JP2000506869A - 安定な因子viii/▲下v▼wf複合体 - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1. 高分子vWF多量体をとくに含有し、低分子vWF分子とvWF蛋白分解産物を含 まない安定な因子VIII/vWF複合体。 2. 少なくとも50U/mg vWF:Agの比血小板凝集活性を示すことを特徴とする請 求項1の安定な因子VIII/vWF複合体。 3. vWFに対する因子VIIIのモル比が0.01〜100であることを特徴とする請求項 1または2の安定な因子VIII/vWF複合体。 4. vWFに対する因子VIIIのモル比が0.05〜1であることを特徴とする請求項3 の安定な因子VIII/vWF複合体。 5. ダブレット構造を持つ高分子血漿vWF多量体を含有することを特徴とする 請求項1〜4のいずれかの安定な因子VIII/vWF複合体。 6. シングレット構造を持つ高分子組換えvWF多量体を含有することを特徴と する請求項1〜5のいずれかの安定な因子VIII/vWF複合体。 7. その高分子vWF分子が高い構造上の完全性を持つことを特徴とする請求項1 〜6のいずれかの安定な因子VIII/vWF複合体。 8. 血漿タンパク質、とくに血漿プロテアーゼを含まず、かつ、フィブリノー ゲンとフィブロネクチンを含まないことを特徴とする請求項1〜7のいずれかの安 定な因子VIII/vWF複合体。 9. 溶液状態で貯蔵安定性を示すことを特徴とする請求項1〜8のいずれかの安 定な因子VIII/vVVF複合体。 10. ウイルスを失活または枯渇させるための処理を受けていることを特徴と する請求項1〜9のいずれかの安定な因子VIII/vWF複合体。 11. 構造上の完全性が高い高分子vWF多量体をとくに含有し、そのvWF多量体 がシングレットまたはダブレット構造からなり、かつ、vWFの蛋白分解産物を含 まない、安定なウイルスセーフ濃縮因子VIII/vWF複合体。 12. 少なくとも50U/mg vWF:Agの比血小板凝集活性を持つことを特徴とする請 求項11の安定なウイルスセーフ濃縮因子VIII/vWF複合体。 13. vWFに対する因子VIIIのモル比が0.01〜100であることを特徴とする請求 項11または12の安定なウイルスセーフ濃縮因子VIII/vWF複合体。 14. vWFに対する因子VIIIのモル比が0.05〜1であることを特徴とする請求項1 3の安定なウイルスセーフ濃縮因子VIII/vWF複合体。 15. 血漿タンパク質、とくに血漿プロテアーゼを含まず、かつ、微生物学的 および分子生物学的病原体を含まないことを特徴とする請求項11〜14のいずれか の安定なウイルスセーフ濃縮因子VIII/vWF複合体。 16. 請求項1〜15のいずれかの安定な因子VIII/WF複合体を含有する医薬組成 物。 17. 生理学的に許容できる担体を含有することを特徴とする請求項16の医薬 組成物。 18. 血友病Aおよび/または種々の形態のフォン・ウィルブランド症候群を治 療するための請求項1〜15のいずれかの安定な因子VIII/vWF複合体の使用。 19. タンパク質溶液から因子VIII/vWFをヘパリンアフィニティー担体に結合 させ、因子VIII/vWF複合体を200mM以上300mM以下の塩濃度で回収することを特徴 とする安定な因子VIII/vWF複合体の回収法。 20. 因子VIII/vWF複合体を含有する血漿画分または寒冷沈降物を該タンパク 質溶液として使用することを特徴とする請求項19の方法。 21. 細胞を含まず、因子VIII/vWF複合体を含有する形質転換細胞の培養上清 を該タンパク質溶液として使用することを特徴とする請求項19の方法。 22. 濃縮タンパク質画分を該タンパク質溶液として使用することを特徴とす る請求項19の方法。 23. ヘパリンアフィニティー担体として、ヘパリンが結合した担体(好まし くはAF-ヘパリントヨパール(Tosohass社)、ヘパリンEMD-フラクトゲルまたは ヘパリン−セファロースファストフロー)を使用することを特徴とする請求項19 〜22のいずれかの方法。 24. アフィニティークロマトグラフィー用の緩衝液系として、緩衝剤(好ま しくはトリス/塩酸緩衝液、リン酸緩衝液またはクエン酸緩衝液)と任意に塩と からなる緩衝液を使用することを特徴とする請求項19〜23のいずれかの方法。 25. アフィニティークロマトグラフィーを6.0〜8.5のpH域(好ましくはpH7.4 )で行なうことを特徴とする請求項19〜24のいずれかの方法。 26. 塩としてNaClを使用することを特徴とする請求項19〜25のいずれかの方 法。 27. 因子VIII:Cの比活性が少なくとも50U/mgタンパク質であり、かつ、比血 小板凝集活性が少なくとも50U/mgvWFである因子VIII/vWF複合体が得られること を特徴とする請求項19〜26のいずれかの方法。 28. 高分子vWF多量体をとくに含有し、低分子vWF多量体とvWF蛋白分解産物を 含まない因子VIII/vWF複合体含有画分が得られることを特徴とする請求項19〜27 のいずれかの方法。 29. 夾雑物を含むタンパク質溶液中の因子VIII/vWF複合体を陰イオン交換体 に結合させる安定な因子VIII/vWF複合体の回収法であって、夾雑血漿タンパク質 を200mM以下の塩濃度でCaCl2を用いて選択的に溶出した後、200mM以上400mM以下 の塩濃度で因子VIII/vWF複合体をその陰イオン交換体から得ることを特徴とする 方法。 30. 夾雑タンパク質が血漿タンパク質であることを特徴とする請求項29の方 法。 31. その血漿タンパク質がとくにビタミンK依存性因子、血漿プロテアーゼ、 フィブロネクチンまたはフィブリノゲンであることを特徴とする請求項30の方法 。 32. CaCl2を溶離液中1mM〜15mM(好ましくは10mM)の濃度で使用することを 特徴とする請求項29〜31のいずれかの方法。 33. 溶出を6.0〜8.5のpH域(好ましくはpH7.4)で行なうことを特徴とする請 求項29〜32のいずれかの方法。 34. 塩としてNaClを使用することを特徴とする請求項29〜33のいずれかの方 法。 35. 高分子vWF多量体をとくに含有し、かつ、低分子vWF分子とvWF分解産物を 含まない因子VIII/vVVF複合体が得られることを特徴とする請求項29〜34のいず れかの方法。 36. 回収された因子VIII/vWF複合体を含有する画分をさらなるクロマトグラ フィー処置(好ましくはアフィニティークロマトグラフィー)にかけることを特 徴とする請求項29〜35のいずれかの方法。 37. そのアフィニティークロマトグラフィーとして請求項19〜27のいずれか のヘパリンクロマトグラフィーを使用することを特徴とする請求項36の方法。 38. vWF分子の精製高分子画分をクロマトグラフィー法で精製された因子VIII または因子VIII/vWF複合体に混合することにより、vWFに対する因子VIIIのモル 比が0.01〜100(好ましくは0.05〜1)の因子VIII/vWF複合体を得ることを特徴と する安定な因子VIII/vWF複合体の生産法。 39. 該精製因子VIIIまたは因子VIII/vWF複合体が血漿画分から回収されるこ とを特徴とする請求項38の方法。 40. 該精製因子VIIIまたは因子VIII/vWF複合体が細胞を含まない形質転換細 胞の細胞培養上清から回収されることを特徴とする請求項38の方法。 41. 該vWF分子の精製高分子画分が血漿vWFからなることを特徴とする請求項3 8の方法。 42. 該vWF分子の精製高分子画分が組換えvWFからなることを特徴とする請求 項38の方法。 43. 少なくとも50U/mgvWF:Agの比血小板凝集活性を持つvWF分子の高分子画分 が回収されることを特徴とする請求項38〜42のいずれかの方法。
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