癌である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】癌が結腸癌である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】Ｓ１００タンパク質が、Ｓ１００−ＡＧ、Ｓ１００−Ａ７
、Ｓ１００−Ａ８およびＳ１００−Ａ９からなる群から選択される、請求項２４
に記載の方法。
【請求項３１】少なくとも一種のＳ１００タンパク質およびアジュバント
を含有する、ホストの免疫のための組成物。
【請求項３２】Ｓ１００タンパク質が、Ｓ１００−ＡＧ、Ｓ１００−Ａ７
、Ｓ１００−Ａ８およびＳ１００−Ａ９からなる群から選択される、請求項３１
に記載の組成物。