JP3629038B2 - アンギオテンシン変換酵素阻害剤 - Google Patents
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Description
【産業上の利用分野】
本発明は、下記構造を有するアンギオテンシン変換酵素阻害剤として有用なペプチドに関する。
H−Lys−Tyr−OH
【0002】
【従来の技術】
アンギオテンシン変換酵素は、主として肺や血管内皮細胞、腎近位尿細管に存在し、アンギオテンシンI(Asp−Arg−Val−Tyr−Ile−His−Pro−Phe−His−Leu)に作用して、アンギオテンシンIのC末端よりジペプチド(His9−Leu10)を開裂遊離させ、強力な昇圧作用を有するアンギオテンシンIIを生成させる酵素である。また、この酵素は生体内降圧物質であるブラジキニンを破壊し不活化する作用も併有し、昇圧系に強力に関与している。従来より、アンギオテンシン変換酵素の活性を阻害すれば、降圧に働き、臨床的には高血圧症の予防、治療に有効であると考えられている。
最近ではプロリン誘導体であるカプトプリルが合成され、降圧活性が確認されて以来、種々のアンギオテンシン変換酵素阻害物質の合成研究が盛んであり、特にペプチド系の阻害剤の取得も試みられているところである。
【0003】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、周知のペプチド系のアンギオテンシン変換酵素阻害物質はポリペプチドが多く、複雑な構造を持つのでその合成に手間がかかる難点があり、ジペプチド、トリペプチドでのアンギオテンシン変換酵素阻害剤の開発が望まれているところである。
【0004】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、かかる課題を解決すべく鋭意探索した結果、H−Lys−Tyr−OHなるペプチドがアンギオテンシン変換酵素阻害活性を有することを見出し、本発明を完成した。
【0005】
上記でいうLysはリジン、Tyrはチロシンを意味し、かかるアミノ酸はいずれもL−体である。
本発明のペプチドはペプチド合成に通常用いられる方法、即ち液相法または固相法でペプチド結合の任意の位置で二分される2種のフラグメントの一方に相当する反応性カルボキシル基を有する原料と、他方のフラグメントに相当する反応性アミノ基を有する原料とをカルボジイミド法、活性エステル法等を用いて縮合させ、生成する縮合物が保護基を有する場合、その保護基を除去させることによって製造し得る。
【0006】
この反応工程において反応に関与すべきでない官能基は、保護基により保護される。アミノ基の保護基としては、例えばベンジルオキシカルボニル、ε−ベンジルオキシカルボニル、t−ブチルオキシカルボニル、p−ビフェニルイソプロピロオキシカルボニル、9−フルオレニルメチルオキシカルボニル等が挙げられる。カルボキシル基の保護基としては例えばアルキルエステル、ベンジルエステル等を形成し得る基が挙げられるが、固相法の場合は、C末端のカルボキシル基はクロルメチル樹脂、オキシメチル樹脂、P−アルコキシベンジルアルコール樹脂等の担体に結合している。縮合反応は、カルボジイミド等の縮合剤の存在下にあるいはN−保護アミノ酸活性エステルまたはペプチド活性エステルを用いて実施する。
【0007】
縮合反応終了後、保護基は除去されるが、固相法の場合はさらにペプチドのC末端と樹脂との結合を切断する。更に、本発明のペプチドは通常の方法に従い精製される。例えばイオン交換クロマトグラフィー、逆相液体クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等が挙げられる。
本発明で使用するペプチドの投与経路としては、経口投与、非経口投与、直腸内投与のいずれでもよいが、経口投与が好ましい。本発明のペプチドの投与量は、化合物の種類、投与方法、患者の症状・年令等により異なるが、通常1回0.001〜1000mg、好ましくは0.01〜10mgを1日当たり1〜3回である。本発明のペプチドは通常、製剤用担体と混合して調製した製剤の形で投与される。
【0008】
製剤用担体としては、製剤分野において常用され、かつ本発明のペプチドと反応しない物質が用いられる。具体的には、例えば乳糖、ブドウ糖、マンニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプン、庶糖、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガント、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、ロウ、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボン、非イオン界面活性剤、プロピレングリコール、水等が挙げられる。
【0009】
剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。これらの製剤は常法に従って調製される。尚、液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当な媒体に溶解又は懸濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発明のペプチドを水に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。
これらの製剤は、本発明のペプチドを0.01%以上、好ましくは0.5〜70%の割合で含有することができる。これらの製剤はまた、治療上価値ある他の成分を含有していてもよい。
【0010】
【作用】
本発明のペプチドは、新規なペプチドであり優れたアンギオテンシン変換酵素阻害作用を有し、血圧降下作用、ブラジキニン不活化抑制作用を示し本態性高血圧、腎性高血圧、副腎性高血圧などの高血圧症の予防、治療剤、これらの疾患の診断剤や各種の病態において用いられる血圧効果剤、狭心病発作の閾値上昇、心筋梗塞の減少、うっ血性心不全における病態の改善剤として有用である。
【0011】
【実施例】
次に実例を挙げて本発明を更に具体的に説明する。
〔ペプチドの合成〕
市販のBoc(ブトキシカルボニル)−Tyr(Cl2−Bzl)(ジクロルベンジル基)−O−Resin(置換率0.75meq/g)0.6gをバイオサーチ社のペプチド合成装置SAM2の反応槽に分取し、以下のように合成を行った。
45%トリフルオロ酢酸、2.5%アニソールを含む塩化メチレン中、25分間の反応により、Boc基を除去したのち、塩化メチレンによる洗浄、10%ジイソプロピルエチルアミンを含む塩化メチレンによる中和、及び塩化メチレンによる洗浄を行った。
これと7.5mlの0.4M Boc−Lys(Z)(ε−ベンジルオキシカルボニル基)のジメチルホルムアミド溶液、7.5mlの0.4Mジイソプロピルカルボジイミドの塩化メチレン溶液とを混合した後、反応槽に加え、室温にて2時間撹拌反応させた。
【0012】
得られた樹脂をジメチルホルムアミド、塩化メチレン、10%ジイソプロピルエチルアミンを含む塩化メチレン、塩化メチレン更に塩化メチレン及びジメチルホルムアミドとの混合液で洗浄し、Lys(Z)−Tyr(Cl2−Bzl)−樹脂を得た。
該樹脂を20mlの10%アニソールを含むフッ化水素中で0℃、1時間撹拌し、ペプチドを樹脂から遊離させた。フッ化水素を減圧留去し、残渣を30%酢酸で抽出し、凍結乾燥して粗ペプチドを得た。これをODSカラム(Cosmosil 5C18)による逆相クロマトグラフィーにより精製し、H−Lys−Tyr−OH(収量75mg)を得た。
本品を前記と同一のプロテインシーケンサーにより分析した結果、上記の組成であることが判明した。
【0013】
該ペプチドの物性値はつぎのとうりである。
尚、TLCの溶媒は以下すべて前記と同一である。
【0014】
(アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定)
アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定は、CheungとCushmanの方法〔Biochemical Pharamacology 20,1637(1971)〕に準じて以下の方法で行った。
酵素基質;Bz(ベンジル)−Gly−His−Leu
(86mgを水8mlとリン酸緩衝液8mlに溶解した溶液)
酵 素;うさぎの肺のアセトンパウダー(シグマ社製)
(1gを50mMのリン酸緩衝液10ml中で粉砕した後、遠心分離した上澄液)
上記の酵素基質を100μl、酵素溶液を12μl及び本発明の所定濃度のペプチドを混合し、水で全体を250μlとした後、37℃で30分間反応を行った。
【0015】
反応は1N−HCl 250μlを用いて終了させた。反応終了液に酢酸エチル1.5mlを入れVortexで15秒撹拌し、それを遠心分離した。
酢酸エチル層から1.0mlをとり出して、酢酸エチルを留去し、それに1mlの蒸留水を入れて残渣を溶解し、抽出された馬尿酸の紫外吸収228nmの値(OD228)を測定した。
阻害率は阻害剤なしで反応したときのOD228を100%とし、反応時間0分のときのOD228を0%として求め阻害率50%の時の阻害剤(本発明のペプチド)の濃度IC50(μM)で活性を表示すると35.0であった。
【0016】
【発明の効果】
本発明ではアンギオテンシン変換酵素阻害剤として有用なペプチドを提供する。
Claims (1)
- H−Lys−Tyr−OHよりなるペプチドを有効成分とするアンギオテンシン変換酵素阻害剤。
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- 1993-03-26 JP JP09255593A patent/JP3629038B2/ja not_active Expired - Fee Related
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