HUT74681A - N-(2-hydroxy-1-indenyl)-2-phenylmethyl-4-hydroxy-5-(2-carboxamido-piperazinyl)-pentaneamide derivatives of hiv protease inhibitor activity and phrmaceutical compositions contining them - Google Patents

N-(2-hydroxy-1-indenyl)-2-phenylmethyl-4-hydroxy-5-(2-carboxamido-piperazinyl)-pentaneamide derivatives of hiv protease inhibitor activity and phrmaceutical compositions contining them Download PDF

Info

Publication number
HUT74681A
HUT74681A HU9601649A HU9601649A HUT74681A HU T74681 A HUT74681 A HU T74681A HU 9601649 A HU9601649 A HU 9601649A HU 9601649 A HU9601649 A HU 9601649A HU T74681 A HUT74681 A HU T74681A
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
formula
compound
compounds
hydroxy
group
Prior art date
Application number
HU9601649A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9601649D0 (en
Inventor
Bruce D Dorsey
Joel R Huff
Joseph P Vacca
Original Assignee
Merck & Co Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merck & Co Inc filed Critical Merck & Co Inc
Publication of HU9601649D0 publication Critical patent/HU9601649D0/hu
Publication of HUT74681A publication Critical patent/HUT74681A/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/04—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D307/78—Benzo [b] furans; Hydrogenated benzo [b] furans
    • C07D307/79—Benzo [b] furans; Hydrogenated benzo [b] furans with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D307/81—Radicals substituted by nitrogen atoms not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/06—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems

Description

A találmány új, HIV-proteáz inhibitáló hatású vegyületekre vonatkozik. Közelebbről a találmány olyan új vegyületekre vonatkozik, amelyek a humán immunhiányos vírus (HÍV) által kódolt proteáz hatását gátolják és így felhasználhatók a HÍV által okozott fertőzés megelőzésére és kezelésére, továbbá az ebből adódó, úgynevezett szerzett immunhiányos szindróma (angolszász rövidítéssel: AIDS) kezelésére. A találmány kiterjed továbbá az új vegyületek gyógyászatilag elfogadható sóira, valamint ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítményekre, amelyek a találmány szerinti vegyületeken túl adott esetben tartalmazhatnak az AIDS, illetve a HTV által okozott virális fertőzés kezelésére alkalmas, ismert ágenseket.
A humán immunhiányos vírusnak (HÍV) nevezett retrovírus egy olyan komplex megbetegedés etiológiai ágense, amely magában foglalja az immunrendszer előrehaladó leépülését (szerzett immunhiányos szindróma: AIDS), továbbá a központi és a perifériális idegrendszer degenerálódását. Ezt a vírust a korábbiakban a LAV, HTLV-ΙΠ vagy ARV rövidítések alatt is említették az angolszász szakirodalomban. A retrovírusok szaporodásának egy közös jellemzője az, hogy a prekurzor poliproteinek extenzív poszt-transzlacionális átalakuláson esnek át virálisan kódolt proteáz hatására, miáltal a vírus felépüléséhez és működéséhez szükséges természetes virális fehérjék képződnek. Ezen átalakulás gátlása a normális körülmények között fertőző vírus kialakítását megelőzi. így például Kohl, N. E. és munkatársai a Proc. Nat’l. Acad. Sci., 85, 4686 (1988) szakirodalmi helyen leírják, hogy a HÍV által kódolt proteáz genetikus inaktiválása eredményeképpen nem természetes, illetve nem fertőző vírus-részecskék alakulnak ki. Ezek az eredmények jelzik, hogy a HIV-proteáz gátlása az AIDS kezelésé83894-2037 MR/kov re, illetve a HÍV által okozott fertőzés megelőzésére vagy kezelésére egy hasznosítható módszer.
A HÍV nukleotid-szekvenciájában úgynevezett pol-gén található egy nyitott olvasású keretben [Ratner, L. és munkatársai: Natúré, 313, 277 (1985)]. Az aminosav-szekvencia homológiája bizonyíték arra, hogy a pol-szekvencia kódolja a reverz transzkriptázt, egy endonukleázt és egy HIV-proteázt [Toh, H. és munkatársai: EMBO J., 4, 1267 (1985); Power, M. D. és munkatársai: Science, 231, 1567 (1986); és Pearl, L. H. és munkatársai: Natúré, 329, 351 (1987)]. A későbbiekben bizonyítani fogjuk, hogy a találmány szerinti vegyületek a HIV-proteáz inhibitorai.
A későbbiekben ismertetésre kerülő találmány szerinti (I) általános képletü vegyületek és gyógyászatilag elfogadható sóik tehát felhasználhatók a HIV-proteáz gátlására, a HÍV által okozott fertőzés megelőzésére, a HTV által okozott fertőzés kezelésére és az AIDS kezelésére, éspedig önmagukban vagy gyógyászati készítmények hatóanyagaiként, adott esetben más antivirális hatóanyagok, immunomodulátorok, antibiotikumok vagy vakcinák kombinációjában.
A leírásban alkalmazott rövidítések jelentéseit a következőkben adjuk meg.
Rövidítés Védócsoport
BOC (Boc) CBZ (Cbz) TBS (TBDMS) terc-butil-oxi-karbonil-csoport benzil-oxi-karbonil-csoport terc-butil-dimetil-szilil-csoport Aktiváló csoport
HBT (HOBT vagy HOBt) 1 -hidroxi-benztriazol-hidrát Kondenzálószer
BOP reagens benzotriazol-1 -il-oxi-trisz(dimetil-amino)- -foszfónium-hexafluor-foszfát
BOP-C1 bisz(2-oxo-3-oxazolidinil)-foszfínsav-klorid
EDC l-etil-3-[3-(dimetil-amino)-propil]-karbodi- imid-hidroklorid Más
(BOC)2O (BOC2O) di(terc-butil)-dikarbonát
n-Bu4N+FnBuLi (n-Buli) tetrabutil-ammónium-fluorid n-butil-lítium
DMF dimetil-formamid
Et3N trietil-amin
EtOAc etil-acetát
TFA trifluor-ecetsav
DMAP dimetil-amino-piridin
DME dimetoxi-etán
LDA lítium-diizopropil-amid
THF tetrahidrofurán
A találmány szerinti (I) általános képletü vegyületek (I) általános képletében a (II) általános képletü csoport olyan stabil, 8-, 9- vagy 10-tagú biciklusos, heterociklusos csoport, amelynek bármelyik gyűrűje telített vagy telítetlen lehet, továbbá a heterociklus szénatomokból és 1-3, nitrogénatomok, kénatomok és/vagy oxigénatomok közül megválasztott heteroatom(ok)ból áll, továbbá adott esetben szubsztituálva lehet halogénatommal vagy hidroxil-, 1-4 szénatomot tartalmazó alkil- vagy oxocsoporttal, azzal a megkötéssel, hogy a (III) általános képletü csoport jelentése (IV), (V) vagy (VI) képletü csoporttól eltérő.
A találmány szerinti vegyületek egy előnyös csoportját alkotják azok az (I) általános képletü vegyületek és gyógyászatilag elfogadható sóik, amelyek (I) általános képletében a (II) általános képletü csoport stabil 8-, 9- vagy 10-tagú biciklusos, heterociklusos csoport, amelynek bármelyik gyűrűje telített vagy telítetlen lehet, továbbá a heterociklus szénatomokból és 2, nitrogén- és/vagy oxigénatomok közül megválasztott hetaroatomból áll, és a heteroatomok különböző gyűrűkben vannak.
A találmány szerinti vegyületek egy másik előnyös csoportját alkotják azok az (I) általános képletü vegyületek és gyógyászatilag elfogadható sóik, amelyek (I) általános képletében a (II) általános képletü csoport jelentése (VII) vagy (VIII) általános képletü csoport, és az utóbbi két általános képletben X jelentése oxigén- vagy kénatom.
A találmány szerinti vegyületek egy további előnyös csoportját alkotják azok az (I) általános képletü vegyületek és gyógyászatilag elfogadható sóik, amelyek (I) általános képletében a (II) általános képletü csoport jelentése (IX) általános képletü csoport.
A találmány szerinti vegyületek közül a leginkább előnyös az (A) képletü N-[2(R)-hidroxi-l(S)-indanil]-2(R)-fenil-metil-4(S)-hidroxi-5-{l-[4-(3-furo[2,3-b]-piridil-metil)-2(S)-N’-(terc-butil-karboxamido)-piperazinil]}-pentán-amid, illetve gyógyászatilag elfogadható sói.
A találmány szerinti vegyületeknek királis centrumuk van, így előfordulhatnak racemátok, racém elegyek és individuális diasztereomerek vagy enantiomerek formájában. Szakember számára érthető, hogy az összes ilyen formát a találmány oltalmi körébe tartozónak tekintjük. Egy racém elegy a sztereoizomerek 50 : 50 tömegarányú és más tömegarányú elegyéből áll.
Ha bármelyik változó, például a (II) általános képletü csoport egynél több alkalommal fordul elő az (I) általános képletben, akkor definíciója mindegyik előfordulás esetén független egy másik előfordulásnál jelentkező definíciótól. Hasonló módon a szubsztituensek és/vagy változók kombinációi lehetségesek azokban az esetekben, ha az ilyen kombináció egy stabil vegyületet eredményez.
A továbbiakban - ha csak másképpen nem jelezzük - az „alkilcsoport” kifejezés alatt egyenes és elágazó láncú, telített, alifás szénhidrogén-csoportokat értünk, amelyek meghatározott számú szénatomot tartalmaznak (Me = metilcsoport, Et = etilcsoport, Pr = propilcsoport és Bu = butilcsoport). A „halogénatom” kifejezés alatt fluor-, klór-, bróm- és jódatomot értünk.
A találmány szerinti (I) általános képletü vegyületek (víz- vagy olaj-oldható vagy diszpergálható termékek formájában) gyógyászatilag elfogadható sói közé tartoznak hagyományos nem-toxikus sók vagy kvatemer ammóniumsók, amelyek előállíthatok például szervetlen vagy szerves savakból vagy bázisokból. Az ilyen savaddíciós sókra példaképpen megemlíthetjük az acetátokat, adipátokat, alginátokat, aszpartátokat, benzoátokat, benzol-szulfonátokat, biszulfátokat, butirátokat, citrátokat, kamforátokat, kámfor-szulfonátokat, ciklopentán-propionátokat, diglükonátokat, dihidrokloridokat, difoszfátokat, dodecil-szulfátokat, etán-szulfonátokat, fumarátokat, glükoheptanoátokat, glutamátokat, glicerofoszfátokat, hemiszulfátokat, heptanoátokat, hexanoátokat, hidrokloridokat, hidrobromidokat, hidrojodidokat, 2-hidroxi-etán-szulfonátokat, laktátokat, maleátokat, metán-szulfonátokat, 2-naftalin-szulfonátokat, nikotinátokat, nitrátokat, oxalátokat, pamoátokat, pektinátokat, perszulfátokat, 3-fenil-propionátokat, foszfátokat, pikrátokat, pivalátokat, propionátokat, szukcinátokat, tartarátokat, tiocianátokat, tozilátokat és undekanoátokat. A bázikus sók közé tartoznak ammó niumsók; alkálifémsók, például nátrium- és káliumsók; alkáliföldfémsók, például kalcium- és magnéziumsók; szerves bázisokkal alkotott sók, például diciklohexil-aminsók és N-metil-D-glükaminátok; valamint aminosavakkal, például argininnel vagy lizinnel alkotott sók. A bázikus nitrogénatomot tartalmazó csoportok kvatemerizálhatók például olyan kvatemerizálószerekkel, mint a rövid szénláncú alkil-halogenidek, például a metil-, etil-, propil- és butil-kloridok, -bromidok és -jodidok; dialkil-szulfátok, például dimetil-, dietil-, dibutil- és diamil-szulfátok; hosszú szénláncú halogenidek, például decil-, lauril-, mirisztil- és sztearil-kloridok, -bromidok és -jodidok; aralkil-halogenidek, például benzil-bromidok és fenetil-bromidok. Más gyógyászatiig elfogadható sók közé tartoznak a szulfátsók etanolátjai és maguk a szulfátsók.
Az I. és Π. reakcióvázlatokban a találmány szerinti (I) általános képletu új vegyületek előállítását mutatjuk be. A kiviteli példákban azután az említett reakcióvázlatok szerinti reagáltatásokat egyes konkrét vegyületek vonatkozásában részletesen ismertetjük.
A találmány szerinti vegyületek előállítása során végrehajtott, amidkötés kialakítására szolgáló reakciókat tipikusan az úgynevezett karbodiimides módszerrel hajthatjuk végre, amelyhez reagensként például diciklohexil-karbodiimidet vagy 1 -etil-3-[3-(dimetil-amino)-propil]-karbodiimidet használunk. Az amid- vagy peptidkötés kialakítására szolgáló egyéb módszerek közé tartoznak például a savkloridos, azidos, vegyes anhidrides vagy reakcióképes észteres módszerek, de a szintetikus módszerek körét nem korlátozzuk ezekre a módszerekre. Jellegzetesen oldatban az amidkötés kialakítására kapcsolásos módszer hajtunk végre, de ehelyett alkalmazhatjuk a szilárd-fázisú szintézist is az immáron klasszikus Merrifield-technikával. Egy vagy több védőcsoport bevitele és eltávolítása ugyancsak a szerves kémikus szokásos praxisához tartozó művelet.
Az ilyen szintetikus módszerek vonatkozásában további értékes információk találhatók a 0337714 és 0541168 számú európai szabadalmi leírásokban.
Az (I) általános képletú vegyületek előállítására az egyik alkalmazható módszert az I. reakcióvázlatban mutatjuk be. Az ebben a reakcióvázlatban 1 vegyületként jelölt dihidro-5(S)-(terc-butil-dimetil-szilil-oxi-metil)-3(2H)-furanont a szakirodalomból jól ismert módszerrel állítjuk elő kereskedelmi forgalomban kapható dihidro-5(S)-(hidroxi-metil)-2(3H)-furanonból. Az 1 vegyület alkilezése után kapott 2 vegyület (amely egy lakion) védőcsoportját eltávolítjuk vizes hidrogén-fluorid-oldattal, amikor a 3 vegyületet kapjuk.
A 3 vegyület hidroxilcsoportját ezután reakcióképessé tesszük úgy, hogy kilépő csoporttá, például mezilát-, tozilát- vagy triflát-csoporttá alakítjuk úgy, hogy a 3 vegyületet egy szulfonil-kloriddal vagy - előnyösen szulfonsavanhidriddel, például trifluor-metán-szulfonsavanhidriddel reagáltatjuk egy gátolt amin mint bázis, például trietil-amin, dietil-izopropil-amin vagy 2,6-lutidin jelenlétében, amikor egy megfelelő 4 vegyületet kapunk. A 4 vegyület kilépő csoportját ezután egy 5 aminnal, például 4-(l,l-dimetil-etoxi-karbonil-amino)-piperazin-2(S)-karboxamiddal helyettesítjük oldószerben, például DMF-ban vagy xilolban, amikor egy 6 vegyületet kapunk. A trifluor-metán-szulfonil-oxi-csoportot egy aminnal helyettesíthetjük szobahőmérsékleten egy oldószerben, például izopropanolban vagy metilén-kloridban Ν,Ν-diizopropil-etil-aminnal végzett kezelés útján.
A 6 vegyületet ezután hidrolizáljuk vizes lítium-hidroxid-oldattal vagy vizes nátrium-hidroxid-oldattal, amikor egy 8 védett hidroxi-savat kapunk. A hidroxilcsoport célszerűen megvédhető egy szokásos szililcsoporttal mint védőcsoporttal, így például terc-butil-dimetil-szilil- vagy terc-butil-difenil-szilil-csoporttal.
*
A védett 8 hidroxi-savat ezután a kívánt R -aminnal kapcsoljuk egy megfelelő 9 vegyület előállítása céljából, majd az utóbbi szilil-típusú védőcsoportját eltávolítjuk fluoridionnal végzett kezelés útján, amikor egy JO vegyületet kapunk.
Áttérve a Π. reakcióvázlat ismertetésére a 12 epoxid előállítására egy előnyös módszer során a 11 vegyületet egy erős bázis jelenlétében reagáltatjuk. Az erős bázis lehet fémtartalmú bázis egy közömbös, vízmentes szerves oldószerben, például ciklusos vagy aciklusos szénhidrogénben, beleértve a hexánt, pentánt vagy ciklohexánt. A célszerűen alkalmazható erős bázisok közé tartoznak a következők: LiN[(CH3)3Si]2, KN[(CH3)3Si]2, NaN[(CH3)3Si]2, n-butil-lítium (n-BuLi), szek-BuLi, terc-BuLi, kálium-terc-butilát, lítium-diizopropil-amid (LDA), lítium-izopropil-ciklohexil-amid, lítium-pirrolidid, lítium-tetrametil-piperidid, fenil-lítium, izopropil-magnézium-klorid, izobutil-magnézium-klorid és más, a szakirodalomból jól ismert hasonló erős bázisok. Ezek közül előnyösek a következők: n-BuLi, szek-BuLi, LiN[(CH3)3Si]2 és LDA, mimellett az n-BuLi és LiN[(CH3)3Si]2 különösen előnyös. Egy mólekvivalens 11 vegyületre vonatkoztatva előnyösen 1-2 mólekvivalens mennyiségű szabad bázist használunk.
A 13 vegyület előállítása céljából a 12 vegyületet az (5) jelölésű N-(terc-butil)-4-( 1,1 -dimetil-etoxi-karbonil-amino)-piperazin-2(S)-karboxamiddal reagáltatjuk. Előnyösen 1 mólekvivalens 12 epoxidra vonatkoztatva 1 -3 mólekvivalens 5 amint használunk, a leginkább előnyösen 1 mól 12 vegyületre vonatkoztatva mintegy 1,05 mól 5 amint hasznosítunk.
Ezt a reagáltatást bármely alkalmas oldószerben, így például egy szénhidrogénben, például toluolban; éterben, például dietil-éterben; alkoholban, például metanolban, etanolban vagy izopropanolban; nitrilben, például acetonitrilben; és észterben, például etil-acetátban, vagy ezek tetszőle ges kombinációjában végrehajthatjuk, mimellett az alkoholok előnyösek és az izopropanol a leginkább előnyös. A reakció hőmérsékletét szobahőmérséklet és az alkalmazott oldószer forráspontjának megfelelő hőmérséklet közötti értéken tartjuk, de előnyösen a reagáltatást megemelt hőmérsékleteken, így például 80 °C és 90 °C, különösen előnyösen 83 °C és 85 °C közötti hőmérsékleteken hajtjuk végre.
A reakcióképes glicidolok a szakirodalomból jól ismert módszerekkel, például a Klunder, J. és munkatársai által a J. Org. Chem., 54, 1295-1304 (1989) szakirodalmi helyen ismertetett módszerrel állíthatók elő.
Az amidvegyületek, például a 11 vegyület előállíthatok a szakirodalomból ugyancsak jól ismert módszerekkel, például a 10. példában ismertetett módszerrel, megfelelő kiindulási anyagokat használva. A találmány szerinti eljárás gyakorlati végrehajtásakor hasznosíthatunk védőcsoportoΛ kát, így például az aminocsoport megvédésére alkalmas csoportokat. így például a 2-(terc-butil-karboxamido)-piperazin 4-helyzetu nitrogénatomja megvédhető olyan, a szakirodalomból jól ismert védőcsoportokkal, mint a BOC, CBZ, benzilcsoport, 4-metoxi-benzil-csoport, 2,4-dimetoxi-benzil-csoport, trifluor-acetamido-csoport vagy egy trialkil-szilil-csoport. A 15 általános képletü csoportok - a képletben P jelentése nitrogén-védőcsoport, például BOC- vagy CBZ-védőcsoport - előállíthatok ugyancsak az I. reakcióvázlatban ismertetett módszerrel, előnyösen a 4 lakton 5-(trifluor-metán-szulfonil-oxi-metil)-analógj át hasznosítva.
A 16 általános képletü vegyületek előállíthatok a 14 általános képletü vegyületekből különböző módszerekkel, az utóbbiak pedig előállíthatok úgy, hogy egy megfelelő 15 általános képletü vegyület nitrogén-védőcsoportját a szakirodalomból jól ismert módszerekkel eltávolítjuk, például a CBZ-védőcsoport eltávolítása céljából katalitikus hidrogénezést végzünk, vagy pedig a BOC-védőcsoport eltávolítása céljából trimetil-szilil-trifláttal és 2,6-lutidinnel 0 °C körüli hőmérsékleten, oldószerben, például diklór-metánban végzünk kezelést, vagy pedig 6N sósavoldattal izopropanolban végzünk kezelést.
A 14 általános képletű vegyületek 4-helyzetű piperazinil-nitrogénatomja alkilezhető valamely R?-X általános képletű vegyülettel oldószerben, például DMF-ban Et3N jelenlétében szobahőmérsékleten, mimellett X jelentése klór-, bróm- vagy jódatom. Az ezeknek a módszereknek a végrehajtására szolgáló technikák a szakember számára jól ismertek.
A találmány szerinti vegyületekre számos példát ismertetünk a 3. példát követő táblázatban.
A találmány szerinti vegyületek felhasználhatók antivirális hatású vegyületek kiszűrésére alkalmas vizsgálati módszerek előkészítésére és végrehajtására. így például a találmány szerinti vegyületek felhasználhatók olyan enzim mutánsok izolálására, amelyek kiváló szkrínelő eszközök még inkább hatékony antivirális vegyületek kiválasztására. Továbbá a találmány szerinti vegyületek felhasználhatók más antivirális hatású anyagoknak HTV-proteázhoz való kapcsolódási helye meghatározására például kompetitív gátlás útján. így a találmány szerinti vegyületek kereskedelmi forgalomba kerülő termékek az említett célokra.
A találmány szerinti vegyületek - miként említettük - felhasználhatók HTV-proteáz gátlására, a humán immunohiányos vírus (HÍV) által okozott fertőzés megelőzésére vagy kezelésére, valamint az ebből a fertőzésből adódó patológiás állapotok, így például az AIDS kezelésére. Az AIDS kezelése vagy a HÍV által okozott fertőzés megelőzése vagy kezelése a következőképpen definiálható (bár nem korlátozható): HIV-fertőzésből adódó állapotok, így például AIDS, ARC (AIDS-hez kapcsolódó komplex megbetegedés), mind szimptomatikus, mind aszimptomatikus, továbbá HIV-nek aktuálisan vagy potenciálisan kitett állapotok kezelése. így például a talál11 mány szerinti vegyületek felhasználhatók HÍV által okozott fertőzés kezelésére olyan esetekben, amikor a beteg feltételezhetően HÍV fertőzésen esett át, így például vértranszfuzió, szervátültetés, testfolyadékok cseréje, rovarcsípés, véletlenszerű tűszúrás vagy műtét során vérrel történő érintkezés következtében.
Ilyen célokra a találmány szerinti vegyületeket beadhatjuk orálisan, parenterálisan (beleértve a szubkután, intravénás, intramuszkuláris vagy intrastemális injektálást és az infúziós módszereket), inhalálás útján vagy rektális úton, szokásos gyógyászati készítmények formájában, amelyek a találmány szerinti hatóanyagon kívül gyógyászatilag elfogadható, nem mérgező hordozó- és/vagy egyéb hatóanyagokat tartalmaznak.
A találmány szerinti gyógyászati készítmények lehetnek tehát orálisan beadható szuszpenziók vagy tabletták; orrpermetek; steril injektálható készítmények, például steril, injektálható, vizes vagy olajos szuszpenziók; vagy kúpok formájában.
Ha egy szuszpenzió orálisan kerül beadásra, akkor az ilyen típusú készítményeket a gyógyszerkészítésnél jól ismert módszerek valamelyikével állíthatjuk elő, illetve ezek tartalmazhatnak sűrítőszerként mikrokristályos cellulózt, szuszpendálószerként alginsavat vagy nátrium-alginátot, viszkozitást növelőként metil-cellulózt, továbbá ismert ízesítőszereket és édesítőszereket. A hatóanyagot azonnal leadó tabletták előállításához hasznosíthatunk mikrokristályos cellulózt, dikalcium-foszfátot, keményítőt, magnézium-sztearátot és laktózt és/vagy egyéb ismert segédanyagokat, például kötőanyagokat, sűrítőszereket, szétesést elősegítő szereket, hígítószereket és csúsztatókat.
Ha nazális beadásra aeroszol formájában vagy inhalálásra alkalmas készítményeket állítunk elő, akkor ezeket is a gyógyszergyártásból e célra jól ismert módszerekkel állíthatjuk elő, illetve elkészíthetjük ezeket konyI hasóval alkotott oldat formájában, konzerválószerként például benzil-alkoholt vagy más alkalmas konzerválószert, a biológiai hozzáférhetőség céljából abszorpciót elősegítő anyagokat, fluor-szénhidrogéneket és/vagy egyéb szolubilizálószereket vagy diszpergálószereket alkalmazva.
Az injektálható oldatokat vagy szuszpenziókat is a gyógyszergyártásból e célra jól ismert módszerekkel készíthetjük el, segédanyagként például alkalmas nem mérgező, parenterálisan elfogadható hígítóanyagokat vagy oldószereket, így például mannitot, 1,3-bután-diolt, vizet, Ringer-oldatot vagy izotóniás nátrium-klorid-oldatot hasznosítva, továbbá célszerűen diszpergálószereket vagy nedvesítőszereket és szuszpendálószereket, így például steril, nem fertőzött zsíros olajokat, beleértve a szintetikus mono- vagy diglicerideket, és zsírsavakat, beleértve az oleinsavat, alkalmazva.
Ha rektális alkalmazás céljából kúpokat állítunk elő, akkor ezek előállíthatok például úgy, hogy a hatóanyagot egy alkalmas nem irritáló hordozóanyaggal, például kakaóvajjal vagy szintetikus glicerid-észterekkel vagy polietilén-glikolokkal keverjük össze, mely hordozóanyagok a szokásos hőmérsékleteken szilárdak, azonban a rektális üregben cseppfolyósodnak és/vagy oldódnak a hatóanyagot felszabadítva.
A korábbiakban említett megbetegedések kezelése vagy megelőzése céljából napi 0,02 g és 10,0 g közötti dózisszintek hasznosíthatók, orális beadás esetén 2-5 alkalommal végezve ezt. így például HÍV által okozott fertőzés hatékonyan kezelhető testtömegkg-onként 1-50 mg hatóanyag beadásával napi 1-4 alkalommal. Egy előnyös beadási mód abban áll, hogy mindegyik betegnek orálisan 6 óránként 100-400 mg hatóanyagot adunk be. Szakember számára azonban érthető, hogy egy adott konkrét beteg esetében a beadott dózis specifikus nagysága és gyakorisága számos tényezőtől így például a konkrét esetben alkalmazott specifikus vegyület aktivitásától, ugyanezen vegyület metabolikus stabilitásától és hatástartamától, a beteg korától, testtömegétől, általános állapotától, nemétől és táplálkozásmódjától, a beadás módszerétől és időpontjától, a kiválasztási sebességtől, a konkrét esetben alkalmazott hatóanyagkombinációtól és az adott esetben kezelt tünet súlyosságától függően.
A találmány továbbá olyan hatóanyagkombinációkra vonatkozik, amelyek HIV-proteázt inhibitáló vegyületek mellett egy vagy több, AIDS kezelésére alkalmas ágensből állnak. így például a találmány szerinti vegyületek hatékonyan alkalmazhatók - függetlenül attól, hogy előzetesen és/vagy utólag kerülnek beadásra - a szakirodalomból jól ismert, AIDS kezelésére alkalmas antivirális ágensek, immunomodulátorok, fertőzés elleni hatóanyagok vagy vakcinák hatékony mennyiségeivel kombinációban. A következő C. táblázatban olyan gyógyszereket sorolunk fel, amelyek a találmány szerinti vegyületekkel kombinációban hasznosíthatók. Szakember számára azonban érthető, hogy a találmány szerinti vegyületekkel együtt alkalmazható AIDS-antivirális ágensek, immunomodulátorok, fertőzés elleni hatóanyagok vagy vakcinák köre nem korlátozódik a C. táblázatban felsorolt vegyületekre, elvileg bármely olyan kombináció hasznosítható, amely a találmány szerinti vegyület mellett AIDS kezelésére alkalmas hatóanyagot tartalmaz.
C. táblázat
ANTIVIRÁLIS ÁGENSEK
A gyógyszer neve Gyártó cég Indikáció
AL-721 Ethigen (Los Angeles, CA) ARC, PGL HIV-pozitív, AIDS
rekombináns humán béta-interferon Triton Biosciences (Almeda, CA) AIDS, Kaposi-szarkóma, ARC
Acemannan Carrington Labs (Irving, TX) ARC (lásd az immunomodulátorokat is)
Cytovene Syntex (Palo Alto, CA) látást fenyegető CMV
Ganciclovir Syntex (Palo Alto, CA) perifériális CMV-retinitis
d4T (didehidro-dezoxi-timidin) Bristol-Myers (New York, NY) AIDS, ARC
ddl Bristol-Myers (New York, NY) AIDS, ARC
EL10 Elán Corp., PLC (Gainesville, GA) HÍV fertőzés (lásd az immunomodulátorokat is)
trinátrium-foszfonoformiát Astra Pharm. Products, Inc. (Westborough, MA) CMV retinitis, HTV-fertőzés, más CMV-fertőzések
ddC (didezoxi-citidin) Hoffinan-La Roche (Nutley, NJ) AIDS, ARC
Novapren Novaferon Labs, Inc. (Akron, OH) Diapren, Inc. (Roseville, MN, forgalmazó) HÍV-inhibitor
Peptide T oktapeptid-szekven- Peninsula Labs (Belmont, CA) AIDS
cia
A gyógyszer neve Gyártó cég Indikáció
Zifovudine; Burroughs Wellcome (Rsch. Triangle Park, NC) AIDS, előrehaladott ARC pediátrikus AIDS, Kaposi-szarkóma, aszimptomatikus HIV-fertőzés, kevéssé súlyos HIV-megbetegedés, neurológiai szövődmények, más gyógymódokkal kombinációban
Ansamycin LM 427 Adria Laboratories (Dublin, OH) Erbamont (Stamford, CT) ARC
dextrán-szulfát Ueno Fine Chem. Ind. Ltd. (Osaka, Japán) AIDS, ARC, HIV-pozitív aszimptomatikus
Virazole Ribavirin Viratek/ICN (Costa Mesa, CA) aszimptomatikus HIV-pozitív, LAS, ARC
alfa-interferon Burroughs Wellcome (Rsch. Triangle Park, NC) Kaposi-szarkóma, HÍV Retrovir-rel kombinációban
Acyclovir Burroughs Wellcome AIDS, ARC, aszimptomatikus HIV-pozitív AZT-vel kombinációban
antitest, amely semlegesíti a pH-labilis alfa-aberráns interferont immunoadszorbens oszlopon Advanced Biotherapy Concepts (Rockville, MD) AIDS, ARC
B Merek (Rahway, NJ) AIDS, ARC, aszimptomatikus HIV-pozitív AZT-vel kombinációban
C Merek (Rahway, NJ) AIDS, ARC, aszimptomatikus HIV-pozitív AZT-vel kombinációban
Nevirapine Boehringer Ingelheim AIDS, ARC, aszimptomatikus HIV-pozitív AZT-vel kombinációban
IMMUNOMODULÁTOROK
A gyógyszer neve
AS-101
Bropirimine
Acemannan
CL246,738
EL10 gamma-interferon granulocita makrofág telepet stimuláló faktor granulocita makrofág telepet stimuláló faktor granulocita makrofág telepet stimuláló faktor
HÍV magrész immunostimuláns
IL-2 (interleukin-2)
IL-2 (interleukin-2)
Gyártó cég
Wyeth-Ayerst Labs. (Philadelphia, PA)
Upjohn (Kalamazoo, MI)
Carrington Labs., Inc. (Irving, TX)
American Cyanamid (Pearl River, NY) Lederle Labs (Wayne, NJ)
Elán Corp., PLC (Gainesville, GA)
Genentech (S. San Francisco, CA)
Genetics Institute (Cambridge, MA) Sandoz (East Hanover, NJ)
Hoechst-Roussel (Sommerville, NJ) Immunex (Seattle, WA)
Schering-Plough (Madison, NJ)
Rorer (Ft. Washington, PA)
Cetus (Emervyville, CA)
Hoffman-La Roche (Nutley, NJ) Immunex
Indikáció
AIDS előrehaladott AIDS
AIDS, ARC (lásd az antivirális ágenseket is)
AIDS, Kaposi-szarkóma
HIV-fertőzés (lásd az antivirális ágenseket is)
ARC, TNF-val (tumor nekrózis faktor) kombinációban
AIDS
AIDS
AIDS, AZT-vel kombinációban szeropozitív HÍV
AIDS, AZT-vel kombinációban
AIDS, ARC, HÍV, AZT-vel kombinációban • · • ·
A gyógyszer neve Gyártó cég Indikáció
humán intravénás immun-globulin Cutter Biological (Berkeley, CA) pediátrikus AIDS, AZT-vel kombinációban
IMREG-1 Imreg (New Orleans, LA) AIDS, Kaposi-szarkóma, ARC, PGL
IMREG-2 Imreg (New Orleans, LA) AIDS, Kaposi-szarkóma, ARC, PGL
Imuthiol-dietil-ditiokarbamát Merieux Institute (Miami, FL) AIDS, ARC
Alfa-2 interferon Schering Plough (Madison, NJ) AIDS, Kaposi-szarkóma AZT-vel kombinációban
metionin-enkefalin TNI Pharmaceutical (Chicago, IL) AIDS, ARC
MTP-PE (muramil-tripeptid) Ciba-Geigy Corp. (Summit, NJ) Kaposi-szarkóma
granulocita-telep stimuláló faktor Amgen (Thousand Oaks, CA) AIDS, AZT-vel kombinációban
rCD4 (rekombináns oldható humán CD4) Genentech (S. San Francisco, CA) AIDS, ARC
rCD4-IgG hibridek Biogen (Cambridge, MA) AIDS, ARC
rekombináns oldható humán CD4 Biogen (Cambridge, MA) AIDS, ARC
interferon Al- fa 2a Hoffman-La Roche (Nutley, NJ) Kaposi-szarkóma, AIDS, ARC, AZT-vel kombinációban
SK&F 106528 (oldható T4) Smith, Kline & French Laboratories (Philadelphia, PA) HIV-fertőzés
Thymopentin Immunobiology Research Institute (Annandale, NJ) HIV-fertőzés
tumor nekrózis faktor (TNF)
Genentech ARC, gamma-interferonnal (S. San Francisco, CA) kombinációban
FERTŐZÉS ELLENI SZEREK
A gyógyszer neve Gyártó cég Indikáció
Clindamycin és Primaquine Upjohn (Kalamazoo, MI) PCP
Fluconazole Pfizer (New York, NY) cryptococcusos meningitis, candidiasis
Nystatin pasztilla Squibb Corp. (Princeton, NJ) orális candidiasis megelő- zése
Omidyl Eflomithine Merrell Dow (Cincinati, OH) PCP
Pentamidine Isethionate (IM&IV) LyphoMed (Rosemont, IL) PCP kezelés
Trimethoprim antibakteriális
T rimethoprim/sulfa antibakteriális
Piritrexim Burroughs Wellcome (Rsch. Triangle Park, NC) PCP kezelés
Pentamidine isethionate inhalálásra Fisons Corporation (Bedford, MA) PCP megelőzés
Spiramycin Rhone-Poulenc Pharmaceuticals (Princeton, NJ) cryptosporidiális hasmenés
Intraconazole- R51211 Janssen Pharm. (Piscataway, NJ) histoplasmosis; cryptococcusos meningitis
Trimetrexate Wamer-Lambert PCP
MÁS HATÓANYAGOK
A gyógyszer neve
Gyártó cég
Indikáció rekombináns humán Ortho Pharm. Corp eritropoietin (Raritan, NJ)
Megestrol Acetate
Totál Enteral Nutrition
Bristol-Myers (New York, NY)
Norwich Eaton Pharmaceuticals (Norwich, NY) súlyos anémia, AZT terápiával kombinációban anorexia és AIDS együttes kezelése
AIDS-szel kapcsolatos hasmenés és alultápláltság
A C. táblázat egyes vegyületei közelebbről a következők: a B vegyület 6-klór-4(S)-ciklopropil-3,4-dihidro-4-((2-piridil)-etinil)-kinazolin-2(lH)-on; a C vegyület (-)-6-klór-4(S)-(trifluor-metil)-l,2-dihidro-4(H)-3,l-benzoxazin-2-on; és a nevirapine kémiai neve 1 l-ciklopropil-5,ll-dihidro-4-metil-6H-dipirido[3,2-b:2’,3’-e][l,4]diazepin-6-on. A B és C vegyületek előállíthatok az 569 083 számú európai szabadalmi leírásban ismertetett módszerekkel. A nevirapine előállítható a következő három publikáció valamelyikében ismertetett eljárással: Klunder, J. M. és munkatársai: J. Med. Chem., 35, 1887 (1992); Hargrave, K. D. és munkatársai: J. Med. Chem., 34, 2231 (1991); és Cohen, K. A. és munkatársai: J. Bioi. Chem., 266, 14670 (1991).
Az előnyös kombinációk közé tartozik az egyidejű vagy alternáló kezelés egy HIV-proteáz inhibitorral és a HÍV reverz-transzkriptáz nem-nukleozid jellegű inhibitorával. Egy ilyen kombinációban egy adott esetben hasznosítható harmadik komponens a HÍV reverz-transzkriptáz nukleozid-inhibitora, például az AZT, ddC vagy ddl. Előnyös HIV-proteáz inhibitor a találmány szerinti (A) képletü vegyület. A HÍV reverz-transzkriptáz előnyös nem-nukleozid típusú inhibitorai közé tartozik a B vegyület, a C vegyület vagy a nevirapine. Ezek a kombinációk szinergista hatásúak lehetnek a HTV terjedésének gátlásában. Előnyös kombinációk közé tartoznak a következők: (1) (A) képletü vegyület a HÍV reverz-transzkriptáz egy előnyös nem-nukleozid típusú inhibitorával és adott esetben AZT vagy ddl vagy ddC; (2) (A) képletü vegyület és az AZT, ddl vagy ddC.
Mikrobiálisan kifejezett HIV-proteáz gátlásával kapcsolatos vizsgálat
Gátlási kísérleteket végzünk olyan reakcióban, amelyben Eschericia coli baktériumban kifejezett proteázt egy peptid-szubsztráttal [Val-Ser-Gln-Asn-(béta-naftil)Ala-Pro-Ile-Val, 0,5 mg/ml koncentrációban a reakció kezdetekor] reagáltatunk 50 mmólos, 5,5 pH-értékű nátrium-acetát-oldatban 30 °C-on 1 órán át. Az inhibitor különböző koncentrációit adagoljuk 1 μΐ DMSO-ban oldva 25 μΐ, vízzel készült peptid-oldathoz. A reakciót 15 μΐ, 0,33 nmólos proteáz-oldattal (0,11 ng) iniciáljuk, az oldat 0,133 mólos, 5,5 pH-értékű nátrium-acetát-oldattal készült, illetve 0,1 % borjúszérum-albumint tartalmaz. A reakcióelegyet végül 160 μΐ 5 %-os foszforsav-oldattal kvencseljük, majd a reakciótermékeket nagy felbontóképességű folyadékkromatográfiás módszerrel (VYDAC-típusú, széles pórusú, 5 cm-es C-18 fordított fázisú oszlop, acetonitril-gradiens, 0,1 % foszforsav) szeparáljuk. A reakció gátlásának mértékét a termékek csúcsmagasságából határozzuk meg. Az egymástól függetlenül szintetizált termékek ugyanilyen vizsgálata lehetővé teszi a mennyiségi standardok kialakítását, illetve a termékösszetétel megerősítését. Az (A) képletü vegyület IC50-értéke mintegy 0,27 nmól.
Sejtekben való szétterjedéssel kapcsolatos vizsgálat
A HÍV sejttenyészetekben való szétterjedésének gátlását mérjük a Nunberg, J. H. és munkatársai által a J. Virol., 65 4887 (1991) szakirodalmi helyen ismertetett módszenei. E módszer értelmében MT-4 T-limfoid sejteket megfertőzünk HIV-1 (vad típus, ha csak másképpen nem jelezzük) vírussal, előre meghatározott mennyiségű inokulumot használva, majd a te21 nyészeteket 24 órán át inkubáljuk. Ekkor a sejtek körülbelül 1 %-a vagy ennél kisebb mennyisége mutatkozik pozitívnak indirekt immunofluoreszcens vizsgálat során. A sejteket alaposan mossuk, majd 96-lyukú tenyészlemezekben eloszlatjuk. Ezután a lyukakhoz az inhibitor kétszeres sorozathígításait adjuk, majd a tenyésztést további 3 napon át folytatjuk. A fertőzés utáni
4. napon a kontroll tenyészetekben a sejtek 100 %-a fertőzött. A HIV-1 p24 akkumulációja közvetlenül korellál a vírus szétterjedésével. A sejttenyészetben a gátlási koncentrációt úgy határozzuk meg, mint az inhibitornak azt a nmól/1 egységekben kifejezett koncentrációját, amely a fertőzés terjedését legalább 95 %-kal csökkenti. Ez a CIC95-érték. Az (A) képletü vegyület CIC95-értéke 25 nmól.
Vírus szétterjedésének gátlása
A. HIV-fertőzött MT-4 sejtszuszpenzió elkészítése
A 0. napon MT-sejteket fertőzünk meg 250 000/ml koncentrációban HIV-1 törzs mb törzsoldatából (végső 125 pg p24/ml; elegendő az 1. napon a sejtek 1 %-ának vagy ennél kisebb mennyiségnek a megfertőzéséhez és a
4. napon a sejtek 25-100 %-ának megfertőzéséhez) 1 : 1000-szeres hígításával. A fertőzött sejteket a következő összetételű táptalajban növesztjük: RPMI 1640 (Whittaker BioProducts terméke), 10 % inaktivált borjúembrió-szérum, 4 mmól glutamin (Gibco Labs terméke), valamint penicillin és sztreptomicin 1 : 100 tömegarányú keveréke (Gibco Labs terméke).
A reakcióelegyet 37 °C-on 5 térfogat% szén-dioxidot tartalmazó atmoszférában 1 éjszakán át inkubáljuk.
B. Az inhibitorokkal való kezelés
Kétféle hatóanyagot tartalmazó kombinációkból nmólos nagyságrendű mennyiségeket tartalmazó mátrixot készítünk. Az 1. napon az inhibitorok 125 μΐ térfogatú aliquotjait adjuk 96-lyukú mikrotiter sejttenyésztő lemezben azonos térfogatú HIV-fertőzött MT-4 sejtekhez (50 000 lyukanként).
Az inkubálást 37 °C-on 5 térfogat% szén-dioxidot tartalmazó atmoszférában 3 napon át folytatjuk.
C. Vírus szétterjedésének mérése
Többcsatornás pipettát használva a kiülepedett sejteket újraszuszpendáljuk, majd 125 μΙ-t kimérünk külön mikrotiter-lemezbe. A felülúszót megvizsgáljuk HÍV p24 antigénre.
A HÍV p24 antigén koncentrációját enzim-immunovizsgálattal a következőképpen hajtjuk végre. HÍV törzs-antigénre specifikus monoklonális antitesttel borított mikrolyukakba bemérünk a p24 antigénből aliquotokat. A mikrolyukakat ekkor, majd az ezután végrehajtandó egyes alkalmas lépéseknél mossuk. Ezt követően biotinilezett HIV-specifikus antitestet adagolunk, majd konjugált sztreptavidin-torma-peroxidázt. Színreakció megy végbe a beadagolt hidrogén-peroxid és a tetrametil-benzidin-szubsztrát között. A színintenzitás arányos a HÍV p24 antigén koncentrációjával.
Szinergizmus vagy megnövekedett gátlás mértékének számítása
Ha szinergizmus jelensége lép fel, ez azt jelenti, hogy kétféle inhibitor kombinációjának hatása lényegesen erősebb a vírusterjedés meggátlásában, mint az egyes inhibitoroké önmagukban, illetve mint a két inhibitor gátlásának együttes additív értéke.
Az adatokat a következőképpen dolgozzuk fel: Elion és munkatársai által a J. Bioi. Chem., 208, 477 (1954) szakirodalmi helyen ismertetett módszerrel úgynevezett frakcionális gátlási koncentrációarányokat (FIC) számítunk ki. A FIC-értékek minimális összegét - ami a maximális szinergizmust jelenti - különböző párszeru kombinációkkal határozzuk meg. Minél kisebb ez a szám, annál nagyobb a szinergizmus.
1. példa N-[2(R)-Hidroxi-l(S)-indanill-2(R)-fenil-metil-4(S)-(hidroxi)-5-{ 1-í2(S)-N-(terc-butil-karboxamido)-piperazinill)-pentán-amid (14. vegyület) előállítása
1. lépés: Dihidro-5(S)-[(terc-butil-difenil-szilil)-oxi-metill-3(R)-fenil-me- til-3(2H)-furanon előállítása
-78 °C hőmérsékleten lítium-diizopropil-amid (LDA) oldatot állítunk elő úgy, hogy 0,55 ml (3,9 mmól) diizopropil-amin 10 ml THF-nal készült oldatához hozzáadunk 1,55 ml, hexánnal készült 2,5 mólos n-BuLi-oldatot. 30 perc elteltével beadagoljuk 1,38 g (3,89 mmól) dihidro-5(S)-[(terc-butil-difenil-szilil)-oxi-metil]-3(2H)-furanon 5 ml THF-nal készült oldatát. További 30 percen át tartó keverést követően 0,68 g (3,9 mmól) benzil-bromidot adagolunk, majd a keverést 3 órán át folytatjuk. Ezt követően a reakcióelegyet 10 %-os vizes citromsav-oldattal kvencseljük, majd 50-50 ml etil-acetáttal kétszer extraháljuk. Az egyesített extraktumot telített vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, szárítjuk, szüljük és bepároljuk. Az ekkor kapott olajat kromatográfiás tisztításnak vetjük alá szilikagélen, eluálószerként 20 térfogat% etil-acetátot tartalmazó hexánt használva. így a lépés címadó vegyületét kapjuk.
2. lépés: Dihidro-5(S)-(hidroxi-metil1-3(R)-fenil-metil-3(2H)-furanon elő- állítása
5,26 g dihidro-5(S)-[(terc-butil-difenil-szilil)-oxi-metil]-3(R)-fenil-metil-3(2H)-furanon 40 ml acetonitrillel készült oldatához hozzáadunk 1,34 ml 49 %-os, vizes hidrogén-fluorid-oldatot, majd az így kapott reakcióelegyet szobahőmérsékleten 18 órán át állni hagyjuk. Ezt követően a reakcióelegyet szárazra pároljuk, majd a maradékot megosztjuk 50 ml víz és 50 ml etil-acetát között. A szerves fázist telített vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, szárazra szűrjük és bepároljuk. így a lépés címadó vegyületét kapjuk 69-72 °C olvadáspontú, cserszínű csapadékként.
3. lépés: Dihidro-5(S)-r(trifluor-metán-szulfonil)-oxi-metill-3(R)-fenil-me- tíl-3(2H)-furanon előállítása
18,4 g (89,2 mmól) dihidro-5(S)-(hidroxi-metil]-3(R)-fenil-metil-3(2H)-furanon 350 ml metilén-kloriddal készült, 0 °C hőmérsékletre lehűtött oldatához hozzáadunk 13,51 ml (115,98 mmól) 2,6-lutidint, majd cseppenként 16,51 ml (98,1 mmól) trifluor-metán-szulfonsavanhidridet. A reakcióelegyet 0 °C-on 1,5 órán át állni hagyjuk, majd 300 ml jeges vizes nátrium-klorid-oldatba öntjük. Az ekkor kapott vizes elegyet 0,5 órán át keverjük, majd 150-150 ml metilén-kloriddal háromszor extraháljuk. Az egyesített extraktumot 75-75 ml 10 %-os sósavoldattal kétszer, 100 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal egyszer és végül 100 ml vízzel egyszer mossuk, magnézium-szulfát fölött szárítjuk, szűrjük és bepároljuk. A kapott szilárd maradékot flash-kromatográfiás (120 · 150 mm méretű oszlop) tisztításnak vetjük alá, gradiens-eluálást végezve hexán és etil-acetát 4 : 1 és 3 : 1 közötti térfogatarányú elegyeivel. így a lépés címadó vegyületét kapjuk, amelynek olvadáspontja 53-54 °C.
4. lépés: 4-(1,1 -Dimetil-etoxi-karbonil-amino)-1 -(fenil-metil-karbonil-ami- no)-piperazin-2(S)-karbonsav előállítása
A lépés címadó vegyületét a Bigge, C. F., Hays, S. J., Novak, Ρ. M., Drummond, J. T., Johnson, G. és Bobovski, T. P. által a Tetrahedron Lett. 30, 5193 (1989) szakirodalmi helyen ismertetett módszerrel, 2(S)-piperazin-karbonsavból kiindulva állítjuk elő. Az utóbbi vegyület előállítását Felder, E., Maffei, S., Pietra, S. és Pitre, D. ismertetik a Helv. Chim. Acta, 117, 888 (1960) szakirodalmi helyen.
5. lépés: N-(terc-Butil)-4-(l,l-dimetil-etoxi-karbonil-amino)-l-(fenil-me- til-karbonil-amino)-piperazin-2(S)-karboxamid előállítása
A 4. lépésben ismertetett módon előállított vegyületből 9,90 g (27,16 mmól) 75 ml DMF-dal készült, 0 °C-ra lehűtött oldatához hozzáadunk 5,73 g (29,88 mmól) EDC-t, 4,03 g (29,88 mmól) HOBt-t, 3,14 ml (29,88 mmól) terc-butil-amint és végül 4,16 ml (29,88 mmól) trietil-amint. Az így kapott reakcióelegyet 18 órán át keverjük, majd térfogatát közel felére csökkentjük. A koncentrátumot ezután 600 ml etil-acetáttal hígítjuk, majd a hígítást 75-75 ml 10 %-os sósavoldattal kétszer, 75 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal egyszer, 75-75 ml vízzel háromszor és végül 50 ml telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, magnézium-szulfát fölött szárítjuk és szárazra pároljuk. A kapott szilárd anyagot etil-acetát és hexán 1 : 2 térfogatarányú elegyével eldörzsöljük, majd kiszűrjük. így a lépés címadó vegyületét kapjuk 134-135 °C olvadáspontú, fehér színű, szilárd anyagként.
6. lépés: N-(terc-Butíl)-4-(l,l-dimetil-etoxi-karbonil-amino)-piperazin-
-2(S)-karboxamid előállítása
1,20 g (2,86 mmól) N-(terc-butil)-4-(l,l-dimetil-etoxi-karbonil-amino)-l-(fenil-metil-karbonil-amino)-piperazin-2(S)-karbonsav és 1,1 g (0,086 mmól) 10 tömeg% fémtartalmú, szénhordozós palládiumkatalizátor keverékéhez hozzáadunk 15 ml metanolt, majd a reakcióedényt hidrogéngázzal feltöltjük, és a reakcióelegyet 2 órán át keverjük. Ezután a reakcióelegyet Celite márkanevű szűrőanyag segítségével szűrjük, a kiszűrt anyagot etanollal mossuk, a szurletet a mosófolyadékkal elegyítjük, és az oldószereket vákuumban eltávolítjuk. így a lépés címadó vegyületét kapjuk habszerű anyagként.
'H-NMR spektrum (300 MHz, CDC13) δ: 6,65 (széles, 1H), 4,10 (m, 1H), 3,81 (széles, 1H), 3,21 (dd, J = 18 és 7 Hz, 1H), 3,02-2,70 (m, 4H), 2,10-2,0 (széles, 1H), 1,50 (s, 9H), 1,41 (s, 9H).
7. lépés: Dihidro-5(S)-[4-( 1,1 -dimetil-etoxi-karbonil-amino)l-2(S)-N-[(terc-butil-karboxamido)-piperazinil]-metil-3(R)-fenil-metil-3(2H)-furanon előállítása
22,40 g (0,0662 mól), a 3. lépésben ismertetett módon előállított dihidro-5(S)-[(trifluor-metán-szulfonil)-oxi-metíl]-3(R)-fenil-metil-3(2H)-furanon és 18,0 g (0,063 mól) N-(terc-butil)-4-(l,l-dimetil-etoxi-karbonil-amino)-piperazin-2(S)-karboxamid 180 ml izopropanollal készült oldatához hozzáadunk 11,53 ml (0,0662 mól) N,N-diizopropil-etil-amint. 2,5 óra elteltével további 1,2 g dihidro-5(S)-[(trifluor-metán-szulfonil)-oxi-metil]-3(R)-fenil-metil-3(2H)-furanont adagolunk. A reakció az elvégzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat (angolszász rövidítéssel: TLC) tanúsága szerint 3,5 óra elteltével teljes. Ekkor a reakcióelegyet bepároljuk, sűrű olajat kapva. Ezt etil-acetát és hexán 1 : 2 térfogatarányú elegyéből 200 ml-rel eldörzsölve fehér színű csapadékot kapunk, amelyet kiszűrünk és elhajítunk. Az olajat flash-kromatográfiás tisztításnak vetjük alá 120 · 150 mm méretű oszlopon, gradiens-eluálást végezve etil-acetát és hexán 1 : 1, 2 : 1 és 3 : 1 térfogatarányú elegyeivel, illetve tiszta etil-acetáttal. így a lépés címadó vegyületét kapjuk.
'H-NMR spektrum (400 MHz, CDC13) δ: 7,34 (-7,17 (m, 5H), 6,31 (széles s, 1H), 4,38 (széles m, 1H), 3,96-3,92 (m, 1H), 3,79 (széles m, 1H), 3,16 (dd, J = 13,6 és 4,4 Hz, 1H), 3,08-2,99 (m, 3H), 2,90-2,82 (m, 1H), 2,80 (dd, J = 13,5 és 8,9 Hz, 1H), 2,78 (m, 1H), 2,67-2,61 (m, 1H), 2,58-2,49 (m, 1H), 2,38-2,32 (m, 1H), 2,32-2,04 (m, 1H), 1,99-1,92 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,29 (s, 9H).
8. lépés: 2(R)-Fenil-metil-4(S)-(terc-butil-dimetil-szilil-oxi)-5-( 1-(4-(1,1-dimetil-etoxi-karbonil-amino)]!-2(S)-N-((terc-butil-karboxamido)-piperazinil1-pentán-amid előállítása
25,50 g (50,50 mmól) dihidro-5(S)-[4-(l,l-dimetil-etoxi-karbonil-amino)]-2(S)-N-[(terc-butil-karboxamido)-piperazinil]-metil-3(R)-fenil-metil-3(2H)-furanon 120 ml DME-vel készült, 0 °C-ra lehűtött oldatához hozzáadunk 60 ml vízből és 1,512 g (63,01 mmól) lítium-hidroxidból készült oldatot. 0,5 óra elteltével a reakcióelegyet 10 %-os sósavoldat pH = 6 értékig való hozzáadásával kvencseljük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot 50 ml vízben feloldjuk, majd a kapott oldatot 75-75 ml etil-acetáttal négyszer extraháljuk. Az egyesített extraktumot 20 ml vízzel, majd 20 ml telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk. A vizes fázist 75-75 ml etil-acetáttal kétszer visszaextraháljuk, majd az egyesített szerves fázist magnézium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. Az ekkor nyers termékként kapott sárga színű, szilárd anyagot 100 ml DMF-ban feloldjuk, majd a kapott oldathoz 17,87 g (0,262 mól) imidazolt adunk. Az így kapott elegyet ezután 0 °C-ra lehűtjük, majd 31,50 g (0,21 mól) terc-butil-dimetil-szilil-kloridot adunk hozzá. Ezután 0 °C-on 1 órán át keverést végzünk, majd a reakcióelegyet szobahőmérsékletre melegítjük. 20 órán át való állás után a reakcióelegyet 10 ml metanollal kvencseljük, majd térfogatának felére bepároljuk. Ezután 100 ml, 7 pH-értékre pufferolt vizet adagolunk, majd 100-100 ml etil-acetáttal négyszer extrahálást végzünk. Az egyesített extraktumot 50-50 ml 10 %-os sósavoldattal kétszer, 75-75 ml vízzel háromszor és végül 50 ml telített vizes nátrium-klorid-oldattal egyszer mossuk, magnézium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. Ekkor a lépés címadó vegyületét kapjuk, amelyet közvetlenül felhasználunk a következő lépésben.
9. lépés: N-(2(R)-Hidroxi-1 (S)-indanill-2(R)-fenil-metil-4(S)-(terc-butil-
-dimetil-szilil-oxi)-5-{ 1-(4-(1 ,l-dimetil-etoxi-karbonil-amino)ll-2(S)-N-((terc-butil-karboxamido)-piperazinil1-pentán-amid előállítása
27,0 g (0,0446 mól), a 8. lépésben kapott nyers vegyület 180 ml DMF-dal készült, 0 °C-ra lehűtött oldatához hozzáadunk 8,98 g (0,0468 mól) EDC-t, 6,32 g (0,0468 mól) HOBt-t és 7,31 g (0,049 mól) amino-hidroxi-indánt. Ezután még 6,52 ml (0,0468 mól) trietil-amint adagolunk, majd a reakcióelegyet 0 °C-on 2 órán át, ezt követően pedig szobahőmérsékleten 16 órán át keverjük. Ezután 500 ml etil-acetáttal végzett hígítás útján kvencselést végzünk. A szerves fázist 100-100 ml 10 %-os sósavoldattal kétszer, 100 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal egyszer, 150-150 ml vízzel háromszor és 75 ml telített vizes nátrium-klorid-oldattal egyszer mossuk, magnézium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. így a lépés címadó vegyületét kapjuk fehér színű habként.
’H-NMR spektrum (400 MHz, CDC13) δ: 7, 4 (-7,17 (m, 9H), 6,51 (széles s, 1H), 5,79 (széles s, 1H), 5,23 (m, 1H), 4,23 (széles s, 1H), 4,06 (m, 1H), 3,96-3,84 (m, 2H), 3,07-2,78 (m, 8H), 3,65 (dd, J = 9,6 és 4,1 Hz, 1H), 2,56-2,44 (m, 2H), 2,29 (dd, J = 12,0 és 4,5 Hz, 1H), 2,17-2,09 (m, 1H), 1,79 (széles s, 1H), 1,44 (s, 9H), 1,35 (s, 9H), 1,10 (s, 1H), 0,84 (s, 9H), 0,12 (s, 3H), 0,08 (s, 3H).
10. lépés: N-[2(R)-Hidroxi-l(S)-índanil]-2(R)-fenil-metil-4(S)-(hidroxi)-5-
- {1-(4-( 1,1 -dimetil-etoxi-karbonil-amino)]} -2(S)-N-((terc-butil-karboxamído)-piperazinill-pentán-amid előállítása
32,20 g (0,0437 mól) N-[2(R)-hidroxi-l(S)-índanil]-2(R)-fenil-metil-4(S)-(terc-butil-dimetil-szilil-oxi)-5-{ 1-(4-( 1,1 -dimetil-etoxi-karbonil-amino)] } -2(S)-N-[(terc-butil-karboxamido)-piperazinil]-pentán-amidhoz hozzáadunk 437 ml (0,437 mól), THF-nal készült 1,0 mólos tetrabutil-ammóni- um-fluorid-oldatot (az Aldrich cég szállítja), majd az így kapott reakcióelegyet 18 órán át keverjük és ezután térfogatát 200 ml-re betöményítjük. Ezt követően 700 ml etil-acetáttal hígítást végzünk, majd a hígított reakcióelegyet 100-100 ml vízzel kétszer és 50 ml telített vizes nátrium-klorid-oldattal egyszer mossuk. A vizes fázisokat 200-200 ml etil-acetáttal visszaextraháljuk, majd az egyesített szerves fázist magnézium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. A kapott olajat flash-kromatográfíás tisztításnak vetjük alá 120 · 150 mm méretű oszlopon, gradiens-eluálást végezve diklór-metán, kloroform és ammóniagázzal telített metanol elegyével, a metanol mennyiségét 1 %-ra, 1,5 %-ra, végül 2 %-ra növelve. így a lépés címadó vegyületét kapjuk fehér színű, habszeru anyagként.
’H-NMR spektrum (400 MHz, CDC13) 8: 7,31-7,11 (m, 9H), 6,41 (széles s, 1H), 6,23 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,25 (dd, J = 8,6 és 4,7 Hz, 1H), 4,21 (m, 1H), 3,83-3,82 (m, 2H), 3,78-3,61 (m, 2H), 3,22-3,19 (m, 2H), 3,03-2,78 (m, 8H), 2,62-2,58 (m, 1H), 2,41-2,35 (m, 2H), 2,04-2,02 (m, 1H), 1,57-1,50 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,32 (s, 9H).
11. lépés: N-[2(R)-Hidroxi-l(S)-indanil1-2(R)-fenil-metil-4(S)-(hidroxi)-5-{l-r2(S)-N-(terc-butil-karboxamido)-piperazinil]}-pentán-amid (14. vegyület) előállítása
21,15 g (0,034 mól) N-[2(R)-hidroxi-l(S)-indanil]-2(R)-fenil-metil-4(S)-(hidroxi)-5-{ 1 -[4-(l ,1-dimetil-etoxi-karbonil-amino)] }-2(S)-N-[(terc-butil-karboxamido)-piperazinil]-pentán-amid 350 ml metilén-kloriddal készült, 0 °C-ra lehűtött oldatához hozzáadunk 22,43 ml (0,204 mól) 2,6-lutidint és ezután 5 perc leforgása alatt 32,85 ml (0,170 mól) trimetil-szilil-triflátot. 0,5 óra elteltével a reakcióelegyet 80 ml 10 %-os sósavoldattal kvencseljük, majd 0,5 órán át keverjük. Ezután a reakcióelegyhez 100 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldatot, majd a pH értékének 8-ra való beállítá30 sához szükséges mennyiségű szilárd nátrium-hidrogén-karbonátot adagolunk. A vizes fázist ezután 100-100 ml etil-acetáttal négyszer extraháljuk, majd az egyesített szerves fázisokat 50 ml vízzel és ezután 75 ml telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, magnézium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. A maradékot oszlopkromatográfiás tisztításnak vetjük alá 120 · 150 mm méretű oszlopon, gradiens-eluálást végezve diklór-metán, ammóniagázzal telített kloroform és metanol elegyével, a metanol mennyiségét lassan 2 %-ra, 3 %-ra, 4 %-ra, 5 %-ra, 6 %-ra és végül 10 %-ra növelve. így a cím szerinti vegyületet kapjuk fehér színű, habszerű anyagként. ’h-NMR spektrum (400 MHz, CDC13) δ: 7,53 (s, 1H), 7,29-7,09 (m, 9H),
6,52 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,24 (dd, J = 8,2 és 4,9 Hz, 1H), 4,23 (dd, J = 4,7 és 4,03 Hz, 1H), 4,25-4,00 (széles s, 1H), 3,83-3,81 (m, 1H), 3,03-2,88 (m, 4H), 2,82-2,73 (m, 7H), 2,50-1,60 (széles s, 2H), 2,45 (d, J = 6,2 Hz, 2H), 2,32-2,29 (m, 1H), 1,98 (m, 1H), 1,51 (m, 1H), 1,33 (s, 9H).
2. példa
N-r2(R)-Hidroxi-1 (R)-indaniI]-2(R)-fenil-metii-4(R)-(hidroxi)-5- 11 - Γ4-(3-furo|2,3-b]piridil-nletil)-2(R)-N’-(terc-butil-karboxamido)-piperazinilll-pentán-amid előállítása
1. lépés: Furo[2.3-b]piridin-2.5-dikarbonsav Γ(Β) képletü vegyület] előállítása
1,22 g (4,923 mmól), Snyder, H. R. és Ebeetino, F. F. által a J. Hét. Chem., 3, 202-205 (1966) szakirodalmi helyen leírt dietil furo[2,3-b]piridin-2,5-dikarboxilát 10 ml 95 %-os etanollal készült oldatához hozzáadjuk 0,66 g (11,81 mmól) kálium-hidroxid 10 ml vízzel készült oldatát, majd az így kapott reakcióelegyet 80 °C-on tartjuk 3 órán át, ezután szobahőmérsékletre visszahűtjük és szűrjük. A bisz-káliumsót vízben oldjuk, majd a vizes oldat pH-értékét 10 %-os sósavoldattal 2-re beállítjuk. A kivált csapa31 dékot kiszűrjük, majd vákuumban szárítjuk. így 850 mg mennyiségben fehér színű, szilárd anyagként a lépés címadó vegyületét kapjuk.
1 H-NMR spektrum (400 MHz, (CD3)2SO) δ: 8,98 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,76 (d, J = 2,2 z, 1H), 7,69 (s, 1H), 4,25 (széles s, 3H).
2. lépés: Furo[2.3-b]piridin-5-karbonsav [(C) képletü vegyület] előállítása
Argongáz-atmoszférában 0,36 g (1,484 mmól) furo[2,3-b]piridin-2,5-dikarbonsav 3 ml kinolinnal készült szuszpenziójához hozzáadunk 180 mg (2,82 mmól) rézport, majd a keveréket 210 °C-on tartjuk 1,5 órán át. Ezt követően a reakcióelegyet szobahőmérsékletre visszahűtjük, majd 50 ml metilén-kloriddal hígítjuk és ezután Celite márkanevű szűrőanyagon átszűrjük. A szerves fázist 40-40 ml telített vizes nátrium-karbonát-oldattal kétszer extraháljuk, majd pH-értékét 3 N sósavoldattal 3-ra beállítjuk és szűrést végzünk. Ekkor 80 mg mennyiségben cserszínű, szilárd anyagot kapunk. A vizes fázist dietil-éter és metanol 85 : 15 térfogatarányú elegyéből 50-50 ml-rel háromszor extraháljuk, majd 10 ml telített vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, magnézium-szulfát fölött szárítjuk, szűrjük és bepároljuk. Ekkor további 35 mg terméket kapunk.
'H-NMR spektrum (400 MHz, CD3OD) δ: 8,89 (s, 1H), 8,67 (d, J = 2,0 Hz,
1H), 7,97 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 2,4 Hz, 1H).
3. lépés: Metil-furo(2,3-b]piridin-5-karboxilát [(D) képletü vegyület] elő- állítása
3,0 g (18,40 mmól) furo[2,3-b]piridin-5-karbonsav 40 ml metanollal készült oldatához hozzáadunk 160 ml kloroformot, majd lassan 42 ml, hexánnal készült 10 %-os trimetil-szilil-diazo-metán-oldatot. 0,5 óra elteltével 4 csepp jégecetet adagolunk, majd a reakcióelegyet bepároljuk. így 3,20 g mennyiségben a lépés címadó vegyületét kapjuk szürkésfehér, szilárd anyagként.
1H-NMR spektrum (400 MHz, CDC13) δ: 9,02 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,60 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H).
4. lépés: 5-(Hidroxi-metil)-fúro[2,3-b1piridin [(E) képletü vegyület] előállítása
Előzetesen lánggal szárított, 500 ml-es gömblombikba bemérjük
3,20 g (18,08 mmól) furo[2,3-b]piridin-5-karboxilát 90 ml tetrahidrofuránnal készült oldatát, majd az oldatot 0 °C-ra lehűtjük. Ezután beadagolunk 46 ml (46,1 mmól), hexánnal készült 1 mólos diizobutil-alumínium-hidrid-oldatot 10 perc leforgása alatt, majd a hűtő fürdőt eltávolítjuk. 4 óra elteltével a reakcióelegyet visszahűtjük 0 °C-ra, majd lassan 100 ml Rochelle-só-oldattal kvencseljük. További 18 óra elteltével a fázisokat szétválasztjuk, majd a vizes fázist 40-40 ml etil-acetáttal négyszer extraháljuk. Az egyesített szerves fázist 20 ml telített vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, magnézium-szulfát fölött szárítjuk, szűrjük és bepároljuk. A maradékot flash-oszlopkromatográfiás tisztításnak vetjük alá 40 · 150 mm méretű oszlopon, gradiens-eluálást végezve diklór-metán, ammóniagázzal telített diklór-metán és metanol 60 : 39 : 1 térfogatarányú elegyéből 1000 ml-rel, 60 : 38 : 2 térfogatarányú elegyéből 1000 ml-rel, 60 : 37 : 3 térfogatarányú elegyéből 1000 ml-rel és 60 : 36 : 4 térfogatarányú elegyéből 1000 ml-rel. így 2,16 g mennyiségben a lépés címadó vegyületét kapjuk fehér színű, szilárd anyagként.
'H-NMR spektrum (400 MHz, CDC13) δ: 8,19 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,64 (d, J - 2,5 Hz, 1H), 6,69 (d, J - 2,4 Hz, 1H), 4,78 (d, J = 3,8 Hz, 2H), 4,69 (széles s, 1H).
5. lépés: 3-(Klór-metil)-furo[2<3-b1piridin-hidroklorid [(F) képletü vegyü- letl előállítása
5-(Hidroxi-metil)-furo[2,3-b]piridin 9 ml diklór-metánnal készült, 0 °C hőmérsékletre lehűtött oldatához hozzáadunk 4,23 ml (57,99 mmól) tionil-kloridot, majd a jeges fürdőt eltávolítjuk és 1 óra elteltével a reakcióelegyet bepároljuk. így 2,86 g mennyiségben a lépés címadó vegyületét kapjuk szürkésfehér, szilárd anyag formájában.
'Η-NMR spektrum (400 MHz, CDC13) δ: 8,40 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 4,74 (s, 2H).
6. lépés: N-[2(R)-Hidroxi-l(S)-indanil]-2(R)-fenil-metil-4(S)-(hidroxi)-5-
- {1 - [4-(3-furo [2,3 -b]piridil-metil)-2(S)-N ’ -(terc-butil-karboxamido)-piperazinil]}-pentán-amid [(A) képletü vegyület] előállítása
6,50 g (12,48 mmól) N-[2(R)-hidroxi-l(S)-indanil]-2(R)-fenil-metil-4(S)-(hidroxi)-5-[2(S)-N’-(terc-butil-karboxamido)-piperazinil]-pentán-amid 12 ml dimetil-formamiddal készült oldatához argongáz-atmoszférában hozzáadunk 2,80 g (13,72 mmól) 3-(klór-metil)-föro[2,3-b]piridin-hidrokloridot és 5,21 ml (37,44 mmól) trietil-amint, majd 18 óra elteltével a reakcióelegyet 400 ml etil-acetáttal hígítjuk, ezt követően pedig 25 ml telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal egyszer, 20-20 ml vízzel ötször és végül 25 ml telített vizes nátrium-klorid-oldattal egyszer mossuk. Ezután a reakcióelegyet magnézium-szulfát fölött szárítjuk, szűrjük és olajjá bepároljuk. Az utóbbit flash-oszlopkromatográfiás tisztításnak vetjük alá 60 · 150 mm méretű oszlopon, gradiens-eluálást végezve diklór-metán, ammóniagázzal telített diklór-metán és metanol 60 : 39 : 1 térfogatarányú elegyéből 1000 ml-rel, 60 : 38 : 2 térfogatarányú elegyéből 1500 ml-rel, 60 : 37 : 3 térfogatarányú elegyéből 1000 ml-rel és végül 60 : 36 : 4 térfogatarányú elegyéből 1500 ml-rel. A kapott habszerű anyagot etil-acetátban eldörzsöljük, majd a kívánt terméket kiszűrjük és egy éjszakán át nagyvákuumban 65 °C hőmérsékleten szárítjuk. így 5,30 g mennyiségben fehér színű, kristályos, szilárd anyagot kapunk. Az oszlopkromatografálás során kapott vegyes frakciókat kombinálhatjuk, majd újra tisztíthatjuk, amikor további mennyiségű termék képződik. A célvegyület olvadáspontja 183,5-184,5 °C.
111-NMR spektrum (400 MHz, CDC13) δ: 8,25 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,85 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,73 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,32-7,10 (m, 9H), 6,75 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,95 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,27 (dd, J = 8,5 és 4,8 Hz, 1H), 4,27-4,26 (m, 1H), 4,12 (széles s, 1H), 3,16 (dd, J = 3,66 és 3,48 Hz, 1H), 3,15 (dd, J = 6,6 és 5,1 Hz, 1H), 2,94-2,50 (m, 11H), 2,36-2,34 (m, 1H), 1,66 (s, 1H), 1,62-1,47 (m, 1H), 1,35 (s, 9H).
Elemanalízis a C38H47N5O5 képlet alapján: számított: C % = 69,81, H % = 7,25, N % =10,71;
talált: C % = 69,46, H % = 7,22, N % = 10,69.
3. példa
Lényegében a 2. példában ismertetett módon eljárva, de az ott hasznosított N-[2(R)-hidroxi-l(S)-indanil]-2(R)-fenil-metil-4(S)-(hidroxi)-5-{l-[2(S)-N’-(terc-butil-karboxamido)-piperazinil]}-pentán-amidot [a DL reakcióvázlatban a (i) vegyület] valamely R*-X általános képletü alkilezőszerrel reagáltatva a 2. példa 6. lépésében említett alkilezőszer helyett a (iii) általános képletü reakciótermékeket kapjuk.
4. példa
Az 1 amid előállítása - IV. reakcióvázlat
Hőelem-próbával, mechanikai keverővei, nitrogéngáz bevezetésére szolgáló csonkkal és buborékoltatóval felszerelt, 50 1 térfogatú tömblombikban 884 g (5,93 mmól) (-)-cisz-l-amino-indán-2-ol 17,8 1 vízmentes
THF (KF = 55 mg/ml; KF jelentése vízre végzett Kari Fisher titrálás) és 868 ml (6,22 mól) trietil-amin elegyével készült oldatát 15 °C-ra lehűtjük, majd 75 perc leforgása alatt beadagolunk 1000 g (5,93 mól) 3-fenil-propionil-kloridot, miközben a belső hőmérsékletet 14 °C és 24 °C között tartjuk jeges-vizes hűtő fürdővel. Az adagolás befejezése után a reakcióelegyet 18-20 °C-on 30 percen át állni hagyjuk, majd HPLC-elemzéssel vizsgáljuk, hogy a (-)-cisz-l-amino-indán-2-ol eltűnt-e.
A reakció lefutása tehát nagy felbontóképességű folyadékkromatográfiás (HPLC) analízissel követhető, éspedig 25 cm-es Dupont C8-RX oszlopon, eluálószerként acetonitril és 10 mmólos KH2PO4/K2HPO4-oldat 60 : 40 térfogatarányú elegyét használva, az átfolyási sebességet 1,0 ml/perc értékre beállítva, a beinjektálási térfogatot 20 ml-re beállítva, a detektálást 200 nm-nél végezve, illetve a mintát 500-szorosan hígítva. A megközelítő retenciós idők a következők:
Retenciós idő (perc) Vegyület
6,3 cisz-amino-indanol
A reakcióelegyhez ezt követően 241 g (0,96 mól, 0,16 ekvivalens) piridinium-p-toluol-szulfonátot adunk, majd 10 percen át keverést végzünk (a reakcióelegy pH-értéke 4,3 és 4,6 közötti, miután 1 ml-es mintáját azonos térfogatú vízzel hígítottuk). Ezt követően 1,27 1 (13,24 mól, 2,2 ekvivalens)
2-metoxi-propént adagolunk, majd a reakcióelegyet 38-40 °C hőmérsékleten tartjuk 2 órán át. Ezután a reakcióelegyet 20 °C-ra visszahűtjük, majd megosztjuk 12 1 etil-acetát és 10 1, 5 %-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldat között. Ezután keverést végzünk, majd a fázisokat szétválasztjuk. Az etil-acetátos extraktumot 10 1, 5 %-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és 4 1 vízzel mossuk, majd atmoszférikus desztillálás útján szárítjuk. Ezután az oldószert ciklohexánra cseréljük (az össztérfogat közel 30 1). A desztillálás és koncentrálás végén (20 térfogat%-os etil-acetátos extrakciós térfogat) a forró ciklohexános oldatot lassan lehűlni hagyjuk 25 °C hőmérsékletre a termék kristályosítása céljából. Az így kapott szuszpenziót tovább hűtjük 10 °C-ra, majd 1 órán át állni hagyjuk. Ezután a terméket kiszűrjük, majd a nedves szűrőlepényt 800-800 ml, 10 °C hőmérsékletű ciklohexánnal kétszer mossuk. A mosott szűrőlepényt ezután vákuumban 26 mmHg nyomáson 40 °C-on szárítjuk, amikor 1,65 kg (86,4 %, a HPLC segítségével végzett tisztasági mérés 98 terület%-ot mutat) mennyiségben az 1 képletü acetonidot kapjuk.
’lI-NMR spektrum (300,13 MHz, CDC13, a nagyobb rotamer) δ: 7,36-7,14 (m, 9H), 5,03 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,66 (m, 1H), 3,15 (m, 2H).
13C-NMR spektrum (75,5 MHz, CDC13, a nagyobb rotamer) 8C: 168,8, 140,9, 140,8, 140,6, 128,6, 128,5, 128,4, 127,1, 126,3, 125,8, 124,1, 96,5, 78,6, 65,9, 38,4, 36,2, 31,9, 26,5, 24,1.
Elemanalízis a C21H23NO2 képlet alapján:
számított: C % = 78,47, H % = 7,21, N % = 4,36; talált: C % = 78,65, H % = 7,24, N % = 4,40.
5. példa
A 3 epoxid előállítása - V. reakcióvázlat
Termoelemmel, mechanikai keverővei, adagolótölcsérrel és nitrogéngáz bevezetésére szolgáló csonkkal ellátott, 50 1-es, négynyakú gömblombikban 1000 g (3,11 mól) 1 képletü acetonidot és 853 g (3,74 mól, 1,2 ekvivalens) 2 képletü 2(S)-glicidil-tozilát 15,6 1 THF-nal (KF = 22 mg/ml) készült oldatát háromszor gázmentesítjük vákuum alatt, nitrogéngáz átáramoltatása útján, majd -56 °C-ra lehűtjük. Ezután 2 óra leforgása alatt beadagolunk 2,6 1 (1,38 mól, 1,15 ekvivalens) lítium-hexametil-diszilazidot (LiN[(CH3)3Si]2), az adagolás során a belső hőmérsékletet -50 °C és -45 °C között tartva. Az adagolás befejezését követően a reakcióelegyet -45 °C és -40 °C közötti hőmérsékleten 1 órán át keverjük, majd 1 óra leforgása alatt -25 °C hőmérsékletre melegedni hagyjuk. Ezután a reakcióelegyet -25 °C és -22 °C közötti hőmérsékleten 4 órán át (vagy addig, míg a kiindulási acetonid mennyisége 3,0 felület%) keverjük.
A reakció lefutását HPLC segítségével követjük 25 cm · 4,6 nm méretű Zorbax Silica oszlopot használva, illetve eluálószerként 20 térfogat% etil-acetátot tartalmazó hexánt használva, 2,0 ml/perc átfolyási sebességgel, a beinjektálási térfogatot 20 ml-re beállítva, a detektálást 254 nm-nél végezve, illetve a minta készítése során 100-szoros hígítást alkalmazva. A közelítő retenciós idők a következők:
Retenciós idő (perc) Vegyület
5,5 1 képletü amid
6,5 2 képletü glicidil-tozilát
13,5 3 képletü epoxid
A reakcióelegyet -15 °C-on 6,7 1 Dl-vízzel kvencseljük, majd 10 1 etil-acetáttal megosztjuk. A reakcióelegyet keverjük, majd a fázisokat elválasztjuk. Az etil-acetátos fázist 5 1, 1 %-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldat és 0,5 1 telített vizes nátrium-klorid-oldat elegyével mossuk, majd a 28,3 1 térfogatú etil-acetátos fázist 28 Hgmm nyomáson vákuumdesztillálásnak vetjük alá. Ezután járulékos mennyiségű etil-acetátot adunk ahhoz, hogy az oldószert teljesen etil-acetátra változtassuk (össztérfogat = 11,7 1). Az etil-acetátos koncentrátumban ezután az oldószert metanolra cseréljük a termék kristályosítása céljából, majd 3,2 1 végtérfogatra betöményítjük. A visszamaradt etil-acetátot eltávolítjuk 10 1 metanol adagolása, illetve 10 1 desztillátum gyűjtése útján. A kapott szuszpenziót 22 °C-on 1 órán át keverjük, majd 5 °C-ra lehűtjük és 0,5 órán át állni hagyjuk. A terméket szű38 réssel különítjük el, majd a nedves szűrőlepényt 250-250 ml hideg metanollal mossuk. A mosott szűrőlepényt vákuumban 26 Hgmm nyomáson és 25 °C hőmérsékleten szárítjuk, amikor 727 g mennyiségben a 3 képletü epoxidot (61,2 %, HPLC segítségével mérve a nagyobb epoxidból 98,7 feIület%) kapjuk.
13C-NMR spektrum (300 MHz, CDC13) δ: 171,1, 140,6, 140,5, 139,6,
129,6, 128,8, 128,2, 127,2, 126,8, 125,6, 124,1, 96,8, 79,2, 65,8, 50,0, 48,0, 44,8, 39,2, 37,4, 36,2, 26,6, 24,1.
6. példa
A 6 képletü vegyület előállítása - VI. reakcióvázlat
Mechanikai keverővei, visszafolyató hűtővel, vízfürdővel, teflonbevonatú termoelemmel és nitrogéngáz bevezetésére szolgáló csonkkal ellátott 72 1-es gömblombikban 1950 g (6,83 mól, 99,5 %-nál nagyobb enantiomer fölösleg) 4 képletü 2(S)-(terc-butil-karboxamido)-4-N-Boc-piperazin és 2456 g 3 képletü epoxid (6,51 mól, 4(S) és 4(R) epoxidok 97,5 : 2,5 tömegarányú keveréke) 18,6 1 2-propanollal készült szuszpenzióját visszafolyató hűtő alkalmazásával 84-85 °C belső hőmérsékletre felmelegítjük. 40 perc elteltével homogén oldatot kapunk. Ezután ezt a homogén oldatot visszafolyató hűtő alkalmazásával 28 órán át forraljuk.
A visszafolyató hűtő alkalmazásával végzett forralás során a belső hőmérséklet 84-85 °C. A reakció lefutását HPLC segítségével követjük, 25 cm-es Dupont C8-RX oszlopot, eluálószerként acetonitril és 10 mmólos KH2PO4/K2HPO4 oldat 60 : 40 térfogatarányú elegyét használva 1,0 ml/perc átfolyási sebességgel, a detektálást 220 nm-nél végezve, a reakcióelegyből 2 μΙ-es mintát acetonitrillel 1 ml-re hígítva. A megközelítő retenciós idők a következők:
Retenciós idő (perc) Vegyület
4,8 4 képletü piperazin
8,9 3 képletü epoxid
15,2 5 képletü kapcsolt tennék
óra elteltével a visszamaradt 3 epoxid és 5 kapcsolt termék menynyisége HPLC elemzéssel 1,5 felület%, illetve 91-93 felület%. A reakcióelegyet 0-5 °C-ra lehűtjük, majd 20,9 1 6 N sósavoldatot adunk hozzá, miközben hőmérsékletét 15 °C alatt tartjuk. Az adagolás befejezése után a reakcióelegyet 22 °C-ra felmelegítjük. Ekkor gázfejlődés, éspedig izobutilén fejlődése észlelhető. A reakcióelegyet 20-22 °C-on 6 órán át állni hagyjuk.
A reakció lefutását HPLC segítségével, az előzőekben ismertetett körülmények között végezzük. A megközelítő retenciós idők a következők:
Retenciós idő (perc) Vegyület
7,0 cisz-amino-indol
11,9 6 képletü vegyület
15,1 5 képletü kapcsolt termék
A reakcióelegyet 0 °C-ra lehűtjük, majd lassan hozzáadunk 7,5 1 50 %-os vizes nátrium-hidroxid-oldatot a pH értékének 11,6-re való beállítása céljából. Az adagolás során a hőmérsékletet 25 °C alatt tartjuk. Ezután a reakcióelegyet megosztjuk 40 1 etil-acetát és 3 1 víz között, majd keverést végzünk és a fázisokat szétválasztjuk. A 60 1 térfogatú szerves fázist 29 Hgmm nyomáson koncentráljuk, majd az oldószert DMF-ra cseréljük. Ezután 10,5 1 végtérfogatra bepárlást végzünk (KF = 1,8 mg/ml). HPLC elemzés szerint a 6 képletü vegyület hozama etil-acetátban 86,5 %. A 6 képletü vegyület DMF-dal készült oldatát közvetlenül felhasználjuk a következő lépésben további tisztítás nélkül. Az izolált 6 képletü vegyület vonatkozásában a következő azonosító adatot adjuk meg:
13C-NMR spektrum (75,4 MHz, CDC13) δ: 175,2, 170,5, 140,8, 140,5, 139,9, 129,1, 128,5, 127,9, 126,8, 126,5, 125,2, 124,2, 73,0, 66,0, 64,8, 62,2, 57,5, 49,5, 47,9, 46,4, 45,3, 39,6, 39,3, 38,2, 28,9.
7. példa képletú pirazin-2-(terc-butíl)-karboxamid előállítása - VII. reakcióvázlat
Az előállítás során a következő anyagokat hasznosítjuk:
8 képletü 2-pirazin-karbonsav oxalil-klorid 3,35 kg (27 mól) 3,46 kg (27,2 mól)
terc-butil-amin (KF = 460 pg/ml) etil-acetát (KF = 56 gg/ml) DMF 9,36 1 (89 mól) 271 120 ml
1-propanol 301
Mechanikai keverővei felszerelt 72 1 térfogatú, háromnyakú lombikban nitrogéngáz atmoszféra alatt 27 1 etil-acetát és 120 ml DMF elegyében szuszpendáljuk a 8 képletú karbonsavat, majd a szuszpenziót 2 °C-ra lehűtjük. Ezután beadagoljuk az oxalil-kloridot, az adagolás során a hőmérsékletet 5 °C és 8 °C között tartva.
A beadagolást 5 óra alatt hajtjuk végre. Az adagolás során exoterm reakció megy végbe, ennek során szén-monoxid és szén-dioxid fejlődik. A képződött hidrogén-klorid nagyrészt oldatban marad. Csapadék képződik, amely feltételezhetően a karbonsavból képződött savklorid hidrokloridsója. A savklorid képződését úgy ellenőrizzük, hogy a reakcióelegyből vett víz41 mentes mintát terc-butil-aminnal kvencseljiik. A reakció befejeződése után a 8 képletü savból 0,7 %-nál kisebb mennyiség marad vissza.
A savklorid képződésének befejeződésével kapcsolatos vizsgálat fontos, mert a nem teljes reakció bisz-terc-butil-oxamid szennyeződéshez vezet.
A reakciót HPLC segítségével követjük, e célra 25 cm-es Dupont Zorbax RXC8 oszlopot használva 1 ml/perc átfolyási sebesség mellett, a detektálást 250 nm-nél végezve, továbbá lineáris gradienst alkalmazva 98 térfogat%-ban vett, 0,1 %-os vizes foszforsav-oldat és 2 térfogat% mennyiségben vett acetonitril mint egyik szélső összetétel, illetve 50 térfogat% vizes foszforsav-oldat és 50 térfogat% acetonitril mint másik szélső összetétel között, az eluálást 30 perc alatt hajtva végre. A retenciós idők a következők: 8 képletü sav = 10,7 perc, 9 képletü amid = 28,1 perc.
A reakcióelegyet 5 °C-on 1 órán át állni hagyjuk, majd a képződött szuszpenziót 0 °C-ra lehűtjük és ezután olyan sebességgel adunk hozzá terc-butil-amint, hogy a belső hőmérséklet 20 °C alatt maradjon.
Az adagoláshoz 6 órára van szükség, minthogy a reakció rendkívül exoterm. A képződött terc-butil-ammónium-hidroklorid kis mennyisége kiválik a reakcióból pelyhes, fehér csapadékként.
A reakcióelegyet 18 °C-on további 30 percen át állni hagyjuk, majd a képződött ammóniumsókat szűréssel eltávolítjuk. A szűrőlepényt 12 1 etil-acetáttal mossuk, majd az egyesített szerves fázisokat 6 1, 3 %-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal egyszer, majd 2-2 1 telített vizes nátrium-klorid-oldattal kétszer mossuk. A szerves fázist ezután 200 g Darco G60 márkanevű aktív szénnel kezeljük, majd Solka Fiók márkanevű szűrőanyagok átszűrjük, végül a szűrőlepényt 4 1 etil-acetáttal mossuk.
Az aktív szénnel végzett kezelés hatékonyan eltávolítja a termékből a meglévő bíbor színt.
A 9 képletü amid etil-acetáttal készült oldatát 10 mbar nyomáson az eredeti térfogatának 25 %-ára betöményítjük, majd 30 1 1-propánok adunk hozzá. Ezután a desztillálást addig folytatjuk, míg 20 1 végtérfogatot érünk el.
Ennél a pontnál az etil-acetát mennyisége az ’H-NMR-vizsgálattal végzett mérés határán alul van, azaz 1 %-nál kevesebb. Ennél az oldószercserénél a belső hőmérséklet 30 °C-nál kisebb volt. A 9 képletú vegyület 1-propanol és etil-acetát elegyével készült oldata stabil marad visszafolyató hűtő alkalmazásával atmoszférikus nyomáson, több napon át végzett forralás után is.
Egy aliquot bepárlásakor 87-88 °C olvadáspontú, cserszínű, szilárd anyagot kapunk.
13C-NMR spektrum (75 MHz, CDC13, ppm) 8: 161,8, 146,8, 145,0, 143,8,
142,1, 51,0, 28,5.
8. példa képletü racém píperazin-2-(terc-butíl)-karboxamid előállítása
- VUI. reakcióvázlat
Kiindulási anyagként 2,4 kg (13,4 mól) 9 képletü pirazin-2-(terc-butil)-karboxamidot használunk 12 1 1-propanollal készült oldata formájában, továbbá 144 g, 20 tömeg% fémet és 16 tömeg% vizet tartalmazó szénhordozós palládium(II)-hidroxid-katalizátort.
A pirazin-2-(terc-butil)-karboxamid 1-propanollal készült oldatát bemérjük 5 gallon térfogatú autoklávba, majd beadagoljuk a katalizátort, és a reakcióelegyet 65 °C-on 3 atm hidrogéngáz-nyomáson hidrogénezzük.
óra elteltével a reakcióelegy a számított mennyiségű hidrogéngázt felvette, és a gázkromatográfiás elemzés azt mutatja, hogy a 9 képletú vegyület mennyisége 1 %-nál kevesebb. A reakcióelegyet lehűtjük, nitrogén43 gázzal átalakítjuk és a katalizátort Solka Floc márkanevű szűrőanyag segítségével kiszűrjük. A katalizátort ezután 2 1 meleg 1-propanollal mossuk.
Megállapítottuk, hogy a meleg 1-propanol alkalmazása a szűrőlepény mosására javítja a szűrési hatásfokot, illetve csökkenti a termék veszteségét.
A reakciót gázkromatográfiásán követjük, e célra 30 m-es Megabore oszlopot használva, 100 °C és 160 °C között 10 °C/perc sebességgel emelve a hőmérsékletet, ezt 5 percen át tartva, majd 10 °C/perc sebességgel a hőmérsékletet 250 °C-ra emelve. Retenciós idők: 9 képletü vegyület = 7,0 perc, 10 képletü vegyület = 9,4 perc. A reakció követhető vékonyrétegkromatográfíásan is, futtatószerként etil-acetát és metanol 50 : 50 térfogatarányú elegyét, illetve előhívószerként ninhidrint használva.
Egy aliquot bepárlásakor megállapítható, hogy az amidálás és hidrogénezés összhozama 88 %, illetve a 10 képletü vegyület koncentrációja 133 g/1. Egy aliquot bepárlásakor a 10 képletü vegyületet kapjuk 150-151 °C olvadáspontú, fehér színű, szilárd anyagként.
13C-NMR spektrum (75 MHz, D2O, ppm): 173,5, 59,8, 52,0, 48,7, 45,0,
44,8, 28,7.
9. példa képletü (S)-2-(terc-butil)-karboxamid-piperazin-bisz(S)-kámfor-szulfonsav-só előállítása - IX. reakcióvázlat
A példa szerinti reagáltatásban a következő anyagokat használjuk:
képletü racém piperazin-2-(terc-butil)-karboxamid
1-propanolos oldatban (S)-(+)-10-kámfor-szulfonsav
1-propanol acetonitril víz
4,10 kg (22,12 mól)
25,5 kg oldószerben
10,0 kg (43,2 mól)
121
391
2,41
A 10 képletű amin 1-propanollal készült oldatát bemérjük 100 1-es reakcióedénybe, amelyhez koncentráló egység kapcsolódik. Az oldat bepárlását 10 mbar nyomáson 25 °C-nál kisebb hőmérsékleten végezzük körülbelül 12 1-re.
Ennél a pontnál a tennék kicsapódik az oldatból, de visszamegy oldatba, ha a reakcióelegyet 50 °C-ra melegítjük.
Egy homogén aliquot elemzése azt mutatja, hogy a 10 képletű vegyület koncentrációja 341 g/1. A koncentrációt HPLC segítségével határozzuk meg, éspedig 25 cm-es Dupont Zorbax RXC8 oszlopot használunk 1,5 ml/perc átfolyási sebességgel és 210 nm-nél detektálva, izokratikus eluálást végezve 98 térfogat% acetonitril és 2 térfogat%, 1 %-os, vizes foszforsav-oldat elegyével. A 10 képletű vegyület retenciós ideje 2,5 perc.
1 acetonitril és 2,4 1 víz adagolásakor tiszta, enyhén barnás színű oldatot kapunk.
A víztartalom KF-titrálással végzett meghatározása, illetve az acetonitril/1-propanol arány 'H-NMR-integrálással való meghatározása azt mutatja, hogy az acetonitril/1-propanol/víz arány 26 : 8 : 1,6. Az oldat koncentrációja 72,2 g/1.
Az (S)-lO-kámfor-szulfonsavat 30 perc leforgása alatt 4 adagban 20 °C-on adjuk be. A beadagolás befejezése után a reakcióelegy hőmérséklete 40 °C. Néhány perc elteltével sűrű, fehér csapadék képződik. A fehér csapadékot tartalmazó szuszpenziót 76 °C-ra felmelegítjük az összes szilárd anyag feloldása céljából, majd az enyhén barnás színű oldatot 8 óra leforgása alatt 21 °C-ra lehűlni hagyjuk.
A tennék 62 °C-on csapódik ki. A terméket 21 °C-on való állás nélkül kiszűrjük, majd a szűrőlepényt 5 1 olyan oldószereleggyel mossuk, amelyben az acetonitril, 1-propanol és víz térfogataránya 26 : 8 : 1,6. Ezután a szűrőlepényt 35 °C-on vákuuinkemencében, nitrogéngáz átáramoltatása mellett szárítjuk, amikor 5,6 kg (39 %) mennyiségben a 11 képletü vegyületet kapjuk 288-290 °C olvadáspontú (bomlik), fehér színű, kristályos, szilárd anyagként.
[a]D 25 = 18,9° (c = 0,37, H2O).
13C-NMR spektrum (75 MHz, D2O, ppm): 222,0, 164,0, 59,3, 54,9, 53,3, 49,0, 48,1,43,6, 43,5, 40,6, 40,4, 28,5, 27,2, 25,4, 19,9, 19,8.
A kapott termék enantiomer-tisztasága 95 %, a következőkben ismertetett módon végrehajtott királis, nagy felbontóképességű folyadékkromatográfiás vizsgálat szerint: all vegyületből tehát egy 33 mg tömegű aliquotot 4 ml etanol és 1 ml trietil-amin elegyében szuszpendálunk, majd a szuszpenzióhoz 11 mg Boc2O-t adunk. Az így kapott reakcióelegyet 1 órán át állni hagyjuk, majd az oldószert vákuumban teljesen eltávolítjuk. A maradékot feloldjuk közel 1 ml etil-acetátban, majd átszűrjük szilícium-dioxiddal töltött Pasteur-pipettában, eluálószerként etil-acetátot használva. A terméket tartalmazó frakciókat bepároljuk, majd a kapott szilárd anyagot hexánban újra oldjuk körülbelül 1 mg/ml koncentrációban. Az enantiomereket ezután Daicel Chiracell AS oszlopon szeparáljuk, 1 ml/perc átfolyási sebesség mellett 97 : 3 térfogatarányú hexán/izopropil-amin elegyet használva eluálószerként, illetve a detektálást 228 nm-nél végezve. A retenciós idők a következők: S-antipód = 7,4 perc, R-antipód = 9,7 perc.
10. példa
All képletü vegyület sójából a 4 képletü (S)-2-(terc-butil-karboxamido)-4-(terc-butoxi-karbonil)-piperazin előállítása - X. reakcióvázlat
A reagáltatás során a következő kiindulási anyagokat használjuk:
képletü vegyület bisz(S)-(+)-CSA- 5,54 kg (8,53 mól) -sója (95 %-os enantiomer-tisztaságú) di-terc-butil-dikarbonát 1,86 kg (8,53 mól) trietil-amin
5,95 1 (42,6 mól) etanol („Punctilious 200 proof) 55 1 minőségű etil-acetát 21
Adagolótölcsérrel felszerelt, 100 1 térfogatú, háromnyakú lombikban nitrogéngáz-atmoszférában a 11 képletü vegyület (S)-CSA-sójához hozzáadjuk az etanolt, majd a trietil-amint, 25 °C-on. A szilárd anyag készségesen oldódik a trietil-amin adagolásakor. Ezután a di-terc-butil-dikarbonátot feloldjuk etil-acetátban, majd az adagolótölcsérbe töltjük. Ezt követően ezt az oldatot olyan sebességgel adagoljuk a reakcióedénybe, hogy a reakcióedényben a hőmérséklet 25 °C alatt maradjon. Az adagolás 3 órát vesz igénybe. Az adagolás befejezése után a reakcióelegyet 1 órán át állni hagyjuk.
A reakciót nagy felbontóképességű folyadékkromatográfiás vizsgálattal követjük, e célra 25 cm-es Dupont Zorbax RXC8 oszlopot használva 1 ml/perc átfolyási sebesség mellett és 228 nm-nél detektálva, mimellett az eluálószer izokratikus acetonitril/0,1 mólos kálium-dihidrogén-foszfát-oldat 50 : 50 térfogat% arányban, az eluálószer pH-értéke nátrium-hidroxiddal 6,8-re van beállítva. A 4 képletü vegyület retenciós ideje 7,2 perc. A királis vizsgálatot a 9. példában ismertetett módon hajtjuk végre. A reakció következő vékonyrétegkromatográfíásan is, futtatószerként 100 %-ban etil-acetátot használva. A 4 képletü vegyület Rrértéke 0,7.
Az oldatot ezután közel 10 1-re koncentráljuk 20 °C-nál alacsonyabb belső hőmérséklet mellett „batch” típusú koncentráló berendezésben 10 mbar vákuumnyomás alatt. Az oldószer cseréjét úgy tesszük teljessé, hogy lassan beadagolunk 20 1 etil-acetátot, majd közel 10 1 térfogatra újra betöményítjük a rendszert. Ezután a reakcióelegyet átmossuk egy extraktorba 60 1 etil-acetáttal. A szerves fázist 16 1, 5 %-os, vizes nátrium-karbonát-oldattal egyszer, 10-10 1 „Di”-vízzel kétszer és 6-6 1 telített vizes nátrium-klorid-oldattal ugyancsak kétszer mossuk. Az egyesített vizes mosófolyadékokat 20 1 etil-acetáttal visszaextraháljuk, majd az egyesített fázist 3-3 1 vízzel kétszer, ezután 4-4 1 telített vizes nátrium-klorid-oldattal kétszer mossuk. Ezt követően az egyesített etil-acetátos fázist 10 mbar vákuumnyomáson koncentráljuk úgy, hogy a belső hőmérséklet 20 °C alatt maradjon. E célra 100 1-es „batch” típusú koncentráló berendezést használunk. Az így kapott, közel 8 1 folyadékhoz ezután lassan közel 20 1 ciklohexánt adunk, majd újból 8 1-re betöményítünk. Az így kapott szuszpenzióhoz 5 1 ciklohexánt és 280 ml etil-acetátot adunk, majd a kapott elegyet visszafolyató hűtő alkalmazásával felforraljuk, amikor a szilárd teljes mennyisége oldatba megy. Ezután az oldatot lehűtjük, majd 58 °C-on 10 g ojtókristályt adunk hozzá. A képződött szuszpenziót 22 °C-ra lehűtjük 4 óra leforgása alatt, majd a terméket szűréssel elkülönítjük azt követően, hogy a reakcióelegyet 22 °C-on 1 órán át állni hagytuk. A szűrőlepényt ezután 1,8 1 ciklohexánnal mossuk, majd vákuumkemencében 35 °C-on nitrogéngáz-atmoszférában szárítjuk. így 1,87 kg (77 %, HPLC segítségével mérve 99,9 felület%-nál nagyobb, R-izomer mennyisége a detektálási küszöb alatt) mennyiségben a 4 képletü célvegyületet kapjuk enyhén cserszínű por formájában.
[a]D 25 = 22,0° (c = 0,20, metanol).
Olvadáspont: 107 °C.
13C-NMR spektrum (75 MHz, CDC13, ppm): 170,1, 154,5, 79,8, 58,7, 50,6,
46,6, 43,6, 43,4, 28,6, 283.

Claims (11)

1. (I) általános képletü vegyületek és gyógyászatilag elfogadható sóik
- az (I) általános képletben a (II) általános képletü csoport olyan stabil, 8-, 9- vagy 10-tagú biciklusos, heterociklusos csoport, amelynek bármelyik gyűrűje telített vagy telítetlen lehet, továbbá a heterociklus szénatomokból és 1-3, nitrogénatomok, kénatomok és/vagy oxigénatomok közül megválasztott heteroatom(ok)ból áll, továbbá adott esetben szubsztituálva lehet halogénatommal vagy hidroxil-, 1-4 szénatomot tartalmazó alkil- vagy oxocsoporttal, azzal a megkötéssel, hogy a (III) általános képletü csoport jelentése (IV), (V) vagy (VI) képletü csoporttól eltérő.
2. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletü vegyületek és gyógyászatilag elfogadható sóik, azzal jellemezve, hogy a (II) általános képletü csoport stabil 8-, 9- vagy 10-tagú biciklusos, heterociklusos csoport, amelynek bármelyik gyűrűje telített vagy telítetlen lehet, továbbá a heterociklus szénatomokból és 2, nitrogén- és/vagy oxigénatomok közül megválasztott hetaroatomból áll, és a heteroatomok különböző gyűrűkben vannak.
3. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletü vegyületek és gyógyászatilag elfogadható sóik, azzal jellemezve, hogy a (II) általános képletü csoport jelentése (VII) vagy (VIII) általános képletü csoport, és az utóbbi két általános képletben X jelentése oxigén- vagy kénatom.
4. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletü vegyületek és gyógyászatilag elfogadható sóik, azzal jellemezve, hogy a (Π) általános képletü csoport jelentése (IX) általános képletü csoport.
5. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletü vegyületek közül az (A) képletü N-[2(R)-hidroxi-1 (S)-indanil]-2(R)-fenil-metil-4(S)-hidroxi-5- {1 - [4 - ( 3 -furo [2,3-b] -piridil-metil)-2(S)-N ’ -(terc-butil-karboxamido)-piperazinil]} -pentán-amid vagy gyógyászatilag elfogadható sói.
6. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletü vegyületek közül a (G) képletü vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható sói.
7. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletü vegyületek közül a (H) képletü vegyület vagy gyógyászatilag elfogadható sói.
8. Gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti vegyületet vagy gyógyászatilag elfogadható sóját tartalmazza a gyógyszergyártásban használt hordozó- és/vagy egyéb segédanyagokkal együtt.
9. A 8. igénypont szerinti gyógyászati készítmény AIDS kezelésére, HÍV által okozott fertőzés megelőzésére, HÍV által okozott fertőzés kezelésére vagy HIV-proteáz gátlására.
10. Az 1-7. igénypont szerinti vegyületek bármelyikének alkalmazása olyan gyógyászati készítmények előállítására, amelyek AIDS kezelésére, HÍV okozta fertőzés megelőzésére, HÍV okozta fertőzés kezelésére vagy HIV-proteáz gátlására alkalmasak.
83894-2037 MR/kov
11. Az 5. igénypont szerinti vegyület kombinációja a B vegyület, a C vegyület és Nevirapine közül megválasztott nem-nukleozid analóg HÍV reverz transzkriptáz inhibitorral, és adott esetben AZT, ddl vagy ddC közül bármelyikkel, vagy az 5. igénypont szerinti vegyületek bármelyikének kombinációja AZT, ddl vagy ddC közül bármelyikkel.
HU9601649A 1993-12-15 1994-12-12 N-(2-hydroxy-1-indenyl)-2-phenylmethyl-4-hydroxy-5-(2-carboxamido-piperazinyl)-pentaneamide derivatives of hiv protease inhibitor activity and phrmaceutical compositions contining them HUT74681A (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US16801393A 1993-12-15 1993-12-15
US17047593A 1993-12-20 1993-12-20

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HU9601649D0 HU9601649D0 (en) 1996-08-28
HUT74681A true HUT74681A (en) 1997-01-28

Family

ID=26863718

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9601649A HUT74681A (en) 1993-12-15 1994-12-12 N-(2-hydroxy-1-indenyl)-2-phenylmethyl-4-hydroxy-5-(2-carboxamido-piperazinyl)-pentaneamide derivatives of hiv protease inhibitor activity and phrmaceutical compositions contining them

Country Status (19)

Country Link
US (2) US5646148A (hu)
EP (1) EP0734387B1 (hu)
JP (1) JP3000564B2 (hu)
KR (1) KR100234863B1 (hu)
CN (1) CN1046727C (hu)
AT (1) ATE215952T1 (hu)
AU (1) AU692509B2 (hu)
BG (1) BG62093B1 (hu)
BR (1) BR9408305A (hu)
CA (1) CA2178760C (hu)
CZ (1) CZ288312B6 (hu)
DE (1) DE69430385T2 (hu)
ES (1) ES2174921T3 (hu)
FI (1) FI962488A (hu)
HU (1) HUT74681A (hu)
NZ (1) NZ278201A (hu)
PL (1) PL314984A1 (hu)
SK (1) SK75796A3 (hu)
WO (1) WO1995016688A1 (hu)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE299707T1 (de) 1995-11-13 2005-08-15 Vitaleech Bioscience N V Antivirale isolate von blutegeln
MY126358A (en) * 1996-03-22 2006-09-29 Glaxo Group Ltd Compositions comprising vx478 and a water soluble tocopherol derivative such as vitamin e-tpgs
TW438799B (en) * 1997-05-29 2001-06-07 Merck & Co Inc HIV protease inhibitor
CO4940492A1 (es) * 1997-05-29 2000-07-24 Merck & Co Inc Inhibidor de proteasa de vih
CO4970782A1 (es) * 1997-11-13 2000-11-07 Merck & Co Inc Terapia combinada para el tratamiento del sida
US6180634B1 (en) 1997-11-13 2001-01-30 Merck & Co., Inc. Combination therapy for the treatment of AIDS
US6251906B1 (en) 1998-05-15 2001-06-26 Abbott Laboratories Retroviral protease inhibiting compounds
FR2780649B1 (fr) 1998-07-06 2001-03-09 Univ Paris Vii Denis Diderot Derives de la piperazine pour l'inhibition de la replication du virus de l'immunodeficience humaine
GB2341385A (en) 1998-09-14 2000-03-15 Merck & Co Inc Recovery of iodide from chemical process waste water
US6440946B1 (en) * 1999-02-25 2002-08-27 Takeda Chemical Industries, Ltd. Multiple-agents-binding compound, production and use thereof
US6589962B1 (en) 1999-07-20 2003-07-08 Merck & Co., Inc. Alpha-hydroxy-gamma-[[(carbocyclic-or heterocyclic-substituted)amino]carbonyl]alkanamide derivatives and uses thereof
US6642237B1 (en) 1999-11-24 2003-11-04 Merck & Co., Inc. Gamma-hydroxy-2-(fluoroalkylaminocarbonyl)-1-piperazinepentanamides and uses thereof
US6482952B2 (en) 2000-06-20 2002-11-19 Merck & Co., Inc. Process for preparing acetonides
US7049146B2 (en) 2000-11-14 2006-05-23 Facet Analytical Services And Technology, Llc Calibration standards, methods, and kits for water determination
US7122376B2 (en) * 2001-11-01 2006-10-17 Facet Analytical Services And Technology, Llc Calibration standards, methods, and kits for water determination
US20040131504A1 (en) * 2002-09-17 2004-07-08 Landers James P. Remote temperature sensing of small volume and related apparatus thereof
GB0720503D0 (en) * 2007-10-22 2007-11-28 Angeletti P Ist Richerche Bio New compound
US20130115237A1 (en) 2010-06-09 2013-05-09 Vaccine Technologies, Incorporated Therapeutic immunization in hiv infected subjects to augment antiretroviral treatment
CN108178764A (zh) * 2018-01-09 2018-06-19 天津科技大学 呋喃并[2,3-b]吡啶类化合物及无金属催化的合成方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL89900A0 (en) * 1988-04-12 1989-12-15 Merck & Co Inc Hiv protease inhibitors useful for the treatment of aids and pharmaceutical compositions containing them
WO1993008184A1 (en) * 1991-10-23 1993-04-29 Merck & Co., Inc. Hiv protease inhibitors
EP0541168B1 (en) * 1991-11-08 1998-03-11 Merck & Co. Inc. HIV protease inhibitors useful for the treatment of aids
US5413999A (en) * 1991-11-08 1995-05-09 Merck & Co., Inc. HIV protease inhibitors useful for the treatment of AIDS
SI9420017B (sl) * 1993-03-31 2003-12-31 Merck & Co. Inc. Inhibitorji proteaze hiv-a v farmacevtskih kombinacijah za zdravljenje aids-a

Also Published As

Publication number Publication date
NZ278201A (en) 1998-01-26
WO1995016688A1 (en) 1995-06-22
BR9408305A (pt) 1997-08-26
CZ158696A3 (en) 1996-11-13
EP0734387A4 (en) 1997-03-05
EP0734387B1 (en) 2002-04-10
CA2178760C (en) 2000-08-01
PL314984A1 (en) 1996-09-30
AU1433195A (en) 1995-07-03
KR100234863B1 (ko) 1999-12-15
DE69430385T2 (de) 2002-11-07
ES2174921T3 (es) 2002-11-16
AU692509B2 (en) 1998-06-11
CN1046727C (zh) 1999-11-24
JPH09506619A (ja) 1997-06-30
BG100643A (bg) 1997-02-28
US5646148A (en) 1997-07-08
CA2178760A1 (en) 1995-06-22
HU9601649D0 (en) 1996-08-28
JP3000564B2 (ja) 2000-01-17
DE69430385D1 (de) 2002-05-16
CZ288312B6 (en) 2001-05-16
FI962488A0 (fi) 1996-06-14
EP0734387A1 (en) 1996-10-02
FI962488A (fi) 1996-06-14
SK75796A3 (en) 1997-05-07
US5807841A (en) 1998-09-15
CN1142827A (zh) 1997-02-12
BG62093B1 (bg) 1999-02-26
ATE215952T1 (de) 2002-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HUT74681A (en) N-(2-hydroxy-1-indenyl)-2-phenylmethyl-4-hydroxy-5-(2-carboxamido-piperazinyl)-pentaneamide derivatives of hiv protease inhibitor activity and phrmaceutical compositions contining them
SK136395A3 (en) Hiv protease inhibitors and pharmaceutical composition containing them
JP4982482B2 (ja) Ｈｉｖインテグラ−ゼ阻害剤
EP0617968B1 (en) HIV protease inhibitors in pharmaceutical combinations for the treatment of AIDS
EP1637521B1 (en) Novel tricyclic heterocycle compound
US7348448B2 (en) Phenylcarboxylate beta-secretase inhibitors for the treatment of alzheimer&#39;s disease
JP2020506914A5 (hu)
KR20100116206A (ko) Ｈｓｐ90 저해제로서의 옥심 유도체
US20150344444A1 (en) Bet-protein-inhibiting dihydroxyquinoxalinones
SK137899A3 (en) 4,4-disubstituted-3,4-dihydro-2(1h)-quinazolinones useful as hiv reverse transcriptase inhibitors
US5650412A (en) HIV protease inhibitors useful for the treatment of AIDS
WO1994026749A1 (en) Hiv protease inhibitors
EA010154B1 (ru) Пиридиновые производные алкилоксиндолов в качестве агентов, активных в отношении рецептора 5-нт7
US5747540A (en) HIV protease inhibitors useful for the treatment of AIDS
EP0826686A2 (en) Tricyclic compounds, their production and use
RU2137768C1 (ru) Ингибиторы hiv протеазы

Legal Events

Date Code Title Description
DFC4 Cancellation of temporary protection due to refusal