JPH02167052A - 経口摂食組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、高血圧予防のための健康食品等として用いて
有用な経口摂食組成物に関するものである。

〔従来の技術〕

今日、高血圧症は我が国において死亡率の上位を占める
疾病の一つであり、その治療あるいは予防は緊急かつ重
要な課題となっている。

高血圧症には二次性高血圧症と、本態性高血圧症とがあ
るが、後者の発症機序には食塩の過剰摂取、遺伝性因子
、レニ゛ンーアンジオテンシンーアンドステロン調節不
全、交換神経系緊張によるカテコラミン過剰分泌などが
単独あるいは相互に関連して発症の要因となっていると
されている。

元来我が国は味噌、醤油といった高塩含有の調味料を用
い、保存食の漬物や干物を含め味付けに塩を基本として
おり、全国平均で１日当り１２ｇ、北部では２０ｇを超
える摂取量であり、ヒトの適量をはるかに超えている。

過剰に摂取された食塩は、体内の細胞外液量を増加させ
尿として排泄されるまでの間、循環血液量を増加させ、
心拍比１の増加などを招き、その結果血圧を上昇させる
。

食塩過剰摂取が長期にわたり高血圧状態が持続すると、
血管壁が肥厚し、硬化状態となり、血管抵抗を増加させ
高血圧を増悪させるのである。

かかる観点から高血圧予防の対策の１つとして減塩食事
療法が上げられるが、ヒトの欲望の１つである食欲の味
覚を減じさせる事は橿めて強い苦痛を供なう、そこで、
食塩等を１■食しても、それと供に、血圧の上昇を制御
出来るものが望まれている。

〔発明の解決課題〕

本発明者等は、高血圧症あるいは高血圧傾向の人の食塩
等高ナトリウム含有物摂取に際する血圧の上昇を調節す
る経口ｔＪ（取■成物を提供すべく鋭意研究を行なった
結果、意外にも安全性の高いカゼイン由来のアンジオテ
ンシン転換酵素（以下、ＡＣＥと略記する）阻害ペプチ
ドを食塩等に配合することにより、血圧上昇が緩和され
る事を見出し、本発明を完成するに至った。

〔発明の構成〕

即ら、本発明はカゼインを蛋白質分解酵素により分解し
て得られるアンジオテンシン転換酵素を阻害するペプチ
ドを含有することを特徴とするナトリウム塩含有経口摂
食組成物である。

本発明に云うカゼイン由来のＡＣＥ阻害ペプチドとして
は、例えば以下に示す如きアミノ酸配列からなるＣ　Ｅ
　Ｉ　＋□、ＣＥＩβ１等があり、それらは単独で、も
しくは混合物として用いられる。

ＣＥ　Ｉ　＋ｔ　　：　Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｌ
ａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−ＧｌｕＶａｔ−Ｐｈｅ−
Ｇｌｙ−Ｌｙｓ ＣＥ　Ｉ　β？　　：　　Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔ
ｙｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−＾ｒｇこれらへＣＥ阻害ペプチ
ドのうち、ＣＥ　Ｉ、□およびＣＢＩβ７は、牛山来カ
ゼイン（特に後者はβ−カゼイン）のトリプシン加水分
解物から得られる。

ＣＥＩ＋ｚの調製は、特開昭５８−１０９４２５号公報
等によって公知の方法に準して例えば以下のようにして
行われる。

牛山来カゼイン（α−カゼインまたはβ−カゼイン）を
、ｐ　ｔｔ　ｓ、　ｏ〜９．０の条件下トリプシンによ
り分解し、分解物から加熱処理あるいは酸処理によりト
リプシンおよび未分解カゼインを沈降除去せしめる０次
に、母液を、要すればアルカリで中和し、減圧下に２〜
３倍に濃縮した上、セファデックスＧ−２５等を充填し
たカラムに添加し、蒸留水で溶出させてＡＣＥ阻害活性
を示す両分を集め、さらに必要に応じて同様の精製を繰
返した後、゛活性画分から、例えば減圧濃縮あるいは有
機溶媒添加等の方法によりＣＥＩ＋ｚを取得する。

また、ＣＥＩβ、は、その出発原料がβ−カゼインに限
定されることを除けば、上記のＣＥｆ＋ｆｆｉと全く同
様にしてこれを調製することができる。

この場合、トリプシン分解物中にはＣＥＩβ、とＣＥ　
１．□とが同時に生成してくることになるが、それらは
セファデックスカラムクロマトグラフィーにより容易に
分別が可能である。

又、より有利には有機化学的な合成手法を用いることが
できる。

以下にＣＥＩ＋ｔの合成法の一例を示す、ここでは、不
７容性１！！体としてポリスチレン樹脂を用いる固相対
称酸無水物法を利用し、ペプチド合成を行う。なお、こ
こでは、アミノ酸はすべてＬ体を意味し、アミノ酸の保
護基の略号はそれぞれ次の残■を表す。

口ｏｃ　　　：　　ｔｅｒｔ、　　　Ｂｕｔｙｌｏｘｙ
−ｃａｒｂｏｎｙｌ　　　２ｆＥＰＡＭ　　：　ｐ−ｍ
ｅｔｈｏｘｙ　　ｐｈｏｎｙｌ　　ａｃｕｔａｍｉｄｏ
＋ｍｅｔｈｌ　ｒｅｓｉｎＢｚｌ　　：ヘンジル基 Ｚ　　：ヘンジルオキン力ルボニル基 Ｔｏｓ　　：ρ−トリルスルホニル基 へＡ’：ｎ　番目のアミノ酸 ポリスチレン樹脂に架橋されたＡＡ’　　（ＡＡ−ＰＡ
Ｍ）をＴＦＡにより、脱保護基反応により、Ｈ−ＡＡ’
−ＰＡＭを合成し、それにＢｏａＡＡ”−ＯＨをジクロ
ルメタン中でＤＣＣを用いをジメチルホルムアミド中で
縮合させ、ＢｏｃＡＡ”　−ＡＡ’　　−ＰＡＭを合成
し、未反応のＡＡ’−ＲＡＭを無水酢酸を用い、キャン
ピングする。

得られたＢ　ｏ　ｃ　−Ａ　Ａ　！Ａ　Ａ　’　　　Ｐ
　Ａ　Ｍを再びＴ’ＦＡを用い、脱保ｊｌ　５反応を行
ない、同（ｐＳこしてＢｏａ−ＡＡ３−ＯＨを縮合し、
以下同（ηにしてＡ　Ａ　ｌ　！まで縮合反応を行なう
。なお、用いるアミノ酸側鎖の官能基は以下の様に封鎖
してお（。

Ａｒｇげｏｓ）、　ＡＳ＋）　（０−Ｂｚ　１）Ｃｙ　
ｓ（４−Ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｙｌ）、Ｇ　Ｉ　ｕ　（
０−Ｂ　ｚ　Ｉ）Ｌ　ｙ　ｓ　（２−Ｃｈｌｏｒｏｐｈ
ｅｎｙｌｏｘｙ　　ｃａｒｂｏｎｙｌ）。

Ｓｅｔ　（Ｂｚｌ）、Ｔｈｒ　（［３ｚｌ）、Ｔｒｙ（
２−Ｂｒｏｍｏｐｌ＋ｅｎｙｌｏｘｙ　　ｃａｒｂｏｎ
ｙｌ）、　Ｈｉ　ｓ　　（′ｒ’　ｏ　＝　）縮合反応
終了後、ＨＦを用い脱保護基反応を行ない、Ｂｏｃ及び
ＰＡＭ、側鎖の保ｉ！基を除き、１１−　Ａ　Ａ日−−
−一−−−−−−−−・−−−−−一−・−−−−Ａ　
Ａ　’　　−ＯＩＩを得る。

ここでＡＡ’　　＝Ｌｙｓ、ＡＡ２＝ＧＩｙ、ＡＡ″＝
Ｐｈｅ、ＡＡ’　＝Ｖａ　ｌ、ＡＡ’　＝Ｇｌｕ。

ＡＡ’−Ｐｒｏ、ＡＡ’　＝Ｐｈｅ、ＡＡ’　＝Ｐｒ。

ＡＡ９＝Ａｌａ　　ＡＡ”＝Ｖａｌ、ＡＡ”＝ＰｈｅＡ
Ａ”−Ｐｈｅを示す。

また、これらを混合物として大量の試料を得る為には、
カゼインを蛋白質分解酵素により分解後、その分解液を
高温加熱処理し、この上清をそのまま得たり、又、この
上清を更に酸処理し沈澱物を除いた上清をポアサイズＭ
Ｗ＝８．ＯＯＯ以下の透析膜により透析し、透析液をそ
のままあるいは、／ａ縮・凍結乾燥等の操作を行えばよ
い。

本製造に使用するカゼインは各種酸カゼイン、カゼイン
ナトリウム、カゼインカルシウム等のカゼインが最も良
いが、牛乳、スキムミルク等の未精製のものでも原料と
して用いることができる。

本製法に従えば、この原料カゼインを水に溶解し、トリ
プシン又はトリプシンを含む酵素剤を加える。

本発明に使用するトリプシンまたはそれを含む酵素剤と
しては、市販の膵臓性の酵素（バンクレアチン）でも十
分であるが、収率等の点から、結晶グレードのものが好
ましい。

トリプシン以外の蛋白質加水分解酵素としては、キモト
リプシン、ペプシン、パパイン、ズブチリシン等の蛋白
ペプチド鎖内部の結合を加水分解する所謂公知のエンド
ペプチダーゼであれば可能である。

又、カゼインを酵素により分解する方法は公知のいずれ
の方法でも良い。

以上の如きカゼイン由来のＡＣＥ阻害ペプチド頚をナト
リウム塩含有物に適当な形状で適宜混入して経口摂食用
に供する。ナトリウム塩含有経口摂食物の例としては、
食塩、味噌、醤油、グルタミン酸ナトリウム等の調味料
類、またこれらを用い加工された食品ないしは嗜好品、
例えば漬物、干物、塩辛、佃煮、バター、マヨネーズ、
ソーセージ、菓子類、ナツツ類、スポーツ飲料等が挙げ
られる。

これら経日１バ 造に於ける通常の方法を使用することができる。

配合量は、経ロ摂食物ナトリウム塩量換算で１ｇ当りＡ
ＣＥ阻害ペプチドを５ｍｇ〜４ｇの範囲が適当であり、
かかる範囲から摂食目的に応して適宜の量が選択される
。

〔発明の効果〕

本発明により、安全性が高く、有効性の高い血圧上昇援
用すトリウム塩含有経口摂食物の提供が可能となった。

以下、製造例、試験例、実施例によって本発明を更に、
詳細に説明する。

製造例−１ ５０リットルジャーファメンタ−（ミツワ製）に牛山来
カゼイン（和光純薬製、生化学用）２．５ｋｇを３５リ
ットルのＨ２Ｏに）甑？蜀し、アンモニア水（和光製、
２５％ＮＨ．０ＩＩ）によってｐ　Ｈを７．６に調整す
る。３７℃に保〆昌しトリプシン（シグマ製トリプシン
ＥＣ３．４．２１．４牛膵臓由来ＴｙｐｅＩｌｌ）６．
２５ｇを加え、撹拌しながら１８時間消化を行った．こ
れをオートクレーブ（１２１’Ｃ，２０分）し、更にｃ
　ｏ　ｎ　ｃ　Ｈ　Ｃ　ｌを加え、ｐ　ｔｌ　１．　Ｏ
とし、未反応Ｃａ５ｅｉｎ等を沈澱させた。これを１０
．ＯＯＯｒｐｍ，４℃で連続遠心分離を行ない、沈澱物
を除いた後、上澄液を透析チューブ（スペクトラ、ボア
６　分画分子１１、０００）を用いて流水下にて室温で
透析を行った。チューブのシールは、スペクトラ製のク
ローサーで行った。透析の終点は、透析チューフ内液の
伝導度が４　ｍ　ｓ　／　ｃ　ｍ以下に低下した時とし
た。（通常３〜４ｈｒ必要） 透析ン夜を１０．ＯＯＯｒｐｍ，ｆｏｒ　　１５ｍ１ｎ
．４℃で遠心分離し、不溶物を除いた後、凍結乾燥を行
ないペプチド９４０ｇを得た。

本ペプチドはＣＥ　Ｉ，□と（、Ｅｌβ７を生体とする
ＡＣＥＩ！Ｊｌ害ペプチドであり、Ｉ　Ｄ　５Ｇ　＝　
０．２０ｍ　ｇ／ｍ６（　酵素７１／汽・シ宕液申　の
５農厘　）て゛ゐろ・（ＡＣＥ阻害ペプチドのＡＣＥ阻
害活性の測定〕１）アンジオテンシン転換酵素液（Ａ　
ＣＣ７夜）の調製 ５ｇのラビットラングアセトンパウダー（シグマ社製）
を５０ｍｊ！のＯ，ｌ　Ｍホウ酸１Ｍ　４Ｊｉ液（ｐ　
ｔ（８，３）に溶解し、４０，０００ｘｇ、４０分の条
件下で遠心処理し、その上清液をさらに、上記緩衝液で
、１０倍に（希釈し、アンジオテンシン転換酵素液を得
た。

■）活性の測定 試料を試験管に０．０３　ｍ　Ｉｔ入れ、これに基質と
して、２５０μｉのヒプリルーＬ−ヒスチジルＬ−ロイ
シン〔シグマ社（Ｓ　ｉ　ｇｍａ、Ｃｏ、）製、最１”
　？３度５ｍＭ、Ｎａ　Ｃ１３００ｍＭを含む。

を添加し、３７℃で１０分間保温後、上記酵素液をＯ，
ｌ　ｍ　ｌ添加し、３７℃で３０分間反応させた。

その後、ＩＮ塩酸０．２５　ｍ　ｌを添加して反応を停
止させた後、１．５　ｍ　Ａの酢酸エチルを加え、１５
秒間激しく撹拌した。その後、３，５ＱＯｒｐｍで１５
分間遠心して、酢酸エチルｒＭｌ　ｍ　１を採取した。

その酢酸エチル層を１２０℃で３０分間加熱し、ン容媒
を除去した。溶媒除去後、蒸留水１ｍｅを添加し、抽出
されたヒプリル酸の吸収（２２８ｎｍの吸光度）を測定
し、これを酵素活性とした。

阻害率は、次式より算出した。

阻害率＝　（Ａ−Ｂ）　／Ａｘ　１００％Ａ：阻害剤を
含まない場合の２２８　ｎｍの吸光度 Ｂ：阻害剤添加の場合２２８ｎｍの吸光度そして、阻害
率５０％の時の試料濃度を１０．。

とする。

次に製造例１で得たペプチドの食塩摂取による血圧上昇
の抑制作用について試験した。

試験例Ｉ 製造例１で得たペプチドと食塩を飼料にまぜ自由に摂食
させ３週間飼育した時の血圧上昇抑制作用をみた。

（１１試験方法 ４週令の自然発症高血圧ラット（日本チャールズーリバ
ー社）を温度２３±３℃、湿度５０±１０％に保たれた
動物室に収容し１週間予備飼育した後、健常なものを試
験に用いた。飼料はオリエンタル酵母社製ＭＦ（粉末飼
＄４）に終濃度３％になるように食塩を添加したものを
、う、ト体重１ｋｇ当り１日約３．０ｇとなるように調
整しながら飼料に配合した。

対照として、食塩、ペプチドを配合しない飼料および水
をｉＭ取させたものを用いた。

血圧および心拍数の測定を１週間に２度行なった。測定
は、非観血的無加温弐尾肋脈血圧・心［０数測定装置を
用い、１匹につき３回測定した値の平均値を求めること
により行なった。

結果は１群５匹の平均値で示した。

（２）　　試験結果 第１図に血圧測定結果を示す。

第１図から明らかな通り、自然発症高直圧ラットは食塩
の過剰摂取により有意な血圧上昇を示し、これを、本発
明のペプチドの配合により有意に血圧の上昇を抑制し、
緩和していることが認められた。

一方心拍数は、いずれの群も有意な差は認められず一定
であった。

又、飼料摂取量、体重変化は対照と同様であり、安全面
でも良好である事を確認した。

以下に実施例を示す。

実施例−１、食卓塩 食塩に重量当り５％の製造例−１のペプチドを混合する
ことにより作成した。

実施例−２、味噌 通常の製造法にて調製された信州味噌に重量当す０．５
％の製造例−１のペプチドを添加、練込み作成した。

実施例−３、醤油 通常の製造法にて調製された、こいくち醤油に１００ｒ
ｎｊ！当り１％の製造例−１のペプチドを添加、撹拌し
、作成した。

【図面の簡単な説明】

第１図は、自然発症高血圧ラットに、食塩または食塩と
カゼイン分解ペプチド含有飼料を３週間自由に摂食させ
た試験群と対照群の血圧の経時変化を示すグラフである
。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）カゼインを蛋白質分解酵素により分解して得られ
   るアンジオテンシン転換酵素を阻害するペプチドを含有
   することを特徴とするナトリウム塩含有経口摂食組成物