JPH0262828A - 新規ベプチドおよびこれを含有する降圧剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規ペプチドおよびこれを含有する降圧剤に
関する。

従来の技術 近年、牛乳カゼイン等の食品蛋白質の酵素分解物中にオ
ピオイドペプチド（１）　、　Ｃａ吸収促進ペグテド、
アンノオテンシン変換酵素阻害ペプチド（２）　＃。

種々の薬理活性ペグチドが存在することが報告されてき
た。これは、食品が単に栄養面での重要性を持つだけで
なく、外在性の因子として生体の制御に関与している可
能性を示していると考えられる。しかしこのようなペプ
チドの生理４的意義は今のところほとんど明らかにされ
ていない。

参考文献 （１）：　１）　　Ｖ、Ｂｒａｎｔｌ、Ｈ，Ｔａ５ａｈ
＠ｍａｃｈ＊ｒ、　Ａ。

Ｈａｎｉｈ＊ｎ、　ａｎｄ　Ｆ、Ｌｏｔｔｍｐ＠ｉ＠ｈ
、　Ｈｏｐｐ＠−８＠ｙｌａｒｓＺ、Ｐｈｙｓｉｏｌ、
Ｃｈ＠ｍ、　３６０．１２１１　（１９７９）。

２）　　　Ｓ、ＬｏｕｋａｓｓＤ、Ｖａｒｏｕｅｈａ＋
Ｃ，Ｚｌｏｕｄｒｏｕ、。

４５６７（１９８３）。

（２）：　　Ｓ、Ｍａｒｕｙａｎｎ、に、Ｎａｋｍｇｏ
ｍｉ、Ｎ、Ｔｏｍｉｓｕｋａ　　＃ａｔｓｄ　Ｈ，５ｕ
ｚｕｋｉ＋　　ＡＨ（ｒｉｅ、Ｂｉｏｌ、ｃｈ＠ｍ、＋
　　４９（５）＋一方、従来の医薬品は、多くの場合副
作用尋を有し安全性の問題を抱えてＩ！九ため、副作用
が少なく、安全性の旨い薬剤の開発が］ｉ′ｉ！ｉなＩ
ｔｅｍとなりている。上記のような食品蛋白質由来のペ
プチドを、医薬品等として利用する場合、これらの起源
が日常状々が摂取する食品であることから、極めて安全
性の高い本のが得られると考えられる。

さらに人間にとっては異種タンノククである牛乳カゼイ
ンではなく１人乳カゼインを用い、この中から薬理活性
ペプチドを見い出すことにより、より安全性の高いもの
を得ることが可能である。しかし人乳カゼインを量的に
得ることは困難であり。

また酵素分解による方法では、用いる酵素の基質特異性
や灰石条件等により、生じるペプチドが変化して目的ペ
プチドが得られるとは限らない。

発明が解決しようとする課題 前記薬理活性が高くかつ作用が藺やかで、副作用の少な
く医薬に適したものの開発が期待されている。

前記問題点を解決すべく鋭意検討′ｔ−重ねた結果本発
明者らは構造既知のヒトβ−カゼイン中のペプチドフラ
グメントを種々検討し、下記ペプチドを新規に合成する
ことに成功し、かつ、降圧剤として優れていることを見
出し１本発明を完我するに到りた。即ち１本発明は、下
記構造式のいずれかで示される新規ペプチドおよびその
塩、及びこれらの少なくとも一種を有効成分として含有
する降圧剤である。

Ｉ ｈ 一 塩の形態の場合、その塩類としては、塩酸塩。

臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、リン陵塩郷の
無機酸塩および酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン敗
塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、乳酸塩。

メタンスルホンｆｉｌ塩、Ｐ　−）ルエンスルホン酸塩
等の有機酸塩が挙けられる。なお、降圧剤に含有する場
合は、医薬上許容される塩の形態をとる。

ペプチドを構成するアミノ酸は、天然に存在するという
点でＬ一体が望ましい。

本発明のペプチドはペプチド合成に通常用いられる固相
法で、−（デチド結合の任意の位置で二分される２種の
フラグメントの一方に相当する反応性カルボキシル基を
有する原料と、他方の７ラグメントに相当する反応性ア
ミン基を有する原料をジシクロへキシルカルざシイミド
法を用いて縮合させ、生成する縮合物が保護基を有する
場合、その保慢基を除去させることにより製造し得る。

この反応工程において反応に関与すべきでない官能基は
、保護基により保護される。アミン基の保護基としては
、例えはペンゾルオキシカルゲニル、ｔ−ブチルオキシ
カルブニル、Ｐ−ビフェニルイノグロビルオキシ力ルダ
ニル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル等が挙
げられる。Ｃ端のカルＭｄｆ−シル基はクロルメチル樹
脂、オキシメチル国脂、Ｐ−アルコキシベンジルアルコ
ール樹脂等の担体に結合している。

権合反応は、ジシクロへキシルカルｔｆ９イ（１’等の
縮合剤の存在下にて実施する。

縮合反ら終了後、保護基は除去され、さらにペプチドの
Ｃ端と樹脂との結合を切断する。

さらに、本発明の新規ペグテドは通常の方法に従い精製
される。例えばイオン交換クロマドグ２フイー、逆相液
体クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフ
ィー等が挙げられる。

本発明の降圧剤の有効成分として使用するペプチドまた
はその塩の投与経路としては、経口投与、非経口投与、
直腸内投与のいずれでもよいが、経口投与が好ましい。

本発明のペプチドまたはその塩の投与量は、化合物の種
間、投与方法、患者の症状・年令等により異なるが、通
常１回０．００１〜１０００１９、好ましくは０．０１
〜１０ダｔ−１日当り１〜３回である。本発明のペプチ
ドまたはその塩は通常、製剤用担体と混合して１１ｉ製
した製剤の形で投与してもよい。製剤用担体としては、
製剤分野において常用され、かつ本発明のペプチドまた
はその塩と反応しない物質が用いられる。具体的には、
例えば乳糖、ブドウ糖、マンニット、デキストリン、シ
クロデキストリン、デングン、ｍｗ、メタケイ酸アルミ
ン酸マグネシクム、合成ケイ酸アルミニウム、結晶セル
ロース、カルＭキシメチルセルロースナトリウム、ヒド
ロキシグロビルデングン、カルボキシメチルセルロース
カルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロース、ゼラ
チン、アラビアゴム、ヒドロキシグロビルセルロ−，ｘ
　、　低＠ｊｐ４度ヒドロキシグロビルセルロース、ヒ
ト四キシグロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリ
ドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケイ酸、ステア
リン醒マグネシクム、メルク、トラがント、べｙトナイ
ト、ビーガム、カル〆キシビニルボリマー、酸化ブタン
、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム
、グリ＋リン、脂肪酸グリセリンエステル、Ｐｗ製２ノ
υン、グリセロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴー
ル、植物油、ロク、流動・母ヲフィン、白色ワセリン１
フルオｐカーボン、非イオン界面活性剤、グロビレ／グ
リ；−ル、水等が挙げられる。剤型としては、錠剤、カ
ブセル剤、顆粒剤、散剤、シロラグ剤、Ｍ層剤、坐剤％
軽膏、クリーム剤、ｒル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等
が挙げられる。これらの製剤は常法に従りて調製される
。なお液体製剤にありては、用時、水又は他の適当な媒
体に溶解又はｓｉｉする形であってもよい。また錠剤、
顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよ１０注射剤
の場合には、本発明のイグチドまたはその塩を水に溶解
させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水あるいは
ブドク循溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤
を添加してもよい。

ヒれらの製剤は、本発明のイグチドまたはその塩を０．
２ｓ以上、好ましくは０．５〜７０％の割合で含有する
ことができる。これらの製剤Ｆｉ１次、治療上価値ある
他の成分を含有していてもよい。

実施例 以下、実施例によシ本発明’ｉ−Ａ体的に説明する。

なお、本明細書中で用いた略号は、次の意味を有する。

Ａｌａアラニン（μ下アミノ酸は傘て５体）、。

Ａｒｇアルギニン ＡｓＨアスｔ！　７　ｄｆ　ｙ Ａｓｐアス／＃２ギ／酸 Ｇｉｎグルタミン Ｇｌｕグルタミン酸 Ｇｌｙグリシン Ｈ１ｇヒスチジン ■１・イソロイシ／ Ｌ・Ｕロイシン Ｌｙａリジン Ｍ＠ｔメチオニン ｐｈ・フェニルアラニン ｐｒｏグロリン Ｓ・ｒセリン Ｔｈｒスレオニン Ｔｒｐ　トリブトファン Ｔｙｒチロシン Ｍａｌバリン Ｐｙｒピログルタミン酸 Ｂｏａ　ｔ−ブチルオキシカル？ニル基Ｆｒｎｏ＠９−
フルオレニルメチルオキシカルｌニル基７１０Ｂｔ　　
１−ヒドロキシベンゾトリアゾールＤＭＦジメチルホル
ムアミド Ｂｕｔ　七−グチル基 ＥＤＴ人エチレンジアミン四酢酸 ＴＬＣ薄層クロマトグラフィー 実施例１ Ｌａｕ−Ｈｌｉ−Ｌｓｕ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒ。

Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ　ｌｉｄ脂（Ｆｍｏｅ−Ｐｒｏ　ＯＨ
が０．５３ミリモル／ｇ樹脂の割合で尋人されているｐ
−アルコキシペンシルアルコール樹脂）１５０１１５１
を振とうできるように装置し九Ｍ・ｒｒｉｆｌｅｌｄの
固相法用反応装置にとシ、ＤＭＦ　（１０Ｒｔ＞に懸濁
し３０分間振とうし、Ｆｍｏａ−Ｐｒｏ樹脂ｔ−＊　潤
させた。

これを、以下のｐ’ｍｏａ基除去サイクルに付した。

亀）ＤＭＦＩＭ中、１分間撮と？（１回）。

ｂ）５０％ビグリジン−ＤＭＦ溶液ｌｏｄ中、３分間振
とり。

ａ＞　　５ｏｓピペリジ：ｙ　−ＤＭＦ　ｍ数１０ｍ中
でＩＯ分間振とうし、　ｐ’ｒｎ６ａ基を脱離する。

ｄ）ＤＭＦＩＯＨｌで４回洗浄。

ｅ）イソグロパノール１０ｍで１回洗浄。

ことで、Ｋａｌｓｅｒ法（Ｅ、Ｋａｉｇ会ｒ　ａｔ　ａ
ｌ、、Ａｎａｌ−Ｂｉｏａｈ＊ｔｎ、　３４．５９５（
１９７０））にょシ、Ｆｍｏｃ　１５が完全に除去しｔ
ことを確認し、もし、不完全ならば上記の除去サイクル
を繰り返し之。また、完全に除去されているならば、以
下に示す縮合サイクルに供し念。

ｆ）　　Ｆｍｏｅ基除去サイクルで得られたＨ−Ｐｒｏ
　Ｑ脂ｆ、ＤＭＦ２０ｊＬ／で２回振とぅすることによ
りて膨潤させた。

ｇ）　　Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（８４’Ｓ’、０．２
４ｔリモル）、Ｈｏｎｔ　　（３１ｖ、０．２９　＜　
ｖ４ル）　ＯｃＨ２ＣＬ２：　ＤＭＦ”−９：ｌ溶液（
１０ゴ）ｔ−加え、１分間擾とぅする。

ｈ）１Ｍジシクロへキシルカルボシイでドｍ化メチレ／
酊液０．２６４１１ｔを添加し、７００分間振うとする
。

１）ＤＭＦＩＯＩＩＪ’で２回洗浄。

ｊ）　　イソグロノぐノール１０ｄで２回洗浄。

ここで、Ｋａｉｓ＠ｒ法によって縮合が完了しているか
否かを確認し、もし、不完全ならば、上記の縮合サイク
ルをａシ返した。

Ｆｍｏｅ″′Ｐｒｏ″″樹脂を用いている場合は、ここ
でのＦｍｏｏ基除去サイクルとして以下の方法を用いた
。

ｋ）ＤＭＦ１０酩中、１分間振とり（１回）。

１）Ｏ，２Ｓピ々リジ／−ＤＭＦ　溶液１０ａｊ中？１
０分間撮とりを４回〈シ返えし、Ｆｍｏａ基を脱離する
。

ｍ）ＤＭＦ’１Ｏ１ｌｌで２回洗浄。

ｎ）　　イングロノ４ノール１０ＩＩＬｔで１　［ｆｆ
ｌ洗浄。

ここで、Ｋａｌｎｒ法によってＦｔｎｏｅ基が除去され
ていることを確認した、セしてｇ）スラッグｔ−Ｆｍｏ
ａ−Ｐｒｏ−ＯＨで行なう縮合サイクルに付した。以後
同様に、　ｆｒｎｏｅ基除去ティクルとｊ”ｍｏｃアミ
ノ酸縮合サイすＡ／？繰り返してＦｍｏａ−Ｌ＠ａ　Ｏ
Ｈ、ＦｒｆＩｏｎ　Ｈｌｓ（Ｆｍｏａ）ＯＨｓ　ＢＯｅ
−Ｌｅａ−ＯＨ縮合するσこうしてＢｏａ−Ｌ＠ｕ−Ｈ
ｌｍ−Ｌ＠ｕ−Ｐｒｏ−Ｌ＠ｕ−ｐｒｏ　ｔ！Ｉ脂を得
、ついで、樹脂からの脱離工程に供した。

すなわち、塩化メチン／１０ｄで２回洗浄し、塩化メチ
レン（５１Ｌｌ）−アニソール（１，０ｄ　）−チオフ
ェノール（０，３３１１７）混合溶液に懸濁、続いて、
トリフルオロ酢４９（１０ｍ）−塩化メチレン（１，１
６Ｉｔｌ）ｔ−加え、１時間振とうし次。樹脂をろ過し
、得られたろ液を減圧濃縮して、残渣にエーテルを加え
、ろ過するととくよって、得られる白色粉末を逆相液体
クロマトグラフィーに供し、求めるＬｓｕ−Ｈｌｓ−Ｌ
ｓｕ−Ｐｒｏ−Ｌｅａ−Ｐｒｏ画分を分取し、得られる
溶出画分’ｔｓ縮乾固する。ついで、蒸留水を加え数回
濃縮乾固を繰シ返した後、少量の蒸留水にとかし、凍結
乾燥する。こうしてｍＩ製されｆｔ−Ｌ＠ｕ−Ｈｌｓ−
Ｌ＠ａ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ　ｔ−得た。精製物の
一部をとシＦＡＲ［量分計器によシ分子量測定を行って
ｍ／ｓ　：　６８９　（Ｍ“＋Ｈ）となシ理論値に一致
した。

さらに、６Ｎ−ＨＣ１水溶液で加水分解し、アぽノ酸分
析に供したところＰｒ６１１．９８、Ｌｓｕ、３．００
％Ｈ１ｓ＋０．９７の比となりこれもまた理論値、と−
枚した。従って、求めるベグテドが合成されていること
が確認され念。

純度は、薄層クロマトグラフィーと逆相液体クロマトグ
ラフィーで純度よく合成されていることを確認した。

実施例２〜２８ 上記実施例と同樋の方法にょシ下記化合物をそれぞれ合
成した。

莢施例２９　活性試験 本発明のイデチドを九はその塩は、アンジオテンシン変
換酵素阻害作用を有する。以下に酵素阻害作用について
説明する。

各ペグチド試料溶液１００μ７に、２２５μノの１０ｍ
Ｍｐ−ヒドロキシベンゾイルグリシル−Ｌ−ヒスチジル
−Ｌ−ロイシン、２．５　ｍＭ　４−アミノアンチピリ
ン、３ユニット／Ｍヒグリカーゼ（０，７ＭＮ　ａ　Ｃ
１含む０．１２Ｍホウ酸緩衝液の溶液）を加え３７℃で
３分間保温後、７０ミリユニツトの９サギ肺アンジオテ
ンシン変換騨ａＣｔ−加え反応を開始した。２０分間３
７℃に保温後、７５０μ！０３ｍｕ　ＥＤＴＡ　、　　
０．２　％トライトンＸ　−１００ｔ　６．５　ｍｈ５
過ヨウ素酸ナトリウム溶液を加え反応を停止し九後・引
１１３分間保温して発色させ、反応溶液ｔ−ｆｆ製氷を
対照として波長５０５　ｎｍで比色定量した。

阻害率５０チの時の試料の濃度′ｆ：ＩＣ５゜値として
、本発明の−ｅ７’チドの一部についての１を表１に示
すＯ 発明の効果 以上の結果から、本発明のペグチドは降圧作用を有し、
優れた降圧剤の提供が期待できる。従りて、本発明は、
医薬産業上極めて有用である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 下記構造式のいずれかで示されるペプチド およびその塩。 【遺伝子配列があります】 ２、下記構造式のいずれかで示されるペプチド又はその
   医薬上許容される塩を有効成分として含有する降圧剤。 【遺伝子配列があります】