JP3454545B2 - アンジオテンシンｉ変換酵素阻害トリペプチドおよびその製造法ならびにそれを含む食品 - Google Patents
アンジオテンシンｉ変換酵素阻害トリペプチドおよびその製造法ならびにそれを含む食品Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アンジオテンシンＩ変
換酵素阻害ペプチドおよび同ペプチドの製造および利用
法に関する。
換酵素阻害ペプチドおよび同ペプチドの製造および利用
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】高血圧症は、最大血圧が１６０ｍｍＨｇ
以上か、最小血圧が９５ｍｍＨｇ以上または両者がそれ
以上の状態である。わが国では患者数が約２０００万人
であるといわれ、り患率の高い疾病である。高血圧症
は、脳出血、脳梗塞、クモ膜下出血、狭心症、心筋梗
塞、腎硬化症、腎不全、網膜静脈閉塞症など広範囲の臓
器にわたって様々な合併症を生じることが知られてお
り、有効な治療薬が望まれている。生体内において血圧
を調節するメカニズムの一つとして、昇圧系であるレニ
ン−アンジオテンシン系と降圧系であるカリクレイン−
キニン系がある。レニン−アンジオテンシン系では酵素
レニンが腎臓の傍糸球体細胞（Ｊ．Ｇ細胞）で生成さ
れ、血管でレニン基質であるところのアンジオテンシノ
ーゲンに作用してアンジオテンシンＩを生成する。この
アンジオテンシンＩをアンジオテンシンＩＩに変換する
酵素がアンジオテンシンＩ変換酵素であり、生じたアン
ジオテンシンＩＩは細動脈に作用して収縮を起こさせ
る。また、アンジオテンシンＩＩは副腎皮質にも作用し
てアルドステロンの合成と分泌を促し、腎臓でのナトリ
ウムの再吸収を促進し、体液量を保持する働きもある。
このようにしてアンジオテンシンＩＩによって血圧が上
昇する。
以上か、最小血圧が９５ｍｍＨｇ以上または両者がそれ
以上の状態である。わが国では患者数が約２０００万人
であるといわれ、り患率の高い疾病である。高血圧症
は、脳出血、脳梗塞、クモ膜下出血、狭心症、心筋梗
塞、腎硬化症、腎不全、網膜静脈閉塞症など広範囲の臓
器にわたって様々な合併症を生じることが知られてお
り、有効な治療薬が望まれている。生体内において血圧
を調節するメカニズムの一つとして、昇圧系であるレニ
ン−アンジオテンシン系と降圧系であるカリクレイン−
キニン系がある。レニン−アンジオテンシン系では酵素
レニンが腎臓の傍糸球体細胞（Ｊ．Ｇ細胞）で生成さ
れ、血管でレニン基質であるところのアンジオテンシノ
ーゲンに作用してアンジオテンシンＩを生成する。この
アンジオテンシンＩをアンジオテンシンＩＩに変換する
酵素がアンジオテンシンＩ変換酵素であり、生じたアン
ジオテンシンＩＩは細動脈に作用して収縮を起こさせ
る。また、アンジオテンシンＩＩは副腎皮質にも作用し
てアルドステロンの合成と分泌を促し、腎臓でのナトリ
ウムの再吸収を促進し、体液量を保持する働きもある。
このようにしてアンジオテンシンＩＩによって血圧が上
昇する。
【０００３】一方、カリクレイン−キニン系では、蛋白
分解酵素であるカリクレインが、基質であるところのキ
ニノーゲンに作用してキニンを生じる。キニンは血管を
拡張させ、血圧を下げる働きを有するが、キニナーゼＩ
Ｉによって分解を受ける。キニナーゼＩＩはアンジオテ
ンシンＩ変換酵素と同一物質であることが知られてい
る。以上のことから、アンジオテンシンＩ変換酵素を阻
害することによる高血圧の治療を行うことができると考
えられる。この考え方により現在カプトプリル、エナラ
プリル、アラセプリル等の合成医薬が開発されている。
また、天然物からはカゼインやゼラチン、魚肉、家畜の
血液などに由来するペプチドもアンジオテンシンＩ変換
酵素を阻害する働きがあることが知られている。（特開
昭５９−４４３２４号、特開昭６４−５４９７号、特開
平０１−３１３４９８号）
分解酵素であるカリクレインが、基質であるところのキ
ニノーゲンに作用してキニンを生じる。キニンは血管を
拡張させ、血圧を下げる働きを有するが、キニナーゼＩ
Ｉによって分解を受ける。キニナーゼＩＩはアンジオテ
ンシンＩ変換酵素と同一物質であることが知られてい
る。以上のことから、アンジオテンシンＩ変換酵素を阻
害することによる高血圧の治療を行うことができると考
えられる。この考え方により現在カプトプリル、エナラ
プリル、アラセプリル等の合成医薬が開発されている。
また、天然物からはカゼインやゼラチン、魚肉、家畜の
血液などに由来するペプチドもアンジオテンシンＩ変換
酵素を阻害する働きがあることが知られている。（特開
昭５９−４４３２４号、特開昭６４−５４９７号、特開
平０１−３１３４９８号）
【０００４】
【発明が解決しようとしている課題】カプトプリルは、
内服で強力な血圧降下作用を示す。しかし、使用量が不
適当であると腎機能障害や低血圧をもたらす。また、分
子内に存在するＳＨ基のため、発疹や味覚異常を引き起
こすとも言われている。安価な天然物を原料とするアン
ジオテンシンＩ変換酵素阻害物質であるカゼイン、ゼラ
チン、魚肉などに由来するペプチドは分離精製が困難な
上、収率が悪い。本発明では、アンジオテンシンＩ変換
酵素を阻害するペプチドを見い出し、同ペプチドの製造
法を確立し、これを応用した食品を開発することによ
り、本発明を完成した。
内服で強力な血圧降下作用を示す。しかし、使用量が不
適当であると腎機能障害や低血圧をもたらす。また、分
子内に存在するＳＨ基のため、発疹や味覚異常を引き起
こすとも言われている。安価な天然物を原料とするアン
ジオテンシンＩ変換酵素阻害物質であるカゼイン、ゼラ
チン、魚肉などに由来するペプチドは分離精製が困難な
上、収率が悪い。本発明では、アンジオテンシンＩ変換
酵素を阻害するペプチドを見い出し、同ペプチドの製造
法を確立し、これを応用した食品を開発することによ
り、本発明を完成した。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、アンジオテン
シンＩ変換酵素阻害ペプチドに関する。本ペプチドは、
Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）
−アミノ酸やｔ−Ｂｏｃ（ｔ−ブトキシカルボニル）−
アミノ酸などを用いる固相合成法、プロテアーゼを用い
るペプチド合成法など全ての既知の化学合成法［生化学
実験講座１，タンパク質の化学ＩＶ 第ＩＩ部 ペプチ
ド合成（Ｐ．２０５），日本生化学会編 東京化学同
人、続生化学実験講座２ タンパク質の化学下，２０章
ペプチド合成（Ｐ．６４１），日本生化学会編 東京化
学同人］で製造することができる。また本ペプチド配列
を含むタンパク質は天然に豊富に存在し、タンパク質分
解酵素を用いる等の適当な方法で加水分解することによ
り、効率よく得ることができる。
シンＩ変換酵素阻害ペプチドに関する。本ペプチドは、
Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）
−アミノ酸やｔ−Ｂｏｃ（ｔ−ブトキシカルボニル）−
アミノ酸などを用いる固相合成法、プロテアーゼを用い
るペプチド合成法など全ての既知の化学合成法［生化学
実験講座１，タンパク質の化学ＩＶ 第ＩＩ部 ペプチ
ド合成（Ｐ．２０５），日本生化学会編 東京化学同
人、続生化学実験講座２ タンパク質の化学下，２０章
ペプチド合成（Ｐ．６４１），日本生化学会編 東京化
学同人］で製造することができる。また本ペプチド配列
を含むタンパク質は天然に豊富に存在し、タンパク質分
解酵素を用いる等の適当な方法で加水分解することによ
り、効率よく得ることができる。
【０００６】
アンジオテンシンＩ変換酵素阻害の測定は、カッシュマ
ンらの方法（バイオケミカル・ファーマコロジー ２０
巻 １６３７〜１６４８頁（１９７１））を改良した丸
山らの方法（アグリカルチュアル・バイオロジカル・ケ
ミストリー４６巻５号（１３９３〜１３９４（１９８
２））に従った。
ンらの方法（バイオケミカル・ファーマコロジー ２０
巻 １６３７〜１６４８頁（１９７１））を改良した丸
山らの方法（アグリカルチュアル・バイオロジカル・ケ
ミストリー４６巻５号（１３９３〜１３９４（１９８
２））に従った。
【０００７】試験管に本ペプチド水溶液３０μｌと酵素
基質として、Ｌ−ヒプリルヒスチジルロイシン（シグマ
社製）とＮａＣｌを含有したｐＨ８．３のほう酸バッフ
ァー２５０μｌを加えて、３７℃で１０分間プレインキ
ュベーションした。その後、アンジオテンシンＩ変換酵
素含有液１００μｌを加え、酵素反応を開始した。この
時ほう酸バッファーの濃度は０．１ Ｍ 、Ｌ−ヒプリ
ルヒスチジルロイシン濃度は５ｍＭ、ＮａＣｌ ３００
ｍＭであり、阻害がかからない場合の酵素活性は、８ｍ
Ｕである。
基質として、Ｌ−ヒプリルヒスチジルロイシン（シグマ
社製）とＮａＣｌを含有したｐＨ８．３のほう酸バッフ
ァー２５０μｌを加えて、３７℃で１０分間プレインキ
ュベーションした。その後、アンジオテンシンＩ変換酵
素含有液１００μｌを加え、酵素反応を開始した。この
時ほう酸バッファーの濃度は０．１ Ｍ 、Ｌ−ヒプリ
ルヒスチジルロイシン濃度は５ｍＭ、ＮａＣｌ ３００
ｍＭであり、阻害がかからない場合の酵素活性は、８ｍ
Ｕである。
【０００８】３７℃、ｐＨ８．３で３０分間インキュベ
ートしながら反応させた後、１ＮＨＣｌ ２５０μｌを
加えて反応を停止させた。なお、盲検としては、アンジ
オテンシンＩ変換酵素含有液を加える前に１ＮＨＣｌを
加え、同様に処理した。酢酸エチル１．５ｍｌを加えて
１５秒振盪させて酵素反応で生じた馬尿酸を抽出し、２
０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し、酢酸エチル層１．
０ｍｌを試験管に採取した。酢酸エチルをホットドライ
バスのなかで１２０℃、３０分間加熱し完全に除去した
後、室温で５分間放置した。そして、水１．０ｍｌを加
え、生成した馬尿酸の量を２２８ｎｍの吸光度を測定し
て求めた。酵素反応に使用したアンジオテンシンＩ変換
酵素含有液は、ラビットラングアセトンパウダー（シグ
マ社製）１ｇを０．１Ｍほう酸バッファー（ｐＨ ８．
３）１０ｍｌに溶かしよく攪拌した後、４℃、４０００
０ｇで４０分間遠心分離した。その上澄を０．１Ｍほう
酸バッファー（ｐＨ８．３）で希釈して作成した。アン
ジオテンシンＩ変換酵素阻害活性は、下記の数１式を使
用して求めた。
ートしながら反応させた後、１ＮＨＣｌ ２５０μｌを
加えて反応を停止させた。なお、盲検としては、アンジ
オテンシンＩ変換酵素含有液を加える前に１ＮＨＣｌを
加え、同様に処理した。酢酸エチル１．５ｍｌを加えて
１５秒振盪させて酵素反応で生じた馬尿酸を抽出し、２
０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し、酢酸エチル層１．
０ｍｌを試験管に採取した。酢酸エチルをホットドライ
バスのなかで１２０℃、３０分間加熱し完全に除去した
後、室温で５分間放置した。そして、水１．０ｍｌを加
え、生成した馬尿酸の量を２２８ｎｍの吸光度を測定し
て求めた。酵素反応に使用したアンジオテンシンＩ変換
酵素含有液は、ラビットラングアセトンパウダー（シグ
マ社製）１ｇを０．１Ｍほう酸バッファー（ｐＨ ８．
３）１０ｍｌに溶かしよく攪拌した後、４℃、４０００
０ｇで４０分間遠心分離した。その上澄を０．１Ｍほう
酸バッファー（ｐＨ８．３）で希釈して作成した。アン
ジオテンシンＩ変換酵素阻害活性は、下記の数１式を使
用して求めた。
【０００９】
【数１】
Ａ：蒸留水添加時の吸光度 （２２８ｎｍ）
Ｂ：阻害剤添加時の吸光度 （２２８ｎｍ）
ａ，ｂ：それぞれに対する盲検の吸光度 （２２８ｎ
ｍ） この方法で上記ペプチドのＩＣ50は、２７．５μＭ（配
列表１）であった。
ｍ） この方法で上記ペプチドのＩＣ50は、２７．５μＭ（配
列表１）であった。
【００１０】（実施例２）以下に本発明の食品への実施
例を示すが、本ペプチドの用途としては，以下の実施例
に限定されるものではない。ペプチド含有ハンバーグを
次のようにして作成した。牛肉３０、鶏肉３０、玉ねぎ
２５、パン粉１０、タマゴ４、でんぷん１の組成比重の
ハンバーグ６０ｇあたりペプチドを１種類または２種類
以上混合で５０ｍｇ加え，よく混ぜ合わせた。その後，
オーブンで焼き、ペプチド含有ハンバーグを作成した。
このハンバーグのペプチド含有量は，ハンバーグを食す
る対象者によって増減可能である。
例を示すが、本ペプチドの用途としては，以下の実施例
に限定されるものではない。ペプチド含有ハンバーグを
次のようにして作成した。牛肉３０、鶏肉３０、玉ねぎ
２５、パン粉１０、タマゴ４、でんぷん１の組成比重の
ハンバーグ６０ｇあたりペプチドを１種類または２種類
以上混合で５０ｍｇ加え，よく混ぜ合わせた。その後，
オーブンで焼き、ペプチド含有ハンバーグを作成した。
このハンバーグのペプチド含有量は，ハンバーグを食す
る対象者によって増減可能である。
【００１１】
【発明の効果】以上説明したとおり、本発明によれば、
新規なアンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドを合成
し、食品に応用することができた。
新規なアンジオテンシンＩ変換酵素阻害ペプチドを合成
し、食品に応用することができた。
【００１２】
配列番号：１
配列の長さ：３
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直線状(linear)
配列の種類：ペプチド(peptide）
配列：Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｐｒｏ
１
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C07K 5/08
C07K 7/14
A23L 1/305 - 1/317
ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
ＣＡ（ＳＴＮ)
Claims (3)
- 【請求項１】 下記構造を有するアンジオテンシンＩ変
換酵素阻害ペプチド。 Ｐ ｈｅ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ - 【請求項２】 化学合成法により合成することを特徴と
する請求項１記載の構造を有するアンジオテンシンＩ変
換酵素阻害ペプチドの製造法。 - 【請求項３】 請求項１記載の構造を有するアンジオテ
ンシンＩ変換酵素阻害ペプチドを含む食品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21214193A JP3454545B2 (ja) | 1992-10-16 | 1993-08-05 | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害トリペプチドおよびその製造法ならびにそれを含む食品 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4-303141 | 1992-10-16 | ||
| JP30314192 | 1992-10-16 | ||
| JP21214193A JP3454545B2 (ja) | 1992-10-16 | 1993-08-05 | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害トリペプチドおよびその製造法ならびにそれを含む食品 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06179695A JPH06179695A (ja) | 1994-06-28 |
| JP3454545B2 true JP3454545B2 (ja) | 2003-10-06 |
Family
ID=26519018
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21214193A Expired - Fee Related JP3454545B2 (ja) | 1992-10-16 | 1993-08-05 | アンジオテンシンｉ変換酵素阻害トリペプチドおよびその製造法ならびにそれを含む食品 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3454545B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1472276A4 (en) * | 2001-02-28 | 2007-05-09 | Keith M Skubitz | PEPTIDES OF SMALL SIZE CAPACITY TO MODULATE THE FUNCTION OF THE MEMBERS OF THE FAMILY OF CD66 (CEACAM) |
-
1993
- 1993-08-05 JP JP21214193A patent/JP3454545B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06179695A (ja) | 1994-06-28 |
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