JP2001163896A - アンギオテンシン変換酵素阻害剤として用いられる新規ペプチド及びその製造方法 - Google Patents
アンギオテンシン変換酵素阻害剤として用いられる新規ペプチド及びその製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】アンギオテンシン変換酵素阻害剤として用いる
ことのできる新規ペプチド、ならびにアンギオテンシン
変換酵素阻害活性を有する生成物の製造方法を提供す
る。 【解決手段】アンギオテンシン変換酵素阻害剤として用
いられる特定の配列を有する５つの新規ペプチド、およ
びアンギオテンシン変換阻害活性を有する生成物の製造
方法であって、次の工程、（ａ）鶏かすの溶液に反応の
ためにタンパク質ヒドロラーゼを加える、（ｂ）工程
（ａ）の反応後、鶏かす及び液体を分離し、分離された
液体を収集する、及び（ｃ）工程（ｂ）から得られた液
体を乾燥して生成物を得る、から構成される製造方法を
提供する。
ことのできる新規ペプチド、ならびにアンギオテンシン
変換酵素阻害活性を有する生成物の製造方法を提供す
る。 【解決手段】アンギオテンシン変換酵素阻害剤として用
いられる特定の配列を有する５つの新規ペプチド、およ
びアンギオテンシン変換阻害活性を有する生成物の製造
方法であって、次の工程、（ａ）鶏かすの溶液に反応の
ためにタンパク質ヒドロラーゼを加える、（ｂ）工程
（ａ）の反応後、鶏かす及び液体を分離し、分離された
液体を収集する、及び（ｃ）工程（ｂ）から得られた液
体を乾燥して生成物を得る、から構成される製造方法を
提供する。
Description
【０００１】
【従来の技術】アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）は
主にヒトの血管の内皮細胞、肺、腎臓及び脳に存在す
る。この酵素は、血管の収縮を引き起こし、血圧を上昇
させるために、Ｃ末端から２つのアミノ酸（Ｈｉｓ−Ｌ
ｅｕ）を切断することにより、不活性なアンギオテンシ
ンＩを活性なアンギオテンシンIIに変換し得る。その間
に、ＡＣＥは血管の軽減の機能を示すブラジキシンを不
活性化し得る。したがって、ＡＣＥは血圧を上昇させる
ことができる。
主にヒトの血管の内皮細胞、肺、腎臓及び脳に存在す
る。この酵素は、血管の収縮を引き起こし、血圧を上昇
させるために、Ｃ末端から２つのアミノ酸（Ｈｉｓ−Ｌ
ｅｕ）を切断することにより、不活性なアンギオテンシ
ンＩを活性なアンギオテンシンIIに変換し得る。その間
に、ＡＣＥは血管の軽減の機能を示すブラジキシンを不
活性化し得る。したがって、ＡＣＥは血圧を上昇させる
ことができる。
【０００２】アンギオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥ
Ｉ）のＡＣＥへの結合はアンギオテンシンIIの生成及び
ブラジキニンの不活性化を減少し得る。ＡＣＥＩを食品
に加えると、高血圧症状を減少させるのにプラスの効果
を引き起こすだろう。現在のところ、多くのペプチドが
ＡＣＥの阻害についての効果を有することが知られてい
る。それらは異なったアミノ酸配列と長さを有する。Ａ
ＣＥ阻害活性を有するポリペプチドは食品から単離でき
る。これらの食品は、動物または植物タンパク質、たと
えば、カゼイン（丸山及び鈴木、１９８２）、コーンタ
ンパク質（三好他、１９９１）、イワシの肉（松井他、
１９９３）及びカツオ（松村他、１９９３）並びに発酵
食品、たとえば、酒及びワイン残渣（斎藤他、１９９
４）、大豆油（木下他、１９９３）、チーズ（岡本他、
１９９５）及び発酵ミルク（中村他、１９９５）等の加
水分解物を含む。
Ｉ）のＡＣＥへの結合はアンギオテンシンIIの生成及び
ブラジキニンの不活性化を減少し得る。ＡＣＥＩを食品
に加えると、高血圧症状を減少させるのにプラスの効果
を引き起こすだろう。現在のところ、多くのペプチドが
ＡＣＥの阻害についての効果を有することが知られてい
る。それらは異なったアミノ酸配列と長さを有する。Ａ
ＣＥ阻害活性を有するポリペプチドは食品から単離でき
る。これらの食品は、動物または植物タンパク質、たと
えば、カゼイン（丸山及び鈴木、１９８２）、コーンタ
ンパク質（三好他、１９９１）、イワシの肉（松井他、
１９９３）及びカツオ（松村他、１９９３）並びに発酵
食品、たとえば、酒及びワイン残渣（斎藤他、１９９
４）、大豆油（木下他、１９９３）、チーズ（岡本他、
１９９５）及び発酵ミルク（中村他、１９９５）等の加
水分解物を含む。
【０００３】特開平５−８７０５２号公報及び特開平２
−１５４６９３号公報はオリゴペプチドを含有する物質
を開示する。月刊「食品化学（Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌＭｏｎｔｈｌｙ）」１９９０年６月号第８０頁も、
血液中のトリグリセリドの濃度の低下を含む、脂質の代
謝に改善された効果を有する特異的なオリゴペプチドを
開示する。上記特許及び参考文献に記載されたオリゴペ
プチドを含有するこれらの物質はタンパク質加水分解物
の混合物である。しかしながら、それらは、活性成分の
混合物のアミノ酸配列を記載していない。ペプチドを含
有する上記物質の純度は比較的低く、医薬として用いる
ことができない。さらに、これらの物質が食品の中に含
まれている時、食品に含まれている他のペプチドから定
量的に検出するのが非常に困難である。これが、品質管
理にいくらかの問題を引き起こすだろう。
−１５４６９３号公報はオリゴペプチドを含有する物質
を開示する。月刊「食品化学（Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌＭｏｎｔｈｌｙ）」１９９０年６月号第８０頁も、
血液中のトリグリセリドの濃度の低下を含む、脂質の代
謝に改善された効果を有する特異的なオリゴペプチドを
開示する。上記特許及び参考文献に記載されたオリゴペ
プチドを含有するこれらの物質はタンパク質加水分解物
の混合物である。しかしながら、それらは、活性成分の
混合物のアミノ酸配列を記載していない。ペプチドを含
有する上記物質の純度は比較的低く、医薬として用いる
ことができない。さらに、これらの物質が食品の中に含
まれている時、食品に含まれている他のペプチドから定
量的に検出するのが非常に困難である。これが、品質管
理にいくらかの問題を引き起こすだろう。
【０００４】特開平６−２９８７９４号公報は、動物源
及び植物源、たとえば、魚肉、豚及び鶏のタンパク質か
らのＡＣＥＩの製造方法を開示する。この方法はタンパ
ク質ヒドロラーゼ、たとえば、サーモリシン、ペプシン
またはトリプシンを出発物質を分解するのに適切な培地
及び適当な条件で利用する。加水分解物を遠心分離、ろ
過、濃縮及び樹脂吸収にかけて、ＡＣＥ阻害活性を有す
るペプチドを得る。特開平５−３３１１９２号公報は、
サーモリシンによりカツオブシを加水分解してＡＣＥ阻
害活性を有するペプチドを生成することを開示してい
る。そのペプチドの配列は、Ｈ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｔｒ
ｐ−Ａｌａ−ＯＨである。特開平４−２６４０９８号公
報は、脂肪を含有しない鶏の肉からのＡＣＥ阻害活性を
有するペプチドの製造を開示する。そのペプチドの配列
はＧｌｎ−Ｌｙｎ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇである。米
国特許第５，８５４，０２９号明細書は、ＡＣＥ阻害活
性を示す、ジペプチド、Ｔｙｒ−Ｐｒｏの製造方法を開
示する。この方法においては、Ｔｙｒ−Ｐｒｏを含有す
るペプチド及び／またはタンパク質培地中でラクトバシ
ラス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属をインキュベー
トして、多量のＴｙｒ−Ｐｒｏを含有するインキュベー
ト溶液を得る。
及び植物源、たとえば、魚肉、豚及び鶏のタンパク質か
らのＡＣＥＩの製造方法を開示する。この方法はタンパ
ク質ヒドロラーゼ、たとえば、サーモリシン、ペプシン
またはトリプシンを出発物質を分解するのに適切な培地
及び適当な条件で利用する。加水分解物を遠心分離、ろ
過、濃縮及び樹脂吸収にかけて、ＡＣＥ阻害活性を有す
るペプチドを得る。特開平５−３３１１９２号公報は、
サーモリシンによりカツオブシを加水分解してＡＣＥ阻
害活性を有するペプチドを生成することを開示してい
る。そのペプチドの配列は、Ｈ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｔｒ
ｐ−Ａｌａ−ＯＨである。特開平４−２６４０９８号公
報は、脂肪を含有しない鶏の肉からのＡＣＥ阻害活性を
有するペプチドの製造を開示する。そのペプチドの配列
はＧｌｎ−Ｌｙｎ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ａｒｇである。米
国特許第５，８５４，０２９号明細書は、ＡＣＥ阻害活
性を示す、ジペプチド、Ｔｙｒ−Ｐｒｏの製造方法を開
示する。この方法においては、Ｔｙｒ−Ｐｒｏを含有す
るペプチド及び／またはタンパク質培地中でラクトバシ
ラス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属をインキュベー
トして、多量のＴｙｒ−Ｐｒｏを含有するインキュベー
ト溶液を得る。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】上記先行技術の中で
は、ＡＣＥ阻害活性を有するペプチドを製造するため
に、動物のタンパク質、たとえば、魚肉、鶏または豚と
は異なったヒドロラーゼ、分離及び精製方法を利用す
る。しかしながら、出発物質のコストはより高価であ
る。
は、ＡＣＥ阻害活性を有するペプチドを製造するため
に、動物のタンパク質、たとえば、魚肉、鶏または豚と
は異なったヒドロラーゼ、分離及び精製方法を利用す
る。しかしながら、出発物質のコストはより高価であ
る。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本出願人は、鶏のエキス
の製造により生産された廃棄物の加水分解及びさらなる
ヒドロラーゼを用いる廃棄物混合物の処理は、強力なＡ
ＣＥ阻害活性を有する生成物を得ることができることを
見い出した。この方法はコストが低く、鶏のエキスの副
生物の価値を改善し得る。本発明の主な目的は、ＡＣＥ
阻害活性を有する新規なペプチドを提供することであ
る。本発明の他の目的は、ＡＣＥ阻害活性を有する生成
物の製造方法を提供することである。この方法はタンパ
ク質ヒドロラーゼを有する鶏かすの、ＡＣＥ阻害活性を
有する生成物を得るための処理を含む。この生成物は健
康食品に用いることができる。
の製造により生産された廃棄物の加水分解及びさらなる
ヒドロラーゼを用いる廃棄物混合物の処理は、強力なＡ
ＣＥ阻害活性を有する生成物を得ることができることを
見い出した。この方法はコストが低く、鶏のエキスの副
生物の価値を改善し得る。本発明の主な目的は、ＡＣＥ
阻害活性を有する新規なペプチドを提供することであ
る。本発明の他の目的は、ＡＣＥ阻害活性を有する生成
物の製造方法を提供することである。この方法はタンパ
ク質ヒドロラーゼを有する鶏かすの、ＡＣＥ阻害活性を
有する生成物を得るための処理を含む。この生成物は健
康食品に用いることができる。
【０００７】ＡＣＥ阻害活性を有する本発明のペプチド
は次の配列：Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ（ＶＬＰ）、Ｉｌ
ｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ（ＩＬＰ）、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙ
ｒ（ＶＬＹ）、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ（ＶＬ
ＰＰ）及びＩｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ（ＩＬＰ
Ｐ）を有する。
は次の配列：Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ（ＶＬＰ）、Ｉｌ
ｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ（ＩＬＰ）、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙ
ｒ（ＶＬＹ）、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ（ＶＬ
ＰＰ）及びＩｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ（ＩＬＰ
Ｐ）を有する。
【０００８】これらのペプチドは天然物質から単離及び
精製できるかまたは公知の化学合成方法で製造すること
ができる。アミノ酸配列によると、それらは、そのペプ
チドのアミノ酸配列に対応するヌクレオチド配列を適切
なベクターに入れて、クローン化させ、適切な宿主細胞
中で発現させることによっても製造することができる。
精製できるかまたは公知の化学合成方法で製造すること
ができる。アミノ酸配列によると、それらは、そのペプ
チドのアミノ酸配列に対応するヌクレオチド配列を適切
なベクターに入れて、クローン化させ、適切な宿主細胞
中で発現させることによっても製造することができる。
【０００９】本発明によると、鶏エキスを製造する過程
から生産された廃棄物が出発物質として用いられる。そ
れらは不完全に加水分解された鶏肉及び鶏骨かすであ
る。前記物質に適当な量の水とタンパク質ヒドロラーゼ
を加えて、適当な反応条件で加水分解する。次いで、加
水分解物とかすとを分離し、液体を収集する。得られた
液体をさらなるろ過及び濃縮後、乾燥させて、粗生成物
を得る。生成物を精製してペプチドを得る。そのペプチ
ドのアミノ酸配列を配列決定機で決定する。そのペプチ
ドを医薬、健康食品として用いることができるか、また
は食品に添加することができる。
から生産された廃棄物が出発物質として用いられる。そ
れらは不完全に加水分解された鶏肉及び鶏骨かすであ
る。前記物質に適当な量の水とタンパク質ヒドロラーゼ
を加えて、適当な反応条件で加水分解する。次いで、加
水分解物とかすとを分離し、液体を収集する。得られた
液体をさらなるろ過及び濃縮後、乾燥させて、粗生成物
を得る。生成物を精製してペプチドを得る。そのペプチ
ドのアミノ酸配列を配列決定機で決定する。そのペプチ
ドを医薬、健康食品として用いることができるか、また
は食品に添加することができる。
【００１０】本発明は、さらにＡＣＥ阻害活性を有する
生成物の製造方法を開示し、それは次の工程、（ａ）鶏
かすの溶液に反応のためにタンパク質ヒドロラーゼを加
える、（ｂ）工程（ａ）の反応後、鶏かすと液体を分離
させ、分離した液体を収集する、及び（ｃ）工程（ｂ）
から得られた液体を乾燥させて生成物を得る、を含む。
生成物の製造方法を開示し、それは次の工程、（ａ）鶏
かすの溶液に反応のためにタンパク質ヒドロラーゼを加
える、（ｂ）工程（ａ）の反応後、鶏かすと液体を分離
させ、分離した液体を収集する、及び（ｃ）工程（ｂ）
から得られた液体を乾燥させて生成物を得る、を含む。
【００１１】本発明によると、この方法は出発物質とし
て鶏のエキスを製造する方法から生産された廃棄物を利
用する。その物質は不完全に加水分解された鶏肉及び鶏
の骨かすである。これらの物質は鶏のエキスを製造する
工場から得ることができる。その物質に適当な量の水と
タンパク質ヒドロラーゼを加える。混合物を適当な反応
条件下で反応させる。加水分解物とかすとを分離し、液
体を収集する。得られた液体を、生成物を得るために、
さらなるろ過及び濃縮後に乾燥させる。生成物をＡＣＥ
阻害活性を示すために検出し、生成物は健康食品に広く
用いることができるか、または食品添加物として用いる
ことができる。加水分解生成物をさらに精製すると、Ａ
ＣＥ阻害活性を有するペプチドが得られる。このペプチ
ドは医薬として用いることができる。
て鶏のエキスを製造する方法から生産された廃棄物を利
用する。その物質は不完全に加水分解された鶏肉及び鶏
の骨かすである。これらの物質は鶏のエキスを製造する
工場から得ることができる。その物質に適当な量の水と
タンパク質ヒドロラーゼを加える。混合物を適当な反応
条件下で反応させる。加水分解物とかすとを分離し、液
体を収集する。得られた液体を、生成物を得るために、
さらなるろ過及び濃縮後に乾燥させる。生成物をＡＣＥ
阻害活性を示すために検出し、生成物は健康食品に広く
用いることができるか、または食品添加物として用いる
ことができる。加水分解生成物をさらに精製すると、Ａ
ＣＥ阻害活性を有するペプチドが得られる。このペプチ
ドは医薬として用いることができる。
【００１２】工程（ａ）のタンパク質ヒドロラーゼは、
タンパク質加水分解活性を有するもの、たとえば、サー
モリシン、ペプシン、トリプシン、ブロメレイン（Ｂｒ
ｏｍｅｌａｉｎ）、アルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓ
ｅ）、フレーバ−ザイム（Ｆｌａｖｏｒｚｙｍｅ）また
はエスペラーゼ、ならいかなるものでもよく、好ましく
はアルカラーゼである。タンパク質ヒドロラーゼのため
の加水分解反応の温度及び時間は、選択したヒドロラー
ゼの種に依存する。たとえば、アルカラーゼを鶏かすの
加水分解を進めるのに用いるなら、好ましい温度は約５
０〜７０℃で、好ましい反応時間は約１〜５時間であ
る。
タンパク質加水分解活性を有するもの、たとえば、サー
モリシン、ペプシン、トリプシン、ブロメレイン（Ｂｒ
ｏｍｅｌａｉｎ）、アルカラーゼ（Ａｌｃａｌａｓ
ｅ）、フレーバ−ザイム（Ｆｌａｖｏｒｚｙｍｅ）また
はエスペラーゼ、ならいかなるものでもよく、好ましく
はアルカラーゼである。タンパク質ヒドロラーゼのため
の加水分解反応の温度及び時間は、選択したヒドロラー
ゼの種に依存する。たとえば、アルカラーゼを鶏かすの
加水分解を進めるのに用いるなら、好ましい温度は約５
０〜７０℃で、好ましい反応時間は約１〜５時間であ
る。
【００１３】加水分解後の加水分解物は、次いで液体と
かすに分離する。一般に、分離は、当業者に既知の分離
のいかなる操作工程によっても実施することができる。
加水分解物を乾燥工程を容易にするために、さらに濃縮
して水を除去することができる。たとえば、かすを含有
する加水分解物をろ過袋に入れ、ろ液を収集するために
遠心分離することができる。ろ液を珪藻土と混合し、加
圧ろ過にかけ、そして真空濃縮することができる。
かすに分離する。一般に、分離は、当業者に既知の分離
のいかなる操作工程によっても実施することができる。
加水分解物を乾燥工程を容易にするために、さらに濃縮
して水を除去することができる。たとえば、かすを含有
する加水分解物をろ過袋に入れ、ろ液を収集するために
遠心分離することができる。ろ液を珪藻土と混合し、加
圧ろ過にかけ、そして真空濃縮することができる。
【００１４】濃縮された加水分解物をさらに限外ろ過に
かけて、高分子量の分子を除去することができる。この
工程は、１００〜２０，０００の分子量カットオフを有
する膜、好ましくは、１０，０００の分子量カットオフ
を有する膜を用いて膜ろ過を進行させる。本発明に関係
する乾燥工程は、当業者に既知のあらゆる方法、たとえ
ば、凍結乾燥、噴霧乾燥、ドラム乾燥機乾燥及び流動床
乾燥、特に噴霧乾燥により達成できる。
かけて、高分子量の分子を除去することができる。この
工程は、１００〜２０，０００の分子量カットオフを有
する膜、好ましくは、１０，０００の分子量カットオフ
を有する膜を用いて膜ろ過を進行させる。本発明に関係
する乾燥工程は、当業者に既知のあらゆる方法、たとえ
ば、凍結乾燥、噴霧乾燥、ドラム乾燥機乾燥及び流動床
乾燥、特に噴霧乾燥により達成できる。
【００１５】乾燥後の生成物は健康食品に適用できる
か、または食品添加剤として用いることができる。それ
らをさらに精製して、医薬として用いることができるペ
プチドを得ることができる。精製工程は、当業者に既知
のあらゆる方法、たとえば、ゲルろ過、イオン交換クロ
マトグラフィー及びアフィニティークロマトグラフィー
によって達成できる。本発明の１つの好ましい態様で
は、得られた生成物をさらに精製して、ＡＣＥ阻害活性
を有するペプチドを得る。アミノ酸配列は、Ｖａｌ−Ｌ
ｅｕ−Ｐｒｏ（ＶＬＰ）、Ｉｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ（Ｉ
ＬＰ）、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（ＶＬＹ）、Ｖａｌ−
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ（ＶＬＰＰ）及びＩｌｕ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ（ＩＬＰＰ）と決定される。
か、または食品添加剤として用いることができる。それ
らをさらに精製して、医薬として用いることができるペ
プチドを得ることができる。精製工程は、当業者に既知
のあらゆる方法、たとえば、ゲルろ過、イオン交換クロ
マトグラフィー及びアフィニティークロマトグラフィー
によって達成できる。本発明の１つの好ましい態様で
は、得られた生成物をさらに精製して、ＡＣＥ阻害活性
を有するペプチドを得る。アミノ酸配列は、Ｖａｌ−Ｌ
ｅｕ−Ｐｒｏ（ＶＬＰ）、Ｉｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ（Ｉ
ＬＰ）、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（ＶＬＹ）、Ｖａｌ−
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ（ＶＬＰＰ）及びＩｌｕ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ（ＩＬＰＰ）と決定される。
【００１６】ＡＣＥ阻害活性を有する本発明のペプチド
は既知の化学合成により製造することができる。たとえ
ば、アジド法、酸クロライド法、酸無水物法、混合酸無
水物法、ＤＣＣ法、活性エステル法、カーボイミダゾー
ル法、酸化−還元法、ＤＣＣ−活性法〔たとえば、Ｓｃ
ｈｒｏｄｅｒ及びＬｕｈｋｅ「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄ
ｅ」ｖｏｌ．１（１９９６）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓ、米国，ニューヨーク州、または泉谷他「Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」丸善株式会社（１９７
５）参照〕。これらのペプチド合成法は、固相合成また
は液相合成のいずれかで実施することができる。側鎖官
能基を有するアミノ酸、たとえば、チロシン及びトレオ
ニン、は、好ましくは、それらの側鎖官能基において、
既知の保護基、たとえば、ベンジルオキシカルボニル
基、ｔ−ブトキシカルボニル基またはベンジル基等で保
護される。保護基は既知の任意の方法で除去できる。
は既知の化学合成により製造することができる。たとえ
ば、アジド法、酸クロライド法、酸無水物法、混合酸無
水物法、ＤＣＣ法、活性エステル法、カーボイミダゾー
ル法、酸化−還元法、ＤＣＣ−活性法〔たとえば、Ｓｃ
ｈｒｏｄｅｒ及びＬｕｈｋｅ「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄ
ｅ」ｖｏｌ．１（１９９６）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓ、米国，ニューヨーク州、または泉谷他「Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」丸善株式会社（１９７
５）参照〕。これらのペプチド合成法は、固相合成また
は液相合成のいずれかで実施することができる。側鎖官
能基を有するアミノ酸、たとえば、チロシン及びトレオ
ニン、は、好ましくは、それらの側鎖官能基において、
既知の保護基、たとえば、ベンジルオキシカルボニル
基、ｔ−ブトキシカルボニル基またはベンジル基等で保
護される。保護基は既知の任意の方法で除去できる。
【００１７】次の例は、本発明の技術内容を具体化する
ために本発明の可能性の詳細な説明のためであって本発
明の範囲を限定するためではない。従来技術の教示に基
づいた当業者の本発明に対する任意の変更及び修正は本
発明の範囲内である。
ために本発明の可能性の詳細な説明のためであって本発
明の範囲を限定するためではない。従来技術の教示に基
づいた当業者の本発明に対する任意の変更及び修正は本
発明の範囲内である。
【００１８】
【実施例】例１−加水分解鶏かすからのＡＣＥ阻害活性
を有するペプチドの製造 ５４kgの鶏の骨、４３．２kgの水、１６２ｇのニュート
ラーゼ、２７０ｇのプロタメックス（Ｐｒｏｔａｍｅ
ｘ）、１６２ｇのポリリン酸塩及び３２ｇのトコフェロ
ールの混合。混合物を６２℃で２時間加水分解する。
７，４８０ｇの骨のかすを加水分解後に得る。加水分解
物を遠心分離して１１，０６０ｇのろ液を得る。１１，
０６０ｇのろ液を４倍の容積の水（４４，０００ｇ）で
希釈し、１１０ｇのアルカラーゼを用いて６５℃で２．
５時間再加水分解する。加水分解物を遠心分離して、ろ
過かす６，６００ｇを得る。ろ液に１kgの珪藻土を加
え、加圧ろ過で処理し、ブリックス２．０を有する再加
水分解物を得る。噴霧乾燥を容易にするために、再加水
分解物を濃縮し、分子量カットオフ１０，０００の膜を
用いて限外ろ過する。本例は、混合物をブリックス１
１．８まで濃縮し、次いで噴霧乾燥を進行させる。噴霧
乾燥のための加水分解物は４，８５０ｇである。噴霧乾
燥後、粉末３９１．４ｇを得る。
を有するペプチドの製造 ５４kgの鶏の骨、４３．２kgの水、１６２ｇのニュート
ラーゼ、２７０ｇのプロタメックス（Ｐｒｏｔａｍｅ
ｘ）、１６２ｇのポリリン酸塩及び３２ｇのトコフェロ
ールの混合。混合物を６２℃で２時間加水分解する。
７，４８０ｇの骨のかすを加水分解後に得る。加水分解
物を遠心分離して１１，０６０ｇのろ液を得る。１１，
０６０ｇのろ液を４倍の容積の水（４４，０００ｇ）で
希釈し、１１０ｇのアルカラーゼを用いて６５℃で２．
５時間再加水分解する。加水分解物を遠心分離して、ろ
過かす６，６００ｇを得る。ろ液に１kgの珪藻土を加
え、加圧ろ過で処理し、ブリックス２．０を有する再加
水分解物を得る。噴霧乾燥を容易にするために、再加水
分解物を濃縮し、分子量カットオフ１０，０００の膜を
用いて限外ろ過する。本例は、混合物をブリックス１
１．８まで濃縮し、次いで噴霧乾燥を進行させる。噴霧
乾燥のための加水分解物は４，８５０ｇである。噴霧乾
燥後、粉末３９１．４ｇを得る。
【００１９】例２−ＡＣＥ阻害活性の決定方法 １．鶏の骨の加水分解物の再加水分解 例１から得られた鶏ろ液を２倍の容積の水で希釈し、混
合し、５つの群に分割する。加水分解物の質量に基づい
て、１％のブロメレイン（Ｂｒｏｍｅｌａｉｎ）、アル
カラーゼ、フレーバーザイム、エスペラーゼ及び水を各
群に加える。これらの混合物を６０℃で２．５時間反応
させ、次いで、９０℃まで１０分間加熱して、酵素を不
活化する。加水分解物を１０，０００ｇで２０分間遠心
分離する。上方の溶液をＡＣＥ阻害活性の決定のために
収集する。結果を表１に示す。ＩＣ50値はＡＣＥ活性の
５０％阻害に対して必要なＡＣＥＩの濃度である。
合し、５つの群に分割する。加水分解物の質量に基づい
て、１％のブロメレイン（Ｂｒｏｍｅｌａｉｎ）、アル
カラーゼ、フレーバーザイム、エスペラーゼ及び水を各
群に加える。これらの混合物を６０℃で２．５時間反応
させ、次いで、９０℃まで１０分間加熱して、酵素を不
活化する。加水分解物を１０，０００ｇで２０分間遠心
分離する。上方の溶液をＡＣＥ阻害活性の決定のために
収集する。結果を表１に示す。ＩＣ50値はＡＣＥ活性の
５０％阻害に対して必要なＡＣＥＩの濃度である。
【００２０】２．ＡＣＥＩ活性の決定 （ａ）ＨＨＬ法 この方法はＣｕｓｈｍａｎ及びＣｈｅｕｎｇ「Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．」２０、１６３７（１９
７１）の方法を修正したものである。８０μｌの加水分
解物をＨＨＬインキュベート溶液に加える。インキュベ
ート溶液は５mMのＨＨＬ（ヒップリル−ヒスチジル−ロ
イシン）及び０．１Ｍのホウ酸ナトリウム緩衝液中の
０．３Ｍの塩化ナトリウムを含有する。この溶液を３７
℃（予備加熱）で５分間インキュベートする。２０μｌ
の０．１Ｕ／ml ＡＣＥ溶液を前記溶液に加え、３７℃
で３０分間インキュベートする。溶液に１Ｎの塩化水素
酸を加える。次いでこの溶液を１．７mlの酢酸エチルで
抽出する。次いで、有機部分を真空乾燥にかける。乾燥
粉末を１mlの水に再溶解する。吸収値をＵＶ２２８mmで
測定する。
ｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．」２０、１６３７（１９
７１）の方法を修正したものである。８０μｌの加水分
解物をＨＨＬインキュベート溶液に加える。インキュベ
ート溶液は５mMのＨＨＬ（ヒップリル−ヒスチジル−ロ
イシン）及び０．１Ｍのホウ酸ナトリウム緩衝液中の
０．３Ｍの塩化ナトリウムを含有する。この溶液を３７
℃（予備加熱）で５分間インキュベートする。２０μｌ
の０．１Ｕ／ml ＡＣＥ溶液を前記溶液に加え、３７℃
で３０分間インキュベートする。溶液に１Ｎの塩化水素
酸を加える。次いでこの溶液を１．７mlの酢酸エチルで
抽出する。次いで、有機部分を真空乾燥にかける。乾燥
粉末を１mlの水に再溶解する。吸収値をＵＶ２２８mmで
測定する。
【００２１】鶏の再加水分解物のタンパク質濃度は当業
界で既知であるミクロ−ビウレット法により決定され
る。再加水分解物溶液は別々に５０，１００，２００，
３００及び４００容積の上記５つの濃度まで希釈され
る。回帰曲線を対数関数としてプロットし、ＩＣ50値を
対数関数から決定した。
界で既知であるミクロ−ビウレット法により決定され
る。再加水分解物溶液は別々に５０，１００，２００，
３００及び４００容積の上記５つの濃度まで希釈され
る。回帰曲線を対数関数としてプロットし、ＩＣ50値を
対数関数から決定した。
【００２２】ｂ）シグマキット法 この方法はシグマキットのマニュアルを修正する。０．
０５mlの脱イオン水（対照のための）または０．０５ml
の試料（試験のため）を１mlの反応溶液（ＡＣＥ基質）
に加える。０．０５mlの検量溶液（豚ＡＣＥ）を前記溶
液に加える。溶液を３７℃で５分間置く。３４０nmでの
吸収値を決定する（この値を際立つ（ｓｔａｒｉｎｇ）
Ａ値という）。この測定後、この混合物を水浴に置き直
す。５分後、吸収値を再び測定する（この値を最終Ａ値
という）。得られたこれらの値を次のように計算する。
０５mlの脱イオン水（対照のための）または０．０５ml
の試料（試験のため）を１mlの反応溶液（ＡＣＥ基質）
に加える。０．０５mlの検量溶液（豚ＡＣＥ）を前記溶
液に加える。溶液を３７℃で５分間置く。３４０nmでの
吸収値を決定する（この値を際立つ（ｓｔａｒｉｎｇ）
Ａ値という）。この測定後、この混合物を水浴に置き直
す。５分後、吸収値を再び測定する（この値を最終Ａ値
という）。得られたこれらの値を次のように計算する。
【００２３】
【数１】
【００２４】
【表１】
【００２５】表１に示された結果から、ＡＣＥ阻害活性
のＩＣ50値をＨＨＬ法で測定するかあるいはシグマキッ
ト法で測定するかのいずれにせよ、再加水分解物の活性
のオーダーは同一であることが分かる。アルカラーゼに
より製造された再加水分解物生成物は最も顕著な活性を
有する。
のＩＣ50値をＨＨＬ法で測定するかあるいはシグマキッ
ト法で測定するかのいずれにせよ、再加水分解物の活性
のオーダーは同一であることが分かる。アルカラーゼに
より製造された再加水分解物生成物は最も顕著な活性を
有する。
【００２６】例３−限外ろ過の方法 さらに、再加水分解物を精製し、噴霧乾燥による生成物
の製造を容易にするために、限外ろ過を実施して生成物
を濃縮する。選択された限外ろ過膜は、それぞれ、１
０，０００及び５００のカットオフ分子量を有するもの
である。再加水分解物を１０，０００及び５００のカッ
トオフ分子量を有する膜を用いて順にろ過する。透析物
のＡＣＥ阻害活性を上記方法で決定する。結果を表２に
示す。
の製造を容易にするために、限外ろ過を実施して生成物
を濃縮する。選択された限外ろ過膜は、それぞれ、１
０，０００及び５００のカットオフ分子量を有するもの
である。再加水分解物を１０，０００及び５００のカッ
トオフ分子量を有する膜を用いて順にろ過する。透析物
のＡＣＥ阻害活性を上記方法で決定する。結果を表２に
示す。
【００２７】
【表２】
【００２８】上表から、１０，０００のカットオフ分子
量を有する膜は高分子量を有する物質（すなわち、短い
保留時間のもの）を除去できる。５００の分子量カット
オフを有する膜を用いる限外ろ過の前後の物質の有意な
差を観察する。より低分子量でより純粋な物質が得られ
る。表２に示されたＩＣ50値との比較で、１０，０００
のカットオフ分子量を有する膜を通過する物質はより顕
著なＡＣＥ阻害活性を有する。５００のカットオフ分子
量を有する膜については、限外ろ過の前後の物質の活性
は有意な差はない。したがって、１０，０００の分子量
カットオフを有する膜を用いる再加水分解物の処理は、
高分子量の物質の部分及び再加水分解物の沈澱を除去
し、かつ、再加水分解物のＩＣ50値を効果的に増加し得
る。
量を有する膜は高分子量を有する物質（すなわち、短い
保留時間のもの）を除去できる。５００の分子量カット
オフを有する膜を用いる限外ろ過の前後の物質の有意な
差を観察する。より低分子量でより純粋な物質が得られ
る。表２に示されたＩＣ50値との比較で、１０，０００
のカットオフ分子量を有する膜を通過する物質はより顕
著なＡＣＥ阻害活性を有する。５００のカットオフ分子
量を有する膜については、限外ろ過の前後の物質の活性
は有意な差はない。したがって、１０，０００の分子量
カットオフを有する膜を用いる再加水分解物の処理は、
高分子量の物質の部分及び再加水分解物の沈澱を除去
し、かつ、再加水分解物のＩＣ50値を効果的に増加し得
る。
【００２９】例４−ペプチドの精製 １ｇの前に噴霧乾燥した粉末を５０mlの水に溶解する。
溶液を０．４５μの遠心管でろ過し、精製し、次の工程
により特徴づける。 １．サイズ排除カラムを最初の分離段階で用いる。条件
は次のとおりである。 システム：ＡＫＴＡ精製機 分離カラム：Ｓｕｐｅｒｄｅｘ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＨＲ
１０３０ 移動相：０．５μｌ 溶離液：５％のアルコール水溶液 流量：０．５ml／分 検出器：２１４、２５４及び２８０nmでの検出 結果を図１に示す。
溶液を０．４５μの遠心管でろ過し、精製し、次の工程
により特徴づける。 １．サイズ排除カラムを最初の分離段階で用いる。条件
は次のとおりである。 システム：ＡＫＴＡ精製機 分離カラム：Ｓｕｐｅｒｄｅｘ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＨＲ
１０３０ 移動相：０．５μｌ 溶離液：５％のアルコール水溶液 流量：０．５ml／分 検出器：２１４、２５４及び２８０nmでの検出 結果を図１に示す。
【００３０】上記の画分を、繰り返し、１０回収集す
る。収集した溶液をＳｐｅｅｄ Ｖａｃを用いて凍結乾
燥する。画分２，３及び４の総乾燥質量は、それぞれ、
０．０５４、０．１４３及び０．０１９mgである。３つ
の画分を水に２回再溶解し、２つの濃度、１mg／ml及び
１０mg／mlに配合する。１mg／ml溶液をＡＣＥ阻害活性
の決定のために用いる。１０mg／ml溶液を精製のために
用いる。画分２，３及び４（１mg／ml）をシグマキット
により、０％、４６．６９％及び２７．７１％のＡＣＥ
阻害活性を有すると決定する。画分３（この後、Ａ３と
いう）を次の精製に進める。
る。収集した溶液をＳｐｅｅｄ Ｖａｃを用いて凍結乾
燥する。画分２，３及び４の総乾燥質量は、それぞれ、
０．０５４、０．１４３及び０．０１９mgである。３つ
の画分を水に２回再溶解し、２つの濃度、１mg／ml及び
１０mg／mlに配合する。１mg／ml溶液をＡＣＥ阻害活性
の決定のために用いる。１０mg／ml溶液を精製のために
用いる。画分２，３及び４（１mg／ml）をシグマキット
により、０％、４６．６９％及び２７．７１％のＡＣＥ
阻害活性を有すると決定する。画分３（この後、Ａ３と
いう）を次の精製に進める。
【００３１】２．ＲＰ１８カラムを第２段階で用いる。
条件は次のとおりである。 システム：ＡＫＴＡ精製機 分離カラム：ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ ＰＲ−１８（７μ
ｍ）予備装てんカラムＲＴ２５０−２５ 移動相：５０００μｌ 溶離液Ａ１：０．１％のＴＦＡを含有する水 溶離液Ｂ１：０．１％のＴＦＡを含有するメタノール グラジエント：０．５容積のカラム中で用いる０％のＢ
１ ３容積のカラム中で用いる０〜１００％のＢ１ １．２容積のカラム中で用いる１００％のＢ１ 流量：０．５ml／分 検出器：２１４，２５４及び２８０nmを用いる検出 結果を図２に示す。
条件は次のとおりである。 システム：ＡＫＴＡ精製機 分離カラム：ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ ＰＲ−１８（７μ
ｍ）予備装てんカラムＲＴ２５０−２５ 移動相：５０００μｌ 溶離液Ａ１：０．１％のＴＦＡを含有する水 溶離液Ｂ１：０．１％のＴＦＡを含有するメタノール グラジエント：０．５容積のカラム中で用いる０％のＢ
１ ３容積のカラム中で用いる０〜１００％のＢ１ １．２容積のカラム中で用いる１００％のＢ１ 流量：０．５ml／分 検出器：２１４，２５４及び２８０nmを用いる検出 結果を図２に示す。
【００３２】図２の結果を５つの画分に分離できる。５
つの画分を３回収集し、ＳｐｅｅｄＶａｃで乾燥する。
乾燥固体物質の質量は、それぞれ、０．００８５、０．
０２２２、０．０３０３、０．０４３２及び０．０２１
４である。前の操作と同様に、５つの画分を１mg／mlの
溶液に配合し、ＡＣＥ阻害活性の決定に用いる。１０mg
／mlの溶液を精製に用いる。５つの画分のＡＣＥの阻害
をシグマキットにより決定する。結果は次のとおりであ
る：
つの画分を３回収集し、ＳｐｅｅｄＶａｃで乾燥する。
乾燥固体物質の質量は、それぞれ、０．００８５、０．
０２２２、０．０３０３、０．０４３２及び０．０２１
４である。前の操作と同様に、５つの画分を１mg／mlの
溶液に配合し、ＡＣＥ阻害活性の決定に用いる。１０mg
／mlの溶液を精製に用いる。５つの画分のＡＣＥの阻害
をシグマキットにより決定する。結果は次のとおりであ
る：
【００３３】
【表３】
【００３４】表３から、画分Ａ３−Ｂ４は最も顕著なＡ
ＣＥ阻害活性を有することが理解できる。したがって、
画分Ａ３−Ａ４をさらに精製する。
ＣＥ阻害活性を有することが理解できる。したがって、
画分Ａ３−Ａ４をさらに精製する。
【００３５】３．分析クラスのＲＰ１８カラムを第３段
階で用いる。条件は次のとおりである。 システム：ＡＫＴＡ精製機 分離カラム：Ｓｅｐｈａｓｉｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＲＰ
−１８（５μｌ）ＳＴ４，６／２５０ 移動相：１００μｌ 溶離溶液Ａ１：０．１％のＴＦＡを含有する水 溶離溶液Ｂ１：０．１％のＴＦＡを含有するメタノール グラジエント：２容積のカラム中で用いる０％のＢ１ １０容積のカラム中で用いる０〜１００％のＢ１ ３容積のカラム中で用いる１００％のＢ１ 流量：０．６ml／分 検出器：２１４、２５４及び２８０nmを用いる検出 結果を図３に示す。
階で用いる。条件は次のとおりである。 システム：ＡＫＴＡ精製機 分離カラム：Ｓｅｐｈａｓｉｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＲＰ
−１８（５μｌ）ＳＴ４，６／２５０ 移動相：１００μｌ 溶離溶液Ａ１：０．１％のＴＦＡを含有する水 溶離溶液Ｂ１：０．１％のＴＦＡを含有するメタノール グラジエント：２容積のカラム中で用いる０％のＢ１ １０容積のカラム中で用いる０〜１００％のＢ１ ３容積のカラム中で用いる１００％のＢ１ 流量：０．６ml／分 検出器：２１４、２５４及び２８０nmを用いる検出 結果を図３に示す。
【００３６】図３の結果を８つの画分に分離できる。８
つの画分を１５回収集し、Ｓｐｅｅｄ Ｖａｃを用いて
真空乾燥する。８つの画分をＡＣＥ阻害活性の決定のた
めに１mg／mlの溶液に配合する。１０mg／mlの溶液を精
製に用いる。８つの画分のＡＣＥ阻害は次のとおりであ
る。
つの画分を１５回収集し、Ｓｐｅｅｄ Ｖａｃを用いて
真空乾燥する。８つの画分をＡＣＥ阻害活性の決定のた
めに１mg／mlの溶液に配合する。１０mg／mlの溶液を精
製に用いる。８つの画分のＡＣＥ阻害は次のとおりであ
る。
【００３７】
【表４】
【００３８】表４は画分Ａ３−Ｂ４−Ｃ６が最も顕著な
ＡＣＥ阻害活性を有することを表わしている。したがっ
て、画分Ａ３−Ｂ４−Ｃ６をさらに精製する。
ＡＣＥ阻害活性を有することを表わしている。したがっ
て、画分Ａ３−Ｂ４−Ｃ６をさらに精製する。
【００３９】４．分析クラスのＣ−１８カラムを第４段
階に用いる。条件は次のとおりである。 システム：ＡＫＴＡ精製機 分離カラム：Ｓｅｐｈａｓｉｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＲＰ
−１８（５μｌ）ＳＴ４．６／２５０ 移動相：１００μｌ 溶離液Ａ１：０．１％のＴＦＡを含有する水 溶離液Ｂ１：０．１％のＴＦＡを含有するエチルニトリ
ル グラジエント：１容積のカラム中で用いる１０％のＢ１ ５容積のカラム中で用いる１０〜３０％のＢ１ ４容積のカラム中で用いる３０〜６０％のＢ１ ２容積のカラム中で用いる６０〜１００％のＢ１ １容積のカラム中で用いる１００％のＢ１ 流量：１ml／分 検出器：２１４、２５４及び２８０nmを用いる検出 結果を図３に示す。
階に用いる。条件は次のとおりである。 システム：ＡＫＴＡ精製機 分離カラム：Ｓｅｐｈａｓｉｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＲＰ
−１８（５μｌ）ＳＴ４．６／２５０ 移動相：１００μｌ 溶離液Ａ１：０．１％のＴＦＡを含有する水 溶離液Ｂ１：０．１％のＴＦＡを含有するエチルニトリ
ル グラジエント：１容積のカラム中で用いる１０％のＢ１ ５容積のカラム中で用いる１０〜３０％のＢ１ ４容積のカラム中で用いる３０〜６０％のＢ１ ２容積のカラム中で用いる６０〜１００％のＢ１ １容積のカラム中で用いる１００％のＢ１ 流量：１ml／分 検出器：２１４、２５４及び２８０nmを用いる検出 結果を図３に示す。
【００４０】図４における５つのより明らかなピークを
Ａ３−Ｂ４−Ｃ６−Ｄ１〜Ｄ５という。それらの配列を
配列決定機で決定する。５つの短鎖ペプチド、Ｖａｌ−
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ（ＶＬＰ）、Ｉｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ
（ＩＬＰ）、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（ＶＬＹ）、Ｖａ
ｌ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ（ＶＬＰＰ）及びＩｌｕ−
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏが得られる。それらのＡＣＥ阻
害活性（ＩＣ50）を決定する。結果を表５に示す。
Ａ３−Ｂ４−Ｃ６−Ｄ１〜Ｄ５という。それらの配列を
配列決定機で決定する。５つの短鎖ペプチド、Ｖａｌ−
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ（ＶＬＰ）、Ｉｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ
（ＩＬＰ）、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（ＶＬＹ）、Ｖａ
ｌ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ（ＶＬＰＰ）及びＩｌｕ−
Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏが得られる。それらのＡＣＥ阻
害活性（ＩＣ50）を決定する。結果を表５に示す。
【００４１】
【表５】
【００４２】例５−動物試験 ７週令の２０匹の雄のＳＨＲ／Ｎ（自然の高血圧ラッ
ト：岡本−青木ＳＨ／Ｎ）ラットを購入した。ラットを
ステンレス製のケージの中で粉末餌で飼育した。８週令
のラットを１グループ６〜７匹のラット（体重約１５７
ｇ）の３つのグループにランダムに分割した。３つのグ
ループを通常の餌（対照）、１％のＡＣＥＩ及び３％の
ＡＣＥＩで飼育した。これらのラットは食物と水に自由
にアクセスできた。ケージを温度２４±１℃、相対湿度
５０〜７０％に保った。試験の期間は１７週である。試
験の期間中、体重及び血圧を１〜２週毎に記録した。
ト：岡本−青木ＳＨ／Ｎ）ラットを購入した。ラットを
ステンレス製のケージの中で粉末餌で飼育した。８週令
のラットを１グループ６〜７匹のラット（体重約１５７
ｇ）の３つのグループにランダムに分割した。３つのグ
ループを通常の餌（対照）、１％のＡＣＥＩ及び３％の
ＡＣＥＩで飼育した。これらのラットは食物と水に自由
にアクセスできた。ケージを温度２４±１℃、相対湿度
５０〜７０％に保った。試験の期間は１７週である。試
験の期間中、体重及び血圧を１〜２週毎に記録した。
【００４３】ラットの収縮期の血圧及び心拍数をプログ
ラムされた電気フィゴマノメーター（ｅｌｅｃｔｒｏｐ
ｈｙｇｏｍａｎｏｍｅｔｅｒ，ＰＢ９８Ａ，Ｓｏｒｔｒ
ｏｎ）により測定した。結果を図５及び６に示す。図５
はＡＣＥＩを含有する餌で飼育することによる自然高血
圧ラットの成長を示す。３グループのラットの体重は時
間の増加とともに増加する。３グループの中に有意の差
はない。餌の量は有意な差がない（対照のための餌の消
化量は１％ＡＣＥＩ及び３％ＡＣＥＩグループは、それ
ぞれ、２０．１±１．５、２０．３±１．７、１９．６
±１．３ｇである）。結果はＡＣＥＩ粉末の添加は食欲
及び成長のいずれにも影響しないことを示している。
ラムされた電気フィゴマノメーター（ｅｌｅｃｔｒｏｐ
ｈｙｇｏｍａｎｏｍｅｔｅｒ，ＰＢ９８Ａ，Ｓｏｒｔｒ
ｏｎ）により測定した。結果を図５及び６に示す。図５
はＡＣＥＩを含有する餌で飼育することによる自然高血
圧ラットの成長を示す。３グループのラットの体重は時
間の増加とともに増加する。３グループの中に有意の差
はない。餌の量は有意な差がない（対照のための餌の消
化量は１％ＡＣＥＩ及び３％ＡＣＥＩグループは、それ
ぞれ、２０．１±１．５、２０．３±１．７、１９．６
±１．３ｇである）。結果はＡＣＥＩ粉末の添加は食欲
及び成長のいずれにも影響しないことを示している。
【００４４】図６は、ＡＣＥＩを含有する餌で飼育する
ことによる自然高血圧ラットの血圧の変化を示す。全体
として、自然発生高血圧ラットの血圧は年とともに次第
に増加する。ラットをＡＣＥＩで飼育しないなら、血圧
は約２００mmHgに増加するとき、安定値に維持し得る。
８週間、ＡＣＥＩで飼育したラット（１６週令）の血圧
は、わずかに制御されるが、対照の血圧と異ならない。
１５週後、ＡＣＥＩで飼育されたラットの血圧は対照の
血圧より有意に低い（Ｐ＜０．０５）。１％及び３％の
ＡＣＥＩで飼育されたラットの血圧は、それぞれ、１４
及び２５mmHg低下する。この傾向はラットが２４週令に
なるまで続く。これは、長期間の再加水分解物の消化
は、全く、血圧の低下に生理学的な効能を示すことを示
している。投与を増加すればするほど、血圧の低下に有
意な効能を示す。ＡＣＥＩでの１週間の飼育の終りに、
血圧の低下効能は、さらにある期間なお続くかもしれな
い。
ことによる自然高血圧ラットの血圧の変化を示す。全体
として、自然発生高血圧ラットの血圧は年とともに次第
に増加する。ラットをＡＣＥＩで飼育しないなら、血圧
は約２００mmHgに増加するとき、安定値に維持し得る。
８週間、ＡＣＥＩで飼育したラット（１６週令）の血圧
は、わずかに制御されるが、対照の血圧と異ならない。
１５週後、ＡＣＥＩで飼育されたラットの血圧は対照の
血圧より有意に低い（Ｐ＜０．０５）。１％及び３％の
ＡＣＥＩで飼育されたラットの血圧は、それぞれ、１４
及び２５mmHg低下する。この傾向はラットが２４週令に
なるまで続く。これは、長期間の再加水分解物の消化
は、全く、血圧の低下に生理学的な効能を示すことを示
している。投与を増加すればするほど、血圧の低下に有
意な効能を示す。ＡＣＥＩでの１週間の飼育の終りに、
血圧の低下効能は、さらにある期間なお続くかもしれな
い。
【図１】サイズ排除カラムを用いることによる本発明に
より製造された第１段階のペプチドの単離の結果を示
す。
より製造された第１段階のペプチドの単離の結果を示
す。
【図２】ＲＰ１８カラムを用いることによる本発明によ
り製造された第２段階のペプチドの精製の結果を示す。
り製造された第２段階のペプチドの精製の結果を示す。
【図３】分析クラスのＣ−１８カラムを用いることによ
る本発明により製造された第３段階のペプチドの精製の
結果を示す。
る本発明により製造された第３段階のペプチドの精製の
結果を示す。
【図４】やはり、分析クラスのＣ−１８カラムを用いる
ことによる本発明により製造された第４段階のペプチド
の精製の結果を示す。
ことによる本発明により製造された第４段階のペプチド
の精製の結果を示す。
【図５】ＡＣＥＩを含有する餌で飼育された自然高血圧
ラットの成長を示す。
ラットの成長を示す。
【図６】ＡＣＥＩを含有する餌で飼育された自然高血圧
ラットの血圧の変化を示す。
ラットの血圧の変化を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １１６ Ｃ０７Ｋ 5/103 ＺＮＡ Ｃ０７Ｋ 5/103 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｐ 21/06 Ｃ１２Ｐ 21/06 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者 チェン イ−ホン 台湾，シンチュー 300，ピー．オー．ボ ックス 246 (72)発明者 ヤン ユン−シアン 台湾，シンチュー 300，ピー．オー．ボ ックス 246 (72)発明者 リウ ユー−フイ 台湾，シンチュー 300，ピー．オー．ボ ックス 246 (72)発明者 チャン チェン−チ 台湾，シンチュー 300，ピー．オー．ボ ックス 246 (72)発明者 フェン シァオ−フイ 台湾，シンチュー 300，ピー．オー．ボ ックス 246 (72)発明者 チェン チュー−チン 台湾，シンチュー 300，ピー．オー．ボ ックス 246 Ｆターム(参考） 4B018 LE03 MD20 ME04 MF01 MF12 4B064 AG23 CA21 CB05 CD25 CE06 CE07 CE08 CE10 CE16 DA01 DA10 4C084 AA01 AA02 AA03 BA15 BA16 CA41 DC40 ZA422 ZC172 4H045 AA10 AA20 AA30 BA12 BA13 CA40 DA57 EA01 EA23 FA70 GA01 GA10 GA15 GA22 GA25
Claims (16)
- 【請求項１】 アンギオテンシン変換酵素阻害活性を有
する新規ペプチドであって、 Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ（ＶＬＰ）、 Ｉｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ（ＩＬＰ）、 Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（ＶＬＹ）、 Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ（ＶＬＰＰ）及び Ｉｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ（ＩＬＰＰ） からなる群から選択されるペプチド。 - 【請求項２】 アンギオテンシン変換酵素阻害剤として
用いられる請求項１に記載のペプチド。 - 【請求項３】 Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（ＶＬＹ）であ
る請求項１に記載のペプチド。 - 【請求項４】 アンギオテンシン変換阻害活性を有する
生成物の製造方法であって、次の工程、 （ａ）鶏かすの溶液に反応のためにタンパク質ヒドロラ
ーゼを加える、 （ｂ）工程（ａ）の反応後、鶏かす及び液体を分離し、
分離された液体を収集する、及び （ｃ）工程（ｂ）から得られた液体を乾燥して生成物を
得る、を含む方法。 - 【請求項５】 前記タンパク質ヒドロラーゼがアルカラ
ーゼである請求項４に記載の方法。 - 【請求項６】 前記鶏かすを５０〜７０℃で１〜５時間
加水分解する請求項４に記載の方法。 - 【請求項７】 さらに、鶏かすと液体とを加圧ろ過にか
け、前記分離された液体を濃縮する、工程（ｂ′）を含
む請求項４に記載の方法。 - 【請求項８】 さらに、分子量カット−オフが１０，０
００である膜を用いて限外ろ過を行う、工程（ｂ″）を
含む請求項４に記載の方法。 - 【請求項９】 さらに、前記生成物を精製して精製した
形のペプチドを得る、工程（ｄ）を含む請求項４に記載
の方法。 - 【請求項１０】 前記精製した形のペプチドが請求項１
に記載のペプチドである請求項９に記載の方法。 - 【請求項１１】 請求項４〜１０のいずれか１項に記載
の方法により製造される、ＡＣＥ阻害活性を有する生成
物。 - 【請求項１２】 請求項１に記載のペプチドを含む、Ａ
ＣＥの阻害に用いるための医薬。 - 【請求項１３】 請求項４〜１０のいずれか１項に記載
の方法により製造される、ＡＣＥの阻害に用いるための
健康食品。 - 【請求項１４】 請求項４〜１０のいずれか１項の方法
により製造される、ＡＣＥの阻害に用いるための食品添
加剤。 - 【請求項１５】 請求項１１の生成物を含む、ＡＣＥの
阻害に用いるための健康食品。 - 【請求項１６】 請求項１１の生成物を含む、ＡＣＥの
阻害に用いるための食品添加剤。
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|---|---|---|---|
| TW088120997A TWI225070B (en) | 1999-12-01 | 1999-12-01 | Novel peptides used as angiotensin converting enzyme inhibitor and preparation process thereof |
| TW88120997 | 1999-12-01 |
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| JP2004008484A Division JP2004182739A (ja) | 1999-12-01 | 2004-01-15 | アンギオテンシン変換酵素阻害剤として用いられる新規ペプチド及びその製造方法 |
| JP2004008411A Division JP2004189748A (ja) | 1999-12-01 | 2004-01-15 | アンギオテンシン変換酵素阻害剤として用いられる新規ペプチド及びその製造方法 |
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|---|---|
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| JP3739992B2 JP3739992B2 (ja) | 2006-01-25 |
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| JP2000105410A Expired - Lifetime JP3739992B2 (ja) | 1999-12-01 | 2000-04-03 | アンギオテンシン変換酵素阻害剤として用いられる新規ペプチド及びその製造方法 |
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| JP2004008411A Pending JP2004189748A (ja) | 1999-12-01 | 2004-01-15 | アンギオテンシン変換酵素阻害剤として用いられる新規ペプチド及びその製造方法 |
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|---|---|---|---|
| JP2004008484A Pending JP2004182739A (ja) | 1999-12-01 | 2004-01-15 | アンギオテンシン変換酵素阻害剤として用いられる新規ペプチド及びその製造方法 |
| JP2004008411A Pending JP2004189748A (ja) | 1999-12-01 | 2004-01-15 | アンギオテンシン変換酵素阻害剤として用いられる新規ペプチド及びその製造方法 |
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100370920C (zh) * | 2004-08-09 | 2008-02-27 | 金松亭 | 一种辣子鸡精以及制作方法 |
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|---|---|---|---|---|
| KR101115041B1 (ko) | 2011-01-07 | 2012-03-06 | 경남과학기술대학교 산학협력단 | 계육 가수분해물을 포함하는 기능성 조성물 및 이의 제조방법 |
| US8673862B1 (en) | 2012-09-06 | 2014-03-18 | Food Industry Research And Development Institute | Peptides and use thereof in the inhibition of angiotensin converting enzyme |
| ES2606954B1 (es) * | 2015-09-25 | 2017-12-18 | Universitat Rovira I Virgili | Procedimiento para la obtención de un hidrolizado de garras de pata de pollo con actividad antihipertensiva, hidrolizado obtenido y péptidos que contiene |
| CN107488696B (zh) * | 2017-09-19 | 2021-05-07 | 广东雅道生物科技有限公司 | 一种鸡骨双酶解方法 |
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|---|---|---|---|---|
| JPS6483096A (en) | 1987-09-25 | 1989-03-28 | Ajinomoto Kk | Novel peptide and hypotensor containing same |
| JPH02167052A (ja) * | 1988-06-17 | 1990-06-27 | Kanebo Ltd | 経口摂食組成物 |
| JPH0262828A (ja) | 1988-08-26 | 1990-03-02 | Ajinomoto Co Inc | 新規ベプチドおよびこれを含有する降圧剤 |
| JP2764276B2 (ja) | 1988-09-06 | 1998-06-11 | 仙味エキス株式会社 | 機能性新規ペプチド及びその利用 |
| DE69015708T2 (de) * | 1989-01-13 | 1995-06-08 | United Biomedical Inc., Lake Success, N.Y. | Künstliche peptid-zusammensetzungen mit immunoreaktiven antikörpern von htlv-1. |
| EP0483247A4 (en) * | 1989-07-21 | 1992-12-09 | Washington University | Recombinantly produced human membrane cofactor protein (mcp) |
| JPH04154798A (ja) * | 1990-10-17 | 1992-05-27 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 生理活性ペプチド及びその塩 |
| JP3119674B2 (ja) | 1991-02-15 | 2000-12-25 | 日本合成化学工業株式会社 | 新規ペプチド、その製造法及び用途 |
| JP3068656B2 (ja) * | 1991-03-07 | 2000-07-24 | アピ株式会社 | 新規なペプチド及びアンジオテンシン変換酵素阻害ペプチド並びにそれらを含有する経口摂食組成物 |
| US5314807A (en) | 1991-03-29 | 1994-05-24 | Nippon Gohsei Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Method for producing an angiotensin converting enzyme inhibitor-containing composition |
| JP3085753B2 (ja) | 1991-09-25 | 2000-09-11 | 川崎製鉄株式会社 | 冷却水漏洩検知装置を備えた空気圧縮機の冷却装置 |
| JPH0649096A (ja) | 1991-09-30 | 1994-02-22 | Asahi Chem Ind Co Ltd | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害ペプチドおよびその製造法ならびにそれを含む食品 |
| JPH05331192A (ja) | 1992-05-29 | 1993-12-14 | Nippon Synthetic Chem Ind Co Ltd:The | 新規ペプチド及びそれを製造する方法 |
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- 2000-05-17 US US09/572,531 patent/US6767990B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-01-15 JP JP2004008484A patent/JP2004182739A/ja active Pending
- 2004-01-15 JP JP2004008411A patent/JP2004189748A/ja active Pending
- 2004-04-05 US US10/818,999 patent/US7335722B2/en not_active Expired - Lifetime
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