JP2001500114A - ３―ヒドロキシメチルセファロスポリンの溶媒抽出法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 セファロスポリン中間体、デスアセチル７−グルタリールＡＣＡおよびデスアセチルセファロスポリンＤは、該中間体を低濃度の形体で含む水溶液から、シクロヘキサノンを使用する溶媒抽出とその後の水中への逆抽出によって、濃厚水溶液の形体で得られる。この中間体の濃厚水溶液は、周知の方法を使用する７−ＡＣＡの経済的製造に使用しうる形体にある。

Description

【発明の詳細な説明】 ３−ヒドロキシメチルセファロスポリンの溶媒抽出法 発明の属する技術分野 本発明は水性醗酵液から３−ヒドロキシメチルセファロスポリンの濃水溶液を 得る改良法に関する。更に詳しくは、本発明は水性醗酵液からある種の３−ヒド ロキシメチルセファロスポリン中間体のシクロヘキサノン抽出を行い次いでこれ を逆抽出して所望の３−ヒドロキシメチルセファロスポリン中間体の濃縮水溶液 を得る方法に関する。発明の背景 ７−アミノセファロスポリン酸（７−ＡＣＡ）及びその種々の誘導体はセファ スポリン系の抗生物質の製造において公知の重要な中間体である。７−ＡＣＡお よび種々の３−置換基をもつその誘導体は周知の方法によって醗酵誘導体セファ ロスポリンＣから得ることができる。たとえば、セファロスポリンＣからの７− ＡＣＡへの転化は、周知の化学的および酵素的方法によって行われる。 米国特許出願第４，５３３，６３２号には水性醗酵液中のデスアセチルセファ ロスポリンＣを得る方法が記載されており、この生成物はセファロスポリン誘導 体の製造にセファロスポリンＣよりすぐれた著しい利点をもつことが報告されて いる。 他の公知例たとえは米国特許第５，４２４，１９６号は、水性醗酵液中に生成 したデスアセチルセファロスポリンＣを３−ヒドロキシメチル置換基を含むデス アセチル−７−グルタリールＡＣＡに転化する酵素法を開示している。 米国特許第４，９０８，４４４号のタケダ、米国特許第５，２２１，７３９号 およびＪ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ４７（１）：６４−７１，１９９４のリリ イは、水溶液中のデスアセチル７−グルタリールＡＣＡを無水酢酸でアセチル化 して７−グルタリールＡＣＡを製造し、次いでこれを酵素的に加水分解して高収 率で７−ＡＣＡを作る方法を開示している。 水性醗酵液から生じたデスアセチル７−グルタリールＡＣＡを使用する酵素的 ７−ＡＣＡ法はかなり進歩したが、この方法は依然として工業的に有利には利用 されていない。１つの深刻な問題は、デスアセチル７−グルタリールＡＣＡが醗 酵液には低濃度（〜１〜３％）でしか得られず、従来の方法によってはこれらの 濃度では経済的にアセチル化することができないという点にある。たとえば上記 のリリイの特許およびＪ．Ａｎｔｉｃｓ誌には、アセチル化反応は高濃度の、好 ましくは１０％以上のデスアセチル７−グルタリールＡＣＡ濃度で最もよく進行 することが報告されている。デスアセチルセファロスポリンＣ醗酵液から適正濃 ることは今迄可能ではなかったので、その水性アシル化工程を工業的に可能には できなかった。 関連セファロスポリンＣ誘導体のＮ−カルブイソブトキシセファロスポリンＣ は次式、 をもち、そのビスジシクロヘキシルアミン塩は米国特許第３，５７３，２９６号 、および第３，８３０，８０９号に７−ＡＣＡの合成の有用な中間体として開示 されている。中間体Ｎ−カルブイソブトキシセファロスポリンをここでは「セフ ァロスポリンＤ」と呼ぶ。セファロスポリンＤを使用して７−ＡＣＡを製造する ために（たとえば米国特許４，５３３，６３２号参照）デスアセチルセファロス ポリンＣ醗酵液をより高い滴定濃度で得るには、醗酵液中に生成したデスアセチ ルセファロスポリンＣを、米国特許第３，５７３，２９６号の一般法によりイソ ブチルクロロホーメートでアシル化することによって式 のデスアセチルセファロスポリンＤにまず転化することが必要である。このよう にして生成したデスアセチルセファロスポリンＤは次いで米国特許第４，９０８ ，４４４号および第５，２２１，７３９号の一般法により無水酢酸でアセチル化 してセファロスポリンＤとする必要がある。この生成物は米国特許第３，８３０ ，８０９号に記載されているようにビス−ジシクロヘキシルアミン塩の形体で好 都合に単離することができる。 然し上記のデスアセチル−７−グルタリールＡＣＡのアシル化の場合と同様に 、 化工程をコスト上有効にするために必要である。また、デスアセチル７−グルタ リールＡＣＡの場合と同様に、このような高濃度で醗酵液からデスアセチルセフ ァロスポリンＤを得る実用的方法はなかった。 多数の有機溶媒、たとえばｎ−ブチルアセテート、メチレンクロリド、メチル イソブチルケトン、クロロホルム及びエチルアセテートが、水性醗酵液からのセ ファロスポリン生成物の抽出に使用されている。米国特許第３，８３５，１２９ 号には、シクロヘキサノンが良好なＮ−アシルセファロスポリンＣ抽出溶媒であ ると考えられたが、それは大規模操作で使用したとき乳化問題を生じたことか述 べられている。米国特許第４，１６８，３７５号はセファロスポリンＣのスルホ ンアミド誘導体の一連の可能な抽出溶媒としてシクロヘキサノンをあげているが 、３−ヒドロキシメチルセファロスポリンの抽出については述べていない。米国 特許第３，９８６，６４４号にはシクロヘキサノンがある種のセファロスポリン Ｃリン酸アミド誘導体の抽出に使用されることが述べられているが、３−ヒドロ キシメチルセファロスポリンには言及されていない。 本発明者等は、デスアセチル−７−グルタリールＡＣＡおよびデスアセチルセ ファロスポリンＤのような３−ヒドロキシメチルセファロスポリンが、他のセフ ァロスポリン化合物たとえばＮ−ブロックのセファロスポリンＣに使用する普通 の有機溶媒で抽出することは困難もしくは不可能であるが、本発明の方法で抽出 用溶媒としてシクロヘキサノンを使用するとデスアセチル７−グルタリールＡＣ Ａまたはデスアセチルセファロスポリンの十分に濃厚な水溶液を醗酵液からうる ことが可能となり、上記の水性アセチル化工程を経済的に実施して７−グルタリ ールＡＣＡおよびセファロスポリンＤ（これは次いで公知の方法により７−ＡＣ Ａに転化することができる）を得ることを可能にすることを見出した。発明の要約 本発明はデスアセチル７−グルタリールＡＣＡまたはデスアセチルセファロス ルＡＣＡまたはデスアセチルセファロスポリンＤを低濃度で含む水溶液、好まし くは水性醗酵液、そして最も好ましくは処理（ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ）醗酵液から 、製造する方法であり、その方法は次の工程、すなわち （ａ）デスアセチル７−グルタリールＡＣＡまたはデスアセチルセファロスポリ ンＤを含む水溶液、好ましくは醗酵液、そして最も好ましくは処理醗酵液を 用意し； （ｂ）この溶液を約１．５〜約３のｐＨでシクロヘキサノンと接触させてデスア セチル７−グルタリールＡＣＡまたはデスアセチルセファロスポリンＤをシ クロヘキサノン溶媒相中に抽出し； （ｃ）このシクロヘキサノン溶媒相を水性相から分離し； （ｄ）このシクロヘキサノン相を約５〜約７．５のｐＨで水と接触させ；そして （ｅ）デスアセチル７−グルタリールＡＣＡまたはデスアセチルセファロスポリ ンＤの所望濃度の溶液を含む水性相を分離する； 諸工程からなる。発明の詳細な説明 上記のように、工業的規模でデスアセチルセファロスポリンＣから７−ＡＣＡ を製造する酵素法の実施には、問題のアセチル化工程を経済的収率で達成するこ と、すなわち７−グルタリールＡＣＡへのデスアセチル７−グルタリールＡＣＡ の無水酢酸水性アセチル化を経済的収率で達成することを必要とする。この工程 重量／容量）水溶液の使用に依存する。然し、この物質が醗酵液からえられると き、それは１〜３重量／容量のずっと低い濃度で醗酵液中に存在するので、醗酵 液から７−グルタリールＡＣＡを抽出し、これを濃縮して、このアセチル化工程 を実用的で７−ＡＣＡ製造の化学的合成法と競合できるようにすることが必要で ある。 同様に、従来からの化学合成ルートによって７−ＡＣＡを得るために公知の中 間体セファロスポリンを使用する場合には、高収率でセファロスポリンＤを与え る無水酢酸による水性アシル化反応をもたらすように、醗酵中に生成したデスア セチルセファロスポリンＣをデスアセチルセファロスポリンＤに転化し次いでこ スアセチルセファロスポリンＣ醗酵における最近の改良を利用することが非常に 好ましい。 好ましい態様において、本発明の方法は、出発物質として、デスアセチル７− グルタリールＡＣＡまたはデスアセチルセファロスポリンＤを含む処理醗酵液を 使用する。ここに使用する用語「処理醗酵液」とは、たとえば米国特許第５，４ ２４，１９６号に記載されているような酵素法によってデスアセチル７−グルタ リールＡＣＡを含む液に転化された、又はイソブチルクロロフォーメートによっ てセファロスポリンＤを含む液に転化された、デスアセチルセファロスポリンＣ 醗酵液を意味する。デスアセチル７−グルタリールＡＣＡまたはデスアセチルセ ファロスポリンＤは、処理液中に回収可能量で存在しなければならず、一般に約 １−３％（重量／容量）のやや低濃度で存在する。処理液は直接に、又はｐＨ調 節および濾過のような精製を受けた後に使用することができる。処理液はまた１ 以上の樹脂カラムによる処理にかけてそれを更に精製することもできる。後者の 水性媒質は時として「樹脂溶離」とも呼ばれる。 水溶液、好ましくは処理醗酵液、を抽出溶媒としてのシクロヘキサノンと接触 させ、醗酵液と攪拌もしくは激しく混合して２つの溶媒相を与える。シクロヘキ サノンによる抽出の前又は抽出中に、溶液または混合物は無機酸たとえば硫酸、 硝酸または塩酸により約１．５〜約３、好ましくは約２のｐＨに調節する。シク ロヘキサノン抽出工程の温度は臨界的ではないが、抽出は約０℃〜約室温で行う のが好ましく、最も好ましくは約５〜１０℃で行う。抽出後に、水性相はシクロ ヘキサノンで再び抽出して追加量のデスアセチル７−グルタリールＡＣＡまたは デスアセチルセファロスポリンＤを得ることができる。シクロヘキサノン層を合 体する。シクロヘキサノン抽出は高い％、一般には９０％以上のデスアセチル７ −グルタリールＡＣＡまたはデスアセチルセファロスポリンＤの醗酵液からの抽 出をもたらす。 ７−グルタリールＡＣＡまたはセファロスポリンＤを作るためのアセチル化工 程は水性条件下で行われるので、デスアセチル７−グルタリールＡＣＡまたはデ スアセチルセファロスポリンを含むシクロヘキサノン層を水で逆抽出して所望濃 度の水溶液を得ることが必要である。シクロヘキサノン相は水性相から分離され て水と約５〜約７．５の範囲のｐＨで接触して再び２つの溶媒相を与える。この とき水性相はデスアセチル７−グルタリールＡＣＡまたはデスアセチルセファロ スポリンＤを含む。この溶媒相を分離して所望の水性溶液を得る。この工程でｐ Ｈ調節に使用する塩基は臨界的ではないが、酢酸ナトリウムまたは酢酸カリウム のような酢酸塩緩衝液を使用するのが好ましい。この抽出工程の温度はシクロヘ キサノン抽出に使用したのと同一であることができる。水による逆抽出は、高収 率を与え、再び９０％以上のデスアセチル７−グルタリールＡＣＡまたはデスア セチルセファロスポリンＤが水性相中に回収される。 本発明の方法は、１０％以上の濃度の水性デスアセチル７−グルタリールＡＣ ＡまたはデスアセチルセファロスポリンＤ溶液をもたらす。１０−２０％重量／ 容量の範囲の濃度が達成可能であり、１５％濃度が容易にえられ、次のアセチル 化工程に好ましい。抽出および次の逆抽出を組合せた方法は、醗酵塩の除去なら びにデスアセチル７−グルタリールＡＣＡまたはデスアセチルセファロスポリン Ｄの濃縮を可能にする。 上記のように、シクロヘキサノンは、３−ヒドロキシメチルセファロスポリン 、たとえばデスアセチル７−グルタリールＡＣＡおよびデスアセチルセファロス ポリンＤ、の抽出用の独特の溶媒であることが見出された。醗酵液からＮ−ブロ ック−セファロスポリンＣのような他のセファロスポリン中間体を抽出するのに 使用する共通の有機溶媒は３−ヒドロキシメチルセファロスポリンには有用では ない。これを説明するために、次の表は多くの工業的溶媒を使用して抽出した７ −グルタリールＡＣＡおよびデスアセチルセファロスポリンＤの％を示す。デスアセチル７−グルタリールＡＣＡの抽出 （処理醗酵液から） 溶媒 抽出％ メチルイソブチルケトン ５ ｎ−ブチルアセテート １ ｎ−ブチルアセテート １７ ／ｎ−ブタノール（２０％） ｎ−ブタノール ５２．５ エチルアセテート ８．４ シクロヘキサノン ７２．５ （３回の抽出後に９８％） デスアセチルセファロスポリンＤの抽出 （処理醗酵液から） 溶媒 抽出％ メチルイソブチルケトン ４５．６ ｎ−ブチルアセテート １３．４ ｎ−ブチルアセテート ６７ ／ｎ−ブタノール（６％） エチルアセテート ７５．８ シクロヘキサノン ８８．４ デスアセチルセファロスポリンＤの場合にはブタノールを添加したエチルアセ テート及びｎ−ブチルアセテートも優れた抽出性を示したが、シクロヘキサノン は明らかに最良の抽出溶媒である。エチルアセテートの溶媒回収はエタノールと 酢酸へのエチルアセテートの容易な加水分解のために、十分でない。逆抽出にお けるブタノールのようなアルコールの存在は次のアセチル化工程で妨害となる。 シクロヘキサノンを抽出溶媒として使用することによりデスアセチル７−グルタ リールＡＣＡのラクトン化が著しく減少することも判明した。本発明の抽出／逆 抽出の方法は全体として１０倍以上の濃度のデスアセチル７−グルタリールＡＣ ＡまたはデスアセチルセファロスポリンＤを与え、えられる濃厚水溶液は、更な る処理の必要なしに、水性アシル化反応方法に適応できる。 次の実施例を本発明の説明のために使用する。例１ ２．７％のデスアセチル７−グルタリールＡＣＡ水溶液（１１８０ｍｌ）とシ クロヘキサノン（１１８０ｍｌ）を攪拌し、６ＮのＨＣｌを加えて混合物をｐＨ ２．０に調節した。混合物を分解ロートに移して抽出した。層を分離してシクロ ヘキサノン層を残した。水性層を新鮮なシクロヘキサノン（２×１０００ｍｌ） て抽出した。集めたシクロヘキサノン層（３２２０ｍｌ）を検査し、０．９２８ ％溶液を得た。デスアセチル７−グルタリールＡＣＡを９２％の効率で抽出した 。デスアセチル７−グルタリールＡＣＡ（０．９２８％）を含むシクロヘキサノ ン抽出物（３２１５ｍｌ）を４．Ｍの酢酸ナトリウム（ＮａＯＡｃ）（９０．０ ｍ１）で逆抽出した。混合物の初期ｐＨはｐＨ２．４からｐＨ５．８７に上昇し た。層の分離は１８．１％濃度の水性層（１５１．５ｍｌ）を与えた。７−グル タリールＡＣＡの逆抽出は９２％の効率で達成された。デスアセチル７−グルタ リールＡＣＡ抽出の全効率は８４％であった。例２ ２．４８％のデスアセチル７−グルタリールＡＣＡ水溶液（９１０ｍｌ）とシ クロヘキサノン（９１０ｍｌ）を攪拌し、６ＮのＨＣｌを加えて混合物をｐＨ７ ．２からｐＨ２．０に調節した。混合物を分離ロートに移して抽出した。層を分 離し、シクロヘキサノン層を残した。水性層を新鮮なシクロヘキサノン（２×９ １０ｍｌ）で抽出した。集めたシクロヘキサノン層（２８２５ｍｌ）を検査し、 ０．７７％溶液を得た。デスアセチル７−グルタリールＡＣＡを９６％の効率で 抽出した。デスアセチル７−グルタリールＡＣＡ（０．７７％）を含むシクロヘ キサノン抽出物（２８２２ｍｌ）を、４．８Ｍの酢酸カリ（ＫＯＡｃ）（６００ ｍｌ）で逆抽出した。混合物の初期ｐＨはｐＨ２．５からｐＨ６．４５に上昇し た。層を分離して１４．１％濃度で水性層（１２２．５ｍｌ）（７９％）を得た 。１．０ＭＣのＫＯＡｃ（２×７．０ｍｌ）による逆抽出により合計水層（１８ ．２ｍｌ）（７６％）を得た。デスアセチル７−グルタリールＡＣＡの逆抽出は ８７．６％の効率で達成された。デスアセチル７−グルタリールＡＣＡの抽出の 全効率 は８４％であった。例３ デスアセチル７−グルタリールＡＣＡ溶液を含む酸化したＵＦ（超濾過）浸透 液を使用する実験室規模の実験 ＤｅＬａｖａｌセパレータを使用して、デスアセチル７−グルタリールＡＣＡ （２．４１％）を含む濾過醗酵液（１０．１９ｌ）をｐＨ２．０でシクロヘキサ ノン（１０．１９ｌ）で抽出した。それぞれの抽出を１．９ｌ規模で行った。新 鮮な浸透液を前の抽出からのリッチなシクロヘキサノンで抽出して連続抽出に似 せた。最後の溶液（１．１８％）からのリッチなシクロヘキサノンの部分（３８ ３０ｍｌ）を４．０ＭのＮａＯＡｃ（１５０ｍｌ）で逆抽出してデスアセチル７ −グルタリールＡＣＡの水溶液（２５０ｍｌ）（１６．３％）をえた。逆抽出は ９０％の効率で達成された。例４ Ａ．分離ロート抽出 デスアセチルセファロスポリンＤの溶液（１７．８８ｇ）３７．７６ミリモル 、１．９ｌ）をシクロヘキサノン（９４５ｍｌ）で攪拌した。溶液を塩酸（６Ｎ 、８６．０ｍｌ）でｐＨ７．１８からｐＨ２．２７に調節した。二相混合物を５ 分間攪拌し、ｐＨ２．１８が観察された。混合物を分離ロートに移し、相を分離 した。小量の白色エマルジョンを濾過により除いた。シクロヘキサノン相（７５ ０ｍｌ）と水性相（２１９５ｍｌ）をサンプリングしてＨＰＬＣ分析した。シク ロヘキサノン中のデスアセチルセファロスポリンＤ（１８．５ｇ／ｌ）を７７． ５％収率でえた。水溶液は残りのデスアセチルセファロスポリンＤ（０．７６ｇ ／ｌ、９．４％）を含んでいた。物質収支は８６．９％であった。 Ｂ．ＤｅＬａｖａｌ セパレータによる抽出 取扱いの容易のために、デスアセチルセファロスポリン溶液（４．０２５ｌ） を２つの部分に分割した。デスアセチルセファロスポリンＤの溶液（１７．３６ ｇ、３６．６６ミリモル、２．０ｌ）をシクロヘキサノン（１．０ｌ）と攪拌し た（５℃）。この溶液を塩酸（６Ｎ、７８．０ｍｌ）でｐＨ７．７からｐＨ２． ５に調節した。二相混合物を５分間攪拌した。デスアセチルセファロスポリンＤ の溶液（１７．５８ｇ、３７．１３ミリモル、２．０２５ｌ）をシクロヘキサノ ン（１．０ｌ）と攪拌（５℃）した。この溶液を塩酸（６Ｎ、９０．０ｍｌ）で ｐＨ７．８６からｐＨ２．５７に調節した。二相混合物を５分間攪拌した。これ ら混合物の双方をＤｅＬａｖａｌセパレータに移して有機相を水性相から分離し た。小量の白色固体がシクロヘキサノン相に存在した。シクロヘキサノン相（１ ７１０ｍｌ）と水性相（４０２０ｍｌ）をＨＰＬＣ分析用にサンプリングした。 シクロヘキサノン中のデスアセチルセファロスポリンＤ（１７．９２ｇ／ｌ）を ８７．７％収率で得た。水溶液は残りのデスアセチルセファロスポリンＤ（０． ８６ｇ／ｌ、９．９％）を含んでいた。物質収支は９７．６％であった。Ｃ．水への逆抽出 デスアセチルセファロスポリンＤのシクロヘキサノン中の溶液（１３．８６ｇ 、２９．２７ミリモル、７５０ｍｌ）を酢酸ナトリウム（２．０Ｍ、１２４ｍｌ ）で攪拌（１０℃）した。この溶液を攪拌し、ｐＨをｐＨ２．１３からｐＨ５． ７７に増大させた（３５分）。この溶液を分離ロートに移して分離した。水性相 （１７０ｍｌ）とシクロヘキサノン相（６９０ｍｌ）をＨＰＬＣ分析用にサンプ リングした。水性緩衝液中のデスアセチルセファロスポリンＤ（７５．４ｇ／ｌ ）が９２．５％の収率でえられた。シクロヘキサノン溶液は残りのデスアセチル セファロスポリンＤ（０．４６ｇ／ｌ、２．３％）を含んでいた。物質収支は９ ４．８％であった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ， ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，Ｆ Ｉ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ， ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，Ｎ Ｏ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ， ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 ルービー，ジョン エム アメリカ合衆国ニューヨーク州 13057 イー シラキューズ コベントリー ロー ド 7205 (72)発明者 オーディア，ビッキ エイチ アメリカ合衆国ニュージャージー州 08536 プレインズボロ ラベンス クレ スト ドライブ 56―19

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．次の諸工程すなわち、 （ａ）デスアセチル７−グルタリールＡＣＡを含む水溶液を用意し； （ｂ）この溶液を約１．５から約３のｐＨでシクロヘキサノンと接触させてデス アセチル７−グルタリールＡＣＡをシクロヘキサノン溶媒相中に抽出し； （ｃ）シクロヘキサノン溶媒相を水性相から分離し； （ｄ）シクロヘキサノン相を約５〜約７．５のｐＨで水と接触させ；そして （ｅ）所望の濃度のデスアセチル−７−グルタリールＡＣＡを含む水性相を分離 する； 諸工程からなることを特徴とする低濃度のデスアセチル７−グルタリールＡＣＡ を含む水溶液からデスアセチル７−グルタリールＡＣＡの濃厚（１０重量／容量 ％以上）水溶液を製造する方法。 ２．工程（ａ）の水溶液が処理醗酵液である請求項１の方法。 ３．工程（ｄ）が酢酸塩緩衝液の使用を含む請求項１または請求項２の方法。 ４．次の諸工程すなわち、 （ａ）デスアセチルセファロスポリンＤを含む水溶液を用意し； （ｂ）この溶液を約１．５〜約３のｐＨでシクロヘキサノンと接触させてデスア セチルセファロスポリンＤをシクロヘキサノン溶媒相中に抽出し； （ｃ）シクロヘキサノン溶媒相を水性相から分離し； （ｄ）シクロヘキサノン相を約５〜約７．５のｐＨで水と接触させ；そして （ｅ）デスアセチルセファロスポリンＤの所望濃度溶液を含む水性相を分離する ； 諸工程からなることを特徴とする低濃度のデスアセチルセファロスポリンＤを含 む水溶液からデスアセチルセファロスポリンＤの濃厚（１０重量／容量％以上） 水溶液を製造する方法。 ５．工程（ａ）の水溶液が処理醗酵液である請求項４の方法。 ６．工程（ｄ）が酢酸塩緩衝液の使用を含む請求項４または請求項５の方法。