JP4362529B2 - 単球分離培養装置および樹状細胞回収方法 - Google Patents
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(1) 単球を含有する被処理液から単球を選択的に分離するとともに、分離された単球を培養する単球分離培養装置であって、ガス透過性がある材質からなり、流入口および流出口を有するハウジングと、該ハウジング内を流入室と流出室とに区分するように設けられ、平均孔径が6〜8μmであり、かつ肉厚(mm)と平均孔径(mm)との比が100〜200である単球捕捉フィルターとを有する単球分離器具と、該単球分離器具の流入口に連通する被処理液の流入ラインと、該流入ラインに連通する培養液の添加ラインと、該単球分離器具の流出口に連通する排出ラインとを備えることを特徴とする単球分離培養装置。
最初に、本発明の実施形態に係る単球分離培養装置に用いる単球捕捉フィルターについて説明する。図1は、本発明の実施形態に係る単球分離培養装置に用いる単球分離器具の平面図であり、図2は、図1の断面図である。
本実施形態において、単球分離器具1は、ハウジング12と単球捕捉フィルター11とを備えるものであり、流入口13からハウジング12内に入った被処理液が流入室15を通って、必ず単球捕捉フィルター11を通過して、流出室16に流れ、流出口14から出るように構成されている。
ハウジング12は、2枚のシートからなり、単球捕捉フィルター11によって捕捉された単球を培養するのにあったて支障のない程度のガス透過性を有する熱可塑性樹脂からなる。具体的には、軟質ポリ塩化ビニル、ポリオレフィン、エチレン−酢酸ビニル共重合体などが挙げられる。
単球捕捉フィルター11は、単球以外の細胞は吸着しない材料で、細胞培養用担体として使用可能なものであればよい。また、液を通過させる観点から、親水性、保水性を有するものが好ましい。このような材料としては、天然樹脂、合成樹脂、天然繊維、合成繊維などが挙げられる。具体的には、ポリウレタン、ポリビニルアルコールなどの合成樹脂からなる連通孔を有するスポンジ状多孔質体や、ポリエステル、ナイロン、ポリオレフィンなどの合成樹脂からなる織布または不織布からなる繊維塊である。
このような<2>の工程は、単球から樹状細胞が分化誘導されるまで行われる。具体的には、3〜20日程度、好ましくは5〜10日程度行う。このような一連の操作は、37℃,5%CO2雰囲気下で行うことが好ましい。
これに対して、比較例1〜9のフィルターは、単球の捕捉率が高いと、残りの血液成分(リンパ球、顆粒球、赤血球および血小板)の捕捉率も高く、単球の捕捉率が低いと、残りの血液成分(リンパ球、顆粒球、赤血球および血小板)の捕捉率も低く、単球が選択的に捕捉されていない。
11 単球捕捉フィルター
12 ハウジング
13 流入口
14 流出口
15 流入室
16 流出室
100 単球分離培養装置
110 単球分離培養装置
2 処理液バッグ
21 流入ライン
22 添加ライン
221 コネクタ
222 添加ポート
23 採液ライン
25 排出口
3 回収バッグ
31 排出ライン
32 回収ライン
33 廃液ライン
331 コネクタ
332 廃液ポート
34 廃液バッグ
345 排出口
35 排出口
Claims (8)
- 単球を含有する被処理液から単球を選択的に分離するとともに、分離された単球を培養する単球分離培養装置であって、
ガス透過性がある材質からなり、流入口および流出口を有するハウジングと、該ハウジング内を流入室と流出室とに区分するように設けられ、平均孔径が6〜8μmであり、かつ肉厚(mm)と平均孔径(mm)との比が100〜200である単球捕捉フィルターとを有する単球分離器具と、
該単球分離器具の流入口に連通する被処理液の流入ラインと、
該流入ラインに連通する培養液の添加ラインと、
該単球分離器具の流出口に連通する排出ラインとを備えることを特徴とする単球分離培養装置。 - 前記単球捕捉フィルターは、連通孔を有するスポンジ状多孔質体からなる請求項1に記載の単球分離培養装置。
- 前記排出ラインは、末端に回収バッグを有し、前記単球分離器具を通過した被処理液を回収する回収ラインと、使用済みの培養液を排出する廃液ラインとに分岐している請求項1または2に記載の単球分離培養装置。
- 前記単球を含有する被処理液は、末梢血である請求項1ないし3のいずれかに記載の単球分離培養装置。
- ガス透過性がある材質からなり、流入口および流出口を有するハウジングと、該ハウジング内を流入室と流出室とに区分するように設けられ、平均孔径が6〜8μmであり、かつ肉厚(mm)と平均孔径(mm)との比が100〜200である単球捕捉フィルターとを有する単球分離器具を用いて、
単球を含有する被処理液から単球を選択的に分離するとともに、分離された単球から得られる樹状細胞を回収する樹状細胞回収方法であって、
前記単球を含有する被処理液を前記単球分離器具の流入口から導入して、前記単球捕捉フィルターにより単球を捕捉し、その他の被処理液を前記単球分離器具の流出口から排出する工程と、
培養液を前記単球分離器具の流入口から導入して、前記分離された単球から樹状細胞を分化誘導する工程と、
抗原溶液を前記単球分離器具の流入口から導入して、前記樹状細胞に抗原を提示する工程と、
前記単球分離器具の流入口から前記抗原を提示された樹状細胞を回収する工程とを含むことを特徴とする樹状細胞回収方法。 - 前記単球捕捉フィルターは、連通孔を有するスポンジ状多孔質体からなる請求項5に記載の樹状細胞回収方法。
- 前記単球から樹状細胞を分化誘導する工程は、一定時間経過後に、前記単球分離器具の流出口から培養液を排出し、再び新しい培養液を前記単球分離器具の流入口から導入する操作を複数回行うものである請求項5または6に記載の樹状細胞回収方法。
- 前記抗原を提示された樹状細胞を回収する工程は、前記単球分離器具の流出口から培養液を排出した後に、置換液を前記単球分離器具の流入口から導入して、培養液を流出口から排出し、次いで、回収液を前記単球分離器具の流出口から導入して行う請求項5ないし7のいずれかに記載の樹状細胞回収方法。
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