JP2003502344A - β−細胞機能およびＩＧＴ疾患およびＩＩ型糖尿病の存在を判定するための診断検査試薬としてのＧＬＰ−１ - Google Patents

β−細胞機能およびＩＧＴ疾患およびＩＩ型糖尿病の存在を判定するための診断検査試薬としてのＧＬＰ−１

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JP2003502344A
JP2003502344A JP2001503895A JP2001503895A JP2003502344A JP 2003502344 A JP2003502344 A JP 2003502344A JP 2001503895 A JP2001503895 A JP 2001503895A JP 2001503895 A JP2001503895 A JP 2001503895A JP 2003502344 A JP2003502344 A JP 2003502344A
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glucagon
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ホルスト，ジェイ．，ジェイ．
ビルスボ−ル，ティーナ
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バイオネブラスカ，インコーポレイテッド
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 グルカゴン様ペプチド−1（ＧＬＰ−１）は、公知の最も有能な向インシュリン性ホルモンであり、II型糖尿病の患者においてインシュリン分泌を強力に刺激することが認められている。 【解決手段】 本発明はβ−細胞機能を簡単にテストするためにβ−細胞刺激テストにおいてＧＬＰ−１又はその生物学的活性類似体を使用する。このテストはインシュリン分泌能についての情報を与えるもので、簡単であり、再現性に優れ、副作用も有意なものではない。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の技術分野） 本発明は、グルコース耐性障害の診断指標として、更に糖尿病の警告指標とし
て個人のβ−細胞機能の損傷を検知することに関する。
【０００２】 β−細胞機能の評価は、多くの異なる状況、例えば、治療中の糖尿病患者をモ
ニターする場合；家族検査において糖尿病発症の危険性を予測する場合；すい臓
又はランゲルハンス島の移植後の状態を知る場合などにおいて興味深いものであ
る。正確なβ−細胞の質量を直接測定することはできない。代用として、グルカ
ゴン試験は、日常生活におけるβ−細胞機能を測定するものとして広く認められ
ている。なぜならば、グルカゴンの１ｍｇの静脈内投与後6分後の血漿Ｃ−ペプ
チド濃度は、殆どの場合、標準食事後の最大Ｃ−ペプチド濃度に相当することが
証明されているからである（Ｆａｂｅｒ ＯＫ、Ｂｉｎｄｅｒ Ｃ（１９７７）
）；グルカゴンに対するＣ−ペプチドの応答；真性糖尿病における残留β−細胞
機能についてのテスト；Ｄｉａｂｅｔｅｓ ２６：６０５−６１０；Ｍａｄｓｂ
ａｄ Ｓ， Ｋｒａｒｕｐ Ｔ， ＭｃＮａｉｒ Ｐら（１９８１）真性糖尿病
の治療の選択におけるＣ−ペプチドのグルカゴン刺激に対する応答の実用的価値
；Ａｃｔａ Ｍｅｄ．Ｓｃａｎｄ．２１０：１５３−１５６）。最大分泌能力の
評価が５ｇのＬ−アルギニンの輸液を用いた技術的要求が高く長期間に亘る高血
糖クランプを用いて行われてきた（Ｗａｒｄ ＷＫ，Ｂｏｌｇｉａｎｏ ＤＣ，
ＭｃＫｎｉｇｈｔ Ｂ， Ｈａｌｔｅｒ ＪＢ， Ｐｏｒｔｅ Ｄ（１９８４
）、 非インシュリン依存型真性糖尿病の患者におけるβ−細胞分泌能の減退；
Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ． ７４：１３１８−１３２８）。しかし、このテ
ストは時間がかかり、患者に可成りの不快および苦痛を与えることが知られてい
る。
【０００３】 グルコース耐性障害（ＩＧＴ）は米国人の間で一般的なものである。グルコー
ス耐性障害の羅病率は、２０−７４歳の一般的人口における１１％に対し、４０
−７５歳の年齢の者で、糖尿病の家族のもので、体重が正常より１２０％より大
きい者では２４％に上昇する。グルコース耐性障害を有する者は心血管疾患や非
インシュリン依存型真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）の高い危険性を有し、２型糖尿病
として知られている。
【０００４】 グルコース耐性障害は、すい臓β−細胞機能の初期の微妙な欠陥と、それに伴
うインシュリン抵抗により特徴付けられる。これらの初期の欠陥には、インシュ
リン分泌の適当なレベルでの血漿グルコース濃度の小さな変化に対するβ−細胞
の減退した感受性および応答性、並びにグルコースインシュリン分泌投与−応答
曲線の右側への緩やかなシフトが含まれる。β−細胞のグルコース感受能および
高速インシュリン分泌応答能は、２時間グルコースレベルの上昇が極めて小さい
とき、ＩＧＴの間における極めて初期の段階で喪失する。ＩＧＴにおけるグルコ
ース制御の経時的劣化はβ−細胞機能の漸進的障害に殆ど基づくものであり、多
くの場合、グルコース制御の決定的喪失およびＮＩＤＤＭの有害な開始をもたら
す。 上記事情から、信頼性が高く、可成りの悪性の副作用や患者への苦痛および不
快を生じさせることのないグルコース耐性障害指標テストとして、β−細胞機能
を測定するための迅速的で簡単なテストについての実際的、かつ、継続的要望が
存在することが理解されるであろう。本発明はこの継続的要望を達成することを
第１の目的とする。
【０００５】 （発明の概要） グルカゴン様ペプチド−1（ＧＬＰ−１）は、公知の最も有能な向インシュリ
ン性ホルモンであり、II型糖尿病の患者においてインシュリン分泌を強力に刺激
することが認められ、本発明はβ−細胞機能を簡単にテストするためにβ−細胞
刺激テストにおいてＧＬＰ−１又はその生物学的活性類似体を使用する。このテ
ストはインシュリン分泌能についての情報を与えるもので、簡単であり、再現性
に優れ、副作用も有意なものではない。
【０００６】 （発明の具体的説明） 腸内分泌ホルモンであるグルカゴン様ペプチド−1はβ−細胞分泌物に対して
知られている最も有能な刺激剤である。更に、真性II型糖尿病の患者において非
常に有効であることが証明されている。すなわち、高血糖クランプを８−９ｍｍ
ｏｌ／Ｌで維持した条件のもとで、軽度のII型糖尿病の患者のグループに対しＧ
ＬＰ−１を輸液した結果、健康人の対照グループで認められたものと同様の程度
のインシュリンおよびC−ペプチド応答が得られた。更に、経口用抗糖尿病薬の２
次的効能不全のため長期間の疾患およびインシュリン治療を受けていていた患者
において、ＧＬＰ−１の輸液により、十分なインシュリン分泌がもたらされ、同
時にグルカゴン分泌が抑制され、血糖を正常化することができた。他の生理学的
に重要な内分泌ホルモンであるグルコース依存型向インシュリン性ポリペプチド
（ＧＩＰ）の作用と比較して、ＧＬＰ−１の作用は非常に優れている。II型糖尿
病の患者の同様のグループに対するＧＩＰの輸液はインシュリン分泌および血糖
に対し、殆ど効果を示さなかった（Ｎａｕｃｋ ＭＡ， Ｈｅｉｍｅｓａａｔ
ＭＭ， Ｏｒｓｋｏｖ Ｃ， Ｈｏｌｓｔ ＪＪ， Ｅｂｅｒｔ Ｒ， Ｃｒｅ
ｕｔｚｆｅｌｄｔ Ｗ（１９９３）、真性II型糖尿病の患者における、合成ヒト
胃抑制ポリペプチドを除いての、グルカゴン様ペプチド−1［７−３６アミド］
の持続的内分泌活性； Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ． ９１：３０１−３０７
； Ｋｒａｒｕｐ Ｔ（１９８８）、 免疫反応胃抑制ポリペプチド；Ｅｎｄｏ
ｃｒ． Ｒｅｖ． ９：１２２−１３４）。この差をβ−細胞のレベルでの作用
機構で説明することは困難である。なぜならば、これら２種のペプチドは同一の
細胞内機構を活性化するとおもわれるからである（すなわち、アデニレートシク
ラーゼの活性化によりｃＡＭＰが形成され、これはβ−細胞に対する更なる全て
の作用が説明できると思われる）。それにも拘らず、II型糖尿病の患者に対する
ＧＬＰ−１の顕著な効果のため、β−細胞機能のテストにこのペプチドを利用す
ることは適当なアプローチであると思われる。理論的には、β−細胞の分泌能は
、１）β−細胞の総質量、２）適用された刺激物に対する個々の細胞の感度、３
）個々の細胞の分泌能に依存する。糖尿病において、これら３つの因子の全てが
損傷するものと思われる。特にII型糖尿病においては、グルコースに対する感度
が損傷し、そのため、β−細胞の感度が最も維持される刺激物を選択することが
重要である。このような刺激物としてＧＬＰ−１が利用できるであろう。このこ
との調査のため、本発明者等は、種々の投与量および投与モードについて、ＧＬ
Ｐ−１に対するβ−細胞分泌応答を食事に対する応答、グルカゴンに対する応答
および高血糖クランプの間に注射されたアルギニンに対する応答と比較した。こ
れらの実施例における検査の内の投与量−応答についての検査の結果、患者にお
ける標準食事、２．５ｎｍｏｌのＧＬＰ−１および１ｍｇのグルカゴンで、イン
シュリンおよびＣ−ペプチドについての同様のピーク濃度が得られることが見出
された。しかし、ＧＬＰ−１はグルカゴンよりも副作用が少くない。ＧＬＰ−１
のより高い投与量で可成り大きい応答が得られ、従って、ＧＬＰ−１の単一の注
射に対する最大の応答は、本検査で使用した２．５ｎｍｏｌより若干高い投与量
で得られるものと思われる。他方、より高い投与量により、より多くの患者が副
作用を示した。正常のヒトにおいては、すべての投与量で同様の応答が得られた。
興味深いことに、いずれの刺激物に対する絶対的応答は患者の場合と実質的に同
一であり、ＧＬＰ−１の向インシュリン作用がII型糖尿病患者で広く維持される
という考察を確認することができた。投与量−応答の関係が患者については存在
するが、健康人については存在しないという事実はβ−細胞のＧＬＰ−１に対す
る感度が患者において幾分減少することを示唆するものである。グルカゴンに対
する応答は同様であり、グルカゴンがβ−細胞分泌に対する刺激物としてＧＬＰ
−１と同様に効果的であることを示唆している（しかし、有効性は可成り低く、
副作用は大きい）。患者および健康人の更に大きいグループにおいて得られた結
果は上記投与量−応答についての検査で得られたものと同様であった。
【０００７】 以下に記載する投与量−応答についての検査において、ＧＬＰ−１の全ての投
与量は、予想した通り、血漿グルコース濃度を低下させたが、食事テストおよび
グルカゴンテストでは血漿グルコース濃度は増大した。すなわち、β−細胞に対
するグルコースの信号がより小さいため、ＧＬＰ−１の作用が低く予測されたも
のと思われる。なぜならば、高血糖症は、殆どのインシュリン分泌促進薬に対す
るβ−細胞の応答を増大するからである。しかし、この作用はII型糖尿病患者に
おいては小さい。従って、実施例の第２部においては、ＧＬＰ−１に対するβ−
細胞の応答についての高血糖症の作用が試験された。ここで、健康人と患者との
間で顕著な差異が認められた。すなわち、健康人においては、分泌応答がほぼ４
倍に増大したが、患者においてはその応答の増加は僅かに過ぎなかった。これは
、一方において、おそらく糖尿病β−細胞のグルコース非感受性を説明するもの
であり、他方において、ＧＬＰ−１の２．５ｎｍｏｌの投与量が、糖尿病患者に
おけるほぼ最大のβ−細胞応答を引き出すよう作用することを示唆するものと思
われる。しかし、これらの実験は静脈内投与においてＧＬＰ−１の極めて急速な
劣化を考慮に入れていない。単一の静脈内投与が最大の応答を引き出すには短す
ぎる短時間、ＧＬＰ−１の血漿濃度を上昇させ得ることが考えられる。実際に、
血漿ＧＬＰ−１の直接的測定により、２．５ｎｍｏｌの静脈注射後１０−１５分
で既に完全なＧＬＰ−１の基底濃度が認められた。ＧＬＰ−１の更なる継続的作
用を検査するため、静脈内投与を皮下注射と比較した。この場合、ＧＬＰ−１は
先に実証された最大許容投与量を与えた。これらの実験において、完全なＧＬＰ
−１の残存濃度が９０分もの長時間，持続した。しかし、得られたインシュリン
およびＣ−ペプチドの最大濃度は、静脈内投与後に得られたものと異なることは
なかった。従って、ＧＬＰ−１の継続的投与がピーク応答を更に増大させること
はなかった。グルコース／ＧＬＰ−１組合せの注射の間におけるインシュリンお
よびＣ−ペプチドの応答は、β−細胞分泌能が健康な人のものと比較してII型糖
尿病患者のグループにおいて約２５％に損傷されることを示すものであった。
【０００８】 最大分泌能を検査するため、グルコース／ＧＬＰ−１組合せの応答と、高血糖
クランプ＋アルギニンの応答と比較した（Ｗａｒｄ ＷＫ，Ｂｏｌｇｉａｎｏ
ＤＣ， ＭｃＫｎｉｇｈｔ Ｂ， Ｈａｌｔｅｒ ＪＢ， Ｐｏｒｔｅ Ｄ（１
９８４）、 非インシュリン依存型真性糖尿病の患者におけるβ−細胞分泌能の
減退；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ． ７４：１３１８−１３２８）。漸増する
インシュリンおよびＣ−ペプチドの応答は糖尿病患者のものと同様であった。４
５分間の高血糖クランプの間のβ−細胞のプライミング作用は、アルギニンクラ
ンプの間における、より高い絶対インシュリンおよびＣ−ペプチド応答を示唆す
るものと思われる。
【０００９】 すなわち、II型糖尿病患者においても、β−細胞の最大分泌速度は、非常に高
濃度のグルコース（すなわち、患者の日常のグルコースレベルより可成り高い）
と、ＧＬＰ−１又はアルギニンなどの追加の分泌促進薬との組合せによってのみ
引き出すことができる。しかし、例えば混合食事の摂取などの生理学的刺激によ
って引き出されるインシュリン量を分泌させる患者の能力は、ＧＬＰ−１の２．
５ｎｍｏｌの少量の静脈投与により、迅速、かつ、簡便に測定することができ、
患者に深いを感じさせることもない。 外来患者病院における最善のテストをグルコース／ＧＬＰ−１組合せの注射に
よって行うことができ、ＧＬＰ−１による刺激の前にII型糖尿病患者および健康
人において同様の基底血糖が得られる。
【００１０】 ＧＬＰ−１は、静脈内で又は皮下的に投与することができ、連続的又はブロス
注射により投与することができる。グルコースの注射又は輸液の前後、又は同時
に全て投与することができる。以下の投与量を用いることができる。連続的輸液
の場合において、静脈内投与（Ｉ．Ｖ．）によるときは、０．１ ｐｍｏｌ／ｋ
ｇ／分ないし１０ ｐｍｏｌ／ｋｇ／分、皮下投与（Ｓ．Ｃ．）によるときは、
０．１ ｐｍｏｌ／ｋｇ／分ないし２５ ｐｍｏｌ／ｋｇ／分である。また、単
一投与(ブロス投与)で、Ｉ．Ｖ．によるときは、０．００５ ｎｍｏｌ／ｋｇな
いし２０ ｎｍｏｌ／ｋｇ、Ｓ．Ｃ．によるときは、０．１ｎｍｏｌ／ｋｇない
し１００ ｎｍｏｌ／ｋｇである。
【００１１】 “ＧＬＰ−１”又はグルカゴン様ペプチドの用語は、擬似体を含み、本発明の
趣旨で使用する場合、グルカゴン様ペプチド、関連するペプチド、グルカゴン様
ペプチド−１の類似体、つまりＧＬＰ−１（７−３６）アミドレセプター蛋白質
のようなグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）レセプター蛋白質に結合する
ものを含むものであり、ＧＬＰ−１の天然の生物学的に活性な型であるＧＬＰ−
１（７−３６）アミドに対応する生物学的作用をインシュリン分泌に関して有す
るものである（Ｇoke，ＢおよびＢｙｒｎｅ，Ｍ，Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｍｅｄｉ
ｃｉｎｅ；１９９６，１３：８５４−８６０）。ＧＬＰ−１レセプターは、細胞
表面たんぱく質であり、例えば、インシュリン生産すい臓β−細胞に見出すこと
ができる。グルカゴン様ペプチドおよびその類似体には、向インシュリン活性を
有し、ＧＬＰ−１レセプター分子の作動薬、つまりＧＬＰ−１レセプター分子を
活性化させる種であって、更に特にインシュリン生産β−細胞に対し第２メッセ
ンジャー活性を有するものを含む。このレセプターを介して活性を示すグルカゴ
ン様ペプチドの作動薬については以下の文献がある。すなわち、ＥＰ０７０８１
７９Ａ２；Ｈｊｏｒｔｈ，Ｓ．Ａ．その他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（
４８）：３０１２１−３０１２４（１９９４）；Ｓｉｅｇｅｌ，Ｅ．Ｇ．その他
、Ａｍｅｒ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃ．５７ｔｈ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ
Ｓｅｓｓｉｏｎｓ，Ｂｏｓｔｏｎ（１９９７）；Ａｄｅｌｈｏｒｓｔ，Ｋ．そ
の他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（９）：６２７５−６２７８（１９９４
）；Ｄｅａｃｏｎ Ｃ．Ｆ．その他、１６ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ Ａｂｓｔｒａｃ
ｔｓ，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（１９９７）；Ｉｒｗ
ｉｎ，Ｄ．Ｍ．その他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９４
：７９１５−７９２０（１９９７）；Ｍｏｓｊｏｖ，Ｓ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔ
ｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．４０：３３３：３４３（１９９２）などであ
る。
【００１２】 グルカゴン様分子には、ＧＬＰ−１の作動薬を表し、つまりＧＬＰ−１レセプタ
ー分子を活性化させるポリヌクレオチドであって、更に特にインシュリン生産β
−細胞に対し第２メッセンジャー活性を有するものを含む。β−細胞の作動薬で
あるＧＬＰ−１擬似体は、特にＧＬＰ−１レセプターを活性化させるようにした
化合物を含む。グルカゴン様ペプチド−１拮抗薬も知られている。つまり、Ｗａ
ｔａｎａｂｅ、Ｙ．その他、Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１４０（１）：４５−
５２（１９９４）に記載され、これにはエクセンジン（９−３９）アミン、エク
センジン類似体を含み、これはＧＬＰ−１レセプターの拮抗薬である（例えば、
ＷＯ９７／４６５８４）。最近の文献にはＢｌａｃｋ Ｗｉｄｏｗ ＧＬＰ−１
およびＳｅｒ２ ＧＬＰ−１が開示されている(例えば、Ｇ．Ｇ．Ｈｏｌｚ，Ｊ
．Ｆ．Ｈａｋｎｅｒ／Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｃｃｃｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｐａｒｔ Ｂ１２１（１９９８）１７７−
１８４およびＲｉｔｚｅｌ，その他、Ａ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｇｌｕｃａｇｏ
ｎ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ−１ ａｎａｌｏｇ ｗｉｔｈ ｉｍｐｒｏｖｅ
ｄ ｐｌａｓｍａ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １９９８
Ｏｃｔ．；１５９（１）：９３−１０２)。
【００１３】 その他の例としては、化学的に合成されたグルカゴン様ポリペプチド、そのポ
リペプチド又はそのフラグメントであり、これらは実質的に同族体である。“実
質的に同族体”とは核酸およびアミノ酸配列についてのもので、特定の対象の配
列，例えば変異体で、１以上の置換、欠失又は付加によって対照配列と異なるも
のである。その実質的作用は対象の配列と対照の配列との間に好ましくない機能
的非類似性を生じさせない。本発明の目的において、５０％を超える同族体を有
する配列、好ましくは９０％を超える同族体を有する配列のもの、血漿グルコー
スレベルに対するβ−細胞の応答を向上させる同等の生物学的活性を有するもの
、均等な発現特性を有するものは、実質的に実質的に同族体ということができる
。同族体の判定を目的とする場合、完成された配列からの先端切断は無視される
べきである。同族性の程度の小さい配列,生物学的活性が同等のもの、均等の発
現特性を有するものは均等物であると解される。
【００１４】 哺乳動物のＧＬＰペプチドおよびグルカゴンは同一の遺伝子でコード化される
。回腸において、表現型はＧＬＰペプチドホルモンの２つの主なクラス、すなわ
ち、ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−２に処理される。表現型ペプチドから処理された
４つのＧＬＰ−１関連ペプチドが知られている。ＧＬＰ−１（１−３７）は、配
列、Ｈｉｓ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｇｌ
ｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅ
ｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌ
ｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｒ
ｇ Ｇｌｙ （ＳＥＱ． ＩＤ ＮＯ：１）を有する。ＧＬＰ−１（１−３７）
は翻訳後処理によりアミド化され、ＧＬＰ−１（１−３６）ＮＨ２ を生じさせ
、これは配列、Ｈｉｓ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ａ
ｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓ
ｅｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ａｌａ Ａｌａ Ｌ
ｙｓ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇ
ｌｙ Ａｒｇ（ＮＨ２）（ＳＥＱ． ＩＤ ＮＯ：２）を有する。若しくは、こ
れは酵素処理されＧＬＰ−１（７−３７）を生じさせ、これは配列、Ｈｉｓ Ａ
ｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓ
ｅｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ａｌａ Ａｌａ Ｌ
ｙｓ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇ
ｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ（ＳＥＱ． ＩＤ ＮＯ：３）を有する。ＧＬＰ−１（７
−３７）はアミド化され、更にアミド化されＧＬＰ−１（７−３６）アミドを生
じさせ、これはＧＬＰ−１分子の天然型であり、配列、Ｈｉｓ Ａｌａ Ｇｌｕ
Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ
Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ
Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｒｇ
（ＮＨ２）（ＳＥＱ． ＩＤ ＮＯ：４）を有する。
【００１５】 腸内Ｌ細胞はＧＬＰ−１（７−３７）（ＳＥＱ． ＩＤ ＮＯ：３）およびＧ
ＬＰ−１（７−３６）（ＮＨ２）（ＳＥＱ． ＩＤ ＮＯ：４）を１ないし５の
割合でそれぞれ分泌する。これらのＧＬＰ−１の欠失型はその場における半寿命
が１０分未満の短いものであり、アミノジペプチダーゼＧＬＰ−１ＩＶにより不
活性化され、Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｖａ
ｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ａｌａ Ａｌ
ａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｌｙ
ｓ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ（ＳＥＱ． ＩＤ ＮＯ：５）；およびＧｌｕ Ｇ
ｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｔ
ｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｐ
ｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｒｇ （
ＮＨ２）（ＳＥＱ． ＩＤ ＮＯ：６）をそれぞれ生じさせる。これらのペプチ
ド、Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅ
ｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｙ
ｓ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌ
ｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ（ＳＥＱ． ＩＤ ＮＯ：５）；およびＧｌｕ Ｇｌｙ Ｔ
ｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｌ
ｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｉ
ｌｅ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｒｇ （ＮＨ２）
（ＳＥＱ． ＩＤ ＮＯ：６）は肝臓のグルコース生産に影響を及ぼすことが予
測されるが、すい臓からのインシュリンの生産又は放出に対し刺激を与えること
はない。 ＧＬＰ−１と同族の６種のペプチドがアメリカドクトカゲの毒液に存在する。
これらの配列が表１にＧＬＰ−１と比較して記載されている。
【００１６】 表 １ ａ．H A E G T F T S D V S S Y L E G Q A A K E F I A W L V K G R NH2 b．H S D G T F T S D L S K Q M E E E A V R L F I E W L K N G G P S S
G A P P P S NH2 c． D L S K Q M E E E A V R L F I E W L K N G G P S S
G A P P P S NH2 d．H G E G T F T S D L S K Q M E E E A V R L F I E W L K N G G P S S
G A P P P S NH2 e．H S D A T F T A E Y S K L L A K L A L Q K Y L E S I L G S S T S P
R P P S S f．H S D A T F T A E Y S K L L A K L A L Q K Y L E S I L G S S T S P
R P P S g．H S D A I F T E E Y S K L L A K L A L Q K Y L A S I L G S R T S P
P P NH2 h．H S D A I F T Q Q Y S K L L A K L A L Q K Y L A S I L G S R T S P
P P NH2 a=ＧＬＰ−１（ＳＥＱ. ＩＤ ＮＯ:４） b=Ｅｘｅｎｄｉｎ ３（ＳＥＱ. ＩＤ ＮＯ:７） c=Ｅｘｅｎｄｉｎ ４（９−３９(ＮＨ２（ＳＥＱ. ＩＤ ＮＯ:８） ｄ=Ｅｘｅｎｄｉｎ ４（ＳＥＱ. ＩＤ ＮＯ:９） ｅ=Ｈｅｌｏｓｐｅｃｔｉｎ Ｉ（ＳＥＱ. ＩＤ ＮＯ:１０） ｆ=Ｈｅｌｏｓｐｅｃｔｉｎ II（ＳＥＱ. ＩＤ ＮＯ:１１） ｇ=Ｈｅｌｏｄｅｒｍｉｎ（ＳＥＱ. ＩＤ ＮＯ:１２） ｈ=Ｑ８ ，Ｑ９Ｈｅｌｏｄｅｒｍｉｎ（ＳＥＱ. ＩＤ ＮＯ:１３）
【００１７】 表１の欄外に記載されているように、主な同族体は：ペプチドｃおよびｈはｂ
およびｇからそれぞれ得られたものである。６種の天然のペプチド（ａ，ｂ，ｄ
, ｅ，ｆおよびｇ）は位置、１，７，１１，１８において一致する。ＧＬＰ−
１およびイクセンジン（ｅｘｅｎｄｉｎ）３，４（ａ，ｂ及びｄ）は更に位置、
４，５，６，８，９，１５，２２，２３，２５，２６，２９において一致する。
位置２において、Ａ，ＳおよびＧは構造的に類似する。位置３において、Ｄおよ
びＥ（ＡｓｐおよびＧｌｕ）は構造的に類似する。位置２２，２３において、Ｆ
（Ｐｈｅ）およびＩ（Ｉｌｅ）は構造的にＹ（Ｔｙｒ）およびＬ（Ｌｅｕ）にそ
れぞれ類似する。同様に、位置２６において、ＬおよびＩは構造的に均等である
。 すなわち、ＧＬＰ−１の３０の残基の内、イクセンジン（ｅｘｅｎｄｉｎ）３
，４は１５個の位置で同一であり、５個の更なる位置において均等である。根本
的構造変化が明らかに位置は、残基、１６，１７，１９，２１，２４，２７，２
８，３０のみに認められる。イクセンジンもカルボキシル基末端に９個の余分な
残基を有する。
【００１８】 ＧＬＰ−１様ペプチドは、化学的固相ペプチド合成により作ることができる。
ＧＬＰ−１は更に、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｍａｎｉａｔｉｓに記
載されている標準手法を用いた従来の組換え技術により,作ることもできる。こ
こで、“組換え”とは組換え(例えば、微生物又は哺乳動物の)発現システムから
たんぱく質が得られることを意味するものであり、ＧＬＰ−１又はその生物学的
に活性な類似体についての発現遺伝子を含むよう遺伝子的に変質される。 ＧＬＰ−１様ペプチドは、種々の方法により組換え細胞培養から回収、精製す
ることができる。その方法の例としては、限定されるものでないが、例えば、硫
酸アンモニウム又はエタノール析出法、酸抽出法、カチオン又はアニオンクロマ
トグラフィ法、ホスホセルロースクロマトグラフィ法、疎水性相互作用クロマト
グラフィ法、アッフィニティクロマトグラフィ法、ヒドロキシアパタイトクロマ
トグラフィ法、レクチンクロマトグラフィ法などを用いることができる。高性能
液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）法は最終の精製工程で使用することができる
。
【００１９】 本発明のポリペプチドは天然の精製された製品であっても、あるいは、化学的
合成法によるもの、原核生物又は真核生物宿主（培養による、又はｉｎ ｖｉｖ
ｏにおけるバクテリア、酵母、高級植物、昆虫、哺乳動物の細胞）から組換え技
法により製造されたものであってもよい。組換え技法にて使用される宿主の種類
にもよるが、本発明のポリペプチドは一般にグリコシル化されていないが、グリ
コシル化されていてもよい。 ＧＬＰ−１活性は標準的方法、すなわち、一般的には、レセプター結合活性ス
クリーニング法により判定することができる。この方法は、表面にＧＬＰ−１レ
セプターを発現する適当な細胞、例えば、ＲＩＮｍＳＦ細胞又はＩＮＳ−１細胞
のようなインシュリノマ細胞ラインを用いる（Ｍｏｓｊｏｖ、Ｓ．（１９９２）
およびＥＰ０７０８１７０Ａ２参照）。放射免疫検定法を用い、膜へのトレーサ
の特異的結合を測定することに加え、ｃＡＭＰ活性又はグルコース依存インシュ
リン生産も測定する。１つの方法として、本発明のレセプターをコード化するポ
リヌクレオチドを使用し細胞のトランスフェクションを行い、ＧＬＰ−１レセプ
ターたんぱく質を発現させてもよい。すなわち、これらの方法はレセプター作動
物質をスクリーニングするために使用することができ、これは、そのような細胞
をスクリーニングされるべき化合物と接触させ、その化合物が信号を発するか否
か、すなわち、レセプターを活性化するか否かを判定するものである。
【００２０】 ポリクローンおよびモノクローン抗体を利用し、上述の方法で使用されるＧＬ
Ｐ−１様ペプチドを検知し、精製し、識別することができる。ＡＢＧＡ１１７８
のような抗体は完全な、かつ、継ぎ合わせていないＧＬＰ−１（１−３７）又は
Ｎ−末端−欠失ＧＬＰ−１（７−３７）又は（７−３６）アミドを検知すること
ができる。他の抗体は、前駆分子のＣ−末端の先端を検知することができ、その
手法により減法を介して生物学的に活性な欠失ペプチド、すなわち、ＧＬＰ−１
（７−３７）又は（７−３６）アミドの量を計算することができる（Ｏｒｓｋｏ
ｖその他、Ｄｉａｂｅｔｅｓ，１９９３、４２：６５８−６６１；Ｏｒｓｋｏｖ
その他、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９１、８７：４１５−４２３）。
【００２１】 他のスクリーニング法としては、レセプター活性により生じた細胞外ｐＨ又は
イオン変化を測定するシステムにおいてＧＬＰ−１レセプターを発現する細胞、
例えばトランスフェクトされたＣＨＯ細胞を使用する方法がある。例えば、潜在
的作動物質を、ＧＬＰ−１たんぱく質レセプターを発現する細胞と接触させ、第
２のメッセンジャー応答、例えば、信号変換、イオン又はｐＨの変化を測定し、
潜在的作動物質が有効か否かを判定する。
【００２２】 本発明のグルカゴン様ペプチド−１レセプター結合たんぱく質は適当な薬剤担
体との組合せで使用することもできる。そのような組成は、ポリペプチドの治療
有効量と、薬理学的に許容し得る担体又は賦形剤とからなる。担体の例としては
、塩水、緩衝塩水、デキストローゼ、水、グリセロール、エタノール、ラクトース
、ホスフェート、マンニトール、アルギニン、トレハロースおよびこれらの混合
物である。その調合は投与の型に適合するようなされるもので、それについては
当業者にとって自明であろう。ＧＬＰ−１ペプチドは、その生物学的活性を向上
させ、持続させるために、このペプチドのｉｎ ｖｉｖｏでの半寿命を向上させ
る公知の薬剤と組合わせて使用することもできる。例えば、投与の前に、分子又
は化学的部位を本発明の組成物に共有結合させてもよい。その他、この向上剤を
上記組成物と同時に投与するようにしてもよい。さらに、この向上剤は、ＧＬＰ
−１様ペプチドの酵素劣化を抑制する公知の分子を含むものであってもよく、こ
れをＧＬＰ−１様ペプチド組成物と同時に又は投与後に投与するようにしてもよ
い。 以下の実施例は説明のためのものであり、本発明のテスト法を制限することを
意図するものではない。もちろん、テストで使用される分子、手法を或る程度の
変更は当然なしうるものであり、それらも、文字通り、又は均等論により、本発
明の趣旨および範囲に包含されるものである。
【００２３】 （実施例） 本発明の検査は３つの部分に分割されている。その第１部の目的は、インシュ
リン分泌に対するＧＬＰ−１刺激の投与量−応答の関係を確立するため（ＧＬＰ
−１を、２．５、 ５、 １５、 ２５ｎｍｏｌ用いて）、標準の食事テスト後
、およびグルカゴンテスト（Ｉ．Ｖ．で１ｍｇ投与）後の応答を比較するもので
ある。その第２部の目的は、選択された投与量のより大きいグループ（II型糖尿
病患者１２人と、対応する健康人12人）における作用効果を評価し、更に血漿グ
ルコースを１５ｍｍｏｌ／Ｌにまで増大させてグルコースの輸液と併用させたと
きのＧＬＰ−１の効果を検査することである。その第３部の目的は、上記第２部
のグルコース＋ＧＬＰ−１組合せの注射を、最大分泌能の判定に使用されたアル
ギニンを用いた従前の高血糖クランプと比較することである。 第１部：６人のII型糖尿病患者（４人の男性と２人の女性；平均値(範囲):年
齢５６歳(４８−６７歳)；ＢＭＩ：３１．１ｋｇ／ｍ２（２７−３８ｋｇ／ｍ２ ）；ＨｂＡ１ｃ：９．６％（７．０−１２．５％）および６人の健康人（４人の
男性と２人の女性；平均値(範囲):年齢５６歳(５１−７０歳)；ＢＭＩ：３１．
６ｋｇ／ｍ２（２６−３７ｋｇ／ｍ２）；ＨｂＡ１ｃ：５．５％（５．２−５．
８％）。 第２部：患者グループを更に６人のII型糖尿病男性患者を含めるよう
にした（平均値(範囲):年齢５９歳(４９−６９歳)；ＢＭＩ：３０．０ｋｇ／ｍ
２（２６−３５ｋｇ／ｍ２）；ＨｂＡ１ｃ：８．９％（８．１−１０％）および
更に６人の健康人（平均値(範囲):年齢５７歳(５０−６４歳)；ＢＭＩ：３０．
４ｋｇ／ｍ２（２８−３４ｋｇ／ｍ２）；ＨｂＡ１ｃ：５．７％（５．５−６％
）、従って、このグループは合計１２人のII型糖尿病患者と、これに対応する１
２人の健康人からなるものであった。７人の患者は食事のみで治療し、５人は食
事と、経口抗糖尿病薬（スルホニル尿素および／又はビグアニド）で治療した。
６人の患者は高血圧症の履歴があり、サイアザイド、ＡＣＥ抑制剤および／又は
カルシウム拮抗薬で治療した。 第３部：８人のII型糖尿病患者（７人の男性と
１人の女性；平均値(範囲):年齢５５歳(４９−６９歳)；ＢＭＩ：３０．９ｋｇ
／ｍ２（２７−３５ｋｇ／ｍ２）；ＨｂＡ１ｃ：７．６％（６．３−８．６％）
および８人の健康人（平均値(範囲):年齢５５歳(５１−６４歳)；ＢＭＩ：３１
．１ｋｇ／ｍ２（２５−３８ｋｇ／ｍ２）；ＨｂＡ１ｃ：５．４％（５．０−６
．０％）。４人の患者は食事のみで治療し、４人は食事と、経口抗糖尿病薬（ス
ルホニル尿素および／又はビグアニド）で治療した。５人の患者は高血圧症の履
歴があり、サイアザイド、ＡＣＥ抑制剤および／又はカルシウム拮抗薬で治療し
た。全てのII型糖尿病患者は国家糖尿病データグループ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｄ
ｉａｂｂｅｔｅｓ Ｄａｔａ Ｇｒｏｕｐ）の基準に従って診断された。いずれ
の患者も腎機能障害はなく（正常な血清クレアチンレベル（＜１３０μｍｏｌ／
Ｌ）およびミクロアルブミン尿症はなかった）、増殖性網膜症や肝臓障害もなか
った。いずれの健康人も家族に糖尿病の履歴はなく、経口耐グルコーステスト（
ＯＧＴＴ）も正常であった。全ての人は口頭および書面による情報を受けたのち
、テストに参加することに同意した。
【００２４】 全ての経口抗糖尿病薬の投与は検査の７２時間前に中止した。一晩の断食（１
０ＰＭ）後、被験者は横臥の状態で２本の針を肘静脈に挿入して検査した。つま
り、一方の針はＧＬＰ−１、グルカゴン、Ｌ−アルギニンおよび／又はグルコー
スの注射のため、他方は血液のサンプリングのためである。
【００２５】 第１部： 全ての参加者に対し、６日間の別々の日にランダムな順序で、食事
テスト、グルカゴン（１ｍｇ）のＩ．Ｖ．ボーラス注射、又はＧＬＰ−１の異な
る投与量（２．５，５，１５，２５ｎｍｏｌ）により検査した。食事テストは：
標準の朝食の摂取前、１５分、１０分および０分、摂取後、１５分、３０分、４
５分、６０分、７５分、９０分、１２０分、１５０分、１８０分の各時点で血液
を静脈から採取した。この食事は、５６６ｋｃａｌ（２３７０ｋＪ）で、３４％
の脂肪、４７％の炭水化物、１９％のたんぱく質からなるものであった。グルカ
ゴンの静脈内投与又はＧＬＰ−１のＩ．Ｖ．投与について：１ｍｇ（＝２８７ｎ
ｍｏｌ）の生合成グルカゴン（ＧｌｕｃａＧｅｎ，Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ，
Ｂａｇｓｖａｅｒｄ，デンマーク）のＩ．Ｖ．ボーラス投与、又はＧＬＰ−１の
４種の異なる投与量による投与の前、１５分、１０分および０分、投与後、２分
、３分、４分、６分、８分、１０分、１５分、２０分、３０分、４５分の各時点
で血液を静脈から採取した。合成ＧＬＰ−１（７−３６）アミドはＰｅｎｉｓｕ
ｌａ Ｅｕｒｏｐｅ（Ｍｅｙｅｒｓｉｄｅ，英国）から購入した。ペプチドは２
％ヒト血清アルブミン（Ａｌｂｕｍｉｎ Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄ
ｉｓｋ，Ｂａｇｓｖａｅｒｄ，デンマーク；Ｂ型肝炎表面抗原およびヒト免疫欠
損ウイルス抗体が全くないことが保証されたもの）を含む滅菌水に溶解させ、滅
菌ろ過を行った。各被験者に対する適当な量のペプチドを調剤し、ガラスアンプ
ルに入れ、実験日まで滅菌状態で凍結保存した。
【００２６】 第２部： β−細胞を異なる３日間検査した。ランダムな順序で、標準食事テ
スト、Ｉ．Ｖ．グルカゴンテスト（１ｍｇ）、および２．５ｎｍｏｌのＧＬＰ−
１のボーラス注射により検査した。更に、絶食時血漿グルコース（ＦＰＧ）が１
５ｍｍｏｌ／Ｌ未満のII型糖尿病患者（１２人中、９人）および全ての健康人に
対し、グルコース＋ＧＬＰ−１組合せの注射を行った。ゼロ時間（０分）で、５
０％グルコース（ｗ／ｖ）を１分間、輸液し、血漿グルコースを１５ｍｍｏｌ／
Ｌに増大させた（計算方法は：（１５ｍｍｏｌ／Ｌ−絶食時血漿グルコース）ｘ
３５ｍｇグルコース ｘ 体重（ｋｇ））。更に３分後、２．５ｎｍｏｌのＧ
ＬＰ−１のボーラス注射を２分間行った。Ｉ．Ｖ．注射の後、ＧＬＰ−１が急速
に代謝され［７，８］、従ってβ−細胞に対する十分な効果が求められる前に分
裂され、この方法では最大の効果を得ることが不可能であると思われる。血漿Ｇ
ＬＰ−１の更なる持続的上昇効果を検査するため、II型糖尿病患者の８人と、７
人の健康人に対し、ＧＬＰ−１の皮下注射を行った（１．５ｎｍｏｌのＧＬＰ−
１／ｋｇ体重を臍周縁部に注射した）［９］。１５分後、上述のグルコース（５
０％ｗ／ｖ）の静脈内投与により、血漿グルコースは１５ｍｍｏｌ／Ｌに増大し
た。ＧＬＰ−１の投与の前、１５分、１０分および０分、投与後、１０分、２０
分、３０分、４０分、５０分、６０分、７０分、８０分、９０分の各時点で血液
を静脈から採取した。この実験の結果を、同じ８人の患者と、７人の健康人に対
するＩ．Ｖ．グルコース／ＧＬＰ−１組合せの注射によるものと比較した（８人
の患者の内の２人については、ＦＰＧが１５ｍｍｏｌ／Ｌであったため、グルコ
ース／ＧＬＰ−１組合せの注射の代わりに、グルコースの事前の投与を行うこと
なくＧＬＰ−１の注射を行った。）。
【００２７】 第３部： 異なる２日間、ランダムな順序で、グルコース／ＧＬＰ−１組合せ
の注射、又は５ｇのＬ−アルギニンモノ塩酸塩を用いた高血糖クランプを行い、
最大分泌能を予測した。高血糖クランプの間、ゼロ時間で、グルコース（５０％
ｗ／ｖ）を注射し、血漿グルコースを３０ｍｍｏｌ／Ｌに増大させた（計算方法
は：（３０ｍｍｏｌ／Ｌ−絶食時血漿グルコース）ｘ ３５ｍｇグルコース ｘ
体重（ｋｇ））。グルコースの連続的輸液により血漿グルコースを３０ｍｍｏ
ｌ／Ｌに維持した。この値は血漿グルコースのベッド際の測定により５分毎に調
整した。４５分の時点において、５ｇのＬ−アルギニンモノ塩酸塩を３０秒間、
ボーラスとして注射した。血漿グルコースの上昇前、１５分、１０分および０分
、上昇後、５分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、３５分、４０分、
４５分、４７分、４８分、４９分、５１分、５３分、５５分、６０分、６５分、
７０分、７５分、９０分の各時点で血液を静脈から採取した。Ｌ−アルギニンは
５０ｍＬの滅菌水に溶解、調剤し、ガラスアンプルに入れ、実験日まで４℃で保
存した。血液をフッ化チューブ中に採取し、グルコースについて測定し、更に、
アプロチニン（ａｐｒｏｔｉｎｉｎ；５００ ＫＩＵ／ｍＬ 血液；Ｔｒａｓｙ
ｌｏｌ，Ｂａｙｅｒ，Ｌｅｖｅｒｋｕｓｅｎ，ドイツ国）を伴った冷却ＥＤＴＡ
チューブ中に採血し、ペプチドを分析した。これらチューブは直ちに，氷上で冷
却し、４℃で２０分以内で遠心分離し、血漿を-２０℃で分析時まで貯蔵した。
この実験の間、参加者全てについて副作用について尋ね、結果を表２に示す。
【００２８】 グルコース分析器（Ｙｅｌｌｏｗ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ
Ｍｏｄｅｌ ２３Ａ，米国）を用いたグルコースオキシダーゼ法により、実験の
間、血漿グルコース濃度を測定した。血漿インシュリン濃度は、ヒトインシュリ
ンのスタンダードと、抗体コード番号２００４を用い、Ａｌｂａｎｏらの方法に
従って測定した。この検査法の感度は、約３ｐｍｏｌ／Ｌであり、検査内変動率
は４８ｐｍｏｌ／Ｌで８％である。Ｃ-ペプチド濃度は、ポリクローン抗体Ｍ１
２３０［１２］を用いたＨｅｄｉｎｇら［１１］に記載された放射免疫検定法（
ＲＩＡ）を用いて判定した。稀に見られるプロインシュリン変換中間型：ＤＥＳ
（６４，６５）−プロインシュリンは強力に交差反応し（１２６％）、それに対
し、プロインシュリン様免疫反応性の優勢型：ＤＥＳ（３１，３２）および完全
なプロインシュリンはＣ-ペプチド（１００％）に対し、１３−１５％反応する
。検知限界はほぼ６０ｐｍｏｌ／Ｌであり、検査内変動率は５％であり、検査間
変動率は７．３％である。血漿サンプルをＧＬＰ−１免疫反応性についてＧＬＰ
−１分子の各末端に対し特異的なＲＩＡｓを用いて検査した。Ｎ-末端免疫反応
性を、抗血清９３２４２［１３］を用いて測定した。この抗血清はＧＬＰ−１（
１−３６）アミドとほぼ１０％で交差反応し、ＧＬＰ−１（８−３６）アミドお
よびＧＬＰ−１（９−３６）アミドと０．１％未満で交差反応する。この検査は
５ｐｍｏｌ／Ｌの検知限界を有する。ＧＬＰ−１のＣ-末端免疫反応性を抗血清No
.８９３９０を用い、合成ＧＬＰ−１（７−３６）アミド（＝プログルカゴン７
８−１０７アミド）のスタンダードに対し測定した。この抗血清No.８９３９０
の交差反応は、Ｃ−末端切欠フラグメントに対しては０．０１％未満、ＧＬＰ−
１（９−３６）アミドに対しては８３％未満であった。検知限界は１ｐｍｏｌ／
Ｌである。
【００２９】 第１部： インシュリンおよびＣ−ペプチドの濃度を図１に示す。インシュリ
ンおよびＣ-ペプシドのピーク濃度はＧＬＰ−１又はグルカゴンのＩ.Ｖ.注射後
６-１０分の時点、更に、食事（食事のデータは示していない）後、９０分（患者
の場合）および３０-９０分（健康人の場合）に認められた。II型糖尿病患者お
よび健康人についてのインシュリンおよびＣ−ペプチドの平均ピーク濃度を表１
に示す。同様の結果が、所定のサンプリング時間（例えば、輸液後６分）での値を
比較した場合に得られた。２．５ｎｍｏｌのＧＬＰ−１投与、標準食事テスト、
１ｍｇのグルカゴンの投与の後のインシュリンおよびＣ−ペプチドのピーク濃度
は、個々のピーク濃度を比較した場合、有意な差が認められなかった（ｐ＝０．
０５９、ＡＮＯ．ＶＡ）。II型糖尿病患者においては、ＧＬＰ−１の投与量を多
くすることにより、インシュリン（ｐ＝０．００３３）およびＣ−ペプチド（ｐ
＝０．０００６）の応答がより高くなった（繰返し測定、ＡＮＯＶＡ）。“Ｐｏ
ｓｔ ｈｏｃ”比較の結果、インシュリンに関するＧＬＰ−１対食事テスト（ｐ
＜０．０５およびｐ＜０．０１）において、１５ｎｍｏｌと２５ｎｍｏｌ（ＧＬ
Ｐ−１）との間に有意差は認められなかった。更に、Ｃ−ペプチドについての、
２．５ｎｍｏｌと２５ｎｍｏｌのＧＬＰ−１（ｐ＜０．０５）、１５および２５
ｎｍｏｌのＧＬＰ−１対グルカゴンテスト（ｐ＜０．０５およびｐ＜０．０１）
、２５ｎｍｏｌのＧＬＰ−１対食事テスト（ｐ＜０．０５）間においても有意差
は認められなかった。健康人においては、異なる６日間における応答において有
意差は認められなかった（インシュリン（ｐ＝０．５７）およびＣ−ペプチド（
ｐ＝０．１２））。
【００３０】 基底血漿ＧＬＰ−１濃度は、４−１０pmol/Lであった。完全なＧＬＰ−１の基
底濃度は、４種の異なる投与量のＩ．Ｖ．注射後１０-３０分で再び到達した。
ＧＬＰ−１の投与量の増加に伴い、血漿ＧＬＰ−１のピーク濃度も直線的に増大
し（図２）、この傾向はII型糖尿病患者および健康人について同様であった。
【００３１】 これらのテストの間に記録された副作用が表２に示されており、参加者の４２
ないし６７％の者が満足感の減退を訴え、ＧＬＰ−１の低い投与量（２．５およ
び５ｎｍｏｌ）でも３３％ないし５０％の者が吐き気を訴えた。グルカゴンテス
トでは、参加者の８３％の者が満足感の減退を訴え、７５％の者が吐き気を訴え
た。ＧＬＰ−１の投与量を増加したところ（１５および２５ｎｍｏｌ）、参加者
の１００％の者が満足感の減退を訴え、６７％ないし８３％の者が吐き気を訴え
、副作用の増加が認められた。ＧＬＰ−１の全ての投与量において、可成りの血
漿グルコース低下作用が糖尿病患者（４日間の実験日における平均ＦＰＧは：１
１ｍｍｏｌ／Ｌないし１２．６ｍｍｏｌ／Ｌ）（この場合、ＰＧは０．８ないし
１．４ｍｍｏｌ／Ｌ減少し、投与量間に有意な差はない）並びに健康人（ＦＰＧ
は：５．３ｍｍｏｌ／Ｌないし５．５ｍｍｏｌ／Ｌ）（この場合、ＰＧは１．０
ないし１．３ｍｍｏｌ／Ｌ減少し、投与量間に有意な差はない）の双方に認めら
れた。グルカゴンテストおよび食事テストの間の平均ＦＰＧは、II型糖尿病患者
の場合、それぞれ１０．８ｍｍｏｌ／Ｌおよび１１．４ｍｍｏｌ／Ｌであり、健
康人の場合、それぞれ５．３ｍｍｏｌ／Ｌおよび５．６ｍｍｏｌ／Ｌであった。
【００３２】 この検査の第２部からのインシュリンおよびＣ−ペプチドの平均濃度を図３に
示す。インシュリンおよびＣ-ペプシドのピーク濃度は、２．５ｎｍｏｌのＧＬＰ
−１投与、標準食事テスト、グルカゴンテストにおいて、II型糖尿病患者および
健康人について同様であった（但し、２５ｎｍｏｌのＧＬＰ−１対食事テスト（
ｐ＜０．０５）における健康人のＣ−ペプチド応答を除く）（表３）。健康人に
ついて、グルコース／ＧＬＰ−１組合せ注射の場合に、２５ｎｍｏｌのＧＬＰ−
１の単独投与と比較してインシュリンおよびＣ−ペプチドの増加が認められた（
ｐ＜０．００１）（患者についてのＮＳ）。
【００３３】 この検査の第２部において副作用の発生は少なく、グルカゴンテストでは、参
加者の５４％の者が満足感の減退を訴え、４６％の者が吐き気を訴え、これに対
し、２．５ｎｍｏｌのＧＬＰ−１テストでは、参加者の４２％の者が満足感の減
退を訴え、２９％の者が吐き気を訴えた。グルコース＋ＧＬＰ−１組合せの注射
の間において、１９％の患者が満足感の減退および吐き気を訴えた。この副作用
に関し、患者グループと、対照グループとの間に差異は認められなかった（表２
）。II型糖尿病患者においては、グルコース濃度が１５ｍｍｏｌ／Ｌで、１．５
ｎｍｏｌのＧＬＰ−１／ｋｇ体重を皮下投与した後のインシュリンおよびＣ−ペ
プチドの平均ピーク応答と、グルコース＋ＧＬＰ−１組合せへの応答との間に有
意な差は認められなかった（＞０．０５）。健康人に対しては、インシュリンに関
しては有意な差は認められなかったが（＞０．０５）、Ｃ−ペプチド（Ｐ＝０．
０４６）に関しては若干の差が認められた（図４）。５日間の実験日における平
均ＦＰＧは、糖尿病患者の場合、それぞれ１０．２ｍｍｏｌ／Ｌおよび１１．２
ｍｍｏｌ／Ｌであり、健康人の場合、それぞれ５．３ｍｍｏｌ／Ｌおよび５．５
ｍｍｏｌ／Ｌであった。
【００３４】 研究第３部からの血漿インシュリンおよびＣ−ペプチド濃度が図５および表４
に示されている。インシュリンおよびＣ-ペプシドのピーク濃度はグルコース＋
ＧＬＰ−１組合せの輸液の間のＧＬＰ−１のボーラス注射の終了後６-１０分の
時点並びに高血糖クランプの間のアルギニンの注射後４分の時点で認められた。
II型糖尿病患者のインシュリンおよびＣ−ペプチド（かっこ内）の平均濃度はＧ
ＬＰ−１の注射の時点で６３±１１（８１１±１１１）pmol/L、４５分の高血糖
クランプの後、５ｇのＬ-アルギニン注射の直前において１８９±４６（１６８
２±２８０）pmol/Lであった。健康人についての対応する結果は、それぞれ６１
±１４（６８９±５８）pmol/L、４６３±１２６（２６５７±３０７）pmol/Lで
あった。インシュリンおよびＣ−ペプチド（かっこ内）応答の増加はＧＬＰ−１
注射時とアルギニン注射時の濃度の差として計算し、ピーク応答はII型糖尿病患
者については、グルコース＋ＧＬＰ−１組合せのテストの間では、４１１±１３
０（１４８３±３０９）pmol/Lであり、高血糖クランプの間では、６２８±２２
６（１３６０±２５０）pmol/Lであった（ｐ＝０．１９（ｐ＝０．６３））。同
じく、健康人ではそれぞれ１３４２±３０２（３３６４±５０２）pmol/L、１９
２１±３３８（３３９１±３８８）pmol/Lであった（ｐ＝０．００８（ｐ＝０．
９２））。II型糖尿病患者のインシュリンおよびＣ−ペプチド（かっこ内）の絶
対平均ピーク濃度はグルコース＋ＧＬＰ−１輸液の間では、４７５±１４１（２
２９５±３７９）pmol/L、高血糖クランプの間では、８１６±２６８（３０４３
±５０８）pmol/Lであった（ｐ＝０．０９（ｐ＝０．０２））。健康人について
の対応する結果は、それぞれ１４０３±３０８（４０５３±５３３）pmol/L、２
３８４±４５２（６０４７±６５２）pmol/Lであった（ｐ＝０．００３（ｐ＝０
．０００３））。ＦＰＧ平均は、II型糖尿病患者については、グルコース／ＧＬ
Ｐ−１組合せ注射の当日では８．９ｍｍｏｌ／Ｌ、高血糖クランプの当日では９
．２ｍｍｏｌ／Ｌであった。同じく、健康人ではそれぞれ５．５ｍｍｏｌ／Ｌ、
５．６ｍｍｏｌ／Ｌであった。
【００３５】 表１ （検査の第１部におけるII型糖尿病患者および対照健康人についてのピ
ークインシュリンおよびＣ-ペプシド濃度） 患者 対照 Ｐ −値 (平均±ＳＥＭ） （平均±ＳＥＭ）（対ｔ−テスト） 2.5nmol GLP-1 インシュリン(pmol/L） 268±47 270±18 （p=0.95） C-ペプチド（pmol/L） 1771±237 1788±110 （p=0.95） 5nmol GLP-1 インシュリン（pmol/L） 318±32 340±67 （p=0.72） C-ペプチド（pmol/L） 1970±172 1716±254 （p=0.55） 15nmol GLP-1 インシュリン（pmol/L） 348±39 343±57 （p=0.81） C-ペプチド（pmol/L） 2049±169 1769±215 （p=1.0） 25nmol GLP-1 インシュリン（pmol/L） 360±29 359±60 （p=0.49） C-ペプチド（pmol/L） 2195±164 2144±248 （p=0.19） グルカゴン テスト(1mg) インシュリン（pmol/L） 265±45 360±39 （p=0.98） C-ペプチド（pmol/L） 1643±178 1874±158 （p=0.38） 食事テスト インシュリン（pmol/L） 197±31 386±61 （p=0.95） C-ペプチド（pmol/L） 1735±218 2398±265 （p=0.77）
【００３６】 表２ （ＧＬＰ−１テストの間の副作用（患者および対照）） 第１部 2-1/2 5 15 25 グルカゴン nmol nmol nmol nmol テスト (n=12) (n=12) (n=12) (n=12) (n=12) 満足感の変化（％） 67 42 100 100 83 発汗（％） 17 17 83 67 33 吐き気（％） 50 33 67 83 75 第２部 2-1/2 グルコース／ＧＬＰ−１ グルカゴン テスト nmol テスト (n-24) (n=24) (n=21) 満足感の変化（％） 42 19 54 発汗（％） 13 10 25 吐き気（％） 29 19 46
【００３７】 表３ （検査の第２部におけるII型糖尿病患者および対照健康人についてのピ
ークインシュリンおよびＣ-ペプシド濃度） 患者 対照 Ｐ−値 （平均±ＳＥＭ） （平均±ＳＥＭ） （対ｔ−テスト） 2.5nmol GLP-1 インシュリン（pmol/L） 390±74 356±51 （p=0.68） C-ペプチド（pmol/L） 2144±254 2001±130 (p=0.64） グルコース＋GLP-1 インシュリン（pmol/L） 465±87 1412±187 （p=0.002）＊ C-ペプチド（pmol/L） 2384±299 4391±416 （p=0.001）＊ グルカゴンテスト（1mg） インシュリン（pmol/L） 329±50 420±61 （p=0.28） C-ペプチド（pmol/L） 1780±160 1995±99 （p=0.27） 食事テスト インシュリン（pmol/L） 277±42 543±89 （p=0.01）＊ C-ペプチド（pmol/L） 2181±261 2873±210 （p=0.03）＊
【００３８】 表４ （検査の第３部におけるII型糖尿病患者および対照健康人についてのピ
ークインシュリンおよびＣ-ペプチド濃度） 患者 対照 Ｐ−値 （平均±ＳＥＭ） (平均±ＳＥＭ) (対ｔ−テスト） グルコース＋GLP-1 インシュリン（pmol/L）475±141 1403±308 （p=0.03）＊ C-ペプチド（pmol/L） 2295±379 4053±533 （p=0.03）＊ 高血糖 クランプ 816±268 2384±452 （p=0.02）＊ インシュリン（pmol/L）3043±508 6047±652 （p=0.01）＊ C-ペプチド（pmol/L）
【００３９】 上記説明から、上述のように投与されたＧＬＰ−１が、患者がII型糖尿病を患
っているか、又はその危険性があるか否かを判定するため外来患者のインシュリ
ン分泌能をテストするための最適のものであることが理解されるであろう。従っ
て、上記目的の全てを達成し得る。
【図面の簡単な説明】
【図１Ａ】 II型糖尿病患者の血漿インシュリン平均濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はＧＬＰ
−１が２．５ｎｍｏｌの場合、ｏ−ｏ線はＧＬＰ−１が５ｎｍｏｌの場合、■−
■線はＧＬＰ−１が１５ｎｍｏｌの場合、▲−▲線はＧＬＰ−１が２５ｎｍｏｌ
の場合、●−●線はグルカゴンが１ｍｇの場合を実験の第１部として示すグラフ
図。
【図１Ｂ】 健康人の血漿インシュリン平均濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はＧＬＰ−１が２
．５ｎｍｏｌの場合、ｏ−ｏ線はＧＬＰ−１が５ｎｍｏｌの場合、■−■線はＧ
ＬＰ−１が１５ｎｍｏｌの場合、▲−▲線はＧＬＰ−１が２５ｎｍｏｌの場合、
●−●線はグルカゴンが１ｍｇの場合を実験の第１部として示すグラフ図。
【図１Ｃ】 II型糖尿病患者のＣ−ペプチド濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はＧＬＰ−１が２
．５ｎｍｏｌの場合、ｏ−ｏ線はＧＬＰ−１が５ｎｍｏｌの場合、■−■線はＧ
ＬＰ−１が１５ｎｍｏｌの場合、▲−▲線はＧＬＰ−１が２５ｎｍｏｌの場合、
●−●線はグルカゴンが１ｍｇの場合を実験の第１部として示すグラフ図。
【図１Ｄ】 健康人のＣ−ペプチド濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はＧＬＰ−１が２．５ｎｍ
ｏｌの場合、ｏ−ｏ線はＧＬＰ−１が５ｎｍｏｌの場合、■−■線はＧＬＰ−１
が１５ｎｍｏｌの場合、▲−▲線はＧＬＰ−１が２５ｎｍｏｌの場合、●−●線
はグルカゴンが１ｍｇの場合を実験の第１部として示すグラフ図。
【図２】 II型糖尿病患者糖尿病（◆−◆線）および健康人（□−□線）について、Ｃ−
末端（上方曲線）およびＮ−末端（下方曲線）に向けられたＲＩＡによるピーク
血漿ＧＬＰ−１濃度を示す図。
【図３Ａ】 II型糖尿病患者の血漿インシュリン平均濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はＧＬＰ
−１が２．５ｎｍｏｌの場合、●−●線はグルカゴンが１ｍｇの場合、□−□線
はグルコース／ＧＬＰ−１組合せを注射の場合を実験の第２部として示すグラフ
図。
【図３Ｂ】 健康人の血漿インシュリン平均濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はＧＬＰ−１が２
．５ｎｍｏｌの場合、●−●線はグルカゴンが１ｍｇの場合、□−□線はグルコ
ース／ＧＬＰ−１組合せを注射の場合を実験の第２部として示すグラフ図。
【図３Ｃ】 II型糖尿病患者のＣ−ペプチド濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はＧＬＰ−１が２
．５ｎｍｏｌの場合、●−●線はグルカゴンが１ｍｇの場合、□−□線はグルコ
ース／ＧＬＰ−１組合せを注射の場合を実験の第２部として示すグラフ図。
【図３Ｄ】 健康人のＣ−ペプチド濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はＧＬＰ−１が２．５ｎｍ
ｏｌの場合、●−●線はグルカゴンが１ｍｇの場合、□−□線はグルコース／Ｇ
ＬＰ−１組合せを注射の場合を実験の第２部として示すグラフ図。
【図４Ａ】 II型糖尿病患者の血漿インシュリン平均濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はグルコ
ース／ＧＬＰ−１組合せを注射した場合、◆−◆線はＧＬＰ−１を皮下投与し、
ついでグルコース注射注射した場合を示すグラフ図。
【図４Ｂ】 健康人の血漿インシュリン平均濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はグルコース／Ｇ
ＬＰ−１組合せを注射した場合、◆−◆線はＧＬＰ−１を皮下投与し、ついでグ
ルコース注射注射した場合を示すグラフ図。
【図４Ｃ】 II型糖尿病患者のＣ−ペプチド濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はグルコース／Ｇ
ＬＰ−１組合せを注射した場合、◆−◆線はＧＬＰ−１を皮下投与し、ついでグ
ルコース注射注射した場合を示すグラフ図。
【図４Ｄ】 健康人のＣ−ペプチド濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はグルコース／ＧＬＰ−１
組合せを注射した場合、◆−◆線はＧＬＰ−１を皮下投与し、ついでグルコース
注射注射した場合を示すグラフ図。
【図５Ａ】 II型糖尿病患者の血漿インシュリン平均濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はグルコ
ース／ＧＬＰ−１組合せを注射した場合、◆−◆線はアルギニンを用いた高血糖
クランプを用いた場合を示すグラフ図。
【図５Ｂ】 健康人の血漿インシュリン平均濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はグルコース／Ｇ
ＬＰ−１組合せを注射した場合、◆−◆線はアルギニンを用いた高血糖クランプ
を用いた場合を示すグラフ図。
【図５Ｃ】 II型糖尿病患者のＣ−ペプチド濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はグルコース／Ｇ
ＬＰ−１組合せを注射した場合、◆−◆線はアルギニンを用いた高血糖クランプ
を用いた場合を示すグラフ図。
【図５Ｄ】 健康人のＣ−ペプチド濃度を示すもので、ｘ−ｘ線はグルコース／ＧＬＰ−１
組合せを注射した場合、◆−◆線はアルギニンを用いた高血糖クランプを用いた
場合を示すグラフ図。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１３年６月５日（２００１．６．５）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ， ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，Ｋ Ｒ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ， ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，Ｓ Ｉ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C085 HH20 KA36 KA40 KB78 KB82 KB95 LL15 4H045 AA30 BA09 CA40 DA30 EA27 EA28 EA30

Claims (17)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 個人におけるβ−細胞分泌能を評価する方法であって、グル
    コースおよびグルカゴン様ペプチド−1又は生物学的に活性な類似体を投与し；
    健康人の標準的応答との対比で該個人の応答を測定し、該個人がβ−細胞機能損
    傷を有するか否かを判定することを特徴とする方法。
  2. 【請求項２】 受容体結合化合物が、（ａ）グルカゴン様ペプチド−１のア
    ミノ酸配列からなるペプチド，および（ｂ）上記グルカゴン様ペプチド−１とは
    1以上の置換、欠失又は挿入によって異なるアミノ酸配列からなる変異体ペプチ
    ドの内から選択されるものである請求項１記載の方法。
  3. 【請求項３】 該受容体結合化合物がグルカゴン様ペプチド−１である請求
    項２記載の方法。
  4. 【請求項４】 該受容体結合化合物が、配列、Ｈｉｓ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇ
    ｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｔ
    ｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｐ
    ｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇ
    ｌｙ （ＳＥＱ． ＩＤ ＮＯ：３）を有するグルカゴン様ペプチド−１（７−
    ３７）である請求項２記載の方法。
  5. 【請求項５】 該受容体結合化合物が、配列、Ｈｉｓ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇ
    ｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｔ
    ｙｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ａｌａ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｐ
    ｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ａｒｇ （
    ＮＨ２） （ＳＥＱ． ＩＤ ＮＯ：４）を有するグルカゴン様ペプチド−１（
    ７−３６）アミドである請求項２記載の方法。
  6. 【請求項６】 該受容体結合化合物が、変異体ペプチドであって、それが該
    アミノ酸配列における置換、欠失および挿入の組合せにおいて上記グルカゴン様
    ペプチド−１のアミノ酸配列からの１０を超えるアミノ酸によって異なるもので
    はない請求項２記載の方法。
  7. 【請求項７】 該受容体結合化合物のin vivoでの半寿命を向上させる薬剤
    を更に含む請求項１記載の方法。
  8. 【請求項８】 該受容体結合化合物がポリヌクレオチドにより表されるもの
    である請求項１記載の方法。
  9. 【請求項９】 グルコース／ＧＬＰ−１又はその生物学的活性類似体の組合
    せを患者に同時に輸液する請求項１記載の方法。
  10. 【請求項１０】 患者に、最初にグルコースをついで後にＧＬＰ−１を輸液
    する請求項１記載の方法。
  11. 【請求項１１】 ＧＬＰ−１の投与が０．０５ｎｍｏｌないし１００ｎｍｏ
    ｌをボーラスで静脈内におこなうものである請求項１記載の方法。
  12. 【請求項１２】 投与が、１０ｎｍｏｌないし１０００ｎｍｏｌをボーラス
    で皮下におこなうものである請求項１記載の方法。
  13. 【請求項１３】 患者に、ＧＬＰ−１又はその生物学的活性類似体を０．１
    ｐｍｏｌ／ｋｇ／分ないし１０ ｐｍ／ｋｇ／分で静脈内に連続的に輸液する
    請求項１記載の方法。
  14. 【請求項１４】 投与が０．５ないし５０ ｐｍ／ｋｇ／分で皮下に連続的
    に輸液するものである請求項１記載の方法。
  15. 【請求項１５】 個人が、グルコース耐性阻害を有するものである請求項１
    記載の方法。
  16. 【請求項１６】 個人におけるβ−細胞のグルコースに対する応答を評価す
    る方法であって、グルコースおよびグルカゴン様ペプチド−1又は生物学的に活
    性な類似体を投与し；健康人の標準的応答との対比で該個人の応答を測定し、該
    個人がβ−細胞機能損傷を有するか否かを判定することを特徴とする方法。
  17. 【請求項１７】 個人が、グルコース耐性阻害を有するものである請求項１
    記載の方法。
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Families Citing this family (63)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7138486B2 (en) * 1986-05-05 2006-11-21 The General Hospital Corporation Insulinotropic hormone derivatives and uses thereof
US6849708B1 (en) * 1986-05-05 2005-02-01 The General Hospital Corporation Insulinotropic hormone and uses thereof
MXPA00012286A (es) * 1998-06-12 2002-10-17 Bionebraska Inc Peptide-1 similar a glucagon mejora la respuesta celular beta a glucosa en sujetos con tolerancia danada de glucosa.
US6344180B1 (en) * 1999-06-15 2002-02-05 Bionebraska, Inc. GLP-1 as a diagnostic test to determine β-cell function and the presence of the condition of IGT and type II diabetes
US6528486B1 (en) 1999-07-12 2003-03-04 Zealand Pharma A/S Peptide agonists of GLP-1 activity
AU2002224124A1 (en) 2000-12-01 2002-06-11 Takeda Chemical Industries Ltd. Method for producing preparation containing bioactive substance
WO2002047716A2 (en) * 2000-12-13 2002-06-20 Eli Lilly And Company Chronic treatment regimen using glucagon-like insulinotropic peptides
JP2002293799A (ja) * 2001-03-29 2002-10-09 Itoham Foods Inc 新規ペプチド及びそれを含有する消化管運動抑制剤
US7238671B2 (en) * 2001-10-18 2007-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Human glucagon-like-peptide-1 mimics and their use in the treatment of diabetes and related conditions
PL377687A1 (pl) * 2001-10-18 2006-02-06 Bristol-Myers Squibb Company Środki naśladujące ludzki peptyd glukagonopodobny typu 1 i ich zastosowanie w leczeniu cukrzycy i stanów związanych z cukrzycą
EP1463751B1 (en) 2001-12-21 2013-05-22 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
JP5685355B2 (ja) * 2002-07-04 2015-03-18 ジーランド ファーマ アクティーゼルスカブ Ｇｌｐ−１および糖尿病の処置方法
CA2500295A1 (en) 2002-10-02 2004-04-29 Zealand Pharma A/S Stabilized exendin-4 compounds
US8088734B2 (en) * 2003-01-21 2012-01-03 Unigene Laboratories Inc. Oral delivery of peptides
US7847063B2 (en) * 2003-03-28 2010-12-07 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co., Ltd. GLP-1 derivative
US7395319B2 (en) * 2003-12-31 2008-07-01 Checkfree Corporation System using contact list to identify network address for accessing electronic commerce application
JP2008536881A (ja) * 2005-04-21 2008-09-11 ガストロテック・ファルマ・アクティーゼルスカブ Ｇｌｐ−１分子と制吐剤との医薬製剤
US20110129522A1 (en) * 2008-07-21 2011-06-02 Transpharma Medical Ltd. Transdermal system for extended delivery of incretins and incretn mimetic peptides
RS56632B1 (sr) 2008-10-17 2018-03-30 Sanofi Aventis Deutschland Kombinacija insulina i glp-1-agonista
WO2010054326A2 (en) 2008-11-07 2010-05-14 The General Hospital Corporation C-terminal fragments of glucagon-like peptide-1 (glp-1)
CN102711804B (zh) 2009-11-13 2015-09-16 赛诺菲-安万特德国有限公司 包含glp-1激动剂和甲硫氨酸的药物组合物
AU2010317995B2 (en) 2009-11-13 2014-04-17 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Pharmaceutical composition comprising a GLP-1 agonist, an insulin, and methionine
EP2555791B1 (en) 2010-04-09 2017-11-01 Sinai Health System Methods for treating disorders of the gastrointestinal tract using a glp-1 agonist
CN107129538B (zh) 2010-04-27 2021-07-16 西兰制药公司 Glp-1受体激动剂和胃泌素的肽缀合物及其用途
JP6199186B2 (ja) 2010-08-30 2017-09-20 サノフィ−アベンティス・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング ２型糖尿病の治療用の医薬の製造のためのａｖｅ００１０の使用
WO2012061466A2 (en) 2010-11-02 2012-05-10 The General Hospital Corporation Methods for treating steatotic disease
WO2012121746A2 (en) 2011-03-09 2012-09-13 The General Hospital Corporation Imaging beta cell mass
US9821032B2 (en) 2011-05-13 2017-11-21 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin
WO2013006692A2 (en) 2011-07-06 2013-01-10 The General Hospital Corporation Methods of treatment using a pentapeptide derived from the c-terminus of glucagon-like peptide 1 (glp-1)
JP6367115B2 (ja) 2011-08-29 2018-08-01 サノフィ−アベンティス・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング ２型糖尿病患者の血糖コントロールに使用する組合せ医薬
TWI559929B (en) 2011-09-01 2016-12-01 Sanofi Aventis Deutschland Pharmaceutical composition for use in the treatment of a neurodegenerative disease
WO2013064669A1 (en) 2011-11-03 2013-05-10 Zealand Pharma A/S Glp-1 receptor agonist peptide gastrin conjugates
JP6224586B2 (ja) 2012-07-10 2017-11-01 武田薬品工業株式会社 注射用製剤
CN104662038B (zh) 2012-07-23 2018-11-06 西兰制药公司 胰高血糖素类似物
TWI608013B (zh) 2012-09-17 2017-12-11 西蘭製藥公司 升糖素類似物
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
BR112015014510A2 (pt) 2012-12-21 2017-11-21 Sanofi Sa agonistas de glp1/gip duais ou de glp1/gip/glucagon trigonais
TWI780236B (zh) 2013-02-04 2022-10-11 法商賽諾菲公司 胰島素類似物及/或胰島素衍生物之穩定化醫藥調配物
US20140278121A1 (en) * 2013-03-13 2014-09-18 Robust for Life, Inc. Systems and methods for network-based calculation and reporting of metabolic risk
US9988429B2 (en) 2013-10-17 2018-06-05 Zealand Pharma A/S Glucagon analogues
CN105745222A (zh) 2013-10-17 2016-07-06 西兰制药公司 酰化胰高血糖素类似物
TWI670281B (zh) 2013-11-06 2019-09-01 西蘭製藥公司 Ｇｉｐ－ｇｌｐ－１雙重促效劑化合物及方法
CA2929107C (en) 2013-11-06 2023-09-26 Zealand Pharma A/S Glucagon-glp-1-gip triple agonist compounds
WO2015086729A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
TW201609795A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 作為雙重ｇｌｐ－１／ｇｉｐ受體促效劑的艾塞那肽－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）胜肽類似物
EP3080149A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
WO2015086730A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Non-acylated exendin-4 peptide analogues
CN112957455A (zh) 2014-01-09 2021-06-15 赛诺菲 胰岛素类似物和/或胰岛素衍生物的稳定化药物制剂
MX2016008978A (es) 2014-01-09 2016-10-04 Sanofi Sa Formulaciones farmaceuticas de analogos de insulina y/o derivados de insulina estabilizadas y que estan libres de glicerol.
CN105899190B (zh) 2014-01-09 2022-06-14 赛诺菲 门冬胰岛素的稳定化药物制剂
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
ES2883345T3 (es) 2014-10-29 2021-12-07 Zealand Pharma As Compuestos agonistas del GIP y métodos
MX2017007699A (es) 2014-12-12 2017-09-18 Sanofi Aventis Deutschland Formulacion de proporcion fija de insulina glargina/lixisenatida.
TWI748945B (zh) 2015-03-13 2021-12-11 德商賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 第２型糖尿病病患治療
TW201705975A (zh) 2015-03-18 2017-02-16 賽諾菲阿凡提斯德意志有限公司 第２型糖尿病病患之治療
JP6989385B2 (ja) 2015-04-16 2022-01-05 ジーランド ファーマ アクティーゼルスカブ アシル化グルカゴン類似体
US20160335350A1 (en) * 2015-05-13 2016-11-17 Vinay BAWRI Computer implemented method for ranking, searching and managing contacts in electronic device
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
AR105284A1 (es) 2015-07-10 2017-09-20 Sanofi Sa Derivados de exendina-4 como agonistas peptídicos duales específicos de los receptores de glp-1 / glucagón
BR112019010624A2 (pt) 2016-12-09 2019-10-22 Zealand Pharma As agonistas duplos de glp-1/glp-2 acilados e composição

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UA65549C2 (uk) 1996-11-05 2004-04-15 Елі Ліллі Енд Компані Спосіб регулювання ожиріння шляхом периферійного введення аналогів та похідних glp-1 (варіанти) та фармацевтична композиція
MXPA00012286A (es) 1998-06-12 2002-10-17 Bionebraska Inc Peptide-1 similar a glucagon mejora la respuesta celular beta a glucosa en sujetos con tolerancia danada de glucosa.
US6344180B1 (en) 1999-06-15 2002-02-05 Bionebraska, Inc. GLP-1 as a diagnostic test to determine β-cell function and the presence of the condition of IGT and type II diabetes

Also Published As

Publication number Publication date
AU5489400A (en) 2001-01-02
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