JP2002513756A

JP2002513756A - メラニン産生を促進する化合物を同定するためのアッセイおよび当該アッセイにより同定されたレチノイド様化合物

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Publication number: JP2002513756A
Application number: JP2000546767A
Authority: JP
Inventors: ディーパ・ラングタ
Original assignee: ガルデルマ・リサーチ・アンド・デヴェロップメント・エス・エヌ・セ
Priority date: 1998-05-06
Filing date: 1999-05-06
Publication date: 2002-05-14
Anticipated expiration: 2019-05-06
Also published as: IL138772A0; EP1082111A1; AR018340A1; AU762364B2; CA2324001C; AU3882999A; WO1999056740A1; NO20004723D0; ZA200005026B; ID26632A; CN1299274A; NO20004723L; CA2324001A1; CN1247192C; EP1082111A4; KR100538417B1; JP3669925B2; KR20010043147A; BR9909599A

Abstract

(57)【要約】皮膚の色素沈着を変更する化合物を選択するためのインビトロアッセイを提供する。また、カルボン酸が、遊離したまたは保護基で保護されたフェノール、ナフトール、チオフェノールまたはチオナフトール基を含まない、置換された芳香族または複素環式カルボン酸、誘導体またはそれらの薬学的に許容できる塩を含む、新規のプロピグメントリー化合物を提供する。好ましい実施態様では、これらの化合物がＲＸＲの活性を示す。これらの化合物は、美容または皮膚化学的組成物においてヒトの皮膚および／または髪の色素沈着を変更するため、並びに、皮膚または髪の色素沈着を変更する疾患を処理するために用いられる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野および従来の技術】

正常な皮膚の色は、メラニン、褐色色素が主要成分である、種々の色素の混合
物の組み合わせられた発現の結果である。メラニンは、表皮内に見出される分化
細胞、メラノサイトによって合成される。メラノサイトは、メラノソームと呼ば
れるオルガネラ内でメラニンを合成する。メラノソームがメラニンで飽和された
状態になると、メラノソームの樹状アームに輸送され、まわりのケラチノサイト
に移される。次いで、ケラチノサイトは、皮膚の表面に移動し、皮膚に褐色の色
素沈着を引き起こす。ケラチノサイトにおけるメラニンの量が、皮膚および髪の
色素沈着の程度を決定する。

【０００２】皮膚および髪の色素沈着におけるメラニンの効果のために、メラニン産生およ
び／または周りのケラチノサイトへのメラニンの輸送に影響する化合物を同定す
ることを目的とする研究が行われている。かかる化合物は、髪および皮膚の色素
沈着を変更する可能性のある適用を有する。例えば、メラノサイト刺激ホルモン
（ＭＳＨ）およびテオフィリンのような化合物が、色素沈着を促進することが知
られている。さらに、ＭＳＨのアナログは、皮膚色素沈着を促進する臨床効果に
ついて試験されている。また、アルファ-リポプロテインが皮膚のメラニン産生
を刺激しうることも報告されている（特許公開第８２−１５３３４８号公報、Ｇ
Ｂ２１２４９００、Empresa Cubana Importadora y Exportadora de Productos
Medicos, Cubaによる）。逆に、例えば、黒皮症を治療するために、色素沈着を
阻害する化合物、例えば、ヒドロキノン（ＨＱ）およびモノベンゼンエーテル（
Pathakら,J. American Academy Dermotol.15:894-899(1986); Smithら,Pigment
Cell Research,1:386-389(1988)）、およびアルブチン、ＨＱの糖共役体(gluco
conjugate)（Proceeding Japan Soc.Invest.Dermotol.12:138-139(1988)）の使
用も知られている。

【０００３】さらに、コウジ酸とその誘導体および／または吉草酸が、メラニン形成を阻害
することが報告されている（特許公開第０３０１１０１０号公報；Oyama, Yasua
ki, Sansei Pharmaceutical Co.,Ltd.,Japan）。

【０００４】さらに、プロピオン酸、酪酸および吉草酸並びにこれらの塩が、不飽和脂肪酸
と組み合わせて、または組み合わせることなく、メラニンの産生を触媒するチロ
シナーゼの形成を抑制することが報告されている（Mishimaら, EPA 345081, Hay
ashibara Biochemical Laboratories, Inc.,Japan）。

【０００５】ＥＰ０５０９２４１およびＷＯ９３／１９７２９は、色素過剰または皮膚の日
焼けが、十分な期間、有効量のトランスレチノイン酸を局所的に適用することに
よって行われうることを記載する。それにも関わらず、これらの方法で用いられ
る化合物は、炎症を引き起こす。

【０００６】新たなメラニン合成を阻害する化合物、および可能性のある抗メラノソーマ、
細胞毒性化合物を同定するのに適しているとされるインビトロ方法が、Dooleyら
, Pharmcol.,7:188-200(1994)により報告された。この方法は、メラノサイト由
来の二つの不死化マウス細胞系、Ｍｅｌ-Ａｂ（Dooleyら, Oncogene,3:531-535
(1988)）、および繊維芽細胞由来の他の細胞系を利用する。Ｍｅｌ-Ａｂ細胞は
、培養中に急速に増殖し、かつ、多量のメラニンを産生する、自発的に不死化し
たマウスＣ５７ＢＬ／６メラノサイト系から誘導される。このアッセイは、メラ
ノサイトに独特なメラニン生合成経路における中間体に類似した構造を有する化
合物をスクリーニングするために、用いられたようである。特に、チロシンに関
連するパラ置換フェノールと、ＤＯＰＡに関連する１,２-ジヒドロキシベンゼン
がスクリーニングされ、また、１,３-ジヒドロキシベンゼン、１,４-ジヒドロキ
シベンゼン、１,４-ジメトキシベンゼン、および１,４-ベンゾキノンもスクリー
ニングされた。色素沈着を変更するとされているいくつかの化合物が、このスク
リーニングを用いて同定された。しかしながら、本発明とは異なって、このイン
ビトロスクリーニングは、不死化したマウス細胞系を利用し、正常なヒトメラノ
サイトを利用するものではない。

【０００７】しかしながら、色素沈着並びにメラニン産生および／または輸送に影響を与え
る他の化合物が同定されれば、利益がもたらされる。また、よく寛容され、皮膚
に非刺激性である化合物が同定されれば、利益がもたらされる。さらに、かかる
化合物の同定を行うことができる、改善されたインビトロスクリーニングアッセ
イが開発されれば、有益である。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】

メラノサイト、好ましくはヒトメラノサイトによるメラニンの発現を変更（増
強または阻害）することができる化合物を同定するための新規のアッセイを提供
することが本発明の目的である。

【０００９】本発明の他の目的は、かかるアッセイにより同定された少なくとも一つの化合
物のメラニン促進または阻害量を含む皮膚科学／美容学／薬学的組成物を提供す
ることである。

【００１０】本発明のさらに特定の目的は、ヒトメラノサイトによるメラニン産生を変更（
増強または阻害）する少なくとも一つの化合物のメラニン促進または阻害量を含
む、局所的に適用できる皮膚科学／美容学／薬学的組成物を提供することである
。

【００１１】本発明のさらに特定の目的は、カルボン酸が遊離のフェノール、ナフトール、
チオフェノールまたはチオナフトール基を含まない、あるいは保護基で保護され
たものを含まないという条件で、置換された芳香族または複素環式カルボン酸ま
たはそれらの誘導体の少なくとも一つのメラニン増強または阻害量を含む、皮膚
科学／美容学／薬学的組成物を提供することである。

【００１２】本発明のさらに特定の目的は、皮膚および／または髪の色素沈着を誘導するの
に十分な時間、少なくとも一つのメラニン作用（増強または阻害）レチノイド化
合物を含む組成物の有効量を局所的に適用することを含む、処置を必要とする者
における、皮膚および／または髪の色素沈着を変更する方法を提供することであ
る。

【００１３】本発明のさらに特定の目的は、カルボン酸が遊離または保護されたフェノール
、ナフトール、チオフェノールまたはチオナフトール基を含まないという条件で
、皮膚および／または髪の色素沈着に影響を与えるのに十分な時間、少なくとも
一つの置換された芳香族または複素環式カルボン酸またはそれらの誘導体を含む
組成物の有効量を局所的に適用することを含む、処置を必要とする者における、
皮膚および／または髪の色素沈着を変更、すなわち増強または低減する方法を提
供することである。

【００１４】

【課題を解決するための手段および発明の実施の形態】

第一の実施態様では、本発明は、ヒトメラノサイトによるメラニンの発現を変
更（増進または阻害）する化合物、好ましくはヒトメラノサイトによるメラニン
産生を増強する化合物を同定するための新規アッセイを提供する。

【００１５】一般に、この主題のアッセイは、特定の化合物または化合物の組合せの、培養
中のヒトメラノサイトの成長または増殖に与える影響、および、同化合物の培養
されたヒトメラノサイトによるメラニン産生に与える影響を調べ、前記培養ヒト
メラノサイトの数（増殖）をベースとするメラニン含量を正常化し、かつ、細胞
当たりのメラニン産生の増大または低減をベースとするメラニン産生に影響を与
える化合物を同定することである。

【００１６】特に、この主題のアッセイは、以下を含む。（i）少なくとも二つのヒトメラノサイト培養物を、メラニン産生に対する効果
についてスクリーニングする少なくとも一つの化合物と接触させる；（ii）前記ヒトメラノサイト培養物の一方に含まれるメラノサイトの増殖を測定
する；（iii）第二のヒトメラノサイト培養物に含まれるメラニンの量を測定する；（iv）上記化合物のメラニン産生に与える効果（増強または低減）を調べるため
に、工程（ii）および（iii）で得られたデータを比較し、培養物に含まれるメ
ラノサイトの数に基づいてデータを正常化する；（v）前記化合物が不在であることを除いて、先の培養物と同じ条件下で培養さ
れたコントロールのヒトメラノサイト培養物におけるメラニン産生および増殖と
、工程（ii）および（iii）で得られたデータとをさらに比較する；かつ、（vi）前記化合物と接触していないコントロール培養物と比較した、前記化合物
の存在下で培養されたメラノサイトによるメラニン産生の増大または低減をベー
スとして、スクリーニングされた化合物を、ヒトメラノサイトによるメラニン発
現を変更（増強または低減）するものとして同定する。

【００１７】この方法は、好ましくは、適切な源から、例えば新生児の皮膚メラノサイト等
の、ヒトメラノサイトを得ることによって実施される。これらのメラノサイトは
、例えば９６ウェルプレートと２４ウェルプレート等の二つの細胞培養チャンバ
ーに同時に蒔かれる。かかる細胞をウェル表面に付着させた後に、固定量の特定
の化合物と共に各ウェルをインキュベートして、メラニン発現に対する効果を調
べる。かかるインキュベーションは、培養されたメラノサイトによるメラニン産
生に与える上記化合物の影響を評価するのに十分な時間行われる。

【００１８】次いで、インキュベーションは、約１分から約１ヶ月まで、好ましくは約１時
間から約２週間まで、最も好ましくは約１２時間から１週間までの範囲である。
インキュベーション後、前記培養物の一方の細胞の増殖を評価する。これは、吸
光度等の適切な方法で行われる。

【００１９】好ましい実施態様では、９６ウェルプレートの細胞は、３-（４,５-ジメチル
チアゾール-２-イル）-５-（３-カルボキシメトキシフェニル）-２-（４-スルホ
フェニル）-２Ｈ-テトラゾリウム（細胞増殖の比色分析に通常用いられるテトラ
ゾリウム染料）（ＭＴＳ）を用いて処理され、このプレートの吸光度を４９０ｎ
ｍにおいて読み取り、９６ウェルプレート中の細胞の増殖を調べる。これらの結
果を、同じ条件下で培養され、ＭＴＳ溶液で処理したが、試験化合物で処理され
ていないコントロールメラノサイト培養物と比較する。

【００２０】同一条件下で試験化合物を用いてインキュベートされたヒトメラノサイト培養
物を含む、２４ウェルプレート等の第二の培養物を、そこに含まれている細胞に
よって発現されたメラニンの量を調べるために試験する。これは周知の方法で実
施される。本発明では、これは、例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）等を
用いてかかる細胞を洗浄し、例えば１ＮＮａＯＨ等のアルカリ溶液を用いてこ
の洗浄された細胞を溶解し、かつ、例えば、４０５ｎｍにおけるアルカリ可溶性
メラニンの吸光度を測定することにより、そこに含まれるアルカリ可溶性メラニ
ンの量を測定することによって実施される。次いで、このデータを、同じ条件下
であるが、試験化合物の不在下で生育されたコントロールのメラノサイト培養物
と比較する。

【００２１】次いで、両方のメラノサイト細胞培養物から得られたデータを、特定化合物の
、メラノサイトによるメラニン産生およびメラニン蓄積に対する効果を調べるた
めに、メラノサイト増殖（細胞数）に基づいて、正規化する。

【００２２】本発明にかかるメラニン発現を変更する化合物は、培養されたヒトメラノサイ
トにおけるメラニン産生および蓄積に影響する化合物である。好ましくは、かか
る化合物は、コントロールのメラノサイト培養物に対して少なくとも１０％まで
メラニン発現を変更する。さらに好ましくは、かかる化合物は、少なくとも２０
％までメラニン産生に影響する。最も好ましくは、１５０ないし２５０％の程度
、あるいはそれ以上、メラニン産生および蓄積に影響する。

【００２３】それゆえ、主題の発明は、ヒトメラノサイトによるメラニン産生および蓄積を
増大または低減する化合物またはそれらの組合せの同定に関する。メラニン産生
および蓄積を増大する化合物は、例えば、皮膚の日焼け(tanning)または褐色化(
browning)を促進し、かつ、髪のグレー化を処理または妨げるために用いられる
。また、かかる化合物は、白斑等の色素沈着欠乏にかかる疾患または状態を処理
するためにも用いられる。

【００２４】メラニン産生を低減する化合物は、色素沈着過剰にかかる疾患または状態を有
する患者の処理に利用される。かかる疾患および状態は、黒皮症または年齢に伴
う色素沈着過剰、および肝斑を含む。

【００２５】また、メラニン産生および／または蓄積を阻害する化合物は、老人の手や顔に
しばしば観察される「肝斑」等の、年齢に伴う色素沈着過剰を処理および／また
は防止するために用いられる。色素沈着疾患にかかる疾患および状態のリストは
、ここに完全に参照として含めるDermatology in General Medicine (Fitzpatri
c, T.B.,ら)に見出される。

【００２６】本発明の化合物は、白斑、炎症後色素沈着欠乏または脱色等の色素沈着欠乏の
処理、皮膚移植後の色素沈着欠乏または脱色の処理、紫外線に過度に暴露したこ
とによる色素沈着欠乏または脱色の処理、瘢痕形成後色素沈着欠乏または脱色の
処理、または老化またはほくろによる色素沈着欠乏または脱色の処理に使用でき
る。

【００２７】メラニン産生を低減する化合物は、黒皮症または年齢に伴う色素沈着過剰の処
理に使用できる。

【００２８】さらに、主題のアッセイは、ヒトメラノサイトによるメラニン産生または蓄積
に影響（増大または低減）する化合物の組合せ、特にメラニン産生または蓄積に
対して相乗効果を有する組合せを同定するために用いられる。

【００２９】上述したように、第二の実施態様では、本発明は、本発明に係る少なくとも一
つのメラニン作用性化合物を含む薬学的／皮膚化学的／美容学的化合物に関する
。これに関して、正常なヒトメラノサイトによるメラニン産生および／または蓄
積を促進する新規クラスの化合物が、主題のアッセイ方法を用いて見出された。
これらの化合物は、皮膚によく寛容され、かつ非刺激性であるという点でも有利
である。これは、主題のアッセイを用いてスクリーニングされた他の多くのレチ
ノイド化合物が、同様の条件下で色素沈着に影響しなかったと言うことから、驚
くべきことである。これらの化合物は、レチノイドシグナリング経路を介してメ
ラニン産生および／または蓄積に影響することが推定される。

【００３０】好ましい実施態様では、本発明は、カルボン酸が、フリーまたは保護された形
態の、フェノール、ナフトール、チオフェノールまたはチオナフトール基を含ま
ないという条件で、少なくとも一つの置換された芳香族または複素環式カルボン
酸またはその誘導体の一定量を含む薬学／美容学／皮膚化学的化合物を提供する
。かかるカルボン酸は、例として、安息香酸、プロピオル酸、ニコチン酸、アク
リル酸、ブテン酸およびナフト酸(naphtoic acid)を含む。

【００３１】好ましい実施態様では、本発明に係る置換された芳香族または複素環式カルボ
ン酸は、ＲＸＲの活性を示す。本発明によれば、ＲＸＲ活性を示す化合物は、５
０００ｎＭ未満、好ましくは１０００ｎＭ未満のＲＸＲに対する結合を示す化合
物である。ＲＸＲに対する結合を調べることは、当業者に周知であり、例えば（
１）“Selective Synthetic Ligands for Nuclear Retinoic Acid Receptor Sub
types” RETINOIDS, Progress in Research and Clinical Applications, Chapi
tre 10 (pp261-267), Marcel Dekker Inc, Maria A.Livrea et Lester Packerに
より公表;（２）Synthetic Retinoids: Receptor Selectivity and Biological
Activity" Pharmacol Skin, Basel, Karger, 1993, Vol.5,pp117-127;（３）“S
elective Synthetic Ligands for Human Nuclear Retinoic Acid Receptors” S
kin Pharmacology, 1992, Vol.5,pp57-65;（４）“Identification of Syntheti
c Retinoids with Selectivity for Human Nuclear Retinoic Acid Receptor-γ
”Biochemical and Biophysical Research Communications, Vol.186,No.2, Jul
y 1992,pp977-983;および（５）“Selective High Affinity RAR-α or RAR-β
Retinoic Acid Receptor Ligands”Mol.Pharmacol.,Vol.40,pp556-562に報告さ
れている。

【００３２】また、より好ましい実施態様では、ＲＸＲの活性を示す化合物は、ＲＸＲのア
ゴニスト活性を示す。このＲＸＲのアゴニスト活性は、例えば参照としてここに
その全体の内容を含める米国特許第５６９６１０４号に報告されている方法で決
定することができる。

【００３３】特に、本発明に係るヒトメラノサイトによるメラニン産生および／または蓄積
を促進することが驚くべきことに見出された化合物は、 4-[1-(5,6,7,8-テトラヒドロ-5,5,8,8-テトラメチル-2-ナフチル)エテニル]安息
香酸(CD No.2771)； 3-[3-(5,5,8,8-テトラメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)-フェ
ニル]-アクリル酸(CD No.2908)； 3-[3-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)-フ
ェニル]-ブト-2-エン酸(but-2-enoic acid)(CD No.3206)； 6-[1-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)-シ
クロプロピル]-ニコチン酸(CD No.3127)； 3-[3-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)-フ
ェニル]-アクリル酸(CD No.2915)； 4-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-カルボニル)-
安息香酸(CD No.2608)； 4-(3-ブロモ-5,5,8,8-テトラメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル
オキシ)-安息香酸(CD No.2661)； 5-[(E)-2-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)
-プロペニル]-チオフェン-３-カルボン酸(CD No.2425)； 3-[3-(5,5,8,8-テトラメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イルスルフ
ァニル)-フェニル]-アクリル酸(CD No.3132)； 6-(3-ブチル-5,5,8,8-テトラメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル
スルファニル)-ニコチン酸(CD No.3292)； 4-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-2-ナフチルチオ)安息香酸(C
D No.2624)； 3-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-2ナフチル)フェニルプロピ
オル酸(CD No.2906)；および 6-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-2ナフチルチオ)ニコチン酸(
CD No.2809) を含む。

【００３４】上述したように、薬学的／皮膚化学的／美容学的組成物は、皮膚および／また
は髪に対する局所的適用に適した形態である。好ましい実施態様では、これらの
組成物は、皮膚の人工的日焼けおよび／または褐色化に適した形態である。

【００３５】これらの組成物は、かかるタイプの組成物に通常用いられる、薬理学、美容学
または皮膚化学的に許容できる、イオン性または非イオン性増粘剤、柔軟剤、抗
酸化剤、乳白剤、安定化剤、皮膚軟化薬、ＵＶ-Ａおよび／またはＵＶ-Ｂ領域に
おいて活性な有機サンスクリーン剤、光保護無機顔料およびナノ顔料、湿潤剤、
ビタミン、香料、防腐剤、フィラー、金属イオン遮閉剤、染料および着色料等の
、他の成分を含んでもよい。

【００３６】通常、当業者であれば、本発明の組成物に本質的に関連した有利な特性が、企
図された添加によって不利な影響を受けないように、これらの最適な補助化合物
および／またはその量を選択するのに注意を払うべきである。

【００３７】本発明の組成物は、メラノサイトによるメラニン産生および／または蓄積に影
響する一つ以上の化合物、例えば相乗的組合せを含んでもよい。また、かかる組
成物は、例えばジヒドロキシアセトン（ＤＨＡ）またはその誘導体等の色素沈着
を促進または阻害する他の化合物を含んでもよい。適切な化合物は、Tuloup等に
より１９９７年３月１８日に出願され、LOREALに譲渡された米国シリアル番号第
０８／８１９０８４号に開示されている。また、色素沈着を促進するＭＳＨおよ
びそのアナログも含むことができる。逆に、ＨＱ、モノベンゼンエーテルおよび
アルブチンのような色素沈着を阻害する化合物が、色素沈着を阻害する、本主題
のアッセイを用いて同定された化合物と共に含まれてもよい。

【００３８】本主題の組成物は、ヒトの皮膚および／または髪に局所的に適用するのに適し
た形態である。適切な形態は、クリーム、ミルク、クリーム-ゲル、液状ローシ
ョン、水中油型エマルションまたは油中水型エマルション、小胞分散物または当
該技術分野において通常用いられる他のあらゆる形態を含む。

【００３９】本主題の組成物に含まれる少なくとも一つのメラニン作用化合物の量は、組成
物の全重量に対して約０．０００１ないし約３０重量％、好ましくは組成物の全
重量に対して約０．５ないし約１５重量％、さらに好ましくは組成物の全重量に
対して約０．００１ないし５重量％の濃度範囲である。

【００４０】また本発明は、本発明に係るメラニン作用性化合物の一定量を局所的に適用す
ることを含む、処理、美容、皮膚科学または治療的方法を含む。有効量は、皮膚
および／または髪の色素沈着に影響を与える（増大または低減）のに十分な量で
ある。かかる方法は、皮膚および／または髪の色素沈着に影響を与える他の化合
物と組み合わせて実施されてもよい。かかる方法は、色素沈着に対し所望の効果
が達成されるまで繰り返し実施されてもよい。主題の化合物が皮膚を刺激しない
ので、長期にわたる投与は適している。

【００４１】上述したように、本発明は、特に、髪の着色を促進するのに適した、本発明に
係る少なくとも一つの化合物を含む組成物を含む。かかる組成物は、例えば、コ
ンディショニング剤、顔料および色素成分、ストレート剤、パーマ剤、界面活性
剤、香料、アルコール（以下参照）等の、髪用製剤に通常含まれる他の成分を含
んでもよい。

【００４２】本発明の理解をより容易なものとするため、以下の例を示す。

【００４３】

【実施例】

実施例１新生児の皮膚の正常ヒトメラノサイトを、アッセイに用いた。始めのスクリー
ニングのために、これらの細胞を、ウェルの表面積に従って適切に９６ウェルプ
レートと２４ウェルプレートに同時に蒔き、５日間テスト化合物を用いて処理し
た。プレートに対する化合物の添加は、正確さを確実なものとするために（各ウ
ェル当たり同量）ロボットを用いて行った。５日間処理の最後に、９６ウェルプ
レート中の細胞を、ＭＴＳ溶液で処理し、プレートを４９０ｎｍで読みとり、細
胞の増殖に対する化合物の効果を調べた。２４ウェルプレート中の細胞をＰＢＳ
ですすぎ、次いで１ＮＮａＯＨで溶解し、アルカリ溶解性メラニンの吸光度を
４０５ｎｍにおいて測定した。

【００４４】９６ウェルプレートからのデータを分析して、細胞の増殖に対する各化合物の
影響を調べ、２４ウェルプレートからのデータを用いて、細胞のメラニン含量に
与える化合物の効果を調べた。次いで、メラニン含量を、細胞の増殖に対して正
常化した。

【００４５】この方法を用いて、本発明者らは、正常なヒトメラノサイトのメラニン含量を
増大する以下の化合物を同定した。かかる結果に基づいて、ヒトメラノサイトに
よるメラニン産生を変更（増大または低減）する、レチノイド等の他の化合物を
同定できることが期待される。

【００４６】

【表１】

【００４７】かくして、本発明のアッセイを用いて、本発明者らは、正常なヒトメラノサイ
トに対する新たなクラスのプロピグメントリー化合物（pro-pigmentory compoun
d）を同定した（それによりメラニン産生が増大する）。これらの分子は、レチ
ノイドシグナリング経路を介して作用すると仮定される。プロピグメントリー活
性を有するあるクラスのレチノイド様分子の発見は、他のレチノイドシグナリン
グ分子が同様の条件下で色素沈着を誘導しないことから、特に驚くべきものであ
る。かかる知見は、これらの化合物が皮膚に刺激を与えず、非常によく寛容され
ることから、さらに有利である。従って、ヒトの被験者の皮膚および／または髪
における色素沈着を変更することにおいて可能性のある適用を有する。

【００４８】実施例２製剤例１．経口経路（ａ）以下の組成物を、０．８ｇの錠剤の形態で調製する：式（２）の化合物０．００５ｇ予めゼラチン化された(pregelatinized)デンプン０．２６５ｇミクロクリスタリンセルロース０．３００ｇラクトース０．２００ｇステアリン酸マグネシウム０．０３０ｇ炎症後色素沈着欠乏を処理するため、処理するケースの深刻度に応じて３〜６
ヶ月間、成人に一日当たり１〜３錠が与えられる。

【００４９】（ｂ）５ｍｌのバイアルに収容される飲用懸濁液を調製する。式（４）の化合物０．０５０ｇグリセロール０．５００ｇ７０％ソルビトール０．５００ｇサッカリナートナトリウム０．０１０ｇメチルパラ-ヒドロキシベンゾアート０．０４０ｇ味付剤適量精製水全体を５ｍｌとする量皮膚移植後の色素沈着欠乏を処理するため、処理するケースの深刻度に応じて
３ヶ月間、成人に一日当たり１本のバイアルが与えられる。

【００５０】（ｃ）ゼラチンカプセルに収容される以下の製剤を調製する：式（５）の化合物０．０２５ｇコーンスターチ０．０６０ｇラクトース全体を０．３００ｇとする量使用したゼラチンカプセルは、ゼラチン、酸化チタンおよび防腐剤からなる。白斑を処理するため、３０日間、成人に一日当たり１つのゼラチンカプセルが
与えられる。

【００５１】２．局所的経路（ａ）以下の非イオン性油中水型クリームを調製する：式（８）の化合物０．１００ｇ “anhydrous Eucerin”の商品名でＢＤＦ社から市販されている乳化ラノリン
アルコール、ワックスおよび精製油の混合物３９．９００ｇメチルパラ-ヒドロキシベンゾアート０．０７５ｇプロピルパラ-ヒドロキシベンゾアート０．０７５ｇ無菌脱イオン水全体を１００．０００ｇとする量このクリームは、３０日間、一日当たり１または２回、色素沈着欠乏した移植
された皮膚に適用される。

【００５２】（ｂ）以下の製剤を調製することによってゲルを調製する：式（１１）の化合物０．０５０ｇエリスロマイシン・ベース４．０００ｇブチルヒドロキシトルエン０．０５０ｇ “Klucel HF”の商品名でHercules社から市販されているヒドロキシプロピル
セルロース２．０００ｇエタノール（９５゜）全体を１００．０００ｇとする量このゲルは、処理するケースの深刻度に応じて、６〜１２週間、一日当たり１
〜３回、色素沈着欠乏の移植された皮膚に適用される。

【００５３】（ｃ）以下の成分を混合することにより、炎症後色素沈着欠乏を矯正するための
ローションを調製する：式（２）の化合物０．０３０ｇプロピレングリコール５．０００ｇブチルヒドロキシトルエン０．１００ｇエタノール（９５゜）全体を１００．０００ｇとする量このローションを一日に２回適用し、２〜６週間以内に顕著な改善が見られる
。

【００５４】（ｄ）日光の有害な影響に対抗する美容組成物が、以下の成分を混合することに
よって調製される：式（４）の化合物１．０００ｇベンジリデンカンファー４．０００ｇ脂肪酸トリグリセリド３１．０００ｇグリセリルモノステアラート６．０００ｇステアリン酸２．０００ｇセチルアルコール１．２００ｇラノリン４．０００ｇ防腐剤０．３００ｇプロピレングリコール２．０００ｇトリエタノールアミン０．５００ｇ香料０．４００ｇ脱イオン水全体を１００．０００ｇとする量この組成物は毎日適用され、光誘導老化を処置することができる。

【００５５】（ｅ）以下の非イオン性水中油型クリームが調製される：式（３）の化合物０．５００ｇビタミンＤ３０．０２０ｇセチルアルコール４．０００ｇグリセリルモノステアラート２．５００ｇＰＥＧ-５０ステアラート２．５００ｇカリテバター９．２００ｇプロピレングリコール２．０００ｇメチルパラ-ヒドロキシベンゾアート０．０７５ｇプロピルパラ-ヒドロキシベンゾアート０．０７５ｇ無菌脱イオン水全体を１００．０００ｇとする量このクリームは、白斑を有する皮膚に３０日間、一日に１または２回適用され
る。

【００５６】（ｆ）以下の成分を混合することにより局所的ゲルが調製される：式（１７）の化合物０．０５０ｇエタノール４３．０００ｇ α-トコフェロール０．０５０ｇ “Goodrich”社からCarbopol 941（登録商標）の商品名で市販されているカル
ボキシビニルポリマー０．５００ｇ２０重量％水溶液としてのトリエタノールアミン３．８００ｇ水９．３００ｇプロピレングリコール全体を１００．０００ｇとする量このゲルは、白斑を有する皮膚に、処理するケースの深刻度に応じて、６〜１
２週間、一日に１〜３回適用される。

【００５７】（ｇ）以下の成分を混合することにより、髪を再着色するヘアローションが調製
される：式（９）の化合物０．０５ｇ Minoxidil（登録商標）の商品名で市販されている化合物１．００ｇプロピレングリコール２０．００ｇエタノール３４．９２ｇポリエチレングリコール（分子量＝４００）４０．００ｇブチルヒドロキシアニソール０．０１ｇブチルヒドロキシトルエン０．０２ｇ水全体を１００．０００ｇとする量このローションは、深刻な脱色を有する頭皮に、３ヶ月間、一日に２回適用さ
れる。

【００５８】（ｈ）以下の成分を混合することにより、瘢痕形成後クリームが調製される：式（１３）の化合物０．０５０ｇレチノイン酸０．０１０ｇ “Gattefosse”社からGelot 64（登録商標）の商品名で市販されているグリセ
リルステアラートとポリエチレングリコールステアラート（７０ｍｏｌ）の混合
物１５．０００ｇ “Gattefosse”社からLabrafil M2130 CS（登録商標）の商品名で市販されて
いる６ｍｏｌのエチレンオキシドでポリオキシエチレン化された核油８．０００ｇペルヒドロスクアレン１０．０００ｇ防腐剤適量ポリエチレングリコール（分子量＝４００）８．０００ｇエチレンジアミン四酢酸の二ナトリウム塩０．０５０ｇ精製水全体を１００．０００ｇとする量このクリームは、６〜１２週間、一日に１〜３回適用される。

【００５９】（ｉ）以下の製剤を調製することにより、水中油型クリームが調製される：式（４）の化合物０．０２０ｇベタメタゾン１７-バレラート０．０５０ｇＳ-カルボキシメチルシステイン３．０００ｇ “Atlas”社からMyrj52（登録商標）の商品名で市販されているポリオキシエ
チレンステアラート（４０ｍｏｌのエチレンオキシド）４．０００ｇ “Atlas”社からTween 20（登録商標）の商品名で市販されている２０ｍｌの
エチレンオキシドでポリオキシエチレン化されたソルビタンモノラウラート１．８００ｇ “Gattefosse”社からGeleol（登録商標）の商品名で市販されているグリセリ
ルモノ-およびジステアラートの混合物４．２００ｇプロピレングリコール１０．０００ｇブチルヒドロキシアニソール０．０１０ｇブチルヒドロキシトルエン０．０２０ｇセトステアリルアルコール６．２００ｇ防腐剤適量ペルヒドロスクアレン１８．０００ｇ “Dynamit Nobel”社からMiglyol 812（登録商標）の商品名で市販されている
カプリル／カプリントリグリセリドの混合物４．０００ｇトリエタノールアミン（９９重量％）２．５００ｇ水全体を１００．０００ｇとする量このクリームは、老化による色素沈着の問題を有する皮膚に、一日に２回適用
される。

【００６０】（ｊ）以下の水中油型クリームが調製される：乳酸５．０００ｇ式（１３）の化合物０．０２０ｇ “Atlas”社からMyrj52（登録商標）の商品名で市販されているポリオキシエ
チレンステアラート（４０ｍｏｌのエチレンオキシド）４．０００ｇ “Atlas”社からTween 20（登録商標）の商品名で市販されている２０ｍｏｌ
のエチレンオキシドでポリオキシエチレン化されたソルビタンモノラウラート１．８００ｇ “Gattefosse”社からGeleol（登録商標）の商品名で市販されているグリセリ
ルモノ-およびジステアラートの混合物４．２００ｇプロピレングリコール１０．０００ｇブチルヒドロキシアニソール０．０１０ｇブチルヒドロキシトルエン０．０２０ｇセトステアリルアルコール６．２００ｇ防腐剤適量ペルヒドロスクアレン１８．０００ｇ “Dynamit Nobel”社からMiglyol 812（登録商標）の商品名で市販されている
カプリル／カプリントリグリセリドの混合物４．０００ｇ水全体を１００．０００ｇとする量

【００６１】（ｋ）スプレー型皮膚用ローション：式（１５）の化合物５．０００ｇエタノール３０．０００ｇ脱イオン水全体を１００．０００ｇとする量

【００６２】（ｌ）ヘアローション：式（１８）の化合物３．０００ｇプロピレングリコール３０．０００ｇエチルアルコール４０．５００ｇ水全体を１００．０００ｇとする量このローションは、一回当たり１ｍｌを１日に１または２回、頭皮に適用され
る。

【００６３】（ｍ）濃縮型ローション：式（１）の化合物５．０００ｇカワイン(Kawaine) ２．０００ｇヒドロキシプロピルセルロース（Hercules社のKlucel G（登録商標））３．５００ｇエチルアルコール全体を１００．０００ｇとする量この濃縮型ローションは、一回当たり１ｍｌを１日に１または２回、頭皮に適
用される。

【００６４】（ｎ）ニオソマル(Niosomal)ローション： Chimexane ML（登録商標）０．４７５ｇコレステロール０．４７５ｇステアロイルグルタミン酸モノナトリウム０．０５０ｇ式（３）の化合物０．１００ｇ防腐剤適量染料適量香料適量脱イオン水全体を１００．０００ｇとする量このローションは、一回当たり１ｍｌを１日に１または２回、頭皮に適用され
る。

【００６５】（ｏ）ローション：式（１７）の化合物５．０００ｇプロピレングリコールモノメチルエーテル（Dow Chemical社のDowanol PM（登
録商標））２０．０００ｇヒドロキシプロピルセルロース（Hercules社のKlucel G（登録商標））３．０００ｇエチルアルコール４０．０００ｇミノキシジル２．０００ｇ水全体を１００．０００ｇとする量この濃縮型ローションは、一回当たり１ｍｌを１日に１または２回、頭皮に適
用される。

【００６６】本発明についてある特定の実施態様に関して記載したが、本発明の精神から離
れることなく当業者による多くの修正および変更が可能である。それゆえ、特許
請求の範囲により、本発明の真の精神および範囲内に該当する全ての修正および
変更が担保されるべきである。

【図面の簡単な説明】

【図１】メラニン産生に影響する、本発明に従って同定された化合物の構
造を示す。

【図２】本発明の化合物を用いて処理される色素沈着疾患を示す。

【図３】本発明の化合物を用いて処理される色素沈着疾患を示す。

【図４】本発明の化合物を用いて処理される色素沈着疾患を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 7/42 Ａ６１Ｋ 7/42 7/48 7/48 31/381 31/381 31/455 31/455 Ａ６１Ｐ 17/00 Ａ６１Ｐ 17/00 43/00 １１１ 43/00 １１１ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷＦターム(参考） 4C083 AA122 AC012 AC022 AC072 AC102 AC122 AC172 AC231 AC242 AC302 AC311 AC402 AC422 AC432 AC442 AC472 AC482 AC532 AC542 AC582 AC662 AC772 AC831 AC832 AC851 AC852 AC861 AC862 AD042 AD092 AD282 AD492 AD512 AD532 AD611 AD621 AD622 AD652 AD662 BB21 BB41 BB45 BB46 BB47 BB48 BB60 CC02 CC05 CC19 CC33 CC36 DD23 DD32 DD33 DD41 DD45 EE16 4C086 AA01 AA02 BB02 BC19 GA08 MA01 MA04 NA14 ZA89 ZC41 4C206 AA01 AA02 DA12 DA16 MA01 MA04 NA14 ZA89 ZC41

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】カルボン酸が、遊離したまたは保護基で保護されたフェノー
ル、ナフトール、チオフェノールまたはチオナフトール基を含まないという条件
で、有効量の少なくとも一つの置換された芳香族または複素環式カルボン酸、誘
導体またはそれらの薬学的に許容できる塩を、皮膚および／または髪の色素沈着
を誘導するのに十分な時間、局所的に適用することを含む、ヒトの皮膚および／
または髪の色素沈着を変更（促進または阻害）する美容学／皮膚科学および／ま
たは治療学的方法。
【請求項２】化合物が、ヒトの皮膚および／または髪の色素沈着を促進す
るレチノイドシグナリング分子である、請求項１記載の方法。
【請求項３】化合物が、 4-[1-(5,6,7,8-テトラヒドロ-5,5,8,8-テトラメチル-2-ナフチル)エテニル]安息
香酸； 3-[3-(5,5,8,8-テトラメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)-フェ
ニル]-アクリル酸； 3-[3-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)-フ
ェニル]-ブト-2-エン酸； 6-[1-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)-シ
クロプロピル]-ニコチン酸； 3-[3-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)-フ
ェニル]-アクリル酸； 4-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-カルボニル)-
安息香酸； 4-(3-ブロモ-5,5,8,8-テトラメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル
オキシ)-安息香酸； 5-[(E)-2-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)
-プロペニル]-チオフェン-３-カルボン酸； 3-[3-(5,5,8,8-テトラメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イルスルフ
ァニル)-フェニル]-アクリル酸； 6-(3-ブチル-5,5,8,8-テトラメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル
スルファニル)-ニコチン酸； 4-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-2-ナフチルチオ)安息香酸； 3-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-2ナフチル)フェニルプロピ
オル酸；および 6-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-2ナフチルチオ)ニコチン酸
からなる群から選択される、請求項１記載の方法。
【請求項４】ヒトの皮膚の褐色化または日焼けを促進するために用いられ
る、請求項１記載の方法。
【請求項５】ヒトの髪の着色を促進するために用いられる、請求項１記載
の方法。
【請求項６】前記化合物が、局所的に適用できる組成物中に、当該組成物
の重量に対して０．００１ないし３０重量％の範囲で含まれる、請求項１記載の
方法。
【請求項７】前記化合物の量が、組成物の０．５ないし１５重量％の範囲
である、請求項１記載の方法。
【請求項８】（i）化合物が、ヒトの皮膚および／または髪の色素沈着を
変更するのに効果的である、遊離したまたは保護されたフェノール、ナフトール
、チオフェノールまたはチオナフトール基を含まないという条件で、所定の量の
少なくとも一つの置換された芳香族または複素環式カルボン酸化合物、誘導体ま
たはそれらの薬学的に許容できる塩；および（ii）薬理学、美容学または皮膚化学的に許容できるキャリアを含む、局所的に適用することによりヒトの皮膚および／または髪の色素沈着を
変更する薬理学／美容学／皮膚科学的組成物。
【請求項９】化合物が、 4-[1-(5,6,7,8-テトラヒドロ-5,5,8,8-テトラメチル-2-ナフチル)エテニル]安息
香酸； 3-[3-(5,5,8,8-テトラメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)-フェ
ニル]-アクリル酸； 3-[3-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)-フ
ェニル]-ブト-2-エン酸； 6-[1-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)-シ
クロプロピル]-ニコチン酸； 3-[3-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)-フ
ェニル]-アクリル酸； 4-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-カルボニル)-
安息香酸； 4-(3-ブロモ-5,5,8,8-テトラメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル
オキシ)-安息香酸； 5-[(E)-2-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル)
-プロペニル]-チオフェン-３-カルボン酸； 3-[3-(5,5,8,8-テトラメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イルスルフ
ァニル)-フェニル]-アクリル酸； 6-(3-ブチル-5,5,8,8-テトラメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-ナフタレン-2-イル
スルファニル)-ニコチン酸； 4-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-2-ナフチルチオ)安息香酸； 3-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-2ナフチル)フェニルプロピ
オル酸；および 6-(3,5,5,8,8-ペンタメチル-5,6,7,8-テトラヒドロ-2ナフチルチオ)ニコチン酸
からなる群から選択される、請求項８記載の組成物。
【請求項１０】前記化合物の量が、組成物の重量に対して０．００１ない
し３０重量％の範囲である、請求項８記載の組成物。
【請求項１１】前記化合物の量が、組成物の重量に対して０．５ないし１
５重量％の範囲である、請求項８記載の組成物。
【請求項１２】クリーム、ミルク、クリーム-ゲル、液状ローション、水
中油型エマルション、油中水型エマルションおよび小胞分散物からなる群から選
択される局所的適用に適した形態である、請求項８記載の組成物。
【請求項１３】皮膚および／または髪の色素沈着に影響を与える他の化合
物をさらに含む、請求項８記載の組成物。
【請求項１４】イオン性または非イオン性増粘剤、柔軟剤、抗酸化剤、乳
白剤、安定化剤、皮膚軟化薬、ＵＶ-Ａおよび／またはＵＶ-Ｂ領域において活性
な有機サンスクリーン剤、光保護無機顔料およびナノ顔料、保湿剤、ビタミン、
香料、防腐剤、フィラー、金属イオン遮閉剤、染料および着色料からなる群から
選択される少なくとも一つの成分をさらに含む、請求項８記載の組成物。
【請求項１５】以下の工程：（i）少なくとも二つのメラノサイト培養物を、化合物または化合物の組合せと
共にインキュベートし、ヒトの皮膚および／または髪の色素沈着に対するそれら
の効果を評価する工程；（ii）前記化合物または化合物の組合せが不在であることを除いて、前記培養物
と同じ条件下で培養されたコントロールのメラノサイト培養物と比較して、前記
培養物の一方に含まれるメラノサイトの増殖に対する、前記化合物または化合物
の組合せの効果を測定する工程；（iii）工程（ii）と同時または実質的に同時に、前記化合物または化合物の組
合せを用いてインキュベートした第二の前記培養物に含まれる細胞のメラニン含
量を測定し、前記化合物または化合物の組合せが不在であることを除いて同じ条
件下で生育したコントロール培養物に対してメラニン含量を比較する工程；（iv）工程（ii）および（iii）で得られたデータを比較し、メラノサイト培養
物における増殖（細胞数）に基づいてデータを適性化し、メラノサイトによるメ
ラニン産生に対する上記化合物または化合物の組合せの効果を調べる工程を含む、ヒトの皮膚および／または髪の色素沈着を変更（増大または低減）する
化合物または化合物の組合せを選択するインビトロにおける方法。
【請求項１６】前記メラノサイト培養物が、ヒトのメラノサイトを含む、
請求項１５記載の方法。
【請求項１７】ヒトのメラノサイトが、新生児の皮膚から得られる、請求
項１６記載の方法。
【請求項１８】工程（ii）が、前記第一の培養物におけるメラノサイトの
増殖を、吸光度によって調べることを含む、請求項１５記載の方法。
【請求項１９】工程（ii）が、（ＭＴＳ）３-（４,５-ジメチルチアゾー
ル-２-イル）-５-（３-カルボキシメトキシフェニル）-２-（４-スルホフェニル
）-２Ｈ-テトラゾリウム溶液を用いて前記細胞を処理し、当該ＭＴＳ処理細胞の
吸光度を４９０ｎｍにおいて測定することを含む、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】工程（iii）において、細胞を溶解し、細胞をアルカリ溶
液で処理し、４０５ｎｍにおける吸光度を測定することによって、そこに含まれ
るアルカリ溶解性メラニンの量を調べる、請求項１５記載の方法。
【請求項２１】メラニン含量を、前記化合物または化合物の組合せで処理
されていないコントロールのメラノサイト培養物と比較して、少なくとも２０％
まで変更することを基準に、前記化合物または化合物の組合せが選択される、請
求項１５記載の方法。
【請求項２２】前記化合物または化合物の組合せが、コントロールのメラ
ノサイト培養物と比較して少なくとも５０％までメラニン含量を変更する、請求
項２１記載の方法。
【請求項２３】前記化合物または化合物の組合せが、コントロールのメラ
ノサイト培養物と比較して少なくとも１５０％までメラニン含量を変更する、請
求項２２記載の方法。
【請求項２４】前記化合物または化合物の組合せが、少なくとも２５０％
までメラニン含量を変更する、請求項２２記載の方法。
【請求項２５】前記化合物が、ＲＸＲの活性を示す、請求項１記載の方法
。
【請求項２６】前記化合物が、ＲＸＲの活性を示す、請求項８記載の組成
物。
【請求項２７】前記化合物が、５０００ｎＭ未満のＲＸＲに対する結合を
示す、請求項２５記載の方法。
【請求項２８】前記化合物が、５０００ｎＭ未満のＲＸＲに対する結合を
示す、請求項２６記載の組成物。