JP2001197897A

JP2001197897A - Ｄ−リンゴ酸の精製方法

Info

Publication number: JP2001197897A
Application number: JP2000065897A
Authority: JP
Inventors: Hirotoshi Hiraoka; 宏敏平岡; Makoto Ueda; 誠上田
Original assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Current assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Priority date: 1999-11-09
Filing date: 2000-03-10
Publication date: 2001-07-24

Abstract

(57)【要約】【課題】特に微生物反応によって製造され、菌体由来
の脂質やタンパク質に加え、ジカルボン酸類、特にマレ
イン酸又はＬ−リンゴ酸を不純物として含有するＤ−リ
ンゴ酸及び／又はその塩を含有する水性媒体からＤ−リ
ンゴ酸を高効率に精製する方法を提供する。【解決手段】Ｄ−リンゴ酸及び／又はその塩を精製す
るに際し、酸処理した後、活性炭と接触させることを特
徴とするＤ−リンゴ酸の精製方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、医薬、農薬等の中
間体原料として産業上有用な化合物である、Ｄ−リンゴ
酸の高効率な精製方法に関する。本発明によれば、水溶
液中のＤ−リンゴ酸を簡単に、高純度、高収量で採取す
ることが可能である。

【０００２】

【従来の技術】Ｄ−リンゴ酸を微生物を用いて製造する
方法としては、マレイン酸から製造する方法（特開昭５
１−７０８８０号公報、特開平５−１０３６８０号公
報、特許２５０９９０号公報）やＤＬ−リンゴ酸からＬ
体のみをＬ−アスパラギン酸に変換し、未反応原料のＤ
−リンゴ酸を分離する方法（特開平５−２６８９９１号
公報、特開平５−２７１１４７号公報、特開平６−７２
９４５号公報）、ＤＬ―リンゴ酸からＬ−体のみを資化
させる方法（Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｌｅｔ．ｐ．２３−３８
（１９９３））等が知られている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記文
献において、Ｄ−リンゴ酸を単離・精製する工程として
は、有機溶媒で抽出した後にクロマト精製を行う方法や
過塩素酸を用いた除タンパク工程を有する方法、また
は、単に陽イオン交換樹脂を用いただけの方法が記載さ
れているのみであった。これらの精製方法のうち、前者
は実験室レベルでの精製方法であり、煩雑な方法ため、
工業的には使用できず、また、後者は、医農薬中間体の
原料として用いるに当たっては、精製度合いが未だ不十
分であり、更に再結晶工程等が必要であった。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、菌体や培
地由来の脂質、有機酸等や各種副生物を含有する反応液
から、高効率かつ簡便にＤ−リンゴ酸を採取するため鋭
意検討を行った結果、強酸性陽イオン交換樹脂処理の後
に活性炭処理を行うことにより、Ｄ−リンゴ酸が高効率
で分離・回収できることを見い出し、本発明を完成する
に至った。

【０００５】すなわち、本発明の要旨は、Ｄ−リンゴ酸
及び／又はその塩を精製するに際し、酸処理した後、活
性炭と接触させることを特徴とするＤ−リンゴ酸の精製
方法に存する。

【０００６】

【発明の実施の形態】本発明に用いるＤ−リンゴ酸及び
／又はその塩の製造方法は、化学合成法によるものでも
微生物や酵素反応を用いたものでも特に限定されるもの
ではないが、微生物を用いて製造されたものが好まし
く、具体的には、例えば、安価な無水マレイン酸を原料
とし、マレイン酸ヒドラターゼ活性を有する微生物菌体
又はその処理物を水性媒体中で作用させて製造したもの
やＤＬ−リンゴ酸にＬ−リンゴ酸のみを資化する微生物
を作用させたものが挙げられる。

【０００７】上記リンゴ酸の塩としては、特に限定され
るものではなく、上記反応において系中に共存する金属
イオンと塩を形成したものでも、上記反応で生成したリ
ンゴ酸塩に無機塩等添加し、更に別の塩に変換したもの
でもよい。具体的にはナトリウム塩、カリウム塩、リチ
ウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウ
ム塩、バリウム塩等のアルカリ土類金属塩等が挙げられ
る。

【０００８】精製工程に供されるＤ−リンゴ酸及び／又
はその塩の形態としては、固体でも、水性媒体中に溶解
した状態でも、一部が析出した懸濁状態でも問題ない
が、塩化カルシウム又は硫酸カルシウム等の無機カルシ
ウム塩を、３０〜５５℃、好ましくは４５〜５０℃の範
囲で上記製造工程で得られるＤ−リンゴ酸含有液中に添
加し、Ｄ−リンゴ酸を不溶性のカルシウム塩とすること
が分離・回収を容易にする上では好ましい。

【０００９】上記水性媒体としては、上記製造工程で使
用される溶媒、具体的には水、アルコールもしくはその
混合物等が挙げられるが、このうち水が好ましい。ま
た、Ｄ−リンゴ酸及び／又はその塩は、上記製造工程で
系中に共存する菌体由来の脂質、タンパク質や各種有機
酸等を不純物として含んでいる。不純物として含まれる
有機酸としては、マレイン酸、Ｌ―リンゴ酸等の未反応
原料やＬ−リンゴ酸、アスパラギン酸、ピルビン酸、オ
キザロ酢酸等の反応副生物、菌体由来の各種アミノ酸、
脂質等が挙げられ、その多くはジカルボン酸類である。

【００１０】本発明は、特に微生物反応によって製造さ
れ、菌体由来の脂質やタンパク質に加え、ジカルボン酸
類、特にマレイン酸又はＬ−リンゴ酸を不純物として含
有するＤ−リンゴ酸及び／又はその塩を精製するのに好
ましい方法である。上記Ｄ−リンゴ酸及び／又はその塩
の含有する不純物量としては、上記各有機酸量としてそ
れぞれ１０重量％以下が好ましい。

【００１１】また精製工程に供される水性媒体中のＤ−
リンゴ酸及び／又はその塩の濃度は、特に制限されるも
のではないが、通常０．０１〜２０重量％、好ましくは
０．１〜１０重量％である。本発明においては、上記不
純物を含有するＤ−リンゴ酸及び／又はその塩を酸処理
した後に活性炭処理することを特徴とする。

【００１２】本発明における酸処理としては、酸性溶液
や強酸性陽イオン交換樹脂で処理するものが挙げられ、
このうち強酸性陽イオン交換樹脂処理が好ましく、ま
た、酸性溶液処理と陽イオン交換樹脂処理を組み合わせ
ても良い。上記酸処理工程に使用する酸性溶液として
は、強酸の水溶液であれば限定されないが、このうち硫
酸及び／又は塩酸のような無機酸の水溶液が好適に用い
られる。

【００１３】添加する酸の濃度としては、特に制限され
るものではないが、例えば、０．５〜５Ｎ、好ましくは
１Ｎ〜３Ｎのものが用いられる。該酸性溶液は、通常、
１０〜５０℃にて、Ｄ−リンゴ酸及び／又はその塩を含
有する水性溶媒のｐＨが１〜４になるまで添加し、その
まま３０分以上、好ましく２時間ほど攪拌する。

【００１４】本発明に使用する強酸性陽イオン交換樹脂
としては、Ｈ型のものまたは他の塩型のものを酸で処理
してＨ型にしたものを用いることができ、例えば「ダイ
ヤイオンＳＫ−１Ｂ」Ｈ型（三菱化学社製）、「ダウエ
ックス（Ｄｏｗｅｘ）５０ＷＸ」（ＤｏｗＣｈｅｍｉ
ｃａｌ製）、「アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）
ＩＲ１２０，ＩＲ１２２，ＩＲ１１８」（Ｒｏｈｍａ
ｎｄＨａｓｓ製）、「ＡＧＭＰ−５０」（Ｂｉｏ−Ｒ
ａｄ製）、「ダウオライト（Ｄｕｏｌｉｔｅ）Ｃ−２
０」（Ｄｉａｍｍｏｎｄ−ＳｈａｍｒｏｃｋＣｈｅｍｉ
ｃａｌ製）等が好適に用いられる。

【００１５】処理形式としては、Ｄ−リンゴ酸及び／又
はその塩の形態にも依存し、Ｄ−リンゴ酸及び／又はそ
の塩が固体又は懸濁状態である場合にはバッチ式が、溶
液状態の場合は連続式が好ましい。バッチ式の場合に
は、Ｄ−リンゴ酸及び／又はその塩に対してプロトン換
算で等モル量以上の陽イオン交換樹脂とＤ−リンゴ酸及
び／又はその塩とを、必要に応じて水を加えて、反応器
中で所定時間混合する。処理温度としては、１０〜５５
℃、好ましくは５０℃以下であり、処理時間としては、
通常２時間程度である。

【００１６】連続式で処理する場合には、陽イオン交換
樹脂を充填した塔に、Ｄ−リンゴ酸及び／又はその塩を
含む水溶液を通液する方法が挙げられる。処理温度とし
ては、１０〜５５℃、好ましくは５０℃以下であり、通
液条件としては、空間速度（ｍｌ／ｍｌ樹脂・ｈｒ）
０．５〜５、好ましくは１〜３である。又、上記連続処
理方式では、流動床型処理装置も好適に使用される。

【００１７】上記処理工程を経たＤ−リンゴ酸含有液体
は、活性炭と接触させる。本発明の活性炭処理工程にお
いて使用する活性炭としては、特に限定されるものでは
なく、通常、比表面積が５００〜３０００ｍ²／ｇであ
るものが使用される。この活性炭としては、例えば、
「特製白鷺」、「粒状白鷺ＤＣ」、「カルボラフィ
ン」、「白鷺Ａ」、「白鷺Ｍ」（以上武田薬品工業社
製）、「ダイアホープＳ６０」、「ダイアホープＳ６
１」、「ダイアホープＳ７０」、「ダイアホープＳ８
０」（以上三菱化学社製）として市販されている市販品
を好適に用いることができ、このうちリンゴ酸の損失量
が少ないという点では、白鷺Ａまたは白鷺Ｍが好まし
い。

【００１８】活性炭処理の形式としては、Ｄ−リンゴ酸
含有液体に活性炭をそのまま添加し接触処理後、これを
分離するバッチ式でも、活性炭の充填塔にＤ−リンゴ酸
含有液体を連続的通液する連続式でも特に限定されるこ
とは無い。活性炭の使用量としては、上記液体に対して
０．０１〜１％Ｗ／Ｖであり、好ましくは０．０５〜
０．５％Ｗ／Ｖである。処理は、通常５５℃以下、好ま
しくは、３０〜５０℃で行われ、バッチ式の場合には、
通常１〜２時間攪拌すればよい。

【００１９】さらに、本精製工程には、必要に応じて、
陰イオン交換樹脂処理工程、限外濾過工程等を入れるこ
ともでき、これらは、上記精製工程の前後だけでなく、
陽イオン交換樹脂処理工程と活性炭処理工程との間に組
み込むことも可能である。本発明の精製処理を行った
後、該処理液を蒸発乾固させることでＤ−リンゴ酸粉末
を得ることが出来る。

【００２０】

【実施例】以下、実施例により本発明を詳細に説明する
が、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
尚、Ｄ−リンゴ酸量の測定は、高速液体クロマトグラフ
ィー（ＳｈｏｄｅｘＳｕｇａｒＳＨ１８２１）を用い
て行った。また、Ｄ−リンゴ酸の光学純度は高速液体ク
ロマトグラフィー（ＳＵＭＩＣＨＩＲＡＬＯＡ−５０
００）により確認した。高速液体クロマトグラフィーの
分析条件は次のとおりである。高速液体クロマトグラフィー分析条件（定量分析用）カラム：ＳｈｏｄｅｘＳＵＧＡＲＳＨ１８２１８．０ｍｍＩ．Ｄ．ｘ３００ｍｍ（昭和電工（株））溶離液：０．０１Ｎ−Ｈ₂ＳＯ₄ 流速：０．６ｍＬ／分間カラム温度：室温検出器：ＲＩ高速液体クロマトグラフィー分析条件（光学純度測定
用）カラム：ＳＵＭＩＣＨＩＲＡＬＯＡ−５０００４．６ｍｍＩ．Ｄ．ｘ１５０ｍｍ（（株）住化分析セン
ター）溶離液：１ｍＭ酢酸銅０．１Ｍ酢酸アンモニウムｉｎ水／イソプロピルアルコール（８５：１５）ｐ
Ｈ４．５流速：０．９ｍＬ／分間カラム温度：３５℃ 検出器：ＵＶ２８０ｎｍまた、Ｄ−リンゴ酸中の蛋白量は、ＢｉｏＲａｄ社製
蛋白質定量キットを用いて行い、カルシウム量は、
和光純薬社製カルシウムＣ−テストワコーを用いて行っ
た。

【００２１】参考例１マレイン酸ヒドラターゼ含有菌
体の調製培地〔ソルビトール１０．０ｇ、マレイン酸３．０
ｇ、ＮＨ₄ＮＯ₃ ２．０ｇ、ＫＨ₂ＰＯ₄ ３．０ｇ、Ｋ
₂ＨＰＯ₄ １０．５ｇ、ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ０．２５
ｇ、ＦｅＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ１０．０ｍｇ、ＭｎＳＯ₄・
４〜６Ｈ₂Ｏ１０．０ｍｇ、酵母エキス５．０ｇ、
Ｌ−プロリン２．０ｇ、／蒸留水１０００ｍＬｐＨ
７．０〕１００ｍｌを５００ｍｌ容三角フラスコに分注
し、滅菌した後、アルスロバクター・エスピー（Ａｒｔ
ｈｒｏｂａｃｔｅｒｓｐ）ＭＣＩ２６１２株（ＦＥＲ
ＭＰ−１２５６２）を植菌し、３０℃にて２０時間震
盪培養した。

【００２２】次に、上記と同じ組成の培地２リットル
を５リットル容通気撹拌槽に仕込み、滅菌（１２０℃、
２０分間）後、前記培養物の２０ｍｌを添加して、回転
数４５０ｒｐｍ、通気量１ｖｖｍ、温度３０℃、ｐＨ
７．０にて１６時間培養した。培養終了後、培養物のう
ち、２リットルを分取し、遠心分離により集菌した。参
考例２Ｄ−リンゴ酸含有反応液の調整上記参考例１で
得た集菌体を（Ａ）反応液〔（Ａ）：無水マレイン酸３
３．８ｇ、リン酸一カリウム１．０２ｇ、リン酸二カリ
ウム２．１８ｇ、ポリオキシエチレンオクチルフェニル
エステル２ｇ／脱イオン水１リットル（ＮａＯＨでｐＨ
を７．０に調整）〕１リットルに懸濁し、３７℃にて震
盪反応させた。反応開始４時間後に（Ｂ）反応液
〔（Ｂ）：無水マレイン酸１３５．２ｇ、リン酸一カリ
ウム１．０２ｇ、リン酸二カリウム２．１８ｇ、ポリオ
キシエチレンオクチルフェニルエーテル２ｇ／脱イオン
水１リットル（ＮａＯＨでｐＨを７．０に調整）〕１２
５ミリリットル添加し、引き続き４０時間、トータルで
４４時間震盪反応させた。

【００２３】反応終了後、遠心分離（８０００ｘｇ、３
０分間、１０℃）にて上澄液と菌体を分離した。実施例１参考例２により調製した反応上澄液１００ｍｌ（マレイ
ン酸５．３ｍｇ／ｍｌ、Ｄ−リンゴ酸５８．３ｍｇ／ｍ
ｌ含有）を５０℃まで加熱撹拌した後、反応液温度を５
０℃に保ちながら塩化カルシウム９．６９ｇを撹拌しな
がら添加し、引き続き２時間撹拌した。その後引き続き
２時間放冷して室温まで冷却し、生成したカルシウム塩
を含む沈殿を遠心分離（８０００ｘｇ、５分間）するこ
とで溶液画分より分離し、含水結晶を得た。この含水結
晶を強酸性陽イオン交換樹脂（三菱化学（株）社製商品
名「ダイヤイオンＳＫ−１Ｂ」Ｈ型）１００ｍｌで回分
処理し、次いで該処理液を遠心分離（８０００ｘｇ、２
０分間）後、活性炭回分処理（０．１重量％白鷺Ｍ；５
０℃、１時間）にて菌体由来の夾雑成分等を除去した
後、真空エバポレーターにより濃縮した。回収したＤ−
リンゴ酸の量は２５６０ｍｇであり、収率は４３．９％
であった。又、該結晶の光学純度を測定したところ、１
００％ｅｅであった。また、上記Ｄ−リンゴ酸は、不純
物である蛋白に関しては測定限界以下(1.25um/mL以
下)、カルシウムイオン濃度に関しては0mg/dl（コント
ロール以下）であった。

【００２４】実施例２参考例２により調製した反応上澄液１００ｍｌから実施
例１と同様にして含水結晶を得た。この含水結晶に蒸留
水１０ｍＬ添加後２Ｎ硫酸を３７ｍＬ添加して２時間撹
拌した。遠心分離（８０００ｘｇ、１０分間）により沈
殿を除去後当該上清を強酸性陽イオン交換樹脂（三菱化
学（株）社製商品名「ダイヤイオンＳＫ−１Ｂ」Ｈ型）
１００ｍｌを充填したカラムに、空間速度２．０で通液
した後、活性炭回分処理（０．１重量％白鷺Ｍ；５０
℃、１時間）に供し、さらに真空エバポレーターにより
濃縮した。回収したＤ−リンゴ酸の量は２６００ｍｇで
あり、収率は４４．６％であった。又、該結晶の光学純
度を測定したところ、１００％ｅｅであった。また、上
記Ｄ−リンゴ酸は、不純物である蛋白に関しては測定限
界以下(1.25um/mL以下)、カルシウムイオン濃度に関し
ては0mg/dl（コントロール以下）というような高純度の
ものであった。

【００２５】実施例３参考例２により調製した反応上澄液１００ｍｌ（マレイ
ン酸５．３ｍｇ／ｍｌ、Ｄ−リンゴ酸５８．３ｍｇ／ｍ
ｌ含有）を強酸性陽イオン交換樹脂（三菱化学（株）社
製商品名「ダイヤイオンＳＫ−１Ｂ」Ｈ型）１００ｍｌ
を充填したカラムに、空間速度２．０で通液した後、活
性炭回分処理（０．１重量％白鷺Ｍ；５０℃、１時間）
に供した後、該処理液を真空エバポレーターにより濃縮
した。回収したＤ−リンゴ酸の量は４７００ｍｇであ
り、収率は８２．３％であった。又、該結晶の光学純度
を測定したところ、１００％ｅｅであった。上記Ｄ−リ
ンゴ酸は、不純物である蛋白に関しては測定限界以下
(1.25um/mL以下)、カルシウムイオン濃度に関しては0mg
/dl（コントロール以下）というような高純度のもので
あった。

【００２６】実施例４培地（ＤＬ−リンゴ酸１０．０ｇ、（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄
２．０ｇ、Ｋ₂ＨＰＯ ₄ ７．０ｇ、ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂
Ｏ０．１ｇ、／蒸留水１０００ｍＬｐＨ７．２）
１００mlを５００ml容三角フラスコに分注し、滅菌した
後、アシネトバクター・ルウオフィ（Acinetobacter lw
offii）ＡＴＣＣ９０３６を植菌し、３０℃にて４日
間振盪培養した。

【００２７】培養終了後、培養物８００ｍＬから遠心分
離（８０００ｇ、１０分間、１０℃）にて上澄液と菌体
を分離した。この上澄み液８００ml（リンゴ酸５．２ｍ
ｇ／ｍｌ含有）を真空エバポレーターにより濃縮し、Ｄ
−リンゴ酸を含む濃縮上澄み液（リンゴ酸７９．８ｍｇ
／ｍｌ含有）を得た。該濃縮上澄み液２０ｍＬを５０℃
まで加熱攪拌した後、液温度を５０℃に保ちながら塩化
カルシウム２．６ｇを攪拌しながら添加し、引き続き２
時間攪拌した。その後引き続き２時間放冷して室温まで
冷却し、生成したカルシウム塩を含む沈殿を遠心（８０
００ｇ５分間）することで溶液画分より分離し、含水
結晶を得た。この含水結晶に脱塩水１０ｍＬを添加しス
ラリーとした後、濃硫酸０．６４ｍＬを滴下して１時間
３０℃にて攪拌した後沈殿を遠心（８０００ｇ１０分
間）することで固体画分を分離し、溶液画分を得た。こ
の溶液画分を強酸性陽イオン交換樹脂（三菱化学（株）
社製商品名「ダイヤイオンＳＫ−１Ｂ」Ｈ型）１０mlで
バッチ処理し、該処理液を遠心（８０００ｇ２０分
間）、活性炭処理（０．１％ｗ／ｖ白鷺Ｍ；５０℃ １
時間）した後、真空エバポレーターにより濃縮した。回
収したＤ−リンゴ酸の結晶量は５２３ｍｇであり、反応
液からの収率は３２．８％であった。さらに該結晶の光
学純度を測定したところ、９９．５％ｅｅであった。上
記Ｄ−リンゴ酸は、蛋白に関しては測定限界以下(1.25u
m/mL以下)、カルシウムイオン濃度に関しては0mg/dl
（コントロール以下）というような高純度のものであっ
た。

【００２８】実施例５培地（ＤＬ−リンゴ酸１０．０ｇ、（ＮＨ₄）₂ＳＯ₄
２．０ｇ、Ｋ₂ＨＰＯ ₄ ７．０ｇ、ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂
Ｏ０．１ｇ、／蒸留水１０００ｍＬｐＨ７．２）
１００mlを５００ml容三角フラスコに分注し、滅菌した
後、アシネトバクター・ルウオフィ（Acinetobacter lw
offii）ＡＴＣＣ９０３６を植菌し、３０℃にて３日
間振盪培養した。

【００２９】培養終了後、培養物５００ｍＬから遠心分
離（８０００ｇ、１０分間、１０℃）にて上澄液と菌体
を分離し、Ｄ−リンゴ酸を含む上澄み液を得た。該上澄
み液１００ml（リンゴ酸５.1ｍｇ／ｍｌ含有）を強酸性
陽イオン交換樹脂（三菱化学（株）社製商品名「ダイヤ
イオンＳＫ−１Ｂ」Ｈ型）３０mlで２時間バッチ処理
し、該処理液を遠心（８０００ｇ２０分間）後、活性
炭処理（０．１％w/v白鷺Ｍ；５０℃１時間）にて夾雑
物除去した後、真空エバポレーターにより濃縮した。回
収したＤ−リンゴ酸の結晶量は４２４ｍｇであり、培養
液からの収率は８３％であった。さらに該結晶の光学純
度を測定したところ、９９．６％ｅｅであった。

【００３０】上記Ｄ−リンゴ酸は、蛋白に関しては測定
限界以下(1.25um/mL以下)、カルシウムイオン濃度に関
しては0mg/dl（コントロール以下）というような高純度
のものであった。

【００３１】

【発明の効果】本発明によれば、特に微生物反応によっ
て製造され、菌体由来の脂質やタンパク質に加え、ジカ
ルボン酸類、特にマレイン酸又はＬ−リンゴ酸を不純物
として含有するＤ−リンゴ酸及び／又はその塩を含有す
る水性媒体から、簡便に、高純度、高収量でＤ−リンゴ
酸を精製することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｒ 1:06）Ｃ１２Ｒ 1:06）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】Ｄ−リンゴ酸及び／又はその塩を精製す
るに際し、酸処理した後、活性炭と接触させることを特
徴とするＤ−リンゴ酸の精製方法。
【請求項２】Ｄ−リンゴ酸及び／又はその塩が微生物
を用いて製造されたものであることを特徴とする請求項
１に記載のＤ−リンゴ酸の精製方法。
【請求項３】Ｄ−リンゴ酸及び／又はその塩が、不純
物として有機酸を含有しているものであることを特徴と
する請求項１又は２に記載の精製方法。
【請求項４】有機酸が、ジカルボン酸であることを特
徴とする請求項３に記載の精製方法。
【請求項５】ジカルボン酸がマレイン酸又はＬ−リン
ゴ酸であることを特徴とする請求項４に記載の精製方
法。
【請求項６】Ｄ−リンゴ酸の塩がカルシウム塩である
ことを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の精製
方法。
【請求項７】酸処理が、強酸性陽イオン交換樹脂によ
る処理であることを特徴とする請求項１〜６のいずれか
に記載の精製方法。