JP2002530272A

JP2002530272A - 薬剤組成物及び使用方法

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Publication number: JP2002530272A
Application number: JP2000554358A
Authority: JP
Inventors: グリブル，ゴードン・ダブリュー; ホンダ，タダシ; スポーン，マイケル・ビー; スー，ナンジョ
Original assignee: トラスティーズ・オヴ・ダートマス・カレッジ
Priority date: 1998-06-19
Filing date: 1999-06-18
Publication date: 2002-09-17
Anticipated expiration: 2019-06-18
Also published as: JP5210971B2; US7863327B2; US20030236303A1; ES2324966T3; US6326507B1; EP1089724B1; US20080220057A1; US7288568B2; PT1089724E; US20080234368A9; EP2062577A1; US8586775B2; CA2335505C; JP2009242409A; US8034955B2; CY1109256T1; JP4541548B2; WO1999065478A1; US20140275618A1; US9278913B2

Abstract

(57)【要約】ガン、アルツハイマー病、パーキンソン病、炎症性腸疾病、及び多発性硬化症等の疾患の化学防止治療に有用な化合物及び方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、ガン、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化、関節リュ
ーマチ、及び他の炎症性疾患等の疾患の防止または治療に有用なことが判明して
いる化合物に関する。

【０００２】ガン防止における主要なニーズの一つは、化学防止のための有効で、安全な新
しい薬剤の開発である。特に、発ガンのプロセスに含まれることが知られている
機構をターゲットにした化学防止薬剤に対するニーズが存在する。近年、発ガン
に関連する炎症の機構の研究及び新しい化学防止薬剤の開発の基礎としてのこの
ような機構の使用に関心が復活している。

【０００３】炎症と発ガンが関連する現象であるという概念がこれらの２つのプロセスを機
構的な手法で結び付けることを試みる多くの研究の主題であった。ＮＯの構造的
合成とそれぞれアルギニン及びアラキドネートからのプロスタグランジンを仲介
する酵素は、炎症または発ガンに対して比較的小さな意義を有する。対照的に、
誘導性酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）及び誘導性シクロオキシゲナーゼ（ＣＯ
Ｘ−２）の双方は、負傷または病原菌への組織の応答において重要な役割を有す
る。これらの誘導性酵素は、炎症性プロセス、負傷の最終的修復、及び発ガンの
基本的なコンポーネントである。ｉＮＯＳ及びＣＯＸ−２の生理活性は、生物体
にはっきりした利益を提供する一方、ｉＮＯＳまたはＣＯＸ−２の異常または過
剰発現は、多くの病気のプロセスの病原、特に中枢神経系の変性、発ガン、敗血
症性ショック、心筋症、関節リューマチにかかわりがある。

【０００４】スクアレンの環化により植物中で生合成されるトリテルペノイドは、多くのア
ジアの国で薬用の目的に使用される。ウルソール酸及びオレアノール酸のような
一部のものは、抗炎症性で抗発ガン性であることが知られている。しかしながら
、これらの天然起源の分子の生物活性は比較的弱く、それゆえこれらの効能を増
進する新しい類似体の合成が試みられている。いくつかのこのような合成類似体
は、ＩＦＮ−γまたはＬＰＳにより刺激されたマクロファージにおけるｉＮＯＳ
及びＣＯＸ−２のデノボ生成を抑制することができることが以前に報告された。
多くの器官における発ガンのエンハンサーとしてのｉＮＯＳ及びＣＯＸ−２の役
割は、増大する注目を集めている。それゆえ、これらの酵素の合成または活性の
抑制が化学防止の標的である。分化を誘起する、あるいはプレ悪性あるいは悪性
細胞の増殖を抑制する薬剤は、ガンの化学防止、並びに化学療法への別な機構的
なアプローチとなる。

【０００５】（発明の要約）本発明は、ガン、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化等の疾患の
防止または治療の方法及び組成物を提供する。本発明の方法は、被験者に式：

【化１３】（式中、ＡまたはＢは単結合または二重結合であり、Ｃ₁₁またはＣ₁₂は有機あるいは無機の置換部分＝Ｘを有し、Ｒ₁は１から１０により表される６員環のいずれかの位置で置換されている有機
あるいは無機の部分であり、Ｒ₂（Ｒ₂基は式で表される構造のいずれかの位置で置換されている）及びＲ₃は
水素または有機あるいは無機部分であり、またｎは０から１００の数である）の薬剤化合物を投与することを含む。

【０００６】本発明は、更に式：

【化１４】（式中、ＡまたはＢは二重結合であって、Ａが二重結合である場合には、Ｃ₁₁は有機ある
いは無機の置換部分＝Ｘを有し、またＢが二重結合である場合には、Ｃ₁₂は有機
あるいは無機の置換部分＝Ｘを有し、Ｒ₁は１から１０により表される６員環のいずれかの位置で置換されている有機
あるいは無機の部分であり、Ｒ₂（Ｒ₂基は式（Ｉ）で表される構造のいずれかの位置で置換されている）及び
Ｒ₃は水素または有機あるいは無機部分であり、またｎは０から１００の数である）を有する薬剤組成物及びそれらの使用方法に関する。

【０００７】従って、実施の形態として、本発明の組成物及び方法は、ガン、パーキンソン
病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、多発性硬化症（ＭＳ）、及び筋萎縮性
側索硬化症（ＡＬＳ）等の神経変性疾患（ＮＤＤ）、炎症性疾患、例えば、クロ
ーン疾患及び潰瘍性大腸炎等の炎症性腸疾患及び関節リューマチ（ＲＡ）等の疾
患の防止または治療に有用である。本発明の方法は、被験者におけるこのような
症状を防止または治療するために使用される。この方法は、少なくとも一部、本
発明で開示された化合物がｉＮＯＳ及びＣＯＸ−２遺伝子の転写または翻訳を抑
制し、その過剰発現が過剰のＮＯ及び／またはプロスタグランジンの生成と結び
付けられるという発見に基づいている。

【０００８】更なる面として、本発明は、マクロファージ中のインターフェロン−γ（ＩＦ
Ｎ−γ）誘導ＮＯ生成を調節するのに有効なトリテルペノイド組成物に関し、上
記組成物は少なくとも０．６μＭ未満、好ましくは０．００１μＭ未満のＩＣ₅₀ 値を有する。

【０００９】もう一つの面として、疾患を防止または治療するように、医薬として有効な量
の式（Ｉ）の組成物を被験者に投与することからなる、ｉＮＯＳまたはＣＯＸ−
２遺伝子の過剰発現を特徴とする疾患の防止または治療の方法が提供される。こ
のような疾患は、ガン、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、及
び筋萎縮性側索硬化症等の神経変性疾患、及び関節リューマチを含む。

【００１０】更なる面として、被験者においてｉＮＯＳ及びＣＯＸ−２遺伝子の転写または
翻訳を調節する方法は、ｉＮＯＳ及びＣＯＸ−２遺伝子の転写または翻訳を調節
するように、医薬として有効な量の式（Ｉ）の組成物を被験者に投与することを
含んでなる。更なるもう一つの面として、過剰のＮＯ及び／またはプロスタグラ
ンジンの生成を調節するように、医薬として有効な量の式（Ｉ）の組成物を被験
者に投与することを含んでなる過剰のＮＯ及び／またはプロスタグランジンの生
成を調節する方法が提供される。

【００１１】（発明の詳細な説明）本発明の更なる説明の前に、本明細書、実施例及び添付のクレームで使用され
る語を便宜のためにここに集める。

【００１２】定義ここで使用されるように、「有機部分」という語は、アルキル、アルキルアミ
ノ、アルコキシ、アリール、アラルキル、アリールオキシ、アルキルチオ、及び
アルキルカルボキシル等の炭素をベースとする官能基を含むことを意図する。

【００１３】ここで使用されるように、「無機部分」という語は、水素、ハロ、アミノ、ニ
トロ、チオール、及びヒドロキシル等の非炭素をベースとする官能基を含むこと
を意図する。

【００１４】ここで使用されるように、「電子吸引部分」という語は、業界で公知であり、
水素よりも電子吸引性が大きい基を指す。種々の電子吸引基が公知であり、ハロ
ゲン（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ、及びヨード基）、ニトロ、シアノ、
−ＮＲ₃ ⁺、−ＳＲ₂ ⁺、−ＮＨ₃、−ＳＯ₂Ｒ、−ＳＯ₂Ａｒ、−ＣＯＯＨ、−ＯＡ
ｒ、−ＣＯＯＲ、−ＯＲ、−ＣＯＲ、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＯＨ、−Ａｒ及び−Ｃ
Ｈ＝ＣＲ₂を含む（式中、Ａｒはアリールであり、Ｒは任意の適当な有機あるい
は無機部分、好ましくはアルキル部分を表す）。

【００１５】ここで使用されるように、「ハロ置換アルキル部分」という語は、少なくとも
一つの水素の代わりにハロゲン部分を有するアルキル部分を含むことを意図する
。「アミノ」という語は−ＮＨ₂を意味し、「ニトロ」という語は−ＮＯ₂を意味
し、「ハロゲン」という語は−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉを表し、「チオー
ル」という語は−ＳＨを意味し、また「ヒドロキシ」という語は−ＯＨを意味す
る。かくして、ここで使用されるように、「アルキルアミノ」という語は、アミ
ノ基が付いている上記に定義されているようなアルキル基を意味する。ここで使
用されるように、「アルキルチオ」という語は、スルフヒドリル基が付いている
上記に定義されているようなアルキル基を意味する。「アルキルカルボキシル」
という語はここで使用されるように、カルボキシル基が付いている上記に定義さ
れているようなアルキル基を意味する。

【００１６】「芳香族基」という語は、一つあるいはそれ以上の環を含む不飽和環状炭化水
素を含むことを意図する。芳香族基は、ゼロから４個のヘテロ原子を含む５及び
６員単環の基、例えば、ベンゼン、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾー
ル、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジ
ン、ピリダジン及びピリミジンなどを含む。芳香環は、一つあるいはそれ以上の
環位置で例えば、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルコキシ、
低級アルキルチオ、低級アルキルアミノ、低級アルキルカルボキシル、ニトロ、
ヒドロキシル、−ＣＦ₃、−ＣＮなどにより置換されることもある。

【００１７】「アルキル」という語は、直鎖アルキル基、分岐鎖アルキル基、シクロアルキ
ル（脂環式）基、アルキル置換シクロアルキル基、及びシクロアルキル置換アル
キル基を含む、飽和脂肪族基を指す。

【００１８】更に、本明細書及びクレームで使用される「アルキル」（「低級アルキル」を
含む）という語は、「非置換アルキル」及び「置換アルキル」の双方を含むこと
を意図し、後者は炭化水素骨格の一つあるいはそれ以上の炭素上の水素を置換す
る部分を有するアルキル部分を指す。このような部分は、例えば、ハロゲン、ヒ
ドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキ
シカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、ア
ルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルチオカ
ルボニル、アルコキシ、ホスフェート、ホスホナート、ホスフィナート、シアノ
、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリ−ルアミノ、ジアリールアミ
ノ、アルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミ
ノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイル及びウレイドを含む）、アミジノ
、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレー
ト、サルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、
トリフルオロメチル、シアノ、アジド、ヘテロ環、アラルキル、または芳香族あ
るいはヘテロ芳香族部分を含むことができる。炭化水素鎖上で置換された部分は
、適切ならば、それ自身置換され得ることは当業者ならば理解するであろう。シ
クロアルキルは、例えば上記の部分によって、更に置換され得る。「アラルキル
」部分は、アリールにより置換されたアルキルである（例えば、フェニルメチル
（ベンジル））。

【００１９】「アルコキシ」という語はここで使用されるように、−Ｏ−アルキル（アルキ
ルは上記されている）の構造を有する部分を指す。

【００２０】ここで使用されるような「アリール」という語は、ゼロから４個のヘテロ原子
を含む５及び６員単環の基、例えば、置換あるいは非置換のベンゼン、ピロール
、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾー
ル、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン及びピリミジンなどを含む。
アリール基は、また、ナフチル、キノリル、インドリル等の多環縮合芳香族基を
含む。芳香環は、一つあるいはそれ以上の環位置で例えば、アルキル基について
上述されたような部分により置換され得る。好ましいアリール基は、非置換及び
置換フェニル基を含む。

【００２１】「アリールオキシ」という語はここで使用されるように、−Ｏ−アリール（ア
リールは上記されている）の構造を有する部分を指す。

【００２２】「アミノ」という語は、ここで使用されるように式−ＮＲ_aＲ_b（式中、Ｒ_a及
びＲ_bは各々独立に水素、アルキル、アリール、またはヘテロ環であり、あるい
はＲ_a及びＲ_bは、付いている窒素原子と合体して、環中に３から８個の原子を有
する環状部分を形成する）の非置換及び置換部分を指す。かくして、「アミノ」
という語は、特記しない限り、ピペリジニルあるいはピロリジニル基等の環状ア
ミノ部分を含むことを意図する。「アミノ置換アミノ基」は、Ｒ_a及びＲ_bの少な
くとも一つがアミノ基により更に置換されているアミノ基を指す。

【００２３】ここで使用されるように、「被験者」という語はここで記述されているような
ある状態が起こり得る生物体を含むことを意図する。例は、ヒト、猿、牛、羊、
山羊、犬、猫、マウス、ねずみ、及びこれらのトランスゲニック種を含む。好ま
しい実施の形態として、被験者は霊長類である。更に好ましい実施の形態として
、霊長類はヒトである。被験者の他の例は、マウス、ねずみ、犬、猫、山羊、豚
、及び牛等の実験動物を含む。実験動物は、疾患用の動物モデル、例えばアルツ
ハイマー型の神経病理を持つトランスジェニックマウスとすることができる。被
験者は、パーキンソン病、アルツハイマー病、等の神経変性疾患に罹っているヒ
トとすることができる。

【００２４】ここで使用されるように、「ＩＣ₅₀」という語は得られる最大応答の５０％で
ある抑制性用量を指す。ここで使用されるような他の略号は次の通りである。Ｃ
ＤＤＯ，２−シアノ−３，１２−ジオキソオレア−１，９−ジエン−２８−ノー
ル酸；ＤＭＳＯ，ジメチルスルホキサイド；ｉＮＯＳ，誘導性酸化窒素シンター
ゼ；ＣＯＸ−２，誘導性シクロオキシゲナーゼ；ＮＧＦ，神経成長因子；ＩＢＭ
Ｘ，イソブチルメチルキサンチン；ＦＢＳ，ウシ胎仔血清；ＧＰＤＨ，グリセロ
ール３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ；Ｒ_xＲ，レチノイドＸレセプター；Ｔ
ＧＦ−β，形質転換成長因子；ＩＦＮ−γ，インターフェロン−γ；ＬＰＳ，バ
クテリア内毒素性リポポリサッカラーゼ；ＴＮＦ−α，腫瘍壊死因子−α；ＩＬ
−１β，インターロイキン−１β；ＧＡＰＤＨ，グリセロアルデヒド−３−ホス
フェートデヒドロゲナーゼ；ＭＴＴ，３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−
イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド；ＴＣＡ，トリクロロ酢
酸。

【００２５】この化合物は、経口により、あるいは皮下、静脈内、腹腔内などの投与（例え
ば、注射により）により投与される。投与経路に依って、活性化合物は、材料中
に被覆されて、酸の作用及び化合物を不活性化する他の自然条件から化合物を保
護する。

【００２６】非経口以外の投与により薬剤化合物を投与するためには、化合物を不活性化を
防止する材料により材料により被覆すること、あるいは共供与することが必要で
ある。例えば、薬剤化合物は、適切なキャリア例えば、リポゾームまたは希釈剤
中で被験者に投与される。医薬として許容しうる希釈剤は、塩溶液及びバッファ
ー水溶液を含む。リポゾームは、水−中−油−中−水ＣＧＦエマルジョン並びに
従来のリポゾームを含む。

【００２７】薬剤化合物は、また、非経口、腹腔内、髄腔内あるいは大脳内に投与される。
グリセロール、液体ポリエチレングリコール、及びこれらの混合物中で、また油
中でディスパージョンを製造することができる。貯蔵及び使用の通常条件下で、
調合物は微生物の成長を防止するために保存剤を含む。

【００２８】注射の使用に好適な医薬組成物は、無菌水溶液（水溶性である場合には）また
はディスパージョン及び無菌注射液またはディスパージョンの即席調合のための
無菌パウダーを含む。すべての場合において、組成物は無菌でなければならず、
容易に注射できる程度に流動的でなければならない。それは、製造及び貯蔵の条
件下で安定でなければならず、バクテリア及びカビ等の微生物の汚染作用に抗し
て保存されなければならない。キャリアは溶剤または分散媒体とすることができ
る。例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレン
グリコール、及び液状ポリエチレングリコールなど）、これらの好適な混合物、
及び植物油を含むレシチン等のコーティングの使用により、ディスパージョンの
場合必要とされる粒子サイズの維持により、また界面活性剤の使用により、適当
な流動性を維持することができる。種々の抗菌剤及び抗カビ剤、例えば、パラベ
ン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサルなどにより、
微生物の作用の防止が得られる。多くの場合、アイソトニック剤、例えば砂糖、
塩化ナトリウム、またはマンニトール及びソルビトール等のポリアルコールを組
成物中に含むことが好ましい。組成物中に吸収遅延剤、例えばアルミニウムモノ
ステアレートまたはゼラチンを含むことにより、注射用組成物のゆっくりした吸
収をもたらすことができる。

【００２９】薬剤化合物を、必要に応じて上に挙げた成分の一つまたは組み合わせと共に、
適切な溶剤中に必要とされる量で包含させ、その後濾過無菌化を行うことにより
、無菌注射液を作製することができる。一般に、基本的な分散媒体及び上に挙げ
た成分のうち必要とされる他の成分を含む無菌キャリア中に薬剤化合物を包含す
ることにより、ディスパージョンを作製することができる。無菌注射液作製用の
無菌パウダーの場合には、好ましい製造方法は真空乾燥及び凍結乾燥であり、そ
れは、前に濾過した無菌溶液から活性成分（すなわち、薬剤化合物）に加えて追
加の所望の成分の粉末を生成する。

【００３０】薬剤化合物、例えば、不活性希釈剤または吸収性食用キャリアと共に経口的に
投与され得る。薬剤化合物及び他の成分は、また、硬いあるいは柔らかいゼラチ
ンカプセルに包み、錠剤に圧縮され、あるいは被験者の食物中に直接に包含され
る。経口的な薬剤投与には、薬剤化合物は賦形剤と共に包含され、経口錠剤、口
内錠、トローチ、カプセル、エリキシル剤、サスペンジョン、シロップ、ウエハ
ーの形で使用される。勿論、組成物及び調合物中の薬剤化合物のパーセンテージ
は変わる。薬剤として有用な化合物中の薬剤化合物の量は、好適な用量が得られ
るような量である。

【００３１】投与の容易さ及び用量の均一さのために非経口組成物を服用単位の形に配合す
ることが特に得策である。ここで使用されるような服用単位の形は、治療を受け
る被験者に対する一回の用量として適する物理的に分けられた単位を指し、各単
位は、必要とされる医薬キャリアと一緒にして所望の薬剤効果を生み出すように
計算された予め定められた量の薬剤化合物を含む。本発明の服用単位の形に対す
る規格は、（ａ）薬剤化合物の独自の特徴と得るべき特定の薬剤効果、及び（ｂ
）被験者における選ばれた状態の治療に対してこのような薬剤化合物を混和する
当業界に固有な制約により決定され、依存する。

【００３２】活性化合物は、被験者における状態と関連する状態を治療するのに充分な薬剤
として有効な用量で投与される。「薬剤として有効な用量」は、好ましくは、治
療を受けない被験者に比べて、感染被験者における状態の症状を少なくとも約２
０％、更に好ましくは少なくとも約４０％、より好ましくは少なくとも約６０％
、更により好ましくは少なくとも約８０％低減する。例えば、化合物の効能は、
実施例及び図で示されるモデルシステム等、ヒトの病気を治療する効能を予測す
るような動物モデルシステムにおいて評価され得る。

【００３３】本発明は式

【化１５】（式中、ＡまたはＢは単結合または二重結合であり、Ｃ₁₁またはＣ₁₂は有機あるいは無機の置換部分＝Ｘを有し、Ｒ₁は１から１０により表される６員環のいずれかの位置で置換されている有機
あるいは無機の部分であり、Ｒ₂（Ｒ₂基は式で表される構造のいずれかの位置で置換されている）及びＲ₃は
水素または有機あるいは無機部分であり、またｎは０から１００の数である）を有する物質組成物を特徴とする。

【００３４】本発明は、更に式

【化１６】（式中、ＡまたはＢは二重結合であって、Ａが二重結合である場合には、Ｃ₁₁は有機ある
いは無機の置換部分＝Ｘを有し、またＢが二重結合である場合には、Ｃ₁₂は有機
あるいは無機の置換部分＝Ｘを有し、Ｒ₁は１から１０により表される６員環のいずれかの位置で置換されている有機
あるいは無機の部分であり、Ｒ₂（Ｒ₂基は式（Ｉ）で表される構造のいずれかの位置で置換されている）及び
Ｒ₃は水素または有機あるいは無機部分であり、またｎは０から１００の数である）を有する物質組成物を特徴とする。

【００３５】Ｒ₁は電子吸引基、例えばシアノ、アリール、及びハロ置換アルキル部分であ
る。好ましくは、Ｒ₁は、シアノ、ハロ、または−ＯＲ’（式中、Ｒ’はＨまた
は有機部分、例えばアセチルまたはカルボキシル基である）を含む。Ｒ₁は１か
ら１０の位置により表される６員環のいずれかで置換されているが、好ましい実
施の形態としては、Ｒ₁は位置２にあり、更に好ましい実施の形態としては、Ｒ₁ は位置２のシアノである。

【００３６】式（Ｉ）の更に好ましい実施の形態としては、Ｂは二重結合であり、ＸはＯで
あり、Ｒ₃は−ＯＨであり、Ｒ₁は好ましくは位置２のシアノである。好ましい化
合物の例は、３，１１−ジオキソオレアン−１，１２−ジエン−２８オイック酸
（3,11-dioxoolean-1,12-dien-28oic acid）、２−シアノ−３，１１−ジオキソ
オレアン−１，１２−ジエン−２８オイック酸（2-cyano-3,11-dioxoolean-1,12
-dien-28oic acid）及び２−シアノ−３，１２−ジオキソオレアン−１，９−ジ
エン−２８オイック酸（2-cyano-3,12-dioxoolean-1,9-dien-28oic acid）を含
む。

【００３７】もう一つの面として、本発明は、マクロファージ中のインターフェロン−γ（
ＩＦＮ−γ）誘導ＮＯ生成を調節するのに有効なトリテルペノイド組成物を特徴
とし、上記組成物は少なくとも０．６μＭ未満、好ましくは０．００１μＭ未満
のＩＣ₅₀値を有する

【００３８】もう一つの面として、疾患を防止または治療するように、医薬として有効な量
の式（Ｉ）の組成物を被験者に投与することからなる、ｉＮＯＳまたはＣＯＸ−
２遺伝子の過剰発現を特徴とする疾患の防止または治療の方法が提供される。好
ましい実施の形態としては、この疾患は、ガン、神経変性疾患、及び関節リュー
マチを含む。更に好ましい実施の形態としては、神経変性疾患は、パーキンソン
病、アルツハイマー病、多発性硬化、及び筋萎縮性側索硬化を含む。ガンは、乳
ガン、前立腺ガン、結腸ガン、脳腫瘍、及び骨ガンを含む。

【００３９】もう一つの面として、過剰のＮＯ及び／またはプロスタグランジンの生成を調
節するように、医薬として有効な量の式（Ｉ）の組成物を被験者に投与すること
を含んでなる、過剰のＮＯ及び／またはプロスタグランジンの生成を調節する方
法が提供される。

【００４０】もう一つの面として、被験者においてｉＮＯＳ及びＣＯＸ−２遺伝子の転写ま
たは翻訳を調節する方法は、ｉＮＯＳ及びＣＯＸ−２遺伝子の転写または翻訳を
調節するように、医薬として有効な量の式（Ｉ）の組成物を被験者に投与するこ
とを含んでなる。

【００４１】もう一つの面として、神経変性疾患を防止または治療するように、医薬として
有効な量の式（Ｉ）の組成物を被験者に投与することからなる、神経変性疾患の
防止または治療の方法が提供される。好ましい実施の形態として、神経変性疾患
は、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化、及び筋萎縮性側索硬化を
含む。

【００４２】本発明の化合物は、好ましい実施の形態として、下記

【化１７】（式中、Ｒ_xは有機あるいは無機部分、好ましくはメチルを表し、Ｙは好ましく
はヒドロキシルである）に示されるようなトリテルペノイドをベースとする式（Ｉ）に示される５個の環
をベースとする化合物である。

【００４３】トリテルペノイドは、ステロイドのように、スクアレンの環化により天然に生
成し、ウルソール酸（ＵＡ）及びオレアノール酸（ＯＡ）等、すべての３０個の
炭素原子を分子中に保持している。ＯＡ及びＵＡは多数の薬理活性を有すること
が知られているが、これらの天然起源の分子の効能は比較的弱い。しかしながら
、このに開示されているようなＯＡ及びＵＡの誘導体は、ＯＡ及びＵＡよりも効
能が大きい。

【００４４】好ましい実施の形態として、このような化合物はウルソール酸及びオレアノー
ル酸の誘導体を含む。特に好ましい実施の形態として、ＯＡ、例えば２−シアノ
−３，１２−ジオキソオレア−１，９−ジエン−２８−ノール酸（ＣＤＤＯ）の
誘導体

【化１８】は、ヒトの乳ガンの細胞成長の抑制に有効であり、図で詳述するように、マクロ
ファージにおける酸化窒素及びプロスタグランジンの生成の抑制、ヒトの乳ガン
の細胞成長の抑制、ねずみの前立腺細胞における酸化窒素の生成の抑制、及びヒ
トの結腸繊維芽細胞におけるプロスタグランジン生成の抑制等の多数のビトロア
ッセイにおいて極めて効能が高いことが見出された。

【００４５】これらの化合物は、ガン、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症
、筋萎縮性側索硬化症、関節リューマチ、炎症性腸疾病及び病原が酸化窒素また
はプロスタグランジンの過剰な生成を含むと考えられるすべての他の病気の防止
または治療に有用である。

【００４６】ｉＮＯＳまたはＣＯＸ−２のいずれかの異常あるいは過剰発現が結腸における
発ガンを含む多くの病気のプロセスの病原においてかかわりあいがあるとされて
きた。かくして、ＣＯＸ−２に対する遺伝子の過剰発現は、結腸の発ガンにおけ
る以前からの中心的なイベントである。ＡＰＣ（線腫様ｐｏｌｙｐｏｓｉｓｃ
ｏｌｉ）遺伝子における欠陥を持つマウスは、若年で多数の腸ポリープにかかり
、ＣＯＸ−２酵素レベルにおける顕著な上昇がこれらのポリープに見出されてい
る。これらの動物の発見は、多くのヒトのプライマリ結腸ガン及び結腸ガン株に
おけるＣＯＸ−２ｍＲＮＡ及びタン白の上昇したレベルと関連し、ＣＯＸ−２の
上昇は、通常、プレネオプラスティック（ｐｒｅｎｅｏｐｌａｓｉｔｉｃ）細胞
の死に導くアポトーシスの抑制に導くと考えられる。ＣＯＸ−２遺伝子のノック
アウト及びこのノックアウトを持つマウスのＡＰＣ遺伝子において損傷を持つポ
リープを持つマウスとの引き続く交配により、腸腫瘍形成へのＣＯＸ−２の機能
の関連が示された。ＣＯＸ−２ノックアウトは、子において多数のポリープの劇
的な減少を起こした。更に、選択的ＣＯＸ−２インヒビターまたは非選択的ＣＯ
Ｘ−１／ＣＯＸ−２インヒビターによる実験動物の治療は、腸ガンの化学防止へ
の有力なアプローチであると報告されている。発ガンにおけるｉＮＯＳの役割に
関しては、ＮＯは効果的な突然変異誘発物質であり、酸化窒素はまたＣＯＸ−２
を活性化することができることが明白である。更に、発ガン物質のアゾキシメタ
ンにより誘導されたラットの結腸腫瘍でのｉＮＯＳが顕著に増加する。

【００４７】ＭＳは中枢神経系の炎症性状態であることが知られている。炎症性、酸化的、
あるいは免疫的機構がＭＳ，ＡＤ，ＰＤ，及びＡＬＳの病原に含まれる。反応性
星状細胞及び活性化小膠細胞は、ＮＤＤ／ＮＩＤの因果関係においてかかわりが
あるとされてきた。酵素、ｉＮＯＳ及びＣＯＸ−２の各々の生成物としてＮＯ及
びプロスタグランジンの双方を合成する細胞として小膠細胞に特別な強調がなさ
れている。これらの酵素のデノボ生成は、インターフェロン−ガンマまたはイン
ターロイキン−１等の炎症性サイトカインにより促進される。一方、ＡＤ及びＭ
Ｓの結果としての発現及び起こり得るＰＤ及びＡＬＳを伴う、ＮＯの過剰な生成
は、神経系のニューロン及び希突起膠細胞を含む多くの器官の細胞及び組織中の
炎症性カスケード及び／または酸化的損傷に導く。疫学データは、アラキドネー
トからのプロスタグランジンの合成を阻止するＮＳＡＩＤの長期にわたる使用は
、ＡＤの進行に対するリスクを顕著に低下させる。かくして、ＮＯ及びプロスタ
グランジンの生成を阻止する薬剤がＮＤＤの防止及び治療へのアプローチにおい
て使用される。

【００４８】ここに更に開示されるのは、次の３つの重要な性質を有する、新しい合成オレ
アネートトリテルペノイド、ＣＤＤＯの合成及び生物活性である。１）悪性及び非悪性細胞の双方における分化の誘導のための有効な薬剤である。
２）それは、多くの悪性及びプレ悪性細胞の増殖のインヒビターとしてナノモル
レベルで活性である。３）それは、炎症性酵素、ｉＮＯＳ及びＣＯＸ−２のデノボ合成の抑制において
これ迄のいかなるトリテルペノイドよりも１００から５００倍の効力がある。これらの３つの作用は有用な新しい化学防止薬剤の開発に重要であり、これらは
、また、悪性腫瘍の治療に関連がある。

【００４９】本発明の実施には、特記しない限り、当業界の技術の範囲内である、細胞生物
学、細胞培養、分子生物学、微生物学、組み替え型ＲＮＡ、及び免疫学が使用さ
れる。このような方法は文献で充分説明されている。

【００５０】本発明は、次の実施例により例示されるが、これは本発明を更に限定するもの
とは考えられるべきでない。背景を含めて本出願を通して引用される、すべての
リファレンス、出願特許及び公開された特許出願はここに引用として包含されて
いる。実施例及び図において記述されているモデルにおける本発明の薬剤化合物
の効能の例示はヒトにおける効能を予測している。

【００５１】（実施例）実施例１化合物を下記のように合成した。

【化１９】

【化２０】

【００５２】ＴＨＦ中のナトリウムメトキサイドの存在下、ＯＡ（化合物９）をエチルホル
メートによりホルミル化することにより、化合物１０を調製した。酢酸エチル中
でフェニルセレニルクロライドにより化合物１０のＣ−１に二重結合を導入し、
引き続いて３０％過酸化水素を添加することによって、化合物７を得た。エタノ
ール水溶液中でヒドロキシルアミンを添加することにより、化合物１０から化合
物１１を合成した。化合物１１をナトリウムメトキサイドにより開裂することに
より、化合物１２を得た。アルカリ加水分解の後、ジョーンズ酸化することによ
り、化合物１３から化合物１４を調製した。ベンゼン中ナトリウムメトキサイド
の存在下化合物１４をエチルホルメートによりホルミル化することにより、化合
物１５を調製した。ヒドロキシルアミンを添加することにより、化合物１５から
化合物１６を合成した。１６をナトリウムメトキサイドにより開裂することによ
り、化合物１７を得た。酢酸エチル中でフェニルセレニルクロライドにより化合
物１７のＣ−１に二重結合を導入し、引き続いて３０％過酸化水素を添加し、そ
の後ＤＭＦ中ヨウ化リチウムによりハロゲノリシスを行うことによって、化合物
６（ＣＤＤＯ）を調製した。

【００５３】マウスのマクロファージにおけるＩＦＮ−γ誘導ＮＯ生成に及ぼすこれらの化
合物及びデキサメタソンのインヒビター活性を下記の表１に示す。アッセイに次
の手順を使用した。４日前に４％チオグリコレートを腹腔内に注射したメスのマ
ウスからマクロファージを収穫した。９６穴の組織培養板中にこれらの細胞を種
付けし、インヒビター試験化合物の存在下あるいは存在させずに４ｎｇ／ｍＬＩ
ＮＦ−γによりインキュベートした。４８時間後、ＮＯ生成を求めた（グリース
反応により亜硝酸塩として測定）。このアッセイの詳細は、Ｄｉｎｇら、１９９
０、Ｂｏｇｄａｎ、１９９２に示されている。化合物６（ＣＤＤＯ）は、デキサ
メタソンに類似して優れたインヒビター活性（ＩＣ₅₀，１ｎＭ）を示した。

【００５４】

【表１】

【００５５】すべての新化合物６−８は、高分解能質量スペクトル及び元素分析を含めて満
足なスペクトルデータを示した。

【００５６】次の実施例のために、ＤＭＳＯ中ＣＤＤＯ（０．０１Ｍ）のストック溶液を作
製し、一部を−２０℃で凍結した。細胞培養媒体に添加する前にＤＭＳＯ中連続
希釈を行った。プライマリラット小膠細胞及び海馬ニューロンを単離し、Ｆｌ
ａｒｉｓら、１９９３及びＲｅｎとＦｌａｎｄｅｒｓ、１９９６に記述されてい
るように培養した。

【００５７】実施例２：骨髄性白血病細胞、ＰＣ１２褐色細胞腫細胞、及び３Ｔ３−Ｌ１繊維芽細胞における分化の誘導ＣＤＤＯは、ＮＣＩ小児腫瘍学部門（ＰｅｄｉａｔｒｉｃＯｎｃｏｌｏｇｙ
Ｂｒａｎｃｈ）の化学療法耐性の患者に由来する、不充分に分化したＬＣＤＢ
急性骨髄性白血病細胞株に単球分化を誘導する。図１１は、ＲＰＭＩ１６４０／
２％ＦＢＳ中で、単独で（１１Ａ）、２．５ｎｇ／ｍｌＴＧＦ−β１（１１Ｂ）
と共に、１０−８ＭＣＤＤＯ（１１Ｃ）と共に、あるいはＴＧＦ−β１及びＣＤ
ＤＯ（１１Ｄ）の双方と共に種付けされたＬＣＤＢ細胞を図示する。４８時間後
、シトスピン（ｃｙｔｏｓｐｉｎ）スライドプレパラートを作製し、α−ナフチ
ルアセテートエステラーゼ活性（Ｓｉｇｍａのキット）について染色した。格子
付きの皿中のＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳ及び５％ウマ血清中で、単独で（１１Ｅ）
、１００ｎｇ／ｍｌ７ＳＮＧＦ（１１Ｆ）と共に、１０−６ＭＣＤＤＯ（１１
Ｇ）と共に、あるいはＮＧＦ及びＣＤＤＯ（１１Ｈ）の双方と共に、ＰＣ１２細
胞を５日間培養した。三度細胞を蒔き、少なくとも２つの別な細胞のプレーティ
ングにおいて、各処理に対して類似の結果を観察した。細胞及び神経突起のサイ
ズの定量的な像分析についての方法が記述されている。図１１Ｅのコントロール
細胞は直径がほぼ１０μｍである。３Ｔ３−Ｌ１細胞をＤＭＥＭ／５％子牛血清
中で合流で成長させ、ＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳ中ＣＤＤＯ（図１２Ａ）により、
あるいはＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳ中ＣＤＤＯ及び／またはＬＧ１００２６８（図
１２Ｂ）により処理した。その後２日毎に、ＣＤＤＯまたはＬＧ１００２６８の
添加なしで、媒体をＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳに変えた。８日目（図１２Ａ）また
は６日目（図１２Ｂ）に細胞を収集し、３４０ｎｍにおけるＮＡＤＨの消費に対
する標準のアッセイを用いて、ＧＰＤＨを溶解物で測定した。これらの細胞は単
球／マクロファージマーカー、α−ナフチルエステラーゼを発現しない（図１１
Ａ）。しかしながら、４８時間内に、ＣＤＤＯ（１０−８Ｍ）は、組織化学的に
求められるように、この酵素の活性を誘導した。ＴＧＦ−β１によるＬＣＤＢ細
胞の処理（２．５ｎｇ／ｍｌ）は、また、α−ナフチルエステラーゼ活性を誘導
し、双方の薬剤を使用する場合には追加の効果があった。ＣＤＤＯは、それ自身
であるいはＴＧＦ−β１と組み合わせて、ヒト単球白血病株、ＴＨＰ−１、及び
ヒトプロ骨髄性白血病株、ＮＢ４（データは示さず）に対して分化効果を有する
。

【００５８】ニューロン成長及び分化の研究に、ラット褐色細胞腫細胞株、ＰＣ１２は、広
く使用されてきた。ＮＧＦによるこれらの腫瘍細胞の処理は、多大な神経突起成
長と共に、ニューロン形質誘導することが知られている。ＣＤＤＯは、ＮＧＦの
これらの効果を著しく可能にする。図１１Ｅ及びＦは、ＮＧＦによる神経突起成
長の誘導を示す。ＣＤＤＯ（１０−６Ｍ）はそれ自身神経突起形成を誘導しない
が、それは、細胞をして、大きな、平らな形状をとらしめる（図１１Ｇ）。ＮＧ
Ｆと組み合わせて使用する場合、ＣＤＤＯ（図１１Ｈ）はプライマリ神経突起
／細胞の数をほとんど倍加させ（１．２±０．２Ｓ．Ｅ．Ｍ．から２．１±０．
１、ｐ＜０．００１）、神経突起の長さの３倍以上（２８±６から９９±９ミク
ロン、ｐ＜０．００１）の増加と、神経突起／細胞の５倍の増加（０．２３±０
．０６から１．１３±０．０８、ｐ＜０．００１）を引き起こす。かくして、Ｃ
ＤＤＯは、細胞サイズ、並びに神経突起樹枝状分岐の程度と複雑性を増加させる
ことにより、ＰＣ１２細胞のニューロン分化を増進させる。

【００５９】ＣＤＤＯが分化を誘導する第３の細胞のタイプは、３Ｔ３−Ｌ１繊維芽細胞で
ある。これらの非塑性繊維芽細胞は、古典的に誘導されて、インシュリン、デキ
サメタソン、及びＩＢＭＸの組み合わせにより含脂肪細胞を形成する。１０^-8Ｍ
の低用量でのＣＤＤＯ（図１２Ａ）による処理は、トリグリセライド合成におけ
るキー酵素として知られている、マーカーのＧＰＤＨの誘導により測定されるよ
うに、含脂肪細胞分化を引き起こした。酵素アッセイによる結果は、脂滴に対し
て染色するオイルレッドＯにより確かめられた（データは示さず）。更に、ＣＤ
ＤＯはＲ_xＲ選択的レチノイドのＬＧ１００２６８と共に相乗的に作用して、含
脂肪細胞の化を促進する（図１２Ｂ）。

【００６０】実施例３：ＣＤＤＯによる多くの悪性及びプレ悪性細胞の増殖の抑制細胞増殖のインヒビターは、有用な化学防止及び化学治療薬剤であることが知
られている。極めて攻撃的な白血病及び悪性腫瘍、並びに非塑性組織に由来する
広範な多様な細胞に対して、ＣＤＤＯを試験した。Ｄａｎｉｅｌｐｏｕｒら、１
９９４に記述されているように、ＮＲＰ−１５２細胞を成長させた。１７−β−
エストラジオール（１０ｐＭ）を添加したフェノールレッドを含まないＲＰＭＩ
／１０％炭除去したＦＢＳ中でＭＣＦ−７細胞を成長させた。プレーティング時
、トリテルペノイドを添加し、７２時間後³Ｈ−チミジン（１μＣｉ／穴）を添
加し、２時間の最終インキュベーションを行った。細胞をＴＣＡ（１０％）によ
り沈殿させ、洗浄し、可溶化した後チミジンの包含を測定した。図１３で使用さ
れたシンボルは、ＣＤＤＯ（中黒の正方形）、ＴＰ−８２（○）、及びオレアノ
ール酸（●）である。

【００６１】２つの細胞タイプ、ヒトＭＣＦ−７乳の悪性腫瘍及び非悪性前立腺上皮につい
ての典型的な用量−応答曲線を図１３に示す。ＣＤＤＯは、これらの細胞におけ
るチミジンの包含を抑制することにおいて、ナノモル領域において極めて活性で
あり、一方、ＴＰ−８２は著しく低活性であり、オレアノール酸は１μＭあるい
はそれ以下で実質的に活性がない。

【００６２】他のガン細胞について得られた結果を表２に示す。（１）エストロゲン受容体
ネガチブの乳ガンのいくつかの株はＣＤＤＯに敏感である。エストロゲン受容体
ポジチブのＭＣＦ−７細胞も同様である。（２）たとえ、腫瘍細胞がＳｍａｄ−
４／ＤＰＣ₄突然変異を有し、それゆえ、ＴＧＦ−βの成長抑制作用に敏感でな
いとしても、Ｓｗ６２６卵巣悪性腫瘍、ＣＡＰＡＮ−１及びＡｓＰｃ−１膵臓悪
性腫瘍、及びＭＤＡ−ＭＢ−４６８乳悪性腫瘍細胞の場合に見られるように、こ
れらはなおＣＤＤＯに応答する。（３）特に骨髄系統の多くの白血病細胞はＣＤ
ＤＯに極めて敏感であることに注目されたい。

【００６３】

【表２】

【００６４】実施例４：ＣＤＤＯによるｉＮＯＳ及びＣＯＸ−２のデノボ合成の阻害ＣＤＤＯは、酵素のｉＮＯＳ及びＣＯＸ−２のデノボ生成を誘導するいくつか
の炎症性サイトカインの能力を阻害することにおいて高活性である（図１４）。
図１４（Ａ）はウエスターンブロットを図示する。プライマリマウスマクロファ
ージ、ＩＦＮ−γ，１０ｎｇ／ｍｌ、ＬＰＳ，２ｎｇ／ｍｌを添加し、トリテル
ペノイドまたはデキサメタソンと一緒に培養した（濃度はμＭで示す）。細胞を
１２時間で収集した。図１４（Ｂ）はノーザンブロット、ＲＡＷ２６４．７マク
ロファージ様細胞株を図示する。ＩＦＮ−γ，１０ｎｇ／ｍｌ、ＬＰＳ，１ｎｇ
／ｍｌ、ＴＮＦ−α，１０ｎｇ／ｍｌを添加し、トリテルペノイドまたはデキサ
メタソンと一緒に培養した。ＲＮＡを１２時間後に調製した。ＧＡＰＨＤＨをロ
ーディングコントロールとして使用した。図１４（Ｃ）はプライマリマクロファ
ージにおけるＮＯ及びＰＧＥ２の生成の抑制を図示する。ＮＯの試験には、ＣＤ
ＤＯ（中黒の正方形）、デキサメタソン（○）、ＴＰ−８２（□）、またはオレ
アノール酸（中黒の三角形）と一緒に、細胞をＩＦＮ−γ，１０ｎｇ／ｍｌによ
り処理した。４８時間後、上澄みをグリース反応によりＮＯについて分析した。
ＰＧＥ２の試験には、同じ組みのインヒビターと一緒に、細胞をＩＦＮ−γ，５
ｎｇ／ｍｌ、及びにＬＰＳ，５ｎｇ／ｍｌより処理した。４８時間後、ＰＧＥ２
をイムノアッセイにより上澄み中で測定した。ＮＯ及びＰＧＥ２に対するコント
ロール値（インヒビターなし）は、それぞれ４．７ｎモル／２×１０⁵細胞及び
２．２ｎｇ／ｍｌ／２×１０⁵細胞であった。図１４（Ｄ）及び１４（Ｅ）は、
ＭＥＭ／１０％ＦＢＳ中で成長させた１８Ｃｏ細胞を図示する（ヒト結腸筋繊維
芽細胞）。他の方法はマウスマクロファージについて上記に報告したのと同じで
ある。図１４（Ｄ）は、ＩＬ−１β（３０ｐｇ／ｍｌ）による誘導の後のＣＯＸ
−２ｍ−ＲＮＡの抑制に対する用量−応答を示すノーザンブロットを図示する。
図（Ｅ）においては、ウエスターンブロットは、ＣＯＸ−２タン白の抑制を示す
。ＩＬ−１β（３０ｐｇ／ｍｌ）と一緒にＣＤＤＯを添加した。また、ＣＤＤＯ
による細胞上澄みにおけるＰＧＥ２の蓄積性の生成の抑制も示される。

【００６５】ＣＤＤＯのこれらの効果は、プライマリマウスマクロファージ、マクロファー
ジ様腫瘍細胞株、及びヒト結腸繊維芽細胞において見られる（ＲＡＷ２６４．７
）。図１４（Ａ）は、プライマリマクロファージについてのウエスターンブロッ
トを示す。ＩＦＮ−γまたはＬＰＳ等の炎症性メヂエーターにより刺激される迄
、ｉＮＯＳまたはＣＯＸ−２の発現もこれらの細胞では検出することができない
。１μＭまたはそれ以下の濃度のＣＤＤＯは、ｉＮＯＳ及びＣＯＸ−２タン白双
方の発現を阻害する。図１３に見られるように、再度、ＣＤＤＯのＣ−２でのニ
トリル機能の重要性を図１４（Ａ）に示す。図１４（Ｂ）は、ＣＤＤＯ（１０−
６Ｍ）がＲＡＷ２６４．７細胞におけるｉＮＯＳ及びＣＯＸ−２の双方に対する
ｍＲＮＡ発現のレベルを７５％以上低下させることを表すノーザンブロットを示
す。プライマリマクロファージにおいて測定されるように、ｉＮＯＳ及びＣＯＸ
−２に及ぼす上記の効果はまた酵素生成物、ＮＯ及びＰＧＥ２それぞれの蓄積性
の生成に反映されている図１４（Ｃ）。ＣＤＤＯによる顕著な抑制が１０^-9Ｍと
いう低濃度で見られ、これはＴＰ−８２またはオレアノール酸よりも著しく活性
であった。しかしながら、これらの２つの酵素の合成が既に誘導されたＲＡＷ細
胞に添加する場合、ＮＯまたはプロスタグランジンの生成に直接の効果を持たな
いので、ＣＤＤＯは、ｉＮＯＳまたはＣＯＸ−２の酵素活性の直接のインヒビタ
ーでない（データは示さず）。同様に、ＣＤＤＯの作用は、糖質コルチコイド受
容体に結合することが知られている糖質コルチコイド拮抗薬のＲＵ−４８６によ
り阻害されない（データは示さず）。これらの点で、ＣＤＤＯは、以前に試験さ
れた他のオレアノール酸誘導体と同じである。

【００６６】ＣＤＤＯがＣＯＸ−２のデノボ生成の高効率のインヒビターである第２のタイ
プの細胞は、結腸繊維芽細胞である。結腸発ガンにおける間質性細胞ＣＯＸ−２
の重要性のためにこれらの細胞を選択した。ＣＤＤＯは、ＩＬ−１による非塑性
１８Ｃｏ細胞の処理によって引き起こされるＣＯＸ−２ｍ−ＲＮＡ及びタン白の
誘導を阻害した（図１４Ｄ，Ｅ）。再度、この作用は培養媒体中のＰＧＥ２レベ
ルの低下に反映された。ＣＤＤＯは、ＩＦＮ−γ、ＬＰＳ、ＴＮＦ−α、及びＩ
Ｌ−１等の薬剤によりＣＯＸ−２の誘導を効率的に阻害するが、ＣＯＸ−２のイ
ンジューサーとしてＴＰＡを使用する場合には無効である。これは、１８Ｃｏ細
胞、並びにヒト乳房上皮細胞株、１８４Ｂ５／ＨＥＲに見られた。

【００６７】実施例５：ラット脳細胞におけるＣＤＤＯによるｉＮＯＳの抑制及び細胞死の防止ガン及びアルツハイマー病の発生における炎症性メディエーターの役割、並び
に細胞生き残りとアポトーシスに対する異常プログラムは今真剣な研究が行われ
ている。この実施例ではＣＤＤＯを、培養小膠細胞（脳のレジデントマクロファ
ージ）におけるｉＮＯＳのデノボ生成のサプレッサーとして並びにβ−アミロイ
ドにより誘導される細胞死から培養海馬ニューロンを保護する能力を試験した。
ＣＤＤＯは、プライマリマクロファージ培養において、プライマリ腹膜マクロフ
ァージ培養について上記に報告されたものと類似の方法で作用することが見出さ
れた。かくして、ＬＰＳ（５ｎｇ／ｍｌ）は、プライマリ小膠細胞ｌ培養におい
てｉＮＯＳを誘導し、１８時間内にＮＯの生成において２７倍の増加を引き起こ
した。１０^-6または１０^-7ＭでのＣＤＤＯによるこれらの培養の付随する処理は
この誘導を、それぞれ７３％及び５２％抑制した。我々は、また、アルツハイマ
ー病の病原に中心的であるこのペプチドの神経毒作用において、ＮＯが関連付け
られたので、ＣＤＤＯは、ペプチドのβ−アミロイドにより誘導される細胞死か
ら培養海馬ニューロンを保護する可能性を探究した。海馬ニューロンを単離し、
１６日ラット胚から培養し、ＣＤＤＯにより２４時間処理し、その後にβ−アミ
ロイドペプチドフラグメント、アミノ酸２５−３５を、１０μＭの最終濃度で添
加した。β−アミロイド単独によるこの投与は、ＭＴＴアッセイにより測定され
るように、培養中２４時間内に半分以上のニューロンの死を引き起こした。ＣＤ
ＤＯ（１０^-8及び１０^-7Ｍ）によるニューロン培養の前処理はこの細胞死を全体
的に防止し、ＣＤＤＯの防止活性は１０^-10Ｍという低用量にあることが判明し
た。

【００６８】要約上記に見られるように、ＣＤＤＯ等の本発明の化合物は、広範囲の作用を有す
る効果的な多機能分子であり、これらの多くはガン等の疾患の防止または治療に
有用である。エストロゲン受容体ポジチブ及びネガチブの乳ガン、骨髄性白血病
、及びＳｍａｄ−４突然変異を持ついくつかの悪性腫瘍由来のものを含むヒト腫
瘍細胞株の増殖が抑制される。マウス腹膜マクロファージ、ラット脳細胞小膠細
胞、またはヒト結腸筋繊維芽細胞において酵素、誘導性酸化窒素シンターゼ（ｉ
ＮＯＳ）、誘導性シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ−２）を誘導する、インターフ
ェロン−γ、インターフェロン−１、または腫瘍壊死因子等の種々の炎症性サイ
トカインの能力が抑制される。また、脳海馬ニューロンはβ−アミロイドにより
誘導される細胞死から保護される。上記は、本発明の化合物、例えばＣＤＤＯは
、悪性腫瘍の化学防止または化学治療に、並びに神経保護にインビボで有用であ
ることを示した。

【図面の簡単な説明】

【図１】インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）誘導ＣＯＸ−２発現及びヒト結腸筋繊
維芽細胞１８Ｃｏ細胞におけるプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）を抑制する
点での本発明の組成物の２−シアノ−３，１２−ジオキソオレア−１，９−ジエ
ン−２８−ノール酸（ＣＤＤＯ）（「ＴＰ−１５１」と表示）の効力を図示する
。

【図２】ラット脳細胞小膠細胞（脳マクロファージ細胞）におけるリポポリサッカライ
ド（ＬＰＳ）により誘導されたＮＯ生成に及ぼす効力の比較であり、ＴＰ−１５
１の活性がデキサメサソン、糖質コルチコイドのそれに有利であることを示し、
神経変性疾患を防止、治療するのに本発明の組成物がどのように使用されるかを
示す。「ＴＰ−８２」は３，１１−ジオキソオレア−１，９−ジエン−２８−ノ
ール酸を指す。

【図３】アルツハイマー病で関連付けられる、β−アミロイドにより誘導される毒性に
対してラットの海馬ニューロンを防止する点でのＴＰ−１５１の効力を図示する
。

【図４】前立腺ガンの防止または治療に関連して、正常なラット前立腺細胞（ＮＲＰ１
５２）の成長を抑制する点でのＴＰ−１５１の効力を図示する。

【図５】正常なラット前立腺細胞（ＮＲＰ１５２）におけるｉＮＯＳタン白の発現を調
節する点でのＴＰ−１５１の効力を図示する。

【図６】乳ガンの防止または治療に関連して、ＭＣＦ−７細胞（乳ガン細胞株）におけ
るエストロゲンに刺激された成長を抑制する点でのＴＰ−１５１を含む種々の化
合物の効力の比較を図示する。

【図７】炎症性コンポーネントによる状態の防止または治療に関連して、プライマリマ
クロファージにおけるＬＰＳ及びＩＦＮ−γにより誘導されるＮＯ生成を抑制す
る点でのＴＰ−１５１を含む種々の化合物の効力の比較を図示し、ＴＰ−１５１
の活性がデキサメサソンのそれに有利であることを示す。

【図８】プライマリマクロファージにおけるＩＦＮ−γにより誘導されるＮＯ生成を抑
制する点での種々の化合物の効力の比較を図示する。

【図９】プライマリマクロファージにおけるＬＰＳ及びＩＦＮ−γにより誘導されるＰ
ＧＥ２生成を抑制する点での種々の化合物の効力の比較を図示する。

【図１０】プライマリマクロファージにおけるＦＮ−γ及びＬＰＳにより誘導されるｉＮ
ＯＳ及びＣＯＸ−２の発現を抑制する点での種々の化合物の効力の比較を図示す
る。

【図１１（Ａ）−（Ｊ）】ＬＣＤＢ白血病細胞（Ａ−Ｄ）、ＰＣ１２細胞（Ｅ−Ｈ）におけるＣＤＤＯに
よる分化の誘導を示す。

【図１２（Ａ）−（Ｂ）】３Ｔ３−Ｌ１繊維芽細胞におけるＣＤＤＯによる分化の誘導を示す。

【図１３】ＣＤＤＯ（中黒の正方形）、ＴＰ−８２（○）、及びオレアノール酸（●）に
よるＮＲＰ１５２及びＭＣＦ−７細胞における細胞成長の抑制に対する用量−応
答曲線を図示する。

【図１４（Ａ）−（Ｅ）】マウスマクロファージ及びヒト結腸繊維芽細胞におけるｉＮＯＳ及びＣＯＸ−
２の誘導に及ぼすトリテルペノイドの抑制効果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 25/00 Ａ６１Ｐ 25/00 25/16 25/16 25/28 25/28 29/00 １０１ 29/00 １０１ 35/00 35/00 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＣＡ，ＪＰ (72)発明者ホンダ，タダシアメリカ合衆国ニューハンプシャー州 03755，ハノーヴァー，ヴェローナ・アヴェニュー５ (72)発明者スポーン，マイケル・ビーアメリカ合衆国ヴァーモント州05077，タンブリッジ，スポーン・ドライヴ９ (72)発明者スー，ナンジョアメリカ合衆国ニューハンプシャー州 03755，ハノーヴァー，ヴァリー・ロード 19 Ｆターム(参考） 4C086 AA01 AA02 DA50 MA01 MA02 MA03 MA04 MA09 NA14 ZA02 ZA16 ZA66 ZA81 ZA96 ZB11 ZB15 ZB26 ZC41 4C091 BB20

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式：【化１】（式中、ＡまたはＢは二重結合であって、Ａが二重結合である場合には、Ｃ₁₁は有機ある
いは無機の置換部分＝Ｘを有し、またＢが二重結合である場合には、Ｃ₁₂は有機
あるいは無機の置換部分＝Ｘを有し、Ｒ₁は１から１０により表される６員環のいずれかの位置で置換されている有機
あるいは無機の部分であり、Ｒ₂（Ｒ₂基は式（Ｉ）で表される構造のいずれかの位置で置換されている）及び
Ｒ₃は水素または有機あるいは無機部分であり、またｎは０から１００の数である）を有する物質組成物。
【請求項２】Ｒ₁がシアノ基である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】Ｂが二重結合であり、ＸがＯであり、Ｒ₃が−ＯＨであり、
Ｒ₁がシアノ基である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】上記組成物が３，１１−ジオキソオレアン−１，１２−ジエ
ン−２８オイック酸、２−シアノ−３，１１−ジオキソオレアン−１，１２−ジ
エン−２８オイック酸及び２−シアノ−３，１２−ジオキソオレアン−１，９−
ジエン−２８オイック酸からなる群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】Ｒ₁がシアノ、ハロ、または−ＯＲ’（式中、Ｒ’はＨまた
は有機部分である）からなる群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】Ｒ₁が電子吸引性部分である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】Ｒ₁が２の位置にある、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】上記組成物が式：【化２】（式中、Ｒ_xは有機あるいは無機部分を表す）を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】Ｒ_xがメチルである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】Ｙがヒドロキシルである、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】マクロファージ中のインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）
誘導ＮＯ生成を調節するのに有効なトリテルペノイド組成物であって、上記組成
物が少なくとも０．６μＭ未満のＩＣ₅₀値を有する組成物。
【請求項１２】上記組成物が少なくとも０．００１μＭ未満のＩＣ₅₀値を
有する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】式：【化３】（式中、ＡまたはＢは二重結合であって、Ａが二重結合である場合には、Ｃ₁₁は有機ある
いは無機の置換部分＝Ｘを有し、またＢが二重結合である場合には、Ｃ₁₂は有機
あるいは無機の置換部分＝Ｘを有し、Ｒ₁は１から１０により表される６員環のいずれかの位置で置換されている有機
あるいは無機の部分であり、Ｒ₂（Ｒ₂基は式（Ｉ）で表される構造のいずれかの位置で置換されている）及び
Ｒ₃は水素または有機あるいは無機部分であり、またｎは０から１００の数である）を有する組成物を、疾患を防止し、治療するために、被験者に、医薬として有効
な量で投与することを含んでなる、疾患を防止又は治療する方法。
【請求項１４】上記疾患がガン、神経変性疾患、炎症性腸疾患、及び関節
リューマチからなる群から選ばれる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】上記神経変性疾患がパーキンソン病、アルツハイマー病、
多発性硬化症、及び筋萎縮性側索硬化症からなる群から選ばれる、請求項１４に
記載の方法。
【請求項１６】上記ガンが乳ガン、前立腺ガン、結腸ガン、脳腫瘍、及び
骨ガンからなる群から選ばれる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】上記被験者が哺乳動物である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】上記被験者がヒトである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】Ｒ₁がシアノ基である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】Ｂが二重結合であり、ＸがＯであり、Ｒ₃が−ＯＨであり
、Ｒ₁がシアノ基である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】上記組成物が３，１１−ジオキソオレアン−１，１２−ジ
エン−２８オイック酸、２−シアノ−３，１１−ジオキソオレアン−１，１２−
ジエン−２８オイック酸及び２−シアノ−３，１２−ジオキソオレアン−１，９
−ジエン−２８オイック酸からなる群から選ばれる、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】Ｒ₁がシアノ、ハロ、または−ＯＲ’（式中、Ｒ’はＨま
たは有機部分である）からなる群から選ばれる、請求項１３に記載の方法。
【請求項２３】Ｒ₁が電子吸引性部分である、請求項１３に記載の方法。
【請求項２４】上記炎症性腸疾患がクローン病及び潰瘍性大腸炎からなる
群から選ばれる、請求項１３に記載の方法。
【請求項２５】式：【化４】（式中、ＡまたはＢは二重結合であって、Ａが二重結合である場合には、Ｃ₁₁は有機ある
いは無機の置換部分＝Ｘを有し、またＢが二重結合である場合には、Ｃ₁₂は有機
あるいは無機の置換部分＝Ｘを有し、Ｒ₁は１から１０により表される６員環のいずれかの位置で置換されている有機
あるいは無機の部分であり、Ｒ₂（Ｒ₂基は式（Ｉ）で表される構造のいずれかの位置で置換されている）及び
Ｒ₃は水素または有機あるいは無機部分であり、またｎは０から１００の数である）を有する組成物を、酸化窒素またはプロスタグランジンの生成を調節するために
、被験者に、医薬として有効な量で投与することを含んでなる、被験者における
過剰な酸化窒素またはプロスタグランジンの生成を調節する方法。
【請求項２６】Ｒ₁がシアノ基である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】Ｂが二重結合であり、ＸがＯであり、Ｒ₃が−ＯＨであり
、Ｒ₁がシアノ基である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】上記組成物が３，１１−ジオキソオレアン−１，１２−ジ
エン−２８オイック酸、２−シアノ−３，１１−ジオキソオレアン−１，１２−
ジエン−２８オイック酸及び２−シアノ−３，１２−ジオキソオレアン−１，９
−ジエン−２８オイック酸からなる群から選ばれる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】Ｒ₁がシアノ、ハロ、または−ＯＲ’（式中、Ｒ’はＨま
たは有機部分である）からなる群から選ばれる、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】Ｒ₁が電子吸引性部分である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】Ｒ₁が２の位置にある、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】上記組成物が式：【化５】（式中、Ｒ_xは有機あるいは無機部分を表す）を有する、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】Ｒ_xがメチルである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３４】Ｙがヒドロキシルである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３５】式：【化６】（式中、ＡまたはＢは二重結合であって、Ａが二重結合である場合には、Ｃ₁₁は有機ある
いは無機の置換部分＝Ｘを有し、またＢが二重結合である場合には、Ｃ₁₂は有機
あるいは無機の置換部分＝Ｘを有し、Ｒ₁は１から１０により表される６員環のいずれかの位置で置換されている有機
あるいは無機の部分であり、Ｒ₂（Ｒ₂基は式（Ｉ）で表される構造のいずれかの位置で置換されている）及び
Ｒ₃は水素または有機あるいは無機部分であり、またｎは０から１００の数である）を有する組成物を、ｉＮＯＳまたはＣＯＸ−２遺伝子の転写または翻訳を調節す
るために、被験者に、医薬として有効な量で投与することを含んでなる、ｉＮＯＳ及びＣＯ
Ｘ−２遺伝子の転写または翻訳を調節する方法。
【請求項３６】Ｒ₁がシアノ基である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】Ｂが二重結合であり、ＸがＯであり、Ｒ₃が−ＯＨであり
、Ｒ₁がシアノ基である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】上記組成物が３，１１−ジオキソオレアン−１，１２−ジ
エン−２８オイック酸、２−シアノ−３，１１−ジオキソオレアン−１，１２−
ジエン−２８オイック酸及び２−シアノ−３，１２−ジオキソオレアン−１，９
−ジエン−２８オイック酸からなる群から選ばれる、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】Ｒ₁がシアノ、ハロ、または−ＯＲ’（式中、Ｒ’はＨま
たは有機部分である）からなる群から選ばれる、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】Ｒ₁が電子吸引性部分である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】上記電子吸引性部分がシアノ、アリール、ハロ置換アルキ
ル部分からなる群から選ばれる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】上記組成物が式：【化７】（式中、Ｒ_xは有機あるいは無機部分を表す）を有する、請求項３５に記載の方法。
【請求項４３】Ｒ_xがメチルである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】Ｙがヒドロキシルである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】式：【化８】（式中、ＡまたはＢは二重結合であって、Ａが二重結合である場合には、Ｃ₁₁は有機ある
いは無機の置換部分＝Ｘを有し、またＢが二重結合である場合には、Ｃ₁₂は有機
あるいは無機の置換部分＝Ｘを有し、Ｒ₁は１から１０により表される６員環のいずれかの位置で置換されている有機
あるいは無機の部分であり、Ｒ₂（Ｒ₂基は式（Ｉ）で表される構造のいずれかの位置で置換されている）及び
Ｒ₃は水素または有機あるいは無機部分であり、またｎは０から１００の数である）を有する組成物を、神経変性疾患を防止または治療するために、被験者に、医薬
として有効な量で投与することを含んでなる、神経変性疾患の防止または治療の
方法。
【請求項４６】上記神経変性疾患がパーキンソン病、アルツハイマー病、
多発性硬化症、及び筋萎縮性側索硬化症からなる群から選ばれる、請求項４５に
記載の方法。
【請求項４７】上記被験者が哺乳動物である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】上記被験者がヒトである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】Ｒ₁がシアノ基である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５０】Ｂが二重結合であり、ＸがＯであり、Ｒ₃が−ＯＨであり
、Ｒ₁がシアノ基である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５１】上記組成物が３，１１−ジオキソオレアン−１，１２−ジ
エン−２８オイック酸、２−シアノ−３，１１−ジオキソオレアン−１，１２−
ジエン−２８オイック酸及び２−シアノ−３，１２−ジオキソオレアン−１，９
−ジエン−２８オイック酸からなる群から選ばれる、請求項４５に記載の方法。
【請求項５２】Ｒ₁がシアノ、ハロ、または−ＯＲ’（式中、Ｒ’はＨま
たは有機部分である）からなる群から選ばれる、請求項４５に記載の方法。
【請求項５３】Ｒ₁が電子吸引性部分である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５４】Ｒ₁が２の位置にある、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】上記組成物が式：【化９】（式中、Ｒ_xは有機あるいは無機部分を表す）を有する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】Ｒ_xがメチルである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】Ｙがヒドロキシルである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】式：【化１０】（式中、ＡまたはＢは単結合または二重結合であり、Ｃ₁₁またはＣ₁₂は有機あるいは無機の置換部分＝Ｘを有し、Ｒ₁は１から１０により表される６員環のいずれかの位置で置換されている有機
あるいは無機の部分であり、Ｒ₂（Ｒ₂基は式で表される構造のいずれかの位置で置換されている）及びＲ₃は
水素または有機あるいは無機部分であり、またｎは０から１００の数である）を有する物質組成物。
【請求項５９】式：【化１１】（式中、ＡまたはＢは単結合または二重結合であり、Ｃ₁₁またはＣ₁₂は有機あるいは無機の置換部分＝Ｘを有し、Ｒ₁は１から１０により表される６員環のいずれかの位置で置換されている有機
あるいは無機の部分であり、Ｒ₂（Ｒ₂基は式で表される構造のいずれかの位置で置換されている）及びＲ₃は
水素または有機あるいは無機部分であり、またｎは０から１００の数である）を有する組成物を、下記疾患を防止又は治療するために、被験者に、医薬として
有効な量で投与することを含んでなる、ｉＮＯＳまたはＣＯＸ−２遺伝子の過剰
発現を特徴とする疾患を防止又は治療する方法。
【請求項６０】マクロファージ活性を減少し、それにより状態を治療する
ために、請求項１に記載の化合物を、被験者に、医薬として有効な量で投与する
ことを含んでなる、活性化マクロファージにより被験者に引き起こされる状態を
治療する方法。
【請求項６１】化合物がＣＤＤＯである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】式：【化１２】（式中、ＡまたはＢは二重結合であって、Ａが二重結合である場合には、Ｃ₁₁は有機ある
いは無機の置換部分＝Ｘを有し、またＢが二重結合である場合には、Ｃ₁₂は有機
あるいは無機の置換部分＝Ｘを有し、Ｒ₁は１から１０により表される６員環のいずれかの位置で置換されている有機
あるいは無機の部分であり、Ｒ₂（Ｒ₂基は式（Ｉ）で表される構造のいずれかの位置で置換されている）及び
Ｒ₃は水素または有機あるいは無機部分であり、またｎは０から１００の数である）を有する組成物を、下記疾患を防止又は治療するために、被験者に、医薬として
有効な量で投与することを含んでなる、ｉＮＯＳまたはＣＯＸ−２遺伝子の過剰
発現を特徴とする疾患を防止又は治療する方法。
【請求項６３】上記疾患がガン、神経変性疾患及び関節リューマチからな
る群から選ばれる、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】上記神経変性疾患がパーキンソン病、アルツハイマー病、
多発性硬化症、及び筋萎縮性側索硬化症からなる群から選ばれる、請求項６３に
記載の方法。
【請求項６５】上記ガンが乳ガン、前立腺ガン、結腸ガン、脳腫瘍、及び
骨ガンからなる群から選ばれる、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】上記被験者が哺乳動物である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６７】上記被験者がヒトである、請求項６２に記載の方法。
【請求項６８】Ｒ₁がシアノ基である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６９】Ｂが二重結合であり、ＸがＯであり、Ｒ₃が−ＯＨであり
、Ｒ₁がシアノ基である、請求項６２に記載の方法。
【請求項７０】上記組成物が３，１１−ジオキソオレアン−１，１２−ジ
エン−２８オイック酸、２−シアノ−３，１１−ジオキソオレアン−１，１２−
ジエン−２８オイック酸及び２−シアノ−３，１２−ジオキソオレアン−１，９
−ジエン−２８オイック酸からなる群から選ばれる、請求項６２に記載の方法。
【請求項７１】Ｒ₁がシアノ、ハロ、または−ＯＲ’（式中、Ｒ’はＨま
たは有機部分である）からなる群から選ばれる、請求項６２に記載の方法。
【請求項７２】Ｒ₁が電子吸引性部分である、請求項６２に記載の方法。
【請求項７３】Ｒ₁が２の位置にある、請求項７２に記載の方法。