JP2001513088A - カチオン交換クロマトグラフィーによるフォンビルブラント因子の精製 - Google Patents
カチオン交換クロマトグラフィーによるフォンビルブラント因子の精製Info
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Abstract
Description
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- 【特許請求の範囲】 1. 低塩濃度でvWFをカチオン交換体と結合させ、フラクション化溶出に よって高い比活性を有するvWFを回収することを特徴とするvWFの回収方法 。 mMの塩濃度で特に高分子vWF多量体を含むvWFフラクションを溶出させる ことを特徴とする請求項1に記載の方法。 3. pH5.0から8.5、好ましくはpH6.0から8.0の範囲のpH を有する緩衝液中、高分子vWF多量体を含有するvWFを含むフラクションを 溶出させることを特徴とする請求項1または2のいずれかに記載の方法。 低い比活性を有するvWFタンパク質分解産物および非特異的な付随タンパク質 を除去することを特徴とする請求項1から3のいずれかに記載の方法。 5. カチオン交換体がスルホプロピル基結合担体またはカルボキシメチル基 結合担体であることを特徴とする請求項1から4のいずれかに記載の方法。 6. 特に、少なくとも65U/タンパク質mgの特異的な血小板凝集活性お よび少なくとも65U/タンパク質mgの特異的なコラーゲン結合活性を有する 高分子vWF多量体を含有するvWFを含むフラクション(群)を回収すること を特徴とする請求項1から5のいずれかに記載の方法。 7. 回収されたvWFを含むフラクション(群)が低分子vWF多量体、低 い特異的vWF活性を有するvWF断片および混入核酸を実質的に含まないこと を特徴とする請求項1から6のいずれかに記載の方法。 8. 血漿、血漿フラクション、クリオ沈降物、組換え細胞培養物の上清また は抽出物、またはタンパク質富化溶液から、高い比活性を有するvWFを回収す ることを特徴とする請求項1から7のいずれかに記載の方法。 9. 前精製工程により、該タンパク質富化溶液を得ることを特徴とする請求 項8に記載の方法。 10. アニオン交換またはアフィニティークロマトグラフィーまたはそれら の組み合わせのようなクロマトグラフィー法によって、該タンパク質富化溶液を 得ることを特徴とする請求項9に記載の方法。 11. ウイルスを不活化または涸渇するために、回収されたvWFを含むフ ラクション(群)を処理することを特徴とする請求項1から10のいずれかに記 載の方法。 12. 特に、カチオン交換クロマトグラフィーによってvWFを含むタンパ ク質溶液から得ることができる高分子vWF多量体からなる精製されたvWFを 含む調製物。 13. いかなる低分子vWF多量体、不活性なvWF分解産物および混入核 酸をも実質的に含まないことを特徴とする請求項12に記載の調製物。 14. 少なくとも65U/タンパク質mgの特異的な血小板凝集活性および 少なくとも65U/タンパク質mgの特異的なコラーゲン結合活性を有するvW Fを含むことを特徴とする請求項13に記載の調製物。 15. 因子VIIIを実質的に含まず、因子VIII:Cに対するvWFの 活性の比に基づく因子VIII含量が<0.1%であることを特徴とする請求項 12から14のいずれかに記載の調製物。 16. ウイルスに関して安全であることを特徴とする請求項12から15の いずれかに記載の調製物。 17. 保存安定形態で存在することを特徴とする請求項12から16のいず れかに記載の調製物。 18. 医薬調製物として製剤化されていることを特徴とする請求項12から 17のいずれかに記載の調製物。 19. 表現型血友病およびvWDの患者の処置用薬物を生産するための請求 項12から18のいずれかに記載のvWFを含む調製物の使用。
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