JPH0649096A - アンジオテンシンｉ変換酵素阻害ペプチドおよびその製造法ならびにそれを含む食品 - Google Patents
アンジオテンシンｉ変換酵素阻害ペプチドおよびその製造法ならびにそれを含む食品Info
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- JPH0649096A JPH0649096A JP4262733A JP26273392A JPH0649096A JP H0649096 A JPH0649096 A JP H0649096A JP 4262733 A JP4262733 A JP 4262733A JP 26273392 A JP26273392 A JP 26273392A JP H0649096 A JPH0649096 A JP H0649096A
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- angiotensin
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Grain Derivatives (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 副作用が少ないアンジオテンシンＩ変換酵素
阻害ペプチド、その適切な製造法および用途を供する。 【構成】 Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−
Ｇｌｎ，Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ａ
ｌａ−Ｘ（ＸはＧｌｙ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒまたはアミノ酸
残基なし）の構造を持つアンジオテンシンＩ変換酵素阻
害ペプチドであって豚赤血球から分離、精製して製造す
る。また、化学合成法でも製造できる。これらは各種の
食品、医薬品に応用できる。 【効果】 Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−
Ｇｌｎ，Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ａ
ｌａ−Ｘ（ＸはＧｌｙ，Ｌｙｓまたは アミノ酸残基な
し）はアンジオテンシンＩ変換酵素阻害作用を示すので
血圧を下げる。
阻害ペプチド、その適切な製造法および用途を供する。 【構成】 Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−
Ｇｌｎ，Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ａ
ｌａ−Ｘ（ＸはＧｌｙ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒまたはアミノ酸
残基なし）の構造を持つアンジオテンシンＩ変換酵素阻
害ペプチドであって豚赤血球から分離、精製して製造す
る。また、化学合成法でも製造できる。これらは各種の
食品、医薬品に応用できる。 【効果】 Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−
Ｇｌｎ，Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ａ
ｌａ−Ｘ（ＸはＧｌｙ，Ｌｙｓまたは アミノ酸残基な
し）はアンジオテンシンＩ変換酵素阻害作用を示すので
血圧を下げる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アンジオテンシンＩ変
換酵素阻害ペプチドおよび同ペプチドの製造および利用
法に関する。
換酵素阻害ペプチドおよび同ペプチドの製造および利用
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】高血圧症は、最大血圧が１６０ｍｍＨｇ
以上か、最小血圧が９５ｍｍＨｇ以上または両者がそれ
以上の状態である。わが国では患者数が約２０００万人
であるといわれ、り患率の高い疾病である。高血圧症
は、脳出血、脳梗塞、クモ膜下出血、狭心症、心筋梗
塞、腎硬化症、腎不全、網膜静脈閉塞症など広範囲の臓
器にわたって様々な合併症を生じることが知られてお
り、有効な治療薬が望まれている。
以上か、最小血圧が９５ｍｍＨｇ以上または両者がそれ
以上の状態である。わが国では患者数が約２０００万人
であるといわれ、り患率の高い疾病である。高血圧症
は、脳出血、脳梗塞、クモ膜下出血、狭心症、心筋梗
塞、腎硬化症、腎不全、網膜静脈閉塞症など広範囲の臓
器にわたって様々な合併症を生じることが知られてお
り、有効な治療薬が望まれている。
【０００３】生体内において血圧を調節するメカニズム
の一つとして、昇圧系であるレニン−アンジオテンシン
系と降圧系であるカリクレイン−キニン系がある。レニ
ン−アンジオテンシン系では酵素レニンが腎臓の傍糸球
体細胞（Ｊ．Ｇ細胞）で生成され、血管でレニン基質で
あるところのアンジオテンシノーゲンに作用してアンジ
オテンシンＩを生成する。このアンジオテンシンＩをア
ンジオテンシンIIに変換する酵素がアンジオテンシンＩ
変換酵素であり、生じたアンジオテンシンIIは細動脈に
作用して収縮を起こさせる。また、アンジオテンシンII
は副腎皮質にも作用してアルドステロンの合成と分泌を
促し、腎臓でのナトリウムの再吸収を促進し、体液量を
保持する働きもある。このようにしてアンジオテンシン
IIによって血圧が上昇する。
の一つとして、昇圧系であるレニン−アンジオテンシン
系と降圧系であるカリクレイン−キニン系がある。レニ
ン−アンジオテンシン系では酵素レニンが腎臓の傍糸球
体細胞（Ｊ．Ｇ細胞）で生成され、血管でレニン基質で
あるところのアンジオテンシノーゲンに作用してアンジ
オテンシンＩを生成する。このアンジオテンシンＩをア
ンジオテンシンIIに変換する酵素がアンジオテンシンＩ
変換酵素であり、生じたアンジオテンシンIIは細動脈に
作用して収縮を起こさせる。また、アンジオテンシンII
は副腎皮質にも作用してアルドステロンの合成と分泌を
促し、腎臓でのナトリウムの再吸収を促進し、体液量を
保持する働きもある。このようにしてアンジオテンシン
IIによって血圧が上昇する。
【０００４】一方、カリクレイン−キニン系では、蛋白
分解酵素であるカリクレインが、基質であるところのキ
ニノーゲンに作用してキニンを生じる。キニンは血管を
拡張させ、血圧を下げる働きを有するが、キニナーゼII
によって分解を受ける。キニナーゼIIはアンジオテンシ
ンＩ変換酵素と同一物質であることが知られている。以
上のことから、アンジオテンシンＩ変換酵素を阻害する
ことによる高血圧の治療を行うことができると考えられ
る。この考え方により現在カプトプリル、エナラプリ
ル、アラセプリル等の合成医薬が開発されている。ま
た、天然物からはカゼインやゼラチン、魚肉、家畜の血
液などに由来するペプチドもアンジオテンシン変換酵素
を阻害する働きがあることが知られている。（特開昭５
９−４４３２４号、特開昭６４−５４９７号、特開平０
１−３１３４９８号）
分解酵素であるカリクレインが、基質であるところのキ
ニノーゲンに作用してキニンを生じる。キニンは血管を
拡張させ、血圧を下げる働きを有するが、キニナーゼII
によって分解を受ける。キニナーゼIIはアンジオテンシ
ンＩ変換酵素と同一物質であることが知られている。以
上のことから、アンジオテンシンＩ変換酵素を阻害する
ことによる高血圧の治療を行うことができると考えられ
る。この考え方により現在カプトプリル、エナラプリ
ル、アラセプリル等の合成医薬が開発されている。ま
た、天然物からはカゼインやゼラチン、魚肉、家畜の血
液などに由来するペプチドもアンジオテンシン変換酵素
を阻害する働きがあることが知られている。（特開昭５
９−４４３２４号、特開昭６４−５４９７号、特開平０
１−３１３４９８号）
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】カプトプリルは、内服
で強力な血圧降下作用を示す。しかし、合成法で作られ
高価であり、安価に入手することは難しい。そのうえ、
使用量が不適当であると腎機能障害や低血圧をもたら
す。また、分子内に存在するＳＨ基のため、発疹や味覚
異常を引き起こすとも言われている。安価な天然物を原
料とするアンジオテンシンＩ変換酵素阻害物質であるカ
ゼイン、ゼラチン、魚肉などに由来するペプチドは、分
離精製が困難な上、収率が悪い。
で強力な血圧降下作用を示す。しかし、合成法で作られ
高価であり、安価に入手することは難しい。そのうえ、
使用量が不適当であると腎機能障害や低血圧をもたら
す。また、分子内に存在するＳＨ基のため、発疹や味覚
異常を引き起こすとも言われている。安価な天然物を原
料とするアンジオテンシンＩ変換酵素阻害物質であるカ
ゼイン、ゼラチン、魚肉などに由来するペプチドは、分
離精製が困難な上、収率が悪い。
【０００６】一方、家畜血液は屠殺時に大量に生じてい
るにもかかわらず、有効利用されず殆んど廃棄物として
処理されている。家畜の血球からアンジオテンシンＩ変
換酵素阻害活性を持つペプチド含有組成物は得られてい
るが、作用本体のペプチドの構造は判っておらず、その
解明および新たな血圧降下剤の開発が望まれていた。 （特開平３−６６６２６等）本発明では、この家畜血液
からアンジオテンシンＩ変換酵素を阻害するペプチドを
見い出し、その構造を明らかにし、同ペプチドの製造法
を確立することにより、本発明を完成した。
るにもかかわらず、有効利用されず殆んど廃棄物として
処理されている。家畜の血球からアンジオテンシンＩ変
換酵素阻害活性を持つペプチド含有組成物は得られてい
るが、作用本体のペプチドの構造は判っておらず、その
解明および新たな血圧降下剤の開発が望まれていた。 （特開平３−６６６２６等）本発明では、この家畜血液
からアンジオテンシンＩ変換酵素を阻害するペプチドを
見い出し、その構造を明らかにし、同ペプチドの製造法
を確立することにより、本発明を完成した。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、家畜血液由来
のアンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドおよびその
製造法ならびにそれを含む食品に関する。本ペプチドは
動物血液の赤血球を溶血、変性し、加水分解した後、得
られたペプチド含有組成物を分離することにより得られ
る。加水分解の方法としては、タンパク質分解酵素を用
いる方法がある。タンパク分解酵素としては、動物、植
物、微生物または菌類由来のタンパク分解酵素で本発明
に該当するペプチドを赤血球タンパク質であるヘモグロ
ビンから製造できるものであれば、単独または混合で使
用できる。
のアンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドおよびその
製造法ならびにそれを含む食品に関する。本ペプチドは
動物血液の赤血球を溶血、変性し、加水分解した後、得
られたペプチド含有組成物を分離することにより得られ
る。加水分解の方法としては、タンパク質分解酵素を用
いる方法がある。タンパク分解酵素としては、動物、植
物、微生物または菌類由来のタンパク分解酵素で本発明
に該当するペプチドを赤血球タンパク質であるヘモグロ
ビンから製造できるものであれば、単独または混合で使
用できる。
【０００８】該加水分解物からのペプチド含有組成物の
分離方法としては、以下の方法がある。１０００から
５００００ダルトンの限外濾過で濾過する。またはｐ
Ｈをタンパク質の等電点付近に合わせてヘム部分を沈澱
させ、その上澄を遠心分離により分離する。または
で得られたヘムタンパク質由来の種々のペプチドを含有
する画分を、まずオクタデシル基を有する逆相クロマト
用の充填剤Ｃ18（シリカゲルにオクタデシル基を化学結
合させてたもの）に吸着させ、蒸留水で充填剤を洗浄し
た後、アセトニトリル濃度を段階的に１５，３０，６
０，１００％と上昇させることにより、吸着物を段階的
に溶出させる。この１５または３０％画分を、さらにＣ
18逆相ＨＰＬＣを用いてアセトニトリル濃度の連続的な
変化による吸着物の溶離、さらにゲル濾過ＨＰＬＣによ
る精製を行うことにより、目的とするペプチドが得られ
る。家畜血液としては、ブタ、ウシ、ニワトリなど全て
の動物種のものが使用可能である。
分離方法としては、以下の方法がある。１０００から
５００００ダルトンの限外濾過で濾過する。またはｐ
Ｈをタンパク質の等電点付近に合わせてヘム部分を沈澱
させ、その上澄を遠心分離により分離する。または
で得られたヘムタンパク質由来の種々のペプチドを含有
する画分を、まずオクタデシル基を有する逆相クロマト
用の充填剤Ｃ18（シリカゲルにオクタデシル基を化学結
合させてたもの）に吸着させ、蒸留水で充填剤を洗浄し
た後、アセトニトリル濃度を段階的に１５，３０，６
０，１００％と上昇させることにより、吸着物を段階的
に溶出させる。この１５または３０％画分を、さらにＣ
18逆相ＨＰＬＣを用いてアセトニトリル濃度の連続的な
変化による吸着物の溶離、さらにゲル濾過ＨＰＬＣによ
る精製を行うことにより、目的とするペプチドが得られ
る。家畜血液としては、ブタ、ウシ、ニワトリなど全て
の動物種のものが使用可能である。
【０００９】また、本ペプチドは、Ｆｍｏｃ（９−フル
オレニルメチルオキシカルボニル）−アミノ酸やｔ−Ｂ
ｏｃ（ｔ−ブトキシカルボニル）−アミノ酸などを用い
る固相合成法、プロテアーゼを用いるペプチド合成法な
ど全ての既知の化学合成法〔生化学実験講座１，タンパ
ク質の化学IV 第II部 ペプチド合成（Ｐ．２０５），
日本生化学会編 東京化学同人、続生化学実験講座２
タンパク質の化学下，２０章ペプチド合成（Ｐ．６４
１），日本生化学会編 東京化学同人〕で製造すること
ができる。以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。
オレニルメチルオキシカルボニル）−アミノ酸やｔ−Ｂ
ｏｃ（ｔ−ブトキシカルボニル）−アミノ酸などを用い
る固相合成法、プロテアーゼを用いるペプチド合成法な
ど全ての既知の化学合成法〔生化学実験講座１，タンパ
ク質の化学IV 第II部 ペプチド合成（Ｐ．２０５），
日本生化学会編 東京化学同人、続生化学実験講座２
タンパク質の化学下，２０章ペプチド合成（Ｐ．６４
１），日本生化学会編 東京化学同人〕で製造すること
ができる。以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。
【００１０】
実施例１ タンパク質３５％を含有するブタ暗色血球１０Ｋｇに水
１０Ｋｇを加え、赤血球を溶血させた。これに水３０Ｋ
ｇを加え、５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを１１
とした。室温で１時間放置後、１Ｍクエン酸水溶液でｐ
Ｈを９．０にし、ノボ社製アルカラーゼ０．６Ｌ １２
４ｇを加え、５０℃で酵素分解を行った。酵素分解中は
５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを８．７〜９．３に
保った。酵素反応終了後、温度を２０℃に下げ、水１０
リットルを加え、１００００ダルトンの分離限界を持つ
「中空繊維」タイプの限外濾過モジュールで限外濾過を
行い、濾液約４０リットルを得た。得られた濾液は、噴
霧乾燥機により乾燥し、ペプチド含有組成物粉体約２Ｋ
ｇを得た。
１０Ｋｇを加え、赤血球を溶血させた。これに水３０Ｋ
ｇを加え、５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを１１
とした。室温で１時間放置後、１Ｍクエン酸水溶液でｐ
Ｈを９．０にし、ノボ社製アルカラーゼ０．６Ｌ １２
４ｇを加え、５０℃で酵素分解を行った。酵素分解中は
５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを８．７〜９．３に
保った。酵素反応終了後、温度を２０℃に下げ、水１０
リットルを加え、１００００ダルトンの分離限界を持つ
「中空繊維」タイプの限外濾過モジュールで限外濾過を
行い、濾液約４０リットルを得た。得られた濾液は、噴
霧乾燥機により乾燥し、ペプチド含有組成物粉体約２Ｋ
ｇを得た。
【００１１】このペプチド含有組成物を２ｇ／１００ｍ
ｌに調整し、その１００ｍｌにＣ18充填剤（粒径５５〜
１０５μｍ；ウォターズ製）４ｇを添加し、１時間攪拌
した。グラスフィルターを用い溶液を濾過し、蒸留水で
洗浄後、０、１５、３０、６０％のアセトニトリル濃度
で溶出を行い、溶出液を濃縮乾固した。この３０％アセ
トニトリル溶出画分を水に溶かして、逆相ＨＰＬＣによ
り分離した。ＨＰＬＣ条件はＨＰＬＣ条件１に示した。
ｌに調整し、その１００ｍｌにＣ18充填剤（粒径５５〜
１０５μｍ；ウォターズ製）４ｇを添加し、１時間攪拌
した。グラスフィルターを用い溶液を濾過し、蒸留水で
洗浄後、０、１５、３０、６０％のアセトニトリル濃度
で溶出を行い、溶出液を濃縮乾固した。この３０％アセ
トニトリル溶出画分を水に溶かして、逆相ＨＰＬＣによ
り分離した。ＨＰＬＣ条件はＨＰＬＣ条件１に示した。
【００１２】ＨＰＬＣ条件１ カラム Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ １００ ＲＰ
１８（ｅ）（１０μｍ） メルク社 流速 ４．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ｎｍ 溶離液 Ａ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 Ｂ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 ８０％アセト
ニトリルＡ１００％から１２０ｍｉｎ後Ｂ１００％にな
るような直線グラジエント
１８（ｅ）（１０μｍ） メルク社 流速 ４．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ｎｍ 溶離液 Ａ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 Ｂ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 ８０％アセト
ニトリルＡ１００％から１２０ｍｉｎ後Ｂ１００％にな
るような直線グラジエント
【００１３】条件１ではアンジオテンシンＩ変換酵素阻
害能を持つペプチドは、リテンションタイム２１分（画
分Ｉ）、２３分（画分II）および２６分（画分III ）に
溶出された（図１に示すチャート１ピーク１、２および
３）。このペプチドを精製するために、画分Ｉ，画分II
および画分III をさらにＨＰＬＣで精製した。この時の
条件をＨＰＬＣ条件２に示した。
害能を持つペプチドは、リテンションタイム２１分（画
分Ｉ）、２３分（画分II）および２６分（画分III ）に
溶出された（図１に示すチャート１ピーク１、２および
３）。このペプチドを精製するために、画分Ｉ，画分II
および画分III をさらにＨＰＬＣで精製した。この時の
条件をＨＰＬＣ条件２に示した。
【００１４】ＨＰＬＣ条件２ カラム Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ １００ ＲＰ
１８（ｅ）（５μｍ）（メルク社） 流速 １．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ｎｍ 溶離液 Ａ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 Ｂ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 ８０％アセト
ニトリルＡ１００％から２４０ｍｉｎ後Ｂ１００％にな
るような直線グラジエント
１８（ｅ）（５μｍ）（メルク社） 流速 １．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ｎｍ 溶離液 Ａ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 Ｂ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 ８０％アセト
ニトリルＡ１００％から２４０ｍｉｎ後Ｂ１００％にな
るような直線グラジエント
【００１５】この条件ではアンジオテンシンＩ変換酵素
阻害能を持つペプチドは、以下に示したリテンションタ
イムに溶出された。 リテンションタイム （画分Ｉ） ３４分（Ｉ−１） 図２に示すチャート２ピーク４ （画分Ｉ） ４３分（II−１） 図３に示すチャート３ピーク５ （画分II） ４８分（ III−１） 図４に示すチャート４ピーク６ （画分II） ５１分（ III−２） チャート４ピーク７
阻害能を持つペプチドは、以下に示したリテンションタ
イムに溶出された。 リテンションタイム （画分Ｉ） ３４分（Ｉ−１） 図２に示すチャート２ピーク４ （画分Ｉ） ４３分（II−１） 図３に示すチャート３ピーク５ （画分II） ４８分（ III−１） 図４に示すチャート４ピーク６ （画分II） ５１分（ III−２） チャート４ピーク７
【００１６】さらに、（ III−２）を精製するためにゲ
ル濾過ＨＰＬＣを用いた。この時の条件をＨＰＬＣ条件
３に示した。 ＨＰＬＣ条件３ カラム Ａｓａｈｉｐａｋ ＧＳ−２２０（旭化
成） 流速 １．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ ｎｍ 溶離液 １０ ｍＭ酢酸アンモニウム この条件ではアンジオテンシンＩ変換酵素阻害能を持つ
ペプチドは、１７．８分のリテンションタイムで溶出さ
れた（図５に示すチャート５ピーク８）。
ル濾過ＨＰＬＣを用いた。この時の条件をＨＰＬＣ条件
３に示した。 ＨＰＬＣ条件３ カラム Ａｓａｈｉｐａｋ ＧＳ−２２０（旭化
成） 流速 １．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ ｎｍ 溶離液 １０ ｍＭ酢酸アンモニウム この条件ではアンジオテンシンＩ変換酵素阻害能を持つ
ペプチドは、１７．８分のリテンションタイムで溶出さ
れた（図５に示すチャート５ピーク８）。
【００１７】このピークをＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙ
ｓｔｅｍ社の気相プロテイン・シーケンサー（Ｍｏｄｅ
ｌ−４７０Ａ）とオンラインの高速液体クロマトグラフ
ィーを用いてＥｄｍａｎ分解反応を行い、各サイクルで
得られるＰＴＨアミノ酸を同定した。その結果 （Ｉ−１） Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅ
ｕ−Ｇｌｎ （II−１） Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａ
ｌ−Ａｌａ−Ｌｙｓ （III −１） Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａ
ｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙ （III −２） Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａ
ｌ−Ａｌａ の構造を持つことが判った。
ｓｔｅｍ社の気相プロテイン・シーケンサー（Ｍｏｄｅ
ｌ−４７０Ａ）とオンラインの高速液体クロマトグラフ
ィーを用いてＥｄｍａｎ分解反応を行い、各サイクルで
得られるＰＴＨアミノ酸を同定した。その結果 （Ｉ−１） Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅ
ｕ−Ｇｌｎ （II−１） Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａ
ｌ−Ａｌａ−Ｌｙｓ （III −１） Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａ
ｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙ （III −２） Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａ
ｌ−Ａｌａ の構造を持つことが判った。
【００１８】〔アンジオテンシンＩ変換酵素阻害活性の
測定〕アンジオテンシンＩ変換酵素阻害の測定は、カッ
シュマンらの方法（バイオケミカル・ファーマコロジー
２０巻 １６３７〜１６４８頁（１９７１））を改良
した丸山らの方法（アグリカルチュアル・バイオロジカ
ル・ケミストリー４６巻５号（１３９３〜１３９４（１
９８２））に従った。試験管に本ペプチド水溶液３０μ
ｌと酵素基質として、Ｌ−ヒプリルヒスチジルロイシン
（シグマ社製）と ＮａＣｌを含有したｐＨ８．３のほ
う酸バッファー２５０μｌを加えて、３７℃で１０分間
プレインキュベーションした。その後、アンジオテンシ
ンＩ変換酵素含有液１００μｌを加え、酵素反応を開始
した。この時ほう酸バッファーの濃度は０．１Ｍ、Ｌ−
ヒプリルヒスチジルロイシン濃度は５ｍＭ、ＮａＣｌ
３００ｍＭであり、阻害がかからない場合の酵素活性
は、８ｍＵである。
測定〕アンジオテンシンＩ変換酵素阻害の測定は、カッ
シュマンらの方法（バイオケミカル・ファーマコロジー
２０巻 １６３７〜１６４８頁（１９７１））を改良
した丸山らの方法（アグリカルチュアル・バイオロジカ
ル・ケミストリー４６巻５号（１３９３〜１３９４（１
９８２））に従った。試験管に本ペプチド水溶液３０μ
ｌと酵素基質として、Ｌ−ヒプリルヒスチジルロイシン
（シグマ社製）と ＮａＣｌを含有したｐＨ８．３のほ
う酸バッファー２５０μｌを加えて、３７℃で１０分間
プレインキュベーションした。その後、アンジオテンシ
ンＩ変換酵素含有液１００μｌを加え、酵素反応を開始
した。この時ほう酸バッファーの濃度は０．１Ｍ、Ｌ−
ヒプリルヒスチジルロイシン濃度は５ｍＭ、ＮａＣｌ
３００ｍＭであり、阻害がかからない場合の酵素活性
は、８ｍＵである。
【００１９】３７℃、ｐＨ８．３で３０分間インキュベ
ートしながら反応させた後、１ＮＨＣｌ ２５０μｌを
加えて反応を停止させた。なお、盲検としては、アンジ
オテンシンＩ変換酵素含有液を加える前に１Ｎ ＨＣｌ
を加え、同様に処理した。酢酸エチル１．５ｍｌを加え
て１５秒振盪させ、酵素反応で生じた馬尿酸を抽出し、
２０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し、酢酸エチル層
１．０ｍｌを試験管に採取した。酢酸エチルをホットド
ライバスのなかで１２０℃、３０分間加熱し完全に除去
した後、室温で５分間放置した。そして水１．０ｍｌを
加え、生成した馬尿酸の量を２２８ｎｍの吸光度を測定
して求めた。酵素反応に使用したアンジオテンシンＩ変
換酵素含有液は、ラビットラングアセトンパウダー（シ
グマ社製）１ｇを０．１Ｍほう酸バッファー（ｐＨ
８．３）１０ｍｌに溶かしよく攪拌した後、４℃、４０
０００ｇで４０分間遠心分離した。その上澄を０．１Ｍ
ほう酸バッファー（ｐＨ８．３）で希釈して作成した。
アンジオテンシンＩ変換酵素阻害活性は下記の数１式を
使用して求めた。
ートしながら反応させた後、１ＮＨＣｌ ２５０μｌを
加えて反応を停止させた。なお、盲検としては、アンジ
オテンシンＩ変換酵素含有液を加える前に１Ｎ ＨＣｌ
を加え、同様に処理した。酢酸エチル１．５ｍｌを加え
て１５秒振盪させ、酵素反応で生じた馬尿酸を抽出し、
２０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し、酢酸エチル層
１．０ｍｌを試験管に採取した。酢酸エチルをホットド
ライバスのなかで１２０℃、３０分間加熱し完全に除去
した後、室温で５分間放置した。そして水１．０ｍｌを
加え、生成した馬尿酸の量を２２８ｎｍの吸光度を測定
して求めた。酵素反応に使用したアンジオテンシンＩ変
換酵素含有液は、ラビットラングアセトンパウダー（シ
グマ社製）１ｇを０．１Ｍほう酸バッファー（ｐＨ
８．３）１０ｍｌに溶かしよく攪拌した後、４℃、４０
０００ｇで４０分間遠心分離した。その上澄を０．１Ｍ
ほう酸バッファー（ｐＨ８．３）で希釈して作成した。
アンジオテンシンＩ変換酵素阻害活性は下記の数１式を
使用して求めた。
【００２０】
【数１】 Ａ：蒸留水添加時の吸光度 （２２８ｎｍ） Ｂ：阻害剤添加時の吸光度 （２２８ｎｍ） ａ，ｂ：それぞれに対する盲検の吸光度 （２２８ｎ
ｍ） この方法で上記ペプチドのＩＣ50は、それぞれ １．９
μＭ（Ｉ−１）、２．１μＭ（II−１） ７．４μＭ
（III −１） ５．８μＭ（III −２）であった。
ｍ） この方法で上記ペプチドのＩＣ50は、それぞれ １．９
μＭ（Ｉ−１）、２．１μＭ（II−１） ７．４μＭ
（III −１） ５．８μＭ（III −２）であった。
【００２１】実施例２ 実施例１と同様に赤血球を溶血させ、アルカラーゼと反
応させた後、限外濾過を行い濾液を得た。この濾液を濃
縮し、Ｃ18充填剤に吸着させ、０、１５、３０、６０％
アセトニトリル濃度で溶出し、溶出液を濃縮乾固した。
この１５％アセトニトリル溶出画分を水に溶かして、イ
オン交換ＨＰＬＣにより分離した。ＨＰＬＣ条件はＨＰ
ＬＣ条件４に示した。
応させた後、限外濾過を行い濾液を得た。この濾液を濃
縮し、Ｃ18充填剤に吸着させ、０、１５、３０、６０％
アセトニトリル濃度で溶出し、溶出液を濃縮乾固した。
この１５％アセトニトリル溶出画分を水に溶かして、イ
オン交換ＨＰＬＣにより分離した。ＨＰＬＣ条件はＨＰ
ＬＣ条件４に示した。
【００２２】ＨＰＬＣ条件４ カラム ＴＳＫ−ｇｅｌ ＳＰ−５ＰＷ（２１．５
ｍｍ×７．５ｃｍ 東ソー）（強陽イオン交換カラム） 流速 ４．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ ｎｍ 溶離液 Ａ： ２０ｍＭ酢酸バッファー（ｐＨ５．
５） Ｂ： Ａ＋５００ｍＭ Ｎａ2 ＳＯ4 Ａ１００％から４０ｍｉｎ後Ｂ１００％になるような直
線グラジエント
ｍｍ×７．５ｃｍ 東ソー）（強陽イオン交換カラム） 流速 ４．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ ｎｍ 溶離液 Ａ： ２０ｍＭ酢酸バッファー（ｐＨ５．
５） Ｂ： Ａ＋５００ｍＭ Ｎａ2 ＳＯ4 Ａ１００％から４０ｍｉｎ後Ｂ１００％になるような直
線グラジエント
【００２３】条件４ではアンジオテンシンＩ変換酵素阻
害能を持つペプチドは、リテンションタイム約２５分
（画分ＩＶ，図６に示すチャート６エリア１）および約
３２分（画分Ｖ，図６に示すチャート６エリア２）に溶
出された。このペプチドをさらに逆相ＨＰＬＣで精製し
た。この時の画分ＩＶの分析条件をＨＰＬＣ条件５に、
画分Ｖの分析条件をＨＰＬＣ条件６に示した。
害能を持つペプチドは、リテンションタイム約２５分
（画分ＩＶ，図６に示すチャート６エリア１）および約
３２分（画分Ｖ，図６に示すチャート６エリア２）に溶
出された。このペプチドをさらに逆相ＨＰＬＣで精製し
た。この時の画分ＩＶの分析条件をＨＰＬＣ条件５に、
画分Ｖの分析条件をＨＰＬＣ条件６に示した。
【００２４】ＨＰＬＣ条件５ カラム ＬｉｃｈｒｏＣＡＲＴ ２５０−１０ ＨＰＬＣ−Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ １００ ＲＰ １８（ｅ）
（１０μｍ） メルク社 流速 ４．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ ｎｍ 溶離液 Ａ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 Ｂ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 ５０％アセト
ニトリルＡ１００％から１２０ｍｉｎ後Ｂ１００％にな
るような直線グラジエント
（１０μｍ） メルク社 流速 ４．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ ｎｍ 溶離液 Ａ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 Ｂ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 ５０％アセト
ニトリルＡ１００％から１２０ｍｉｎ後Ｂ１００％にな
るような直線グラジエント
【００２５】ＨＰＬＣ条件６ カラム Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ １００ ＲＰ−
１８ ｅｎｄｃａｐｐｅｄ（５μｍ） メルク社 流速 １．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ ｎｍ 溶離液 Ａ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 Ｂ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 ５０％アセト
ニトリルＡ１００％から１２０ｍｉｎ後Ｂ１００％にな
るような直線グラジエント
１８ ｅｎｄｃａｐｐｅｄ（５μｍ） メルク社 流速 １．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ ｎｍ 溶離液 Ａ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 Ｂ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 ５０％アセト
ニトリルＡ１００％から１２０ｍｉｎ後Ｂ１００％にな
るような直線グラジエント
【００２６】条件５，６で分離したところ、アンジオテ
ンシンＩ変換酵素阻害能を持つペプチドは、以下に示し
たリテンションタイムに溶出された。 リテンションタイム （画分ＩＶ） ３７．２分（ＩＶ−１） 図７に示すチャート７ピーク ９ ３８．０分（ＩＶ−２） １０ ４１．０分（ＩＶ−３） １１ （画分Ｖ） ２７．７分（Ｖ） 図８に示すチャート８ピーク１２ ＩＶ−１，２および３については、さらにゲル濾過ＨＰ
ＬＣで精製した。この時の条件をＨＰＬＣ条件７に示し
た。
ンシンＩ変換酵素阻害能を持つペプチドは、以下に示し
たリテンションタイムに溶出された。 リテンションタイム （画分ＩＶ） ３７．２分（ＩＶ−１） 図７に示すチャート７ピーク ９ ３８．０分（ＩＶ−２） １０ ４１．０分（ＩＶ−３） １１ （画分Ｖ） ２７．７分（Ｖ） 図８に示すチャート８ピーク１２ ＩＶ−１，２および３については、さらにゲル濾過ＨＰ
ＬＣで精製した。この時の条件をＨＰＬＣ条件７に示し
た。
【００２７】ＨＰＬＣ条件７ カラム Ａｓａｈｉｐａｋ ＧＳ−２２０（旭化
成） 流速 １．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ ｎｍ 溶離液 １０ ｍＭ酢酸アンモニウム
成） 流速 １．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ ｎｍ 溶離液 １０ ｍＭ酢酸アンモニウム
【００２８】この条件ではアンジオテンシンＩ変換酵素
阻害能を持つペプチドは、以下に示したリテンションタ
イムに溶出された。 リテンションタイム （ＩＶ−１） ２４．０分 図９に示すチャート９ピーク１３ （ＩＶ−２） ２５．１分 図１０に示すチャート１０ピーク１４ （ＩＶ−３） ２４．９分 図１１に示すチャート１１ピーク１５
阻害能を持つペプチドは、以下に示したリテンションタ
イムに溶出された。 リテンションタイム （ＩＶ−１） ２４．０分 図９に示すチャート９ピーク１３ （ＩＶ−２） ２５．１分 図１０に示すチャート１０ピーク１４ （ＩＶ−３） ２４．９分 図１１に示すチャート１１ピーク１５
【００２９】このピーク（ＩＶ−１，２，３およびＶ）
をＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社の気相プロテ
イン・シーケンサー（Ｍｏｄｅｌ−４７０Ａ）とオンラ
インの高速液体クロマトグラフィーを用いてＥｄｍａｎ
分解反応を行い、各サイクルで得られるＰＴＨアミノ酸
を同定した。その結果 （ＩＶ−１）Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ
−Ａｌａ−Ｓｅｒ （ＩＶ−２）Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ
−Ａｌａ−Ｇｌｙ （ＩＶ−３）Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ
−Ａｌａ （Ｖ） Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｎ の構造を持つことが判った。
をＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社の気相プロテ
イン・シーケンサー（Ｍｏｄｅｌ−４７０Ａ）とオンラ
インの高速液体クロマトグラフィーを用いてＥｄｍａｎ
分解反応を行い、各サイクルで得られるＰＴＨアミノ酸
を同定した。その結果 （ＩＶ−１）Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ
−Ａｌａ−Ｓｅｒ （ＩＶ−２）Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ
−Ａｌａ−Ｇｌｙ （ＩＶ−３）Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ
−Ａｌａ （Ｖ） Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｎ の構造を持つことが判った。
【００３０】実施例３ 実施例１と同様に赤血球を溶血させ、アルカラーゼと反
応させた後、限外濾過を行い濾液を得た。この濾液を濃
縮し、Ｃ18充填剤に吸着させ、０、１５、３０、６０％
アセトニトリル濃度で溶出し、溶出液を濃縮乾固した。
この６０％アセトニトリル溶出画分を水に溶かして、逆
相ＨＰＬＣにより分離した。ＨＰＬＣ条件はＨＰＬＣ条
件８に示した。
応させた後、限外濾過を行い濾液を得た。この濾液を濃
縮し、Ｃ18充填剤に吸着させ、０、１５、３０、６０％
アセトニトリル濃度で溶出し、溶出液を濃縮乾固した。
この６０％アセトニトリル溶出画分を水に溶かして、逆
相ＨＰＬＣにより分離した。ＨＰＬＣ条件はＨＰＬＣ条
件８に示した。
【００３１】ＨＰＬＣ条件８ カラム Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ １００ ＲＰ
１８ ｅｎｄｃａｐｐｅｄ（５μｍ） メルク社 流速 １．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ ｎｍ 溶離液 Ａ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 Ｂ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 ８０％アセト
ニトリルＡ１００％から２４０ｍｉｎ後Ｂ１００％にな
るような直線グラジエント
１８ ｅｎｄｃａｐｐｅｄ（５μｍ） メルク社 流速 １．０ ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度 室温 検出 ＵＶ ２１０ ｎｍ 溶離液 Ａ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 Ｂ： ０．０５％ トリフルオロ酢酸 ８０％アセト
ニトリルＡ１００％から２４０ｍｉｎ後Ｂ１００％にな
るような直線グラジエント
【００３２】この条件ではアンジオテンシンＩ変換酵素
阻害能を持つペプチドは、リテンションタイム２２分に
溶出された。得られたペプチドについて実施例１と同様
に構造解析を行ったところ、配列表で示したペプチド構
造であることがわかった。
阻害能を持つペプチドは、リテンションタイム２２分に
溶出された。得られたペプチドについて実施例１と同様
に構造解析を行ったところ、配列表で示したペプチド構
造であることがわかった。
【００３３】実施例４ アプライド バイオシステム社のペプチド合成機 ペプ
チド シンセサイザー４３０Ａを用いて、同社の操作マ
ニュアルに従い、配列表１から５で表されるペプチドを
合成した。ペプチドを抽出し、陰イオン交換樹脂カラム
処理後、ＯＤＳカラムを用いた逆相ＨＰＬＣにより、本
発明のペプチドを精製した。アミノ酸組成を測定した結
果、ペプチドの配列から期待される値とよく一致した。
得られたペプチドを水に溶解し、実施例１と同様にＡＣ
Ｅ阻害活性を測定したところ、同様の高い活性を与え
た。
チド シンセサイザー４３０Ａを用いて、同社の操作マ
ニュアルに従い、配列表１から５で表されるペプチドを
合成した。ペプチドを抽出し、陰イオン交換樹脂カラム
処理後、ＯＤＳカラムを用いた逆相ＨＰＬＣにより、本
発明のペプチドを精製した。アミノ酸組成を測定した結
果、ペプチドの配列から期待される値とよく一致した。
得られたペプチドを水に溶解し、実施例１と同様にＡＣ
Ｅ阻害活性を測定したところ、同様の高い活性を与え
た。
【００３４】実施例５ 以下に本発明の食品への実施例を示すが、本ペプチドの
用途としては、以下の実施例に限定されるものではな
い。ACE阻害活性ペプチドは上記実施例１から４のいず
れかの方法に従って得た。グラニュー糖１００ｇを小鍋
にとり、水５０ｃｃを加えて火に掛け煮溶かし、鍋をま
わしながら、薄く煙がたって砂糖水がカラメル色になる
まで煮つめた。鍋を火から外し荒熱を取り、熱いうちに
サラダ油を塗ったプリン型１２個に等分に流し込んだ。
ＡＣＥ阻害活性ペプチド一種類または二種類以上混合し
たもの５０ｍｇ加え、よく混ぜ、バットに水を張って冷
やした。
用途としては、以下の実施例に限定されるものではな
い。ACE阻害活性ペプチドは上記実施例１から４のいず
れかの方法に従って得た。グラニュー糖１００ｇを小鍋
にとり、水５０ｃｃを加えて火に掛け煮溶かし、鍋をま
わしながら、薄く煙がたって砂糖水がカラメル色になる
まで煮つめた。鍋を火から外し荒熱を取り、熱いうちに
サラダ油を塗ったプリン型１２個に等分に流し込んだ。
ＡＣＥ阻害活性ペプチド一種類または二種類以上混合し
たもの５０ｍｇ加え、よく混ぜ、バットに水を張って冷
やした。
【００３５】小鍋で牛乳７００ｃｃを中火で沸騰寸前ま
で温め、バニラエッセンスを加えて火を止めた。ボール
に卵４個、卵黄５個分をいれ、泡立てないようにほぐし
十分にかき混ぜた。砂糖を加え全体によく混ぜ込み、先
に暖めておいた牛乳でのばした。これをこしきでこし
て、上記のカラメルソースが固まったそれぞれのプリン
型に等分に注いだ。これをテンパンに並べ、湯を型の１
／４まで注ぎ、オーブンで約３０分蒸し焼いた。蒸した
後、型から出して皿に盛りつけ、高血圧低下プリンを作
った。
で温め、バニラエッセンスを加えて火を止めた。ボール
に卵４個、卵黄５個分をいれ、泡立てないようにほぐし
十分にかき混ぜた。砂糖を加え全体によく混ぜ込み、先
に暖めておいた牛乳でのばした。これをこしきでこし
て、上記のカラメルソースが固まったそれぞれのプリン
型に等分に注いだ。これをテンパンに並べ、湯を型の１
／４まで注ぎ、オーブンで約３０分蒸し焼いた。蒸した
後、型から出して皿に盛りつけ、高血圧低下プリンを作
った。
【００３６】
【発明の効果】以上説明したとおり、本発明によれば、
これまで殆んど使用用途がなかった家畜血液から、アン
ジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドを単離することが
できる。また、そのペプチドのアミノ酸配列を決定した
ことにより、合成ペプチドからも同様の活性が得られ
た。
これまで殆んど使用用途がなかった家畜血液から、アン
ジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドを単離することが
できる。また、そのペプチドのアミノ酸配列を決定した
ことにより、合成ペプチドからも同様の活性が得られ
た。
【００３７】配列番号：１ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状(linear) 配列の種類：ペプチド(peptide) 起源 生物名：Sus scrofa domestica
【００３８】配列番号：２ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状(linear) 配列の種類：ペプチド(peptide) 起源 生物名：Sus scrofa domestica
【００３９】配列番号：３ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状(linear) 配列の種類：ペプチド(peptide) 起源 生物名：Sus scrofa domestica
【００４０】配列番号：４ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状(linear) 配列の種類：ペプチド(peptide) 起源 生物名：Sus scrofa domestica
【００４１】配列番号：５ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状(linear) 配列の種類：ペプチド(peptide) 起源 生物名：Sus scrofa domestica
【図１】実施例１においてアンジオテンシンＩ変換酵素
阻害能を持つペプチドをＨＰＬＣ条件１で分離したチャ
ートを示す。
阻害能を持つペプチドをＨＰＬＣ条件１で分離したチャ
ートを示す。
【図２】実施例１においてＨＰＬＣ条件１で分離した画
分Ｉ−１を、さらにＨＰＬＣ条件２で分離したチャート
を示す。
分Ｉ−１を、さらにＨＰＬＣ条件２で分離したチャート
を示す。
【図３】実施例１においてＨＰＬＣ条件１で分離した画
分II−１を、さらにＨＰＬＣ条件２で分離したチャート
を示す。
分II−１を、さらにＨＰＬＣ条件２で分離したチャート
を示す。
【図４】実施例１においてＨＰＬＣ条件１で分離した画
分 III−１および III−２を、さらにＨＰＬＣ条件２で
分離したチャートを示す。
分 III−１および III−２を、さらにＨＰＬＣ条件２で
分離したチャートを示す。
【図５】実施例１においてＨＰＬＣ条件２で分離した画
分 III−２を、さらにＨＰＬＣ条件３で分離したチャー
トを示す。
分 III−２を、さらにＨＰＬＣ条件３で分離したチャー
トを示す。
【図６】実施例２においてアンジオテンシンＩ変換酵素
阻害能を持つペプチドをＨＰＬＣ条件４で分離したチャ
ートを示す。
阻害能を持つペプチドをＨＰＬＣ条件４で分離したチャ
ートを示す。
【図７】実施例２においてＨＰＬＣ条件４で分離した画
分 IV −１、 IV −２ およびIV −３を、さらにＨＰ
ＬＣ条件５で分離したチャートを示す。
分 IV −１、 IV −２ およびIV −３を、さらにＨＰ
ＬＣ条件５で分離したチャートを示す。
【図８】実施例２においてＨＰＬＣ条件４で分離した画
分Ｖを、さらにＨＰＬＣ条件６で分離したチャートを示
す。
分Ｖを、さらにＨＰＬＣ条件６で分離したチャートを示
す。
【図９】実施例２においてＨＰＬＣ条件５で分離した画
分 IV −１を、さらにＨＰＬＣ条件７で分離したチャー
トを示す。
分 IV −１を、さらにＨＰＬＣ条件７で分離したチャー
トを示す。
【図１０】実施例２においてＨＰＬＣ条件５で分離した
画分 IV −２を、さらにＨＰＬＣ条件７で分離したチャ
ートを示す。
画分 IV −２を、さらにＨＰＬＣ条件７で分離したチャ
ートを示す。
【図１１】実施例２においてＨＰＬＣ条件５で分離した
画分 IV −３を、さらにＨＰＬＣ条件７で分離したチャ
ートを示す。
画分 IV −３を、さらにＨＰＬＣ条件７で分離したチャ
ートを示す。
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 37/18 ＡＢＵ 8314−4Ｃ 37/64 ＡＥＱ 8314−4Ｃ Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ０７Ｋ 99:00
Claims (4)
- 【請求項１】 下記構造を有するアンジオテンシンＩ変
換酵素阻害ペプチド。 Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｘ （式中、ＸはＧｌｙ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，または アミノ
酸残基なし を示す。） - 【請求項２】 家畜赤血球を酵素分解し分離精製するこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１項の構造を有するア
ンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドの製造法。 - 【請求項３】 化学合成法により合成することを特徴と
する特許請求の範囲第１項記載の構造を有するアンジオ
テンシンＩ変換酵素阻害ペプチドの製造法。 - 【請求項４】 特許請求の範囲第１項の構造を有するア
ンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドを少なくとも１
種類含む食品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4262733A JPH0649096A (ja) | 1991-09-30 | 1992-09-07 | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害ペプチドおよびその製造法ならびにそれを含む食品 |
Applications Claiming Priority (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27633891 | 1991-09-30 | ||
| JP3696892 | 1992-01-29 | ||
| JP4-166741 | 1992-06-03 | ||
| JP4-36968 | 1992-06-03 | ||
| JP3-276338 | 1992-06-03 | ||
| JP16674192 | 1992-06-03 | ||
| JP4262733A JPH0649096A (ja) | 1991-09-30 | 1992-09-07 | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害ペプチドおよびその製造法ならびにそれを含む食品 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0649096A true JPH0649096A (ja) | 1994-02-22 |
Family
ID=27460347
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4262733A Pending JPH0649096A (ja) | 1991-09-30 | 1992-09-07 | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害ペプチドおよびその製造法ならびにそれを含む食品 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0649096A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6767990B1 (en) | 1999-12-01 | 2004-07-27 | Food Industry Research And Development Institute | Peptides used as angiotensin converting enzyme inhibitor and preparation process thereof |
| US10668766B2 (en) | 2016-02-11 | 2020-06-02 | Societe Bic | Mechanical pencil with a side button and an eraser dispenser and a method of assembly |
-
1992
- 1992-09-07 JP JP4262733A patent/JPH0649096A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6767990B1 (en) | 1999-12-01 | 2004-07-27 | Food Industry Research And Development Institute | Peptides used as angiotensin converting enzyme inhibitor and preparation process thereof |
| US10668766B2 (en) | 2016-02-11 | 2020-06-02 | Societe Bic | Mechanical pencil with a side button and an eraser dispenser and a method of assembly |
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