JPH09329750A

JPH09329750A - 光走査型顕微鏡

Info

Publication number: JPH09329750A
Application number: JP8171833A
Authority: JP
Inventors: Yoshinori Kuroiwa; 義典黒岩
Original assignee: Nikon Corp
Current assignee: Nikon Corp
Priority date: 1996-06-11
Filing date: 1996-06-11
Publication date: 1997-12-22
Anticipated expiration: 2016-06-11
Also published as: JP3849176B2

Abstract

(57)【要約】【課題】煩雑な操作を必要とせず、簡単な構成で複数
の波長の光ビームを所定の範囲に同時に照射させること
ができる。【解決手段】励起光Ｌ１と開裂光Ｌ２とを発する光照
射系１０と走査手段２０との間の開裂光Ｌ１の光路中に
配置され、開裂光Ｌ２が試料８１へ向かうのを阻止する
遮光状態と、開裂光が試料８１へ向かうのを許す透光状
態とを切換える高速シャッタ７０と、スキャナ制御回路
３０から得られる走査位置情報３０ａに基づき、走査手
段２０による走査範囲内の所定の部分領域で高速シャッ
タ７０を透光状態にする制御回路４０とを備える．

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は光走査型顕微鏡に
関する。

【０００２】

【従来の技術】光走査型顕微鏡は、試料観察用の第１光
ビームと、試料の部分領域に所定の反応を促す第２光ビ
ームとを発し、各々を異なる光路に配置する光照射系
と、第１光ビームと第２光ビームとを同一光路に配置し
て試料上を２次元的に走査する走査手段と、第１光ビー
ムの照射によって試料から発する光を検出する検出手段
と、この検出手段の出力と走査手段から得られる走査位
置情報とに基づいて前記試料の画像を得る画像取得手段
とを備えている。

【０００３】この光走査型顕微鏡は生体細胞に光を照射
し、そのときに生体細胞に起きる現象を観察する顕微鏡
として使用される。

【０００４】この光走査型顕微鏡、例えばレーザ走査型
顕微鏡を使用して、ケイジドコンパウンド試薬を組み合
わせた生体細胞の蛍光観察を行うとき、レーザの波長に
よって照射範囲を変える。

【０００５】すなわち、生体細胞内の特定部位に特定量
だけ入れたケイジドコンパウンド試薬を開裂させるた
め、生体細胞内の特定部位にＵＶ波長のレーザ光を照射
し、細胞内に予め注入されている蛍光試薬とＵＶ波長の
レーザ光の照射によって開裂したケイジドコンパウンド
試薬とが選択的に結合して発した蛍光を観察するため、
可視波長のレーザ光を観察対象の生体細胞全体に照射す
る。

【０００６】波長により照射範囲を変える方法として
は、従来次の方法が行われている。照射する波長毎に波長に応じた光路をそれぞれ設定
し、スキャナを介さずに任意の範囲を照射する。光路毎にスキャナを用意し、各光路を通ったレーザ光
の照射範囲を独立に照射する。照射する波長毎に順番に走査を行って照射範囲を変え
る。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】しかし、の方法で
は、試料の厚さが非常に薄いため、開裂光と観察光とを
同一焦点にする操作（ピント合わせ）が非常に難しい、
の方法では、複数のスキャナ等を必要とするシステム
構成が複雑なものとなって、コストがかかり、システム
自体が大きい、光学アライメントをし難くくなってしま
い、の方法では、ＵＶ光と可視光とを生体細胞の異な
る範囲に同時に照射することができないため、蛍光試薬
と開裂したケイジドコンパウンド試薬とが結合した時の
現象をリアルタイムに観察できないという問題があっ
た。

【０００８】この発明はこのような事情に鑑みてなされ
たもので、その課題は煩雑な操作を必要とせず、簡単な
構成で複数の波長の光ビームを所定の範囲に同時に照射
させることができる光走査型顕微鏡を提供することであ
る。

【０００９】

【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
請求項１に記載の発明の光走査型顕微鏡は、試料観察用
の第１光ビームと、前記試料の部分領域に所定の反応を
促す第２光ビームとを発し、各々を異なる光路に配置す
る光照射系と、前記第１光ビームと前記第２光ビームと
を同一光路に配置して前記試料上を２次元的に走査する
走査手段と、前記第１光ビームの照射によって前記試料
から発する光を検出する検出手段と、この検出手段の出
力と前記走査手段から得られる走査位置情報に基づいて
前記試料の画像を得る画像取得手段とを備えた光走査型
顕微鏡において、前記光照射系と前記走査手段との間の
前記第２光ビームの光路中に配置され、前記第２光ビー
ムが前記試料へ向かうのを阻止する第１の状態と、前記
第２光ビームが前記試料へ向かうのを許す第２の状態と
を切換える光ビーム切換手段と、前記走査手段から得ら
れる走査位置情報に基づき、前記走査手段による走査範
囲内の所定の部分領域で前記光ビーム切換手段を前記第
２の状態にする制御回路とを備えることを特徴とする。

【００１０】制御回路が走査位置情報に基づき、走査手
段による走査範囲内の所定の部分領域で光ビーム切換手
段を前記第２の状態にするので、第１光ビームと第２光
ビームとを１組の走査手段で走査しながら、第１光ビー
ムを走査領域の全範囲に照射し、第２光ビームを走査領
域の一部分である反応させたい範囲内にだけ照射するこ
とができる。

【００１１】請求項２に記載の発明の光走査型顕微鏡
は、請求項１に記載の発明の光走査型顕微鏡において、
前記第２光ビームは、前記試料の部分領域に注入された
試薬を開裂させる紫外線領域の光ビームであることを特
徴とする。

【００１２】第１光ビームを照射した状態において、試
薬に第２光ビームが照射されると試薬は開裂されるの
で、第２光ビームの照射に応じた観察を行うことができ
る。

【００１３】請求項３に記載の発明の光走査型顕微鏡
は、請求項１に記載の発明の光走査型顕微鏡において、
前記画像取得手段は前記走査手段からの走査位置情報に
基づいて前記走査範囲内の少なくとも一部の領域を前記
第２光ビームを照射する領域とし、前記制御回路は、前
記領域を前記所定の部分領域とするように、前記走査手
段からの走査位置情報に基づいて前記光ビーム切換手段
の切換えを制御することを特徴とする。

【００１４】制御回路が走査位置情報に基づき走査範囲
内の少なくとも一部の領域を第２光ビームを照射する領
域とするので、走査範囲内の一部の領域以外の試料への
余計な光の照射が遮断される。

【００１５】請求項４に記載の発明の光走査型顕微鏡
は、請求項１に記載の発明の光走査型顕微鏡において、
前記画像取得手段で得られる前記画像を表示するモニタ
と、このモニタで表示された画像の少なくとも一部の領
域を指定する領域指定手段とを備え、前記制御回路は、
前記モニタの画面を構成する各画素に対応するデータメ
モリ部を有し、前記領域指定手段で指定された領域内の
全ての画素に対応するデータメモリ部の全てのアドレス
に、前記光ビーム切換手段を前記第２の状態にするため
のデータを予め記憶しておき、前記走査手段からの走査
位置位置情報に対応する前記メモリ部のデータに基づい
て前記光ビーム切換手段を前記第２の状態に維持するこ
とを特徴とする。

【００１６】制御回路が走査位置情報に対応するメモリ
部のデータに基づいて光ビーム切換手段を第２の状態に
するので、領域指定手段で指定された領域以外の試料へ
の余計な第２光ビームの照射が遮断される。

【００１７】

【発明の実施の形態】以下、この発明の実施の形態を図
面に基づいて説明する。

【００１８】図１はこの発明の第１実施形態に係るレー
ザ走査型顕微鏡のブロック構成図である。

【００１９】レーザ走査型顕微鏡１は、光照射系１０
と、走査装置（走査手段）２０と、スキャナ制御回路３
０と、切換制御回路４０と、蛍光検出器（検出手段）５
０と、画像処理回路（画像取得手段）６０と、高速シャ
ッタ（光ビーム切換手段）７０と、全反射ミラー２と、
ダイクロイックミラー３，４と、バリアフィルタ５とを
備える。

【００２０】光照射系１０は、試料観察用の励起光（第
１光ビーム）Ｌ１を発する励起用可視レーザ光源１１、
開裂光（第２光ビーム）Ｌ２を発するＵＶレーザ光源１
２とからなる。なお、光照射系１０は、マルチラインの
レーザ光源を用い、ダイクロイックミラーを用いて光路
を分離するようにしてもよい。

【００２１】走査装置２０はステージ８０に載置された
試料８１上で混合レーザ光Ｌ１２を２次元的に走査させ
る水平スキャナ２１と垂直スキャナ２２とからなる。

【００２２】スキャナ制御回路３０は、ＣＰＵ９０の画
像取得開始指令９０ａに基づいて水平スキャナ２１及び
垂直スキャナ２２の駆動を制御する。

【００２３】蛍光検出器５０は、試料８１の蛍光を検出
し、入力した蛍光を光強度を表す信号５０ａに変換す
る。

【００２４】画像処理回路６０は蛍光検出器５０の信号
５０ａとスキャナ制御回路３０から出力される走査位置
情報３０ａ（水平同期信号ＨＤ、垂直同期信号ＶＤ、ピ
クセルクロックＰＣ）とに基づいて試料８１の画像化を
図る。この画像処理回路６０は、Ａ／Ｄ変換素子、フレ
ームメモリ、Ｄ／Ａ変換素子等の画像化するための回路
及びＣＰＵからの操作で画像にラインを重ね書きするた
めのオーバーレイメモリ回路からなる。

【００２５】高速シャッタ７０は、光照射系１０と走査
装置２０との間の開裂光Ｌ２の光路中（ここではＵＶレ
ーザ光源１２と全反射ミラー２との間）に配置され、開
裂光Ｌ２が試料８１へ向かうのを阻止する第１の状態と
開裂光Ｌ２が試料８１へ向かうのを許す第２の状態とに
切り換わる。高速シャッタ７０としては、例えばＡＯＤ
（音響光学変調器）、ＥＯＤ（電気光学変調器）ＭＯＤ
（磁気光学変調器）がある。

【００２６】切換制御回路４０は、スキャナ制御回路３
０から得られる走査位置情報３０ａに基づいて高速シャ
ッタ７０の第１の状態と第２の状態とを切り換える。

【００２７】ダイクロイックミラー３は、ＵＶレーザ光
源１２から射出された開裂光Ｌ２を反射し、励起用可視
レーザ光源１１から射出された励起光Ｌ１を透過する。

【００２８】バリアフィルタ５は、ダイクロイックミラ
ー４で反射されずにダイクロイックミラー４を透過した
励起光Ｌ１及びＬ２をカットする。

【００２９】上記構成におけるレーザ光の光路を説明す
る。なお、試料８１としては生体細胞が用いられ、細胞
内には予め蛍光試薬が注入されている。また、この細胞
内の特定部位にはケージドコンパウンド試薬が特定量だ
け注入されている。

【００３０】励起用可視レーザ光源１１から射出され、
ダイクロイックミラー３を透過した励起光Ｌ１と、ＵＶ
レーザ光源１２から射出され、高速シャッタ７０を通過
した後、全反射ミラー２及びダイクロイックミラー３で
反射された開裂光Ｌ２とは、同一光路に導かれ混合光Ｌ
１２となる。

【００３１】混合光Ｌ１２は、ダイクロイックミラー４
で反射され、水平スキャナ２１及び垂直スキャナ２２へ
導かれ、スキャナ制御回路３０によって試料８１上で２
次元走査される。この混合光Ｌ１２のうち、開裂光Ｌ１
は試料８１内のケージドコンパウンド試薬を開裂させ、
励起光Ｌ２は試料８１中の蛍光試薬を励起して蛍光Ｌ３
を発生させる。

【００３２】この蛍光Ｌ３は励起光Ｌ２と共に同じ光路
を逆行し、垂直スキャナ２２及び水平スキャナ２１でデ
スキャニングされ、ダイクロイックミラー４を透過し、
励起光Ｌ２と分離される。ダイクロイックミラー４を透
過した蛍光Ｌ３はバリアフィルタ５で完全に蛍光Ｌ３の
みとされ、蛍光検出器５０に入射する。

【００３３】図２はスキャナ制御回路の詳細ブロック図
であり、この図を参照してスキャナ制御回路の動作を説
明する。

【００３４】スキャナ制御回路３０は垂直同期信号発生
回路３１と、垂直スキャナ駆動回路３２と、水平同期信
号発生回路３３と、水平スキャナ駆動回路３４と、ピク
セルクロック発生回路３５と、１水平ラインカウント回
路３６と、１フレームカウント回路３７とからなる。

【００３５】垂直同期信号発生回路３１は、システムを
コントロールしているＣＰＵ９０から画像取得開始指令
９０ａを受けて垂直走査を開始させる垂直同期信号ＶＤ
を出力する。

【００３６】垂直スキャナ駆動回路３２は、垂直同期信
号ＶＤを入力すると、垂直スキャナ２２の駆動信号（ノ
コギリ波）ＶＤＤを出力し、垂直スキャナ２２を駆動す
る。

【００３７】垂直同期信号ＶＤは同時に水平同期信号発
生回路３３に入力され、水平同期信号発生回路３３は水
平走査を開始させる水平同期信号ＨＤを出力する。

【００３８】水平スキャナ駆動回路３４は、水平同期信
号ＨＤを入力し、水平スキャナ２１の駆動信号（ノコギ
リ波）ＨＤＤを出力し、水平スキャナ２１を駆動する。

【００３９】水平同期信号ＨＤは同時にピクセルクロッ
ク発生回路３５に入力され、ピクセルクロック発生回路
３５は蛍光データをサンプリングするピクセルクロック
ＰＣを画像処理回路６０へ出力する。

【００４０】１水平ラインカウント回路３６は、水平同
期信号ＨＤとピクセルクロックＰＣとを入力し、水平同
期信号ＨＤの入力に同期してピクセルクロックＰＣのカ
ウントを開始し、予め設定されたクロック数（１水平ラ
インの１周期に当たるピクセルクロックの数、例えば５
１２）をカウントし終えると、トリガ信号ＴＲ１を出力
する。

【００４１】水平同期信号発生回路３３は、トリガ信号
ＴＲ１を入力すると、次のラインを走査するための水平
同期信号ＨＤを出力する。

【００４２】１フレームカウント回路３７は、垂直同期
信号ＶＤと水平同期信号ＨＤとを入力し、垂直同期信号
ＶＤの入力に同期して水平同期信号ＨＤのカウントを開
始し、予め設定された数（１フレームの１周期に当たる
水平同期信号の数、例えば、５１２）をカウントし終え
ると、トリガ信号ＴＲ２を出力する。

【００４３】垂直同期信号発生回路３１はトリガ信号Ｔ
Ｒ２を入力すると、次のフレームの走査を開始し、垂直
同期信号ＶＤを出力する。

【００４４】スキャナ制御回路３０は、上記のようにし
て、水平スキャナ２１と垂直スキャナ２２とを、例えば
同期信号発生器を用いて同期をとって駆動することで混
合光Ｌ１２を２次元的に走査する。

【００４５】図３は切換制御回路の詳細ブロック図であ
り、この図を参照して切換制御回路の動作を説明する。

【００４６】切換制御回路４０は有効水平同期信号カウ
ント回路（有効ＨＤカウント回路と称する）４１と、有
効ピクセルクロックカウント回路（有効ＰＣカウント回
路と称する）４２と、高速シャッタ駆動回路４３とから
なる。

【００４７】有効ＨＤカウント回路４１は、垂直同期信
号ＶＤと水平同期信号ＨＤとを入力し、垂直同期信号Ｖ
Ｄの入力に同期して水平同期信号ＨＤのカウントを開始
し、ＣＰＵ９０で予め設定されたカウント値までの間
は、例えばＨレベルのＨＤイネーブル信号ＨＤＥを出力
する。

【００４８】一方、有効ＰＣカウント回路４２は、水平
同期信号ＨＤとピクセルクロックＰＣを入力し、水平同
期信号ＨＤに同期してピクセルクロックをカウントし、
ＣＰＵ９０で予め設定されたカウント値までの間は、例
えばＨレベルのピクセルクロックイネーブル信号ＰＣＥ
を出力する。

【００４９】高速シャッタ駆動回路４３は、有効ＨＤカ
ウント回路４１及び有効ＰＣカウント回路４２の出力が
共にＨレベルのとき、高速シャッタ駆動回路４３を開裂
光の通過を許す状態（第２の状態）に駆動する信号４３
ａを出力する。

【００５０】上記第１実施形態に係るレーザ走査型顕微
鏡によれば、励起光Ｌ１は水平スキャナ２１及び垂直ス
キャナ２２による走査によって細胞全体に照射される
が、開裂光Ｌ２は予め設定された矩形の領域だけに照射
させることができる。そして、励起光Ｌ１と開裂光Ｌ２
とは同時に照射されるため、試料８１に生じた反応をリ
アルタイムで観察することができる。

【００５１】図４はこの発明の第２実施形態に係るレー
ザ走査型顕微鏡のブロック構成図であり、第１の実施形
態と同一部分については同一符号を付し、その説明を省
略する。

【００５２】この実施形態には、画像処理回路６０で得
られる画像信号６０ａを再生するモニタ１００と、この
モニタ１００に表示された画像の少なくとも一部の領域
を指定するポインティングデバイス（領域指定手段）９
１とが付加されている。

【００５３】モニタ１００にはＣＲＴが用いられ、モニ
タ１００は例えば画面を構成する画素に対応したバッフ
ァメモリを持ち、その内容を繰り返し表示する。なお、
バッファメモリの内容は動的に変更可能となっている。

【００５４】ポインティングデバイス９１は、例えばタ
ブレット（デジタイザ）、ライトペン、マウス等であ
り、ＣＰＵ９０に接続されており、画像処理回路６０を
介してモニタ１００の画面上の任意の１点を指示するこ
とができる。

【００５５】図５は切換制御回路の詳細ブロック図であ
る。

【００５６】切換制御回路４０はピクセルクロックカウ
ンタ４５、メモリ４６、高速シャッタ駆動回路４７から
なる。

【００５７】ピクセルクロックカウンタ４５は、垂直同
期信号ＶＤとピクセルクロックＰＣとを入力し、垂直同
期信号ＶＤの入力に同期してピクセルクロックＰＣのカ
ウント値をリセットし、ピクセルクロックＰＣのカウン
トを開始し、そのカウント値４５ａを出力する。

【００５８】メモリ４６は例えばＲＡＭで構成され、画
像の画素サイズと同じかそれ以上で１ビットデータが記
憶できる容量を有し、画素単位でアドレスが定義されて
いる。ＣＰＵ９０によって画素と対応したアドレスにシ
ャッタコントロールデータ４６ａが後述する方法で予め
書込まれている。

【００５９】このメモリ４６は、ピクセルクロックＰＣ
のカウント値４５ａをメモリ４６のアドレスとして入力
し、インクリメントされたカウント値が入力する度に、
カウント値に対応するアドレスに書込まれている１ビッ
トのシャッタコントロールデータ４６ａを出力する。

【００６０】高速シャッタ駆動回路４７は、シャッタコ
ントロールデータ４６ａを入力し、このシャッタコント
ロールデータ４６ａに基づいて高速シャッタ７０を開裂
光の通過を許す状態（第２の状態）に駆動する信号４７
ａを出力する。

【００６１】次に、予め行われる上記メモリ３６へのシ
ャッタコントロールデータの書き込みについて説明す
る。

【００６２】図６はモニタ画面上に表示されたラスタス
キャンして取得された１フレームの蛍光画面を示す図、
図７はシャッタコントロールデータを記憶してあるメモ
リのマッピングデータを示す図である。なお、図７にお
いて、説明を簡略化するため、画素サイズを２５×２５
としている。

【００６３】先ず、１フレーム（１画像）だけラスタス
キャンして得た蛍光画面１０１の全体を図６に示すよう
にモニタ１００上に表示させる。

【００６４】次に、このモニタ１００で試料８１の全体
画像を見ながら、実際に開裂光Ｌ２で開裂したいケージ
ドコンパウンド試薬の注入されている領域をポインティ
ングデバイス９１を用いてトレースし、図６に示すよう
な軌跡１０２で囲まれた領域１０３を表示させる。

【００６５】なお、表示させる領域１０３は１つに限る
ものではなく、任意の数の領域を指定してもよい。

【００６６】上記領域１０３を決定後、ＣＰＵ９０は図
７に示すように画素と対応したアドレスをたよりにメモ
リ４６にアクセスし、高速シャッタ７０の第２の状態又
は第１の状態を示すシャッタコントロールデータ４６ａ
をメモリ３６に直接書込む。

【００６７】図において、「１」は第２の状態にするこ
と、「０」は第１の状態にすることをそれぞれ表してい
る。

【００６８】上記第２実施形態に係るレーザ走査型顕微
鏡によれば、励起光Ｌ１は水平スキャナ２１及び垂直ス
キャナ２２による走査によって細胞全体に照射される
が、開裂光Ｌ２は、予め行われた走査に基づいてメモリ
４６に記憶された領域１０３だけに１画素もずれずに照
射される。そして、励起光Ｌ１と開裂光Ｌ２とは同時に
照射されるため、試料８１に生じた反応をモニタ１００
によってリアルタイムで観察することができる。

【００６９】なお、上記実施形態においては、第２光ビ
ームはケイジドコンパウンド試薬開裂用レーザ光として
説明したが、細胞を殺すためのレーザ（レーザメス）と
して用いることもできる。

【００７０】

【発明の効果】以上に説明したように請求項１記載の発
明の光走査型顕微鏡によれば、制御回路が走査位置情報
に基づき、走査手段による走査範囲内の所定の部分領域
で光ビーム切換手段を前記第２の状態にするので、第１
光ビームと第２光ビームとを１組の走査手段で走査しな
がら、第１光ビームで走査領域の全範囲に照射し、第２
光ビームで走査領域の一部分である反応させたい範囲内
だけ照射することができる。したがって、ピント合わせ
のような煩雑な操作を必要とせず、１組の走査手段だけ
の簡単な構成で複数の波長の光ビームを所定の範囲に同
時に照射させることができる。例えば、ケイジドコンパ
ウンド試薬を組合わせた蛍光観察では、蛍光試薬と開裂
したケイジドコンパウンド試薬とが結合した時の現象を
リアルタイムに反応を観察することができる。

【００７１】請求項２記載の発明の光走査型顕微鏡によ
れば、第１光ビームを照射した状態において、試薬に第
２光ビームが照射されると試薬は開裂されるので、第２
光ビームの照射に応じた観察を行うことができる。

【００７２】請求項３記載の発明の光走査型顕微鏡によ
れば、走査範囲内の一部の領域以外の試料への余計な光
の照射が遮断され、第２光ビームは走査領域の一部分で
ある反応させたい範囲内だけ照射することができる。

【００７３】請求項４に記載の発明の光走査型顕微鏡に
よれば、領域指定手段で指定された領域以外の試料への
余計な第２光ビームの照射が遮断され、第２光ビームは
予め行われた走査に基づいてメモリに記憶された領域に
対応する範囲内だけ照射することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１はこの発明の第１実施形態に係るレーザ走
査型顕微鏡のブロック構成図である。

【図２】図２はスキャナ制御回路の詳細ブロック図であ
る。

【図３】図３は切換制御回路の詳細ブロック図である。

【図４】図４はこの発明の第２実施形態に係るレーザ走
査型顕微鏡のブロック構成図である。

【図５】図５は切換制御回路の詳細ブロック図である。

【図６】図６はモニタ画面上に表示されたラスタスキャ
ンして取得された１フレームの蛍光画面を示す図であ
る。

【図７】図７はシャッタコントロールデータを記憶して
あるメモリのマッピングデータを示す図である。

【符号の説明】

１レーザ走査型顕微鏡１０光照射系２０走査装置（走査手段）３０スキャナ制御回路４０切換制御回路４６メモリ５０蛍光検出器（検出手段）６０画像処理回路（画像取得手段）７０高速シャッタ（光ビーム切換手段）８１試料９１ポインティングデバイス（領域指定手段）１００モニタ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】試料観察用の第１光ビームと、前記試料
の部分領域に所定の反応を促す第２光ビームとを発し、
各々を異なる光路に配置する光照射系と、前記第１光ビ
ームと前記第２光ビームとを同一光路に配置して前記試
料上を２次元的に走査する走査手段と、前記第１光ビー
ムの照射によって前記試料から発する光を検出する検出
手段と、この検出手段の出力と前記走査手段から得られ
る走査位置情報に基づいて前記試料の画像を得る画像取
得手段とを備えた光走査型顕微鏡において、前記光照射系と前記走査手段との間の前記第２光ビーム
の光路中に配置され、前記第２光ビームが前記試料へ向
かうのを阻止する第１の状態と、前記第２光ビームが前
記試料へ向かうのを許す第２の状態とを切換える光ビー
ム切換手段と、前記走査手段から得られる走査位置情報
に基づき、前記走査手段による走査範囲内の所定の部分
領域で前記光ビーム切換手段を前記第２の状態にする制
御回路とを備えることを特徴とする光走査型顕微鏡。
【請求項２】前記第２光ビームは、前記試料の部分領
域に注入された試薬を開裂させる紫外線領域の光ビーム
であることを特徴とする請求項１に記載の光走査型顕微
鏡。
【請求項３】前記画像取得手段は前記走査手段からの
走査位置情報に基づいて前記走査範囲内の少なくとも一
部の領域を前記１つの波長の光ビームを照射する領域と
し、前記制御回路は、前記領域を前記所定の部分領域と
するように、前記走査手段からの走査位置情報に基づい
て前記光ビーム切換手段の切換えを制御することを特徴
とする請求項１に記載の光走査型顕微鏡。
【請求項４】前記画像取得手段で得られる前記画像を
表示するモニタと、このモニタで表示された画像の少な
くとも一部の領域を指定する領域指定手段とを備え、前記制御回路は、前記モニタの画面を構成する各画素に対応するデータメ
モリ部を有し、前記領域指定手段で指定された領域内の
全ての画素に対応するデータメモリ部の全てのアドレス
に、前記光ビーム切換手段を前記第２の状態にするため
のデータを予め記憶しておき、前記走査手段からの走査
位置位置情報に対応する前記メモリ部のデータに基づい
て前記光ビーム切換手段を前記第２の状態に維持するこ
とを特徴とする請求項１に記載の光走査型顕微鏡。