JP2002287034A - 走査型光学顕微鏡 - Google Patents
走査型光学顕微鏡Info
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- JP2002287034A JP2002287034A JP2001083703A JP2001083703A JP2002287034A JP 2002287034 A JP2002287034 A JP 2002287034A JP 2001083703 A JP2001083703 A JP 2001083703A JP 2001083703 A JP2001083703 A JP 2001083703A JP 2002287034 A JP2002287034 A JP 2002287034A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】励起波長の種類よりも少ない数の光検出器を用
いて小型化、低価格化を図り、かつ短時間での画像取得
を行なうこと。 【解決手段】励起波長λ１、λ２、λ３のレーザ光を遮
断し、かつ多重染色蛍光標本１から発した蛍光波長
λ１’、λ２’、λ３’の蛍光を透過する特性を有する
１つのバリアフィルタ１７を透過した蛍光を１つの光検
出器１８により検出し、この光検出器１８から出力され
る蛍光強度信号に基づいて画像形成装置１９により励起
波長λ１、λ２、λ３ごとの画像を形成し、これら画像
を合成して多重染色蛍光標本１の画像を取得する。
いて小型化、低価格化を図り、かつ短時間での画像取得
を行なうこと。 【解決手段】励起波長λ１、λ２、λ３のレーザ光を遮
断し、かつ多重染色蛍光標本１から発した蛍光波長
λ１’、λ２’、λ３’の蛍光を透過する特性を有する
１つのバリアフィルタ１７を透過した蛍光を１つの光検
出器１８により検出し、この光検出器１８から出力され
る蛍光強度信号に基づいて画像形成装置１９により励起
波長λ１、λ２、λ３ごとの画像を形成し、これら画像
を合成して多重染色蛍光標本１の画像を取得する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、複数の波長の励起
光を多重染色蛍光標本に照射して当該標本を露光し、こ
の多重染色蛍光標本から発せられた蛍光を検出して多重
染色観察を行なう走査型光学顕微鏡に関する。
光を多重染色蛍光標本に照射して当該標本を露光し、こ
の多重染色蛍光標本から発せられた蛍光を検出して多重
染色観察を行なう走査型光学顕微鏡に関する。
【０００２】
【従来の技術】例えば共焦点レーザ走査型光学顕微鏡を
用いて多重染色蛍光標本を観察する場合には、標本を多
重染色した複数の試薬に対応する複数波長の蛍光が発せ
られるので、これら波長の蛍光をそれぞれ検出するため
に複数の光検出器が備えられている。
用いて多重染色蛍光標本を観察する場合には、標本を多
重染色した複数の試薬に対応する複数波長の蛍光が発せ
られるので、これら波長の蛍光をそれぞれ検出するため
に複数の光検出器が備えられている。
【０００３】ところが、励起光の波長に対する蛍光の発
光波長帯域が広い試薬に対しては、各蛍光波長毎に別れ
ている複数の光検出器によって同時にその試薬により発
せられる蛍光が検出されてしまい、多重染色してその標
本を観察する意味をなさなくなってしまう。
光波長帯域が広い試薬に対しては、各蛍光波長毎に別れ
ている複数の光検出器によって同時にその試薬により発
せられる蛍光が検出されてしまい、多重染色してその標
本を観察する意味をなさなくなってしまう。
【０００４】このようなことを回避するために、波長帯
域が隣接する各光検出器により上記蛍光の発光波長帯域
が広い試薬の蛍光を検出しないように、一画面の標本に
対する画像取得毎に励起波長を切り換え、当該励起波長
に応じた波長の蛍光を発せさせ、画像を取得するシーケ
ンシャルスキャン方法が行われている。この方法におい
て、各光検出器は、その蛍光波長に応じた特性のチャン
ネルに割当てられており、励起波長の種類と同じ数の光
検出器が用いられている。
域が隣接する各光検出器により上記蛍光の発光波長帯域
が広い試薬の蛍光を検出しないように、一画面の標本に
対する画像取得毎に励起波長を切り換え、当該励起波長
に応じた波長の蛍光を発せさせ、画像を取得するシーケ
ンシャルスキャン方法が行われている。この方法におい
て、各光検出器は、その蛍光波長に応じた特性のチャン
ネルに割当てられており、励起波長の種類と同じ数の光
検出器が用いられている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記レ
ーザ走査型光学顕微鏡のようにそれぞれ異なる励起波長
の励起光を順次スキャンし、それぞれの蛍光波長に応じ
たチャンネルに用意された各光検出器によって蛍光を検
出して多重染色蛍光標本の画像を取得する方法では、励
起波長の種類に応じた数だけ光検出器が必要であり、そ
のうえに各チャンネルごとに最適な共焦点開口、分光フ
ィルタ、励起光カットフィルタなどが必要となり、顕微
鏡が大型化すると共に高価になっていた。
ーザ走査型光学顕微鏡のようにそれぞれ異なる励起波長
の励起光を順次スキャンし、それぞれの蛍光波長に応じ
たチャンネルに用意された各光検出器によって蛍光を検
出して多重染色蛍光標本の画像を取得する方法では、励
起波長の種類に応じた数だけ光検出器が必要であり、そ
のうえに各チャンネルごとに最適な共焦点開口、分光フ
ィルタ、励起光カットフィルタなどが必要となり、顕微
鏡が大型化すると共に高価になっていた。
【０００６】通常、生物標本の蛍光観察においては、励
起光による標本に対する光毒性の影響を少なくするため
に励起光の露光を最小限にすることが要求されている。
ところが、一画面の画像を取得するのに励起露光を励起
波長の種類だけ複数回行なうため、これら励起露光を行
なうだけでも時間がかかっている。
起光による標本に対する光毒性の影響を少なくするため
に励起光の露光を最小限にすることが要求されている。
ところが、一画面の画像を取得するのに励起露光を励起
波長の種類だけ複数回行なうため、これら励起露光を行
なうだけでも時間がかかっている。
【０００７】そこで本発明は、励起波長の種類よりも少
ない数の光検出器を用いて小型化、低価格化を図り、か
つ短時間での画像取得ができる走査型光学顕微鏡を提供
することを目的とする。
ない数の光検出器を用いて小型化、低価格化を図り、か
つ短時間での画像取得ができる走査型光学顕微鏡を提供
することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】請求項１記載による本発
明は、複数の波長の励起光を多重染色蛍光標本に照射し
て当該標本の多重染色観察を行なう走査型光学顕微鏡に
おいて、複数の前記励起波長を遮断し、かつ前記多重染
色蛍光標本から発せられた複数の蛍光波長の光を透過す
るバリアフィルタと、このバリアフィルタを透過した前
記蛍光を受光してその蛍光強度を検出する前記励起波長
の数よりも少ない光検出器と、この光検出器から出力さ
れる蛍光強度信号に基づいて前記励起波長ごとの画像を
形成し、これら画像を合成して前記多重染色蛍光標本の
画像を取得する画像形成手段とを具備したことを特徴と
する走査型光学顕微鏡である。
明は、複数の波長の励起光を多重染色蛍光標本に照射し
て当該標本の多重染色観察を行なう走査型光学顕微鏡に
おいて、複数の前記励起波長を遮断し、かつ前記多重染
色蛍光標本から発せられた複数の蛍光波長の光を透過す
るバリアフィルタと、このバリアフィルタを透過した前
記蛍光を受光してその蛍光強度を検出する前記励起波長
の数よりも少ない光検出器と、この光検出器から出力さ
れる蛍光強度信号に基づいて前記励起波長ごとの画像を
形成し、これら画像を合成して前記多重染色蛍光標本の
画像を取得する画像形成手段とを具備したことを特徴と
する走査型光学顕微鏡である。
【０００９】請求項２記載による本発明は、請求項１記
載の走査型光学顕微鏡において、複数の波長の前記励起
光を順次切換えて前記多重染色蛍光標本に照射したとき
に、前記多重染色蛍光標本からそれぞれ発せられる複数
波長の前記蛍光を透過する１つの前記バリアフィルタ
と、このバリアフィルタを透過した前記蛍光を受光する
１つの前記光検出器とからなることを特徴とする。
載の走査型光学顕微鏡において、複数の波長の前記励起
光を順次切換えて前記多重染色蛍光標本に照射したとき
に、前記多重染色蛍光標本からそれぞれ発せられる複数
波長の前記蛍光を透過する１つの前記バリアフィルタ
と、このバリアフィルタを透過した前記蛍光を受光する
１つの前記光検出器とからなることを特徴とする。
【００１０】請求項３記載による本発明は、複数の波長
の励起光を多重染色蛍光標本に照射して当該標本の多重
染色観察を行なう走査型光学顕微鏡において、前記多重
染色蛍光標本から発せられた複数波長の前記蛍光を所定
の波長を境として分光する光分光手段と、この光分光手
段による各分光光路上にそれぞれ配置され、少なくとも
不要な前記励起波長を遮断し、かつ前記蛍光波長の光を
透過する複数のバリアフィルタと、これらバリアフィル
タを透過した前記蛍光をそれぞれ受光してその各蛍光強
度を検出する前記励起波長の数よりも少ない光検出器
と、これら光検出器から出力される各蛍光強度信号に基
づいて前記励起波長ごとの各画像を形成し、これら画像
を合成して前記多重染色蛍光標本の画像を取得する画像
形成手段とを具備したことを特徴とする走査型光学顕微
鏡である。
の励起光を多重染色蛍光標本に照射して当該標本の多重
染色観察を行なう走査型光学顕微鏡において、前記多重
染色蛍光標本から発せられた複数波長の前記蛍光を所定
の波長を境として分光する光分光手段と、この光分光手
段による各分光光路上にそれぞれ配置され、少なくとも
不要な前記励起波長を遮断し、かつ前記蛍光波長の光を
透過する複数のバリアフィルタと、これらバリアフィル
タを透過した前記蛍光をそれぞれ受光してその各蛍光強
度を検出する前記励起波長の数よりも少ない光検出器
と、これら光検出器から出力される各蛍光強度信号に基
づいて前記励起波長ごとの各画像を形成し、これら画像
を合成して前記多重染色蛍光標本の画像を取得する画像
形成手段とを具備したことを特徴とする走査型光学顕微
鏡である。
【００１１】請求項４記載による本発明は、請求項３記
載の走査型光学顕微鏡において、複数の前記バリアフィ
ルタは、それぞれ前記所定の波長を境として当該境の波
長よりも短い波長帯域の前記蛍光波長を透過する特性を
有する前記バリアフィルタを一方の前記分光光路上に配
置し、前記境の波長よりも長い波長帯域の前記蛍光波長
を透過する特性を有する前記バリアフィルタを他方の前
記分光光路上に配置することを特徴とする。
載の走査型光学顕微鏡において、複数の前記バリアフィ
ルタは、それぞれ前記所定の波長を境として当該境の波
長よりも短い波長帯域の前記蛍光波長を透過する特性を
有する前記バリアフィルタを一方の前記分光光路上に配
置し、前記境の波長よりも長い波長帯域の前記蛍光波長
を透過する特性を有する前記バリアフィルタを他方の前
記分光光路上に配置することを特徴とする。
【００１２】請求項５記載による本発明は、請求項３記
載の走査型光学顕微鏡において、複数の波長の前記励起
光を前記多重染色蛍光標本に照射するとき、これら励起
光のうち隣接しない波長帯域となる複数の波長の前記励
起光を同時に前記多重染色蛍光標本に照射することを特
徴とする。
載の走査型光学顕微鏡において、複数の波長の前記励起
光を前記多重染色蛍光標本に照射するとき、これら励起
光のうち隣接しない波長帯域となる複数の波長の前記励
起光を同時に前記多重染色蛍光標本に照射することを特
徴とする。
【００１３】
【発明の実施の形態】（１）以下、本発明の第１の実施
の形態について図面を参照して説明する。
の形態について図面を参照して説明する。
【００１４】図１は共焦点レーザ走査型光学顕微鏡の構
成図である。複数の試薬により染色された多重染色蛍光
標本１の励起に必要なそれぞれ異なる複数の波長のレー
ザ光（励起光）を出力する各レーザ光源２、３、４が備
えられている。これらレーザ光源２、３、４は、３重染
色した多重染色蛍光標本１を観察するためのものであ
る。これらレーザ光源２、３、４は、それぞれ励起波長
λ１、λ２、λ３の各レーザ光を出力するもので、これ
ら励起波長λ１、λ２、λ３の長さはλ１＜λ２＜λ３
の関係となっており、これら励起波長λ１、λ２、λ３
の中心波長は具体的にλ１は４８８ｎｍ、λ２は５４３
ｎｍ、λ３は６３３ｎｍとなっている。
成図である。複数の試薬により染色された多重染色蛍光
標本１の励起に必要なそれぞれ異なる複数の波長のレー
ザ光（励起光）を出力する各レーザ光源２、３、４が備
えられている。これらレーザ光源２、３、４は、３重染
色した多重染色蛍光標本１を観察するためのものであ
る。これらレーザ光源２、３、４は、それぞれ励起波長
λ１、λ２、λ３の各レーザ光を出力するもので、これ
ら励起波長λ１、λ２、λ３の長さはλ１＜λ２＜λ３
の関係となっており、これら励起波長λ１、λ２、λ３
の中心波長は具体的にλ１は４８８ｎｍ、λ２は５４３
ｎｍ、λ３は６３３ｎｍとなっている。
【００１５】これらレーザ光源２、３、４の出力光路上
には、それぞれ各シャッタ５、６、７を介して各ダイク
ロイックミラー８、９とミラー１０が配置されている。
このうち各シャッタ５、６、７は、シャッタ制御装置１
１により１画面取得毎に順次開閉制御されて各励起波長
λ１、λ２、λ３のレーザ光を順次切り替えて顕微鏡本
体１２に導入させるものとなっている。
には、それぞれ各シャッタ５、６、７を介して各ダイク
ロイックミラー８、９とミラー１０が配置されている。
このうち各シャッタ５、６、７は、シャッタ制御装置１
１により１画面取得毎に順次開閉制御されて各励起波長
λ１、λ２、λ３のレーザ光を順次切り替えて顕微鏡本
体１２に導入させるものとなっている。
【００１６】各ダイクロイックミラー８、９とミラー１
０は、上記の如く各レーザ光源２、３、４の出力光路上
に配置され、かつミラー１０の反射光路上に各ダイクロ
イックミラー８、９が配置されている。
０は、上記の如く各レーザ光源２、３、４の出力光路上
に配置され、かつミラー１０の反射光路上に各ダイクロ
イックミラー８、９が配置されている。
【００１７】このうちミラー１０は励起波長λ３のレー
ザ光を反射する特性を有し、ダイクロイックミラー９は
励起波長λ３のレーザ光を透過しかつ励起波長λ２のレ
ーザ光を励起波長λ３のレーザ光の透過方向と同一方向
に反射する特性を有し、ダイクロイックミラー８は励起
波長λ３及びλ２のレーザ光を反射しかつ励起波長λ １
のレーザ光を励起波長λ３及びλ２のレーザ光の反射方
向と同一方向に透過する特性を有している。
ザ光を反射する特性を有し、ダイクロイックミラー９は
励起波長λ３のレーザ光を透過しかつ励起波長λ２のレ
ーザ光を励起波長λ３のレーザ光の透過方向と同一方向
に反射する特性を有し、ダイクロイックミラー８は励起
波長λ３及びλ２のレーザ光を反射しかつ励起波長λ １
のレーザ光を励起波長λ３及びλ２のレーザ光の反射方
向と同一方向に透過する特性を有している。
【００１８】顕微鏡本体１２内には、当該顕微鏡本体１
２内に導入されるレーザ光の光路上にダイクロイックミ
ラー１３が配置されている。このダイクロイックミラー
１３は、当該顕微鏡本体１２内に導入される励起波長λ
１、λ２、λ３のレーザ光を反射し、かつ多重染色蛍光
標本１から発した蛍光波長λ１’、λ２’、λ３’の蛍
光を透過する特性を有している。
２内に導入されるレーザ光の光路上にダイクロイックミ
ラー１３が配置されている。このダイクロイックミラー
１３は、当該顕微鏡本体１２内に導入される励起波長λ
１、λ２、λ３のレーザ光を反射し、かつ多重染色蛍光
標本１から発した蛍光波長λ１’、λ２’、λ３’の蛍
光を透過する特性を有している。
【００１９】このダイクロイックミラー１３の反射光路
上には、互いに直交する２つの偏向素子１４、１５が配
置されている。これら偏向素子１４、１５は、例えばガ
ルバノミラーが用いられ、励起波長λ１、λ２、λ３の
レーザ光をそれぞれ多重染色蛍光標本１の全面に対して
走査（スキャン）照射して当該標本１を励起するもので
ある。
上には、互いに直交する２つの偏向素子１４、１５が配
置されている。これら偏向素子１４、１５は、例えばガ
ルバノミラーが用いられ、励起波長λ１、λ２、λ３の
レーザ光をそれぞれ多重染色蛍光標本１の全面に対して
走査（スキャン）照射して当該標本１を励起するもので
ある。
【００２０】多重染色蛍光標本１から発せられた蛍光波
長λ１’、λ２’、λ３’の蛍光は、戻り光として偏向
素子１５、１４を経由し、ダイクロイックミラー１３を
透過するものとなる。
長λ１’、λ２’、λ３’の蛍光は、戻り光として偏向
素子１５、１４を経由し、ダイクロイックミラー１３を
透過するものとなる。
【００２１】このダイクロイックミラー１３の透過光路
上には、共焦点開口部１６を介してバリアフィルタ１７
が配置されている。このバリアフィルタ１７は、励起波
長λ １、λ２、λ３のレーザ光を遮断し、かつ多重染色
蛍光標本１から発せられた蛍光波長λ１’、λ２’、λ
３’の蛍光を透過する波長特性を有している。図２はか
かるバリアフィルタ１７の波長特性図である。この波長
特性図は、縦軸に分光透過率Ｔ、横軸に波長λを示して
いる。蛍光波長λ１’、λ２’、λ３’の中心波長は、
それぞれ具体的に５２０ｎｍ、５９０ｎｍ、６６０ｎｍ
である。このバリアフィルタ１７の波長特性は、各励起
波長λ１、λ２、λ３のレーザ光に対して透過率を０．
０１％以下に設定し、検出すべき蛍光波長λ１’、
λ２’、λ３’の蛍光に対しては透過率８０％以上の製
造できうる最大限の透過率に設定されている。このバリ
アフィルタ１７は、１枚の基板上に形成してもよいし、
又は複数の基板に形成した波長特性の異なる基板を組み
（重ね）合わせて形成してもよい。
上には、共焦点開口部１６を介してバリアフィルタ１７
が配置されている。このバリアフィルタ１７は、励起波
長λ １、λ２、λ３のレーザ光を遮断し、かつ多重染色
蛍光標本１から発せられた蛍光波長λ１’、λ２’、λ
３’の蛍光を透過する波長特性を有している。図２はか
かるバリアフィルタ１７の波長特性図である。この波長
特性図は、縦軸に分光透過率Ｔ、横軸に波長λを示して
いる。蛍光波長λ１’、λ２’、λ３’の中心波長は、
それぞれ具体的に５２０ｎｍ、５９０ｎｍ、６６０ｎｍ
である。このバリアフィルタ１７の波長特性は、各励起
波長λ１、λ２、λ３のレーザ光に対して透過率を０．
０１％以下に設定し、検出すべき蛍光波長λ１’、
λ２’、λ３’の蛍光に対しては透過率８０％以上の製
造できうる最大限の透過率に設定されている。このバリ
アフィルタ１７は、１枚の基板上に形成してもよいし、
又は複数の基板に形成した波長特性の異なる基板を組み
（重ね）合わせて形成してもよい。
【００２２】光検出器１８は、バリアフィルタ１７を透
過した蛍光波長λ１’、λ２’、λ ３’の蛍光をそれぞ
れ受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強度信号を出力
するもので、例えば１つのフォトマルが用いられてい
る。
過した蛍光波長λ１’、λ２’、λ ３’の蛍光をそれぞ
れ受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強度信号を出力
するもので、例えば１つのフォトマルが用いられてい
る。
【００２３】画像形成装置１９は、光検出器１８から出
力された蛍光強度信号を取り込んで蓄積し、この蛍光強
度信号を各偏向素子１４、１５の駆動信号に同期して内
部に設定された直交座標上に配置して各励起波長λ１、
λ２、λ３ごとの２次元画像を形成し、これら２次元画
像を合成して多重染色蛍光標本１の画像を取得する機能
を有している。
力された蛍光強度信号を取り込んで蓄積し、この蛍光強
度信号を各偏向素子１４、１５の駆動信号に同期して内
部に設定された直交座標上に配置して各励起波長λ１、
λ２、λ３ごとの２次元画像を形成し、これら２次元画
像を合成して多重染色蛍光標本１の画像を取得する機能
を有している。
【００２４】この画像形成装置１９は、取得した多重染
色蛍光標本１の画像を表示装置２０に表示したり、図示
しない印刷装置等により印字出力させたりするものとな
っている。
色蛍光標本１の画像を表示装置２０に表示したり、図示
しない印刷装置等により印字出力させたりするものとな
っている。
【００２５】なお、この画像形成装置１９は、コンピュ
ータを備え、画像処理等を実行するプログラムやシャッ
タ制御装置１１に指令を発するためのプログラム、各偏
向素子１４、１５を駆動するためのプログラムを記憶
し、これらプログラムを実行して多重染色蛍光標本１の
画像を取得する一連の動作制御を行なう機能を有してい
る。
ータを備え、画像処理等を実行するプログラムやシャッ
タ制御装置１１に指令を発するためのプログラム、各偏
向素子１４、１５を駆動するためのプログラムを記憶
し、これらプログラムを実行して多重染色蛍光標本１の
画像を取得する一連の動作制御を行なう機能を有してい
る。
【００２６】次に、上記の如く構成された顕微鏡の作用
について説明する。
について説明する。
【００２７】画像形成装置１９は、シャッタ制御装置１
１に対して一画面の画像が作成されるごとに各シャッタ
５、６、７を順次切り替えて開閉する指令を発し、かつ
各偏向素子１４、１５に対してレーザ光を多重染色蛍光
標本１に対して走査照射させる指令を発する。
１に対して一画面の画像が作成されるごとに各シャッタ
５、６、７を順次切り替えて開閉する指令を発し、かつ
各偏向素子１４、１５に対してレーザ光を多重染色蛍光
標本１に対して走査照射させる指令を発する。
【００２８】先ず、シャッタ５が開放され、他の各シャ
ッタ６、７が遮蔽されている。レーザ光源２から出力さ
れた励起波長λ１のレーザ光は、シャッタ５からダイク
ロイックミラー８を透過して顕微鏡本体１２内に導入さ
れ、さらに当該顕微鏡本体１２内のダイクロイックミラ
ー１３で反射し、各偏向素子１４、１５により多重染色
蛍光標本１の全面に対して走査照射される。これによ
り、多重染色蛍光標本１は、励起される。
ッタ６、７が遮蔽されている。レーザ光源２から出力さ
れた励起波長λ１のレーザ光は、シャッタ５からダイク
ロイックミラー８を透過して顕微鏡本体１２内に導入さ
れ、さらに当該顕微鏡本体１２内のダイクロイックミラ
ー１３で反射し、各偏向素子１４、１５により多重染色
蛍光標本１の全面に対して走査照射される。これによ
り、多重染色蛍光標本１は、励起される。
【００２９】この多重染色蛍光標本１から発せられた蛍
光波長λ１’の蛍光は、戻り光として偏向素子１５、１
４を経由し、ダイクロイックミラー１３を透過し、さら
に共焦点開口部１６に集光されてこの共焦点開口部１６
を通過し、バリアフィルタ１７に入射する。
光波長λ１’の蛍光は、戻り光として偏向素子１５、１
４を経由し、ダイクロイックミラー１３を透過し、さら
に共焦点開口部１６に集光されてこの共焦点開口部１６
を通過し、バリアフィルタ１７に入射する。
【００３０】このバリアフィルタ１７は、上記図２に示
す波長特性図に示すように励起波長λ１のレーザ光を遮
断し、かつ多重染色蛍光標本１から発せられた蛍光波長
λ１’の蛍光を透過する波長特性を有しているので、多
重染色蛍光標本１から発せられた蛍光波長λ１’の蛍光
は、バリアフィルタ１７を透過し、光検出器１８に入射
する。
す波長特性図に示すように励起波長λ１のレーザ光を遮
断し、かつ多重染色蛍光標本１から発せられた蛍光波長
λ１’の蛍光を透過する波長特性を有しているので、多
重染色蛍光標本１から発せられた蛍光波長λ１’の蛍光
は、バリアフィルタ１７を透過し、光検出器１８に入射
する。
【００３１】この光検出器１８は、バリアフィルタ１７
を透過した蛍光波長λ１’の蛍光を受光して蛍光強度を
検出し、その蛍光強度信号を出力する。
を透過した蛍光波長λ１’の蛍光を受光して蛍光強度を
検出し、その蛍光強度信号を出力する。
【００３２】画像形成装置１９は、光検出器１８から出
力された蛍光強度信号を取り込んで蓄積し、この蛍光強
度信号を各偏向素子１４、１５の駆動信号に同期して内
部に設定された直交座標上に配置して励起波長λ１の２
次元画像を形成する。
力された蛍光強度信号を取り込んで蓄積し、この蛍光強
度信号を各偏向素子１４、１５の駆動信号に同期して内
部に設定された直交座標上に配置して励起波長λ１の２
次元画像を形成する。
【００３３】次に、シャッタ６が開放され、他の各シャ
ッタ５、７が遮蔽される。レーザ光源３から出力された
励起波長λ２のレーザ光は、シャッタ６を通過してダイ
クロイックミラー９で反射され、ダイクロイックミラー
８で反射されて顕微鏡本体１２内に導入され、さらに当
該顕微鏡本体１２内のダイクロイックミラー１３で反射
し、各偏向素子１４、１５により多重染色蛍光標本１の
全面に対して走査（スキャン）照射される。これによ
り、多重染色蛍光標本１は、励起される。
ッタ５、７が遮蔽される。レーザ光源３から出力された
励起波長λ２のレーザ光は、シャッタ６を通過してダイ
クロイックミラー９で反射され、ダイクロイックミラー
８で反射されて顕微鏡本体１２内に導入され、さらに当
該顕微鏡本体１２内のダイクロイックミラー１３で反射
し、各偏向素子１４、１５により多重染色蛍光標本１の
全面に対して走査（スキャン）照射される。これによ
り、多重染色蛍光標本１は、励起される。
【００３４】この多重染色蛍光標本１から発せられた蛍
光波長λ２’の蛍光は、戻り光として偏向素子１５、１
４を経由し、ダイクロイックミラー１３を透過し、さら
に共焦点開口部１６に集光されてこの共焦点開口部１６
を通過し、バリアフィルタ１７に入射する。
光波長λ２’の蛍光は、戻り光として偏向素子１５、１
４を経由し、ダイクロイックミラー１３を透過し、さら
に共焦点開口部１６に集光されてこの共焦点開口部１６
を通過し、バリアフィルタ１７に入射する。
【００３５】このバリアフィルタ１７は、上記図２に示
す波長特性図に示すように励起波長λ２のレーザ光を遮
断し、かつ多重染色蛍光標本１から発せられた蛍光波長
λ２’の蛍光を透過する波長特性を有しているので、多
重染色蛍光標本１から発せられた蛍光波長λ２’の蛍光
は、バリアフィルタ１７を透過し、光検出器１８に入射
する。
す波長特性図に示すように励起波長λ２のレーザ光を遮
断し、かつ多重染色蛍光標本１から発せられた蛍光波長
λ２’の蛍光を透過する波長特性を有しているので、多
重染色蛍光標本１から発せられた蛍光波長λ２’の蛍光
は、バリアフィルタ１７を透過し、光検出器１８に入射
する。
【００３６】この光検出器１８は、バリアフィルタ１７
を透過した蛍光波長λ２’の蛍光を受光して蛍光強度を
検出し、その蛍光強度信号を出力する。
を透過した蛍光波長λ２’の蛍光を受光して蛍光強度を
検出し、その蛍光強度信号を出力する。
【００３７】画像形成装置１９は、光検出器１８から出
力された蛍光強度信号を取り込んで蓄積し、この蛍光強
度信号を各偏向素子１４、１５の駆動信号に同期して内
部に設定された直交座標上に配置して励起波長λ２の２
次元画像を形成する。
力された蛍光強度信号を取り込んで蓄積し、この蛍光強
度信号を各偏向素子１４、１５の駆動信号に同期して内
部に設定された直交座標上に配置して励起波長λ２の２
次元画像を形成する。
【００３８】次に、シャッタ７が開放され、他の各シャ
ッタ５、６が遮蔽される。レーザ光源３から出力された
励起波長λ３のレーザ光は、シャッタ７を通過してミラ
ー１０で反射された後、ダイクロイックミラー９を通過
してダイクロイックミラー８で反射され、顕微鏡本体１
２内に導入され、ダイクロイックミラー１３で反射し、
各偏向素子１４、１５により多重染色蛍光標本１に対し
て走査（スキャン）照射され、多重染色蛍光標本１を励
起する。
ッタ５、６が遮蔽される。レーザ光源３から出力された
励起波長λ３のレーザ光は、シャッタ７を通過してミラ
ー１０で反射された後、ダイクロイックミラー９を通過
してダイクロイックミラー８で反射され、顕微鏡本体１
２内に導入され、ダイクロイックミラー１３で反射し、
各偏向素子１４、１５により多重染色蛍光標本１に対し
て走査（スキャン）照射され、多重染色蛍光標本１を励
起する。
【００３９】この多重染色蛍光標本１から発せられた蛍
光波長λ３’の蛍光は、各偏向素子１５、１４を経由
し、ダイクロイックミラー１３を透過し、共焦点開口部
１６を通過してバリアフィルタ１７に入射する。
光波長λ３’の蛍光は、各偏向素子１５、１４を経由
し、ダイクロイックミラー１３を透過し、共焦点開口部
１６を通過してバリアフィルタ１７に入射する。
【００４０】このバリアフィルタ１７は、上記図２に示
す波長特性図に示すように励起波長λ３のレーザ光を遮
断し、かつ多重染色蛍光標本１から発した蛍光波長
λ３’の蛍光を透過する波長特性を有しているので、多
重染色蛍光標本１で発した蛍光波長λ３’の蛍光は、バ
リアフィルタ１７を透過し、光検出器１８に入射する。
す波長特性図に示すように励起波長λ３のレーザ光を遮
断し、かつ多重染色蛍光標本１から発した蛍光波長
λ３’の蛍光を透過する波長特性を有しているので、多
重染色蛍光標本１で発した蛍光波長λ３’の蛍光は、バ
リアフィルタ１７を透過し、光検出器１８に入射する。
【００４１】この光検出器１８は、バリアフィルタ１７
を透過した蛍光波長λ３’の蛍光を受光して蛍光強度を
検出し、その蛍光強度信号を出力する。
を透過した蛍光波長λ３’の蛍光を受光して蛍光強度を
検出し、その蛍光強度信号を出力する。
【００４２】画像形成装置１９は、光検出器１８から出
力された蛍光強度信号を取り込んで蓄積し、この蛍光強
度信号を各偏向素子１４、１５の駆動信号に同期して内
部に設定された直交座標上に配置して励起波長λ３の２
次元画像を形成する。
力された蛍光強度信号を取り込んで蓄積し、この蛍光強
度信号を各偏向素子１４、１５の駆動信号に同期して内
部に設定された直交座標上に配置して励起波長λ３の２
次元画像を形成する。
【００４３】そして、画像形成装置１９は、各励起波長
λ１、λ２、λ３の３枚の２次元画像を合成して多重染
色蛍光標本１の画像を取得し、同画像を表示装置２０に
表示したり、図示しない印刷装置等により印字出力させ
たりする。
λ１、λ２、λ３の３枚の２次元画像を合成して多重染
色蛍光標本１の画像を取得し、同画像を表示装置２０に
表示したり、図示しない印刷装置等により印字出力させ
たりする。
【００４４】このように上記第１の実施の形態において
は、励起波長λ１、λ２、λ３のレーザ光を遮断し、か
つ多重染色蛍光標本１から発せられた蛍光波長λ１’、
λ２’、λ３’の蛍光を透過する特性を有する１つのバ
リアフィルタ１７を用い、このバリアフィルタ１７を透
過した蛍光を１つの光検出器１８により検出し、この光
検出器１８から出力される蛍光強度信号に基づいて励起
波長λ１、λ２、λ３ごとの画像を形成し、これら画像
を合成して多重染色蛍光標本１の画像を取得するように
したので、３つの励起波長λ１、λ２、λ３の種類より
も少ない１つの光検出器１８を用いて多重染色蛍光標本
１の画像を取得して３重染色観察をすることができ、そ
のうえ顕微鏡の小型化、低価格化を図ることができる。
は、励起波長λ１、λ２、λ３のレーザ光を遮断し、か
つ多重染色蛍光標本１から発せられた蛍光波長λ１’、
λ２’、λ３’の蛍光を透過する特性を有する１つのバ
リアフィルタ１７を用い、このバリアフィルタ１７を透
過した蛍光を１つの光検出器１８により検出し、この光
検出器１８から出力される蛍光強度信号に基づいて励起
波長λ１、λ２、λ３ごとの画像を形成し、これら画像
を合成して多重染色蛍光標本１の画像を取得するように
したので、３つの励起波長λ１、λ２、λ３の種類より
も少ない１つの光検出器１８を用いて多重染色蛍光標本
１の画像を取得して３重染色観察をすることができ、そ
のうえ顕微鏡の小型化、低価格化を図ることができる。
【００４５】又、励起波長λ１、λ２、λ３のレーザ光
を順次多重染色蛍光標本１に照射して励起し、このとき
発せられた各蛍光波長λ１’、λ２’、λ３’の蛍光を
順次検出してその画像を形成し、これら画像を合成して
多重染色蛍光標本１の画像を取得するので、短時間での
多重染色蛍光標本１の画像を取得できる。
を順次多重染色蛍光標本１に照射して励起し、このとき
発せられた各蛍光波長λ１’、λ２’、λ３’の蛍光を
順次検出してその画像を形成し、これら画像を合成して
多重染色蛍光標本１の画像を取得するので、短時間での
多重染色蛍光標本１の画像を取得できる。
【００４６】なお、当該共焦点レーザ走査型光学顕微鏡
では、多重染色蛍光標本１をこの標本１の厚さ方向に一
定間隔で送りながら画像を取得して、多重染色蛍光標本
１の３次元画像を構築したり、３画面像取得を連続又は
間欠取得して時間経過と共に観察、解析を行なうことも
できる。
では、多重染色蛍光標本１をこの標本１の厚さ方向に一
定間隔で送りながら画像を取得して、多重染色蛍光標本
１の３次元画像を構築したり、３画面像取得を連続又は
間欠取得して時間経過と共に観察、解析を行なうことも
できる。
【００４７】（２）次に、本発明の第２の実施の形態に
ついて図面を参照して説明する。なお、図１と同一部分
には同一符号を付してその詳しい説明は省略する。
ついて図面を参照して説明する。なお、図１と同一部分
には同一符号を付してその詳しい説明は省略する。
【００４８】図３は共焦点レーザ走査型光学顕微鏡の構
成図である。この共焦点レーザ走査型光学顕微鏡の上記
第１の実施の形態と相違するところは、光検出器３０を
設けて２つの光検出器１８、３０を用いている点であ
る。
成図である。この共焦点レーザ走査型光学顕微鏡の上記
第１の実施の形態と相違するところは、光検出器３０を
設けて２つの光検出器１８、３０を用いている点であ
る。
【００４９】顕微鏡本体１２内のダイクロイックミラー
１３の透過光路上には、分光ダイクロイックミラー３１
が配置されている。この分光ダイクロイックミラー３１
は、多重染色蛍光標本１から発せられた各蛍光波長
λ１’、λ２’、λ３’の蛍光を所定の波長λｓ、例え
ばλ１’＜λｓ＜λ３’でかつλｓ＜λ２’の関係であ
る波長λｓ、例えば波長λｓ＝５６０ｎｍを境として分
光する光分光手段としての波長特性を有するもので、図
４及び図５に示すように波長λｓよりも短い波長の光を
反射し、かつ波長λｓよりも長い波長の光を透過するも
のとなっている。
１３の透過光路上には、分光ダイクロイックミラー３１
が配置されている。この分光ダイクロイックミラー３１
は、多重染色蛍光標本１から発せられた各蛍光波長
λ１’、λ２’、λ３’の蛍光を所定の波長λｓ、例え
ばλ１’＜λｓ＜λ３’でかつλｓ＜λ２’の関係であ
る波長λｓ、例えば波長λｓ＝５６０ｎｍを境として分
光する光分光手段としての波長特性を有するもので、図
４及び図５に示すように波長λｓよりも短い波長の光を
反射し、かつ波長λｓよりも長い波長の光を透過するも
のとなっている。
【００５０】この分光ダイクロイックミラー３１の透過
光路上には、共焦点開口部１６を介してバリアフィルタ
３２が配置されている。このバリアフィルタ３２は、上
記境の波長λｓよりも長い波長帯域の蛍光波長を透過す
る特性を有するもので、図４に示すように少なくとも不
要な励起波長λ１、λ２、λ３を遮断し、かつ蛍光波長
λ２’、λ３’の蛍光を透過するものとなっている。す
なわち、バリアフィルタ３２は、各励起波長λ１、
λ２、λ３の近傍において透過率０．０１％以下に設定
され、かつ励起波長λ１−λ２の間では特に規定せず、
さらに蛍光波長λ２’、λ３’の帯域の透過率をできる
だけ高く設定されている。
光路上には、共焦点開口部１６を介してバリアフィルタ
３２が配置されている。このバリアフィルタ３２は、上
記境の波長λｓよりも長い波長帯域の蛍光波長を透過す
る特性を有するもので、図４に示すように少なくとも不
要な励起波長λ１、λ２、λ３を遮断し、かつ蛍光波長
λ２’、λ３’の蛍光を透過するものとなっている。す
なわち、バリアフィルタ３２は、各励起波長λ１、
λ２、λ３の近傍において透過率０．０１％以下に設定
され、かつ励起波長λ１−λ２の間では特に規定せず、
さらに蛍光波長λ２’、λ３’の帯域の透過率をできる
だけ高く設定されている。
【００５１】一方、分光ダイクロイックミラー３１の反
射光路上には、共焦点開口３３を介してバリアフィルタ
３４が配置されている。このバリアフィルタ３４は、上
記境の波長λｓよりも短い波長帯域の蛍光波長を透過す
る特性を有するもので、図５に示すように少なくとも不
要な励起波長λ１、λ３を遮断し、かつ蛍光波長λ１’
の蛍光を透過するものとなっている。すなわち、バリア
フィルタ３４は、各励起波長λ１、λ３の近傍において
透過率０．０１％以下に設定され、かつ励起波長λ１以
下は特に規定せず、さらに蛍光波長λ１’の帯域の透過
率をできるだけ高く設定されている。
射光路上には、共焦点開口３３を介してバリアフィルタ
３４が配置されている。このバリアフィルタ３４は、上
記境の波長λｓよりも短い波長帯域の蛍光波長を透過す
る特性を有するもので、図５に示すように少なくとも不
要な励起波長λ１、λ３を遮断し、かつ蛍光波長λ１’
の蛍光を透過するものとなっている。すなわち、バリア
フィルタ３４は、各励起波長λ１、λ３の近傍において
透過率０．０１％以下に設定され、かつ励起波長λ１以
下は特に規定せず、さらに蛍光波長λ１’の帯域の透過
率をできるだけ高く設定されている。
【００５２】なお、各バリアフィルタ３２、３４は、そ
れぞれ１枚の基板上に形成してもよいし、又は複数の基
板に形成した波長特性の異なる基板を組み（重ね）合わ
せて形成してもよい。
れぞれ１枚の基板上に形成してもよいし、又は複数の基
板に形成した波長特性の異なる基板を組み（重ね）合わ
せて形成してもよい。
【００５３】光検出器３０は、バリアフィルタ３４を透
過した蛍光波長λ１’の蛍光を受光して蛍光強度を検出
し、その蛍光強度信号を出力するもので、例えば１つの
フォトマルが用いられている。
過した蛍光波長λ１’の蛍光を受光して蛍光強度を検出
し、その蛍光強度信号を出力するもので、例えば１つの
フォトマルが用いられている。
【００５４】画像形成装置３５は、２つの光検出器１
８、３０から出力された各蛍光強度信号を取り込んで蓄
積し、これら蛍光強度信号を各偏向素子１４、１５の駆
動信号に同期して内部に設定された直交座標上に配置し
て各励起波長λ１、λ２、λ３ごとの２次元画像を形成
し、これら２次元画像を合成して多重染色蛍光標本１の
画像を取得する機能を有している。
８、３０から出力された各蛍光強度信号を取り込んで蓄
積し、これら蛍光強度信号を各偏向素子１４、１５の駆
動信号に同期して内部に設定された直交座標上に配置し
て各励起波長λ１、λ２、λ３ごとの２次元画像を形成
し、これら２次元画像を合成して多重染色蛍光標本１の
画像を取得する機能を有している。
【００５５】この画像形成装置３５は、シャッタ制御装
置１１に対して、先ずは２つのシャッタ５と７とを開放
して各励起波長λ１、λ３により多重染色蛍光標本１を
励起（１回目励起露光）し、次にシャッタ６を開放して
励起波長λ２により多重染色蛍光標本１を励起（２回目
励起露光）させる機能を有している。
置１１に対して、先ずは２つのシャッタ５と７とを開放
して各励起波長λ１、λ３により多重染色蛍光標本１を
励起（１回目励起露光）し、次にシャッタ６を開放して
励起波長λ２により多重染色蛍光標本１を励起（２回目
励起露光）させる機能を有している。
【００５６】次に、上記の如く構成された顕微鏡の作用
について説明する。
について説明する。
【００５７】画像形成装置１９は、シャッタ制御装置１
１に対して一画面の画像が作成されるごとに各シャッタ
５、６、７を開放する組み合わせを選択的に順次切り替
える指令を発し、かつ各偏向素子１４、１５に対してレ
ーザ光を多重染色蛍光標本１に対して走査（スキャン）
照射させる指令を発する。
１に対して一画面の画像が作成されるごとに各シャッタ
５、６、７を開放する組み合わせを選択的に順次切り替
える指令を発し、かつ各偏向素子１４、１５に対してレ
ーザ光を多重染色蛍光標本１に対して走査（スキャン）
照射させる指令を発する。
【００５８】先ず、シャッタ５と７とが開放され、シャ
ッタ６が遮蔽されている。レーザ光源２から出力された
励起波長λ１のレーザ光は、シャッタ５からダイクロイ
ックミラー８を透過して顕微鏡本体１２内に導入され、
これと共にレーザ光源４から出力された励起波長λ３の
レーザ光は、シャッタ７を通過してミラー１０で反射さ
れた後、ダイクロイックミラー９を透過してダイクロイ
ックミラー８で反射され、顕微鏡本体１２内に導入され
る。
ッタ６が遮蔽されている。レーザ光源２から出力された
励起波長λ１のレーザ光は、シャッタ５からダイクロイ
ックミラー８を透過して顕微鏡本体１２内に導入され、
これと共にレーザ光源４から出力された励起波長λ３の
レーザ光は、シャッタ７を通過してミラー１０で反射さ
れた後、ダイクロイックミラー９を透過してダイクロイ
ックミラー８で反射され、顕微鏡本体１２内に導入され
る。
【００５９】これら励起波長λ１、λ３の各レーザ光
は、顕微鏡本体１２内のダイクロイックミラー１３で反
射され、各偏向素子１４、１５により多重染色蛍光標本
１の全面に対して走査（スキャン）照射される。これに
より、多重染色蛍光標本１は、励起波長λ１、λ３の各
レーザ光により励起される。
は、顕微鏡本体１２内のダイクロイックミラー１３で反
射され、各偏向素子１４、１５により多重染色蛍光標本
１の全面に対して走査（スキャン）照射される。これに
より、多重染色蛍光標本１は、励起波長λ１、λ３の各
レーザ光により励起される。
【００６０】この多重染色蛍光標本１から発せられた蛍
光波長λ１’、λ３’の各蛍光は、戻り光として偏向素
子１５、１４を経由し、ダイクロイックミラー１３を透
過して分光ダイクロイックミラー３１に入射する。
光波長λ１’、λ３’の各蛍光は、戻り光として偏向素
子１５、１４を経由し、ダイクロイックミラー１３を透
過して分光ダイクロイックミラー３１に入射する。
【００６１】この分光ダイクロイックミラー３１は、蛍
光波長λ１’、λ３’の各蛍光が入射すると、λ１’＜
λｓ＜λ３’の関係から上記図４及び図５に示すように
境とする波長λｓよりも長い波長すなわち蛍光波長
λ３’の蛍光を透過し、かつ波長λｓよりも短い波長す
なわち蛍光波長λ１’の蛍光を反射する。
光波長λ１’、λ３’の各蛍光が入射すると、λ１’＜
λｓ＜λ３’の関係から上記図４及び図５に示すように
境とする波長λｓよりも長い波長すなわち蛍光波長
λ３’の蛍光を透過し、かつ波長λｓよりも短い波長す
なわち蛍光波長λ１’の蛍光を反射する。
【００６２】この分光ダイクロイックミラー３１を透過
した蛍光波長λ３’の蛍光は、共焦点開口部１６に集光
されてこの共焦点開口部１６を通過し、バリアフィルタ
３２を透過して光検出器１８に入射する。この光検出器
１８は、バリアフィルタ３２を透過した蛍光波長λ３’
の蛍光を受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強度信号
を出力する。
した蛍光波長λ３’の蛍光は、共焦点開口部１６に集光
されてこの共焦点開口部１６を通過し、バリアフィルタ
３２を透過して光検出器１８に入射する。この光検出器
１８は、バリアフィルタ３２を透過した蛍光波長λ３’
の蛍光を受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強度信号
を出力する。
【００６３】一方、分光ダイクロイックミラー３１で反
射された蛍光波長λ１’の蛍光は、共焦点開口部３３に
集光されてこの共焦点開口部３３を通過し、バリアフィ
ルタ３４を透過して光検出器３０に入射する。この光検
出器３０は、バリアフィルタ３４を透過した蛍光波長λ
１’の蛍光を受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強度
信号を出力する。
射された蛍光波長λ１’の蛍光は、共焦点開口部３３に
集光されてこの共焦点開口部３３を通過し、バリアフィ
ルタ３４を透過して光検出器３０に入射する。この光検
出器３０は、バリアフィルタ３４を透過した蛍光波長λ
１’の蛍光を受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強度
信号を出力する。
【００６４】画像形成装置３５は、２つの光検出器１
８、３０から出力された各蛍光強度信号を取り込んで蓄
積し、これら蛍光強度信号を各偏向素子１４、１５の駆
動信号に同期して内部に設定された直交座標上に配置し
て各励起波長λ１、λ３ごとの２次元画像を形成する。
８、３０から出力された各蛍光強度信号を取り込んで蓄
積し、これら蛍光強度信号を各偏向素子１４、１５の駆
動信号に同期して内部に設定された直交座標上に配置し
て各励起波長λ１、λ３ごとの２次元画像を形成する。
【００６５】次に、シャッタ６が開放され、他の各シャ
ッタ５、７が遮蔽されている。レーザ光源３から出力さ
れた励起波長λ２のレーザ光は、シャッタ６を通過して
ダイクロイックミラー９で反射された後、ダイクロイッ
クミラー８で反射されて顕微鏡本体１２内に導入され、
さらに顕微鏡本体１２内のダイクロイックミラー１３で
反射し、各偏向素子１４、１５により多重染色蛍光標本
１の全面に対して走査（スキャン）照射される。これに
より、多重染色蛍光標本１は、励起波長λ２のレーザ光
により励起される。
ッタ５、７が遮蔽されている。レーザ光源３から出力さ
れた励起波長λ２のレーザ光は、シャッタ６を通過して
ダイクロイックミラー９で反射された後、ダイクロイッ
クミラー８で反射されて顕微鏡本体１２内に導入され、
さらに顕微鏡本体１２内のダイクロイックミラー１３で
反射し、各偏向素子１４、１５により多重染色蛍光標本
１の全面に対して走査（スキャン）照射される。これに
より、多重染色蛍光標本１は、励起波長λ２のレーザ光
により励起される。
【００６６】この多重染色蛍光標本１から発せられた蛍
光波長λ２’の蛍光は、戻り光として偏向素子１５、１
４を経由し、ダイクロイックミラー１３を透過して分光
ダイクロイックミラー３１に入射する。
光波長λ２’の蛍光は、戻り光として偏向素子１５、１
４を経由し、ダイクロイックミラー１３を透過して分光
ダイクロイックミラー３１に入射する。
【００６７】この分光ダイクロイックミラー３１は、蛍
光波長λ２’の蛍光が入射すると、λｓ＜λ２’の関係
から上記図４及び図５に示すように境とする波長λｓよ
りも長い波長すなわち蛍光波長λ２’の蛍光を透過す
る。
光波長λ２’の蛍光が入射すると、λｓ＜λ２’の関係
から上記図４及び図５に示すように境とする波長λｓよ
りも長い波長すなわち蛍光波長λ２’の蛍光を透過す
る。
【００６８】この分光ダイクロイックミラー３１を透過
した蛍光波長λ２’の蛍光は、共焦点開口部１６に集光
されてこの共焦点開口部１６を通過し、バリアフィルタ
３２を透過して光検出器１８に入射する。この光検出器
１８は、バリアフィルタ３２を透過した蛍光波長λ２’
の蛍光を受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強度信号
を出力する。
した蛍光波長λ２’の蛍光は、共焦点開口部１６に集光
されてこの共焦点開口部１６を通過し、バリアフィルタ
３２を透過して光検出器１８に入射する。この光検出器
１８は、バリアフィルタ３２を透過した蛍光波長λ２’
の蛍光を受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強度信号
を出力する。
【００６９】画像形成装置３５は、光検出器１８から出
力された蛍光強度信号を取り込んで蓄積し、この蛍光強
度信号を各偏向素子１４、１５の駆動信号に同期して内
部に設定された直交座標上に配置して励起波長λ２の２
次元画像を形成する。
力された蛍光強度信号を取り込んで蓄積し、この蛍光強
度信号を各偏向素子１４、１５の駆動信号に同期して内
部に設定された直交座標上に配置して励起波長λ２の２
次元画像を形成する。
【００７０】そして、画像形成装置３５は、各励起波長
λ１、λ３の２次元画像と励起波長λ２の２次元画像と
を合成して多重染色蛍光標本１の画像を取得し、同画像
を表示装置２０に表示したり、図示しない印刷装置等に
より印字出力させたりする。
λ１、λ３の２次元画像と励起波長λ２の２次元画像と
を合成して多重染色蛍光標本１の画像を取得し、同画像
を表示装置２０に表示したり、図示しない印刷装置等に
より印字出力させたりする。
【００７１】このように上記第２の実施の形態において
は、多重染色蛍光標本１から発せられた各蛍光波長
λ１’、λ２’、λ３’の蛍光を所定の波長λｓ、例え
ばλ１’＜λｓ＜λ３’でかつλｓ＜λ２’の関係であ
る波長λｓを境として分光する分光ダイクロイックミラ
ー３１を設け、先ずは多重染色蛍光標本１を各励起波長
λ １、λ３のレーザ光により励起してその２次元画像を
形成し、次に多重染色蛍光標本１を励起波長λ２のレー
ザ光により励起してその２次元画像を形成し、これら２
次元画像を合成して多重染色蛍光標本１の画像を取得す
るようにしたので、上記第１の実施の形態と同様に、３
つの励起波長λ１、λ２、λ３の種類よりも少ない１つ
の光検出器１８、３０を用いて多重染色蛍光標本１の画
像を取得して３重染色観察ができるうえに顕微鏡の小型
化、低価格化を図ることができ、さらに短時間での多重
染色蛍光標本１の画像を取得できる。
は、多重染色蛍光標本１から発せられた各蛍光波長
λ１’、λ２’、λ３’の蛍光を所定の波長λｓ、例え
ばλ１’＜λｓ＜λ３’でかつλｓ＜λ２’の関係であ
る波長λｓを境として分光する分光ダイクロイックミラ
ー３１を設け、先ずは多重染色蛍光標本１を各励起波長
λ １、λ３のレーザ光により励起してその２次元画像を
形成し、次に多重染色蛍光標本１を励起波長λ２のレー
ザ光により励起してその２次元画像を形成し、これら２
次元画像を合成して多重染色蛍光標本１の画像を取得す
るようにしたので、上記第１の実施の形態と同様に、３
つの励起波長λ１、λ２、λ３の種類よりも少ない１つ
の光検出器１８、３０を用いて多重染色蛍光標本１の画
像を取得して３重染色観察ができるうえに顕微鏡の小型
化、低価格化を図ることができ、さらに短時間での多重
染色蛍光標本１の画像を取得できる。
【００７２】又、３つの励起波長λ１、λ２、λ３によ
る３重染色観察を１回目励起露光と２回目励起露光とで
取得された各画像を合成して３重染色蛍光標本１の画像
を取得するので、クロストークの無い、３波長励起分の
蛍光画像を得ることができる。
る３重染色観察を１回目励起露光と２回目励起露光とで
取得された各画像を合成して３重染色蛍光標本１の画像
を取得するので、クロストークの無い、３波長励起分の
蛍光画像を得ることができる。
【００７３】（３）次に、本発明の第３の実施の形態に
ついて図面を参照して説明する。なお、図３と同一部分
には同一符号を付してその詳しい説明は省略する。
ついて図面を参照して説明する。なお、図３と同一部分
には同一符号を付してその詳しい説明は省略する。
【００７４】図６は共焦点レーザ走査型光学顕微鏡の構
成図である。この共焦点レーザ走査型光学顕微鏡の上記
第２の実施の形態と相違するところは、励起波長（中心
波長）λ４＝３５１ｎｍのレーザ光を出力するレーザ光
源４０を加えて４波長とした点である。
成図である。この共焦点レーザ走査型光学顕微鏡の上記
第２の実施の形態と相違するところは、励起波長（中心
波長）λ４＝３５１ｎｍのレーザ光を出力するレーザ光
源４０を加えて４波長とした点である。
【００７５】このレーザ光源４０から出力されたレーザ
光の光路上には、シャッタ４１が配置されている。この
シャッタ４１は、上記シャッタ制御装置１１により開閉
制御されるもので、他のシャッタ５、６、７との組み合
わせて選択的に開閉、例えば各シャッタ５と７、各シャ
ッタ３と４１が同時に開放されるようになっている。
光の光路上には、シャッタ４１が配置されている。この
シャッタ４１は、上記シャッタ制御装置１１により開閉
制御されるもので、他のシャッタ５、６、７との組み合
わせて選択的に開閉、例えば各シャッタ５と７、各シャ
ッタ３と４１が同時に開放されるようになっている。
【００７６】レーザ光源４０から出力されたレーザ光
は、ミラー４２で反射し、ダイクロイックミラー４３で
反射して、上記励起波長λ１、λ２、λ３のレーザ光と
同一の光軸、傾きとなるように導入されるようになって
いる。
は、ミラー４２で反射し、ダイクロイックミラー４３で
反射して、上記励起波長λ１、λ２、λ３のレーザ光と
同一の光軸、傾きとなるように導入されるようになって
いる。
【００７７】上記分光ダイクロイックミラー３１は、多
重染色蛍光標本１から発せられた各蛍光波長λ１’、λ
２’、λ３’、λ４’の蛍光を所定の波長λｓ、例えば
λ４’＜λ１’＜λｓ＜λ２’＜λ３’の関係である波
長λｓを境として分光する波長特性を有するもので、図
７及び図８に示すように波長λｓよりも短い波長の光を
反射し、かつ波長λｓよりも長い波長の光を透過するも
のとなっている。
重染色蛍光標本１から発せられた各蛍光波長λ１’、λ
２’、λ３’、λ４’の蛍光を所定の波長λｓ、例えば
λ４’＜λ１’＜λｓ＜λ２’＜λ３’の関係である波
長λｓを境として分光する波長特性を有するもので、図
７及び図８に示すように波長λｓよりも短い波長の光を
反射し、かつ波長λｓよりも長い波長の光を透過するも
のとなっている。
【００７８】この分光ダイクロイックミラー３１の透過
光路上には、共焦点開口部１６を介してバリアフィルタ
４４が配置されている。このバリアフィルタ４４は、上
記境の波長λｓよりも長い波長帯域の蛍光波長を透過す
る特性を有するもので、図７に示すように不要な励起波
長λ４、λ１、λ２、λ３の近傍では透過率を０．０１
％以下にし、かつ励起波長λ２以下は透過率５％以下と
し、蛍光波長λ２’、λ３’帯域の蛍光の透過率をでき
るだけ高く設定したものである。
光路上には、共焦点開口部１６を介してバリアフィルタ
４４が配置されている。このバリアフィルタ４４は、上
記境の波長λｓよりも長い波長帯域の蛍光波長を透過す
る特性を有するもので、図７に示すように不要な励起波
長λ４、λ１、λ２、λ３の近傍では透過率を０．０１
％以下にし、かつ励起波長λ２以下は透過率５％以下と
し、蛍光波長λ２’、λ３’帯域の蛍光の透過率をでき
るだけ高く設定したものである。
【００７９】一方、分光ダイクロイックミラー３１の反
射光路上には、共焦点開口３３を介してバリアフィルタ
４５が配置されている。このバリアフィルタ４５は、上
記境の波長λｓよりも短い波長帯域の蛍光波長を透過す
る特性を有するもので、図８に示すように不要な励起波
長λ４、λ１、λ２の近傍及び励起波長λ３以上では透
過率を０．０１％以下にし、かつ励起波長λ４以下は特
に規定せず、蛍光波長λ４’、λ１’帯域の透過率がで
きるだけ高くなるように設定されている。
射光路上には、共焦点開口３３を介してバリアフィルタ
４５が配置されている。このバリアフィルタ４５は、上
記境の波長λｓよりも短い波長帯域の蛍光波長を透過す
る特性を有するもので、図８に示すように不要な励起波
長λ４、λ１、λ２の近傍及び励起波長λ３以上では透
過率を０．０１％以下にし、かつ励起波長λ４以下は特
に規定せず、蛍光波長λ４’、λ１’帯域の透過率がで
きるだけ高くなるように設定されている。
【００８０】なお、これらバリアフィルタ４４、４５
は、それぞれ１枚の基板上に形成してもよいし、又は複
数の基板に形成した波長特性の異なる基板を重ね合わせ
て形成してもよい。
は、それぞれ１枚の基板上に形成してもよいし、又は複
数の基板に形成した波長特性の異なる基板を重ね合わせ
て形成してもよい。
【００８１】画像形成装置４６は、２つの光検出器１
８、３０から出力された各蛍光強度信号を取り込んで蓄
積し、これら蛍光強度信号を各偏向素子１４、１５の駆
動信号に同期して内部に設定された直交座標上に配置し
て励起波長λ１とλ３、励起波長λ４、λ２ごとの各２
次元画像を形成し、これら２次元画像を合成して多重染
色蛍光標本１の画像を取得する機能を有している。
８、３０から出力された各蛍光強度信号を取り込んで蓄
積し、これら蛍光強度信号を各偏向素子１４、１５の駆
動信号に同期して内部に設定された直交座標上に配置し
て励起波長λ１とλ３、励起波長λ４、λ２ごとの各２
次元画像を形成し、これら２次元画像を合成して多重染
色蛍光標本１の画像を取得する機能を有している。
【００８２】この画像形成装置４６は、シャッタ制御装
置１１に対して、先ずは２つのシャッタ５と７とを開放
して各励起波長λ１、λ３により多重染色蛍光標本１を
励起（１回目励起露光）し、次にシャッタ６と４１を開
放して励起波長λ４、λ２により多重染色蛍光標本１を
励起（２回目励起露光）させる機能を有している。
置１１に対して、先ずは２つのシャッタ５と７とを開放
して各励起波長λ１、λ３により多重染色蛍光標本１を
励起（１回目励起露光）し、次にシャッタ６と４１を開
放して励起波長λ４、λ２により多重染色蛍光標本１を
励起（２回目励起露光）させる機能を有している。
【００８３】次に、上記の如く構成された顕微鏡の作用
について説明する。
について説明する。
【００８４】画像形成装置４６は、シャッタ制御装置１
１に対して一画面の画像が作成されるごとに各シャッタ
５、６、７、４１を開放する組み合わせを選択的に順次
切り替える指令を発し、かつ各偏向素子１４、１５に対
してレーザ光を多重染色蛍光標本１に対して走査（スキ
ャン）照射させる指令を発する。
１に対して一画面の画像が作成されるごとに各シャッタ
５、６、７、４１を開放する組み合わせを選択的に順次
切り替える指令を発し、かつ各偏向素子１４、１５に対
してレーザ光を多重染色蛍光標本１に対して走査（スキ
ャン）照射させる指令を発する。
【００８５】先ず、シャッタ５と７とが開放され、他の
各シャッタ６、４１が遮蔽されている。レーザ光源２か
ら出力された励起波長λ１のレーザ光は、シャッタ５を
通過してダイクロイックミラー８を透過して顕微鏡本体
１２内に導入され、これと共にレーザ光源４から出力さ
れた励起波長λ３のレーザ光は、シャッタ７を通過して
ミラー１０で反射された後、ダイクロイックミラー９を
透過し、ダイクロイックミラー８で反射されて顕微鏡本
体１２内に導入される。
各シャッタ６、４１が遮蔽されている。レーザ光源２か
ら出力された励起波長λ１のレーザ光は、シャッタ５を
通過してダイクロイックミラー８を透過して顕微鏡本体
１２内に導入され、これと共にレーザ光源４から出力さ
れた励起波長λ３のレーザ光は、シャッタ７を通過して
ミラー１０で反射された後、ダイクロイックミラー９を
透過し、ダイクロイックミラー８で反射されて顕微鏡本
体１２内に導入される。
【００８６】これら励起波長λ１、λ３の各レーザ光
は、顕微鏡本体１２内のダイクロイックミラー１３で反
射され、各偏向素子１４、１５により多重染色蛍光標本
１に対して走査照射される。これにより、多重染色蛍光
標本１は、励起波長λ１、λ３の各レーザ光により励起
される。
は、顕微鏡本体１２内のダイクロイックミラー１３で反
射され、各偏向素子１４、１５により多重染色蛍光標本
１に対して走査照射される。これにより、多重染色蛍光
標本１は、励起波長λ１、λ３の各レーザ光により励起
される。
【００８７】この多重染色蛍光標本１で発した蛍光波長
λ１’、λ３’の各蛍光は、戻り光として偏向素子１
５、１４を経由し、ダイクロイックミラー１３を透過し
て分光ダイクロイックミラー３１に入射する。
λ１’、λ３’の各蛍光は、戻り光として偏向素子１
５、１４を経由し、ダイクロイックミラー１３を透過し
て分光ダイクロイックミラー３１に入射する。
【００８８】この分光ダイクロイックミラー３１は、蛍
光波長λ１’、λ３’の各蛍光が入射すると、λ１’＜
λｓ＜λ３’の関係から上記図７及び図８に示すように
蛍光波長λ３’の蛍光を透過し、かつ蛍光波長λ１’の
蛍光の光を反射する。
光波長λ１’、λ３’の各蛍光が入射すると、λ１’＜
λｓ＜λ３’の関係から上記図７及び図８に示すように
蛍光波長λ３’の蛍光を透過し、かつ蛍光波長λ１’の
蛍光の光を反射する。
【００８９】この分光ダイクロイックミラー３１を透過
した蛍光波長λ３’の蛍光は、共焦点開口部１６に集光
されてこの共焦点開口部１６を通過し、バリアフィルタ
４４を透過して光検出器１８に入射する。この光検出器
１８は、バリアフィルタ４４を透過した蛍光波長λ３’
の蛍光を受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強度信号
を出力する。
した蛍光波長λ３’の蛍光は、共焦点開口部１６に集光
されてこの共焦点開口部１６を通過し、バリアフィルタ
４４を透過して光検出器１８に入射する。この光検出器
１８は、バリアフィルタ４４を透過した蛍光波長λ３’
の蛍光を受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強度信号
を出力する。
【００９０】一方、分光ダイクロイックミラー３１で反
射された蛍光波長λ１’の蛍光は、共焦点開口部３３に
集光されてこの共焦点開口部３３を通過し、バリアフィ
ルタ４５を透過して光検出器３０に入射する。この光検
出器３０は、バリアフィルタ４４を透過した蛍光波長λ
１’の蛍光を受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強度
信号を出力する。
射された蛍光波長λ１’の蛍光は、共焦点開口部３３に
集光されてこの共焦点開口部３３を通過し、バリアフィ
ルタ４５を透過して光検出器３０に入射する。この光検
出器３０は、バリアフィルタ４４を透過した蛍光波長λ
１’の蛍光を受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強度
信号を出力する。
【００９１】画像形成装置４６は、２つの光検出器１
８、３０から出力された各蛍光強度信号を取り込んで蓄
積し、これら蛍光強度信号を各偏向素子１４、１５の駆
動信号に同期して内部に設定された直交座標上に配置し
て各励起波長λ１、λ３の２次元画像を形成する。
８、３０から出力された各蛍光強度信号を取り込んで蓄
積し、これら蛍光強度信号を各偏向素子１４、１５の駆
動信号に同期して内部に設定された直交座標上に配置し
て各励起波長λ１、λ３の２次元画像を形成する。
【００９２】次に、シャッタ６と４１が開放され、他の
各シャッタ５、７が遮蔽されている。レーザ光源３から
出力された励起波長λ２のレーザ光は、シャッタ６を通
過してダイクロイックミラー９で反射され、さらにダイ
クロイックミラー８で反射されて顕微鏡本体１２内に導
入され、これと共にレーザ光源４０から出力された励起
波長λ４のレーザ光は、シャッタ４１を通過してミラー
４２、ダイクロイックミラー４３で反射されて顕微鏡本
体１２内に導入される。
各シャッタ５、７が遮蔽されている。レーザ光源３から
出力された励起波長λ２のレーザ光は、シャッタ６を通
過してダイクロイックミラー９で反射され、さらにダイ
クロイックミラー８で反射されて顕微鏡本体１２内に導
入され、これと共にレーザ光源４０から出力された励起
波長λ４のレーザ光は、シャッタ４１を通過してミラー
４２、ダイクロイックミラー４３で反射されて顕微鏡本
体１２内に導入される。
【００９３】これら励起波長λ２、λ４の各レーザ光
は、顕微鏡本体１２内のダイクロイックミラー１３で反
射され、各偏向素子１４、１５により多重染色蛍光標本
１に対して走査（スキャン）照射される。これにより、
多重染色蛍光標本１は、励起波長λ２、λ４の各レーザ
光により励起される。
は、顕微鏡本体１２内のダイクロイックミラー１３で反
射され、各偏向素子１４、１５により多重染色蛍光標本
１に対して走査（スキャン）照射される。これにより、
多重染色蛍光標本１は、励起波長λ２、λ４の各レーザ
光により励起される。
【００９４】この多重染色蛍光標本１で発した蛍光波長
λ２’、λ４’の蛍光は、戻り光として偏向素子１５、
１４を経由し、ダイクロイックミラー１３を透過して分
光ダイクロイックミラー３１に入射する。
λ２’、λ４’の蛍光は、戻り光として偏向素子１５、
１４を経由し、ダイクロイックミラー１３を透過して分
光ダイクロイックミラー３１に入射する。
【００９５】この分光ダイクロイックミラー３１は、蛍
光波長λ２’、λ４’の各蛍光が入射すると、λ４’＜
λｓ＜λ２’の関係から上記図７及び図８に示すように
蛍光波長λ２’の蛍光を透過し、かつ蛍光波長λ４’の
蛍光の光を反射する。
光波長λ２’、λ４’の各蛍光が入射すると、λ４’＜
λｓ＜λ２’の関係から上記図７及び図８に示すように
蛍光波長λ２’の蛍光を透過し、かつ蛍光波長λ４’の
蛍光の光を反射する。
【００９６】この分光ダイクロイックミラー３１を透過
した蛍光波長λ２’の蛍光は、共焦点開口部１６に集光
されてこの共焦点開口部１６を通過し、バリアフィルタ
４４を透過して光検出器１８に入射する。この光検出器
１８は、バリアフィルタ４４を透過した蛍光波長λ２’
の蛍光を受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強度信号
を出力する。
した蛍光波長λ２’の蛍光は、共焦点開口部１６に集光
されてこの共焦点開口部１６を通過し、バリアフィルタ
４４を透過して光検出器１８に入射する。この光検出器
１８は、バリアフィルタ４４を透過した蛍光波長λ２’
の蛍光を受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強度信号
を出力する。
【００９７】一方、分光ダイクロイックミラー３１で反
射した蛍光波長λ４’の蛍光は、共焦点開口部３３に集
光されてこの共焦点開口部３３を通過し、バリアフィル
タ４５を透過して光検出器３０に入射する。この光検出
器３０は、バリアフィルタ４４を透過した蛍光波長
λ４’の蛍光を受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強
度信号を出力する。
射した蛍光波長λ４’の蛍光は、共焦点開口部３３に集
光されてこの共焦点開口部３３を通過し、バリアフィル
タ４５を透過して光検出器３０に入射する。この光検出
器３０は、バリアフィルタ４４を透過した蛍光波長
λ４’の蛍光を受光して蛍光強度を検出し、その蛍光強
度信号を出力する。
【００９８】画像形成装置４６は、光検出器１８から出
力された蛍光強度信号を取り込んで蓄積し、この蛍光強
度信号を各偏向素子１４、１５の駆動信号に同期して内
部に設定された直交座標上に配置して励起波長λ４、λ
２の２次元画像を形成する。
力された蛍光強度信号を取り込んで蓄積し、この蛍光強
度信号を各偏向素子１４、１５の駆動信号に同期して内
部に設定された直交座標上に配置して励起波長λ４、λ
２の２次元画像を形成する。
【００９９】そして、画像形成装置３５は、各励起波長
λ１、λ３の２次元画像と励起波長λ４、λ２の２次元
画像とを合成して多重染色蛍光標本１の画像を取得し、
同画像を表示装置２０に表示したり、図示しない印刷装
置等により印字出力させたりする。
λ１、λ３の２次元画像と励起波長λ４、λ２の２次元
画像とを合成して多重染色蛍光標本１の画像を取得し、
同画像を表示装置２０に表示したり、図示しない印刷装
置等により印字出力させたりする。
【０１００】このように上記第３の実施の形態において
は、先ずは励起波長λ１、λ３により多重染色蛍光標本
１を励起し、次に励起波長λ４、λ２により多重染色蛍
光標本１を励起し、これら励起波長λ１、λ３の２次元
画像と励起波長λ４、λ２の２次元画像とを合成して多
重染色蛍光標本１の画像を取得するようにしたので、上
記第２の実施の形態と同様に、４つの励起波長λ１、λ
２、λ３、λ４の種類よりも少ない２つの光検出器１
８、３０を用いて多重染色蛍光標本１の画像を取得して
４重染色観察ができるうえに顕微鏡の小型化、低価格化
を図ることができ、さらに短時間での多重染色蛍光標本
１の画像を取得できる。
は、先ずは励起波長λ１、λ３により多重染色蛍光標本
１を励起し、次に励起波長λ４、λ２により多重染色蛍
光標本１を励起し、これら励起波長λ１、λ３の２次元
画像と励起波長λ４、λ２の２次元画像とを合成して多
重染色蛍光標本１の画像を取得するようにしたので、上
記第２の実施の形態と同様に、４つの励起波長λ１、λ
２、λ３、λ４の種類よりも少ない２つの光検出器１
８、３０を用いて多重染色蛍光標本１の画像を取得して
４重染色観察ができるうえに顕微鏡の小型化、低価格化
を図ることができ、さらに短時間での多重染色蛍光標本
１の画像を取得できる。
【０１０１】又、４つの励起波長λ１、λ２、λ３、λ
４による４重染色観察を１回目励起露光と２回目励起露
光とで取得された各画像を合成して４重染色蛍光標本１
の画像を取得するので、クロストークの無い、４波長励
起分の蛍光画像を得ることができる。
４による４重染色観察を１回目励起露光と２回目励起露
光とで取得された各画像を合成して４重染色蛍光標本１
の画像を取得するので、クロストークの無い、４波長励
起分の蛍光画像を得ることができる。
【０１０２】なお、本発明は、上記第１乃至第３の実施
の形態に限定されるものでなく、実施段階ではその要旨
を逸脱しない範囲で種々に変形することが可能である。
の形態に限定されるものでなく、実施段階ではその要旨
を逸脱しない範囲で種々に変形することが可能である。
【０１０３】さらに、上記実施形態には、種々の段階の
発明が含まれており、開示されている複数の構成要件に
おける適宜な組み合わせにより種々の発明が抽出でき
る。例えば、実施形態に示されている全構成要件から幾
つかの構成要件が削除されても、発明が解決しようとす
る課題の欄で述べた課題が解決でき、発明の効果の欄で
述べられている効果が得られる場合には、この構成要件
が削除された構成が発明として抽出できる。
発明が含まれており、開示されている複数の構成要件に
おける適宜な組み合わせにより種々の発明が抽出でき
る。例えば、実施形態に示されている全構成要件から幾
つかの構成要件が削除されても、発明が解決しようとす
る課題の欄で述べた課題が解決でき、発明の効果の欄で
述べられている効果が得られる場合には、この構成要件
が削除された構成が発明として抽出できる。
【０１０４】
【発明の効果】以上詳記したように本発明によれば、励
起波長の種類よりも少ない数の光検出器を用いて小型
化、低価格化を図り、かつ短時間での画像取得ができる
走査型光学顕微鏡を提供できる。
起波長の種類よりも少ない数の光検出器を用いて小型
化、低価格化を図り、かつ短時間での画像取得ができる
走査型光学顕微鏡を提供できる。
【０１０５】又、本発明によれば、クロストークのノイ
ズを防止して多重染色蛍光標本の蛍光画像を得ることが
できる走査型光学顕微鏡を提供できる。
ズを防止して多重染色蛍光標本の蛍光画像を得ることが
できる走査型光学顕微鏡を提供できる。
【図１】本発明に係わる共焦点レーザ走査型光学顕微鏡
の第１の実施の形態を示す構成図。
の第１の実施の形態を示す構成図。
【図２】本発明に係わる共焦点レーザ走査型光学顕微鏡
の第１の実施の形態におけるバリアフィルタの波長特性
図。
の第１の実施の形態におけるバリアフィルタの波長特性
図。
【図３】本発明に係わる共焦点レーザ走査型光学顕微鏡
の第２の実施の形態を示す構成図。
の第２の実施の形態を示す構成図。
【図４】本発明に係わる共焦点レーザ走査型光学顕微鏡
の第２の実施の形態における一方のバリアフィルタの波
長特性図。
の第２の実施の形態における一方のバリアフィルタの波
長特性図。
【図５】本発明に係わる共焦点レーザ走査型光学顕微鏡
の第２の実施の形態における他方のバリアフィルタの波
長特性図。
の第２の実施の形態における他方のバリアフィルタの波
長特性図。
【図６】本発明に係わる共焦点レーザ走査型光学顕微鏡
の第３の実施の形態を示す構成図。
の第３の実施の形態を示す構成図。
【図７】本発明に係わる共焦点レーザ走査型光学顕微鏡
の第３の実施の形態における一方のバリアフィルタの波
長特性図。
の第３の実施の形態における一方のバリアフィルタの波
長特性図。
【図８】本発明に係わる共焦点レーザ走査型光学顕微鏡
の第３の実施の形態における他方のバリアフィルタの波
長特性図。
の第３の実施の形態における他方のバリアフィルタの波
長特性図。
１：多重染色蛍光標本 ２，３，４：レーザ光源 ５，６，７：シャッタ ８，９：ダイクロイックミラー １０：ミラー １１：シャッタ制御装置 １２：顕微鏡本体 １３：ダイクロイックミラー １４，１５：偏向素子 １６：共焦点開口部 １７：バリアフィルタ １８：光検出器 １９：画像形成装置 ２０：表示装置 ３０：光検出器 ３１：分光ダイクロイックミラー ３２：バリアフィルタ ３３：共焦点開口部 ３４：バリアフィルタ ３５：画像形成装置 ４０：レーザ光源 ４１：シャッタ ４２：ミラー ４３：ダイクロイックミラー ４４：バリアフィルタ ４５：バリアフィルタ ４６：画像形成装置
フロントページの続き Ｆターム(参考） 2G043 AA03 DA02 EA01 FA01 FA02 FA06 GA02 GB01 GB17 GB18 GB21 HA02 HA09 HA11 JA03 KA09 LA02 2H048 GA13 GA61 2H052 AA07 AA09 AC04 AC15 AC27 AC34 AD34 AF21 AF25
Claims (5)
- 【請求項１】 複数の波長の励起光を多重染色蛍光標本
に照射して当該標本の多重染色観察を行なう走査型光学
顕微鏡において、 複数の前記励起波長を遮断し、かつ前記多重染色蛍光標
本から発せられた複数の蛍光波長の光を透過するバリア
フィルタと、 このバリアフィルタを透過した前記蛍光を受光してその
蛍光強度を検出する前記励起波長の数よりも少ない光検
出器と、 この光検出器から出力される蛍光強度信号に基づいて前
記励起波長ごとの画像を形成し、これら画像を合成して
前記多重染色蛍光標本の画像を取得する画像形成手段
と、を具備したことを特徴とする走査型光学顕微鏡。 - 【請求項２】 複数の波長の前記励起光を順次切換えて
前記多重染色蛍光標本に照射したときに、前記多重染色
蛍光標本からそれぞれ発せられる複数波長の前記蛍光を
透過する１つの前記バリアフィルタと、このバリアフィ
ルタを透過した前記蛍光を受光する１つの前記光検出器
とからなることを特徴とする請求項１記載の走査型光学
顕微鏡。 - 【請求項３】 複数の波長の励起光を多重染色蛍光標本
に照射して当該標本の多重染色観察を行なう走査型光学
顕微鏡において、 前記多重染色蛍光標本から発せられた複数波長の前記蛍
光を所定の波長を境として分光する光分光手段と、 この光分光手段による各分光光路上にそれぞれ配置さ
れ、少なくとも不要な前記励起波長を遮断し、かつ前記
蛍光波長の光を透過する複数のバリアフィルタと、 これらバリアフィルタを透過した前記蛍光をそれぞれ受
光してその各蛍光強度を検出する前記励起波長の数より
も少ない光検出器と、 これら光検出器から出力される各蛍光強度信号に基づい
て前記励起波長ごとの各画像を形成し、これら画像を合
成して前記多重染色蛍光標本の画像を取得する画像形成
手段と、を具備したことを特徴とする走査型光学顕微
鏡。 - 【請求項４】 複数の前記バリアフィルタは、それぞれ
前記所定の波長を境として当該境の波長よりも短い波長
帯域の前記蛍光波長を透過する特性を有する前記バリア
フィルタを一方の前記分光光路上に配置し、前記境の波
長よりも長い波長帯域の前記蛍光波長を透過する特性を
有する前記バリアフィルタを他方の前記分光光路上に配
置することを特徴とする請求項３記載の走査型光学顕微
鏡。 - 【請求項５】 複数の波長の前記励起光を前記多重染色
蛍光標本に照射するとき、これら励起光のうち隣接しな
い波長帯域となる複数の波長の前記励起光を同時に前記
多重染色蛍光標本に照射することを特徴とする請求項３
記載の走査型光学顕微鏡。
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