JP2000319290A

JP2000319290A - 新規の白金（ｉｖ）錯体及びその製造方法

Info

Publication number: JP2000319290A
Application number: JP11300822A
Authority: JP
Inventors: Eiji Ken; 英二權; Keishi Ko; 圭子黄; Genkei Kin; 元奎金
Original assignee: Sookmyung Womens University SWU
Current assignee: Sookmyung Womens University SWU
Priority date: 1999-05-11
Filing date: 1999-10-22
Publication date: 2000-11-21
Anticipated expiration: 2019-10-22
Also published as: US6340770B1; KR20000073485A; JP3354532B2; KR100317473B1

Abstract

(57)【要約】【課題】本発明は新規の白金（ＩＶ）錯体及びその製
造方法に関し、より詳しくは抗癌剤として有用な新規の
白金（ＩＶ）錯体及びその製造方法に関するものであ
る。【解決手段】下記化学式３で示される白金（ＩＶ）錯
体が開示される。＜化学式３＞【化１】 R₁及びR₂は、それぞれ−OH、−Cl、−OCOCH₃、−OCOCF₃
又は−OCO(CH₂)_nCH₃（nは１乃至４中の整数）である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規の白金（ＩＶ）
錯体及びその製造方法に関し、より詳しくは抗癌剤とし
て有用な新規の白金（ＩＶ）錯体及びその製造方法に関
する。

【０００２】

【従来の技術】今日、人類に一番大きい苦痛を与えてい
る疾患中の一つが癌（cancer）である。人類は癌の存在
を確認したあと抗癌剤開発、遺伝子治療、手術療法、放
射線療法等、癌を征服するための多角的な努力と研究を
重ね今に至っている.その中でも、シス−ジアミンジク
ロロプラチニウム（cis−Diaminedichloroplatinum（Ｉ
Ｉ）：cisplatin）（以下、シスプラチンという）を始
めとする多くの白金錯体等は非常に優れた抗癌剤に認め
られ臨床的に現在用いられており、臨床試験中にある誘
導体等が存在し引続き新規の誘導体等も登場している。
特に、シスプラチン（cis−Diaminedichloroplatinum
（ＩＩ）、cisplatin）¹ ^-2)は、1972年に紹介され現在
まで臨床的に用いられている抗癌剤であり、既存の他の
抗癌剤では治療が困難であった前立腺癌で卓越な治療効
果を現わしており、その他にも卵巣癌、膀胱癌等の固形
癌に優れた治療効果を現わしている。^3-10 ⁾化学式１に
示されたように、シスプラチンは白金（ＩＩ）錯物であ
り、中央に位置する白金がアミンと安定した化合物を形
成している。＜化学式１＞

【０００３】

【化１８】

【０００４】シスプラチンの抗癌作用機転を調べて見れ
ば、他のアルキル化剤と同様に塩素配位子がDNAと位置
替えして安定した結合をなすことにより^66-67)、DNAの
構造に著しい変化を与えるものと考察された。^68-69) シスプラチンを生体内に投与すれば血液、淋巴腺、腸内
液等塩素イオン濃度の高い所では（１０３mM）十分な量
の塩素イオンが存在するためシスプラチンの塩素イオン
離脱が抑制され、電荷を帯びない錯体状態で受動的拡散
により細胞内に入った後、加水分解を受けジアクァ（di
aqua）錯体となるものと知られたが、その理由は細胞外
部より細胞内の塩素イオン濃度が３０倍も低い（４mM）
ためと報告されている。⁹¹⁾ 一旦、細胞内に入りアクア錯体であるPt(OH)₂(NH₃)₂又
はPt(OH)(OH₂)(NH₃)₂状に陽イオン化したシスプラチン
は、陰イオン化したDNAの螺旋構造と電気的引力が作用
して結合することになるものと知られた。^92-93) シスプラチンとDNAとの結合は癌細胞と正常細胞に対し
同一程度に生じるが、癌細胞は増殖速度が正常細胞より
はるかに早い反面、損傷を受けたときの回復程度が非常
に緩慢なため正常細胞より癌細胞に対する障害が大きい
ものと報告された。^87-90)

【０００５】しかし、シスプラチンは次の幾らかの問題
点等により臨床で制限された場合にのみ用いられてい
る。一番目に、治療を受ける患者の２０％程度で深刻な
副作用の新毒性及び悪心、嘔吐、難聴、神経毒性等を起
こし、^15-17) 二番目に、抗癌作用が広範囲に及ばないため乳房癌や直
腸癌等、幾つかの癌に対し低い治療効果を現わし、¹⁸⁾ 三番目に、シスプラチン耐性腫瘍細胞の発現と、^19-21) 四番目に、低い水溶性等の問題点等がある。五番目に、
腎臓毒性が深刻で幾多の問題を誘発させているが、シス
プラチンの腎臓毒性は用量増加に伴う毒性増加（dose−
limiting）で²²⁾、主に細尿管壊死を起こすが腎皮質に
直接的に毒性を表わし遠位細尿管と集合管にも損傷を与
え、近位細尿管（renal proximal tubule）の損傷が一
番激しいものと報告された。² ^3-26)

【０００６】このようなシスプラチンの問題点等を克服
するための第２世代白金錯体として、シス−ジアミン
（１,１−シクロブタン−ジカルボキシレート）プラチ
ニウム（ＩＩ）（cis−diamine（１,１−cyclobutane−
dicarboxylato）platinum（ＩＩ）：carboplatin）（以
下、カルボプラチンという）が開発され現在臨床で用い
られている。カルボプラチン（化学式２）は、シスプラ
チンの塩素基（chloro）が１,１−シクロブタンジカル
ボキシレート（１,１−cyclobutanedicarboxylato）に
置換された化合物で、新毒性や悪心等の副作用がシスプ
ラチンより少なく^31-32)、水溶性が優れ、卵巣癌、小細
胞肺癌等の幾種類の癌からシスプラチンと類似の効果を
現わし優れた抗癌剤に認められた。^33-34) ＜化学式２＞

【０００７】

【化１９】

【０００８】しかし、依然狭い抗癌スペクトラム
^33)、35)とシスプラチンとの交差耐性発現で、シスプラ
チンに耐性のある癌細胞に適用できない問題点を現わし
た。^36-37)シスプラチンの耐性細胞が発現される機転を
考察すれば、白金錯体がDNAに作用して障碍を与えると
き損傷を受けたDNAが復旧する率が増加し、細胞内グル
タチオン（glutathion）のような分子量の少ないチオル
（thiol）基を有する細胞内物質の数値が上がることに
より薬物を不活性化させ、薬物の細胞内再吸収を低減さ
せる作用等を誘発することになる。したがって、向後開
発される誘導体はシスプラチン耐性細胞株の殺滅に焦点
を合わせなければならないものと展望される。その理由
は、３０余年間抗癌剤に用いられたシスプラチンに対し
癌細胞等が耐性を持つに至ったためである。多様な白金
（ＩＩ）錯体等が開発され臨床試験中にあるが、シスプ
ラチンと交差耐性を見せその限界を有するためこれを克
服できる代替物質の開発が要求される。さらに、患者の
苦痛を和らげるため注射剤にのみ適用していた限界を克
服するため、経口用にも使用可能な白金錯体の開発がさ
らに一つの課題となっている。このような課題等を解決
できる物質として現在白金（ＩＶ）錯体が開発されてい
る。しかし、これ以外にも優れた水溶性液と脂溶性及び
腎臓毒性の誘発危険性が低くなければならない等、新規
の抗癌剤が満足しなければならない条件はいろいろとあ
る。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明は先ず優れた抗
癌活性を有し、次にシスプラチン耐性細胞株にも抗癌活
性を現わし、三番目に脂溶性が良く、四番目に腎臓毒性
が少なく、五番目に経口に投与できる新規の抗癌剤、及
びその製造方法を提供することを目的とする。さらに、
前記新規の抗癌剤の合成に用いられる中間体及びこれを
利用した抗癌剤の製造方法を提供することを目的とす
る。

【００１０】

【課題を解決するための手段】前記目的を達成するた
め、本発明は下記化学式３で示される白金（ＩＶ）錯体
を提供する。＜化学式３＞

【００１１】

【化２０】 R₁及びR₂はそれぞれ−OH、−Cl、−OCOCH₃、−OCOCF₃又
は−OCO(CH₂)_nCH₃（nは１乃至４中の整数）である。さ
らに、前記化学式３の化合物を合成するための方法を提
供する。

【００１２】

【発明の実施の形態】本発明者は、幾多の研究及び実験
を繰り返した結果、前記化学式３で示される新規の白金
（ＩＶ）錯体が抗癌剤として優れた特性を持つことを見
出した。前記の化学式の化合物は、先ず７員環白金錯体
を基本構造にすることによりシスプラチンより優れた抗
癌活性を有するようにした。このとき、前記７員環をな
す配位子は１,４−ブタンジアミン（１,４−butanediam
ine）に選択した。１,４−ブタンジアミンに他の機能基
を導入しない理由は、単純な７員環自体だけでも５員環
や６員環より環の大きさがより大きいのでDNAとの結合
の際螺旋構造を激しく歪ませるため追加的な機能基を導
入する場合に分子が一層大きくなり、DNA二重螺旋構造
により多い影響を与え毒性を誘発させる可能性を排除で
きないためである。脱離基としては脂溶性の優れた塩素
配位子等と、水溶性の優れた生体内の代謝物であるマロ
ン酸等をそれぞれ導入した。

【００１３】また、平面構造である白金（ＩＩ）錯体の
抗癌活性の限界を克服し、生体内の利用効率を高めるた
め垂直配位子を導入して八面体構造をなすようにした。
おおよそ、白金（ＩＶ）錯体は２価の白金錯体が酸化し
４価形体の白金錯体となったもので、４価白金錯体は生
体内リポピリシティ（liphopilicity）を高め生体内の
利用効率が高く、プロドラグ（prodrug）形体に作用し
て生体内で２価に還元され抗癌活性を現わすため毒性が
少ないものと知られている。^145-148)

【００１４】本発明に係るより好ましい化合物には、下
記化学式４乃至９の化合物がある。（１）トランス、シス−ジヒドロキソ、ジクロロ−１,
４−ブタンジアミンPt（ＩＶ）錯体（以下、７(OH)Clと
略称する）：trans、cis−dihydroxo、dichloro−１,４
−butanediamine Pt（ＩＶ）complex ＜化学式４＞

【００１５】

【化２１】

【００１６】前記化学式４の白金錯体は下記反応式１に
示すように、ジクロロ−１,４−ブタンジアミンPt（Ｉ
Ｉ）錯物（dichloro−１,４−butanediamine Pt（Ｉ
Ｉ）complex）に３０％H₂O₂を加え、平面の白金（Ｉ
Ｉ）錯体を酸化して垂直にヒドロキシ（hydroxy）基を
導入することにより八面体構造の［７(OH)Cl］を得る。
前記ジクロロ−１,４−ブタンジアミンPt（ＩＩ）錯物
（dichloro−１,４−butanediamine Pt（ＩＩ）comple
x）は、反応式１に示すように通常の方法に従い得たも
のを用いる。＜反応式１＞

【００１７】

【化２２】

【００１８】（２）トランス、シス−ジアセテート、ジ
クロロ−１,４−ブタンジアミンPt（ＩＶ）錯体（以
下、［７(Ac)Cl］と略称する）：trans、cis−diacetat
o、dichloro−１,４−butanediamine Pt（ＩＶ）comple
x ＜化学式５＞

【００１９】

【化２３】

【００２０】前記化学式５の白金（ＩＶ）錯体は前記化
学式４の化合物、即ち７(OH)Clにアセチル基を導入した
ものであり、下記反応式２に示すように、溶媒にCH２Cl
２を用いて７(OH)Clに無水酢酸を過量添加し反応させて
合成した。＜反応式２＞

【００２１】

【化２４】

【００２２】（３）トランス、シス−ジトリフルオルア
セテート−１,４−ブタンジアミンPt（ＩＶ）錯体（以
下、［７(OH)Cl］と略称する）：trans、cis−ditriflu
oroacetato、dichloro−１,４−butanediamine Pt（Ｉ
Ｖ）complex ＜化学式６＞

【００２３】

【化２５】

【００２４】前記化学式６の白金（ＩＶ）錯体は、下記
反応式３でのように、７(OH)Clにトリフルオルアセチッ
クアンヒドライド（trifluoroacetic anhydride）を過
量添加して反応させることにより得る。＜反応式３＞

【００２５】

【化２６】

【００２６】（４）トランス−ジヒドロキソ、マロネー
ト−１,４−ブタンジアミンPt（ＩＶ）錯体（以下、
［７(OH)M］と略称する）：trans−dihydroxo、malonat
o−１,４−butanediamine Pt（ＩＶ）complex ＜化学式７＞

【００２７】

【化２７】

【００２８】前記化学式７の白金（ＩＶ）錯体を合成す
るため反応式４に示すように、先ずシス−ジアイオド−
１,４−ブタンジアミンPt（ＩＩ）錯物（cis−diiodo−
１,４−butanediamine Pt（ＩＩ）complex）にジシルバ
−マロネート塩（disilvermalonate salt）を反応させ
た後、沈殿物のAgIを除去して水溶液を濃縮させ白色の
鱗状の沈殿物のマロネート−１,４−ブタンジアミンPt
（ＩＩ）錯物（malonato−１,４−butanediamine Pt
（ＩＩ）complex：以下７Mとする）を得る。次いで、前
記合成された７Mに過量の３０％H₂O₂を加え［７(OH)M］
を合成する。＜反応式４＞

【００２９】

【化２８】

【００３０】（５）トランス−ジアセテート、マロネー
ト−１,４−ブタンジアミンPt（ＩＶ）錯体（以下、
［７(Ac)M］とする）：trans−diacetato、malonato−
１,４−butanediamine Pt（ＩＶ）complex ＜化学式８＞

【００３１】

【化２９】

【００３２】反応式５に示すように、CH₂Cl₂を溶媒とし
７(OH)Mに無水酢酸を過量添加して反応させた後、次い
で水とメタノールを３：２にした溶媒で再結晶すれば、
針状の白色結晶性沈殿形体で前記化学式８の［７(Ac)
M］が得られる。＜反応式５＞

【００３３】

【化３０】

【００３４】（６）トランス−ジトリフルオルアセテー
ト、マロネート−１,４−ブタンジアミンPt（ＩＶ）錯
体（以下、［７(TF)M］；trans−ditrifluoroacetato、
malonato−１,４−butanediamine Pt（ＩＶ）complex ＜化学式９＞

【００３５】

【化３１】

【００３６】前記化学式９の白金（ＩＶ）錯体は、生体
内の利用効率を高めることができる弗素原子が導入され
た物質であり、下記反応式６に示すように、先ず７(OH)
Mにトリフルオルアセチックアンヒドライド（trifluoro
acetic anhydride）を過量添加して反応させ、トランス
−トリフルオルアセテート、マロネート−１,４−ブタ
ンジアミンPt（ＩＶ）錯物（trans−trifluoroacetat
o、malonato−１,４−butanediamine Pt（ＩＶ）comple
x；以下［７(TF)M］とする）を合成した後、これをメタ
ノールで精製して正六面体の透明な単一結晶として得
る。＜反応式６＞

【００３７】

【化３２】

【００３８】合成及び構造究明以下では本発明に係る好ましい白金（ＩＶ）錯体の合成
例、及び合成により得られた化合物の構造を究明する。
しかし、本発明の権利範囲がこれに限定されるものでは
ない。

【００３９】実施例１トランス、シス−ジヒドロキソ、ジクロロ−１,４−ブ
タンジアミンPt（ＩＶ）錯体／［７(OH)Cl］の合成：tr
ans、cis−Dihydroxo、dichloro−１,４−butanediamin
e Pt（ＩＶ）complex ［７Cl］３g（8.48mM）を水１００mlに懸濁し、３０％
過酸化水素水３０mlを添加して８０℃で５時間反応させ
た。反応後、減圧濃縮して微黄色の沈殿物が生成される
とメタノールを３００ml添加し４℃で２時間以上放置し
た後、濾過して沈殿物をメタノールで洗滌してから６０
℃で減圧乾燥して明るい微黄色の結晶性沈殿物2.17gを
得た。収得率：65.95％ IR (KBr、cm^-1)：3502、3200、1572、1027、545¹ H−NMR (D₂O)：3.2(2H)、2.8(4H)、2.5(4H)、1.7(4
H)、元素分析結果：C₄H₁₄N₂Cl₂O₂Ptに対する理論値 C；12.37％、 H；3.61％、 N；7.22％、 O；8.25％測定値 C；12.35％、H；3.63％、N；7.25％、O；8.25％合成した［７(OH)Cl］のOH基を確認するため赤外線分光
法で分析した結果、３５００cm^-1付近でO−H結合の強力
な伸縮振動が単一ピークで現われ、N−H結合の伸縮振動
は３２００cm^-1付近で広く現われた。

【００４０】実施例２トランス、シス−ジアセテート、ジクロロ−１,４−ブ
タンジアミンPt（ＩＶ）錯体の合成（以下、［７(Ac)C
l］）：trans、cis−Diacetato、dichloro−１,４−but
anediamine Pt（ＩＶ）complex ７(OH)Cl １g（2.577mM）をメチレンクロライド１００m
lに懸濁させ、アセチックアンヒドライド（acetic anhy
dride）２０mlを添加して還流しながら３日間反応させ
た。反応後、減圧濃縮して得た沈殿物をメタノールに溶
解して濾過した後、濾液を再結晶して透明な微黄色直六
角面体の結晶0.96gを得た。収得率：78.9％ IR(KBr、cm^-1)：3159、3039、1598、1363、1295、986、
704、503¹ H−NMR(DMSO−d₆)：7.9(4H)、2.5−2.7(4H)、1.9−2.0
(6H)、1.65(4H)¹ H−NMR(CD₃OD)：2.85−2.95(4H)、2.1(6H)、1.85(4H)¹³ C−NMR(CD₃OD)：183.1、49.5、49.3、49.1、49、48.
8、48.6、48.5、48.2、27.6、23.6 元素分析結果：C₈H₁₈N₂Cl₂O₄Ptに対する理論値 C；20.34％、 H；3.81％、 N；5.93％、実験値C；20.33％、 H；3.80％、 N；5.93％、前記合成により得られた結晶を赤外線分光法、核磁気共
鳴分光法、元素分析で構造を確認し、Ｘ−線回折法で構
造を究明した。赤外線分光法で分析した結果、３５００
cm^-1付近のO−H結合の強力な伸縮振動がヒドロキシ基が
なくなることにより消滅し、１６００cm^-1付近でカルボ
ニル（C＝O）基の強力な伸縮振動ピークが現われるのを
確認することができた。

【００４１】¹H−NMRスペクトルは溶媒をDMSO−d₆を用
いて分析した結果、窒素と結合した水素が7.8−7.9ppm
の間の低磁場でピークが現われ、アルキル基の水素等は
1.6−3.9ppmの間で各炭素に結合された水素の比率でピ
ークを示したが、分離状態が不良でCD₃ODを溶媒で再分
析した結果1.85ppmでアミンと一番遠く離れた二つの炭
素と結合した四つの水素ピークと、2.1ppmで垂直配位子
に存在する二つのメチル基の水素六つのピークと、2.9p
pmでアミンと隣接した二つのメチル基の水素四つのピー
クがそれぞれ現われた。¹³C−NMRスペクトルでは183.1p
pmでカルボニルの炭素ピークを確認できた。元素分析結
果、分子内炭素、水素、窒素の含量比が理論値と一致し
た。一方、合成された［７(Ac)Cl］の分子構造をＸ−線
回折法で究明し、その結果を図１に示した。図１で見ら
れるように、７(Ac)Clは互いに類似の形体（conformati
on）を有する二つの分子（A、B）が結晶内に配列されて
あり、これ等二つの分子等はN (１B)−H……O(２A)分子
間水素結合で結合されている。A分子内の水素結合はN
(１a)−HとO(４a)の間と、N(２a)−HとO(２a)の間で存
在しており、B分子での水素結合も同じ位置で見出され
た。白金（ＩＶ）イオンと１,４−ブタンジアミン（１,
４−butanediamine）が作った員環構造は捩れた椅子形
（twist−chair）であった。下記表１はＸ−線回折法に
より得られたデータであり、［７(Ac)Cl］錯体内の白金
と白金周囲の元素等との結合長さと結合角度を表わす。

【００４２】

【表１】

【００４３】実施例３トランス、シス−トリフルオルアセテート、ジクロロ−
１,４−ブタンジアミンPt（ＩＶ）錯体の合成／［７(T
F)Cl］：trans、cis−Trifluoroacetato、dichloro−
１,４−butanediamine Pt（ＩＶ）complex ７(OH)Cl １g（2.577mM）をメチレンクロライド１００m
lに懸濁させ、トリフルオルアセチックアンヒドライド
（trifluoroacetic anhydride）１５mlを添加して還流
しながら３日間反応させた。反応後、減圧濃縮して得た
沈殿物をメタノールに溶解して濾過してから濾液を再結
晶し、透明な微黄色ダイアモンド形結晶1.22gを得た。収得率：81.62％ IR(KBr、cm^-1)：3254、3209、3177、1724、1565、137
6、1224、1166、739¹ H−NMR(DMSO−d₆)：7.4(4H)、2.5−2.75(4H)、1.7(4H)¹ H−NMR(CD₃OD)：3.0−2.8(4H)、1.85(4H)¹³ C−NMR(CD₃OD)：165.4、165.1、115、112.7、49.5、4
9.3、49.2、49、48.8、48.5、47.8、26.9 元素分析結果：C₈H₁₂N₂Cl₂O₄F₆Ptの理論値 C；16.55％、 H；2.07％、 N；4.83％、実験値．C；16.54％、 H；2.08％、 N；4.80％、前記微黄色の六角形結晶を赤外線分光法、核磁気共鳴分
光法、元素分析法で構造を確認し、Ｘ−線回折法で構造
を究明した。

【００４４】赤外線分光法で分析した結果、７(Ac)Clで
同じように３５００cm^-1付近のO−H強力な伸縮振動等が
ヒドロキシ基がなくなることにより消滅し、１７００cm
^-1付近でカルボニル（C＝O）の強力な伸縮振動が一つの
ピークに現われた。おおよそ、カルボニル基の伸縮振動
が１６００cm^-1で現われるものに比べ１００cm^-1ほどが
低波長幅（さらに高い波数）に移動したが、これは強力
な親電子体である弗素が隣接したカルボニル基の電子を
引き寄せカルボニルの電子が不足したためと思われる。
C−F結合の伸縮振動は１１６６cm^-1で強力な吸収を現わ
した。¹H−NMRスペクトルは、溶媒をDMSO−d₆を用いて
分析した結果、アミンの水素が7.4ppmの低磁場でピーク
が現われ、アセチル基がある白金錯体より約0.5ppm高磁
場側に移動した。この現象もまた弗素原子の親電子的な
性質のためと見なされる。アルキル基の水素等は1.7−
2.8ppmの間で現れたが、分離状態が不良のため溶媒をCD
３ODに用い分析した結果1.85ppmでアミンと一番遠く離
れた二つの炭素と結合した四つの水素ピークと、2.9ppm
でアミンと隣接した二つのメチル基の水素四つのピーク
がそれぞれ現われた。¹³C−NMRスペクトルでは、165.
1、165.4ppmで二つのカルボニル炭素を確認したが、７
(Ac)Clが183.1ppmでカルボニルの炭素ピークが確認され
たものに比べ約１８ppmほど高磁場側に移動したが、こ
れは弗素の影響と見られた。その他、アルキル基の炭素
等は47.8〜49.5ppmで確認された。元素分析結果、分子
内炭素、水素、窒素の含量比が理論値と一致した。合成
された［７(TF)Cl］の分第構造を確認するためＸ−線回
折法を利用してＸ−ray結晶構造を得ており、その結果
を図２に示した。図２で見られるように、［７(TF)Cl］
もまた分子内水素結合が存在するが、N２−HとO４の間
においてとN１−HとO２の間で水素結合の存在が確認さ
れ、Ptイオンと１,４−ブタンジアミン（１,４−butane
diamine）が作った７員環構造は、７(Ac)Clと同じく捩
れた椅子形（twist−chair）であった。表２はＸ−ray
結晶構造から測定された分子内白金と、白金周囲の元素
等との結合長さ及び結合角度を示す。

【００４５】

【表２】

【００４６】実施例４トランス−ヒドロキソ、マロネート−１,４−ブタンジ
アミンPt（ＩＶ）錯体の合成／［７(OH)M］：trans−Hy
droxo、malonato−１,４−butanediamine Pt（ＩＶ）co
mplex ７M（malonato−１,４−butanediamine Pt（ＩＩ）comp
lex）５g（12.99mM）を水３００mlに溶解し、３０％過
酸化水素水３０mlを添加して常温で７２時間攪拌しなが
ら反応させた。このとき、７(OH)Clの合成のときとは別
に８０℃の高温で反応させると合成できず、常温で反応
させてこそ合成が完成される。これはＸ−線回折法で究
明された構造で見るように、脱離基がマロネートの白金
錯体は分子内の弱い水素結合が存在し、７員環の形体が
一番安定した形体の捩れた椅子形（twist−chair for
m）でなく椅子形（chair form）のため、高温で加熱し
たときはこの水素結合が断絶して合成できないものと推
定される。この溶液を減圧濃縮して５mlほどになれば冷
却したメタノールを添加して沈殿物を生成させた。濾過
して得た沈殿物をメタノール及びエーテルで洗滌し、６
０℃で減圧乾燥して白色の沈殿物3.67gを得た。収得率：67.43％ IR(KBr、cm^-1)：3525、3205、1660、1370、975、753、5
69¹ H−NMR(D2O)：1.8−2.0(4H)、2.8(2H)、2.9(4H)、3.0
(2H) 元素分析結果：C₇H₁₆N₂O₆Ptに対する理論値 C；20.05％、 H；3.82％、 N；6.68％、実験値 C；19.98％、 H；3.79％、 N；6.62％、赤外線分光法で分析した結果、３５００cm^-1付近でO−H
結合の強力な伸縮振動を発見することができ、C＝Oの伸
縮振動は１６６０cm^-1で強力な吸収を見せており、１３
７０cm^-1でC−O結合の強力な吸収が現われた。元素分析
結果は分子内炭素、水素、窒素の含量比が理論値と一致
した。

【００４７】実施例５トランス−アセテート、マロネート−１,４−ブタンジ
アミンPt（ＩＶ）錯体の合成／［７(Ac)M］：trans−Ac
etato、malonato−１,４−butanediamine Pt（ＩＶ）co
mplexの合成７(OH)M（trans−Hydroxo、malonato−１,４−butanedi
amine Pt（ＩＶ）complex）1.5g（3.58mM）を取り、以
下7(Ac)Clと同一方法で合成して水とメタノールの比を
２：３にした溶液で再結晶して白色の針状結晶0.98gを
得た。収得率：54.42％ IR(KBr、cm^-1)：3444、3172、3049、1660、1362、709、
532¹ H−NMR(D₂O)：2.95−2.75(8H)、1.95−1.8(8H)¹³ C−NMR(D₂O)：188、183.9、179.8、179.2、49.2、48.
7、28.4、28.1、24.9 元素分析結果：C₇H₁₆N₂O₆Ptに対する理論値 C；26.24％、 H；3.98％、 N；5.57％、実験値. C；26.19％、 H；3.95％、 N；5.53％、赤外線分光法で分析した結果、７(OH)Mで見せた３５０
０cm^-1付近のO−Hピークはなくなり、C＝Oの伸縮動作は
１６６０cm^-1で強力な吸収を見せており、１３７０cm^-1
と１２７８cm^-1でC−O結合の強力な吸収が現われた。¹H
−NMRスペクトルは、溶媒にD₂Oを用いて測定したが分離
状態が不良であり、 ¹³C−NMRスペクトルで分析した結果
四つのカルボニル（C＝O）炭素は179.2、179.8、183.
8、187.9ppmで現われ、アルキル基の炭素等は24.9〜49.
2ppm付近で現われた。

【００４８】実施例６トランス−トリフルオルアセテート、マロネート−１,
４−ブタンジアミンPt（ＩＶ）complexの合成／［７(T
F)M］：trans−Trifluoroacetato、malonato−１,４−b
utanediamine Pt（ＩＶ）complex ７(OH)M 1.5g（3.58mM）を取り、以下７(TF)Clを同一方
法で合成してメタノールで再結晶し透明な白色正六面体
の形体の結晶1.45gを得た。収得率：66.29％ IR(KBr、cm^-1)：3440、3200、3089、1716、1651、136
8、1161、739、523¹ H−NMR(CD₃OD)：3.6(2H)、2.9(4H)、2(4H)¹³ C−NMR(CD₃OD)：176.4、49.5、49.3、49.2、49、48.
8、48.6、48.5、47.4、47.3、26.5 元素分析結果：C₁₁H₁₄N₂O₈F₆Ptに対する理論値 C；21.6％、 H；2.29％、 N；4.58％、実験値 C；21.58％、 H；2.30％、 N；4.57％、赤外線分光法、核磁気共鳴分光法、元素分析を実施して
構造を確認し、Ｘ−線回折法で構造を究明した。赤外線
分光法で分析した結果、７(Ac)Mの場合と同じく３５０
０cm^-1付近のO−Hピークはなくなり、C＝Oの伸縮振動は
弗素の親電子的な影響を受け弗素と隣接したカルボニル
は１７１６cm^-1で強力な吸収を現わし、マロネート（ma
lonate）のカルボニルは１６５１cm^-1で強力な吸収を見
せ、１３６８cm^-1でC−O結合の強力な吸収を、１１６１
cm^-1でC−F結合の伸縮振動が強力な吸収を現わした。

【００４９】¹H−NMRスペクトルは、溶媒にCD₃ODを用い
て測定した結果、アミンと一番遠く離れた二つのメチル
基の四つの水素は２ppm付近でピークが現われ、アミン
と隣接した二つのメチル基に対する四つの水素は2.9ppm
付近でピークが現われ、カルボニルの間に位置する炭素
と結合した二つの水素は3.6ppm付近でピークが現われ
た。¹³C−NMRスペクトルで分析した結果、弗素原子の親
電子的な影響を受け殆どのピークが高磁場側に移動し、
47.3−49.5ppmの間に集中的なピークが現われた。元素
分析結果は分子内炭素、水素、窒素の含量比が理論値と
一致した。Ｘ−線回折法により得られた結晶構造を図３
に示した。図３で見られるように、［７(TF)M］もまた
分子内水素結合が存在するが、N１−Hと06、N２−Hと02
の間の水素結合が確認され、７(Ac)Clや７(TF)Clとは別
に、７員環（seven−membered ring）の構造は椅子形
（chair形）であり、白金−マロネート（Pt−malonat
e）が作る６員環はボート形（boat）であった。Ｘ−線
回折法により得られた白金と、白金周囲の元素等の結合
長さ及び結合角度を表３に示した。

【００５０】

【表３】

【００５１】薬剤学的組成物の製造本発明に係る前記化学式１の白金（ＩＶ）錯体は、薬剤
学的に水溶可能な担体とともに薬剤学的組成物を形成す
ることができる。本発明に係る白金（ＩＶ）錯体は、薬
剤学的に許容可能な担体とともに経口用に用いられる
か、又は適切な溶媒及び希釈液とともに注射剤に投与す
ることができる。

【００５２】（１）経口用に使用本発明に係る白金（ＩＶ）錯体はpH１の強酸雰囲気にお
いても非常に安定した状態を維持するため、胃酸で破壊
されず経口投与が可能である。経口投与の際はカプセル
剤や錠剤に使用が可能であるが、カプセル剤の場合、澱
粉、乳糖、タルク、アテアリン酸マグネシウム等の一
般的な賦形剤等が全て使用可能であり、錠剤の場合も顆
粒に作って打錠するので一般的な錠剤賦形剤等が全て用
いることができる。さらに、その他通常の担体が全て使
用可能である。また、添加剤には澱粉、結晶セルロー
ス、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリエチレ
ングリコール、乳糖、ポリビニルピロリドン、グリセリ
ルビハネート（glyceryl behanate）等を用いることが
でき、希釈剤には、葡萄糖、噴霧乾燥乳糖、ファスト−
フロラクトーズ（Fast−flolactose）、無水乳糖、白
糖、澱粉、スターク１５００（starch １５００）、燐
酸一水素カルシウム、インコンプレス（Emcompress）、
結晶性セルロース（Avicel）があり、湿式結合体及び顆
粒液には水、エタノール、アラビアゴム糖、トラガカン
タ糖、ゼラチン溶液、澱粉糊液、葡萄糖シロップ、白糖
シロップ、フォビドン、セルロース誘導体類等があり、
滑沢剤類はポリエチレングリコール４０００、６００
０、８０００、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸
マグネシウム、安息香酸ナトリウム、ポリエチレンモノ
ステアレート、グリセリルトリアセテート、ステアリン
酸−マグネシウム、−亜鉛、−カルシウム、ステアリン
酸、タルク、硬化植物類、流動パラフィン、パラフィン
類、鉛類等があり、流動化剤に澱粉、タルク、二酸化珪
素、シリケート、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム
等を用いることができ、付着防止剤に澱粉、タルク等が
あり、制御放出添加剤にはヒドロキシプロピルメチルセ
ルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシ
エチルセルロース、エチルセルロース、メチルセルロー
ス、カルボキシメチルセルロース、ポリアクリル酸、ア
クリル酸誘導体、ポリビニルピロリドン、ポリエチレン
グリコール等を用いることができる。

【００５３】（２）注射剤としての使用一方、注射用に用いられる場合には溶剤としてアルコー
ル類（エタノール、ベンジルアルコール、プロピレング
リコール、グリセリン）、高級脂肪酸エステル（オレイ
ン酸エチル）等を用いるのが好ましく、希釈液に、燐酸
緩衝食塩液（phosphate buffer saline、PBS）や生理食
塩液（0.9％NaCl、saline）を用いて希釈し、防腐剤
に、ソジウムベンゾエート（sodium benzoate）、メチ
ルパラベン（methylparaben）、又はプロピルパラベン
（propylparaben）等を添加することができる。例え
ば、本発明に係る薬剤学的組成物を注射剤形体に製造す
る場合には、本発明に係る白金（ＩＶ）錯体結晶を凍結
乾燥して粉末状態にした後アルコール類等の溶剤に溶解
し、これを生理食塩液や燐酸緩衝食塩液に希釈して人体
に投与する。

【００５４】抗癌活性に対する実験本発明に係る白金（ＩＶ）錯体等の抗癌活性を検査する
ため、それぞれ人間とマウスの白血癌細胞であるHL６０
とL１２１０に対しエムティティ分析（MTT分析；［３−
（４,５−dimethylthiazol−２−yl）−２,５−dipheny
ltetrazolium bromide］assay）を実施した。MTT分析
は、細胞内酵素のミトコンドリアルジヒドロゲナーゼ
（mitochondrial dehydrogenase）が黄色水溶性物質のM
TTを、水に溶けない濃い黄色のホルマザン（formazan）
に変える能力に基づき分析する方法で、生成されたホル
マザン（formazan）が生細胞数と比例する定量的な発色
分析法である。^122-124)

【００５５】（１）試薬及び器機抗癌活性試験に用いた癌細胞は浮遊細胞であり、人間と
マウスの白血癌細胞のHL６０、L１２１０細胞株等であ
り、韓国細胞株銀行で冷凍細胞を分譲を受け培養して用
いた。RPMI１６４０培地、ペニシリン−ストレプトマイ
シン（penicillin−streptomycine）１０００unit/ml、
フェイタルボヴィンセラム（fetal bovin serum；以下F
BS）、ホスフェートバッファサリン（phosphate buffer
saline；以下PBS）はGibcoから購入した。シスプラチ
ン（Cisplatin）とMTT（３−（４,５−dimethylthiazol
−２−yl）−２,５−diphenylite−trazolium bromaid
e）試薬はシグマ（sigma）から購入した。CO₂ガスは東
亜ガス社から購入して用い、その他に用いられた試薬は
細胞培養用又は特級試薬を用いた。細胞数係数はヘマト
サイトメートル（hematocytometer）を用い、光学顕微
鏡（olympus CK２）で観察して実施し、ELISAプレート
リーダ（ELISA plate reader）はDynatech MR５０００
を用いた。

【００５６】（２）細胞培養 RPMI１６４０培地に１％ペニシリン−ストレプトマイシ
ン（penicillin−streptomycine）（10,000unit/ml）、
１０％FBSの濃度に調剤して３７℃、５％CO₂存在下で２
−３日間隔で細胞数２×１０⁵個−５×１０⁵個/ml程度
に継代培養した。

【００５７】（３）試薬及び薬物調剤薬物は本発明の実施例等で合成した白金（ＩＶ）錯体等
であり、水溶性のものはそのまま用い、水に溶けないも
のはDMSOや９５％エタノールに溶解してPBSを添加し、
それぞれ２ｍMの濃度になるよう調剤して0.2μ注射器フ
ィルター（syringe filter）で濾過し、無菌状態にさせ
て細胞株に接触する直前に培地に系列希釈してそれぞれ
の該当濃度で調剤した。DMSOや９５％エタノールは細胞
用培地で最終濃度が0.1％未満になるようにした。MTT試
薬はPBSに溶解し0.2μ注射器フィルターで濾過して無菌
状態にして用いた。

【００５８】（４）実験方法 HL６０及びL１２１０細胞株をそれぞれ９６−ウェルプ
レート（９６−well plate）に１０⁴個/wellになるよう
採取し、３７℃、５％CO₂下存在下で３０分間安定化さ
せて合成した白金（ＩＩ）錯体及び白金（ＩＶ）錯体
を、１ml当り１０^-4M−１０^-7Mの濃度に調剤し１００・
ずつ添加した。HL６０細胞株は３７℃、５％CO₂存在下
で７２時間培養後、L１２１０細胞株は４８時間培養後
にMTT試薬（２mg/１ml）５０・/wellずつ添加を行い、
３７℃、５％CO₂存在下で４時間培養した後、２０００r
pmで５分間遠心分離して上澄液１７０・/wellずつ除去
した。次いで、DMSO １５０・/wellずつ添加して４０
℃、３０分間放置後、３分間振動させELISA readerで５
７０nmで吸光度を測定した。同じ条件で同一な９６−we
ll plateで空試験して補正した。この実験は各濃度別に
３個以上のwellに同じく行い、同一実験を３回以上繰り
返した。（５）実験結果 MTT分析結果を下記表４乃至表６に示した。

【００５９】

【表４】

【００６０】

【表５】

【００６１】

【表６】

【００６２】（６）実験結果の分析実験例１：７(TF)Cl及び７(Ac)Clの抗癌活性結果まず、マウスのL１２１０細胞株でシスプラチン（CDD
P）、７(TF)Cl及び７(Ac)Clの抗癌活性に対するIC₅₀値
を表７に示した。表７に示されたように、７(TF)ClのIC
₅₀が0.96μM/mlで一番抗癌活性が高いものと分析され、
７(Ac)ClのIC₅₀は1.49μM/mlに現われた。これは現在臨
床で用いられているシスプラチン（CDDP）のIC₅₀が2.86
μM/mlであるのに比べて遥かに低い値であり、癌細胞増
殖抑制効果が遥かに優れたものである。

【００６３】

【表７】

【００６４】次いで、人間の白血癌細胞株であるHL６０
細胞株でシスプラチン（CDDP）、７(TF)Cl及び７(Ac)Cl
の抗癌活性テストの結果を表８に示した。表５に示され
たように、シスプラチンのIC₅₀は2.74μM/mlであるのに
比べ、７(TF)Cl及び７(Ac)ClのIC₅₀値はそれぞれ1.28μ
M/ml、0.69μM/mlであり、シスプラチン（CDDP）に比べ
抗癌活性が遥かに高いものに現われた。

【００６５】

【表８】

【００６６】実験例２：７(Ac)M及び７(TF)Mの抗癌活性
実験結果マウスのL１２１０細胞株に対しシスプラチン（CDD
P）、７(Ac)M及び７(TF)Mの抗癌活性をテストした後、
その結果を表９に示した。

【００６７】

【表９】

【００６８】表９で見られるように、７(Ac)Mと７(TF)M
のIC₅₀はそれぞれ14.44μM/ml及び8.72μM/mlであり、
相当有意性のある癌細胞増殖抑制効果を見せた。この数
値はシスプラチンよりそれぞれ約３乃至4.5倍ほど高い
数値である。しかし、現在臨床で使われている第２世代
白金錯体であるカルボプラチンのIC₅₀（シスプラチンの
約１０倍以上の数値：J．Med．Chem．1994、vol．37、N
o．10、1471−1485）に比べ遥かに低い値である。次い
で、人間の白血癌細胞株のHL６０細胞株でシスプラチン
（CDDP）、７(Ac)M及び７(TF)Mの抗癌活性をテストした
後、これを表１０に示した。

【００６９】

【表１０】

【００７０】表１０で見られるように、HL６０に対する
抗癌活性実験でもマウスのL１２１０細胞株に対する実
験と類似の結果を現わした。表９及び１０で分かるよう
に、７(Ac)Mと７(TF)MのIC₅₀値はシスプラチン（CDDP）
のIC₅₀値に比べ相対的に高い値ではあるが、カルボプラ
チンがシスプラチンの約１０倍ほどのIC₅₀値を有するの
に比べ７(TF)Mは約３倍、７(Ac)Mは約4.5倍のIC₅₀値を
有するためカルボプラチンよりは低い値である。したが
って、７(Ac)Mと７(TF)Mはシスプラチンに比べ抗癌活性
が劣りはするが、カルボプラチンに比べれば遥かに優れ
た抗癌活性を有する。さらに、下記のように、シスプラ
チンに比べ腎毒性等の副作用を一層緩和することができ
る点でシスプラチンに比べ優れた抗癌特性を有する。
尚、シスプラチン及びカルボプラチンに対し耐性を有す
る腫瘍細胞に対し優れた活性を現わすが、シスプラチン
やカルボプラチンが有する問題点を解決しているため、
これらに対する代替物質として有用である。

【００７１】実験例３：７(OH)Clと７(OH)Mの抗癌活性
実験結果分析マウスの白血癌細胞株であるL１２１０細胞株、及び人
間の白血癌細胞株であるHL６０に対する７(OH)Cl及び７
(OH)Mの抗癌活性実験結果をそれぞれ表１１及び表１２
に示した。

【００７２】

【表１１】

【００７３】

【表１２】

【００７４】表１１及び表１２で見られるように、この
二つの白金（ＩＶ）錯体はシスプラチンより低い抗癌活
性度を示した。しかし、７(OH)Clと７(OH)Mもまた従来
抗癌剤が有する問題点、例えば腎毒性等の副作用や、シ
スプラチン及びカルボプラチンに対し耐性問題を解決す
ることができる長所を有する。特に、７(OH)Clと７(OH)
Mは７(TF)Cl及び７(Ac)Cl合成のための中間物質として
も独自的な有用性を有する。下記表１３は、本発明に係
る新規の白金（ＩＶ）錯体と従来のシスプラチンのIC₅₀
値を棒グラフに図式化したものである。

【００７５】

【表１３】

【００７６】腎臓毒性実験（Ａ）血清学的分析合成された白金錯体の腎臓毒性を血清学的に分析するた
め薬物別に腹腔内に注射してから６時間、１日、３日、
７日経過後血液を採取して血清を分離した後、血中尿窒
素（BUN：Blood urea nitrogen）、クレアチニン（crea
tinine）及び尿酸（uric acid）を分析した。¹³³⁾

【００７７】（１）実験動物実験動物は、体重約２５g内外の雄のICRマウス（ICR mo
use）を大韓実験動物センターで購入して用いた。実験
期間中動物は、漢陽大学校医科大学解剖学校室内清浄動
物室で飼育し、飼料（三養社）と水は無制限供給した。
実験動物は正常対照群、対照群と実験群に分類し、実験
群は再びシスプラチン（cisplatin）投与群、７(Ac)Cl
投与群、７(TF)Cl投与群、７(Ac)M投与群、７(TF)M、投
与群及び７FMN投与群に細分した。各群に対し２０−２
２匹ずつ割当て、これを再び６時間、２４時間、３日、
７日処理群に分けて一群にそれぞれ５−６匹ずつ薬物処
理した。

【００７８】（２）実験動物の処置用いた薬物はシスプラチン（cisplatin；CDDP）、７(A
c)Cl、７(TF)Cl、７(Ac)M、７(TF)M、７FMN等全て６種
で、体重１kg当り投与した薬物用量はシスプラチンは６
mg（IC₅₀×７）、７(Ac)Clは６mg（IC₅₀×８）、７(TF)
Clは5.3mg（IC₅₀×８）、７(Ac)Mは58.8mg（IC₅₀×
８）、７(TF)Mは50.5mg（IC₅₀×８）、７FMNは８８mg
（IC₅₀×８）にした。それぞれ該当量ほど採取しDMSOや
エタノールに溶解しPBSを添加して6.6mlにした。このと
き、DMSOやエタノールの含量が５％未満にし、これはマ
ウス１匹当り（３０g）適用することができる２０・よ
り遥かに少ない量であり実験に及ぼす影響がないように
した。PBSに溶解した薬物等を0.2μ注射器用フィルター
で濾過し、滅菌して腹腔内注射し注射日を０日にして６
時間、１日、３日、及び７日経過後５−６匹ずつ心臓採
血又は頚部切断して採血後頸椎脱臼法で犠牲させた。

【００７９】（３）血中尿窒素（BUN：Blood urea nitr
ogen）、クレアチニン（creatinine）、及び尿酸（uric
acid）の測定マウスから得た血液を4,500rpmに１５分間遠心分離して
血清のみ採取し、実験値測定時まで−２０℃以下で保管
した。血中尿窒素、クレアチニン（creatinine）、及び
尿酸（uric acid）は生化学自動分析器（olympus repl
y、Japan）で測定し、各動物の平均値と標準偏差で示し
た。

【００８０】（４）実験結果血中尿窒素、クレアチニン（creatinine）、及び尿酸
（uric acid）の測定結果をそれぞれ表１４乃至表１６
に示した。対照群（control group）はPBSに溶解し6.6m
l/kgの用量で注射され、各実験結果値は５−６匹のICR
マウスに対する（平均値±標準偏差）の形で表示され
た。

【００８１】

【表１４】

【００８２】

【表１５】

【００８３】

【表１６】

【００８４】（５）分析合成された白金錯体の腎臓毒性を血清学的に分析するた
め投与された薬物の用量はシスプラチンを基準にして算
定した。シスプラチンが毒性を現わしたり毒性が現われ
ても半減期の経過に従い正常に回復ができる用量が単回
投与の場合６mg/kgであり、この用量は抗癌活性試験で
得たIC₅₀の７倍の量になった。合成した他の薬物等が抗
癌剤に開発されるためには最小限シスプラチンよりは毒
性が少なく現われなければならないため、この実験では
マウス１kg当りIC₅₀の８倍の量を投与した。分離された
血清を分析した結果、全ての薬物が正常対照群と比較し
て差がなかった。これは単回投与で実験動物等に酷い損
傷は与えないものと分析された。このような結果から、
本発明に係る白金（ＩＶ）錯体等が少なくともシスプラ
チンよりさらに強力な腎臓毒性を現わさないことが判っ
た。

【００８５】（Ｂ）電子顕微鏡的観察（１）実験方法切取った腎臓組織は近位細尿管（proximal convoluted
tubule）の微細構造的変化を観察するため腎臓の外皮質
（cortex of kidney）組織一部を１・大きさに細切し、
ミロニグスホスフェート緩衝液（Millonig’s phosphat
e buffer；pH 7.2）で製作した２％グルタールアルデヒ
ド−2.5％パラホルムアルデヒド（２％ glutaraldehyd
e−2.5％ paraformaldehyde）溶液に４℃で２−４時間
前固定した後、同一緩衝液で希釈した１％オスミウムテ
トロキシド（osmium tetroxide）で２時間の間後固定し
た。これをエタノール−アセトン（ethanol−acetone）
濃度差に従い組織を脱水してEpon８１２に包埋した後、
微細切片器（ultramicrotome）で厚さ２−５・である薄
切片を製作し、メチレンブルー（methylene blue）で臨
時染色して適正部位を確認した後、再び厚さ６０−８０
nmの超薄切片（ultrathin section）を製作してウラニ
ルアセテート（uranyl acetate）とリードシトレート
（lead citrate）で二重染色を行い透過電子顕微鏡（Hi
tachi−６００、Japan）で観察した。

【００８６】（２）実験結果対照群近位細尿管上皮細胞図４で見られるように、対象群近位細尿管上皮細胞は隣
接した細胞と緻密盤（desmosome）に連結されており、
円形の核が細胞質中央に位置しており、細胞質尖部には
管腔（lumen）へ向けて無数の微細絨毛（microvilli）
が突出しており、微細絨毛直下方細胞質尖部には多様な
大きさの多い吸収小胞（endocytic vesicle）と空胞（v
acuole）が観察され、大小幾多の形の絲粒体（mitochon
dria）と絲粒体と隣接して粗面内形質細網（rough endo
plasmic reticulum）が分布しており、単一膜で限界さ
れた溶解小体（lysosome）と３−４層の小爪（cisterna
e）で構成されたゴルギ複合体（Golgi complex）が観察
され、細胞質基底部では基底皺（basal folding）が観
察され、基底皺に平行に絲粒体が位置しており、絲粒体
と隣接して粗面内形質細網が分布していた。

【００８７】シスプラチン投与群の近位細尿管上皮細
胞図５a乃至図５bで見られるように、シスプラチン投与６
時間経過群近位細尿管上皮細胞では微細絨毛が細胞質尖
部から管腔に向けて突出しており、微細絨毛直下方で多
数の吸収小胞と空胞が分布しており、単一膜で囲まれた
食小体（phagosome；Ph）等と自食空胞（autophagic va
cuole；APV）及び髓鞘様体（myeloid body；MB）等の二
次溶解小体が観察され、絲粒体稜（mitochondrial cris
tae）が溶解されたり（M１）二重合膜が破壊されて損傷
を受けた絲粒体（M２）と馬蹄形の変形された絲粒体（M
３）が観察され、小爪（cisternae）が断絶或いは嚢状
化したり、リボソム（ribosome）が脱落した粗面内形質
細網（RER）が観察された（図５a上部の図参照）。シス
プラチン投与１日経過群近位細尿管上皮細胞の細胞質内
には自食空胞（APV）、食小体（Ph）、及び髓鞘様体（M
B）等の二次溶解小体が多数観察され、絲粒体稜が溶解
されたり二重膜が破壊された絲粒体（M１）と形が変形
した絲粒体（M２）と、小爪が断絶された粗面内形質細
網が観察された（図５a下部の図参照）。シスプラチン
投与３日経過群近位細尿管上皮細胞の細胞質内には多数
の食小体（Ph）と髓鞘様体（MB）が位置しており、二重
膜が破壊されたり絲粒体稜が破壊された損傷を受けた絲
粒体が多く観察され、小爪が断絶されたりribosomeが脱
落した粗面内形質細網（RER）と小爪が拡張されたGolgi
複合体（Go）が観察された（図５b上部の図参照）。シ
スプラチン投与７日経過群近位細尿管上皮細胞では円形
の核が細胞質中央に位置しており、細胞質尖部には多数
の溶解小体が分布しており、細胞質全般に亘り無数の絲
粒体とこれと隣接して粗面内形質細網が観察され、細胞
質基底部には基底皺がよく発達しており、糖原顆粒が分
布していた（図５b下部の図参照）。

【００８８】７(Ac)Cl投与群の近位細尿管上皮細胞図６a乃至図６bに示されたように、７(Ac)Cl投与６時間
経過群近位細尿管上皮細胞の細胞質には食小体（Ph）及
び自食空胞（APV）が観察され、一部の絲粒体で絲粒体
稜が溶解（M１）されており、核に隣接してゴルギ（Gol
gi）複合体（Go）が観察された（図６a上部の図参
照）。７(Ac)Cl投与１日経過群近位細尿管上皮細胞には
多数の髓鞘様体（MB）が観察され、Golgi複合体（Go）
の小爪は萎縮しており、二重膜が破壊された絲粒体（M
１）、形が変形した絲粒体（M２）及び絲粒体稜が溶解
された絲粒体（M３）が観察され、小爪が断絶されたり
嚢状化した粗面内形質細網（RER）が観察された（図６a
下部の図参照）。７(Ac)Cl投与３日経過群近位細尿管上
皮細胞には髓鞘様体（MB）、自食空胞（APV）、食小体
（Ph）等の二次溶解小体が多数観察され、小爪が断絶し
た粗面内形質細網と小爪が萎縮したGolgi複合体（Go）
と、二重膜が破壊（M１）されたり形が変形した（M２）
絲粒体が観察された（図６b上部の図参照）。７(Ac)Cl
投与７日経過群近位細尿管上皮細胞には無数の絲粒体と
これに隣接する粗面内形質細網が観察され、細胞質基底
部にはよく発達した基底部皺とこれと平行に位置してい
る絲粒体が観察された（図６b下部の図参照）。

【００８９】７(TF)Cl投与群の近位細尿管上皮細胞図７a及び図７bに示されたように、７(TF)Cl投与６時間
経過群近位細尿管上皮細胞の細胞質内には髓鞘様体（M
B）、食小体（Ph）、及び髓鞘様体（APV）等の二次溶解
小体が多数観察され、Golgi複合体（Go）の小爪は萎縮
しており、絲粒体稜が溶解されたり二重膜が破壊された
損傷を受けた絲粒体（M１）と形が変形した絲粒体（M
２）、及び小爪が膨大されたり断絶した粗面内形質細網
（RER）が観察された（図７a上部の図参照）。７(TF)Cl
投与１日経過群近位細尿管上皮細胞では食小体（Ph）、
髓鞘様体（MB）、及び自食空胞（APV）が観察され、Gol
gi複合体（Go）の小爪が萎縮しており、絲粒体稜が膨大
（M１）されたり溶解した絲粒体（M２）が多数観察され
た（図７a下部の図参照）。７(TF)Cl投与３日経過群近
位細尿管上皮細胞の細胞質尖部には食小体（Ph）、溶解
小体（Ly）が分布しており、Golgi複合体（Go）の小爪
は極度に萎縮しており、二重膜が破壊されたり絲粒体稜
が溶解された損傷を受けた絲粒体（M１）が観察された
（図７b上部の図参照）。７(TF)Cl投与７日経過群近位
細尿管上皮細胞の細胞質尖部には食小体（Ph）、自食空
胞（APV）等の二次溶解小体が多数観察され、形が変形
された絲粒体（M１）、二重膜が破壊され絲粒体稜が溶
解された絲粒体（M２）が観察された（図７b下部の図参
照）。

【００９０】（３）分析電子顕微鏡的所見上、シスプラチン投与群および７(TF)
Cl投与群では、６時間経過後から激しく損傷された所見
を見せ、３日経過後には細胞質内小器管の大部分が損傷
された所見を現し、２薬剤は投与初期から近位細尿管に
毒性で作用することを観察することができ、７日経過後
には対照群近位細尿管上皮細胞の微細構造と類似な様相
を現し回復された所見を見せた。７(TF)Cl投与群では、
１日経過後に二次用解消体、損傷した絲粒体及び小爪が
萎縮されたゴルギ（Golgi）複合体の出現等損傷された
所見を見せたが、時間が経過するに従い回復して７日経
過後には対照群と類似な所見を現した。このような電子
顕微鏡的所見は、酸ホスファターゼ（acid phosphatas
e）活性の減少と関連があるものと判断される。

【００９１】（Ｃ）腎臓毒性に対する最終分析結果前記腎臓毒性に対する２種類の実験で現われた結果によ
れば、本発明に従う白金（ＩＶ）錯体は、シスプラチン
に比べ腎臓毒性が弱いものと推定することができる。例
えば、（ｉ）7（Ac）C1の場合、シスプラチンより毒性
が少なく現われ、（ｉｉ）7(TF)C1等はシスプラチンと
類似な傾向を見せたが、これはシスプラチンの注射容量
がマウス体重１kg当り6mg（IC₅₀の７倍）であるのに比
べ、7(Ac)C1と7(TF)C1の注射容量はそれぞれ６mgと5.3
mgでIC₅₀の８倍であったことを鑑み、結論的にはシスプ
ラチンよりは毒性が少ないことが判る。

【００９２】

【発明の効果】本発明に係る抗癌剤は、（ｉ）７員環白
金錯体を基本構造にすることにより優れた抗癌活性を有
する。また、（ｉｉ）脱離基として塩素配位子、又はマ
ロネートを有することにより体内に対し満足すべき水溶
性及び脂溶性を有し、（ｉｉｉ）垂直配位子が導入され
た八面体構造の白金（ＩＶ）錯体として、シスプラチン
に対し耐性を有する癌細胞に対しても優秀な抗癌活性を
有し、優秀な生体内利用効率を有する。この他にも、
（ｉｖ）腎臓毒性が少なく、（ｖ）経口投与が可能で患
者の苦痛を軽減させることができる等の長所を有する。
参考に、本発明に関連した多様な文献を参考文献として
以下に開示し、この中の一部は上述の従来技術及び詳細
な説明中に引用した。

【００９３】

【表１７】

【表１８】

【表１９】

【表２０】

【表２１】

【表２２】

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、Ｘ−レイ回折法により測定した本発明
に係る白金（ＩＶ）錯体の結晶構造を示す。

【図２】図２は、Ｘ−レイ回折法により測定した本発明
に係る白金（ＩＶ）錯体の結晶構造を示す。

【図３】図３は、Ｘ−レイ回折法により測定した本発明
に係る白金（ＩＶ）錯体の結晶構造を示す。

【図４】図４は、電子顕微鏡で測定した本発明に係る白
金（ＩＶ）錯体の微細構造を示す。

【図５ａ】図５ａは、電子顕微鏡で測定した本発明に係
る白金（ＩＶ）錯体の微細構造を示す。

【図５ｂ】図５ｂは、電子顕微鏡で測定した本発明に係
る白金（ＩＶ）錯体の微細構造を示す。

【図６ａ】図６ａは、電子顕微鏡で測定した本発明に係
る白金（ＩＶ）錯体の微細構造を示す。

【図６ｂ】図６ｂは、電子顕微鏡で測定した本発明に係
る白金（ＩＶ）錯体の微細構造を示す。

【図７ａ】図７ａは、電子顕微鏡で測定した本発明に係
る白金（ＩＶ）錯体の微細構造を示す。

【図７ｂ】図７ｂは、電子顕微鏡で測定した本発明に係
る白金（ＩＶ）錯体の微細構造を示す。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成１２年１月１７日（２０００．１．１
７）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】図面の簡単な説明

【補正方法】変更

【補正内容】

【図面の簡単な説明】

【図４】図４は、電子顕微鏡で測定した本発明に係る白
金（ＩＶ）錯体注射後の腎臓組織の微細構造を示す。

【図５ａ】図５ａは、電子顕微鏡で測定した本発明に係
る白金（ＩＶ）錯体注射後の腎臓組織の微細構造を示
す。

【図５ｂ】図５ｂは、電子顕微鏡で測定した本発明に係
る白金（ＩＶ）錯体注射後の腎臓組織の微細構造を示
す。

【図６ａ】図６ａは、電子顕微鏡で測定した本発明に係
る白金（ＩＶ）錯体注射後の腎臓組織の微細構造を示
す。

【図６ｂ】図６ｂは、電子顕微鏡で測定した本発明に係
る白金（ＩＶ）錯体注射後の腎臓組織の微細構造を示
す。

【図７ａ】図７ａは、電子顕微鏡で測定した本発明に係
る白金（ＩＶ）錯体注射後の腎臓組織の微細構造を示
す。

【図７ｂ】図７ｂは、電子顕微鏡で測定した本発明に係
る白金（ＩＶ）錯体注射後の腎臓組織の微細構造を示
す。

【手続補正２】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図５ａ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図５ａ】

【手続補正３】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図５ｂ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図５ｂ】

【手続補正４】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図６ａ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図６ａ】

【手続補正５】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図６ｂ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図６ｂ】

【手続補正６】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図７ａ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図７ａ】

【手続補正７】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】図７ｂ

【補正方法】変更

【補正内容】

【図７ｂ】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続きＦターム(参考） 4C206 AA01 AA02 AA03 AA04 JB16 KA01 MA01 MA03 MA77 NA14 ZB26 4H050 AA01 AA02 AA03 AB28 AB84 BB12 BD70 BE32 WB13 WB14 WB17 WB20 WB21

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記化学式３で示す抗癌性化合物。＜化学式３＞【化１】 R₁及びR₂は、それぞれ−OH、−C1、−OCOCH₃、−OCOCF
₃、又は−OCO(CH₂)_nCH₃（ｎは１乃至４中の整数）で
ある。
【請求項２】前記化学式３の化合物は、下記化学式４
乃至９でなる群から選択されたことを特徴とする請求項
１記載の化合物。＜化学式４＞【化２】トランス、シス−ジヒドロキソ、ジクロロ−１,４−ブ
タンジアミンPt（ＩＶ）錯体＜化学式５＞【化３】トランス、シス−ジアセテート、ジクロロ−１,４−ブ
タンジアミンPt（ＩＶ）錯体＜化学式６＞【化４】トランス、シス−ジトリフルオルアセテート−１,４−
ブタンジアミンPt（ＩＶ）錯体＜化学式７＞【化５】トランス−ジヒドロキソ、マロネート−１,４−ブタン
ジアミンPt（ＩＶ）錯体＜化学式８＞【化６】トランス−ジアセテート、マロネート−１,４−ブタン
ジアミンPt（ＩＶ）錯体＜化学式９＞【化７】トランス−ジトリフルオルアセテート、マロネート−
１,４−ブタンジアミンPt（ＩＶ）錯体
【請求項３】下記化学式３の化合物を有効成分に含む
薬剤学的組成物。＜化学式３＞【化８】 R₁及びR₂は、それぞれ−OH、−C1、−OCOCH₃、−OCOCF
₃、又は−OCO(CH₂)_nCH₃（ｎは１乃至４中の整数）で
ある。
【請求項４】前記組成物は、抗癌剤に用いられること
を特徴とする請求項３記載の組成物。
【請求項５】前記組成物を薬剤学的に受容可能な担体
（carrier）をさらに含むことを特徴とする請求項５記
載の組成物。
【請求項６】前記組成物を口腔に投与することを特徴
とする請求項３記載の組成物。
【請求項７】（ａ）ジクロロ−１,４−ブタンジアミ
ンPt（ＩＩ）錯体（dichloro−１,４−butanediamine P
t（ＩＩ）complex）を備える段階と、（ｂ）前記ジクロ
ロ−１,４−ブタンジアミンPt（ＩＩ）錯体に３０％H₂O
₂を加える段階を含むことを特徴とする下記化学式４の
化合物製造方法。＜化学式９＞【化９】トランス、シス−ジヒドロキソ、ジクロロ−１,４−ブ
タンジアミンPt（ＩＶ）錯体
【請求項８】（ａ）トランス、シス−ジヒドロキソ、
ジクロロ−１,４−ブタンジアミンPt（ＩＩ）錯体を備
える段階と、（ｂ）溶媒にCH₂Cl₂を用い、前記トランス、シス−ジヒ
ドロキソ、ジクロロ−１,４−ブタンジアミンPt（Ｉ
Ｉ）錯体と無水酢酸を反応させる段階を含むことを特徴
とする下記化学式５の化合物製造方法。＜化学式５＞【化１０】トランス、シス−ジアセテート、ジクロロ−１,４−ブ
タンジアミンPt（ＩＶ）錯体
【請求項９】（ａ）トランス、シス−ジヒドロクソ、
ジクロロ−１,４−ブタンジアミンPt（ＩＩ）錯体を備
える段階と、（ｂ）溶媒にCH₂Cl₂を用い、前記トランス、シス−ジヒ
ドロキソ、ジクロロ−１,４−ブタンジアミンPt（Ｉ
Ｉ）錯体とトリフルオールアセトアンヒドライド（tri
fluoroacetic anhydride）を反応させる段階を含むこと
を特徴とする下記化学式６の化合物製造方法。＜化学式６＞【化１１】トランス、シス−ジトリフルオルアセテート−１,４−
ブタンジアミンPt（ＩＶ）
【請求項１０】（ａ）マロネート−１,４−ブタンジ
アミンPt（ＩＩ）錯物（malonato−１,４−butanediami
ne Pt（ＩＩ）complex）を備えた段階と、（ｂ）マロネート−１,４−ブタンジアミンPt（ＩＩ）
錯物に過量の３０％H₂O ₂を加える段階を含むことを特徴
とする下記化学式７の化合物製造方法。＜化学式７＞【化１２】トランス−ジヒドロキソ、マロネート−１,４−ブタン
ジアミンPt（ＩＶ）錯体
【請求項１１】前記（ａ）段階は、（ｉ）シス−ジアイオード−１,４−ジブタンジアミンP
t（ＩＩ）錯物（cis−diiodo−１,４−butanediamine P
t（ＩＩ）complex）に、ジシルバマロネート塩（disilv
er malonate salt）を反応させる段階と、（ｉｉ）前記結果物溶液から沈殿物のAgIを除去した
後、水溶液を濃縮させマロネート−１,４−ブタンジア
ミン Pt（ＩＩ）錯物（malonato−１,４−butanediamin
e Pt（ＩＩ）complex）を得る段階を含むことを特徴と
する請求項１０記載の方法。
【請求項１２】前記（ｂ）段階は、室温で行われるこ
とを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項１３】（ａ）トランス−ジヒドロキソ、マロ
ネート−１,４−ブタンジアミンPt（ＩＩ）錯体を備え
る段階と、（ｂ）CH₂Cl₂を溶媒に用い、前記トランス−ジヒドロキ
ソ、マロネート−１,４−ブタンジアミンPt（ＩＩ）錯
体に無水酢酸を過量加えて反応させる段階を含むことを
特徴とする下記化学式８の化合物製造方法。＜化学式８＞【化１３】トランス−ジアセテート、マロネート−１,４−ブタン
ジアミンPt（ＩＶ）錯体
【請求項１４】（ａ）トランス−ジヒドロキソ、マロ
ネート−１,４−ブタンジアミンPt（ＩＩ）錯体を備え
る段階と、（ｂ）CH₂Cl₂を溶媒に用い、前記トランス−ジヒドロキ
ソ、マロネート−１,４−ブタンジアミンPt（ＩＩ）錯
体にフリフルオルアセチックアンヒドライドを過量加え
て反応させる段階を含むことを特徴とする下記化学式９
の化合物製造方法。＜化学式９＞【化１４】トランス−ジトリフルオルアセテート、マロネート−
１,４−ブタンジアミンPt（ＩＶ）錯体
【請求項１５】下記化学式４又は７に示される化合物
でなる群から選択されることを特徴とする下記化学式３
の化合物を製造するための中間物質。＜化学式３＞【化１５】＜化学式４＞【化１６】＜化学式７＞【化１７】