HUE031517T2 - Keresztáramú szûrõberendezés, valamint eljárások leukocita-dúsításra - Google Patents

Claims (8)

1. Karesxtá ramú szűrőberendezések; vifamínt eljárások ! Szabadalmi íoénvoontok |

   1, Egy keresxtáramú szűrőberendezés. amely a véralkotők - mint pl, plazmái | irornbociták, eritfociták ~ szelektív eltávolításával íeukocitákkai dúsított sejtpopuláció ! preparálására szpipi* és amely a következőket tartalmazza: ] egy eltávolító egységet, (1) egy henger alakú keresztáramú kamrával (3) és | egy szűrókamrával, (4) amelyek a kettő között elhelyezkedő kerek szűrővel vannak f egymástól elválasztva, a szűrő fi) fölyadék-dssaekittetifben van a ikeresifiramy | kamrával (3) és a szörőkamrával (4); i A szűrő átmérőié pagyllbii azonos a keresztáramé kamra átmérőiével; J egy henger alakú keresztáramé kamrát (3), amely egy bemenő (6) és egy j kimenő nyílással (?) rendelkezik, a szűrő retentât felületével szomszédos bemenő I nyílás iß) a leukoclíákat tartalmazó véralkotók mintájának a keresztáramé kamrába \ (3) történő bevezetésére szolgál, és párhuzamos a szűrő (5) retentât felületével; és \ a kimenő nyilas (?) szomszédos a szűrő (5) közepével és merőleges a szűrő {5} j retentât felületére, f egy szivattyút, (14) amely folyadékot pumpál a keresztáramú kamrába (3) a ) bemenő nyíláson keresztül (6), amelyet égy alakítottak ki, hogy a henger alakú f keresztáramé kamrába a folyadékot a fütráelós sebességnél $»100x nagyobb 1 bemeneti sebességgel vezesse be; ahol ez az elrendezés a folyadék áramlását befelé spirálisan irányítja a szűrő ; közepe felé, így örvénymozgást képez a folyadékon bélül, és a szűrő, (5) amély · átlagos pőrusméretteí rendelkezik (3-8 mikron), így a minta áramlása a szűrőn (5) keresztül loukooltákkal dúsítja a véralkotók mintáját. '§Ψ A$, I, Igénypontban maghatározott eszköz továbbá tartalmait; 1 egy visszanyerő egységet (2), amely tartalmaz agy bemeneti (10) és egy f kimeneti nyílást (11), és a keresztáramé kamra (3) valamint a visszanyerő egység j (2) hurokszerűen kapcsolódnak egymáshoz, ahol a keresztáramé kamra bemeneti § nyílása (6) folyadék-összeköttetésben van a visszanyerő egység kimeneti nyílásával I (11), és a keresztáramé kamra kimeneti nyílása (?) folyadék-összeköttetésben van a { visslinyorő egység bemeneti nyílásával (10), | ÜL :A I; Igénypontban meghatározott PÄ<te, ahol a visszanyerő egység továbbá | tartalmaz egy míatisfeémaéati nyílás! (12) és i|f Äsill bemenet nyílást (13). 4. A 3. Igénypontban meghatározott eszköz továbbá tartalmaz egy pótfölyadék-forrást. amely folyadék-összeköttetésben van a mosás* heméhéi nyílással (13). É Á 4; Igénypontban maghatározott eszköz, ahol a pöffolyadlk egy izotóníás puffer vagy szöveffenyésziö közeg. II Az Ι-Il igénypontök bármelyikében meghatáifOzoft eszíciztAfáhbá Mrtalmat egy se|fi^fl0:i|gié berébdézist, amely folyadék-ösézekötétifbég van az eltivolifo egységgel I) A 6. Igénypontban meghatározott eszköz, ahol a sejtfeídőlgozé berendezés lyéngylke! lahálmás, 8. A 8. vagy ?. Igénypontban meghatározott eszköz, ahol a sejtfeidolgozö berendezés egy eszközt tartalmaz a leukoeífákkal dúsított sejtpopuláció 9. A 8, igénypontban meghatározóit eszköz, ahol a tenyésztés eszközei a kiveikézikéiiai egy edényt, amely egy első és egy második porttal rendelkezik; egy monocitikus dendrltikus sejt prekurzorhoziapadó szubsztrátof, á szuhsztrái folyadék-összeköttetésben van az első és a második porttal; pgy iiiádt iüily^lizatátt|áá izubszlfátot az edényen belől, arass pórosmérete elegendő ahhoz, hogy átengedje a rnonodilkus dendrifikus sejt prekiirzoi'okat és a denclrltlkus sejteket; egy lefolyócsövet, amely folyadék-összeköttetésben van áz első porttal; és é|y gyyjtőcsövet amely íolyadék-ósszeköftetésbén mn m etil pofiak i :: ί 18. η &amp; Ipnypontban meghatiroioi eszköz továbbá számos fofyaliîfferrâst | y faAâ!mazs; imflyek folyadék-összeköttetésben vannak az első vagy a miiodll ! porttal 11. A 9. vagy 10. Igioponfban rnefhafimzotf eszköz továbbá tartalmai agy lezárható szövettenyésili^aionp amely ászepkös körülmények móllett I monooltlkya denlntíkus sift Pretoriátok fogadására alkalmas, \ 12. A 11. Igénypontban meghatározott: asiliij: áttol a lezárható szdvettenyésitö-edény egy szőveftényosztö'tasak, laska vagy hiomakien 13. A 10-12. Igénypontok bármelyikében moghatároiott eszköz, ahol a I ! ogy szivattyút, amely folyadék-összeköttetésben van számos folyadékforrással és az illő padiak
2. 15, Az 1-14. sgénypontok bármelyikében maglatiriáOi áizlÉ^ továbbá tadalmaz egy hömérsékíefszabályozó eszközt, bogy a: pedeformináii hőmérsékleten tartsa. 16. A 15. Igénypontban meghatározod eszköz, ahol a hömérsékietszabályozö eszköz egy fűtőberendezés. 1 ?.. Az 1-16. Igénypontok bármelyikében niegh atsrozött eszköz, a no! á szíri pőrusméreie kb. 3··? mikron, vagy kb, 1*1,8 mikron.
3. 18. Az 1-17. igénypontok bármelyikében meghatározott eszköz, amely továbbá tartalmaz egy véralkoté-forrást, amely folyadék-összeköttetésben van a keresztáramé kamra bemenő nyílásával. i íi 19. A 18, tpnyponfbib meghatározott eszköz:, ahol a véralkotó-forrés egy | leukaferézls eszköz 20, 1, igénypontban e^zkôl # A^rpIkpÄ: mintájának iigkociiàkkai tortéÂiiéltâiifi fiMiái, ahol az eszköz tartalmaz egy a j szűrön kérésztől! flfirációs se|és|#f |f i) ciökköhtésére alkalmas eszközt, ás ahol áézőfőí® pórusmérete 3-7 mikron. i; 21 ; A 20. Igénypontban meghatározói eszköz továbbá tartalmaz egy eszközt amely a mintában lévő vérsejtek predetenninált koncentrációját teszi lehetővé, ahol a vérsejiek predetermine koncentrációja 1D7-1öt0 sejl/ml,
4. 22, Az 1-19, Igénypontok bármelyikében meghatározott eszköz, ahol a keresztáramé kamra a szűrő és a szűrökamra fölött helyezkedik el. 2|, Az 1-19. Igénypontok bármelyikében meghatározott eszköz, ahol a keresztáramé kamra a szűrő és a szörökamra alatt helyezkedik el. !
5. 24, Égy módszer, amellyel egy alanytól származó véralkotő-mintából eiyéiáSzthaiók a leukodták, ahol a minta tartalmazza p liékecltákal^m módszer a klyetkézőket tartalmazza: ξ|) a minta bevezetését az 1-21. igénypontok bármelyikében meghatározott eszköz eltávolító egységébe (1) a bevezető nyíláson keresztül (6) az eltávolító egységben: P| így a nvnta Kereszfararolásnak van kitéve, amely nagyiéból párhuzamos egy szűrővel, (5) amelynek pómsmérete kb. 3-8 mikron; |i| így a folyadék a szőrön φ) keresnék fílirációnak van kitéve, és pv| szelektíven eltávolítja a nem leukocita véraikitökat a mintából és így leukoeitákka! dúsított sejtpopulációt hoz létre. 25. A 24. igénypontban meghatározott módszer továbbá tartalmaz; az alanyból származó minta preparálását leukaferézss, sûrüség-œntnfugâlâa. differenciál llzis, fiitrácló segítségével, vagy határréteg preparálását az eltávolító < egységbe (1) történő bevezetéshez iS, A 24, vagy '25, igénypontban maghatározott módszer, ahol a nem leukocila ......... ! yiraikoiél: plazmát, ttomböcilákat és/vá|y orltrodtákáttartalmaznak, > ; : If, A 24-28, Igénypontok bármelyikében meghatározott módszer továbbá tartalmaz: ismétlődő lépéseket (b. 00, és {üt} legalább kétszer íeukocitákkal dúsított sejtpopuláció képződését, 28, A 24-28, igénypontok bármelyikében meghatározott módszer, ahol a dúsított sejtpopuláció legalább 20% vagy legalább 80% ieukocttát tartalmaz, 29. A 24-28 OgÉnypoátPÉibáímeiyÉéh továbbá s taitaimázza: a ieulóottákkii dóéitól sejtpopuláció mosóétdattál történő mosását 39. A 24-29. Igénypontok bármelyikében meghatározott módszer továbbá monocitikus dendrilikus sejt prekurzorok preparálását a leukooitákkal dúsított sejtpopulációból, 31. A 30. igénypontban meghatározott módszer, ahol a monocitikus dendritíkus sejt prekurzorok izolálása tartalmaz: egy monocitikus dendritíkus sejt prekurzorhoz tapadó szubsztrát .éhntkeztetését a íeukocitákkal dúsított sejtpopulációval; tehetővé téve, hogy a sejtpopulációban lévő monocitikus dendritíkus sejt prekurzorok reverzibilisen a szubsztráthoz tapadjanak, hogy monocitikus dendritíkus sejt. prekurzorokat és szubszlrátot tartalmazó komplexeket hozzanak létre; a nem tapadó leukoclták és a komplexek szeparálását olyan kompielél kinyerése érdekében, amelyek monocitikus dendritíkus seit prekurzmokat tartalmaznak; és :: monocitikus dendritíkus sej? prekurzorok tenyésztését a prekurzorok ; differenciálásához, hogy áretien és érett dendritíkus sejtekké alakuljanak. : 32. A 31. Igénypontban meghatározott módszer, adót a monocfíikus dendritlkus sejt prekurzorokat a tenyésztés előtt leoldják a szubszlrátróí vagy a szubsztráton [ $pyésztik. I 33. A 32 Igénypontban meghatározod módszer, ahol a szutsztrái tartalmaz, üveget, pdíszfirént műanyag vagy üvegbevonatű pofisztírén mikrogyöngyökei
6. 34. Egy módszert a véralkotók mintájának leukocitákkal történő dúsítására, amely a következőket tartalmazza' | 1) A minta bevezetését az i~21. igénypontok bármelyikében meghatározod j keresztáramú szűrő (angolul. TFT) berendezésbe; ! 2) a minta egy prédéterminait bemeneti és fiftrációs sebességen történő \ reoirkuláltatását a TFF egységen keresztül, a préléferminálf bemeneti \ sebesség legalább ötször nagyobb a predetermibiiHltrációs sebességnél; ahol a prédéterminé!* hitrâclès sebesség kevesebb, mint a szűrő elienáilSs nélküli fsltrációs sebessége, és \ 3) é liűlbölíáiial llsitoi seitpopytáoiö izoláaó)át, { 35. Ä 34. igénypontban meghatározod módszer, ahol a dúsított sejtpopuláció nagyjából mentes a nem leukoila véralköföktől 36. A 34.. igénypontban meghatározott módszer továbbá tartalmazza; vérvételt az alanytól, és a minta p^paráll^ÉtMluk^iei·: sűrűség-centrifugáiéin differenciál .Hasis, flltráció aegstségével vagy határréteg preparálását, 37. A 34-38. igénypontok bármelyikében meghatározott módszer, ahol a nem 38. A 34-37. igénypontok bármelyikében meghatározott módszer, ahol a dúsított sejtpopuláció legalább 20% vagy legalább 80% ieukocitát tartalmaz. 39. A 34-38. Igénypontok bármelyikében meghatározott módszer továbbá tirtaimázzá a dúsított sejtpopuláció mosóoldattál történő mosását. 40. A 34-39. igénypontok bármelyikében meghatározott módszer továbbá tartalmazza a dendfihkus sejtek a dúsított sejtpopulációból történő preparálását. | 41. A 40. Igénypontban meghatározott módszert alól d dendnlikus selákli i r kővetkezőképpen preparálják: egy monocsdkus dendnlikus sejt prekurzorhoz tapadó szubsztrat inntkezteiése a dúsított sejtpopulációval; lehetővé téve, hogy a dúsított sejtpopulációban lévő monoertrkus dendrltikus sejt prekurzorok reverzibilisen a szubsztrálhoz tapadjanak, hogy monocitikus dendrltikus sejt prekurzorokat és szuoszirátot tartalmazó komplexeket hozzanak : a hóm tapadó leukocíták és a komplexek szeparálását olyan komplexek : kinyerése érdekében, amelyek monocitikus dendrltikus sejt prekurzorokat | tartalmaznak; és | monocitikus dendrltikus sejt prekurzorok tenyésztését a prekurzorok differenciálásához, hogy éretlen és érett dendrltikus sejtekké alakuljanak. 42. A 41. Igénypontban meghatározott módszer; ahol a szubsztrát tartalmaz: üveget, polisztiráni műanyag vagy üvegbevouefu polisztirén mikrogyöngyőket éretlen vagy érett dendrltikus sejtek izolálását. 44. A 37. Igénypontban meghatározott módszer, ahol a monocitákat pitplihekke! tenyésztik, amely így elősegíti a monocilák dendrltikus sejtekké történő differenciálódását 45. A 44. igénypontban meghatározott módszer, ahol a ottokínek GM- CSF, GM-CSF és IL~4. 4Í, A 44. vagy 45. igénypontokban megháládpott módszer, ahol a d#hdnikúé séjféket érett dendrltikus sejfekkésériéllfe I?, A 46. igénypontban meghatározott módszer, ahol a dendrihkos sejteket egy \ antigénnel tenyésztik az antigén feldolgozását elősegíti körülmények közölt hogy I antigénnel töltöi denditlküs aéptKit hozzanak litre. i 48. A 34-4?, igénypontok bármelyikében meghatározott módszer, ahol a szűrő | pifüsméréte 3-5,5 mikron, j 49. Ä 48. igénypontban meghatározott módszer, ahol a ieukooHék- j €034* sejteket tartalmaznak j 50. A 48. vagy 49. igénypontban meghatározott módszer, ahol a véralkotók j mintája egy olyan donortól származik, akit legalább egy őssejt mobilizáló anyaggal j kezeltek, j
7. 51. Az 50. igénypontban meghatározott módszer, ahol az őssejt mobilizáló anyag j egy GOSF vagy oiklofószfamid. } 52. A 48-51. Igénypontok bármelyikében meghatározott módszer továbbá ij fadilniazza a laukookák CD34* sejtekkel történő dúsítását. |

   13. Az Ä i|ihyponÍiáh méghátározött módszer, ahol a leukgdták CD34* sejtekkel | történő dúsítása tartalmaz egy mágneses gyöngyökhöz konjugált anti~GD34 54. A 48-53, igénypontok bármelyikeién meghatározott módszérteyiiiá tartalmazza a CD34* sejtek m Wvo expanzióját. tartalmazza i mohooita-eredettj plüfipóteris őssejtek leiskocitikkai dúsított j é^^popilióiójÉbij történő prepatálisit.
8. 58. Az 56. igénypontban meghatározott módszer továbbá tartalmazza egy progrehitor vagy ösiéjt diflérenoiálódásának indokáiásét : "ΐΊ.ΊΛίν'' ,·'6Λ > 57. A 48 Igénypontban megbatározott módszer továbbá tartalmazza egy differenciált seit iraoszdifferenciálódésának indokolását. §8, Ál 1481. tgánypöbtók:Mrm#iyíÍ<Miiéiá mégbÉtárö&amp;ött szűrőberendezés használata a leukocitakkal dúsított sejtpopuláció preparálására, a ! véraikölők - mint pl plazma, írom bocitok és entrodták » szelektív eltávolításával