JP2003274923A - 単球捕捉フィルターおよび単球分離培養装置、並びに樹状細胞回収方法 - Google Patents
単球捕捉フィルターおよび単球分離培養装置、並びに樹状細胞回収方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 簡単な操作で末梢血などから単球を効率良く
分離することができる単球捕捉フィルターおよび無菌的
な操作で単球を分離し、培養することができる単球分離
培養装置、並びに品質の良い樹状細胞を効率良く回収す
ることができる樹状細胞回収方法を提供することであ
る。 【解決手段】 単球分離培養装置１００は、ハウジング
１２とハウジング１２内に設けられ末梢血などの単球を
含有する被処理液から単球を選択的に捕捉できる単球捕
捉フィルター１１とからなる単球分離器具１と、単球分
離器具１に連通する流入ライン２１および排出ライン３
１と、流入ライン２１に連通する添加ライン２２とを備
えている。単球分離フィルター１１は、平均孔径が６〜
８μｍであり、かつ肉厚（ｍｍ）と平均孔径（ｍｍ）と
の比が１００〜２００である。
分離することができる単球捕捉フィルターおよび無菌的
な操作で単球を分離し、培養することができる単球分離
培養装置、並びに品質の良い樹状細胞を効率良く回収す
ることができる樹状細胞回収方法を提供することであ
る。 【解決手段】 単球分離培養装置１００は、ハウジング
１２とハウジング１２内に設けられ末梢血などの単球を
含有する被処理液から単球を選択的に捕捉できる単球捕
捉フィルター１１とからなる単球分離器具１と、単球分
離器具１に連通する流入ライン２１および排出ライン３
１と、流入ライン２１に連通する添加ライン２２とを備
えている。単球分離フィルター１１は、平均孔径が６〜
８μｍであり、かつ肉厚（ｍｍ）と平均孔径（ｍｍ）と
の比が１００〜２００である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、末梢血などから単
球を選択的に分離できる単球捕捉フィルターおよびこれ
を用いた単球分離培養装置、並びに樹状細胞回収方法に
関するものである。
球を選択的に分離できる単球捕捉フィルターおよびこれ
を用いた単球分離培養装置、並びに樹状細胞回収方法に
関するものである。
【０００２】
【従来の技術】近年、細胞機能の研究や、細胞の分離、
培養技術の進歩によって、種々の疾患に対して細胞を移
植する治療法が試みられている。このような治療では、
血液や組織液など種々の細胞が混在した細胞懸濁液から
目的細胞を分離し、培養等の操作の後、患者へ細胞を移
植することが行われている。
培養技術の進歩によって、種々の疾患に対して細胞を移
植する治療法が試みられている。このような治療では、
血液や組織液など種々の細胞が混在した細胞懸濁液から
目的細胞を分離し、培養等の操作の後、患者へ細胞を移
植することが行われている。
【０００３】樹状細胞は、強力な抗原提示細胞としての
機能が最近明らかになり、細胞治療の一つとして研究が
進められている。この治療は、樹状細胞に患者の癌細胞
あるいは癌特異的抗原を提示する方法、樹状細胞に抗原
遺伝子を導入する方法、樹状細胞を腫瘍細胞と細胞融合
させる方法などの処理を行い、処理された樹状細胞を患
者に戻すことで、患者の持つ免疫機能を強化させる一種
の免疫療法であり、癌ワクチンとしての利用が期待され
ている。
機能が最近明らかになり、細胞治療の一つとして研究が
進められている。この治療は、樹状細胞に患者の癌細胞
あるいは癌特異的抗原を提示する方法、樹状細胞に抗原
遺伝子を導入する方法、樹状細胞を腫瘍細胞と細胞融合
させる方法などの処理を行い、処理された樹状細胞を患
者に戻すことで、患者の持つ免疫機能を強化させる一種
の免疫療法であり、癌ワクチンとしての利用が期待され
ている。
【０００４】この治療のために必要な樹状細胞は、骨
髄、末梢血、臍帯血に含まれるＣＤ３４陽性細胞から培
養によって分化誘導させる方法、末梢血や臍帯血に含ま
れる未熟な樹状細胞を採取する方法、末梢血単核球分画
から培養によって分化誘導させる方法などによって得ら
れ、特に末梢血単球を利用する方法が臨床応用に広く用
いられている。
髄、末梢血、臍帯血に含まれるＣＤ３４陽性細胞から培
養によって分化誘導させる方法、末梢血や臍帯血に含ま
れる未熟な樹状細胞を採取する方法、末梢血単核球分画
から培養によって分化誘導させる方法などによって得ら
れ、特に末梢血単球を利用する方法が臨床応用に広く用
いられている。
【０００５】末梢血単球を利用する方法では、最初にア
フェレーシスや比重遠心法によって末梢血中の単球を分
離し、さらに比重遠心法や非付着性細胞の除去を行うこ
とによって単球を分離している。このようにして得られ
た単球は、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦなどのサイトカイン
や血清を添加した培養液中で培養される。
フェレーシスや比重遠心法によって末梢血中の単球を分
離し、さらに比重遠心法や非付着性細胞の除去を行うこ
とによって単球を分離している。このようにして得られ
た単球は、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦなどのサイトカイン
や血清を添加した培養液中で培養される。
【０００６】このような操作は、一般的な培養用の理化
学用具を用いて行われているため、分離操作中に何回も
分離用遠沈管に移し替える作業が必要であるので、操作
が非常に煩雑である。また、遠心操作を繰り返すので、
細胞へのダメージが大きく、細胞のロスの危険性が高い
だけでなく、また、処理に時間を要する。さらに、分離
操作と培養操作は、開放操作で行われるために細菌汚染
の危険性が高い。
学用具を用いて行われているため、分離操作中に何回も
分離用遠沈管に移し替える作業が必要であるので、操作
が非常に煩雑である。また、遠心操作を繰り返すので、
細胞へのダメージが大きく、細胞のロスの危険性が高い
だけでなく、また、処理に時間を要する。さらに、分離
操作と培養操作は、開放操作で行われるために細菌汚染
の危険性が高い。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、簡単
な操作で、末梢血などから単球を効率良く分離すること
ができる単球捕捉フィルターを提供することである。ま
た、本発明の他の目的は、無菌的な操作で、末梢血など
から単球を分離するとともに、培養することができる単
球分離培養装置を提供することである。本発明の他の目
的は、品質の良い樹状細胞を効率良く回収することがで
きる樹状細胞回収方法を提供することである。
な操作で、末梢血などから単球を効率良く分離すること
ができる単球捕捉フィルターを提供することである。ま
た、本発明の他の目的は、無菌的な操作で、末梢血など
から単球を分離するとともに、培養することができる単
球分離培養装置を提供することである。本発明の他の目
的は、品質の良い樹状細胞を効率良く回収することがで
きる樹状細胞回収方法を提供することである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】このような目的は、下記
（１）〜（１２）の本発明により達成される。
（１）〜（１２）の本発明により達成される。
【０００９】（１） 単球を含有する被処理液から単球
を選択的に捕捉する単球捕捉フィルターであって、前記
単球分離フィルターは、平均孔径が６〜８μｍであり、
かつ肉厚（ｍｍ）と平均孔径（ｍｍ）との比が１００〜
２００であることを特徴とする単球捕捉フィルター。
を選択的に捕捉する単球捕捉フィルターであって、前記
単球分離フィルターは、平均孔径が６〜８μｍであり、
かつ肉厚（ｍｍ）と平均孔径（ｍｍ）との比が１００〜
２００であることを特徴とする単球捕捉フィルター。
【００１０】（２） 前記肉厚（ｍｍ）と平均孔径（ｍ
ｍ）との比が１２０〜１５０である上記（１）に記載の
単球捕捉フィルター。 （３） 前記単球を含有する被処理液は、末梢血である
上記（１）または（２）に記載の単球捕捉フィルター。 （４） 前記単球捕捉フィルターは、連通孔を有するス
ポンジ状多孔質体からなる上記（１）ないし（３）のい
ずれかに記載の単球捕捉フィルター。
ｍ）との比が１２０〜１５０である上記（１）に記載の
単球捕捉フィルター。 （３） 前記単球を含有する被処理液は、末梢血である
上記（１）または（２）に記載の単球捕捉フィルター。 （４） 前記単球捕捉フィルターは、連通孔を有するス
ポンジ状多孔質体からなる上記（１）ないし（３）のい
ずれかに記載の単球捕捉フィルター。
【００１１】（５） 単球を含有する被処理液から単球
を選択的に分離するとともに、分離された単球を培養す
る単球分離培養装置であって、ガス透過性がある材質か
らなり、流入口および流出口を有するハウジングと、該
ハウジング内を流入室と流出室とに区分するように設け
られた単球捕捉フィルターとからなる単球分離器具と、
該単球分離器具の流入口に連通する被処理液の流入ライ
ンと、該流入ラインに連通する培養液の添加ラインと、
該単球分離器具の流出口に連通する排出ラインとを備え
ることを特徴とする単球分離培養装置。
を選択的に分離するとともに、分離された単球を培養す
る単球分離培養装置であって、ガス透過性がある材質か
らなり、流入口および流出口を有するハウジングと、該
ハウジング内を流入室と流出室とに区分するように設け
られた単球捕捉フィルターとからなる単球分離器具と、
該単球分離器具の流入口に連通する被処理液の流入ライ
ンと、該流入ラインに連通する培養液の添加ラインと、
該単球分離器具の流出口に連通する排出ラインとを備え
ることを特徴とする単球分離培養装置。
【００１２】（６） 前記排出ラインは、末端に回収バ
ッグを有し、前記単球分離器具を通過した被処理液を回
収する回収ラインと、使用済みの培養液を排出する廃液
ラインとに分岐している上記（５）に記載の単球分離培
養装置。 （７） 前記単球捕捉フィルターは、上記（１）ないし
（４）のいずれかに記載の単球捕捉フィルターである上
記（５）または（６）に記載の単球分離培養装置。
ッグを有し、前記単球分離器具を通過した被処理液を回
収する回収ラインと、使用済みの培養液を排出する廃液
ラインとに分岐している上記（５）に記載の単球分離培
養装置。 （７） 前記単球捕捉フィルターは、上記（１）ないし
（４）のいずれかに記載の単球捕捉フィルターである上
記（５）または（６）に記載の単球分離培養装置。
【００１３】（８） ガス透過性がある材質からなり、
流入口および流出口を有するハウジングと、該ハウジン
グ内を流入室と流出室とに区分するように設けられた単
球捕捉フィルターとからなる単球分離器具を用いて、単
球を含有する被処理液から単球を選択的に分離するとと
もに、分離された単球から得られる樹状細胞を回収する
樹状細胞回収方法であって、前記単球を含有する被処理
液を前記単球分離器具の流入口から導入して、前記単球
捕捉フィルターにより単球を捕捉し、その他の被処理液
を前記単球分離器具の流出口から排出する工程と、培養
液を前記単球分離器具の流入口から導入して、前記分離
された単球から樹状細胞を分化誘導する工程と、抗原溶
液を前記単球分離器具の流入口から導入して、前記樹状
細胞に抗原を提示する工程と、前記単球分離器具の流入
口から前記抗原を提示された樹状細胞を回収する工程と
を含むことを特徴とする樹状細胞回収方法。
流入口および流出口を有するハウジングと、該ハウジン
グ内を流入室と流出室とに区分するように設けられた単
球捕捉フィルターとからなる単球分離器具を用いて、単
球を含有する被処理液から単球を選択的に分離するとと
もに、分離された単球から得られる樹状細胞を回収する
樹状細胞回収方法であって、前記単球を含有する被処理
液を前記単球分離器具の流入口から導入して、前記単球
捕捉フィルターにより単球を捕捉し、その他の被処理液
を前記単球分離器具の流出口から排出する工程と、培養
液を前記単球分離器具の流入口から導入して、前記分離
された単球から樹状細胞を分化誘導する工程と、抗原溶
液を前記単球分離器具の流入口から導入して、前記樹状
細胞に抗原を提示する工程と、前記単球分離器具の流入
口から前記抗原を提示された樹状細胞を回収する工程と
を含むことを特徴とする樹状細胞回収方法。
【００１４】（９） 前記単球から樹状細胞を分化誘導
する工程は、一定時間経過後に、前記単球分離器具の流
出口から培養液を排出し、再び新しい培養液を前記単球
分離器具の流入口から導入する操作を複数回行うもので
ある上記（８）に記載の樹状細胞回収方法。
する工程は、一定時間経過後に、前記単球分離器具の流
出口から培養液を排出し、再び新しい培養液を前記単球
分離器具の流入口から導入する操作を複数回行うもので
ある上記（８）に記載の樹状細胞回収方法。
【００１５】（１０） 前記抗原を提示された樹状細胞
を回収する工程は、前記単球分離器具の流出口から培養
液を排出した後に、置換液を前記単球分離器具の流入口
から導入して、培養液を流出口から排出し、次いで、回
収液を前記単球分離器具の流出口から導入して行う上記
（８）または（９）に記載の樹状細胞回収方法。
を回収する工程は、前記単球分離器具の流出口から培養
液を排出した後に、置換液を前記単球分離器具の流入口
から導入して、培養液を流出口から排出し、次いで、回
収液を前記単球分離器具の流出口から導入して行う上記
（８）または（９）に記載の樹状細胞回収方法。
【００１６】（１１） 前記培養液は、培地およびサイ
トカインを含有するものである上記（８）ないし（１
０）に記載の樹状細胞回収方法。 （１２） 前記単球捕捉フィルターは、上記（８）ない
し（１０）のいずれかに記載の単球捕捉フィルターであ
る上記（５）または（６）に記載の樹状細胞回収方法。
トカインを含有するものである上記（８）ないし（１
０）に記載の樹状細胞回収方法。 （１２） 前記単球捕捉フィルターは、上記（８）ない
し（１０）のいずれかに記載の単球捕捉フィルターであ
る上記（５）または（６）に記載の樹状細胞回収方法。
【００１７】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施例に係る単球
捕捉フィルターおよび単球分離培養装置、並びに樹状細
胞回収方法を詳細に説明する。
捕捉フィルターおよび単球分離培養装置、並びに樹状細
胞回収方法を詳細に説明する。
【００１８】最初に、本発明の実施例に係る単球捕捉フ
ィルターについて説明する。図１は、本発明の実施例に
係る単球捕捉フィルターを用いる単球分離器具の平面図
であり、図２は、図１の断面図である。
ィルターについて説明する。図１は、本発明の実施例に
係る単球捕捉フィルターを用いる単球分離器具の平面図
であり、図２は、図１の断面図である。
【００１９】図１および図２に示すように、本発明の実
施例に係る単球捕捉フィルター１１は、単球を含有する
被処理液（例えば、末梢血、臍帯血など）から単球を選
択的に捕捉できる濾材であり、ハウジング１２内を流入
室１５と流出室１６とに区分するように設けられてい
る。ハウジング１２は、ガス透過性がある材質からな
り、流入口１３および流出口１４を有するものである。
本実施例において、単球分離器具１は、ハウジング１２
と単球捕捉フィルター１１とを備えるものであり、流入
口１３からハウジング１２内に入った被処理液が流入室
１５を通って、必ず単球捕捉フィルター１１を通過し
て、流出室１６に流れ、流出口１４から出るように構成
されている。
施例に係る単球捕捉フィルター１１は、単球を含有する
被処理液（例えば、末梢血、臍帯血など）から単球を選
択的に捕捉できる濾材であり、ハウジング１２内を流入
室１５と流出室１６とに区分するように設けられてい
る。ハウジング１２は、ガス透過性がある材質からな
り、流入口１３および流出口１４を有するものである。
本実施例において、単球分離器具１は、ハウジング１２
と単球捕捉フィルター１１とを備えるものであり、流入
口１３からハウジング１２内に入った被処理液が流入室
１５を通って、必ず単球捕捉フィルター１１を通過し
て、流出室１６に流れ、流出口１４から出るように構成
されている。
【００２０】ここで、本発明における被処理液とは、末
梢血、臍帯血または骨髄液、これらを比重遠心分離する
ことにより得られた単球浮遊液、バフィーコートなどの
単球を含有する生体由来の液状物である。ハウジング１
２は、２枚のシートからなり、単球捕捉フィルター１１
によって捕捉された単球を培養するのにあったて支障の
ない程度のガス透過性を有する熱可塑性樹脂からなる。
具体的には、軟質ポリ塩化ビニル、ポリオレフィン、エ
チレン−酢酸ビニル共重合体などが挙げられる。
梢血、臍帯血または骨髄液、これらを比重遠心分離する
ことにより得られた単球浮遊液、バフィーコートなどの
単球を含有する生体由来の液状物である。ハウジング１
２は、２枚のシートからなり、単球捕捉フィルター１１
によって捕捉された単球を培養するのにあったて支障の
ない程度のガス透過性を有する熱可塑性樹脂からなる。
具体的には、軟質ポリ塩化ビニル、ポリオレフィン、エ
チレン−酢酸ビニル共重合体などが挙げられる。
【００２１】また、流入口１３および流出口１４は、チ
ューブ形状であり、ハウジング１２を構成する２枚のシ
ートの間に、単球捕捉フィルター１１と共に挟んだ状態
で高周波融着や熱シールすることによって、ハウジング
１２に固定されるため、ハウジング１２とのシール性に
優れる材料からなる。具体的には、ハウジング１２と同
一の材料か、融点が近い材料である。
ューブ形状であり、ハウジング１２を構成する２枚のシ
ートの間に、単球捕捉フィルター１１と共に挟んだ状態
で高周波融着や熱シールすることによって、ハウジング
１２に固定されるため、ハウジング１２とのシール性に
優れる材料からなる。具体的には、ハウジング１２と同
一の材料か、融点が近い材料である。
【００２２】単球捕捉フィルター１１は、肉厚（ｍｍ）
と平均孔径（ｍｍ）との比（肉厚／平均孔径）が１００
〜２００の範囲になるものであり、１２０〜１５０の範
囲であることがより好適である。肉厚（ｍｍ）と平均孔
径（ｍｍ）との比は、この範囲より小さくなると単球の
捕捉率の低下を招く。また、この範囲より大きくなる
と、単球以外の細胞の捕捉率が高くなり、余分な細胞成
分が多くなる。
と平均孔径（ｍｍ）との比（肉厚／平均孔径）が１００
〜２００の範囲になるものであり、１２０〜１５０の範
囲であることがより好適である。肉厚（ｍｍ）と平均孔
径（ｍｍ）との比は、この範囲より小さくなると単球の
捕捉率の低下を招く。また、この範囲より大きくなる
と、単球以外の細胞の捕捉率が高くなり、余分な細胞成
分が多くなる。
【００２３】単球捕捉フィルター１１の平均孔径は、直
径５５ｍｍの円盤状に打抜いたフィルターをパームポロ
メーターで測定したときの値である。また、単球捕捉フ
ィルター１１は、総肉厚と平均孔径との比が上記の範囲
に入るものであれば、単層（１枚）でも複数層（複数枚
を重ねたもの）からなるものでもよい。単球捕捉フィル
ター１１は、単球以外の細胞は吸着しない材料で、細胞
培養用担体として使用可能なものであればよい。また、
液を通過させる観点から、親水性、保水性を有するもの
が好ましい。このような材料としては、天然樹脂、合成
樹脂、天然繊維、合成繊維などが挙げられる。具体的に
は、ポリウレタン、ポリビニルアルコールなどの合成樹
脂からなる連通孔を有するスポンジ状多孔質体や、ポリ
エステル、ナイロン、ポリオレフィンなどの合成樹脂か
らなる織布または不織布からなる繊維塊である。
径５５ｍｍの円盤状に打抜いたフィルターをパームポロ
メーターで測定したときの値である。また、単球捕捉フ
ィルター１１は、総肉厚と平均孔径との比が上記の範囲
に入るものであれば、単層（１枚）でも複数層（複数枚
を重ねたもの）からなるものでもよい。単球捕捉フィル
ター１１は、単球以外の細胞は吸着しない材料で、細胞
培養用担体として使用可能なものであればよい。また、
液を通過させる観点から、親水性、保水性を有するもの
が好ましい。このような材料としては、天然樹脂、合成
樹脂、天然繊維、合成繊維などが挙げられる。具体的に
は、ポリウレタン、ポリビニルアルコールなどの合成樹
脂からなる連通孔を有するスポンジ状多孔質体や、ポリ
エステル、ナイロン、ポリオレフィンなどの合成樹脂か
らなる織布または不織布からなる繊維塊である。
【００２４】次に、本発明の実施例に係る単球分離培養
装置について説明する。図３は、本発明の実施例に係る
単球分離培養装置を説明するための平面図である。ま
た、図４は、本発明の他の実施例に係る単球分離培養装
置を説明するための平面図である。
装置について説明する。図３は、本発明の実施例に係る
単球分離培養装置を説明するための平面図である。ま
た、図４は、本発明の他の実施例に係る単球分離培養装
置を説明するための平面図である。
【００２５】図３に示すように、本発明の実施例に係る
単球分離培養装置１００は、単球を含有する被処理液か
ら単球を選択的に分離するとともに、分離された単球を
培養するためのフィルターを備えるバッグシステムであ
り、上述した単球分離器具１と、単球分離器具１の流入
口１３に連通する被処理液の流入ライン２１と、流入ラ
イン２１に連通する培養液の添加ライン２２と、単球分
離器具１の流出口１４に連通する排出ライン３１とを備
える。
単球分離培養装置１００は、単球を含有する被処理液か
ら単球を選択的に分離するとともに、分離された単球を
培養するためのフィルターを備えるバッグシステムであ
り、上述した単球分離器具１と、単球分離器具１の流入
口１３に連通する被処理液の流入ライン２１と、流入ラ
イン２１に連通する培養液の添加ライン２２と、単球分
離器具１の流出口１４に連通する排出ライン３１とを備
える。
【００２６】流入ライン２１は、末端に単球を含有する
被処理液（例えば、末梢血、臍帯血などの未処理液）を
収容するための処理液バッグ２を備えている。この処理
液バッグ２には、被処理液をバッグ内に収容する採液ラ
イン２３が設けられていることが好ましい。
被処理液（例えば、末梢血、臍帯血などの未処理液）を
収容するための処理液バッグ２を備えている。この処理
液バッグ２には、被処理液をバッグ内に収容する採液ラ
イン２３が設けられていることが好ましい。
【００２７】被処理液が末梢血である場合には、処理液
バッグ２として公知の採血バッグを用いることができ、
この場合には、採液ライン２３は末端に採血針（図示せ
ず）を有する採血チューブを用いられる。また、被処理
液が臍帯血や骨髄液である場合には、処理液バッグ２と
して凍結保存に適した材料からなる容器を用いることが
できる。
バッグ２として公知の採血バッグを用いることができ、
この場合には、採液ライン２３は末端に採血針（図示せ
ず）を有する採血チューブを用いられる。また、被処理
液が臍帯血や骨髄液である場合には、処理液バッグ２と
して凍結保存に適した材料からなる容器を用いることが
できる。
【００２８】添加ライン２２は、添加ポート２２２と、
この添加ポート２２２の先端に設けられたコネクタ２２
１を備えている。このコネクタ２２１は、洗浄液が入っ
たシリンジや容器（図示せず）を接続するために設けら
れている。
この添加ポート２２２の先端に設けられたコネクタ２２
１を備えている。このコネクタ２２１は、洗浄液が入っ
たシリンジや容器（図示せず）を接続するために設けら
れている。
【００２９】排出ライン３１は、末端に廃液バッグ３４
を有し、単球分離器具１を通過した被処理液を回収する
ための回収ライン３２と、使用済みの培養液を排出する
ための廃液ライン３３とに分岐している。図３に示す実
施例では、廃液ライン３３の末端に廃液バッグ３４が設
けられている。
を有し、単球分離器具１を通過した被処理液を回収する
ための回収ライン３２と、使用済みの培養液を排出する
ための廃液ライン３３とに分岐している。図３に示す実
施例では、廃液ライン３３の末端に廃液バッグ３４が設
けられている。
【００３０】図４に示すように、本発明の他の実施例に
係る単球分離培養装置１１０においては、廃液ライン３
３が、廃液ポート３３２と、この廃液ポート３３２の先
端に設けられたコネクタ３３１とから構成されている。
このコネクタ３３１には、廃液を収容するためのシリン
ジ、バッグ、容器など（図示せず）を接続することがで
きる。このように、単球分離培養装置１１０は、図３に
示す単球分離培養装置１００と廃液ライン３３の構成が
異なる。なお、この他の構成については、図３に示す単
球分離培養装置１００と同様であるため説明を省略す
る。
係る単球分離培養装置１１０においては、廃液ライン３
３が、廃液ポート３３２と、この廃液ポート３３２の先
端に設けられたコネクタ３３１とから構成されている。
このコネクタ３３１には、廃液を収容するためのシリン
ジ、バッグ、容器など（図示せず）を接続することがで
きる。このように、単球分離培養装置１１０は、図３に
示す単球分離培養装置１００と廃液ライン３３の構成が
異なる。なお、この他の構成については、図３に示す単
球分離培養装置１００と同様であるため説明を省略す
る。
【００３１】処理液バッグ２、回収バッグ３および廃液
バッグ３４は、軟質ポリ塩化ビニルのような熱可塑性樹
脂材料からなる２枚のシートを高周波融着や熱シールに
より融着して作製された公知の血液バッグを用いられ
る。
バッグ３４は、軟質ポリ塩化ビニルのような熱可塑性樹
脂材料からなる２枚のシートを高周波融着や熱シールに
より融着して作製された公知の血液バッグを用いられ
る。
【００３２】図示した処理液バッグ２、回収バッグ３お
よび廃液バッグ３４は、それぞれ２つの排出口２５，３
５，３４５を有するものであるが、これに限らず、排出
口がなくても、排出口が１つまたは３つ以上あってもよ
い。これらの排出口は、バッグ内の液体をサンプリング
したり、バッグ内の液体を別のバッグなどに分離するた
めに設けられている。
よび廃液バッグ３４は、それぞれ２つの排出口２５，３
５，３４５を有するものであるが、これに限らず、排出
口がなくても、排出口が１つまたは３つ以上あってもよ
い。これらの排出口は、バッグ内の液体をサンプリング
したり、バッグ内の液体を別のバッグなどに分離するた
めに設けられている。
【００３３】図３および図４における流入ライン２１、
排出ライン３１および回収ライン３２と、図３における
廃液ライン３３は、軟質ポリ塩化ビニルのような熱可塑
性樹脂材料からなる可撓性のチューブで構成されてい
る。これらの各ラインには、必要に応じて、ローラーク
レンメ、ワンタッチクレンメなどの開閉手段を取り付け
ることができる。
排出ライン３１および回収ライン３２と、図３における
廃液ライン３３は、軟質ポリ塩化ビニルのような熱可塑
性樹脂材料からなる可撓性のチューブで構成されてい
る。これらの各ラインには、必要に応じて、ローラーク
レンメ、ワンタッチクレンメなどの開閉手段を取り付け
ることができる。
【００３４】次に、本発明の実施例に係る単球分離培養
装置の使用方法、すなわち、本発明の実施例に係る樹状
細胞回収方法について説明する。
装置の使用方法、すなわち、本発明の実施例に係る樹状
細胞回収方法について説明する。
【００３５】本発明の実施例に係る樹状細胞回収方法
は、上述した単球分離器具を用いて、単球を含有する被
処理液から単球を選択的に分離するとともに、分離され
た単球から得られる樹状細胞を回収する方法であり、以
下の（１）〜（４）の工程を含むものである。
は、上述した単球分離器具を用いて、単球を含有する被
処理液から単球を選択的に分離するとともに、分離され
た単球から得られる樹状細胞を回収する方法であり、以
下の（１）〜（４）の工程を含むものである。
【００３６】（１）単球を含有する被処理液（例えば、
末梢血）を単球分離器具１の流入口１３から導入して、
単球捕捉フィルター１１により単球を捕捉し、その他の
被処理液（実質的に単球を除く細胞成分を含む末梢血）
を単球分離器具１の流出口１４から排出する工程
末梢血）を単球分離器具１の流入口１３から導入して、
単球捕捉フィルター１１により単球を捕捉し、その他の
被処理液（実質的に単球を除く細胞成分を含む末梢血）
を単球分離器具１の流出口１４から排出する工程
【００３７】（２）培養液（培地およびサイトカインを
含有する溶液）を単球分離器具１の流入口１３から導入
して、分離された単球から樹状細胞を分化誘導する工
程、
含有する溶液）を単球分離器具１の流入口１３から導入
して、分離された単球から樹状細胞を分化誘導する工
程、
【００３８】（３）抗原溶液（抗原分子およびサイトカ
インを含有する溶液）を単球分離器具１の流入口１３か
ら導入して、樹状細胞に抗原を提示する工程
インを含有する溶液）を単球分離器具１の流入口１３か
ら導入して、樹状細胞に抗原を提示する工程
【００３９】（４）単球分離器具１の流入口１３から抗
原を提示された樹状細胞を回収する工程
原を提示された樹状細胞を回収する工程
【００４０】以下、図３に示す単球分離培養装置１００
を用いて、単球を含有する被処理液として末梢血（全
血）を用いる場合を例にして、上記各工程を具体的に説
明する。
を用いて、単球を含有する被処理液として末梢血（全
血）を用いる場合を例にして、上記各工程を具体的に説
明する。
【００４１】上記（１）の工程は、全血から単球を分離
するための工程である。この工程では、予め処理液バッ
グ２に収容され、抗凝固剤と混合された全血を、流入ラ
イン２１を通して流入口１３から単球分離器具１内に導
入し、単球捕捉フィルター１１に通して実質的に単球の
みを選択的に捕捉させることにより分離し、残りの血液
成分（赤血球、血小板、リンパ球および顆粒球）を単球
分離器具１の流出口１４から排出させることにより、全
血から実質的に単球だけが単球分離器具１内に分離さ
れ、残りの血液成分は排出ライン３１および回収ライン
３２を介して回収バッグ３内に回収される。なお、この
ような操作に先立って、プライミング操作を行うことが
好ましい。
するための工程である。この工程では、予め処理液バッ
グ２に収容され、抗凝固剤と混合された全血を、流入ラ
イン２１を通して流入口１３から単球分離器具１内に導
入し、単球捕捉フィルター１１に通して実質的に単球の
みを選択的に捕捉させることにより分離し、残りの血液
成分（赤血球、血小板、リンパ球および顆粒球）を単球
分離器具１の流出口１４から排出させることにより、全
血から実質的に単球だけが単球分離器具１内に分離さ
れ、残りの血液成分は排出ライン３１および回収ライン
３２を介して回収バッグ３内に回収される。なお、この
ような操作に先立って、プライミング操作を行うことが
好ましい。
【００４２】この工程においては、残りの血液成分を確
実に排出させるために、単球捕捉フィルター１１に単球
を捕捉させた状態で洗浄液を通して単球捕捉フィルター
１１を洗浄することが好ましい。具体的には、予め洗浄
液が充填されたシリンジ（図示せず）を添加ライン２２
のコネクタ２２１に接続し、洗浄液を添加ポート２２２
から流入口１３を介して単球分離器具１内に流入し、単
球捕捉フィルター１１に通過させて、流出口１４から排
出ライン３１および回収ライン３２を介して回収バッグ
３内に排出することにより、単球分離器具１の流出室１
６などに残留していた残りの血液成分が確実に洗い流さ
れる。洗浄液としては、ＦＣＳ、ヒト血漿、ヒトアルブ
ミン等を加えた生理食塩水や、デキストラン４０、ＰＢ
Ｓなどを用いることができる。
実に排出させるために、単球捕捉フィルター１１に単球
を捕捉させた状態で洗浄液を通して単球捕捉フィルター
１１を洗浄することが好ましい。具体的には、予め洗浄
液が充填されたシリンジ（図示せず）を添加ライン２２
のコネクタ２２１に接続し、洗浄液を添加ポート２２２
から流入口１３を介して単球分離器具１内に流入し、単
球捕捉フィルター１１に通過させて、流出口１４から排
出ライン３１および回収ライン３２を介して回収バッグ
３内に排出することにより、単球分離器具１の流出室１
６などに残留していた残りの血液成分が確実に洗い流さ
れる。洗浄液としては、ＦＣＳ、ヒト血漿、ヒトアルブ
ミン等を加えた生理食塩水や、デキストラン４０、ＰＢ
Ｓなどを用いることができる。
【００４３】このような（１）の工程が終了後に、末梢
血（全血）が入っていた処理液バッグ２および残りの血
液成分が回収された回収バッグ３は、不要となるので、
処理液バッグ２は流入ライン２１の所定位置でチューブ
シーラーを用いてシールして取り外し、回収バッグ３は
回収ライン３２の所定位置でチューブシーラーを用いて
シールして取り外す。
血（全血）が入っていた処理液バッグ２および残りの血
液成分が回収された回収バッグ３は、不要となるので、
処理液バッグ２は流入ライン２１の所定位置でチューブ
シーラーを用いてシールして取り外し、回収バッグ３は
回収ライン３２の所定位置でチューブシーラーを用いて
シールして取り外す。
【００４４】上記（２）の工程は、単球から樹状細胞を
分化誘導するための工程である。この工程では、単球分
離器具１の流入口１３を開放状態、流出口１４を閉塞状
態とし、予め培地およびサイトカインを含有する培養液
を入れたシリンジを添加ライン２２のコネクタ２２１に
接続して、添加ポート２２２から流入ライン２１を介し
て、流入口１３から単球分離器具１内の単球捕捉フィル
ター１１に捕捉されている単球に培養液を添加すること
により、単球から樹状細胞が分化誘導される。この工程
で用いる培養液は、培地およびサイトカインを含有する
ものである。
分化誘導するための工程である。この工程では、単球分
離器具１の流入口１３を開放状態、流出口１４を閉塞状
態とし、予め培地およびサイトカインを含有する培養液
を入れたシリンジを添加ライン２２のコネクタ２２１に
接続して、添加ポート２２２から流入ライン２１を介し
て、流入口１３から単球分離器具１内の単球捕捉フィル
ター１１に捕捉されている単球に培養液を添加すること
により、単球から樹状細胞が分化誘導される。この工程
で用いる培養液は、培地およびサイトカインを含有する
ものである。
【００４５】この工程では、単球分離器具１の流入口１
３および流出口１４を閉塞状態とし、一定時間経過後
に、流出口１４を開放状態にして、単球分離器具１内の
培養液を排出し、流出口１４を閉塞し、流入口１３を再
び開放状態として、新しい培地およびサイトカインを含
有する培養液を単球分離器具１内に導入し、流入口１３
を閉塞し、一定時間経過後に、この操作（培養液の交
換）を複数回繰り返し行うことにより、短時間で効率良
く、単球から樹状細胞を分化誘導することができる。
３および流出口１４を閉塞状態とし、一定時間経過後
に、流出口１４を開放状態にして、単球分離器具１内の
培養液を排出し、流出口１４を閉塞し、流入口１３を再
び開放状態として、新しい培地およびサイトカインを含
有する培養液を単球分離器具１内に導入し、流入口１３
を閉塞し、一定時間経過後に、この操作（培養液の交
換）を複数回繰り返し行うことにより、短時間で効率良
く、単球から樹状細胞を分化誘導することができる。
【００４６】この操作にあたって、単球分離器具１内の
培養液の排出は、培養液を排出ライン３１から廃液ライ
ン３３を介して廃液バッグ３４に送り込むことにより行
われる。なお、図４に示す単球分離培養装置１１０を用
いる場合には、廃液ライン３３のコネクタ３３１に、廃
液を回収するためのバッグなどを接続して行われる。
培養液の排出は、培養液を排出ライン３１から廃液ライ
ン３３を介して廃液バッグ３４に送り込むことにより行
われる。なお、図４に示す単球分離培養装置１１０を用
いる場合には、廃液ライン３３のコネクタ３３１に、廃
液を回収するためのバッグなどを接続して行われる。
【００４７】この工程で用いる培地としては、１〜１０
％ＦＣＳ、ヒト血漿が加えられたＲＰＭＩ １６４０ま
たはＸ−Ｖｉｖｏ １０、ＡＩＭ−Ｖなどが挙げられ
る。サイトカインとしては、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−
４などを用いることができる。このような（１）の工程
は、単球から樹状細胞を分化誘導されるまで行われる。
具体的には、３〜２０日程度、好ましくは５〜１０日程
度行う。このような一連の操作は、３７℃，５％ＣＯ２
雰囲気下で行うことが好ましい。
％ＦＣＳ、ヒト血漿が加えられたＲＰＭＩ １６４０ま
たはＸ−Ｖｉｖｏ １０、ＡＩＭ−Ｖなどが挙げられ
る。サイトカインとしては、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−
４などを用いることができる。このような（１）の工程
は、単球から樹状細胞を分化誘導されるまで行われる。
具体的には、３〜２０日程度、好ましくは５〜１０日程
度行う。このような一連の操作は、３７℃，５％ＣＯ２
雰囲気下で行うことが好ましい。
【００４８】上記（３）の工程は、樹状細胞に抗原を提
示するための工程である。この工程では、抗原溶液を単
球分離器具１の流入口１３から導入して、樹状細胞に抗
原が提示される。抗原分子の導入は、予め抗原分子を充
填したシリンジ（図示せず）を添加ライン２２のコネク
タ２２１に接続し、抗原溶液を添加ポート２２２から流
入口１３を介して単球分離器具１内に導入し、樹状細胞
に添加することにより行われる。この工程で用いる抗原
溶液は、抗原分子を含有するものであり、抗原分子の他
にサイトカインを含有していても良い。抗原分子として
は、癌細胞溶解産物、酸抽出ペプチド、癌特異的合成ペ
プチドなどを用いることができる。また、サイトカイン
としては、ＴＮＦ−αなどを用いることができる。
示するための工程である。この工程では、抗原溶液を単
球分離器具１の流入口１３から導入して、樹状細胞に抗
原が提示される。抗原分子の導入は、予め抗原分子を充
填したシリンジ（図示せず）を添加ライン２２のコネク
タ２２１に接続し、抗原溶液を添加ポート２２２から流
入口１３を介して単球分離器具１内に導入し、樹状細胞
に添加することにより行われる。この工程で用いる抗原
溶液は、抗原分子を含有するものであり、抗原分子の他
にサイトカインを含有していても良い。抗原分子として
は、癌細胞溶解産物、酸抽出ペプチド、癌特異的合成ペ
プチドなどを用いることができる。また、サイトカイン
としては、ＴＮＦ−αなどを用いることができる。
【００４９】このような（３）の工程は、数時間〜数
日、好ましくは4時間〜２日行う。この間に、培養液の
交換、培地の交換またはサイトカインの交換や、抗原分
子の添加を必要に応じて行うことにより、確実に樹状細
胞に抗原を提示することができる。
日、好ましくは4時間〜２日行う。この間に、培養液の
交換、培地の交換またはサイトカインの交換や、抗原分
子の添加を必要に応じて行うことにより、確実に樹状細
胞に抗原を提示することができる。
【００５０】上記（４）の工程は、抗原を提示された樹
状細胞を回収するための工程である。この工程では、単
球分離器具１の流入口１３から抗原を提示された樹状細
胞が回収される。抗原提示後の樹状細胞の回収は、単球
分離器具１内の培養液を排出した後に、置換液を導入し
て、培養液を流出口から排出し、次いで、回収液を導入
する操作により行う。
状細胞を回収するための工程である。この工程では、単
球分離器具１の流入口１３から抗原を提示された樹状細
胞が回収される。抗原提示後の樹状細胞の回収は、単球
分離器具１内の培養液を排出した後に、置換液を導入し
て、培養液を流出口から排出し、次いで、回収液を導入
する操作により行う。
【００５１】具体的には、最初に、単球分離器具１内の
培養液を単球分離器具１の流出口１４から排出ライン３
１および廃液ライン３３を介して廃液バッグ３４内に排
出し、その後に、予め置換液を充填したシリンジ（図示
せず）を添加ライン２２のコネクタ２２１に接続し、置
換液を添加ポート２２２から単球分離器具１の流入口１
３を介して単球分離器具１内に導入し、抗原提示後の樹
状細胞を置換液に浮遊させ、次いで、置換液が入ってい
たシリンジで樹状細胞浮遊液を吸引することにより、シ
リンジ内に抗原提示後の樹状細胞を回収する。
培養液を単球分離器具１の流出口１４から排出ライン３
１および廃液ライン３３を介して廃液バッグ３４内に排
出し、その後に、予め置換液を充填したシリンジ（図示
せず）を添加ライン２２のコネクタ２２１に接続し、置
換液を添加ポート２２２から単球分離器具１の流入口１
３を介して単球分離器具１内に導入し、抗原提示後の樹
状細胞を置換液に浮遊させ、次いで、置換液が入ってい
たシリンジで樹状細胞浮遊液を吸引することにより、シ
リンジ内に抗原提示後の樹状細胞を回収する。
【００５２】なお、図４に示す単球分離培養装置１１０
を用いる場合には、廃液を回収するためのバッグ（図示
せず）を廃液ライン３３のコネクタ３３１に接続して、
このバッグ内に培養液を排出する。また、樹状細胞の回
収は、置換液を単球分離器具１内に流入した後に、予め
回収液を充填したシリンジなど（図示せず）を廃液ライ
ン３３のコネクタ３３１に接続し、回収液を廃液ポート
３３２から排出ライン３１を介して流出口１４から単球
分離器具１内に流入し、単球分離フィルター１に通して
（逆流させる）、置換液が入っていたシリンジに排出す
ることにより行うことができる。
を用いる場合には、廃液を回収するためのバッグ（図示
せず）を廃液ライン３３のコネクタ３３１に接続して、
このバッグ内に培養液を排出する。また、樹状細胞の回
収は、置換液を単球分離器具１内に流入した後に、予め
回収液を充填したシリンジなど（図示せず）を廃液ライ
ン３３のコネクタ３３１に接続し、回収液を廃液ポート
３３２から排出ライン３１を介して流出口１４から単球
分離器具１内に流入し、単球分離フィルター１に通して
（逆流させる）、置換液が入っていたシリンジに排出す
ることにより行うことができる。
【００５３】この工程で用いる回収液としては、ＦＣ
Ｓ、ヒト血漿、ヒトアルブミンなどを加えた生理食塩水
や、デキストラン４０、ＰＢＳなどを好適に用いること
ができる。また、置換液としても、回収液と同様のもの
を用いることができる。
Ｓ、ヒト血漿、ヒトアルブミンなどを加えた生理食塩水
や、デキストラン４０、ＰＢＳなどを好適に用いること
ができる。また、置換液としても、回収液と同様のもの
を用いることができる。
【００５４】
【実施例】表１に示すような、平均孔径、肉厚および肉
厚と平均孔径の比（肉厚／平均孔径）を有する実施例１
〜１０および比較例１〜９の単球捕捉フィルターを作製
し、単球および残りの血液成分（リンパ球、顆粒球、赤
血球および血小板）の捕捉率を算出した。
厚と平均孔径の比（肉厚／平均孔径）を有する実施例１
〜１０および比較例１〜９の単球捕捉フィルターを作製
し、単球および残りの血液成分（リンパ球、顆粒球、赤
血球および血小板）の捕捉率を算出した。
【００５５】ポリウレタン製のスポンジ状多孔質体を直
径２６ｍｍの円形に切り抜いて、単球捕捉フィルターを
作製した。このフィルターを外周面からの液漏れがない
ように平膜固定用の容器にセットした。そして、この容
器の流入口には軟質ポリ塩化ビニル製チューブを接続
し、流出口には２１Ｇ注射針（２１Ｇ）を接続し、この
注射針の先端に、ろ過した血液を回収できるように血液
回収容器をセットした。なお、流出口から血液回収容器
までの落差は１５ｃｍとした。
径２６ｍｍの円形に切り抜いて、単球捕捉フィルターを
作製した。このフィルターを外周面からの液漏れがない
ように平膜固定用の容器にセットした。そして、この容
器の流入口には軟質ポリ塩化ビニル製チューブを接続
し、流出口には２１Ｇ注射針（２１Ｇ）を接続し、この
注射針の先端に、ろ過した血液を回収できるように血液
回収容器をセットした。なお、流出口から血液回収容器
までの落差は１５ｃｍとした。
【００５６】最初に、流入口から０．５％アルブミン加
生理食塩水を平膜固定用容器に流してプライミングし、
次いで、予め各血球成分数（リンパ球、顆粒球、赤血球
および血小板）をカウントしたＣＰＤ加新鮮全血（末梢
血）１０ｍＬを３ｍＬ／ｍｉｎの流速でろ過し、フィル
ターに単球を捕捉させた。そして、３０ｍＬの０．５％
アルブミン加生理食塩水を流してフィルターを洗浄し
た。このような操作の終了後に、ろ液中の各血球成分の
数をカウントし、捕捉率を算出した。この結果を表１に
示す。なお、ろ過前後の各血球成分数は、自動血球計算
機（ＳｙｓｍｅｘＳＥ−９０００）で測定した。
生理食塩水を平膜固定用容器に流してプライミングし、
次いで、予め各血球成分数（リンパ球、顆粒球、赤血球
および血小板）をカウントしたＣＰＤ加新鮮全血（末梢
血）１０ｍＬを３ｍＬ／ｍｉｎの流速でろ過し、フィル
ターに単球を捕捉させた。そして、３０ｍＬの０．５％
アルブミン加生理食塩水を流してフィルターを洗浄し
た。このような操作の終了後に、ろ液中の各血球成分の
数をカウントし、捕捉率を算出した。この結果を表１に
示す。なお、ろ過前後の各血球成分数は、自動血球計算
機（ＳｙｓｍｅｘＳＥ−９０００）で測定した。
【００５７】
【表１】
【００５８】表１に示す結果より、実施例１〜９の単球
捕捉フィルターは、単球の捕捉率が高く、残りの血液成
分（リンパ球、顆粒球、赤血球および血小板）の捕捉率
は低く、単球が選択的に捕捉されている。特に、実施例
２および実施例３の単球捕捉フィルターは、リンパ球、
顆粒球、赤血球および血小板の捕捉率が低い。これに対
して、比較例１〜９のフィルターは、単球の捕捉率が高
いと、残りの血液成分（リンパ球、顆粒球、赤血球およ
び血小板）の捕捉率も高く、単球の捕捉率が低いと、残
りの血液成分（リンパ球、顆粒球、赤血球および血小
板）の捕捉率も低く、単球が選択的に捕捉されていな
い。
捕捉フィルターは、単球の捕捉率が高く、残りの血液成
分（リンパ球、顆粒球、赤血球および血小板）の捕捉率
は低く、単球が選択的に捕捉されている。特に、実施例
２および実施例３の単球捕捉フィルターは、リンパ球、
顆粒球、赤血球および血小板の捕捉率が低い。これに対
して、比較例１〜９のフィルターは、単球の捕捉率が高
いと、残りの血液成分（リンパ球、顆粒球、赤血球およ
び血小板）の捕捉率も高く、単球の捕捉率が低いと、残
りの血液成分（リンパ球、顆粒球、赤血球および血小
板）の捕捉率も低く、単球が選択的に捕捉されていな
い。
【００５９】
【発明の効果】本発明の単球捕捉フィルターは、簡単な
操作で、末梢血などから単球を効率良く分離することが
できる。また、本発明の単球分離培養装置は、無菌的
に、かつ簡単な操作で、末梢血などから単球を分離する
とともに、培養することができる。また、本発明の樹状
細胞回収方法は、簡単な操作で、細胞へのダメージが少
なく品質の良い樹状細胞を効率良く回収することができ
る。
操作で、末梢血などから単球を効率良く分離することが
できる。また、本発明の単球分離培養装置は、無菌的
に、かつ簡単な操作で、末梢血などから単球を分離する
とともに、培養することができる。また、本発明の樹状
細胞回収方法は、簡単な操作で、細胞へのダメージが少
なく品質の良い樹状細胞を効率良く回収することができ
る。
【図１】図１は、本発明の実施例に係る単球捕捉フィル
ターを用いる単球分離器具の平面図である。
ターを用いる単球分離器具の平面図である。
【図２】図２は、図１の断面図である。
【図３】図３は、本発明の実施例に係る単球分離培養装
置を説明するための平面図である。
置を説明するための平面図である。
【図４】図４は、本発明の他の実施例に係る単球分離培
養装置を説明するための平面図である。
養装置を説明するための平面図である。
１ 単球分離器具
１１ 単球捕捉フィルター
１２ ハウジング
１３ 流入口
１４ 流出口
１５ 流入室
１６ 流出室
１００ 単球分離培養装置
１１０ 単球分離培養装置
２ 処理液バッグ
２１ 流入ライン
２２ 添加ライン
２２１ コネクタ
２２２ 添加ポート
２３ 採液ライン
２５ 排出口
３ 回収バッグ
３１ 排出ライン
３２ 回収ライン
３３ 廃液ライン
３３１ コネクタ
３３２ 廃液ポート
３４ 廃液バッグ
３４５ 排出口
３５ 排出口
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｇ０１Ｎ 33/48 Ｇ０１Ｎ 33/48 Ｓ
Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｅ
Ｆターム(参考） 2G045 AA01 BB06 CA20
4B029 AA08 AA09 BB11 CC01 CC02
CC10 GA02 GB01 GB03 GB04
GB05 HA06
4B065 AA90X BA30 BB19 CA44
CA60
Claims (9)
- 【請求項１】 単球を含有する被処理液から単球を選択
的に捕捉する単球捕捉フィルターであって、 前記単球分離フィルターは、平均孔径が６〜８μｍであ
り、かつ肉厚（ｍｍ）と平均孔径（ｍｍ）との比が１０
０〜２００であることを特徴とする単球捕捉フィルタ
ー。 - 【請求項２】 前記肉厚（ｍｍ）と平均孔径（ｍｍ）と
の比が１２０〜１５０である請求項１に記載の単球捕捉
フィルター。 - 【請求項３】 前記単球を含有する被処理液は、末梢血
である請求項１または２に記載の単球捕捉フィルター。 - 【請求項４】 前記単球捕捉フィルターは、連通孔を有
するスポンジ状多孔質体からなる請求項１ないし３のい
ずれかに記載の単球捕捉フィルター。 - 【請求項５】 単球を含有する被処理液から単球を選択
的に分離するとともに、分離された単球を培養する単球
分離培養装置であって、 ガス透過性がある材質からなり、流入口および流出口を
有するハウジングと、該ハウジング内を流入室と流出室
とに区分するように設けられた単球捕捉フィルターとか
らなる単球分離器具と、 該単球分離器具の流入口に連通する被処理液の流入ライ
ンと、 該流入ラインに連通する培養液の添加ラインと、 該単球分離器具の流出口に連通する排出ラインとを備え
ることを特徴とする単球分離培養装置。 - 【請求項６】 前記排出ラインは、末端に回収バッグを
有し、前記単球分離器具を通過した被処理液を回収する
回収ラインと、使用済みの培養液を排出する廃液ライン
とに分岐している請求項５に記載の単球分離培養装置。 - 【請求項７】 ガス透過性がある材質からなり、流入口
および流出口を有するハウジングと、該ハウジング内を
流入室と流出室とに区分するように設けられた単球捕捉
フィルターとからなる単球分離器具を用いて、 単球を含有する被処理液から単球を選択的に分離すると
ともに、分離された単球から得られる樹状細胞を回収す
る樹状細胞回収方法であって、 前記単球を含有する被処理液を前記単球分離器具の流入
口から導入して、前記単球捕捉フィルターにより単球を
捕捉し、その他の被処理液を前記単球分離器具の流出口
から排出する工程と、 培養液を前記単球分離器具の流入口から導入して、前記
分離された単球から樹状細胞を分化誘導する工程と、 抗原溶液を前記単球分離器具の流入口から導入して、前
記樹状細胞に抗原を提示する工程と、 前記単球分離器具の流入口から前記抗原を提示された樹
状細胞を回収する工程とを含むことを特徴とする樹状細
胞回収方法。 - 【請求項８】 前記単球から樹状細胞を分化誘導する工
程は、一定時間経過後に、前記単球分離器具の流出口か
ら培養液を排出し、再び新しい培養液を前記単球分離器
具の流入口から導入する操作を複数回行うものである請
求項７に記載の樹状細胞回収方法。 - 【請求項９】 前記抗原を提示された樹状細胞を回収す
る工程は、前記単球分離器具の流出口から培養液を排出
した後に、置換液を前記単球分離器具の流入口から導入
して、培養液を流出口から排出し、次いで、回収液を前
記単球分離器具の流出口から導入して行う請求項７また
は８に記載の樹状細胞回収方法。
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