JP2001091837A - 光走査型顕微鏡 - Google Patents
光走査型顕微鏡Info
- Publication number
- JP2001091837A JP2001091837A JP26668299A JP26668299A JP2001091837A JP 2001091837 A JP2001091837 A JP 2001091837A JP 26668299 A JP26668299 A JP 26668299A JP 26668299 A JP26668299 A JP 26668299A JP 2001091837 A JP2001091837 A JP 2001091837A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sample
- generating means
- laser light
- signal
- synchronizing signal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Microscoopes, Condenser (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 試料の詳細な観察を可能にした光走査型顕微
鏡を提供する。 【解決手段】 レーザ光のスポット位置を試料７の所望
する位置に保持させ、この状態からトリガ発生器１３よ
りトリガ信号を発生するとともに、このトリガ信号に同
期して、レーザ光切替え部３によりレーザ光の試料７へ
のレーザ光の照射の要否を切替える。
鏡を提供する。 【解決手段】 レーザ光のスポット位置を試料７の所望
する位置に保持させ、この状態からトリガ発生器１３よ
りトリガ信号を発生するとともに、このトリガ信号に同
期して、レーザ光切替え部３によりレーザ光の試料７へ
のレーザ光の照射の要否を切替える。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、生物、医学分野の
研究に用いられる光走査型顕微鏡に関するものである。
研究に用いられる光走査型顕微鏡に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】生物、医学の研究において、レーザ光を
用いた走査型共焦点顕微鏡（以下、ＬＳＭと称する）の
利用が広く一般的になってきている。特に、ＬＳＭは、
生きた細胞の生理現象の解明の研究に広く用いられてき
ており、この分野での研究の必須の道具になっている。
用いた走査型共焦点顕微鏡（以下、ＬＳＭと称する）の
利用が広く一般的になってきている。特に、ＬＳＭは、
生きた細胞の生理現象の解明の研究に広く用いられてき
ており、この分野での研究の必須の道具になっている。
【０００３】一般的なＬＳＭでは、２次元、３次元また
は時間変化を合わせて通称４次元での画像取得にその機
能の主眼がおかれ、得られた画像をもとに３次元画像の
構築や解析が行なわれている。
は時間変化を合わせて通称４次元での画像取得にその機
能の主眼がおかれ、得られた画像をもとに３次元画像の
構築や解析が行なわれている。
【０００４】ところで、ＬＳＭでの画像取得には、通常
蛍光試薬が用いられ、レーザ光により細胞内に導入した
蛍光試薬を励起し、細胞から発せられた蛍光を集光する
ことで細胞の画像を得るようにしている。
蛍光試薬が用いられ、レーザ光により細胞内に導入した
蛍光試薬を励起し、細胞から発せられた蛍光を集光する
ことで細胞の画像を得るようにしている。
【０００５】ところが、このような蛍光試薬は、レーザ
光の照射強度と時間に比例して励起される蛍光強度が急
激に減衰することが知られている。
光の照射強度と時間に比例して励起される蛍光強度が急
激に減衰することが知られている。
【０００６】このため、蛍光試薬の退色を少しでもなく
すため、特定の部分領域を任意に切り出す方法が考えら
れている。特開平９−１８９８６４号公報は、このよう
な考えに基づくもので、レーザ光を発する光源から細胞
（以下、試料と称する。）までの光路中に、レーザ光が
試料に向かうのを阻止する状態と、試料に向かうのを許
可する状態とを切り替えるレーザ光切り替え手段を設
け、このレーザ光切り替え手段を走査位置情報に基づき
走査範囲内の所定の部分領域で切り替えるようにしてい
る。
すため、特定の部分領域を任意に切り出す方法が考えら
れている。特開平９−１８９８６４号公報は、このよう
な考えに基づくもので、レーザ光を発する光源から細胞
（以下、試料と称する。）までの光路中に、レーザ光が
試料に向かうのを阻止する状態と、試料に向かうのを許
可する状態とを切り替えるレーザ光切り替え手段を設
け、このレーザ光切り替え手段を走査位置情報に基づき
走査範囲内の所定の部分領域で切り替えるようにしてい
る。
【０００７】このような構成によれば、走査中にレーザ
光を切り替えることで、所定の部分領域のみの画像を得
ることが可能で、同時に、既に得られた画像をもとに所
定領域のみを切り出し指定し、画像を得ることが可能に
なる。
光を切り替えることで、所定の部分領域のみの画像を得
ることが可能で、同時に、既に得られた画像をもとに所
定領域のみを切り出し指定し、画像を得ることが可能に
なる。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】ところで、最近、脳・
神経研究において、神経細胞相互間の繋ぎであるシナプ
スと呼ばれる部位の、より一層の厳密な解析が新たな研
究テーマとして浮上してきている。
神経研究において、神経細胞相互間の繋ぎであるシナプ
スと呼ばれる部位の、より一層の厳密な解析が新たな研
究テーマとして浮上してきている。
【０００９】ところが、ここで取り扱う、シナプス間の
信号伝達は、数ｍｓｅｃ以下と非常に速く、こうした部
位の変化を観察するには、上述した特開平９−１８９８
６４号公報に開示された２次元走査するものでは、十分
な観察を行なうことができない。
信号伝達は、数ｍｓｅｃ以下と非常に速く、こうした部
位の変化を観察するには、上述した特開平９−１８９８
６４号公報に開示された２次元走査するものでは、十分
な観察を行なうことができない。
【００１０】このような事情から、レーザ光を一点に固
定し、このポイントでの変化の観察を行なうことが考え
られている。この場合、光学的な観察と、以前より実施
されている電気信号計測による細胞の生理現象の観察と
を同時に行なう必要があり、こうした電気信号による計
測では、同期信号発生手段による信号と計測手段とを同
期させて細胞への刺激を一定周期で繰り返してその変化
を観察するようにしている。また、このような観察で
は、繰り返しの周期をより短くしたいとの要求もあり、
こうした変化の観察は、短くて数分から数時間に至るま
で行なわれる。
定し、このポイントでの変化の観察を行なうことが考え
られている。この場合、光学的な観察と、以前より実施
されている電気信号計測による細胞の生理現象の観察と
を同時に行なう必要があり、こうした電気信号による計
測では、同期信号発生手段による信号と計測手段とを同
期させて細胞への刺激を一定周期で繰り返してその変化
を観察するようにしている。また、このような観察で
は、繰り返しの周期をより短くしたいとの要求もあり、
こうした変化の観察は、短くて数分から数時間に至るま
で行なわれる。
【００１１】本発明は上記事情に鑑みてなされたもの
で、試料のより詳細な観察を可能にした光走査型顕微鏡
を提供することを目的とする。
で、試料のより詳細な観察を可能にした光走査型顕微鏡
を提供することを目的とする。
【００１２】
【課題を解決するための手段】請求項１記載の発明は、
レーザ光を発する光源と、この光源からのレーザ光のス
ポットを試料の所定位置に保持させるスポット保持手段
と、前記試料からの光を検出する検出手段と、前記試料
に対してトリガ信号を発生するトリガ発生手段と、前記
トリか発生手段のトリガ信号に同期して同期信号を発生
する同期信号発生手段と、この同期信号発生手段の同期
信号に応じて前記試料に対するレーザ光の照射の要否を
切替えるレーザ光切替え手段とを具備したことを特徴と
している。
レーザ光を発する光源と、この光源からのレーザ光のス
ポットを試料の所定位置に保持させるスポット保持手段
と、前記試料からの光を検出する検出手段と、前記試料
に対してトリガ信号を発生するトリガ発生手段と、前記
トリか発生手段のトリガ信号に同期して同期信号を発生
する同期信号発生手段と、この同期信号発生手段の同期
信号に応じて前記試料に対するレーザ光の照射の要否を
切替えるレーザ光切替え手段とを具備したことを特徴と
している。
【００１３】請求項２記載の発明は、請求項１記載の発
明において、前記同期信号発生手段の２つの同期信号間
に複数の同期信号を発生する高速同期信号発生手段を有
し、前記レーザ光切替え手段は、前記高速同期信号発生
手段の高速同期信号に応じて前記試料に対するレーザ光
の照射の要否を切替えることを特徴としている。
明において、前記同期信号発生手段の２つの同期信号間
に複数の同期信号を発生する高速同期信号発生手段を有
し、前記レーザ光切替え手段は、前記高速同期信号発生
手段の高速同期信号に応じて前記試料に対するレーザ光
の照射の要否を切替えることを特徴としている。
【００１４】請求項３記載の発明は、請求項１または記
載の発明において、前記スポット保持手段は、前記同期
信号発生手段の同期信号に同期させてレーザ光のスポッ
ト保持位置を移動可能にしたことを特徴としている。
載の発明において、前記スポット保持手段は、前記同期
信号発生手段の同期信号に同期させてレーザ光のスポッ
ト保持位置を移動可能にしたことを特徴としている。
【００１５】請求項４記載の発明は、波長の異なるレー
ザ光を発する複数の光源と、これら光源からのレーザ光
のスポットを試料の所定位置に保持させるスポット保持
手段と、前記試料からの光を検出する検出手段と、前記
試料に対してトリガ信号を発生するトリガ発生手段と、
前記トリか発生手段のトリガ信号に同期して同期信号を
発生する同期信号発生手段と、前記複数の光源に対応さ
せて複数設けられ、前記同期信号発生手段の同期信号に
応じて順に選択され、それぞれ前記試料に対する前記光
源のレーザ光の照射の要否を切替えるレーザ光切替え手
段とを具備したことを特徴としている。
ザ光を発する複数の光源と、これら光源からのレーザ光
のスポットを試料の所定位置に保持させるスポット保持
手段と、前記試料からの光を検出する検出手段と、前記
試料に対してトリガ信号を発生するトリガ発生手段と、
前記トリか発生手段のトリガ信号に同期して同期信号を
発生する同期信号発生手段と、前記複数の光源に対応さ
せて複数設けられ、前記同期信号発生手段の同期信号に
応じて順に選択され、それぞれ前記試料に対する前記光
源のレーザ光の照射の要否を切替えるレーザ光切替え手
段とを具備したことを特徴としている。
【００１６】請求項５記載の発明は、請求項４記載の発
明において、前記同期信号発生手段の２つの同期信号間
に複数の同期信号を発生する高速同期信号発生手段を有
し、前記レーザ光切替え手段は、前記高速同期信号発生
手段の高速同期信号に応じて順に選択され、それぞれ前
記試料に対するレーザ光の照射の要否を切替えることを
特徴としている。
明において、前記同期信号発生手段の２つの同期信号間
に複数の同期信号を発生する高速同期信号発生手段を有
し、前記レーザ光切替え手段は、前記高速同期信号発生
手段の高速同期信号に応じて順に選択され、それぞれ前
記試料に対するレーザ光の照射の要否を切替えることを
特徴としている。
【００１７】この結果、本発明によれば、試料上の所定
位置に対する変化を一定の周期で繰り返し観察すること
ができる。
位置に対する変化を一定の周期で繰り返し観察すること
ができる。
【００１８】本発明によれば、さらにレーザ光を高速に
切替えることができる。
切替えることができる。
【００１９】本発明によれば、試料上のレーザ光のスポ
ット位置を移動しながら、試料の詳細観察を実現でき
る。
ット位置を移動しながら、試料の詳細観察を実現でき
る。
【００２０】本発明によれば、異なる波長の蛍光を同時
に励起し、これらの観察を行なうことができる。
に励起し、これらの観察を行なうことができる。
【００２１】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施形態を図面に
従い説明する。
従い説明する。
【００２２】（第１の実施の形態）図１は、本発明が適
用される光走査型顕微鏡の概略構成を示している。図に
おいて、１、２は、レーザ光を発生するレーザ光源で、
これらレーザ光源１、２は、波長の異なるレーザ光を発
するものである。そして、これらレーザ光源１、２から
発せられるレーザ光は、レーザ光切換え部３を介して光
分光器４に進む。
用される光走査型顕微鏡の概略構成を示している。図に
おいて、１、２は、レーザ光を発生するレーザ光源で、
これらレーザ光源１、２は、波長の異なるレーザ光を発
するものである。そして、これらレーザ光源１、２から
発せられるレーザ光は、レーザ光切換え部３を介して光
分光器４に進む。
【００２３】レーザ光切替え部３は、後述するトリガ発
生器１３のトリガ信号に同期して制御部１１より与えら
れるレーザ光切替え信号によりレーザ光が試料７に向か
うのを許可する第１の状態とレーザ光が試料７に向かう
のを阻止する第２の状態を切替えるもので、例えば、Ａ
ＯＴＦフィルタ（透過波長選択フィルタ）などが用いら
れる。光分光器４は、光を任意の波長で選択反射・透過
するものである。
生器１３のトリガ信号に同期して制御部１１より与えら
れるレーザ光切替え信号によりレーザ光が試料７に向か
うのを許可する第１の状態とレーザ光が試料７に向かう
のを阻止する第２の状態を切替えるもので、例えば、Ａ
ＯＴＦフィルタ（透過波長選択フィルタ）などが用いら
れる。光分光器４は、光を任意の波長で選択反射・透過
するものである。
【００２４】そして、光分光器４で反射されたレーザ光
は、光走査部５、対物レンズ６を介して試料７に照射さ
れる。ここで、光走査部５は、試料７に対しレーザ光を
２次元的に走査するとともに、試料７の所定位置にレー
ザ光のスポットを保持させる機能を有している。
は、光走査部５、対物レンズ６を介して試料７に照射さ
れる。ここで、光走査部５は、試料７に対しレーザ光を
２次元的に走査するとともに、試料７の所定位置にレー
ザ光のスポットを保持させる機能を有している。
【００２５】また、試料７からの光は、対物レンズ６、
光走査部５を介して光分光器４に進み、今度は、光分光
器４を透過され、ピンホール１４を介して光選択器８に
入射される。光選択器８は、例えば、５７０ｎｍ以下の
任意の波長の光を反射、５７０ｎｍ以上の波長の光を透
過するものである。
光走査部５を介して光分光器４に進み、今度は、光分光
器４を透過され、ピンホール１４を介して光選択器８に
入射される。光選択器８は、例えば、５７０ｎｍ以下の
任意の波長の光を反射、５７０ｎｍ以上の波長の光を透
過するものである。
【００２６】そして、光選択器８を透過された光は、第
１の光検出器９で、光選択器８より反射された光は、第
２の光検出器１０でそれぞれ検出される。
１の光検出器９で、光選択器８より反射された光は、第
２の光検出器１０でそれぞれ検出される。
【００２７】一方、制御部１１は、パソコン１２に接続
されていて、パソコン１２からの指令に基づいて同期信
号発生手段のトリガ発生器１３にトリガ信号を発生さ
せ、このトリガ信号を試料７に対し刺激として与え、こ
のときのトリガ信号に同期して、レーザ光切替え部３に
レーザ光切替え信号を与えるようになっている。
されていて、パソコン１２からの指令に基づいて同期信
号発生手段のトリガ発生器１３にトリガ信号を発生さ
せ、このトリガ信号を試料７に対し刺激として与え、こ
のときのトリガ信号に同期して、レーザ光切替え部３に
レーザ光切替え信号を与えるようになっている。
【００２８】次に、このように構成した実施の形態の動
作を説明する。
作を説明する。
【００２９】まず、光走査部５によりレーザ光のスポッ
ト位置を移動して、試料７上の所望の位置に保持させ
る。
ト位置を移動して、試料７上の所望の位置に保持させ
る。
【００３０】この状態から、制御部１１の指示により、
トリガ発生器１３より図２（ａ）に示すようなトリガ信
号が発生し、試料７に刺激として与えられる。また、こ
のトリガ信号に同期して同図（ｂ）に示すようなレーザ
光切替え信号がレーザ光切替え部３に与えられる。これ
により、レーザ光切替え部３は、レーザ光源１（２）か
らのレーザ光が試料７に向かうのを阻止する第２の状態
から試料７に向かうのを許可する第１の状態に切替え、
この間、レーザ光は、光分光器４で反射され、光走査部
５、対物レンズ６を介して試料７に照射される。また、
試料７からの反射光または蛍光は、対物レンズ６、光走
査部５を介して光分光器４に進み、ピンホール１４を介
して光選択器８に入射する。この光選択器８を透過され
た光は、第１の光検出器９で、光選択器８より反射され
た光は、第２の光検出器１０でそれぞれ検出される。
トリガ発生器１３より図２（ａ）に示すようなトリガ信
号が発生し、試料７に刺激として与えられる。また、こ
のトリガ信号に同期して同図（ｂ）に示すようなレーザ
光切替え信号がレーザ光切替え部３に与えられる。これ
により、レーザ光切替え部３は、レーザ光源１（２）か
らのレーザ光が試料７に向かうのを阻止する第２の状態
から試料７に向かうのを許可する第１の状態に切替え、
この間、レーザ光は、光分光器４で反射され、光走査部
５、対物レンズ６を介して試料７に照射される。また、
試料７からの反射光または蛍光は、対物レンズ６、光走
査部５を介して光分光器４に進み、ピンホール１４を介
して光選択器８に入射する。この光選択器８を透過され
た光は、第１の光検出器９で、光選択器８より反射され
た光は、第２の光検出器１０でそれぞれ検出される。
【００３１】この場合、トリガ発生器１３のトリガ信号
の繰り返し周波数とレーザ光切替え部３での第１および
第２の状態の切替え時間は任意に設定可能であるが、例
えばトリガ信号の繰り返し周波数を１ＫＨｚとすると、
レーザ光切替え信号の繰り返し周波数は、１ＫＨｚで、
切替え時間は、０．７ｍｓｅｃとなる。
の繰り返し周波数とレーザ光切替え部３での第１および
第２の状態の切替え時間は任意に設定可能であるが、例
えばトリガ信号の繰り返し周波数を１ＫＨｚとすると、
レーザ光切替え信号の繰り返し周波数は、１ＫＨｚで、
切替え時間は、０．７ｍｓｅｃとなる。
【００３２】従って、このようにすれば、レーザ光のス
ポット位置を試料７の所望する１点に固定し、この状態
からトリガ発生器１３よりトリガ信号を発生し、試料７
に刺激として与えるとともに、このトリガ信号に同期し
て、レーザ光切替え部３によりレーザ光の試料７へのレ
ーザ光の照射の要否を切替え、試料７からの反射光また
は蛍光の検出を可能にしたので、例えば、上述したシナ
プスと呼ばれる部位の変化に対しても、一定周期で繰り
返し刺激を与えながら、繰り返して変化を観察すること
ができるようになり、この種試料のより詳細な観察を実
現することができる。
ポット位置を試料７の所望する１点に固定し、この状態
からトリガ発生器１３よりトリガ信号を発生し、試料７
に刺激として与えるとともに、このトリガ信号に同期し
て、レーザ光切替え部３によりレーザ光の試料７へのレ
ーザ光の照射の要否を切替え、試料７からの反射光また
は蛍光の検出を可能にしたので、例えば、上述したシナ
プスと呼ばれる部位の変化に対しても、一定周期で繰り
返し刺激を与えながら、繰り返して変化を観察すること
ができるようになり、この種試料のより詳細な観察を実
現することができる。
【００３３】（第２の実施の形態）図３は、本発明の第
２の実施の形態の概略構成を示すもので、図１と同一部
分には、同符号を付している。
２の実施の形態の概略構成を示すもので、図１と同一部
分には、同符号を付している。
【００３４】この場合、レーザ光源１、２にそれぞれ対
応させてレーザ光切替え部２１、２２を設けている。そ
の他は、図１と同様である。
応させてレーザ光切替え部２１、２２を設けている。そ
の他は、図１と同様である。
【００３５】このようにしても、基本的には、第１の実
施の形態と同様である。まず、光走査部５によりレーザ
光のスポット位置を移動して、試料７上の所望の位置に
保持させる。この状態から、制御部１１の指示により、
トリガ発生器１３より図４（ａ）に示すようなトリガ信
号が発生し、試料７に刺激として与えられ、また、この
トリガ信号に同期して同図（ｂ）に示すようなレーザ光
切替え信号ａ、ｂがレーザ光切替え部２１と２２に交互
に与えられ、レーザ光切替え部２１、２２が順に選択さ
れる。
施の形態と同様である。まず、光走査部５によりレーザ
光のスポット位置を移動して、試料７上の所望の位置に
保持させる。この状態から、制御部１１の指示により、
トリガ発生器１３より図４（ａ）に示すようなトリガ信
号が発生し、試料７に刺激として与えられ、また、この
トリガ信号に同期して同図（ｂ）に示すようなレーザ光
切替え信号ａ、ｂがレーザ光切替え部２１と２２に交互
に与えられ、レーザ光切替え部２１、２２が順に選択さ
れる。
【００３６】これにより、レーザ光切替え信号ａがレー
ザ光切替え部２１に与えられると、レーザ光源１のレー
ザ光が、試料７に照射され、試料７からの反射光または
蛍光が第１および第２の光検出器９、１０で検出され、
また、レーザ光切替え信号ｂがレーザ光切替え部２２に
与えられると、レーザ光源２のレーザ光が、試料７に照
射され、試料７からの反射光または蛍光が第１または第
２の光検出器９、１０で検出されるようになる。
ザ光切替え部２１に与えられると、レーザ光源１のレー
ザ光が、試料７に照射され、試料７からの反射光または
蛍光が第１および第２の光検出器９、１０で検出され、
また、レーザ光切替え信号ｂがレーザ光切替え部２２に
与えられると、レーザ光源２のレーザ光が、試料７に照
射され、試料７からの反射光または蛍光が第１または第
２の光検出器９、１０で検出されるようになる。
【００３７】従って、このようにしても上述した第１の
実施の形態と同様な効果が得られ、加えて、レーザ光源
１、２から波長の異なるレーザ光が交互に試料７に照射
するようにできるので、異なる波長の蛍光を同時に励起
し、これらの観察を行なうことができる。
実施の形態と同様な効果が得られ、加えて、レーザ光源
１、２から波長の異なるレーザ光が交互に試料７に照射
するようにできるので、異なる波長の蛍光を同時に励起
し、これらの観察を行なうことができる。
【００３８】（第３の実施の形態）図５は、本発明の第
３の実施の形態の概略構成を示すもので、図１と同一部
分には、同符号を付している。
３の実施の形態の概略構成を示すもので、図１と同一部
分には、同符号を付している。
【００３９】この場合、トリガ発生器１３からのトリガ
信号の１周期内に複数の同期信号を発生する高速同期信
号発生器３１を設け、この高速同期信号発生器３１から
の高速同期信号に同期して、レーザ光切替え部３にレー
ザ光切替え信号を与えるようになっている。
信号の１周期内に複数の同期信号を発生する高速同期信
号発生器３１を設け、この高速同期信号発生器３１から
の高速同期信号に同期して、レーザ光切替え部３にレー
ザ光切替え信号を与えるようになっている。
【００４０】このようにしても、基本的には、第１の実
施の形態と同様で、制御部１１の指示により、トリガ発
生器１３より図６（ａ）に示すようなトリガ信号が発生
し、試料７に刺激として与えられ、また、このトリガ信
号に同期して高速同期信号発生器３１より同図（ｂ）に
示すような高速同期信号が発生し、この高速同期信号に
同期してレーザ光切替え信号をレーザ光切替え部３に与
えられる。
施の形態と同様で、制御部１１の指示により、トリガ発
生器１３より図６（ａ）に示すようなトリガ信号が発生
し、試料７に刺激として与えられ、また、このトリガ信
号に同期して高速同期信号発生器３１より同図（ｂ）に
示すような高速同期信号が発生し、この高速同期信号に
同期してレーザ光切替え信号をレーザ光切替え部３に与
えられる。
【００４１】従って、このようにしても上述した第１の
実施の形態と同様な効果が得られ、加えて、高速同期信
号に同期して、さらにレーザ光を高速に切替えることが
できるので、試料のさらなる詳細な観察が可能になる。
実施の形態と同様な効果が得られ、加えて、高速同期信
号に同期して、さらにレーザ光を高速に切替えることが
できるので、試料のさらなる詳細な観察が可能になる。
【００４２】（第４の実施の形態）第７は、本発明の第
４の実施の形態の概略構成を示すもので、図２と同一部
分には、同符号を付している。
４の実施の形態の概略構成を示すもので、図２と同一部
分には、同符号を付している。
【００４３】この場合、トリガ発生器１３からのトリガ
信号の１周期内に複数の同期信号を発生する高速同期信
号発生器３２を設け、この高速同期信号発生器３２から
の高速同期信号に同期して、レーザ光切替え信号ａ、ｂ
をレーザ光切替え部２１、２２に交互に与え、順に選択
するようになっている。
信号の１周期内に複数の同期信号を発生する高速同期信
号発生器３２を設け、この高速同期信号発生器３２から
の高速同期信号に同期して、レーザ光切替え信号ａ、ｂ
をレーザ光切替え部２１、２２に交互に与え、順に選択
するようになっている。
【００４４】このようにしても、基本的には、第２の実
施の形態と同様で、制御部１１の指示により、トリガ発
生器１３より図８（ａ）に示すようなトリガ信号が発生
し、試料７に刺激として与えられ、また、このトリガ信
号に同期して高速同期信号発生器３２より同図（ｂ）に
示すような高速同期信号が発生し、この高速同期信号に
同期して同図（ｃ）（ｄ）に示すようにレーザ光切替え
信号ａ、ｂがレーザ光切替え部２１と２２に交互に与え
られる。
施の形態と同様で、制御部１１の指示により、トリガ発
生器１３より図８（ａ）に示すようなトリガ信号が発生
し、試料７に刺激として与えられ、また、このトリガ信
号に同期して高速同期信号発生器３２より同図（ｂ）に
示すような高速同期信号が発生し、この高速同期信号に
同期して同図（ｃ）（ｄ）に示すようにレーザ光切替え
信号ａ、ｂがレーザ光切替え部２１と２２に交互に与え
られる。
【００４５】従って、このようにしても上述した第２の
実施の形態と同様な効果が得られ、加えて、高速同期信
号に同期して、さらにレーザ光を高速に切替えることが
できるので、試料のさらなる詳細な観察が可能になる。
実施の形態と同様な効果が得られ、加えて、高速同期信
号に同期して、さらにレーザ光を高速に切替えることが
できるので、試料のさらなる詳細な観察が可能になる。
【００４６】（第５の実施の形態）上述した実施の形態
では、レーザ光のスポット位置を試料７上の所望する１
点に固定するようにしたが、この第５の実施の形態で
は、レーザ光のスポット位置を固定せずに、任意に動か
すことができるようになっている。
では、レーザ光のスポット位置を試料７上の所望する１
点に固定するようにしたが、この第５の実施の形態で
は、レーザ光のスポット位置を固定せずに、任意に動か
すことができるようになっている。
【００４７】この場合、基本的には、図７に示す第４の
実施の形態で述べたものと同様で、制御部１１の指示に
より、トリガ発生器１３より図９（ａ）に示すようなト
リガ信号が発生すると、このトリガ信号に同期して同図
（ｂ）に示すようにレーザ光のスポット位置がＡ点とＢ
点との間で交互に切替えられる、また、トリガ信号に同
期して高速同期信号発生器３２より同図（ｃ）に示すよ
うな高速同期信号が発生し、この高速同期信号に同期し
て同図（ｄ）（ｅ）に示すようにレーザ光切替え信号
ａ、ｂがレーザ光切替え部２１と２２に交互に与えられ
る。
実施の形態で述べたものと同様で、制御部１１の指示に
より、トリガ発生器１３より図９（ａ）に示すようなト
リガ信号が発生すると、このトリガ信号に同期して同図
（ｂ）に示すようにレーザ光のスポット位置がＡ点とＢ
点との間で交互に切替えられる、また、トリガ信号に同
期して高速同期信号発生器３２より同図（ｃ）に示すよ
うな高速同期信号が発生し、この高速同期信号に同期し
て同図（ｄ）（ｅ）に示すようにレーザ光切替え信号
ａ、ｂがレーザ光切替え部２１と２２に交互に与えられ
る。
【００４８】従って、このようにすれば、レーザ光のス
ポット位置を移動しながら、試料のより詳細な観察を実
現することができる。
ポット位置を移動しながら、試料のより詳細な観察を実
現することができる。
【００４９】なお、上述した各実施の形態では、レーザ
光切替え部３は、制御部１１に接続される場合を述べて
いるが、パソコン１２に直接接続してもよい。また、ト
リガ信号は、トリガ発生器１３より発生するようにした
が、外部からトリガ信号を入力するようにしてもよい。
さらに、光選択器８は、５７０ｎｍの波長を境に分光す
るものを説明したが、他の波長のものを用いてもよく、
またハーフミラーを用いてもよい。さらにまた、上述で
は２個のレーザ光源１、２の場合を述べたが、レーザ光
源は、１個でも３個以上であってもよい。
光切替え部３は、制御部１１に接続される場合を述べて
いるが、パソコン１２に直接接続してもよい。また、ト
リガ信号は、トリガ発生器１３より発生するようにした
が、外部からトリガ信号を入力するようにしてもよい。
さらに、光選択器８は、５７０ｎｍの波長を境に分光す
るものを説明したが、他の波長のものを用いてもよく、
またハーフミラーを用いてもよい。さらにまた、上述で
は２個のレーザ光源１、２の場合を述べたが、レーザ光
源は、１個でも３個以上であってもよい。
【００５０】また、上述した実施の形態では、各同期信
号を一定周期で発生させたもので説明したが、これに限
るものでなく、例えば、途中で周期を変えたり、任意に
発生させるようにしてもよい。また、２個のレーザ光の
切替えは、交互に行なわず例えば任意に選択するように
してもよい。また、上述した実施の形態では、光走査部
５でレーザ光を２次元的に走査させていたが、レーザ光
を固定しておき試料（ステージ側）を２次元的に移動さ
せてもよい。
号を一定周期で発生させたもので説明したが、これに限
るものでなく、例えば、途中で周期を変えたり、任意に
発生させるようにしてもよい。また、２個のレーザ光の
切替えは、交互に行なわず例えば任意に選択するように
してもよい。また、上述した実施の形態では、光走査部
５でレーザ光を２次元的に走査させていたが、レーザ光
を固定しておき試料（ステージ側）を２次元的に移動さ
せてもよい。
【００５１】
【発明の効果】以上述べたように本発明によれば、試料
上の所定位置にレーザ光のスポットを保持した状態で、
同期信号に応じて、試料に照射されるレーザ光の要否を
高速に切り替えることにより、試料のより詳細な観察を
実現することができる。
上の所定位置にレーザ光のスポットを保持した状態で、
同期信号に応じて、試料に照射されるレーザ光の要否を
高速に切り替えることにより、試料のより詳細な観察を
実現することができる。
【図１】本発明の第１の実施の形態の概略構成を示す
図。
図。
【図２】第１の実施の形態の動作を説明するためのタイ
ムチャート。
ムチャート。
【図３】本発明の第２の実施の形態の概略構成を示す
図。
図。
【図４】第２の実施の形態の動作を説明するためのタイ
ムチャート。
ムチャート。
【図５】本発明の第３の実施の形態の概略構成を示す
図。
図。
【図６】第３の実施の形態の動作を説明するためのタイ
ムチャート。
ムチャート。
【図７】本発明の第４の実施の形態の概略構成を示す
図。
図。
【図８】第４の実施の形態の動作を説明するためのタイ
ムチャート。
ムチャート。
【図９】本発明の第５の実施の形態の動作を説明するた
めのタイムチャート。
めのタイムチャート。
１．２…レーザ光源 ３…レーザ光切換え部 ４…光分光器 ５…光走査部 ６…対物レンズ ７…試料 ８…光選択器 ９…第１の光検出器 １０…第２の光検出器 １１…制御部 １２…パソコン １３…トリガ発生器 １４…ピンホール ２１、２２…レーザ光切替え部 ３１、３２…高速同期信号発生器
Claims (5)
- 【請求項１】 レーザ光を発する光源と、 この光源からのレーザ光のスポットを試料の所定位置に
保持させるスポット保持手段と、 前記試料からの光を検出する検出手段と、 前記試料に対してトリガ信号を発生するトリガ発生手段
と、 前記トリか発生手段のトリガ信号に同期して同期信号を
発生する同期信号発生手段と、 この同期信号発生手段の同期信号に応じて前記試料に対
するレーザ光の照射の要否を切替えるレーザ光切替え手
段とを具備したことを特徴とする光走査型顕微鏡。 - 【請求項２】 前記同期信号発生手段の２つの同期信号
間に複数の同期信号を発生する高速同期信号発生手段を
有し、 前記レーザ光切替え手段は、前記高速同期信号発生手段
の高速同期信号に応じて前記試料に対するレーザ光の照
射の要否を切替えることを特徴とする請求項１記載の光
走査型顕微鏡。 - 【請求項３】 前記スポット保持手段は、前記同期信号
発生手段の同期信号に同期させてレーザ光のスポット保
持位置を移動可能にしたことを特徴とする請求項１また
は２記載の光走査型顕微鏡。 - 【請求項４】 波長の異なるレーザ光を発する複数の光
源と、 これら光源からのレーザ光のスポットを試料の所定位置
に保持させるスポット保持手段と、 前記試料からの光を検出する検出手段と、 前記試料に対してトリガ信号を発生するトリガ発生手段
と、 前記トリか発生手段のトリガ信号に同期して同期信号を
発生する同期信号発生手段と、 前記複数の光源に対応させて複数設けられ、前記同期信
号発生手段の同期信号に応じて順に選択され、それぞれ
前記試料に対する前記光源のレーザ光の照射の要否を切
替えるレーザ光切替え手段とを具備したことを特徴とす
る光走査型顕微鏡。 - 【請求項５】 前記同期信号発生手段の２つの同期信号
間に複数の同期信号を発生する高速同期信号発生手段を
有し、 前記レーザ光切替え手段は、前記高速同期信号発生手段
の高速同期信号に応じて順に選択され、それぞれ前記試
料に対するレーザ光の照射の要否を切替えることを特徴
とする請求項４記載の光走査型顕微鏡。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26668299A JP4512219B2 (ja) | 1999-09-21 | 1999-09-21 | 光走査型顕微鏡 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26668299A JP4512219B2 (ja) | 1999-09-21 | 1999-09-21 | 光走査型顕微鏡 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001091837A true JP2001091837A (ja) | 2001-04-06 |
| JP2001091837A5 JP2001091837A5 (ja) | 2006-10-26 |
| JP4512219B2 JP4512219B2 (ja) | 2010-07-28 |
Family
ID=17434240
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26668299A Expired - Fee Related JP4512219B2 (ja) | 1999-09-21 | 1999-09-21 | 光走査型顕微鏡 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4512219B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003084210A (ja) * | 2001-07-04 | 2003-03-19 | Olympus Optical Co Ltd | 走査型レーザ顕微鏡及び外部信号の記録方法 |
| JP2011514963A (ja) * | 2007-10-06 | 2011-05-12 | コーニング インコーポレイテッド | 細胞応答のデュアル検出システム及び方法 |
| JP2012093757A (ja) * | 2010-10-22 | 2012-05-17 | Leica Microsystems Cms Gmbh | Ｓｔｅｄ光シートを用いるｓｐｉｍ顕微鏡 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01316715A (ja) * | 1988-06-17 | 1989-12-21 | Tokyo Electron Ltd | ビーム走査型光学顕微鏡 |
| JPH09329750A (ja) * | 1996-06-11 | 1997-12-22 | Nikon Corp | 光走査型顕微鏡 |
| JPH1010436A (ja) * | 1996-06-24 | 1998-01-16 | Nikon Corp | 光走査型顕微鏡 |
| JPH10206742A (ja) * | 1996-11-21 | 1998-08-07 | Olympus Optical Co Ltd | レーザ走査顕微鏡 |
-
1999
- 1999-09-21 JP JP26668299A patent/JP4512219B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01316715A (ja) * | 1988-06-17 | 1989-12-21 | Tokyo Electron Ltd | ビーム走査型光学顕微鏡 |
| JPH09329750A (ja) * | 1996-06-11 | 1997-12-22 | Nikon Corp | 光走査型顕微鏡 |
| JPH1010436A (ja) * | 1996-06-24 | 1998-01-16 | Nikon Corp | 光走査型顕微鏡 |
| JPH10206742A (ja) * | 1996-11-21 | 1998-08-07 | Olympus Optical Co Ltd | レーザ走査顕微鏡 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003084210A (ja) * | 2001-07-04 | 2003-03-19 | Olympus Optical Co Ltd | 走査型レーザ顕微鏡及び外部信号の記録方法 |
| JP4511105B2 (ja) * | 2001-07-04 | 2010-07-28 | オリンパス株式会社 | 走査型レーザ顕微鏡及び外部信号の記録方法 |
| JP2011514963A (ja) * | 2007-10-06 | 2011-05-12 | コーニング インコーポレイテッド | 細胞応答のデュアル検出システム及び方法 |
| JP2012093757A (ja) * | 2010-10-22 | 2012-05-17 | Leica Microsystems Cms Gmbh | Ｓｔｅｄ光シートを用いるｓｐｉｍ顕微鏡 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4512219B2 (ja) | 2010-07-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7180661B2 (en) | Confocal scanning microscope | |
| EP0807814B1 (en) | Two-photon molecular excitation in a laser scanning microscopy | |
| US6121603A (en) | Optical confocal device having a common light directing means | |
| US7015444B2 (en) | Optical-scanning examination apparatus | |
| JP4377811B2 (ja) | 生体分子解析装置および生体分子解析方法 | |
| JPH11194275A (ja) | プログラム可能であり空間的に光変調された顕微鏡および顕微鏡による方法 | |
| JPH10206742A (ja) | レーザ走査顕微鏡 | |
| US8154796B2 (en) | Microscope apparatus | |
| JP2003028795A (ja) | 試料検査方法及び走査型顕微鏡 | |
| US7483131B2 (en) | Laser-scanning microscope and microscope observation method | |
| JP2004110017A (ja) | 走査型レーザ顕微鏡 | |
| CN113533294B (zh) | 基于纳米间隙电极对下的时域、空域和谱域单分子表征装置 | |
| US20070272842A1 (en) | Raster microscope and method for the analysis of biological samples by means of a raster microscope | |
| EP1202102B1 (en) | Laser microscope | |
| EP1265092B1 (en) | Method and Apparatus for ROI-Scan with High Temporal Resolution | |
| JP5179099B2 (ja) | 光刺激用照明装置および顕微鏡装置 | |
| JPH09211010A (ja) | 電気生理特性測定装置 | |
| JP5052009B2 (ja) | 走査型顕微鏡および標本画像取得方法 | |
| JP4512219B2 (ja) | 光走査型顕微鏡 | |
| JP2005301065A (ja) | 観察装置 | |
| JP4422425B2 (ja) | 顕微鏡システム | |
| JP2003295064A (ja) | レーザ走査型顕微鏡システム、システム制御方法およびシステム制御をコンピュータに実行させる制御プログラム | |
| JP2000314839A (ja) | レーザ走査型顕微鏡 | |
| JP2004069428A5 (ja) | ||
| JP2006003747A (ja) | 光走査型観察装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060908 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20060908 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20091102 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20091208 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100204 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100427 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100510 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130514 Year of fee payment: 3 |
|
| R151 | Written notification of patent or utility model registration |
Ref document number: 4512219 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R151 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130514 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140514 Year of fee payment: 4 |
|
| S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |