JP2003180382A

JP2003180382A - Ｉｌ−１３受容体ポリペプチド

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Publication number: JP2003180382A
Application number: JP2002271902A
Authority: JP
Inventors: Daniel Caput; ダニエル・カピュ; Pascual Ferrara; パスクアル・フェララ; Patrick Laurent; パトリック・ロラン; Natalio Vita; ナタリオ・ヴィータ
Original assignee: Sanofi Synthelabo SA
Current assignee: Sanofi Aventis France
Priority date: 1995-12-06
Filing date: 2002-09-18
Publication date: 2003-07-02
Anticipated expiration: 2016-11-07
Also published as: ZA9610238B; DE69626859T2; US20050282216A1; NO331148B1; US20110201029A1; MX9804419A; JP2005323595A; ATE234922T1; NO324775B1; NO20092994L; EP0876482B1; NO328197B1; WO1997020926A1; MY123740A; TW565570B; US20060035856A1; AR004860A1; JP4185070B2; CA2238893A1; JPH11511028A

Abstract

(57)【要約】【課題】医療レベルにおける、ＩＬ-４およびＩＬ-１
３の調節の現象の、および特にこれらの２種のサイトカ
インのいずれかによって創製される効果を分離し、別々
に制御すること。【解決手段】ＩＬ−１３に特異的に結合することがで
きる配列番号：２の配列のフラグメントからなり、かつ
／または細胞膜のレベルでＩＬ−１３によって特異的に
生成されるシグナルの伝達に関与し、かつ／または配列
番号：２の配列のポリペプチドに特異的な抗体によって
認識され、ならびに／あるいは配列番号２の配列のポリ
ペプチドを認識する抗体を誘導することができる精製さ
れたポリペプチド。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、インターロイキン
-１３（ＩＬ-１３）に対して特異的な受容体活性を有す
る精製ポリペプチド、その生物学的に活性なフラグメン
ト、および相当する核酸配列、ならびにそれらの適用に
関する。

【０００２】

【従来の技術】ＩＬ-１３は、最近同定された（１、
２）、活性化Ｔリンパ球、活性化後のＢリンパ球および
肥満細胞によって分泌される１１２アミノ酸のサイトカ
インである。ＩＬ-４と共有するその膨大な生物特性に
より、ＩＬ-１３はＩＬ-４様サイトカインとして説明さ
れている。その活性は、Ｂ-細胞（３-５）、単球（６-
１０）および他の非-造血細胞（１１-１２）に対するＩ
Ｌ-４の活性に実際に類似している。一方、ＩＬ-４とは
反対に、休止または活性化Ｔ細胞に対しては特異的な効
果を何ら及ぼさないようである（１３）。

【０００３】単球／マクロファージ、Ｂリンパ球および
ある種の造血前駆体に対するＩＬ-１３の種々の生物活
性はA.J.Mintyによって、ならびにＩＬ-１３の概説論文
に詳記されている（例えば１４を参照されたし）。加え
て、幾つかのデータは、このサイトカインが他の細胞型
に対して多面的な効果を有することを示している。ＩＬ
-１３によって直接的に影響を受けるこれらの非-造血細
胞は、内皮細胞および小膠細胞、表皮ケラチン細胞、な
らびに腎臓および小腸のガン腫である。ＩＬ-１３の抗-
炎症および免疫調節活性は、例えば、自己免疫疾患、腫
瘍およびウイルス病理の治療に有用となり得る。

【０００４】しかしながら、臨床レベルにおけるこれら
の生物特性の利用には、関連する病理において生物特性
を制御および変調させることができるように、それを介
してこの効果が発揮されるシグナルおよびメカニズムの
完全な認識が要求される。細胞内の生物分子によって伝
達されるシグナルの分析におけるステージの１つは、そ
の膜受容体を同定することにある。ＩＬ-１３受容体の
この側面に対して行った研究実験により、ＩＬ-１３お
よびＩＬ-４が共通の受容体、または非常に少なく見積
もっても共通受容体複合体の幾つかのコンポーネント、
ならびに共通のシグナル伝達エレメントを有することが
示されている（１５-１８）。この受容体は、考えられ
る細胞型によって変動し得る数で、種々の細胞型の表面
に存在する。ＩＬ-１３およびＩＬ-１４受容体の比較分
布が、A.J.Minty（１４）によって示されている。

【０００５】Kondoら（１９）は、ＩＬ-４に対して高親
和性を有する受容体の構造を記載している。この受容体
は、１４０ｋＤａの糖蛋白質（ＩＬ-４Ｒ）とＩＬ-２受
容体のγ鎖（γｃ）との会合によって形成されるダイマ
ーである。ＩＬ-４は高親和性（５０〜１００ｐＭのＫ
ｄ）で１４０ｋＤａの糖蛋白質サブユニット（ＩＬ-４
Ｒまたはｇｐ１４０）に結合することができる（１
５）。しかしながら、この親和性は、γｃ鎖がｇｐ１４
０と会合した場合には、２〜３倍だけ上昇する。加え
て、この会合はＩＬ-４により媒介されるある種のシグ
ナルの伝達にも必要である（１９、２０）。

【０００６】ＩＬ-１３またはＩＬ-４のいずれかの結合
性に関する交差-競合実験により、ＩＬ-４はＩＬ-１３
の結合性を通常妨害し得るが、ＩＬ-１３は一般的にＩ
Ｌ-４のその受容体に対する結合性を部分的にしか妨害
できず（１７、２１）、ＩＬ-４受容体の２個のサブユ
ニットのいずれにも、またはそれらの会合によって形成
された複合体にも結合しないことが立証されている。こ
れらの知見に基づいて、本発明者らは、ＩＬ-１３に対
して特異的な受容体が、もう１個のＩＬ-１３結合性コ
ンポーネント（ＩＬ-１３Ｒβ）と会合した受容体複合
体ＩＬ-４よりなると予想した。

【０００７】ＩＬ-１３およびＩＬ-４に応答して増殖す
ることができる赤白血球細胞系統（ＴＦ-１系統）で行
った研究実験により、これらの２種のサイトカインがそ
れらの受容体に結合した後に同様の細胞内事象を生成す
ることが示された（１８）。平行して、交差-連結（cro
ss-linking）実験により、ｇｐ１４０が、γ鎖または新
たなサブユニットのいずれかと分子量５５〜７０ｋＤａ
のヘテロダイマーを形成し得ることが示された（１７、
２１）。

【０００８】さらに、マウス胚幹細胞系統で最近行われ
た研究実験により、４２４アミノ酸残基のポリペプチド
（ＩＬ−１３Ｒα）をコードするゲノムＤＮＡおよびｃ
ＤＮＡを単離することが可能となったが、これは、高親
和性、すなわちその定数Ｋｄが約１０ｐＭ〜１００ｐＭ
の値にある親和性を有する受容体（低親和性受容体は、
２ｎＭ〜１０ｎＭの値にある定数Ｋｄを有している）
（２２、２３）を構成するように、ＩＬ-１３受容体が
ＩＬ-４受容体と共通の鎖を分有していることを示して
いる。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】医療レベルにおける、
ＩＬ-４およびＩＬ-１３の調節の現象の、および特にこ
れらの２種のサイトカインのいずれかによって創製され
る効果を分離し、別々に制御することができる可能性の
明確な理解の重要性に鑑み、本発明者らは、一方では、
高親和性を有するポリペプチド特異的結合性ＩＬ-１３
の特徴付けに、他方では、低親和性でＩＬ-１３に単独
で特異的に結合し、ＩＬ-４受容体と会合するとＩＬ-１
３に対する高親和性受容体を構成するもう１種のポリペ
プチドの特徴付けに関心を持った。

【００１０】

【課題を解決するための手段】今回、本発明者らは、他
の公知のヒト腎臓ガン腫系統（２１）よりもより多量に
ＩＬ-１３特異的受容体を発現しているヒトガン腫細胞
系統を同定し、今回、ＩＬ-４／ＩＬ-１３受容体に対す
るＩＬ-１３の結合に寄与する、ＩＬ-１３Ｒβと称する
一次サブユニットのクローニング、ならびに２種のサイ
トカイン間の交差-競合を許容する高親和性受容体を構
成するためにＩＬ-１３受容体とＩＬ-４受容体によって
分有されている、ＩＬ-１３Ｒαと称する共通鎖のクロ
ーニングを行った。しかるに、本発明はＩＬ-１３に特
異的に結合する精製ポリペプチドに関する。

【００１１】さらに特に、本発明の対象は、そのアミノ
酸配列がＩＬ-１３に対して特異的な受容体（ＩＬ-１３
ＲβおよびＩＬ-１３Ｒα）の配列に対応する精製ポリ
ペプチド、またはその生物学的に活性なフラグメントで
ある。また、本発明の対象は、該ポリペプチドまたはそ
の生物学的に活性なフラグメントをコードする単離ＤＮ
Ａ配列でもある。加えて、本発明は、前記定義のヌクレ
オチド配列の少なくとも１種を含有する発現ベクター、
および該ヌクレオチド配列のうちの１種の複製および／
または発現を許容する条件下にてこれらの発現ベクター
でトランスフェクトした宿主細胞に関する。トランスフ
ェクトした宿主細胞による組換えＩＬ-１３Ｒβおよび
ＩＬ-１３Ｒαまたはそれらの生物学的に活性なフラグ
メントの産生方法も本発明の一部である。

【００１２】また、本発明は、ＩＬ-１３によって創製
される免疫および炎症メカニズムを調節するための、Ｉ
Ｌ-１３Ｒβおよび／またはＩＬ-１３Ｒαまたはそれら
の生物学的に活性なフラグメントを含む医薬組成物をも
含む。加えて、本発明は、ＩＬ-１３Ｒβおよび／また
はＩＬ-１３Ｒαの活性を変調させることができる剤を
同定するための方法、およびこれらの剤をスクリーニン
グするためのＩＬ-１３Ｒβおよび／またはＩＬ-１３Ｒ
αまたはそれらのフラグメントの使用、ならびにＩＬ-
１３受容体の活性を変調させることができる新規な生成
物の製造方法に関する。

【００１３】また、本発明は、ＩＬ-１３Ｒβおよび／
またはＩＬ-１３Ｒαに対して特異的な抗体または抗体
の誘導体をも含む。

【００１４】最後に、本発明は、ＩＬ-１３Ｒβおよび
／またはＩＬ-１３Ｒα、それらの生物学的に活性なフ
ラグメントのうちの１種、またはこの受容体の活性を特
異的に変調させることができる化合物を、医薬上許容さ
れるビヒクルと組合せて患者に投与することを含む、Ｉ
Ｌ-１３によって媒介される免疫反応を変調させるため
の治療処理方法に関する。

【００１５】

【発明の実施の形態】以降の本発明の記載においては、
以下の定義を使用する：‐高親和性でＩＬ-１３に特異
的に結合するポリペプチド（ＩＬ-１３Ｒβ）：配列番
号２のアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはそのい
ずれかの生物学的に活性なフラグメントもしくは誘導
体；

【００１６】-低親和性でＩＬ-１３に単独で特異的に結
合し、ＩＬ-４受容体と会合すると高親和性受容体を構
成するポリペプチド（ＩＬ-１３Ｒα）：配列番号４の
アミノ酸配列を含むポリペプチド、またはそのいずれか
の生物学的に活性なフラグメントもしくは誘導体；

【００１７】-生物学的に活性な：ＩＬ-１３に特異的に
結合することができ、かつ／または細胞膜のレベルでＩ
Ｌ-１３によって特異的に生成されるシグナルの伝達に
関与することができ、かつ／またはＩＬ-４およびＩＬ-
１３に結合することができる複合体を形成するように、
ＩＬ-４に対して特異的な受容体（ＩＬ-４Ｒ／ｇｐ１４
０）と相互作用することができ、かつ／または配列番号
２の配列および／または配列番号４の配列のポリペプチ
ドに対して特異的な抗体によって認識され、ならびに／
あるいは配列番号２の配列および／または配列番号４の
配列のポリペプチドを認識する抗体を誘導することがで
きること；

【００１８】-誘導体：配列番号２の配列および／また
は配列番号４の配列のポリペプチドの変異型であるいず
れかのポリペプチド、または配列番号２の配列または配
列番号４の配列の遺伝的および／または化学的性質の改
変から得た、すなわち１個または限定数のアミノ酸の突
然変異、欠失、付加、置換および／または化学修飾によ
って得たいずれかの分子、ならびにいずれかのイソ型配
列、すなわち、配列番号２の配列または配列番号４の配
列、それらを生物学的に活性とする少なくとも１種の保
存された特性を有するＤエナンチオマー形、該変異
型、修飾またはイソ型配列中に１または２以上のアミノ
酸を含有する、それらのフラグメントのうちの１種もし
くはそれらの修飾配列のうちの１種に等しい配列。

【００１９】本発明の対象は、ａ）配列番号２の配列または配列番号４の配列、およびｂ）前記定義による、配列番号２および配列番号４由来
のいずれかの生物学的に活性な配列；から選択されるア
ミノ酸配列を含む精製ポリペプチドである。誘導体の製
造は種々の対象物を有することができ、これには特にＩ
Ｌ-１３に対する受容体の親和性を上昇させるもの、Ｉ
Ｌ-１３とＩＬ-４との間の交差-競合を変調させるも
の、それらの産生レベルを向上するもの、プロテアーゼ
に対するそれらの耐性を上昇させるもの、それらの生物
活性を改善するもの、あるいは新規な医薬的および／ま
たは生物学的特性をそれらに付与するものが含まれる。
前記定義のポリペプチドの生物学的に活性な変異型の中
では、前記のアミノ酸配列のうちの１種をコードする遺
伝子の転写物（メッセンジャーＲＮＡ）の可変スプライ
シング（alternate splicing）によって生成されたフ
ラグメントが好ましい。

【００２０】有利な変異型においては、配列番号２の配
列のポリペプチドの８個のＣ-末端アミノ酸が以下の６
個のアミノ酸：ＶＲＣＶＴＬによって置換されている。
もう１つの有利な態様により、本発明は、残基３４３、
好ましくは残基３３７まで伸長する配列番号２の配列の
ポリペプチドの細胞外ドメインを特に含む、ＩＬ-１３
Ｒβｓと称するＩＬ-１３Ｒβの可溶性形態、ならび
に、残基３４３、好ましくは残基３３６と３４２との間
の残基まで伸長する配列番号４の配列のポリペプチドの
細胞外ドメインを特に含む、ＩＬ-１３Ｒαｓと称する
ＩＬ-１３Ｒαの可溶性形態に関する。

【００２１】配列番号２の配列または配列番号４の配列
を含むポリペプチドは、本発明の特定の具体例を表す。
実施例から明らかとなるように、このポリペプチドは、
機能性ＩＬ-１３受容体を形成するようにヒト細胞の表
面に発現させることができ、かつ／または、ＩＬ-２受
容体のγ鎖と共に、ＩＬ-４およびＩＬ-１３に共通の受
容体複合体を形成するようにＩＬ-４受容体と結合させ
ることができる。

【００２２】また、本発明の対象は、ａ）配列番号１の配列、ｂ）配列番号３の配列、ｃ）配列番号１の配列もしくは配列番号３の配列、また
はそれらの相補的配列にハイブリダイズすることがで
き、かつＩＬ-１３受容体活性を有するポリペプチドを
コードし、またはＩＬ-１３およびＩＬ-４に対して高親
和性を有する受容体を再構成することができる核酸配
列、ならびにｄ）遺伝コードの縮重のために、配列ａ）、ｂ）および
ｃ）由来となる核酸配列；から選択される単離核酸配列
でもある。

【００２３】より特には、本発明の対象は、記載した生
物特性の少なくとも１つを保存している、ＩＬ-１３Ｒ
βまたはＩＬ-１３Ｒαの可溶性部分をコードする配
列、およびＩＬ-１３ＲβまたはＩＬ-１３Ｒαの転写物
の可変スプライシングによって生成されるいずれかの変
異型である。

【００２４】好ましい具体例は、配列番号１の配列のヌ
クレオチド番号１からヌクレオチド１０８１まで、好ま
しくはヌクレオチド１０６３まで伸長するヌクレオチド
のストレッチを含むか、またはそれからなる核酸配列に
よって表される。

【００２５】もう１つの好ましい具体例は、配列番号３
の配列のヌクレオチド番号１からヌクレオチド番号１０
５９まで、好ましくは番号１０４１と１０５６との間の
ヌクレオチドまで伸長するヌクレオチドのストレッチを
含むか、またはそれからなる核酸配列によって表され
る。

【００２６】有利には、本発明による核酸配列は、ＩＬ
-１３ＲβまたはＩＬ-１３Ｒαの成熟形態に相当する蛋
白質をコードする配列であり、この成熟蛋白質はシグナ
ルペプチドの放出の結果物である。

【００２７】本発明の種々のヌクレオチド配列は、人工
的な起源または他のものとし得る。それらは、配列番号
1の配列または配列番号３の配列に基づいて作製したプ
ローブにより配列ライブラリーをスクリーニングするこ
とによって得られるＤＮＡまたはＲＮＡ配列とし得る。
かかるライブラリーは、当業者に知られている慣用的な
分子生物学的技術によって調製し得る。

【００２８】本発明によるヌクレオチド配列は、化学合
成、または別法としてライブラリーのスクリーニングに
よって得た配列の化学的または酵素的修飾を含む方法の
組合せによっても調製し得る。

【００２９】これらのヌクレオチド配列により、本発明
によるポリペプチドまたはその生物学的に活性なフラグ
メントをコードするヌクレオチド・プローブを調製する
ことができる。適当なハイブリダイゼーション条件は、
当業者によって日常的に使用されている温度およびイオ
ン強度条件、好ましくはＴｍ-５℃とＴｍ-３０℃との間
の温度条件、なおより好ましくはＴｍ-５℃とＴｍ-１０
℃との間の温度条件（高ストリンジェンシー）であり、
Ｔｍとは５０％の塩基対形成鎖が分離する温度として定
義される溶融温度である。これらは、生物試料中の本発
明のポリペプチドに特異的な転写物をハイブリダイゼー
ション実験によって検出するための、あるいは多形性、
突然変異、または不完全な（poor）スプライシングから
生じる異常な合成または遺伝的異常を検出するためのイ
ン・ビトロ（in vitro)診断ツールとして用いることが
できる。

【００３０】本発明のプローブは、少なくとも１０個の
ヌクレオチドを含み、最大限、配列番号１の全体のヌク
レオチド配列もしくは配列番号３の全体のヌクレオチド
配列、またはそれらの相補鎖を含む。最も短いプロー
ブ、すなわち約１０〜１５ヌクレオチドのものの中で
は、適当なハイブリダイゼーション条件は当業者により
日常的に使用されている温度およびイオン強度条件に相
当する。

【００３１】好ましくは、本発明のプローブはその使用
前に標識する。それに関しては、例えば蛍光、放射能、
化学発光、または酵素標識のごとき幾つかの技術が、当
業者の能力の範囲内に存在する。

【００３２】ＩＬ-１３受容体ポリペプチドまたは生物
学的に活性なフラグメントをコードする核酸配列のレベ
ルの異型接合性および遺伝子転移の欠失のごとき異常な
合成または遺伝的異常の検出にこれらのヌクレオチドプ
ローブを用いるイン・ビトロ診断方法が本発明に包含さ
れる。かかるタイプの方法は： -所望により、後記のヌクレオチド配列を増幅させる予
備工程の後であってもよいが、本発明のヌクレオチドプ
ローブと前記のヌクレオチド配列との間のハイブリダイ
ゼーション複合体の形成を許容する条件下にて、該プロ
ーブを生物試料とを接触させ； -形成され得るハイブリダイゼーション複合体を検出
し；ついで -所望により、本発明のプローブとハイブリダイゼーシ
ョン複合体を形成するヌクレオチド配列を配列決定して
もよい；ことを含む。

【００３３】加えて、本発明のｃＤＮＡプローブは染色
体異常の検出にも有利に用いることができる。本発明の
ヌクレオチド配列は、いわゆるＰＣＲ（ポリメラーゼ連
鎖反応）技術またはそのいずれか他の変形により、配列
決定反応または特異的な増幅反応用のセンスおよび／ま
たはアンチセンス・オリゴヌクレオチドプライマーの製
造および使用にも有用である。

【００３４】さらに、本発明によるヌクレオチド配列
は、メッセンジャーＲＮＡを包含する核酸配列と特異的
にハイブリダイズすることができるアンチセンス配列を
調製する治療分野においても用途を有し、遺伝子治療に
も使用することができる。かくして、本発明の対象は、
前記定義のＩＬ-１３受容体ポリペプチドの生成を、少
なくとも部分的に阻害することができるアンチセンス配
列である。かかる配列は、有利には、転写レベルのＩＬ
-１３ＲβまたはＩＬ-１３Ｒαをコードするリーディン
グフレームを構成するものからなる。それらは、より特
に、アレルギーまたは炎症の治療に使用することができ
る。

【００３５】さらに、本発明によるヌクレオチド配列
は、ＩＬ-１３受容体活性を有する前記定義の組換えポ
リペプチドの生成にも使用することができる。これらの
ポリペプチドは、当業者に知られている組換え産物を作
製するための技術により、前記定義のヌクレオチド配列
から作製することができる。この場合においては、使用
するヌクレオチド配列を、細胞性宿主中のその発現を許
容するシグナルの制御下に置く。使用する細胞性宿主
は、細菌のごとき原核生物系、または酵母、昆虫細胞、
ＣＨＯ細胞（チャイニーズハムスター卵巣細胞）または
有利に商業的に入手可能ないずれかの他の系のごとき真
核生物系から選択することができる。本発明のポリペプ
チドの発現に好ましい細胞性宿主は、繊維芽細胞系統Ｃ
ＯＳ-７またはＣＯＳ-３からなる。

【００３６】プロモーター、アクチベーターまたは末端
配列のごときポリペプチドの発現を制御するシグナル
は、使用する細胞性宿主に従って選択する。この終了ま
でに、本発明によるヌクレオチド配列を、選択した宿主
内の自己複製性ベクター、または選択した宿主の組込み
性ベクターに挿入することができる。かかるベクター
は、当業者によって日常的に使用されている方法に従っ
て調製され、得られたクローンは、例えばエレクトロポ
レーションのごとき標準的な方法によって適当な宿主に
導入することができるであろう。

【００３７】前記定義のヌクレオチド配列の少なくとも
１種を含む発現ベクターも、本発明の一部である。ＣＯ
Ｓ-７またはＣＯＳ-３細胞の場合においては、（１７）
に記載されているのと同様に、ベクターｐＳＥ-１を使
用してトランスフェクションを行うことができる。

【００３８】加えて、本発明は、これらの発現ベクター
によってトランスフェクトした宿主細胞にも関する。こ
れらの細胞は、前記定義のベクターに挿入したヌクレオ
チド配列を宿主細胞に導入し、つづいてトランスフェク
トしたヌクレオチド配列の複製および／または発現を許
容する条件下にて該細胞を培養することによって得るこ
とができる。これらの細胞は、配列番号２の配列または
配列番号４の配列の組換えポリペプチドあるいはその誘
導体の産生方法に使用することができ、該方法はそれ自
体が本発明に含まれ、配列番号２の配列もしくは配列番
号４の配列の組換えポリペプチドまたは誘導体の発現を
許容する条件下にて該トランスフェクトした細胞を培養
し、該組換えポリペプチドペプチドを回収することを特
徴とする。

【００３９】使用する精製工程は当業者に知られてい
る。組換えポリペプチドペプチドは、分画、クロマトグ
ラフィー法、特異的なモノクローナル抗体もしくはポリ
クローナル抗体を用いるイムノアフィニティー技術のご
ときを独立で、または組合せて用いる方法によって、細
胞溶解物および抽出物から、培養上清から精製すること
ができる。

【００４０】前記定義によるＩＬ-１３Ｒβおよび／ま
たはＩＬ-１３Ｒαを特異的に認識することができるモ
ノ-またはポリクローナル抗体も本発明の一部である。
ポリクローナル抗体は、通常の手法により、ＩＬ-１３
Ｒβおよび／またはＩＬ-１３Ｒαに対して免疫化した
動物の血清から得ることができる。モノクローナル抗体
は、KoehlerおよびMilstein(Nature，1975，256，495-4
97)によって記載されている慣用的なハイブリドーマ培
養法に従って得ることができる。

【００４１】有利な抗体は、ＩＬ-１３Ｒβおよび／ま
たはＩＬ-１３Ｒαの細胞外ドメインに対して指向され
た抗体である。本発明による抗体は、例えば、キメラ抗
体、ヒト化（humanized）抗体、ＦａｂおよびＦ（ａ
ｂ’）２フラグメントである。それらは、標識化抗体ま
たは免疫コンジュゲートの形態としても存在し得る。例
えば、それらは、ジフテリア毒のごとき毒素と、または
放射性物と会合していてもよい。この場合においては、
これらのイムノトキシンは、ＩＬ-１３Ｒβおよび／ま
たはＩＬ-１３Ｒαの過剰発現に関与するある種の病理
の治療に使用することができる治療剤を構成し得る。本
発明の抗体、特にモノクローナル抗体は、例えば、免疫
蛍光によってか、または金もしくはペルオキシダーゼ標
識によって、特定の組織切片上のＩＬ-１３受容体の免
疫組織化学分析にも使用することができる。

【００４２】それらは、例えば異常な過剰発現のごとき
ＩＬ-１３Ｒβおよび／またはＩＬ-１３Ｒαの発現を観
察することが要求されたり、または膜発現の調節をモニ
ターするいずれの状況においても有利に使用することが
できる。しかるに、本発明は、異常なレベルで発現され
たＩＬ−13Ｒβおよび／またはＩＬ−13Ｒαを含有し得
る生物試料中の、ＩＬ−13Ｒβおよび／またはＩＬ−13
Ｒαの異常な発現と関連付けられる病理のイン・ビトロ
診断方法にも関し、該方法は、本発明の少なくとも１種
の抗体を、ＩＬ−13Ｒβおよび／またはＩＬ−13Ｒαと
該抗体（群）との間の特異的な免疫複合体の可能な形成
を許容する条件下にて、該生物試料と接触させ、形成さ
れ得る該特異的な免疫複合体を検出することを特徴とす
る。

【００４３】また、本発明は、生物試料中のＩＬ−13Ｒ
βおよび／またはＩＬ−13Ｒαの異常な発現のイン・ビ
トロ診断用の、ならびに／あるいは該試料中のＩＬ-１
３受容体の発現レベルを測定するためのキットにも関
し、該キットは、 -所望により支持体に結合されていてもよい、ＩＬ−13
Ｒβおよび／またはＩＬ−13Ｒαに対して特異的な少な
くとも１種の抗体、 -ＩＬ−13Ｒβおよび／またはＩＬ−13Ｒαと該抗体
（群）との間の特異的な抗原／抗体複合体の形成を明ら
かにするための手段、および／またはこれらの複合体を
定量化するための手段を含む。

【００４４】本発明のもう１つの対象は、ＩＬ−13Ｒβ
および／またはＩＬ−13Ｒαに特異的なリガンドまたは
その活性を変調させることができる剤を同定および／ま
たは単離するための方法に関し、該方法は、所望により
未同定であってもよい、当該化合物が受容体に対する親
和性を有するであろう場合には、化合物または種々の化
合物を含有する混合物を、ＩＬ-１３受容体と該化合物
との間の相互作用を許容する条件下にて、その表面にＩ
Ｌ−13Ｒβおよび／またはＩＬ−13Ｒαを発現している
細胞と接触させ、ＩＬ−13Ｒβおよび／またはＩＬ−13
Ｒαに結合した化合物、またはその生物活性を変調させ
ることができるものを検出および／または単離すること
を特徴とする。

【００４５】特定の具体例において、本発明のこの方法
は、そのＩＬ-１３Ｒβおよび／またはＩＬ-１３Ｒα受
容体についてのＩＬ-１３のアゴニストおよびアンタゴ
ニストの同定および／または単離に適用される。また、
本発明は、医薬上許容される担体と結合した、有効成分
として、好ましくは可溶性形態の、前記定義に相当する
ポリペプチドを含む医薬組成物をも含む。かかるポリペ
プチドは、細胞表面に発現されたＩＬ−13Ｒβおよび／
またはＩＬ−13Ｒαと実際に競合して作用し、それによ
って、ＩＬ−１３のその受容体への結合性に特異的なア
ンタゴニストを構成することができ、病理状態において
ＩＬ-１３によって媒介される反応を変調させることを
意図した医薬生成物の合成に有利に使用することができ
る。

【００４６】最後に、本発明は、医薬上許容されるビヒ
クルと結合した、ＩＬ−13Ｒβおよび／またはＩＬ−13
Ｒαを（またはそれらの生物学的に活性なフラグメント
の１種を）、またはその生物活性を特異的に変調させる
ことができる化合物を、患者に投与することを含む、Ｉ
Ｌ-１３によって媒介される免疫学的反応にリンクした
状態の治療処理方法を含む。

【００４７】本発明の他の特徴および利点は、以下に説
明を表す実施例および図面と残りの説明とで明らかにな
るであろう。

【００４８】

【実施例】材料および方法結合性および交差-連結実験：結合性および交差-連結実
験は、［^１２５Ｉ］［Phe43］−ＩＬ−１３−GlyTyrGly
Tyrについて記載されている（１７）のと同様にして行
った。

【００４９】ＩＬ−６の分泌の誘導：Ｃａｋｉ−１細胞
（ＡＴＣＣＨＴＢ４６）を５×１０^４細胞／ウェルの
密度で２４−ウェルプレートに入れ、培養３日後に、密
集した単層を無ウシ胎児血清ＤＭＥＭ培地で３回洗浄し
た。Ｃａｋｉ−１細胞の刺激は、Ｙ１２４ＤＩＬ−４ま
たは抗−ｇｐ１４０モノクローナル抗体の不存在または
存在下にて、３０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４またはＩＬ−１
３を用いて行った。２４時間培養した後に培養培地に放
出されたＩＬ−６の量を、ＥＬＩＳＡ技術（フランス,I
nnotest社製）によって測定した。

【００５０】ヒトＩＬ−１３Ｒβ ｃＤＮＡの単離およ
び分析前記（２５）と同様にして、合計ＲＮＡをＣａｋｉ−１
細胞から抽出した。ポリ（Ａ）ＲＮＡは、オリゴ（ｄ
Ｔ）_２５で被覆した磁気ビーズ（Dynal社製）を用いて
合計ＲＮＡから単離した。２×１０^５クローンを含有す
るｃＤＮＡライブラリーは、プライマー−アダプター法
（２６）およびベクターｐＳＥ−１（２７）を用いて構
築した。用いた発現用のクローニング戦略は、以前に記
載されている（１７）。

【００５１】ヒトＩＬ−１３Ｒβ ｃＤＮＡの調製：Ｒ
ＮＡ試料を逆転写酵素でコピーし、それを、配列＋５２
〜＋７１に相当するセンスプライマーおよび＋４８９〜
＋４７０に相当するアンチセンスプライマー（番号付け
は図５および６に示すｃＤＮＡ配列に基いて行った）を
用いるＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）に付した。ＰＣ
Ｒ−増幅産物は、ｃＤＮＡの配列＋４４５〜＋４６１に
相補的なプローブとハイブリダイズした。サイズマーカ
ーを図の左に示す。

【００５２】ヒトＩＬ−１３Ｒα ｃＤＮＡの単離およ
び分析１）げっ歯類ＩＬ−１３Ｒαプローブの調製ａ）Ｂ９細胞の培養（２８）Ｂ９細胞は、１０％ウシ胎児血清および５０μｇ／ｍｌ
のゲンタマイシンを補充したＲＰＭＩ培地（Gibco社
製）中で培養した。ｂ）Ｂ９細胞のＲＮＡの調製該細胞を、ＰＢＳ緩衝液（GIBCO−BRL社製、生理リン酸
緩衝液、参照04104040）で２回洗浄した。1,000rpmで１
０分間遠心分離した後に、細胞ペレットを以下の組成の
溶解緩衝液中に懸濁した：４Ｍグアニジン−チオシア
ネート；２５ｍＭクエン酸ナトリウムｐＨ７；０．
５％サルコシル；０．１Ｍ β２−メルカプトエタノー
ル。

【００５３】その懸濁液を、UltraturaxソニケーターN
o．231256（JANKE and KUNDEL社製）を用い、最大出
力にて１分間超音波処理した。ｐＨ４の酢酸ナトリウム
を添加して０．２Ｍとした。その溶液を１容量のフェノ
ール／クロロホルム混合液（ｖ／ｖ：５／１）で抽出し
た。水性相に含まれるＲＮＡを１容量のイソプロパノー
ルの援助で−２０℃にて沈殿させた。そのペレットを溶
解緩衝液中に再懸濁した。その溶液をフェノール／クロ
ロホルム混合液で再度抽出し、イソプロパノールでＲＮ
Ａを沈殿させた。そのペレットを７０％ついで１００％
エタノールで洗浄した後に、ＲＮＡを水中に再懸濁させ
た。

【００５４】ｃ）相補的ＤＮＡの調製ｃＤＮＡは、ポリＴ１２プライマーを用いて合計ＲＮＡ
５μｇから調製した。合計ＲＮＡを、３０μｌ容量の緩
衝液：０．５ｍＭ各デオキシヌクレオチド三リン酸お
よび３０単位のＲＮアシン（Promega社製）を含有する
５０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ８．３、６ｍＭＭｇ
Ｃｌ_２、１０ｍＭＤＴＴ、４０ｍＭＫＣｌ中、３７℃
にて１時間、ついで５０℃にて１０分間、さらに３７℃
にて１０分間、逆転写酵素ＲＮエースＨ（Gibco−BRL社
製、参照8064A）２００単位と共にインキュベートし
た。６５℃にて１０分間加熱することによって反応を終
結させた。

【００５５】ｄ）ＰＣＲ技術によるマウスＩＬ−１３Ｒ
α ｃＤＮＡフラグメントの特異的増幅重合は、以下の組成：１０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ
８．３、２．５ｍＭＭｇＣｌ_２、５０ｍＭＫＣｌ、
０．２ｍＭ４種のｄＮＴＰ、２種の核酸プライマー各
２μｇ／ｍｌ、および２．５ＵＴＡＱＤＮＡポリメ
ラーゼ（Beckman社製）；の緩衝液５０μｌ最終容量
中、ｃＤＮＡ６μｌを用いて行った。プライマーのペア
は、Hilton（２２）によって公開されている配列上で選
択した。

【００５６】センス・プライマー：ヌクレオチド２４９
〜２６８ 5’AGAGGAATTACCCCTGGATG 3’ アンチセンス・プライマー：ヌクレオチド１２５６〜１
２７５ 5’TCAAGGAGCTGCTTTCTTCA 3' 反応は、９４℃にて１分間、５８℃にて１分間、７２℃
にて４分間の３０サイクルにつづいて、７２℃にて１０
分間の最終サイクル行った。

【００５７】ｅ）ＰＣＲ増幅産物の精製ＴＡＥ緩衝液（４０ｍＭ、トリス−ＨＣｌ、１ｍＭＥ
ＤＴＡｐＨ７．９）中の１％アガロースゲル（Sigma
社製）上、１００ボルトにて１時間流した後に、同緩衝
液中の１μｇ／ｍｌ臭化エチジウム存在下にてゲルを染
色した。増幅産物（１０２７塩基対（ｂｐ）のＩＬ−１
３ＲαのｃＤＮＡフラグメント）に相当するバンドをGl
ass Maxキット（Gibco社製）を用いて抽出した。

【００５８】ｆ）プローブの調製マウスＩＬ−１３Ｒα受容体に相当する１０２７ｂｐの
精製ｃＤＮＡフラグメント２５ｎｇを、ＢＲＬ Random
Primers DNA 標識化システムキットを用いて、２．
４×１０^９ｄｐｍ／μｇの比活性で^３２Ｐで標識する
か；別法として、１００ｎｇを４×１０^８ｄｐｍ／μｇ
の比活性でBoeringherキットを用いたニックトランスレ
ーションによって標識した。

【００５９】２）ヒトＩＬ−１３Ｒα ｃＤＮＡの単離
および分析ａ）合計ＲＮＡの調製合計ＲＮＡは、１ｂ章で前記したのと同様にしてＣａｋ
ｉ−１細胞から抽出した。

【００６０】ｂ）メッセンジャーＲＮＡ（ポリＡ＋画
分）の精製ＲＮＡのポリＡ＋画分の精製は、製造業者により推奨さ
れている手法に従ってDYNAL オリゴ（ｄＴ）_２５ Dyn
abeadsキット（参照610.05）を用いて行った。原理は、
それにポリ（ｄＴ）_２５オリゴヌクレオチドが結合して
いる超常磁性ポリスチレンビーズの使用に基く。ポリＡ
＋画分は、磁性支持体に捕捉されたビーズに結合したオ
リゴ（ｄＴ）_２５オリゴヌクレオチドとハイブリダイズ
した。

【００６１】ｃ）ノザンブロットポリＡ＋メッセンジャーＲＮＡ５μｇを、ＭＯＰＳ緩衝
液（１０ｍＭｐＨ７．４、０．５ｍＭＥＤＴＡ）中
の１％アガロース、８％ホルムアルデヒド変性ゲル上に
負荷した。移動させ、２０×ＳＳＣ緩衝液中のＮ＋Hybo
ndメンブレン（Amersham社製）上に転移させた後に、そ
のＲＮＡを真空下、８０℃にてオーブン中で加熱するこ
とによって固定化させた。ついでそのメンブレンを、以
下の緩衝液：１ＭＮａＣｌ、３０％ホルムアミド；１
％ＳＤＳ、５×デンハート溶液；１００μｇ／ｍｌサケ
精子ＤＮＡ中、４２℃にて２時間、プレハイブリダイズ
させた。２時間のプレハイブリダイゼーション後に、そ
のメンブレンを２．５×１０^６ｄｐｍ／ｍｌのランダム
・プライマー法によって調製した一定濃度のマウスＩＬ
−１３Ｒαプローブと同緩衝液中にて１６時間ハイブリ
ダイズさせた。ついでそのメンブレンを２×ＳＳＣ緩衝
液、０．１％ＳＤＳ中、室温にて３０分間、ついで同緩
衝液中、５０℃にて２時間、２回洗浄した。カセット
（Molecular Dynamics社製）中で４日間感光させた後
に、ノザンブロットをInstant Imager（Molecular Dy
namics社製）で分析した。４２００ｂｐの優勢な転写
物、および１５００ｂｐと２０００ｂｐとの二重バンド
（doublet）がＣａｋｉ−１細胞、Ｕ３７３およびＵ９
３７で検出された。

【００６２】ヒトＩＬ−１３ＲαおよびＩＬ−１３Ｒβ
の特性の特徴付け：ＣＯＳ−７またはＣＨＯ細胞を前記
（１７）と同様にしてペトリ皿中でトランスフェクトし
た。24時間後に、その細胞をトリプシン処理し、８×１
０^４細胞／ウェルの密度で２４−ウェルプレート中で培
養した。３７℃にて４８時間培養させた後に、その細胞
を、前記（１７）と同様のヨウ素化ＩＬ−１３を用いる
結合性実験（３回行ったアッセイは、１０％未満の変動
を示した）に用いた。トランスフェクションに関して
は、ＣＯＳ−７またはＣＨＯ細胞を、種々のプラスミド
０．６ｍｇを用いて２５−ｃｍ^２プレート中でトランス
フェクトした。２４時間後に、細胞単層をトリプシン処
理し、８×１０^４細胞／ウェルにて１２−ウェルプレー
ト中で培養した。３日後に、標識ＩＬ−１３、ならびに
非標識ＩＬ−１３および／またはＩＬ−４を用いて結合
性および競合実験を行った。結果は、別々に行った少な
くとも３回の実験の代表なものである。

【００６３】ヒトＩＬ−１３Ｒαおよび／またはＩＬ−
４Ｒを発現している細胞の核抽出物のＥＭＳＡにおける
電気泳動移動度の比較：２×１０^６のＣＨＯ細胞を１０
ｃｍペトリ皿に入れた。２４時間後に、その細胞をプラ
スミドＤＮＡ（３４）６μｇでトランスフェクトした。
４８時間後に、その細胞を、１００ｎｇ／ｍｌ濃度のＩ
Ｌ−１３またはＩＬ−４を含むか、または含まない培地
３ｍｌ中、３７℃にて３０分間インキュベートした。つ
いで、その細胞をＰＢＳ−０．５ｍＭＥＤＴＡ緩衝液
で２回濯ぎ、ついでＰＢＳ１．２ｍｌ中に採取した。つ
いで、その細胞を遠心分離し、細胞抽出物を（３５）記
載と同様にして調製した。ついで、細胞抽出物１０〜２
０μｇ、および^３２Ｐで放射性同位元素標識化したオリ
ゴヌクレオチド・プローブ（５０,０００−１００,００
０ｃｐｍ）を用いて、（３６）記載と同様にしてＥＭＳ
Ａを行った。ここに該プローブはヒトＣεプロモーター
のＣεエレメントに相当する（３７）。合成したオリゴ
ヌクレオチド・プローブは以下の配列を有する： 5'−GATCCACTTCCCAAGAACAGA−3’

【００６４】実施例実施例１：Ｃａｋｉ−１細胞表面におけるヒトＩＬ−１３Ｒβの発
現の分析最近、ヒト腎臓ガン腫細胞が、ＩＬ−４およびＩＬ−１
３により分有されている受容体に加えて、大過剰量の特
異的なＩＬ−１３受容体を発現していることが発見され
た（２１）。これらの結果に基づいて、ヒトガン腫細胞
系統の試料を前記（１７）と同様にしてＩＬ−１３の結
合について実験した。ＩＬ−１３に対する結合部位を特
に多数発現する特定の系統Ｃａｋｉ−１（ＡＴＣＣＨ
ＴＢ４６）をより詳細に分析した。飽和実験から得たス
キャッチャード曲線は、４４６±５０ｐＭのＫｄおよび
７．２×１０^４受容体／細胞の結合能力を有する結合部
位が存在することを示した（図１）。競合実験において
は、非標識ＩＬ−１３は用量−依存的な様式で標識化Ｉ
Ｌ−１３を完全に置換したが、ＩＬ−４は高親和性で標
識化ＩＬ−１３の約１０％を置換した。より高濃度のＩ
Ｌ−４（１００ｎＭよりも高い濃度）でも、残りの９０
％の結合ＩＬ−１３を置換しなかった（図２）。

【００６５】これらの結果は、２種の部位、すなわち２
種のサイトカインによって分有されている１種と、ＩＬ
−１３に特異的なもう１種；が存在することと合致し
た。ＩＬ−１３に対する親和性による交差-連結に対す
る実験は、約７０ｋＤａの複合体を示し、これは、種々
の細胞型においてＩＬ−１３を用いた同様の交差-連結
実験において認められた複合体（１７、２１）と一致し
た。標識化ＩＬ−１３はＩＬ−１３によって複合体から
完全に置換されたが、ＩＬ−４によっては置換されなか
った。このことは競合実験と合致した（図３）。

【００６６】実施例２：ＩＬ−４またはＩＬ−１３により誘導されるＩＬ−６の
分泌の分析本発明者らは、Ｃａｋｉ−１細胞でＩＬ−４またはＩＬ
−１３によって誘導される分泌を分析した。２種のサイ
トカインは、同様なレベルのＩＬ−６の分泌を誘導し、
該分泌はＩＬ−４Ｒのα鎖に特異的な抗体によって、お
よびアンタゴニストＹ１２４ＤＩＬ−４によって阻害さ
れた（図４）。このことは、Ｃａｋｉ−１細胞中の２種
のサイトカインによって分有されている受容体がＩＬ−
６の分泌の誘導に寄与していることを示している。ＩＬ
−４およびＩＬ−１３によって誘導される蛋白質複合体
ＩＲＳ１／４ＰＳ（１８）のリン酸化を抗−ＩＬ−４Ｒ
抗体およびＩＬ−４アンタゴニストの存在または不存在
下にて分析した場合にも、同様の結果が認められた。

【００６７】これらの結果は、全体として考慮すると、
Ｃａｋｉ細胞中で発現された受容体複合体ＩＬ−４／Ｉ
Ｌ−１３が以前に記載されているものと同一であるこ
と、および過剰発現しているＩＬ−１３に結合する蛋白
質（ＩＬ−１３Ｒβ）がＩＬ−４Ｒを含む機能性複合体
中のＩＬ−１３の認識に寄与する受容体のコンポーネン
トであることを示している。従って、このＩＬ−１３結
合基をクローニングするためのメッセンジャーＲＮＡの
供給源として、これらの細胞を使用した。

【００６８】実施例３：ＩＬ−１３受容体の一次サブユニット（ＩＬ−１３Ｒ
β）のクローニングクローニングおよび発現のストラテジーは以前に記載さ
れているもの（１７）を用いた。２×１０^５組換えクロ
ーンを含有するｃＤＮＡライブラリーは、Ｃａｋｉ−１
細胞を用いて構築した（２６）。該ライブラリーを、各
バッチのＤＮＡがプラスミド形態であって、ＣＯＳ−７
細胞に導入されている（２９）１０００のｃＤＮＡのバ
ッチに分けた。トランスフェクトしたＣＯＳ−７細胞に
対する標識化ＩＬ−１３の結合性により、ＩＬ−１３受
容体をコードするクローンのバッチを同定することが可
能となった。陽性バッチを分配し、ＩＬ−１３に結合す
ることができる細胞表面蛋白質の合成を行うことができ
る単一クローンが同定されるまで再スクリーニングし
た。２種の独立したＩＬ−１３Ｒβ ｃＤＮＡを最後に
単離した。ＩＬ−１３Ｒβ ｃＤＮＡの完全ヌクレオチ
ド配列およびそれから予想されるアミノ酸配列を図５お
よび６に示す。該ｃＤＮＡはポリ−Ａテイルを除く１２
９８塩基長、および１０６塩基の短い３’非翻訳領域を
有する。典型的な（canonical）AATAAAポリアデニル化
シグナルは予想された部位に存在している。ヌクレオチ
ド５３と１１９２との間のオープンリーディングフレー
ムは３８０アミノ酸のポリペプチドを規定する。該配列
は、潜在的なシグナルペプチド、単一の貫膜ドメイン、
および短い細胞質内テイルと共に膜蛋白質をコードす
る。４箇所の潜在的なＮ−グリコシル化部位は細胞外領
域に位置する。II型ファミリーのサイトカイン受容体の
特徴として考えられている２種の共通モチーフ（３
０）；第１のものはＮ−末端ジスルフィド架橋ループ構
造由来であり、第２のものは細胞外領域のＣ−末端に位
置するＷＳＸＷＳタイプのモチーフである；も存在して
いることは重要である。非常に短い細胞質配列は、なぜ
細胞内のシグナルを伝達するものがＣａｋｉ細胞中のＩ
Ｌ−４およびＩＬ−１３によって分有されている受容体
複合体のみであるのかを説明しているのかも知れない。

【００６９】整列実験により、ヒトＩＬ−５Ｒα鎖との
相同性（５１％類似および２７％同一、図７）および、
より低い程度で、プロラクチン受容体との相同性が立証
された。ＩＬ−５Ｒ複合体が、ＩＬ−５に結合するがも
う１つの蛋白質を要するα鎖と、ＩＬ−３およびＧＭ−
ＣＳＦ受容体に共有されているβ鎖とからなり、シグナ
ルを伝達することができる高親和性受容体を形成するこ
とは興味深い（３１）。

【００７０】実施例４：種々の細胞系統におけるヒトＩＬ−１３Ｒβメッセンジ
ャーＲＮＡの検出驚くべきことには、Ｃａｋｉ−１細胞中においては、大
過剰量のＩＬ−１３Ｒβが発現されているのだが、ＩＬ
−１３ＲβおよびＩＬ−４Ｒに対する同様の量のメッセ
ンジャーＲＮＡがノザンブロットによって検出された。
この知見は、ＩＬ−４Ｒ転写物と比較してこのｍＲＮＡ
のより多量の翻訳が存在することを示しており、少数の
ＩＬ−１３結合部位しか発現していない細胞系統におけ
るＩＬ−１３Ｒβ ｍＲＮＡの検出の欠如を説明してい
る。ＲＴ−ＰＣＲ分析（図８）は、Ｃａｋｉ−１細胞で
見出された転写物が、表皮ケラチン細胞系統Ａ４３１、
前骨髄細胞ＴＦ−１、プレモサイティック細胞（premoc
ytic cell）Ｕ９３７、および細胞系統ＢＩＭ９にお
いてもより低レベルで存在することを示した。JurkatＴ
細胞系統またはプレ−ＢＮＡＬＭ６細胞系統において
は全く転写物が検出されなかった。これらの結果は、本
発明者らによって以前に記載されたこれらと同一の系統
で行ったＩＬ−１３結合性実験（１７）、およびＩＬ−
１３の知られている生物学的標的と合致した。

【００７１】実施例５：ヒトＩＬ−１３Ｒβ ｃＤＮＡでトランスフェクトした
ＣＯＳ−７細胞で行った結合性分析ＩＬ−１３Ｒβをコードする単離ｃＤＮＡでトランスフ
ェクトしたＣＯＳ−７細胞は、標識化ＩＬ−１３に特異
的に結合した。飽和曲線のスキャッチャード解析は、２
５０±３０ｐＭのＫｄ値と５．６×１０⁶受容体／細胞
の最大結合能力とを有する単一のコンポーネント部位を
示した（図９）。

【００７２】組換え受容体の親和性は、Ｃａｋｉ−１細
胞中のＩＬ−１３Ｒβについての４４６ｐＭのＫｄ値お
よび幾つかの他の細胞において記載されているもの（１
７）とよく一致した。その結果、ＩＬ−５Ｒのα鎖との
配列相同性にも拘わらず、クローン化受容体は高親和性
の結合部位を再構成するために第２の鎖を必要としない
ため、それは異なる挙動をする。

【００７３】同様に最近記載されたＩＬ−１５に結合す
る蛋白質（３２）が、ＩＬ−１５Ｒ複合体の他の２種の
コンポーネント不存在下にて、高親和性でＩＬ−１５に
結合する特徴を有することは興味深い。

【００７４】競合実験においては、ＩＬ−１３は、１．
５±０．５ｎＭの阻害定数（Ｋｉ）で、クローン化受容
体に対する標識化ＩＬ−１３の結合性を阻害することが
できたが、ＩＬ−４は該結合性を阻害できなかった。し
たがって、クローン化受容体の薬理学は、Ｃａｋｉ−１
細胞中に存在するＩＬ−１３Ｒβのものと同様であっ
た。交差-連結実験により、７０ｋＤａの放射性同位体
標識化バンドが示された。このバンドは、Ｃａｋｉ細胞
ならびに他の細胞（１７）で認められたものと同一の移
動度を有する。この複合体は、恐らくは、標識化ＩＬ−
４を用いて行った交差-連結実験におけるＩＬ−４Ｒの
１４０ｋＤａバンドに加えて認められた６０−７０ｋＤ
ａのバンドに相当する。また、このことは、機能性受容
体複合体における２種の蛋白質間に強い相互作用が存在
することも示している。しかるに、本発明者らは、ＩＬ
−１３ＲβとＩＬ−４Ｒとが細胞膜中で相互作用し、２
種のサイトカイン間の交差−競合を許容する受容体を再
構成するのかをチェックした。同時発現実験の結果を図
１１および１２に示す。

【００７５】別々か同時かのいずれかの２種の受容体の
発現が、２種のサイトカインのいずれかを特異的に認識
する多数の受容体を生じたことは明らかなようである。
しかしながら、それらが一緒に発現した場合には、少数
の受容体しか（５〜１０％）２種のサイトカインを認識
することができなかった。ＩＬ−４ＲおよびＩＬ−１３
Ｒβとのγｃ鎖の同時トランスフェクションは、分有さ
れる結合部位の数の増加を引き起こさなかった。これら
の結果は、ＩＬ−１３ＲβおよびＩＬ−４Ｒ鎖が細胞膜
中で互いに相互作用して、ＩＬ−１３とＩＬ−４とが競
合関係になり得る受容体を再構成し得ることを示してい
る。再構成受容体の低い％は、ＩＬ−１３およびＩＬ−
４が競合的に結合する受容体複合体の再構成に必要であ
るＣＯＳ細胞中に限定量でもう１つの蛋白質（ＩＬ−１
３Ｒα）が存在することに賛同する論拠である。

【００７６】γｃ鎖でのトランスフェクション実験で得
られた結果は、この蛋白質が以前に示された（１５）限
定因子ではないことを立証した。この結論は、Ｃａｋｉ
−１細胞中にγｃメッセンジャーＲＮＡが存在しないこ
と（２１）によっても支持された。

【００７７】再構成受容体の少ない数を説明するもう１
つの可能な論拠は、不適当な化学量論の２種の蛋白質が
細胞膜中に存在することである。しかしながら、異なる
相対量のＩＬ−４ＲおよびＩＬ−１３Ｒβを用いた同時
トランスフェクションは、再構成受容体の数における大
きな相違は示さなかった。ＩＬ−４Ｒと相互作用するよ
り大きな結合能力を有するもう１つのＩＬ−１３Ｒが存
在するという可能性が、ＩＬ−１３Ｒα ｃＤＮＡの単
離によってマウス（２２）およびヒトで確認された（実
施例７を参照されたし）。γｃの発現が、前記されてい
る（１９）のと同様にＩＬ−４の結合性を向上したが、
ＩＬ−１３の結合性は低下させたことは注意すべきであ
り、このことは、異なる鎖の間の複合体相互作用を示し
ている。

【００７８】実施例６：可溶性形態の受容体によるＩＬ
−１３のその膜受容体への結合性の阻害の実験経時的発
現（図１３）または安定系統（図１４）における結果を
説明する。ＩＬ−１３ＲβおよびＩＬ−１３Ｒβｓをコ
ードする２種のｃＤＮＡ配列を、ＩＬ−２ｃＤＮＡの
代りにベクターｐ７０５５に挿入した（３３）。得られ
たプラスミドは、各々、２０３６および２０３４と称す
る。

【００７９】ａ）経時的発現ＣＨＯ細胞を３×１０^５細胞／ウェルで１２−ウェルプ
レートに接種し、翌日、ＣＯＳ細胞についてと同様にＤ
ＥＡＥ−デキストラン法によって、プラスミド２０３６
もしくは２０３４、または対照としての空プラスミドｐ
ＳＥ−１のいずれかでトランスフェクトした。該細胞
は、プラスミド２０３４でトランスフェクトした細胞の
上清にＩＬ−１３Ｒβｓが蓄積され、プラスミド２０３
６でトランスフェクトした細胞の膜中においてＩＬ−１
３Ｒβが良好に発現されるように、３日間培養した。つ
いで、ＩＬ−１３Ｒβｓ（２０３４）または陰性対照
（空ｐＳＥ−１）でトランスフェクトした細胞の上清を
回収し、ＩＬ−１３Ｒβでトランスフェクトした細胞を
用いてＩＬ−１３の結合性の阻害を実験した。ＩＬ−１
３Ｒβを発現しているＣＨＯ細胞（２０３６）の表面に
対するＩＬ−１３の結合性は、放射性リガンドで１．５
倍に希釈したこれらの粗製上清の存在下または不存在下
で測定し、あるいは過剰量の非-放射性同位元素標識化
ＩＬ−１３（ＮＳＢ）存在下にて測定した。結合性は、
３００ｐＭの放射性リガンドを含む最終容量５００ｍｌ
中の全細胞に対して３回行った。

【００８０】ｂ）安定系統２種の安定な形質転換ＣＨＯ系統は、完全ＩＬ−１３Ｒ
β（３８０残基のポリペプチド）または可溶性形態のＩ
Ｌ−１３Ｒβ（ＩＬ−１３Ｒβｓ、ＩＬ−１３Ｒβの残
基１〜３３７に相当する切頭ポリペプチド）のコード配
列でのトランスフェクションによって得た。これらの配
列をベクターｐ７０５５に挿入した。ＣＨＯ−ＤＨＦＲ
⁻細胞をプラスミド２０３６（ＩＬ−１３Ｒβ）および
２０３４（ＩＬ−１３Ｒβｓ）でトランスフェクトし、
組換えクローンを以前に記載されている（３３）のと同
様にして選抜した。

【００８１】細胞当たり２〜５×１０^５部位を有する、
得られたクローンのうちの１種ＣＨＯ−ＩＬ−１３Ｒβ
（ＣＨＯ２０３６）をウェル当たり１０^５細胞の密度に
て１２−ウェルプレートに接種し、２日後に、その細胞
をＩＬ−１３Ｒβｓ存在または不存在下の結合性実験に
用いた。それに関しては、ＣＨＯ−ＩＬ−１３Ｒβｓ
（ＣＨＯ２０３４）クローンを皿当たり５×１０^５細胞
にて６ｃｍ皿に３回接種した。培養培地中に３日間蓄積
させた後に、ＣＨＯ２０３６クローンのＩＬ−１３Ｒβ
に対するＩＬ−１３結合阻害実験用に培地（皿当たり５
ｍｌ）を収集した。同様にして、可溶性ＩＬ−１３Ｒβ
を発現していないＣＨＯ細胞の上清を収集した。

【００８２】ＣＨＯ２０３６−２２クローンの表面のＩ
Ｌ−１３の結合性は、放射性リガンドで１．５倍に希釈
したこれらの粗製上清の存在下または不存在下にて、あ
るいは過剰量の非-放射性同位元素標識化ＩＬ−１３
（ＮＳＢ）の存在下にて測定した。結合性は、３００ｐ
Ｍの放射性リガンドを含む５００ｍｌ容量中、全細胞に
対して３回行った。

【００８３】図１３および１４の柱状グラフは、ＩＬ−
１３Ｒβに対するＩＬ−１３の結合性のＩＬ−１３Ｒβ
ｓによる阻害を表す。ＩＬ−１３のその受容体に対する
結合性の阻害は、幾つかのクローンで認めることができ
た。

【００８４】実施例７ヒトＩＬ−１３Ｒα受容体のクローニングａ）Ｃａｋｉ−１細胞のポリＡ＋メッセンジャーＲＮＡ
からのｃＤＮＡライブラリーの調製［^３２Ｐ］ｄＣＴＰで標識した一本鎖相補的ＤＮＡ（得
られた相補的ＤＮＡは３０００ｄｐｍ／ｎｇの比活性を
有する）は、ポリＡ＋メッセンジャーＲＮＡ０．５μｇ
で出発し、３０μｌ容量の以下の緩衝液：０．５ｍＭの
各種デオキシヌクレオチド三リン酸、［α^３２Ｐ］ｄＣ
ＴＰ３０μＣｉ、およびＲＮアシン（Promega社製）
３０Ｕを含有する５０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ
８．３、６ｍＭＭｇＣｌ_２、１０ｍＭＤＴＴ、４０
ｍＭＫＣｌ中にて、以下の配列（ＢａｍＨＩ部位を含
む）：５’＜GATCCGGGCCCTTTTTTTTTTTT＜３’ を有する合成プライマーを用いて調製した。逆転写酵素
ＲＮエースＨ（Giboco−BRL社製）２００単位と共に３
７℃にて１時間、ついで５０℃にて１０分間、さらに３
７℃にて１０分間インキュベートした後に、ＥＤＴＡ４
μｌを添加した。ついで、２ＮＮａＯＨ溶液６μｌを
添加し、６５℃にて５分間インキュベートすることによ
って、ＲＮＡ鋳型を分解した。

【００８５】合成プライマーを除去するために、ＴＥ緩
衝液中で平衡化したSephacryl S400カラム（Pharmacia
社製）１ｍｌ上で相補的ＤＮＡを精製した。最初の２つ
の放射性画分を合し、クロロホルムで抽出した後に、１
０Ｍ酢酸アンモニウム溶液１／１０容量およびエタノー
ル２．５容量で沈殿させた。ついで、ターミナルトラン
スフェラーゼ酵素（Pharmacia社製 27073001）２０単
位と共にｄＧホモポリマー性テイルを添加することによ
ってｃＤＮＡを５’において伸長させた。つぎに、以下
の組成：３０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ７．６：１ｍＭ
塩化コバルト；１４０ｍＭカコジル酸；０．１ｍＭ
ＤＴＴ；１ｍＭｄＧＴＰ；を有する緩衝液２０μｌ
中、３７℃にて１５分間インキュベーションを行い、つ
いで０．５ＭＥＤＴＡ２μｌを添加した。水酸化ナト
リウムでのさらなる処理を加熱することなく行い、つづ
いてS400カラム上で再精製し、クロロホルムで抽出し、
エタノールで沈殿させた。そのペレットをＴＥ緩衝液３
３μｌ中に溶解した。つぎのステージは、ＰｓｔＩで切
断した後にホモポリマー性ｄＣテイルが予めそれに加え
られているクローニングベクターｐＴ７Ｔ３−１８、ｃ
ＤＮＡおよびアダプターを組合わせることにあった。ｃ
ＤＮＡ（３３μｌ）を、ベクターｐＴ７／Ｔ３−１８
７５ｎｇ（５μｌ）、以下の配列（Ａｐａ１部位を含
む）：５’AAAAAAAAAAAAAGGGCCCG ３’ のアダプター１２０ｎｇ（１μｌ）、２００ｍＭＮａ
Ｃｌ溶液１０μｌと接触させ、その混合物を６５℃にて
５分間インキュベートし、ついでその反応物を室温まで
放冷させた。つぎのステージは、以下の組成：５０ｍＭ
トリス−ＨＣｌｐＨ７．５；１０ｍＭＭｇＣｌ_２、
１ｍＭＡＴＰ；を有する緩衝液中、酵素Ｔ４ファージ
ＤＮＡリガーゼ（Pharmacia社製）３２．５単位を用い
て、反応容量１００μｌ中のクローニングベクターと一
本鎖ｃＤＮＡとを１５℃にて一晩連結させることにあっ
た。ついで、フェノールでの抽出につづいてクロロホル
ムで抽出することによって蛋白質を除去し、ついで１０
ｍＭ酢酸アンモニウム溶液１／１０容量およびエタノー
ル２．５容量を添加した。その混合物を遠心分離し、ペ
レットを以下の組成：３３ｍＭトリス−酢酸ｐＨ
７．９、６２．５ｍＭ酢酸カリウム、１ｍＭ酢酸マグ
ネシウムおよび１ｍＭＤＴＴ；を有する緩衝液中に採
取し、酵素Ｔ４ファージＤＮＡポリメラーゼ（Pharmaci
a社製）３０単位および１ｍＭの４種のデオキシヌクレ
オチド三リン酸の混合物ならびにＴ４ファージ遺伝子３
２の蛋白質（Pharmacia社製）２単位を含む３０μｌ容
量中、３７℃にて１時間、第２のｃＤＮＡ鎖を合成し
た。その混合物をフェノールで抽出し、Ｐ１０カラム
（Biogel P10−200−400メッシュ−参照15011050−Bio
rad社製）上に沈殿させることによって痕跡を除去し
た。

【００８６】最終ステージは、製造業者により推奨され
ている条件下、２．５ｋＶで使用するBiorad Gene Pu
lser装置を用いた組換えＤＮＡのエレクトロポレーショ
ンによってＥ．ｃｏｌｉＭＣ１０６１細胞を形質転換
し、ついでその細菌を以下の組成：バクトトリプトン１
０ｇ／ｌ；酵母エキストラクト５ｇ／ｌ；ＮａＣｌ１０
ｇ／ｌ；を有するＬＢ培地中で１時間培養することにあ
った。

【００８７】得られた独立クローンの数は、１．５％寒
天（ｗ／ｖ）および１００μｇ／ｍｌアンピシリンを補
充したＬＢ培地（以後、ＬＢ寒天培地と称する）を入れ
た皿上で１時間インキュベーションした後の形質転換体
からの１／１０００希釈液を平板することによって測定
した。得られた独立クローンの数は１，０００，０００
であった。

【００８８】ｂ）ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニン
グ全体ライブラリーをBiodyne Aメンブレン（PALL社製、
参照BNNG 132）で被覆した寒天培地（直径１５０ｍｍ
のペトリ皿）上に平板した。３７℃にて一晩放置した後
に、新たなメンブレン上に接触させることによってクロ
ーンを転移させた。その新たなメンブレンを、下記の組
成の溶液に浸漬させたWathman 3MMペーパー上にそれを
置くことによって処理した：０．５ＮＮａＯＨ、１．
５ＭＮａＣｌ、５分間、ついで０．５Ｍトリス−Ｈ
ＣｌｐＨ８、１．５ＭＮａＣｌ、５分間。以下の緩
衝液：１０ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ８、１０ｍＭ
ＥＤＴＡ、５０ｍＭＮａＣｌ、０．１％ＳＤＳ、１
００μｇ／ｍｌプロテインキナーゼＫ；中、３７℃に
て３０分間、プロテインキナーゼＫで処理した後に、そ
のメンブレンを２×ＳＳＣ緩衝液（クエン酸ナトリウム
−ＮａＣｌ）で完全に洗浄し、ついで真空下、オーブン
中、８０℃にて２０分間乾燥した。

【００８９】ｃ）メンブレンのプレハイブリダイゼーシ
ョンおよびハイブリダイゼーションついで、そのメンブレンを以下の緩衝液：１ＭＮａＣ
ｌ；３０％ホルムアミド；１％ＳＤＳ；５×デンハート
溶液；１００μｇ／ｍｌサケ精子ＤＮＡ；中、４２℃に
て２時間プレハイブリダイズさせた。２時間のプレハイ
ブリダイゼーション後に、そのメンブレンを、２．５×
１０^６ｄｐｍ／ｍｌのニックトランスレーションによっ
て調製した一定濃度のマウスＩＬ−１３Ｒαプローブを
含む同緩衝液中にて１６時間ハイブリダイズさせた。そ
のメンブレンを２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ緩衝液中、
室温にて３０分間、２回洗浄し、ついで同緩衝液中、５
０℃にて２時間洗浄した。Kodak X−OMATフィルム存在
下、−８０℃にて一晩感光させた後に、数個の陽性クロ
ーンが検出された。

【００９０】ｄ）ヒトＩＬ−１３Ｒαクローンの配列決
定および該配列の分析配列は、Applied Biosystem社製キット（参照401628）
を用いて得た。ＩＬ−１３Ｒα ｃＤＮＡの完全核酸配
列およびそれから予想されるアミノ酸配列を図１５およ
び１６に示す。ｃＤＮＡはポリ−Ａテイルを除く３９９
９塩基長であり、２１４５塩基の長い非翻訳３’領域を
有している。

【００９１】典型的なポリアデニル化シグナルが予想さ
れた部位に存在している。ヌクレオチド３４と１８５１
との間のオープンリーディングフレームは、４２７アミ
ノ酸のポリペプチドを規定する。該配列は、潜在的なシ
グナルペプチドならびに単一の貫膜ドメインおよび短い
細胞質外領域と共に膜蛋白質をコードしている。

【００９２】１０箇所の潜在的なグリコシル化部位は、
細胞外領域に位置する。サイトカイン受容体のＩＩ型フ
ァミリーの特徴と考えられる２種の共通モチーフ：１番
目のものはＮ−末端ジスルフィド架橋ループ構造由来の
もので、２番目のものは細胞外領域のＣ−末端に位置す
るＷＳＸＷＳ型のモチーフである；も存在することは重
要である。

【００９３】実施例８ヒトＩＬ−１３Ｒα ｃＤＮＡでトランスフェクトした
ＣＯＳ−３またはＣＨＯ細胞に対して行った結合性分析ＩＬ−１３Ｒαをコードする単離したｃＤＮＡでトラン
スフェクトしたＣＨＯ細胞は、標識化ＩＬ−１３に特異
的に結合した。飽和曲線のスキャッチャード解析は、
４．５±０．４ｎＭのＫｄ値と２６０００受容体／細胞
の最大結合能力とを有する単一のコンポーネント部位を
示した（図１９Ｃおよび１９Ｇ）。同時発現実験の結果
を図１９Ｄおよび１９Ｈに示す。

【００９４】図１９Ｃの結果の分析により、ＣＨＯ細胞
のクローン２０３６においてＩＬ−１３Ｒαが良好に発
現されていることが示された。ＩＬ−４Ｒは、ＩＬ−４
ＲおよびＩＬ−１３Ｒα ｃＤＮＡで同時トランスフェ
クトしたＣＨＯ細胞におけるＩＬ−１３の結合性の６０
％を置換した（図１９Ｈ）が、ＩＬ−１３Ｒαに対する
７．５ｎＭのＫｄを考慮すると、ＩＬ−４Ｒ部位よりも
ＩＬ−１３Ｒα部位が１０倍も多く存在するようである
ことは注意し得る。

【００９５】ｈＩＬ−１３ＲαをコードするｃＤＮＡで
トランスフェクトしたｈＩＬ−４Ｒを発現しているＣＨ
Ｏ−ｈＩＬ４Ｒ細胞（ヒトＩＬ−４Ｒ）は、標識化ＩＬ
−１３に特異的に結合した。

【００９６】飽和曲線のスキャッチャード解析は、２種
のコンポーネント部位；２３±８．９ｐＭのＫｄ値と２
８０００部位／細胞の最大結合能力とを有する高親和性
の１種、および４．２±１．４ｎＭのＫｄ値と１５００
００部位／細胞の最大結合能力とを有する低親和性のも
う１種；を明らかに示した（図１９Ｄ）。

【００９７】特徴付けした２番目の部位は、単独で発現
させたｈＩＬ−１３Ｒα（ヒトＩＬ−１３Ｒα）と同一
の親和性を有し、非会合ＩＬ−１３Ｒα鎖に相当した。
なぜならば、それらはｈＩＬ−４Ｒよりも多量に発現さ
れていたからである。

【００９８】２種のｈＩＬ−１３ＲαおよびｈＩＬ−４
Ｒ鎖存在下にて再構成したこれらの高親和性受容体は、
２種のサイトカインを認識することができた（図１９Ｄ
および１９Ｈ）。このことは、ＩＬ−４が全ての結合性
ＩＬ−１３を置換する匹敵量で２種のｈＩＬ−１３Ｒα
およびｈＩＬ−４Ｒ鎖を同時発現しているＣＯＳ／ｐＳ
Ｅ１細胞でさえより明らかであった。

【００９９】組換えヒトＩＬ−１３Ｒαの親和性は、マ
ウスＩＬ−１３Ｒα受容体について記載されているもの
（２−１０ｎＭ）（参照２２）に匹敵した。以前に記載
されたｈＩＬ−１３Ｒβ鎖とは反対に、ヒトＩＬ−１３
Ｒαはそれ自体の上に高親和性結合部位を構成しなかっ
た。したがって、ＩＬ−１３ＲαおよびＩＬ−４Ｒは、
細胞膜中で相互作用して高親和性受容体を再構成する。

【０１００】実施例９ｈＩＬ−１３ＲαおよびｈＩＬ−４Ｒを同時発現してい
るＣＨＯ細胞におけるＩＬ−１３およびＩＬ−４による
ＳＴＡＴ蛋白質の活性化ヒトＰＢＭＣ細胞において、ｈＩＬ−４およびＩＬ−１
３は、後期転写因子であるＳＴＡＴ６をリン酸化するJA
K(janus)ファミリーの２種のチロシンキナーゼ、Ｊａｋ
１およびＪａｋ２を活性化した。この活性化された因子
は核に入り、ＩＬ−４によって調節された遺伝子のプロ
モーター中の特異的エレメントに結合した。

【０１０１】本発明者らは、電気泳動移動度スイッチア
ッセイ（ＥＭＳＡ）におけるプローブとしてヒトＣεプ
ロモーターのＣεエレメントを選択して、ＳＴＡＴ６と
同様な結合因子のＩＬ−１３による活性化を立証した。

【０１０２】１００ｎｇ／ｍｌＩＬ−１３またはＩＬ
−４で、３７℃にて１０分間刺激した、ＩＬ−１３Ｒ単
独、ＩＬ−４Ｒ単独、または２種の鎖を一緒に発現して
いるＣＨＯ細胞の核抽出物を、放射性同位元素標識化Ｃ
εエレメントと共にインキュベートした。

【０１０３】ｈＩＬ−１３ＲαおよびｈＩＬ−４Ｒを同
時発現している細胞の核抽出物は、当該細胞がＩＬ−４
またはＩＬ−１３のいずれで誘導されていようが、ＥＭ
ＳＡにおいて同一の移動度を有する複合体を形成した
（図２０を参照されたし）。一方、いずれかの鎖を単独
で発現している細胞を用いると、複合体は全く検出され
なかった。

【０１０４】したがって、ｈＩＬ−１３ＲαおよびｈＩ
Ｌ−４Ｒαを発現しているＣＨＯ細胞においては、ＩＬ
−１３およびＩＬ−４が同一のシグナリング経路を始動
させる。

【０１０５】

【発明の効果】本明細書に記載したＩＬ−１３Ｒβおよ
びＩＬ−１３Ｒαのクローニングにより、ＩＬ−４によ
って誘導される応答に匹敵する、ＩＬ−１３によって特
異的に誘導される応答に関与する因子の知識を改善する
ことができる。加えて、ＩＬ−１３がキーとなる役割を
演ずる正常および病理状態下の受容体の発現の調節を研
究するためのツールを有することができた。さらに、ｃ
ＤＮＡの入手可能性により、ＩＬ-４／ＩＬ-１３受容体
複合体の再構成に必要な他の蛋白質を容易にクローニン
グすることができ、また、ＩＬ-１３の活性の特異的な
アンタゴニストとなり得る新規な医薬生成物の製造また
は合理的なモデリングにも有用である。

【０１０６】参照：１．Minty，A．らによるNature，1993，362，248-250．２．McKenzie，A．N．らによるProc．Natl．Acad．Sc
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【０１０７】１１．Herbert，J．M.らによるFebs Let
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041-3045．

【０１０８】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Sanofi-Synthelabo <120> IL-13 receptor polypeptide <130> BET 96/884 <140> PCT/FR96/01756 <141> 1996-11-07 <150> FR 95/14424 <151> 1995-12-06 <160> 4 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 1298 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 ggtgcctgtc ggcggggaga gaggcaatat caaggtttta aatctcggag aaatggcttt 60 cgtttgcttg gctatcggat gcttatatac ctttctgata agcacaacat ttggctgtac 120 ttcatcttca gacaccgaga taaaagttaa ccctcctcag gattttgaga tagtggatcc 180 cggatactta ggttatctct atttgcaatg gcaaccccca ctgtctctgg atcattttaa 240 ggaatgcaca gtggaatatg aactaaaata ccgaaacatt ggtagtgaaa catggaagac 300 catcattact aagaatctac attacaaaga tgggtttgat cttaacaagg gcattgaagc 360 gaagatacac acgcttttac catggcaatg cacaaatgga tcagaagttc aaagttcctg 420 ggcagaaact acttattgga tatcaccaca aggaattcca gaaactaaag ttcaggatat 480 ggattgcgta tattacaatt ggcaatattt actctgttct tggaaacctg gcataggtgt 540 acttcttgat accaattaca acttgtttta ctggtatgag ggcttggatc atgcattaca 600 gtgtgttgat tacatcaagg ctgatggaca aaatatagga tgcagatttc cctatttgga 660 ggcatcagac tataaagatt tctatatttg tgttaatgga tcatcagaga acaagcctat 720 cagatccagt tatttcactt ttcagcttca aaatatagtt aaacctttgc cgccagtcta 780 tcttactttt actcgggaga gttcatgtga aattaagctg aaatggagca tacctttggg 840 acctattcca gcaaggtgtt ttgattatga aattgagatc agagaagatg atactacctt 900 ggtgactgct acagttgaaa atgaaacata caccttgaaa acaacaaatg aaacccgaca 960 attatgcttt gtagtaagaa gcaaagtgaa tatttattgc tcagatgacg gaatttggag 1020 tgagtggagt gataaacaat gctgggaagg tgaagaccta tcgaagaaaa ctttgctacg 1080 tttctggcta ccatttggtt tcatcttaat attagttata tttgtaaccg gtctgctttt 1140 gcgtaagcca aacacctacc caaaaatgat tccagaattt ttctgtgata catgaagact 1200 ttccatatca agagacatgg tattgactca acagtttcca gtcatggcca aatgttcaat 1260 atgagtctca ataaactgaa tttttcttgc gaatgttg 1298 <210> 2 <211> 380 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Ala Phe Val Cys Leu Ala Ile Gly Cys Leu Tyr Thr Phe Leu Ile 1 5 10 15 Ser Thr Thr Phe Gly Cys Thr Ser Ser Ser Asp Thr Glu Ile Lys Val 20 25 30 Asn Pro Pro Gln Asp Phe Glu Ile Val Asp Pro Gly Tyr Leu Gly Tyr 35 40 45 Leu Tyr Leu Gln Trp Gln Pro Pro Leu Ser Leu Asp His Phe Lys Glu 50 55 60 Cys Thr Val Glu Tyr Glu Leu Lys Tyr Arg Asn Ile Gly Ser Glu Thr 65 70 75 80 Trp Lys Thr Ile Ile Thr Lys Asn Leu His Tyr Lys Asp Gly Phe Asp 85 90 95 Leu Asn Lys Gly Ile Glu Ala Lys Ile His Thr Leu Leu Pro Trp Gln 100 105 110 Cys Thr Asn Gly Ser Glu Val Gln Ser Ser Trp Ala Glu Thr Thr Tyr 115 120 125 Trp Ile Ser Pro Gln Gly Ile Pro Glu Thr Lys Val Gln Asp Met Asp 130 135 140 Cys Val Tyr Tyr Asn Trp Gln Tyr Leu Leu Cys Ser Trp Lys Pro Gly 145 150 155 160 Ile Gly Val Leu Leu Asp Thr Asn Tyr Asn Leu Phe Tyr Trp Tyr Glu 165 170 175 Gly Leu Asp His Ala Leu Gln Cys Val Asp Tyr Ile Lys Ala Asp Gly 180 185 190 Gln Asn Ile Gly Cys Arg Phe Pro Tyr Leu Glu Ala Ser Asp Tyr Lys 195 200 205 Asp Phe Tyr Ile Cys Val Asn Gly Ser Ser Glu Asn Lys Pro Ile Arg 210 215 220 Ser Ser Tyr Phe Thr Phe Gln Leu Gln Asn Ile Val Lys Pro Leu Pro 225 230 235 240 Pro Val Tyr Leu Thr Phe Thr Arg Glu Ser Ser Cys Glu Ile Lys Leu 245 250 255 Lys Trp Ser Ile Pro Leu Gly Pro Ile Pro Ala Arg Cys Phe Asp Tyr 260 265 270 Glu Ile Glu Ile Arg Glu Asp Asp Thr Thr Leu Val Thr Ala Thr Val 275 280 285 Glu Asn Glu Thr Tyr Thr Leu Lys Thr Thr Asn Glu Thr Arg Gln Leu 290 295 300 Cys Phe Val Val Arg Ser Lys Val Asn Ile Tyr Cys Ser Asp Asp Gly 305 310 315 320 Ile Trp Ser Glu Trp Ser Asp Lys Gln Cys Trp Glu Gly Glu Asp Leu 325 330 335 Ser Lys Lys Thr Leu Leu Arg Phe Trp Leu Pro Phe Gly Phe Ile Leu 340 345 350 Ile Leu Val Ile Phe Val Thr Gly Leu Leu Leu Arg Lys Pro Asn Thr 355 360 365 Tyr Pro Lys Met Ile Pro Glu Phe Phe Cys Asp Thr 370 375 380 <210> 3 <211> 4009 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 tcagcccggc cgggctccga ggcgagaggc tgcatggagt ggccggcgcg gctctgcggg 60 ctgtgggcgc tgctgctctg cgccggcggc gggggcgggg gcgggggcgc cgcgcctacg 120 gaaactcagc cacctgtgac aaatttgagt gtctctgttg aaaacctctg cacagtaata 180 tggacatgga atccacccga gggagccagc tcaaattgta gtctatggta ttttagtcat 240 tttggcgaca aacaagataa gaaaatagct ccggaaactc gtcgttcaat agaagtaccc 300 ctgaatgaga ggatttgtct gcaagtgggg tcccagtgta gcaccaatga gagtgagaag 360 cctagcattt tggttgaaaa atgcatctca cccccagaag gtgatcctga gtctgctgtg 420 actgagcttc aatgcatttg gcacaacctg agctacatga agtgttcttg gctccctgga 480 aggaatacca gtcccgacac taactatact ctctactatt ggcacagaag cctggaaaaa 540 attcatcaat gtgaaaacat ctttagagaa ggccaatact ttggttgttc ctttgatctg 600 accaaagtga aggattccag ttttgaacaa cacagtgtcc aaataatggt caaggataat 660 gcaggaaaaa ttaaaccatc cttcaatata gtgcctttaa cttcccgtgt gaaacctgat 720 cctccacata ttaaaaacct ctccttccac aatgatgacc tatatgtgca atgggagaat 780 ccacagaatt ttattagcag atgcctattt tatgaagtag aagtcaataa cagccaaact 840 gagacacata atgttttcta cgtccaagag gctaaatgtg agaatccaga atttgagaga 900 aatgtggaga atacatcttg tttcatggtc cctggtgttc ttcctgatac tttgaacaca 960 gtcagaataa gagtcaaaac aaataagtta tgctatgagg atgacaaact ctggagtaat 1020 tggagccaag aaatgagtat aggtaagaag cgcaattcca cactctacat aaccatgtta 1080 ctcattgttc cagtcatcgt cgcaggtgca atcatagtac tcctgcttta cctaaaaagg 1140 ctcaagatta ttatattccc tccaattcct gatcctggca agatttttaa agaaatgttt 1200 ggagaccaga atgatgatac tctgcactgg aagaagtacg acatctatga gaagcaaacc 1260 aaggaggaaa ccgactctgt agtgctgata gaaaacctga agaaagcctc tcagtgatgg 1320 agataattta tttttacctt cactgtgacc ttgagaagat tcttcccatt ctccatttgt 1380 tatctgggaa cttattaaat ggaaactgaa actactgcac catttaaaaa caggcagctc 1440 ataagagcca caggtcttta tgttgagtcg cgcaccgaaa aactaaaaat aatgggcgct 1500 ttggagaaga gtgtggagtc attctcattg aattataaaa gccagcaggc ttcaaactag 1560 gggacaaagc aaaaagtgat gatagtggtg gagttaatct tatcaagagt tgtgacaact 1620 tcctgaggga tctatacttg ctttgtgttc tttgtgtcaa catgaacaaa ttttatttgt 1680 aggggaactc atttggggtg caaatgctaa tgtcaaactt gagtcacaaa gaacatgtag 1740 aaaacaaaat ggataaaatc tgatatgtat tgtttgggat cctattgaac catgtttgtg 1800 gctattaaaa ctcttttaac agtctgggct gggtccggtg gctcacgcct gtaatcccag 1860 caatttggga gtccgaggcg ggcggatcac tcgaggtcag gagttccaga ccagcctgac 1920 caaaatggtg aaacctcctc tctactaaaa ctacaaaaat taactgggtg tggtggcgcg 1980 tgcctgtaat cccagctact cgggaagctg aggcaggtga attgtttgaa cctgggaggt 2040 ggaggttgca gtgagcagag atcacaccac tgcactctag cctgggtgac agagcaagac 2100 tctgtctaaa aaacaaaaca aaacaaaaca aaacaaaaaa acctcttaat attctggagt 2160 catcattccc ttcgacagca ttttcctctg ctttgaaagc cccagaaatc agtgttggcc 2220 atgatgacaa ctacagaaaa accagaggca gcttctttgc caagaccttt caaagccatt 2280 ttaggctgtt aggggcagtg gaggtagaat gactccttgg gtattagagt ttcaaccatg 2340 aagtctctaa caatgtattt tcttcacctc tgctactcaa gtagcattta ctgtgtcttt 2400 ggtttgtgct aggcccccgg gtgtgaagca cagacccctt ccaggggttt acagtctatt 2460 tgagactcct cagttcttgc cacttttttt tttaatctcc accagtcatt tttcagacct 2520 tttaactcct caattccaac actgatttcc ccttttgcat tctccctcct tcccttcctt 2580 gtagcctttt gactttcatt ggaaattagg atgtaaatct gctcaggaga cctggaggag 2640 cagaggataa ttagcatctc aggttaagtg tgagtaatct gagaaacaat gactaattct 2700 tgcatatttt gtaacttcca tgtgagggtt ttcagcattg atatttgtgc attttctaaa 2760 cagagatgag gtggtatctt cacgtagaac attggtattc gcttgagaaa aaaagaatag 2820 ttgaacctat ttctctttct ttacaagatg ggtccaggat tcctcttttc tctgccataa 2880 atgattaatt aaatagcttt tgtgtcttac attggtagcc agccagccaa ggctctgttt 2940 atgcttttgg ggggcatata ttgggttcca ttctcaccta tccacacaac atatccgtat 3000 atatcccctc tactcttact tcccccaaat ttaaagaagt atgggaaatg agaggcattt 3060 cccccacccc atttctctcc tcacacacag actcatatta ctggtaggaa cttgagaact 3120 ttatttccaa gttgttcaaa catttaccaa tcatattaat acaatgatgc tatttgcaat 3180 tcctgctcct aggggagggg agataagaaa ccctcactct ctacaggttt gggtacaagt 3240 ggcaacctgc ttccatggcc gtgtagaagc atggtgccct ggcttctctg aggaagctgg 3300 ggttcatgac aatggcagat gtaaagttat tcttgaagtc agattgaggc tgggagacag 3360 ccgtagtaga tgttctactt tgttctgctg ttctctagaa agaatatttg gttttcctgt 3420 ataggaatga gattaattcc tttccaggta ttttataatt ctgggaagca aaacccatgc 3480 ctccccctag ccatttttac tgttatccta tttagatggc catgaagagg atgctgtgaa 3540 attcccaaca aacattgatg ctgacagtca tgcagtctgg gagtggggaa gtgatctttt 3600 gttcccatcc tcttctttta gcagtaaaat agctgaggga aaagggaggg aaaaggaagt 3660 tatgggaata cctgtggtgg ttgtgatccc taggtcttgg gagctcttgg aggtgtctgt 3720 atcagtggat ttcccatccc ctgtgggaaa ttagtaggct catttactgt tttaggtcta 3780 gcctatgtgg attttttcct aacataccta agcaaaccca gtgtcaggat ggtaattctt 3840 attctttcgt tcagttaagt ttttcccttc atctgggcac tgaagggata tgtgaaacaa 3900 tgttaacatt tttggtagtc ttcaaccagg gattgtttct gtttaacttc ttataggaaa 3960 gcttgagtaa aataaatatt gtctttttgt atgtcaccca aaaaaaaaa 4009 <210> 4 <211> 427 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Glu Trp Pro Ala Arg Leu Cys Gly Leu Trp Ala Leu Leu Leu Cys 1 5 10 15 Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Pro Thr Glu Thr Gln 20 25 30 Pro Pro Val Thr Asn Leu Ser Val Ser Val Glu Asn Leu Cys Thr Val 35 40 45 Ile Trp Thr Trp Asn Pro Pro Glu Gly Ala Ser Ser Asn Cys Ser Leu 50 55 60 Trp Tyr Phe Ser His Phe Gly Asp Lys Gln Asp Lys Lys Ile Ala Pro 65 70 75 80 Glu Thr Arg Arg Ser Ile Glu Val Pro Leu Asn Glu Arg Ile Cys Leu 85 90 95 Gln Val Gly Ser Gln Cys Ser Thr Asn Glu Ser Glu Lys Pro Ser Ile 100 105 110 Leu Val Glu Lys Cys Ile Ser Pro Pro Glu Gly Asp Pro Glu Ser Ala 115 120 125 Val Thr Glu Leu Gln Cys Ile Trp His Asn Leu Ser Tyr Met Lys Cys 130 135 140 Ser Trp Leu Pro Gly Arg Asn Thr Ser Pro Asp Thr Asn Tyr Thr Leu 145 150 155 160 Tyr Tyr Trp His Arg Ser Leu Glu Lys Ile His Gln Cys Glu Asn Ile 165 170 175 Phe Arg Glu Gly Gln Tyr Phe Gly Cys Ser Phe Asp Leu Thr Lys Val 180 185 190 Lys Asp Ser Ser Phe Glu Gln His Ser Val Gln Ile Met Val Lys Asp 195 200 205 Asn Ala Gly Lys Ile Lys Pro Ser Phe Asn Ile Val Pro Leu Thr Ser 210 215 220 Arg Val Lys Pro Asp Pro Pro His Ile Lys Asn Leu Ser Phe His Asn 225 230 235 240 Asp Asp Leu Tyr Val Gln Trp Glu Asn Pro Gln Asn Phe Ile Ser Arg 245 250 255 Cys Leu Phe Tyr Glu Val Glu Val Asn Asn Ser Gln Thr Glu Thr His 260 265 270 Asn Val Phe Tyr Val Gln Glu Ala Lys Cys Glu Asn Pro Glu Phe Glu 275 280 285 Arg Asn Val Glu Asn Thr Ser Cys Phe Met Val Pro Gly Val Leu Pro 290 295 300 Asp Thr Leu Asn Thr Val Arg Ile Arg Val Lys Thr Asn Lys Leu Cys 305 310 315 320 Tyr Glu Asp Asp Lys Leu Trp Ser Asn Trp Ser Gln Glu Met Ser Ile 325 330 335 Gly Lys Lys Arg Asn Ser Thr Leu Tyr Ile Thr Met Leu Leu Ile Val 340 345 350 Pro Val Ile Val Ala Gly Ala Ile Ile Val Leu Leu Leu Tyr Leu Lys 355 360 365 Arg Leu Lys Ile Ile Ile Phe Pro Pro Ile Pro Asp Pro Gly Lys Ile 370 375 380 Phe Lys Glu Met Phe Gly Asp Gln Asn Asp Asp Thr Leu His Trp Lys 385 390 395 400 Lys Tyr Asp Ile Tyr Glu Lys Gln Thr Lys Glu Glu Thr Asp Ser Val 405 410 415 Val Leu Ile Glu Asn Leu Lys Lys Ala Ser Gln 420 425

【図面の簡単な説明】

【図１】Ｃａｋｉ-１細胞中に存在するヒトＩＬ-１３
Ｒβ受容体の特徴付けを示す。［^１２５Ｉ］で標識した
ＩＬ-１３の飽和曲線のスキャッチャード解析（挿入
図）。

【図２】Ｃａｋｉ-１細胞中に存在するヒトＩＬ-１３
Ｒβ受容体の特徴付けを示す。上昇してゆく濃度の非標
識ＩＬ-１３（・）およびＩＬ-４（○）存在下における
［^１２５Ｉ］［Phe43］-ＩＬ-１３-GlyTyrGlyTyrの結合
性。

【図３】Ｃａｋｉ-１細胞中に存在するヒトＩＬ-１３
Ｒβ受容体の特徴付けを示す。非標識ＩＬ−１３不存在
下（レーンａ）、および１００倍過剰量の非ＩＬ−１３
（レーンｂ）またはＩＬ-４（レーンｃ）存在下にて放
射性ＩＬ-１３を用いた交差-連結実験。

【図４】Ｃａｋｉ-１細胞中に存在するヒトＩＬ-１３
Ｒβ受容体の特徴付けを示す。ＩＬ−４Ｒ鎖に対して特
異的なモノクローナル抗体およびＩＬ−４アンタゴニス
トＹ１２４ＤＩＬ−４存在下における、ＩＬ−１３およ
びＩＬ−４によって誘導されるＩＬ−６の分泌の阻害。

【図５】ＩＬ-１３ＲβのｃＤＮＡのヌクレオチド配
列を示す。ＩＬ-１３ＲβのｃＤＮＡのヌクレオチド配
列。核酸配列の予想シグナルペプチドに相当するアミノ
酸はイタリックで示し、貫膜ドメインに相当するアミノ
酸は太字で示す。潜在的なＮ−グリコシル化部位（Asn-
X-Ser/Thr）には下線を引いている。

【図６】ＩＬ-１３ＲβのｃＤＮＡのヌクレオチド配
列を示す。ＩＬ-１３ＲβのｃＤＮＡのヌクレオチド配
列。核酸配列の予想シグナルペプチドに相当するアミノ
酸はイタリックで示し、貫膜ドメインに相当するアミノ
酸は太字で示す。潜在的なＮ−グリコシル化部位（Asn-
X-Ser/Thr）には下線を引いている。

【図７】ＩＬ-５ＲおよびＩＬ-１３Ｒβの蛋白質配列
の比較を示す。ＩＬ−１３ＲβおよびＩＬ−５Ｒ配列の
アミノ酸の整列を示す。ＩＬ−１３ＲおよびＩＬ−５Ｒ
の蛋白質配列を前記（２４）と同様に整列させている。
受容体のこのファミリーに特徴的なシステイン残基およ
びＷＳＸＷＳモチーフは四角で囲んでいる。

【図８】ＩＬ−１３Ｒβ ｍＲＮＡの発現パターンを
示す。ＲＮＡは以下の細胞から調製した：Ｃａｋｉ−１
（レーンａ）、Ａ４３１（レーンｂ）、ＴＦ−１（レー
ンｃ）、Ｕ９３７（レーンｄ）、Ｊｕｒｋａｔ（レーン
ｅ）およびＩＭ９（レーンｆ）。

【図９】ＩＬ−１３についての組換えＩＬ−１３Ｒβ
受容体の特徴付けを示す。ＣＯＳ−７細胞をＩＬ−１３
Ｒβ ｃＤＮＡでトランスフェクトし、飽和曲線のスキ
ャッチャード解析による放射性同位元素標識化ＩＬ−１
３の結合性に関する実験（挿入図）。

【図１０】ＩＬ−１３についての組換えＩＬ−１３Ｒ
β受容体の特徴付けを示す。ＣＯＳ−７細胞をＩＬ−１
３Ｒβ ｃＤＮＡでトランスフェクトし、不存在（レー
ンａ）、および１００倍過剰量の非標識ＩＬ−１３存在
（レーンｂ）下にて放射性同位元素標識化ＩＬ−１３を
用いた交差-連結実験。

【図１１】クローン化ＩＬ−１３Ｒβ、ＩＬ−４Ｒ
（ｇｐ１４０）およびγｃ鎖を用いた同時トランスフェ
クション実験につづく放射性同位元素標識化ＩＬ−１３
の結合性を示す。斜線棒グラフおよび白抜き棒グラフ
は、ＩＬ−１３の特異的結合性を表す。

【図１２】クローン化ＩＬ−１３Ｒβ、ＩＬ−４Ｒ
（ｇｐ１４０）およびγｃ鎖を用いた同時トランスフェ
クション実験につづく放射性同位元素標識化ＩＬ−４の
結合性を示す。斜線棒グラフおよび白抜き棒グラフは、
ＩＬ−４の特異的結合性を表す。

【図１３】経時発現の可溶性形態の受容体（ＩＬ−１
３Ｒβｓ）によるＩＬ−１３のＩＬ−１３Ｒβへの結合
性の阻害。２０３４でトランスフェクトした細胞上清中
のＩＬ−１３Ｒβｓの発現を、ＩＬ−１３Ｒβ（２０３
６）でトランスフェクトした細胞に対するＩＬ−１３の
結合性の阻害によって試験したグラフを示す。該上清
は、ヨウ素化リガンド中でそれを１．５倍に希釈するこ
とによって粗製状態で試験した。２０３６ＮＳＢ：過剰量の非標識ＩＬ−１３存在下にお
ける非特異的結合性。２０３６ＢＴ：２０３６でトランスフェクトした細胞に
対する合計結合性。２０３６＋ｓｇｔ２０３４：２０３４でトランスフェク
トした細胞の上清存在下における、２０３６でトランス
フェクトした細胞に対する結合性。２０３６＋ｓｇｔｐＳＥ１：対照

【図１４】安定系統上の可溶性形態の受容体（ＩＬ−
１３Ｒβｓ）によるＩＬ−１３のＩＬ−１３Ｒβへの結
合性の阻害を示す。Ｔ２０３６−２２：ＩＬ−１３Ｒβ
ｓを分泌するクローン上清不存在下における、ＩＬ−１
３Ｒβ（２０３６−２２）に対する合計結合性（参照
１００％）２０３４−４２０３４−６２０３４−１９４種のクローンＩＬ−１３Ｒβｓ２０３４−２１１２７４−２０：ＩＬ−１３Ｒβｓを発現していないＣ
ＨＯ細胞の上清存在下（対照）。

【図１５】ＩＬ-１３Ｒα ｃＤＮＡのヌクレオチド
配列を示す。ＩＬ-１３Ｒα ｃＤＮＡのヌクレオチド
配列。核酸配列から予想されるシグナルペプチドに相当
するアミノ酸には点線の下線が引かれており、貫膜ドメ
インに相当するアミノ酸には二重線の下線が引かれてい
る。潜在的なＮ−グリコシル化部位（Asn-X-Ser/Thr）
は四角で囲んでいる。

【図１６】ＩＬ-１３Ｒα ｃＤＮＡのヌクレオチド
配列を示す。ＩＬ-１３Ｒα ｃＤＮＡのヌクレオチド
配列。核酸配列から予想されるシグナルペプチドに相当
するアミノ酸には点線の下線が引かれており、貫膜ドメ
インに相当するアミノ酸には二重線の下線が引かれてい
る。潜在的なＮ−グリコシル化部位（Asn-X-Ser/Thr）
は四角で囲んでいる。

【図１７】ヒトＩＬ−１３Ｒαおよびげっ歯類ＩＬ−
１３Ｒαのアミノ酸の整列を示す。ヒトＩＬ−１３Ｒα
およびげっ歯類ＩＬ−１３Ｒαの蛋白質配列を前記（２
４）と同様に整列している。受容体のこのファミリーに
特徴的なシステイン残基およびモチーフＷＳＸＷＳは四
角で囲んでいる。

【図１８】ＩＬ−１３についての組換えＩＬ−１３Ｒ
α受容体の特徴付けを示す。ＣＨＯまたはＣＯＳ−３細
胞をＩＬ−１３Ｒαおよび／またはＩＬ−４ＲｃＤＮ
Ａでトランスフェクトし：ＩＬ−１３Ｒβ ｃＤＮＡで
トランスフェクトした（図ＡおよびＥ）、ＩＬ−１３Ｒ
β ｃＤＮＡおよびＩＬ−４ＲｃＤＮＡでトランスフ
ェクトした（図ＢおよびＦ）ＣＨＯ細胞を用いた飽和曲
線のスキャッチャード解析および該ＣＨＯ細胞に対する
［^１２５Ｉ］−ＩＬ−１３の結合性の競合実験。白抜き
および横線棒グラフは、各々、過剰量（1,000倍多い）
のＩＬ−１３またはＩＬ−４存在下の放射性同位元素標
識化ＩＬ−１３の特異的結合性を表し、黒塗り棒グラフ
は合計結合性を表している。

【図１９】ＩＬ−１３についての組換えＩＬ−１３Ｒ
α受容体の特徴付けを示す。ＣＨＯまたはＣＯＳ−３細
胞をＩＬ−１３Ｒαおよび／またはＩＬ−４ＲｃＤＮ
Ａでトランスフェクトし：ＩＬ−１３Ｒα ｃＤＮＡで
トランスフェクトした（図ＣおよびＧ）、およびＩＬ−
１３Ｒα ｃＤＮＡおよびＩＬ−４ＲｃＤＮＡでトラン
スフェクトした（図ＤおよびＨ）ＣＨＯ細胞を用いた飽
和曲線のスキャッチャード解析および該ＣＨＯ細胞に対
する［^１２５Ｉ］−ＩＬ−１３の結合性の競合実験。白
抜きおよび横線棒グラフは、各々、過剰量（1,000倍多
い）のＩＬ−１３またはＩＬ−４存在下の放射性同位元
素標識化ＩＬ−１３の特異的結合性を表し、黒塗り棒グ
ラフは合計結合性を表している。

【図２０】ＩＬ−４ＲまたはＩＬ−１３存在下にてＣ
ＨＯ細胞を活性化した後の（４または１３）ＩＬ−４単
独に対する受容体を（ＣＨＯ−４）、ＩＬ−１３Ｒα単
独に対する受容体を（ＣＨＯ−１３）、または結合受容
体ＩＬ−１３ＲαおよびＩＬ−４Ｒを（ＣＨＯ−４−１
３）発現している細胞抽出物のＥＭＳＡにおける電気泳
動移動度の比較。ｃは非活性化対照を表している。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｋ 14/715 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ４Ｈ０４５ 16/28 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｎ 5/10 1/68 ＡＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 1/68 5/00 Ｂ // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者パスクアル・フェララフランス、エフ−31290アヴィニョレ−ロラゲ、リブイーユ・サン−アシスクル (72)発明者パトリック・ロランフランス、エフ−31190オテリーヴ、“クロシェート”、シュマン・カルモンテ (72)発明者ナタリオ・ヴィータフランス、エフ−31450モンジスカール、シュマン・アル−セール45ビス番Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA63 CA04 CA05 CA09 CA11 DA02 EA04 GA11 GA18 HA03 HA08 HA12 HA14 4B063 QA01 QA12 QA18 QQ03 QQ20 QQ43 QR07 QR08 QR14 QR32 QR38 QR42 QR55 QR59 QR62 QR69 QR77 QR80 QR82 QS12 QS24 QS25 QS28 QS34 QS39 QX02 QX07 4B064 AG20 AG27 CA10 CA19 CA20 CC24 DA01 DA13 4B065 AA90X AA91X AA93Y AB01 AC14 BA01 CA24 CA44 CA46 4C084 AA02 AA06 AA07 AA17 BA01 BA02 BA08 BA22 BA23 CA53 DA46 ZB072 ZC412 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA40 DA50 DA76 DA86 EA20 EA50 FA72 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ＩＬ−１３に特異的に結合することがで
きる配列番号：２の配列のフラグメントからなり、かつ
／または細胞膜のレベルでＩＬ−１３によって特異的に
生成されるシグナルの伝達に関与し、かつ／または配列
番号：２の配列のポリペプチドに特異的な抗体によって
認識され、ならびに／あるいは配列番号２の配列のポリ
ペプチドを認識する抗体を誘導することができる精製さ
れたポリペプチド。
【請求項２】８個のＣ−末端残基が以下の６個の残
基：VRCVTLによって置換されている配列番号：２の配列
のポリペプチドの変異型であることを特徴とする精製さ
れたポリペプチド。
【請求項３】残基３４３まで伸長する配列番号：２の
配列のポリペプチドの可溶性形態であることを特徴とす
る精製されたポリペプチド。
【請求項４】残基３３７まで伸長する配列番号：２の
配列のポリペプチドの可溶性形態であることを特徴とす
る精製されたポリペプチド。
【請求項５】請求項１記載のポリペプチドをコードす
る単離された核酸。
【請求項６】ａ）ストリンジェントな条件下で配列番
号：１の配列にハイブリダイズすることができ、かつＩ
Ｌ−１３β受容体活性を有するポリペプチドをコードす
る核酸配列、およびｂ）遺伝コードの縮重による配列ａ）由来の核酸配列か
ら選択されることを特徴とする請求項５記載の単離され
た核酸。
【請求項７】配列番号１の配列のヌクレオチド番号１
からヌクレオチド１０８１まで伸長するヌクレオチドリ
ンケージからなることを特徴とする請求項６記載の核
酸。
【請求項８】配列番号１の配列のヌクレオチド番号１
からヌクレオチド１０６３まで伸長するヌクレオチドリ
ンケージからなることを特徴とする請求項６記載の核
酸。
【請求項９】請求項２記載のポリペプチドをコードす
る単離された核酸。
【請求項１０】ａ）ストリンジェントな条件下で配列
番号：１の配列にハイブリダイズすることができ、かつ
ＩＬ−１３β受容体活性を有するポリペプチドをコード
する核酸配列、およびｂ）遺伝コードの縮重による配列ａ）由来の核酸配列か
ら選択されることを特徴とする請求項９記載の単離され
た核酸。
【請求項１１】配列番号１の配列のヌクレオチド番号
１からヌクレオチド１０８１まで伸長するヌクレオチド
リンケージからなることを特徴とする請求項１０記載の
核酸。
【請求項１２】配列番号１の配列のヌクレオチド番号
１からヌクレオチド１０６３まで伸長するヌクレオチド
リンケージからなることを特徴とする請求項１０記載の
核酸。
【請求項１３】請求項３記載のポリペプチドをコード
する単離された核酸。
【請求項１４】ａ）ストリンジェントな条件下で配列
番号：１の配列にハイブリダイズすることができ、かつ
ＩＬ−１３β受容体活性を有するポリペプチドをコード
する核酸配列、およびｂ）遺伝コードの縮重による配列ａ）由来の核酸配列か
ら選択されることを特徴とする請求項１３記載の単離さ
れた核酸。
【請求項１５】配列番号：１の配列のヌクレオチド番
号１からヌクレオチド番号１０８１まで伸長するヌクレ
オチドリンケージからなることを特徴とする請求項１４
記載の核酸。
【請求項１６】配列番号：１の配列のヌクレオチド番
号１からヌクレオチド番号１０６３まで伸長するヌクレ
オチドリンケージからなることを特徴とする請求項１４
記載の核酸。
【請求項１７】配列番号：４のアミノ酸配列からなる
精製されたポリペプチド。
【請求項１８】残基３４３まで伸長する配列番号：４
の配列のポリペプチドの可溶性形態であることを特徴と
する精製されたポリペプチド。
【請求項１９】３３６および３４２の間の残基まで伸
長する配列番号：４の配列のポリペプチドの可溶性形態
であることを特徴とする精製されたポリペプチド。
【請求項２０】配列番号：３であることを特徴とする
請求項１７記載のポリペプチドをコードする単離された
核酸。
【請求項２１】請求項１８記載のポリペプチドをコー
ドする単離された核酸。
【請求項２２】ａ）ストリンジェントな条件下で配列
番号：３の配列にハイブリダイズすることができ、かつ
ＩＬ−１３α受容体活性を有するポリペプチドをコード
する核酸配列、およびｂ）遺伝コードの縮重による配列ａ）由来の核酸配列か
ら選択されることを特徴とする請求項２１記載の単離さ
れた核酸。
【請求項２３】配列番号：３の配列のヌクレオチド番
号１からヌクレオチド１０５９まで伸長するヌクレオチ
ドリンケージからなることを特徴とする請求項２２記載
の単離された核酸。
【請求項２４】配列番号：３の配列のヌクレオチド番
号１から１０４１および１０５６の間のヌクレオチドま
で伸長するヌクレオチドリンケージからなることを特徴
とする請求項２２記載の単離された核酸。
【請求項２５】請求項１９記載のポリペプチドをコー
ドする単離された核酸。
【請求項２６】ａ）ストリンジェントな条件下で配列
番号：３の配列にハイブリダイズすることができ、かつ
ＩＬ−１３α受容体活性を有するポリペプチドをコード
する核酸配列、およびｂ）遺伝コードの縮重による配列ａ）由来の核酸配列か
ら選択されることを特徴とする請求項２５記載の単離さ
れた核酸。
【請求項２７】配列番号：３の配列のヌクレオチド番
号１からヌクレオチド１０５９まで伸長するヌクレオチ
ドリンケージからなることを特徴とする請求項２６記載
の単離された核酸。
【請求項２８】配列番号：３の配列のヌクレオチド番
号１から１０４１および１０５６の間のヌクレオチドま
で伸長するヌクレオチドリンケージからなることを特徴
とする請求項２６記載の単離された核酸。
【請求項２９】請求項５ないし８いずれか１項記載の
核酸配列を含むクローニングおよび／または発現ベクタ
ー。
【請求項３０】プラスミドｐＳＥ−１であることを特
徴とする請求項２９記載のベクター。
【請求項３１】請求項２９または３０記載のベクター
でトランスフェクトした宿主細胞。
【請求項３２】ＣＯＳ−７、ＣＯＳ−３またはＣＨＯ
系統の細胞であることを特徴とする請求項３１記載の宿
主細胞。
【請求項３３】請求項２０記載の核酸配列を含むクロ
ーニングおよび／または発現ベクター。
【請求項３４】プラスミドｐＳＥ−１であることを特
徴とする請求項３３記載のベクター。
【請求項３５】請求項３３または３４記載のベクター
でトランスフェクトした宿主細胞。
【請求項３６】ＣＯＳ−７、ＣＯＳ−３またはＣＨＯ
系統の細胞であることを特徴とする請求項３５記載の宿
主細胞。
【請求項３７】配列番号：３の全体またはその相補鎖
からなることを特徴とするヌクレオチド・プローブ。
【請求項３８】生物試料中の、請求項１記載のポリペ
プチドをコードする核酸配列をストリンジェントな条件
下でのハイブリダイゼーションによって検出するため
の、あるいは、異型接合性または遺伝子転移の欠失のご
とき異常な合成または遺伝的異常を明らかにするための
配列番号：１の配列の全体またはその相補鎖からなるこ
とを特徴とするプローブを含むことを特徴とするイン・
ビトロ（in vitro）診断ツール。
【請求項３９】生物試料中の、請求項１７記載のポリ
ペプチドをコードする核酸配列をストリンジェント条件
下でのハイブリダイゼーションによって検出するため
の、あるいは、異型接合性または遺伝子転移の欠失のご
とき異常な合成または遺伝的異常を明らかにするための
請求項３７記載のプローブを含むことを特徴とするイン
・ビトロ（in vitro）診断ツール。
【請求項４０】請求項３７記載のプローブを含む染色
体異常を検出するための組成物。
【請求項４１】請求項１記載のポリペプチドをコード
する核酸配列のレベルの異常な合成または遺伝的異常を
検出するためのイン・ビトロ検出方法であって、 −所望により、前記ヌクレオチド配列の増幅の予備段階
後であってもよいが、配列番号：１またはその相補鎖か
らなるヌクレオチド・プローブを、該プローブと前記ヌ
クレオチド配列との間のハイブリダイゼーション複合体
の形成を許容するストリンジェントな条件下にて、生物
試料と接触させ； −形成され得るハイブリダイゼーション複合体を検出
し；ついで −所望により、本発明のプローブとハイブリダイゼーシ
ョン複合体を形成するヌクレオチド配列を配列決定して
もよいことを含むことを特徴とする該検出方法。
【請求項４２】請求項１７記載のポリペプチドをコー
ドする核酸配列のレベルの異常な合成または遺伝的異常
を検出するためのイン・ビトロ検出方法であって、 −所望により、前記ヌクレオチド配列の増幅の予備段階
後であってもよいが、請求項３７記載のヌクレオチド・
プローブを、該プローブと前記ヌクレオチド配列との間
のハイブリダイゼーション複合体の形成を許容するスト
リンジェントな条件下にて、生物試料と接触させ； −形成され得るハイブリダイゼーション複合体を検出
し；ついで −所望により、本発明のプローブとハイブリダイゼーシ
ョン複合体を形成するヌクレオチド配列を配列決定して
もよいことを含むことを特徴とする該検出方法。
【請求項４３】請求項６記載の核酸配列を使用するこ
とを特徴とする請求項１記載の組換えポリペプチドの産
生方法。
【請求項４４】請求項２３記載の核酸配列を使用する
ことを特徴とする請求項１７記載の組換えポリペプチド
の産生方法。
【請求項４５】配列番号：２の配列の組換えポリペプ
チドあるいは誘導体の発現を許容する条件下にて、請求
項３１記載のトランスフェクトした細胞を培養し、つい
で該組換えポリペプチドを回収することを特徴とするＩ
Ｌ−１３β受容体組換えポリペプチドの産生方法。
【請求項４６】配列番号：２の配列の組換えポリペプ
チドあるいは誘導体の発現を許容する条件下にて、請求
項３２記載のトランスフェクトした細胞を培養し、つい
で該組換えポリペプチドを回収することを特徴とするＩ
Ｌ−１３β受容体組換えポリペプチドの産生方法。
【請求項４７】配列番号：４の配列の組換えポリペプ
チドあるいは誘導体の発現を許容する条件下にて、請求
項３５記載のトランスフェクトした細胞を培養し、つい
で該組換えポリペプチドを回収することを特徴とするＩ
Ｌ−１３α受容体組換えポリペプチドの産生方法。
【請求項４８】配列番号：４の配列の組換えポリペプ
チドあるいは誘導体の発現を許容する条件下にて、請求
項３６記載のトランスフェクトした細胞を培養し、つい
で該組換えポリペプチドを回収することを特徴とするＩ
Ｌ−１３α受容体組換えポリペプチドの産生方法。
【請求項４９】請求項１記載のポリペプチドを特異的
に認識することができることを特徴とするモノクローナ
ル抗体、ポリクローナル抗体、コンジュゲート抗体また
はそれらの断片。
【請求項５０】請求項１７記載のポリペプチドを特異
的に認識することができることを特徴とするモノクロー
ナル抗体、ポリクローナル抗体、コンジュゲート抗体ま
たはそれらの断片。
【請求項５１】請求項４９記載の抗体を含む、生物試
料中の請求項１記載のポリペプチドを精製または検出す
るための組成物。
【請求項５２】請求項５０記載の抗体を含む、生物試
料中の請求項１７記載のポリペプチドを精製または検出
するための組成物。
【請求項５３】請求項４９または５０記載の少なくと
も１の抗体を、ＩＬ−１３受容体と該抗体（群）との間
の特異的な免疫複合体の可能な形成を許容する条件下
で、該生物試料と接触させ、ついで形成され得る特異的
な免疫複合体を検出することを特徴とする異常なレベル
で発現するＩＬ−１３受容体の異常な発現と関連する病
理をイン・ビトロ検出するための方法。
【請求項５４】生物試料中のＩＬ−１３受容体の異常
な発現をイン・ビトロ診断し、および／または該試料中
のＩＬ−１３受容体の発現のレベルを測定するためのキ
ットであって： −所望により支持体に結合されていてもよい、請求項４
９または５０記載のＩＬ−１３受容体に対して特異的な
少なくとも１種の抗体、および −ＩＬ−１３受容体と該抗体（群）との間の特異的な抗
原／抗体複合体の形成を明らかにするための手段、およ
び／またはこれらの複合体を定量化するための手段を含
む該キット。
【請求項５５】請求項１記載のポリペプチドまたはそ
の活性を変調させることができる剤を同定および／また
は単離するための方法であって、所望により未同定であ
ってもよい化合物または種々の化合物を含有する混合物
を、該化合物が請求項１記載のポリペプチドに対して親
和性を有するであろう場合には、該ポリペプチドと該化
合物との間の相互作用を許容する条件下にて、その表面
に該ポリペプチドを発現している細胞と接触させ、つい
で、ポリペプチドに結合した化合物、またはポリペプチ
ドの生物活性を変調させることができる化合物を検出お
よび／または単離することを特徴とする該方法。
【請求項５６】請求項１７記載のポリペプチドまたは
その活性を変調させることができる剤を同定および／ま
たは単離するための方法であって、所望により未同定で
あってもよい化合物または種々の化合物を含有する混合
物を、該化合物が請求項１７記載のポリペプチドに対し
て親和性を有するであろう場合には、該ポリペプチドと
該化合物との間の相互作用を許容する条件下にて、その
表面に該ポリペプチドを発現している細胞と接触させ、
ついで、ポリペプチドに結合した化合物、またはポリペ
プチドの生物活性を変調させることができる化合物を検
出および／または単離することを特徴とする該方法。
【請求項５７】請求項１記載のポリペプチドを有効成
分として含む医薬組成物。
【請求項５８】請求項１７記載のポリペプチドを有効
成分として含む医薬組成物。
【請求項５９】請求項２記載のポリペプチドを含むこ
とを特徴とする請求項５７記載の医薬組成物。
【請求項６０】請求項１８記載のポリペプチドを含む
ことを特徴とする請求項５８記載の医薬組成物。
【請求項６１】請求項１記載のポリペプチドを含む、
ＩＬ−１３Ｒβの活性を変調させることができる剤をス
クリーニングするための組成物。
【請求項６２】請求項１７記載のポリペプチドを含
む、ＩＬ−１３Ｒαの活性を変調させることができる剤
をスクリーニングするための組成物。
【請求項６３】請求項１記載のポリペプチドを使用す
ることを特徴とする、ＩＬ−１３Ｒβの活性を変調させ
ることができる生成物の製造法。
【請求項６４】請求項１７記載のポリペプチドを使用
することを特徴とする、ＩＬ−１３Ｒαの活性を変調さ
せることができる生成物の製造法。
【請求項６５】請求項２記載のポリペプチドを使用す
ることを特徴とするＩＬ−１３β拮抗作用を有する医薬
生成物の合成法。
【請求項６６】請求項１８記載のポリペプチドを使用
することを特徴とするＩＬ−１３α拮抗作用を有する医
薬生成物の合成法。