JP2953634B2 - 新規ペプチド、その製造法及び用途 - Google Patents
新規ペプチド、その製造法及び用途Info
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- JP2953634B2 JP2953634B2 JP3098378A JP9837891A JP2953634B2 JP 2953634 B2 JP2953634 B2 JP 2953634B2 JP 3098378 A JP3098378 A JP 3098378A JP 9837891 A JP9837891 A JP 9837891A JP 2953634 B2 JP2953634 B2 JP 2953634B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、下記構造を有する新規
なペプチドを提供するものであり、アンギオテンシン変
換酵素阻害剤等として有用なペプチドに関する。 Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ
なペプチドを提供するものであり、アンギオテンシン変
換酵素阻害剤等として有用なペプチドに関する。 Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ
【０００２】
【従来の技術】アンギオテンシン変換酵素は、主として
肺や血管内皮細胞、腎近位尿細管に存在し、アンギオテ
ンシンＩ（ＡＳｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−
Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）に作用し
て、アンギオテンシンＩのＣ末端よりジペプチド（Ｈｉ
ｓ９−Ｌｅｕ１０ ）を開裂遊離させ、強力な昇圧作用
を有するアンギオテンシンＩＩを生成させる酵素であ
る。また、この酵素は生体内降圧物質であるブラジキニ
ンを破壊し不活化する作用も併有し、昇圧系に強力に関
与している。
肺や血管内皮細胞、腎近位尿細管に存在し、アンギオテ
ンシンＩ（ＡＳｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−
Ｈｉｓ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ）に作用し
て、アンギオテンシンＩのＣ末端よりジペプチド（Ｈｉ
ｓ９−Ｌｅｕ１０ ）を開裂遊離させ、強力な昇圧作用
を有するアンギオテンシンＩＩを生成させる酵素であ
る。また、この酵素は生体内降圧物質であるブラジキニ
ンを破壊し不活化する作用も併有し、昇圧系に強力に関
与している。
【０００３】従来より、アンギオテンシン変換酵素の活
性を阻害すれば、降圧に働き、臨床的には高血圧症の予
防、治療に有効であると考えられている。最近ではプロ
リン誘導体であるカプトプリルが合成され、降圧活性が
確認されて以来、種々のアンギオテンシン変換酵素阻害
物質の合成研究が盛んであり、又天然物からの取得も試
みられているところである。
性を阻害すれば、降圧に働き、臨床的には高血圧症の予
防、治療に有効であると考えられている。最近ではプロ
リン誘導体であるカプトプリルが合成され、降圧活性が
確認されて以来、種々のアンギオテンシン変換酵素阻害
物質の合成研究が盛んであり、又天然物からの取得も試
みられているところである。
【０００４】天然物由来のアンギオテンシン変換酵素阻
害剤は食品あるいは食品原料から得られるので低毒性で
安全性の高い降圧剤となることが期待されるからであ
る。
害剤は食品あるいは食品原料から得られるので低毒性で
安全性の高い降圧剤となることが期待されるからであ
る。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、天然物
中に見出されるアンギオテンシン変換酵素阻害物質は極
めてまれで、僅かにブラジル産や日本産蛇毒より得られ
たテプロタイド（ノナペプチド，ＳＱ２０８８１）等
や、ストレプトミセス属に属する放線菌の代謝産物ＩＳ
８３（特開昭５８−１７７９２０号公報）が知られてい
るに過ぎない。また、天然物を酵素処理して得られたア
ンギオテンシン変換酵素阻害物質としては、牛乳カゼイ
ンをトリプシンにより分解して得たペプチド類等が知ら
れているが（特開昭５８−１０９４２５号、同５９−４
４３２３号、同５９−４４３２４号、同６１−３６２２
６号、同６１−３６２２７号）新規な阻害物質の開発が
望まれているところである。
中に見出されるアンギオテンシン変換酵素阻害物質は極
めてまれで、僅かにブラジル産や日本産蛇毒より得られ
たテプロタイド（ノナペプチド，ＳＱ２０８８１）等
や、ストレプトミセス属に属する放線菌の代謝産物ＩＳ
８３（特開昭５８−１７７９２０号公報）が知られてい
るに過ぎない。また、天然物を酵素処理して得られたア
ンギオテンシン変換酵素阻害物質としては、牛乳カゼイ
ンをトリプシンにより分解して得たペプチド類等が知ら
れているが（特開昭５８−１０９４２５号、同５９−４
４３２３号、同５９−４４３２４号、同６１−３６２２
６号、同６１−３６２２７号）新規な阻害物質の開発が
望まれているところである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、かかる課
題を解決すべく天然物質で副作用の少ないアンギオテン
シン変換酵素阻害物質を鋭意探索した結果、アルブミン
を特定の酵素で加水分解した組成物中にアンギオテンシ
ン変換酵素阻害活性を有する物質の存在をつきとめ、該
物質が一般式Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅで示されるペプチ
ドであることを知見し、本発明を完成した。
題を解決すべく天然物質で副作用の少ないアンギオテン
シン変換酵素阻害物質を鋭意探索した結果、アルブミン
を特定の酵素で加水分解した組成物中にアンギオテンシ
ン変換酵素阻害活性を有する物質の存在をつきとめ、該
物質が一般式Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅで示されるペプチ
ドであることを知見し、本発明を完成した。
【０００７】本発明の一般式Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅで
示されるペプチドは文献未載の新規なペプチドであり、
アルブミンをペプシンによって加水分解することによっ
て製造され、実用にあたっては組成物をそのまま用いて
も良く、あるいは必要に応じて精製して使用される。更
にはペプチド合成の常套手段を適用して合成することに
よって製造することもできる。上記でいうＰｈｅはフェ
ニルアラニン、Ｃｙｓはシステインを意味し、かかるア
ミノ酸はいずれもＬ−体である。
示されるペプチドは文献未載の新規なペプチドであり、
アルブミンをペプシンによって加水分解することによっ
て製造され、実用にあたっては組成物をそのまま用いて
も良く、あるいは必要に応じて精製して使用される。更
にはペプチド合成の常套手段を適用して合成することに
よって製造することもできる。上記でいうＰｈｅはフェ
ニルアラニン、Ｃｙｓはシステインを意味し、かかるア
ミノ酸はいずれもＬ−体である。
【０００８】本発明のペプチドはアルブミンをペプシン
で加水分解することによっても、ペプチド合成法でも取
得できる。アルブミンをペプシンで加水分解するには、
アルブミンの性状により処法は異なるが、難溶性の場合
には熱水にアルブミンを混合し強力な撹拌でホモジナイ
ズし、所定量のペプシンを加え温度１０〜６０℃、好ま
しくは２０〜４０℃、ＰＨ０．１〜４．０で１０分〜３
日間静置又は撹拌反応を行う。
で加水分解することによっても、ペプチド合成法でも取
得できる。アルブミンをペプシンで加水分解するには、
アルブミンの性状により処法は異なるが、難溶性の場合
には熱水にアルブミンを混合し強力な撹拌でホモジナイ
ズし、所定量のペプシンを加え温度１０〜６０℃、好ま
しくは２０〜４０℃、ＰＨ０．１〜４．０で１０分〜３
日間静置又は撹拌反応を行う。
【０００９】アルブミンとしては動物や植物の体液及び
組織中に広く分布している卵白アルブミン、血清アルブ
ミン、乳アルブミン等が任意に用いられるが、特に卵白
アルブミンが有用である。加水分解液中には本発明のペ
プチド以外に、他のペプチドが存在してるが、これらは
混合物のままで各種の用途に用いられても良く、又、本
発明のペプチドのみを単離して用いても差し支えない。
組織中に広く分布している卵白アルブミン、血清アルブ
ミン、乳アルブミン等が任意に用いられるが、特に卵白
アルブミンが有用である。加水分解液中には本発明のペ
プチド以外に、他のペプチドが存在してるが、これらは
混合物のままで各種の用途に用いられても良く、又、本
発明のペプチドのみを単離して用いても差し支えない。
【００１０】単離する場合は加水分解液を遠心分離等の
公知の操作で濾過する。その後抽出、濃縮、乾固などを
適用した後、あるいはせずしてそのまま、種々の吸着剤
に対する吸着親和性の差、種々の溶剤に対する溶解性あ
るいは溶解度の差、２種の混ざり合わない液相間におけ
る分配の差、分子の大きさに基づく溶出速度の差、溶液
からの析出性あるいは析出速度の差などを利用する手段
を適用して目的物を単離するのが好ましい。これらの方
法は必要に応じて単独に用いられ、あるいは任意の順序
に組合せ、また反覆して適用される。
公知の操作で濾過する。その後抽出、濃縮、乾固などを
適用した後、あるいはせずしてそのまま、種々の吸着剤
に対する吸着親和性の差、種々の溶剤に対する溶解性あ
るいは溶解度の差、２種の混ざり合わない液相間におけ
る分配の差、分子の大きさに基づく溶出速度の差、溶液
からの析出性あるいは析出速度の差などを利用する手段
を適用して目的物を単離するのが好ましい。これらの方
法は必要に応じて単独に用いられ、あるいは任意の順序
に組合せ、また反覆して適用される。
【００１１】本発明のペプチドはペプチド合成に通常用
いられる方法、即ち液相法または固相法でペプチド結合
の任意の位置で二分される２種のフラグメントの一方に
相当する反応性カルボキシル基を有する原料と、他方の
フラグメントに相当する反応性アミノ基を有する原料と
をカルボジイミド法、活性エステル法等を用いて縮合さ
せ、生成する縮合物が保護基を有する場合、その保護基
を除去させることによっても製造し得る。
いられる方法、即ち液相法または固相法でペプチド結合
の任意の位置で二分される２種のフラグメントの一方に
相当する反応性カルボキシル基を有する原料と、他方の
フラグメントに相当する反応性アミノ基を有する原料と
をカルボジイミド法、活性エステル法等を用いて縮合さ
せ、生成する縮合物が保護基を有する場合、その保護基
を除去させることによっても製造し得る。
【００１２】この反応工程において反応に関与すべきで
ない官能基は、保護基により保護される。アミノ基の保
護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル、ｔ−
ブチルオキシカルボニル、ｐ−ビフェニルイソプロピロ
オキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル等が挙げられる。カルボキシル基の保護基として
は例えばアルキルエステル、ベンジルエステル等を形成
し得る基が挙げられるが、固相法の場合は、Ｃ末端のカ
ルボキシル基はクロルメチル樹脂、オキシメチル樹脂、
Ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂等の担体に結合
している。
ない官能基は、保護基により保護される。アミノ基の保
護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル、ｔ−
ブチルオキシカルボニル、ｐ−ビフェニルイソプロピロ
オキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカル
ボニル等が挙げられる。カルボキシル基の保護基として
は例えばアルキルエステル、ベンジルエステル等を形成
し得る基が挙げられるが、固相法の場合は、Ｃ末端のカ
ルボキシル基はクロルメチル樹脂、オキシメチル樹脂、
Ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂等の担体に結合
している。
【００１３】縮合反応は、カルボジイミド等の縮合剤の
存在下にあるいはＮ−保護アミノ酸活性エステルまたは
ペプチド活性エステルを用いて実施する。縮合反応終了
後、保護基は除去されるが、固相法の場合はさらにペプ
チドのＣ末端と樹脂との結合を切断する。更に、本発明
のペプチドは通常の方法に従い精製される。例えばイオ
ン交換クロマトグラフィー、逆相液体クロマトグラフィ
ー、アフィニティークロマトグラフィー等が挙げられ
る。
存在下にあるいはＮ−保護アミノ酸活性エステルまたは
ペプチド活性エステルを用いて実施する。縮合反応終了
後、保護基は除去されるが、固相法の場合はさらにペプ
チドのＣ末端と樹脂との結合を切断する。更に、本発明
のペプチドは通常の方法に従い精製される。例えばイオ
ン交換クロマトグラフィー、逆相液体クロマトグラフィ
ー、アフィニティークロマトグラフィー等が挙げられ
る。
【００１４】本発明で使用するペプチドの投与経路とし
ては、経口投与、非経口投与、直腸内投与のいずれでも
よいが、経口投与が好ましい。本発明のペプチドの投与
量は、化合物の種類、投与方法、患者の症状・年令等に
より異なるが、通常１回０．００１〜１０００ｍｇ、好
ましくは０．０１〜１０ｍｇを１日当たり１〜３回であ
る。本発明のペプチドは通常、製剤用担体と混合して調
製した製剤の形で投与される。製剤用担体としては、製
剤分野において常用され、かつ本発明のペプチドと反応
しない物質が用いられる。
ては、経口投与、非経口投与、直腸内投与のいずれでも
よいが、経口投与が好ましい。本発明のペプチドの投与
量は、化合物の種類、投与方法、患者の症状・年令等に
より異なるが、通常１回０．００１〜１０００ｍｇ、好
ましくは０．０１〜１０ｍｇを１日当たり１〜３回であ
る。本発明のペプチドは通常、製剤用担体と混合して調
製した製剤の形で投与される。製剤用担体としては、製
剤分野において常用され、かつ本発明のペプチドと反応
しない物質が用いられる。
【００１５】具体的には、例えば乳糖、ブドウ糖、マン
ニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプ
ン、庶糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケ
イ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチル
セルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロ
ース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ
ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケ
イ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガン
ト、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン
脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリ
ン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセ
ロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、
ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボ
ン、非イオン界面活性剤、プロピレングリコール、水等
が挙げられる。
ニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプ
ン、庶糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケ
イ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチル
セルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロ
ース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセ
ルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリ
ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケ
イ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガン
ト、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン
脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリ
ン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセ
ロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、
ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボ
ン、非イオン界面活性剤、プロピレングリコール、水等
が挙げられる。
【００１６】剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリーム
剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。
これらの製剤は常法に従って調製される。尚、液体製剤
にあっては、用時、水又は他の適当な媒体に溶解又は懸
濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方
法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発
明のペプチドを水に溶解させて調製されるが、必要に応
じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよ
く、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。
剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリーム
剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。
これらの製剤は常法に従って調製される。尚、液体製剤
にあっては、用時、水又は他の適当な媒体に溶解又は懸
濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方
法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発
明のペプチドを水に溶解させて調製されるが、必要に応
じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよ
く、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。
【００１７】これらの製剤は、本発明のペプチドを０．
０１％以上、好ましくは０．５〜７０％の割合で含有す
ることができる。これらの製剤はまた、治療上価値ある
他の成分を含有していてもよい。
０１％以上、好ましくは０．５〜７０％の割合で含有す
ることができる。これらの製剤はまた、治療上価値ある
他の成分を含有していてもよい。
【００１８】
【作用】本発明のペプチドは、新規なペプチドであり優
れたアンギオテンシン変換酵素阻害作用を有し、血圧降
下作用、ブラジキニン不活化抑制作用を示し、本態性高
血圧、腎性高血圧、副腎性高血圧などの高血圧症の予
防、治療剤、これらの疾患の診断剤や各種の病態におい
て用いられる血圧降下剤、狭心病発作の閾値上昇、心筋
梗塞の減少、うっ血性心不全における病態の改善剤とし
て有用である。
れたアンギオテンシン変換酵素阻害作用を有し、血圧降
下作用、ブラジキニン不活化抑制作用を示し、本態性高
血圧、腎性高血圧、副腎性高血圧などの高血圧症の予
防、治療剤、これらの疾患の診断剤や各種の病態におい
て用いられる血圧降下剤、狭心病発作の閾値上昇、心筋
梗塞の減少、うっ血性心不全における病態の改善剤とし
て有用である。
【００１９】
【実施例】次に実例を挙げて本発明を更に具体的に説明
する。生卵白を蒸留水で５倍に希釈溶解した後、１Ｎ−
ＨＣ１でＰＨ１．６に調整した溶解液（２０ｍｇ／ｍｌ
の蛋白を含む）にペプシン０．２ｍｇ／ｍｌ（シグマ社
製）を添加して３７℃、３時間静置反応を行い１００
℃、１０分間煮沸して反応を停止させた。この反応液を
１００００ｒＰｍで５分間遠心分離を行い、濃縮した後
高速液体クロマトグラフイー（ＯＤＳ−，ＰＨ−及びＣ
Ｎ−カラム）より精製し、ペプチドを得た。
する。生卵白を蒸留水で５倍に希釈溶解した後、１Ｎ−
ＨＣ１でＰＨ１．６に調整した溶解液（２０ｍｇ／ｍｌ
の蛋白を含む）にペプシン０．２ｍｇ／ｍｌ（シグマ社
製）を添加して３７℃、３時間静置反応を行い１００
℃、１０分間煮沸して反応を停止させた。この反応液を
１００００ｒＰｍで５分間遠心分離を行い、濃縮した後
高速液体クロマトグラフイー（ＯＤＳ−，ＰＨ−及びＣ
Ｎ−カラム）より精製し、ペプチドを得た。
【００２０】本品を気相プロテインシーケンサー（アブ
ライド バイオシステムズ社製 ４７７ Ａ型）を用い
る自動エドマン分解法を適用してアミノ酸配列を分析
し、下記の構造を得た。 Ｈ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−ＯＨ
ライド バイオシステムズ社製 ４７７ Ａ型）を用い
る自動エドマン分解法を適用してアミノ酸配列を分析
し、下記の構造を得た。 Ｈ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−ＯＨ
【００２１】該ペプチドの物性値はつぎのとうりであ
る。
る。
【００２２】〔ペプチドの合成〕市販のＢｏｃ（ブトキ
シカルボニル）−Ｐｈｅ−Ｏ−Ｒｅｓｉｎ ０．５３ｇ
（置換率０．５７ｍｅｑ／ｇ）をバイオサーチ社のペプ
チド合成装置ＳＡＭ２の反応槽に分取し、以下のように
合成を行った。４５％トリフルオロ酢酸、２．５％アニ
ソール、２％エタンジチオールを含む塩化メチレン中、
２５分間の反応により、Ｂｏｃ基を除去したのち、塩化
メチレンによる洗浄、１０％ジイソプロピルエチルアミ
ンを含む塩化メチレンによる中和、及び塩化メチレンに
よる洗浄を行った。これと５ｍｌの０．４Ｍ Ｂｏｃ−
Ｃｙｓ（ＭｅＯＢｚｌ）（メトキシベンジル基）のジメ
チルホルムアミド溶液、５ｍｌの０．４Ｍジイソプロピ
ルカルボジイミドの塩化メチレン溶液とを混合した後、
反応槽に加え、室温にて２時間撹拌反応させた。
シカルボニル）−Ｐｈｅ−Ｏ−Ｒｅｓｉｎ ０．５３ｇ
（置換率０．５７ｍｅｑ／ｇ）をバイオサーチ社のペプ
チド合成装置ＳＡＭ２の反応槽に分取し、以下のように
合成を行った。４５％トリフルオロ酢酸、２．５％アニ
ソール、２％エタンジチオールを含む塩化メチレン中、
２５分間の反応により、Ｂｏｃ基を除去したのち、塩化
メチレンによる洗浄、１０％ジイソプロピルエチルアミ
ンを含む塩化メチレンによる中和、及び塩化メチレンに
よる洗浄を行った。これと５ｍｌの０．４Ｍ Ｂｏｃ−
Ｃｙｓ（ＭｅＯＢｚｌ）（メトキシベンジル基）のジメ
チルホルムアミド溶液、５ｍｌの０．４Ｍジイソプロピ
ルカルボジイミドの塩化メチレン溶液とを混合した後、
反応槽に加え、室温にて２時間撹拌反応させた。
【００２３】得られた樹脂をジメチルホルムアミド、塩
化メチレン、１０％ジイソプロピルエチルアミンを含む
塩化メチレン、塩化メチレン更に塩化メチレン及びジメ
チルホルムアミドとの混合液で洗浄し、Ｂｏｃ−Ｃｙｓ
（ＭｅＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ樹脂を得た。引き続き同様の
Ｂｏｃ基の除去、Ｂｏｃとアミノ酸のカップリングを繰
り返しＰｈｅ−Ｃｙｓ（ＭｅＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ樹脂を
得た。
化メチレン、１０％ジイソプロピルエチルアミンを含む
塩化メチレン、塩化メチレン更に塩化メチレン及びジメ
チルホルムアミドとの混合液で洗浄し、Ｂｏｃ−Ｃｙｓ
（ＭｅＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ樹脂を得た。引き続き同様の
Ｂｏｃ基の除去、Ｂｏｃとアミノ酸のカップリングを繰
り返しＰｈｅ−Ｃｙｓ（ＭｅＯＢｚｌ）−Ｐｈｅ樹脂を
得た。
【００２４】該樹脂を２０ｍｌの１０％アニソールを含
むフッ化水素中で０℃、１時間撹拌し、ペプチドを樹脂
から遊離させた。フッ化水素を減圧留去し、残渣を３０
％酢酸で抽出し、凍結乾燥して粗ペプチドを得た。これ
をＯＤＳカラム（ＣｏｓｍｏＳｉｌ ５Ｃ１８）による
逆相クロマトグラフィーにより精製し、Ｈ−Ｐｈｅ−Ｃ
ｙｓ−Ｐｈｅ−ＯＨ（収量１００ｍｇ）を得た。本品を
前記と同一のプロテインシーケンサーにより分析した結
果、上記の組成であることが判明した。
むフッ化水素中で０℃、１時間撹拌し、ペプチドを樹脂
から遊離させた。フッ化水素を減圧留去し、残渣を３０
％酢酸で抽出し、凍結乾燥して粗ペプチドを得た。これ
をＯＤＳカラム（ＣｏｓｍｏＳｉｌ ５Ｃ１８）による
逆相クロマトグラフィーにより精製し、Ｈ−Ｐｈｅ−Ｃ
ｙｓ−Ｐｈｅ−ＯＨ（収量１００ｍｇ）を得た。本品を
前記と同一のプロテインシーケンサーにより分析した結
果、上記の組成であることが判明した。
【００２５】該ペプチドの物性値はつぎのとうりであ
る。尚、ＴＬＣの溶媒は以下すべて前記と同一である。
る。尚、ＴＬＣの溶媒は以下すべて前記と同一である。
【００２６】実施例１ （アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定） アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定は、Ｃｈｅｕ
ｎｇとＣｕｓｈｍａｎの方法〔Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｐｈａｒａｍａｃｏｌｏｇｙ ２０，１６３７（１９
７１）〕に準じて以下の方法で行った。 酵素基質；Ｂｚ（ベンジル）−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ
（８６ｍｇを水８ｍｌとリン酸緩衝液８ｍｌに溶解した
溶液） 酵 素；うさぎの肺のアセトンパウダー（シグマ社製）
（１ｇを５０ｍＭのリン酸緩衝液１０ｍｌ中で粉砕した
後、遠心分離した上澄液）
ｎｇとＣｕｓｈｍａｎの方法〔Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｐｈａｒａｍａｃｏｌｏｇｙ ２０，１６３７（１９
７１）〕に準じて以下の方法で行った。 酵素基質；Ｂｚ（ベンジル）−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ
（８６ｍｇを水８ｍｌとリン酸緩衝液８ｍｌに溶解した
溶液） 酵 素；うさぎの肺のアセトンパウダー（シグマ社製）
（１ｇを５０ｍＭのリン酸緩衝液１０ｍｌ中で粉砕した
後、遠心分離した上澄液）
【００２７】上記の酵素基質を１００μｌ、酵素溶液を
１２μｌ及び本発明の所定濃度のペプチドを混合し、水
で全体を２５０μｌとした後、３７℃で３０分間反応を
行った。反応は１Ｎ−ＨＣｌ ２５０μｌを用いて終了
させた。反応終了液に酢酸エチル１．５ｍｌを入れＶｏ
ｒｔｅｘで１５秒撹拌し、それを遠心分離した。酢酸エ
チル層から１．０ｍｌをとり出して、酢酸エチルを留去
し、それに１ｍｌの蒸留水を入れて残渣を溶解し、抽出
された馬尿酸の紫外吸収２２８ｎｍの値（ＯＤ２２８）
を測定した。
１２μｌ及び本発明の所定濃度のペプチドを混合し、水
で全体を２５０μｌとした後、３７℃で３０分間反応を
行った。反応は１Ｎ−ＨＣｌ ２５０μｌを用いて終了
させた。反応終了液に酢酸エチル１．５ｍｌを入れＶｏ
ｒｔｅｘで１５秒撹拌し、それを遠心分離した。酢酸エ
チル層から１．０ｍｌをとり出して、酢酸エチルを留去
し、それに１ｍｌの蒸留水を入れて残渣を溶解し、抽出
された馬尿酸の紫外吸収２２８ｎｍの値（ＯＤ２２８）
を測定した。
【００２８】阻害率は阻害剤なしで反応したときのＯＤ
２２８を１００％とし、反応時間０分のときのＯＤ
２２８を０％として求め阻害率５０％の時の阻害剤（本
発明のペプチド）の濃度１Ｃ５０（μＭ）で活性を表示
するとＩＣ５０＝１０μＭであった。
２２８を１００％とし、反応時間０分のときのＯＤ
２２８を０％として求め阻害率５０％の時の阻害剤（本
発明のペプチド）の濃度１Ｃ５０（μＭ）で活性を表示
するとＩＣ５０＝１０μＭであった。
【００２９】
【効果】本発明ではアンギオテンシン変換酵素阻害剤と
して有用な、新規なペプチドが得られる。
して有用な、新規なペプチドが得られる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C07K 5/087 A61K 38/00 A61K 38/55 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (4)
- 【請求項１】一般式Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅで示される
新規ペプチド。 - 【請求項２】アルブミンをペプシンで加水分解すること
を特徴とする一般式Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅで示される
新規ペプチドの製造法。 - 【請求項３】卵白をペプシンで加水分解することを特徴
とする一般式Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅで示される新規ペ
プチドの製造法。 - 【請求項４】一般式Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅで示される
ペプチドを有効成分とするアンギオテンシン変換酵素阻
害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3098378A JP2953634B2 (ja) | 1991-01-31 | 1991-01-31 | 新規ペプチド、その製造法及び用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3098378A JP2953634B2 (ja) | 1991-01-31 | 1991-01-31 | 新規ペプチド、その製造法及び用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04247098A JPH04247098A (ja) | 1992-09-03 |
| JP2953634B2 true JP2953634B2 (ja) | 1999-09-27 |
Family
ID=14218216
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3098378A Expired - Fee Related JP2953634B2 (ja) | 1991-01-31 | 1991-01-31 | 新規ペプチド、その製造法及び用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2953634B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1685764A1 (en) * | 2005-01-27 | 2006-08-02 | Globus Egg Sciences B.V. | Anti-hypertensive functional food products |
-
1991
- 1991-01-31 JP JP3098378A patent/JP2953634B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04247098A (ja) | 1992-09-03 |
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