CN102264410B - 用于从体液分离细胞的系统和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供用于加工生物材料的方法和系统，其包括将生物材料装入容器中；将聚集剂加入容器内的材料中，使材料分离成两种或更多种不同的子材料；从所述容器提取一种或多种子材料；将容器中余留的一种或多种子材料自动转运到过滤装置中；将所得目标保留物收集到目标保留物贮器中。

Description

用于从体液分离细胞的系统和方法
发明背景
总的来讲，本发明涉及用于将复杂的生物材料加工成亚成分的系统、方法和试剂盒。
在分析或治疗性应用量不太大的细胞(例如白细胞或干细胞)前，通常需要从全血中分离出红细胞(RBC)。许多常规血细胞分离方法需要初步除去红细胞并减少样品体积。对于长期细胞存库和再生医学应用，通常需要加工步骤，其中由于贮存限制和/或直接移植所需体积要求小，因此需要以减小的体积，稀有细胞的产量最高。目前，用于加工含血细胞样品(例如脐带血、骨髓、外周血)最常见的技术包括在使用或不使用密度梯度介质的情况下用离心法提高分离的密度梯度沉降法。最近，为了满足对高通量样品加工的不断增加的需要，开发出了用于封闭系统加工脐带血和骨髓样品的自动离心系统。虽然与手工技术相比通量大大提高，但是由于离心机桶的重量和固定的外形尺寸，限制了基于离心的装置的灵活性和轻便性。
在许多血细胞分离应用中还采用过滤技术。例如，有时采用深层过滤以从全血中除去白细胞(例如输血应用)。然而，这些过滤器被设计成排除最多的白细胞(通过将细胞截留在过滤器内)，并没有设计成在过滤步骤后有高的细胞回收率。另外，基于膜的血浆除去法是从全血除去和加工血浆的常见技术。然而，这些技术不包括在过滤前预先清除全血红细胞(RBC)，并且在血细胞存库应用中无法实现需要的体积减少的类型。
本领域已知通过重力或离心分离血液不同组分的沉降方法。一种促进RBC从全血沉降的方法是使用聚合物大分子，例如作为已知的RBC聚集剂的葡聚糖、羟乙基淀粉或明胶。根据血液中聚集剂的组成成分和化学计量比，RBC沉降方法的速度和效率可大幅变化。一些沉降增强剂是已知的，例如草酸钾和丙二酸钾。这些沉降增强剂的效率很大程度上取决于沉降增强剂相对于血液样品的浓度。虽然以前曾证实草酸钾和丙二酸钾是有效的RBC沉降增强剂，但是这些沉降增强剂的临床用途受到与钾盐相关的潜在心血管毒性的限制。
发明概述
本发明适于满足对加工生物材料(例如全血)的功能性封闭系统高通量系统和方法的需要，同时获得高回收率和成活率的目标细胞(例如干细胞)用于下游细胞治疗应用。过滤是血液加工应用(包括血液透析和血浆除去法)的常用技术，但是以前未曾用于血细胞存库应用，其中需要加工生物材料(例如全血)，以便除去红细胞和过量血浆，得到浓缩的白细胞(WBC)样品。这起因于与将大量的红细胞与较少的白细胞和类似大小甚至更少的干细胞相分离有关的挑战。所述系统和方法的一个实施方案包括两步方法，涉及用于除去大量红细胞的初始RBC聚集和重力沉降步骤，然后是浓缩细胞并除去过量血浆的过滤步骤。
用于加工生物材料的封闭系统的一个实施方案包括：装有生物材料并能够将生物材料分成两种或更多种不同的子材料(submaterial)的容器；提取装置，该提取装置用于从容器中去除至少一种子材料；过滤装置；在容器与过滤装置之间转运一种或多种子材料的管道；以及在容器与过滤装置之间通过管道至少转运一种或多种子材料的控制装置。该系统可包括用于至少暂时贮存一种或多种滤液的一个或多个贮器，其中至少一个贮器为废滤液贮器，至少一个贮器为目标保留物贮器。该系统还可包括沿着管道的阀，用于将目标保留物选择性引入目标保留物贮器；以及沿着管道用于使废滤液至少部分通过管道进行选择性再循环的阀。还可将与管道保持液体连通的泵加入该系统，以促进容器与过滤装置之间一种或多种子材料的转运。
所述系统的容器可适宜至少部分根据两种或更多种子材料的相对重量将材料分离成子材料。可将子材料分离成沉降层，其中提取装置适于抽出或者提取一个或多个沉降层。在一个实施方案中，提取装置适于抽出容器中的最低层，而在另一个实施方案中，提取装置可或者或另外抽出容器中的最上层，或者最低层与最上层之间的一层或多层。
所述系统还可包括与试剂贮器流体连通的阀，以选择性地从试剂贮器取出确定量的试剂并引入容器中的确定量的试剂。该实例中的提取装置还另可适于将容器中的确定量的材料抽到之前已引入提取装置中的试剂中，然后将抽取的材料输送回容器中，以利于将材料与试剂混合。所述系统还可包括用于测定容器中至少一种子材料的位置或水平的传感装置。
整个系统或者例如在容器与过滤装置之间运送一种或多种子材料的一部分系统可以是自动化的。
用于加工生物材料的方法的实例一般包括：向容器中提供生物材料；将聚集剂加入容器内的材料中，并使材料分成两种或更多种不同的子材料；从容器中提取一种或多种子材料；将余留在容器中的一种或多种子材料通过管道自动转运到过滤装置中；并将所得到的目标保留物引入目标保留物贮器中。
所述方法的一个实例包括加工血液样品，用于随后的冷冻保存和/或直接的治疗应用，例如减少样品体积，实现高的有核细胞回收率和成活率，并除去存在于起始样品中的大多数红细胞。
所述方法的一个实例使得能够分离白细胞(WBC)流分，该流分包括得自全脐带血、骨髓或外周血(包括GCSF刺激的外周血)的多能干细胞。本发明方法的至少一个实例能够实现高的白细胞回收率(＞80％)、＞95％CD34回收率和高的白细胞成活率(＞95％)，同时根据过滤时间和所用过滤筒的调整，在处理宽范围的起始体积和样品类型中提供灵活性。
与现有方法不同，本发明的方法和系统能够自动加工复杂的生物液体而无需用户购买和使用单独的离心机。本发明的方法和系统还容易的适于处理一定范围的起始体积以将样品浓缩成用户指定的最终体积，并可用于多路复用方法(例如增加/降低加工/运行的样品数)。
总的来讲，本发明的方法和试剂盒提供具有生物相容性并显著提高血液分离方法的效率的沉降增强剂和系统，从而提高总有核细胞(TNC)回收率。认为在规定的浓度范围内，体内使用这些沉降增强剂是无毒和安全的。
含有血细胞的样品的细胞沉淀方法的一个或多个实例包括加入聚集剂和终浓度为约10mM-约100mM的无毒增强剂。
所提供的含有血细胞的样品的细胞沉淀方法的一些实例包括加入聚集剂和包括柠檬酸钠或琥珀酸钠或其组合的无毒增强剂。
在细胞沉淀试剂盒的一些实施方案中，试剂盒包括聚集剂和无毒增强剂，其中无毒增强剂包括柠檬酸钠或琥珀酸钠或其组合。
在细胞沉淀试剂盒的一些实施方案中，试剂盒包括聚集剂和无毒增强剂，其中所述聚集剂选自葡聚糖、羟乙基淀粉或明胶，其中所述无毒增强剂包括柠檬酸钠或琥珀酸钠或其组合。
细胞沉淀方法的一些实施方案提高含红细胞样品中提高百分比的总有核细胞的所得回收率，其中所述方法包括以下步骤：加入聚集剂、无毒增强剂，温育样品以聚集大量RBC，并回收总有核细胞。
附图
参照附图阅读下面的详细说明书时，可以更好地理解本发明的这些和其它特征、方面和优势，附图中类似字符表示整个附图中的类似部件，其中：
图1是本发明系统的一个实施方案的示意图，显示分别在混合容器和试剂贮器中的生物样品和RBC聚集剂(含或不含增强剂)。
图2是图1所示实施方案的示意图，显示吸入提取装置的聚集剂(含或不含增强剂)。
图3是图2所示实施方案的示意图，显示聚集剂(含或不含增强剂)混合进入容器内的生物样品中。
图4是图3所示实施方案的示意图，显示吸入提取装置的部分试剂/样品混合物。
图5是图4所示实施方案的示意图，显示将吸入部分输送回到容器中。
图6是图5所示实施方案的示意图，显示混合物呈沉淀状态。
图7是图6所示实施方案的示意图，显示将沉淀混合物的最低层吸入提取装置。
图8是图7所示实施方案的示意图，显示提取装置与容器之间处于关闭位置的注射器阀。
图9是图8所示实施方案的示意图，显示容器与泵之间处于打开位置的泵阀，且混合物流经系统从容器通过管道直到过滤装置。
图10是图9所示实施方案的示意图，显示废滤液贮器中收集的过滤废液和通过系统再循环的样品。
图11是图10所示实施方案的示意图，显示相对于容器处于关闭位置且相对于废滤液贮器处于打开位置的泵输入阀，以及通过管道和过滤装置再循环的废滤液。
图12是图11所示实施方案的示意图，显示废滤液通过系统泵送直到置换截留在液体通路中的目标保留物。
图13是图12所示实施方案的示意图，显示相对于废滤液贮器处于关闭位置且相对于容器处于打开位置的泵输入阀，以及在泵与目标保留物贮器之间处于打开位置的泵输出阀。
图14是图13所示实施方案的示意图，显示正在目标保留物贮器中收集的目标保留物。
图15是图14所示实施方案的示意图，显示容器底部的目标保留物剩余量正转运到目标保留物贮器中。
图16是图15所示实施方案的示意图，显示在容器与目标保留物贮器之间的管道中目标保留物的残留量。
图17是图16所示实施方案的示意图，显示相对于废滤液贮器处于打开位置的泵输入阀。
图18是图17所示实施方案的示意图，显示废滤液正通过管道转运直到废滤液将管道中的残留目标保留物推进目标保留物贮器中。
图19是图18所示实施方案的示意图，显示相对于目标保留物贮器处于关闭位置的泵输出阀，废滤液正转运到容器中。
图20是图19所示实施方案的示意图，显示系统中的废滤液和任何余留的目标保留物正被收集在辅助滤液贮器中。
图21为柱状图和表格，显示仅葡聚糖、与柠檬酸钠组合的葡聚糖和与琥珀酸钠组合的葡聚糖的回收TNC的体积的实例。
图22图示柠檬酸钠沉降效率的实例。
发明详述
为了更清楚且明确地描述和指出本发明要求保护的主题，下面提供特定术语的定义，其用于下面的说明书和随附权利要求书中。在整个说明书中，特定术语的示例应视为非限制性实例。
本文使用的术语“容器”是指任何物体，该物体具有至少一个口，能够在其范围内装放液体为期至少短暂的一段时间。
本文使用的术语“生物材料”是指任何材料，该材料具有可聚集成两种或更多种子材料的生物性质。生物材料的非限制性实例为全血、脐带血和骨髓，这些材料可通过聚集和沉降/除去RBC分离，同时将有核细胞保留在血浆溶液中。有核细胞包括WBC和稀有干细胞。
有核细胞的加工方法的一个实施方案通常包括从细胞样品(包括但不限于血液和骨髓)分离和富集有核细胞，例如但不限于稀有干细胞。基于过滤的实施方案包括两个通用步骤。第一步包括使细胞样品与沉淀溶液接触，沉淀溶液例如加入或不加入增强剂(例如柠檬酸钠、琥珀酸钠)的红细胞聚集剂(例如葡聚糖)。在该示例性实施方案中，加入增强剂以提高RBC沉降速率和/或减少沉降后最终的RBC压实体积。随后，通过引流、抽出或其它合适的转移方法，从含有血浆和有核细胞的上层部分除去聚集的RBC。第二步包括通过过滤排除RBC的样品来减小体积并浓缩有核细胞。过滤的一个实例采用中空纤维滤筒(GeneralElectricHealthcare，Piscataway，NJ)。该实施方案提供高的细胞回收率(例如最少细胞截留)、最小细胞损坏和快速的加工时间。所述方法的这个实例适用于自动封闭系统。所述方法和系统可适于无菌加工复杂的生物材料，例如但不限于脐带血和其它细胞样品材料。
实例
联合分离之后过滤，而不仅仅单是过滤、离心或磁性分离的两步骤自动实例方法，提供(1)总有核细胞(TNC)回收率提高，(2)RBC去除增加，和(3)因为离心机样品支架的固定外形尺寸，所以与离心相比，在处理一定范围的样品体积(例如50-300mL血液)时具有更大的灵活性。与具有固定尺寸的离心机不同，可根据样品体积调节用于该系统和方法的过滤器。
确定起始材料的体积(例如通过重量、目测)。根据合乎要求的化学计量比(通常血液比葡聚糖为1∶1或1∶2)，计算出所需要的RBC聚集试剂的量。
将细胞样品起始材料转移到加工容器中。也将RBC聚集试剂转移到加工容器中。然后将样品和试剂混合，使之温育约20分钟用于RBC聚集和重力沉降。
然后，从容器中从上部白细胞(WBC)/血浆部分中提取聚集物RBC部分(例如通过泵送、吸取或引流)。然后将剩余的WBC/血浆部分转移(例如通过泵送、正压或负压)到具有合适孔径大小(例如孔隙约0.65um)的过滤装置(例如中空纤维筒)中。使过量血浆通过过滤装置，在废滤液贮器中收集，同时保留WBC。
使流分样品通过过滤装置再循环直到将样品体积浓缩到所需要要的最终体积(例如5-20ml)。将样品转移到目标保留物贮器中，通常用于长期冷冻贮存。然后，冲洗(通常使用血浆和/或空气)过滤器和管道以回收存在于该“死体积”中的细胞。然后将该材料加入浓缩样品中。实现了高的总有核细胞回收率(＞85％)和成活率(＞95％)。
图1是所述系统的一个实施方案的示意图，显示分别在混合容器和试剂贮器中的生物样品和增强剂。在图1中显示且统称为系统10的系统的实施方案包括容器12，该容器12装有生物材料并能够将生物材料分离成两种或更多种不同的子材料；用于从容器中提取至少一种子材料的提取装置16；过滤装置20；在容器与过滤装置之间转运一种或多种子材料的管道18；以及控制通过管道在容器与过滤装置之间至少转运一种或多种子材料的控制装置30。该实施方案只是所述系统的示例性配置。对于给定设置，组件的数目和类型可按需变化，通过系统的材料的顺序和流量也可按需变化。例如，可以采用不同的配置和组件提取、贮存、清洗和混合材料。
在图1所示实施方案中，容器12在顶部有开口，在整个过程的不同时间内通过该开口引入试剂，以及从容器12抽取材料和子材料，提取装置在本实例中为与阀34处于流体连通的注射器。
系统10还包括至少暂时贮存一种或多种滤液的贮器。该实施方案中的一个贮器为废滤液贮器22和目标保留物贮器24。系统10还包括沿着管道将目标保留物选择性引入目标保留物贮器的阀30；沿着管道使废滤液至少部分通过该管道进行选择性再循环的阀28；以及选择性将一种或多种试剂引入容器12、从容器12中提取材料使试剂与样品混合以及在子材料聚集后从容器12中提取一种或多种子材料的阀34。
系统10还可包括一个或多个传感器，例如传感器32。传感器32可用于检测容器12中材料的一个或多个参数，包括但不限于容器内给定位置中子材料的存在；容器内的环境条件，例如但不限于温度、pH、湿度和压力；以及生物材料或子材料的质量或性质。传感器可以是但不限于光学传感器、超声传感器、压电传感器、运动传感器、RFID传感器、电磁传感器和载荷传感器。
系统10还包括控制子系统30(本文亦称控制器)，控制子系统30使泵26、提取装置16和阀28、34和30自动化并协调工作。还可对控制子系统30进行配置以接收系统用户的输入，并根据引入容器12待应用该系统加工的材料的量和类型，自动确定待加入容器12中的试剂的量和/或类型。根据给定系统的配置，通过控制子系统可使该系统全自动化或部分自动化。根据待加工的材料和子材料的类型或量，可将试剂装入按需插入系统口的可移动贮盒内。
系统10还包括与管道处于流体连通的泵26以促进一种或多种子材料在系统不同组件之间的转运。该实施方案的泵26为蠕动泵，但是可包括任何适于该系统配置的任何类型的泵。
可至少部分根据两种或更多种子材料的相对重量，使系统的容器12适于将材料分离成为聚集的子材料。将子材料分离成沉降层，且在该实施方案中，使提取装置适于抽出或者抽取一个或多个沉降层。在图1所示实施方案中，提取装置16包括远端朝向容器12底部放置的收集线(pickupline)，一旦将子材料分成其相应的沉降层，便抽出容器中的最低层。或者或另外，提取装置可抽出容器内的最上层或者最低层与最上层之间的一层或多层，这取决于提取装置相对于容器的配置。
如图2和图3所示，注射器16连同与试剂贮器14处于流体连通的阀34一起，从试剂贮器中选择性取出确定量的试剂，并将确定量的试剂引入容器12中。如图4和图5所示，还可以使该实例中的提取装置进一步适于从容器中将确定量的材料抽入试剂之前已引入其中的提取装置中，然后将抽取的材料输送回到容器中，以促进材料与试剂的混合。为了进行混合步骤，相对于贮器14关闭且相对于容器12打开的阀34开启注射器16与容器12之间的流体连通。一旦聚集剂与容器12中的材料(例如全血)混合，混合物通常需要时间沉淀成为其不同的沉降层。对于与例如葡聚糖和柠檬酸钠混合的全血或脐带血，沉淀应发生在20分钟内，如图6所示。
可以使用检测装置(例如传感器32)，通过测定容器中至少一种子材料的位置或水平，来测定子材料何时聚集并分离成其相应层。
用于本实例(其中将加工全血)的可能试剂的非限制性实例为葡聚糖(一种聚集剂)及均可促进聚集的柠檬酸钠和琥珀酸钠。这3种试剂的实例通过起聚集剂和/或聚集增强剂的作用来启动并加快生物样品中不同类型的子材料(例如WBC和RBC)的聚集和沉降，从而促进所述方法和系统。
图7是图6所示实施方案的示意图，显示吸入注射器16的沉淀混合物的最低层。可将系统配置成提取一层或多层，例如图7所示RBC，直到一层或多层达到预定的设定点。可以使用传感器32测定何时达到设定点。一旦将RBC抽入注射器16，就关闭注射器16与容器12之间的阀34来防止RBC漏回容器中。图8是图7所示实施方案的示意图，显示提取装置与容器之间的阀34处于关闭位置。
图9是图8所示实施方案的示意图，显示容器与泵26之间的泵阀28处于打开位置，混合物流经系统从容器12经由管道18流到过滤装置20中。当混合物通过过滤装置20过滤时，在废滤液贮器22中收集过滤废液(在本实例中为血浆)，如图10所示。可对系统进行配置以使通过过滤装置20的样品继续再循环，直到通过容器12再循环的样品体积达到预定水平。例如，可以使用传感器对容器12中总有核细胞(TNC)的浓度水平进行光学监测。
为了使过滤装置16清洁，关闭相对于容器的泵输入阀28且打开相对于废滤液贮器22的泵输入阀28，使废滤液(本实例中为血浆)通过管道18和过滤装置20再循环(图11)。图12是图11所示系统10的示意图，显示废滤液通过系统泵送直到置换截留在液体通路中的目标保留物(例如TNC)。
目标保留物包括欲从生物材料中分离并收集于目标保留物贮器24的一种或多种子材料。在本实例中，目标保留物包括TNC。目标保留物贮器可以是适于给定目的的任何贮器，例如用于各种血液组分的收集袋。根据待加工的材料，可能有多个废弃物贮器和目标保留物贮器。或者，或除多个贮器以外，废弃物贮器和目标保留物贮器可能在一次加工与另一次加工中彼此互换，甚至在有不只一种子材料需要收集的单一加工时段内彼此互换。所述系统还可包括一系列的过滤装置及废弃物贮器和目标保留物贮器，以捕获和分捡给定起始材料中不同类型的子材料。
图13显示在图12所示步骤后的系统10，显示相对于废滤液贮器处于关闭位置且相对于容器处于打开位置的泵输入阀28，以及在泵与目标保留物贮器之间处于打开位置的泵输出阀30，以便将目标保留物收集于目标保留物贮器中，如图14所示。
如图15所示，即使容器底部余留的少量目标保留物也可被转运到目标保留物贮器中。然而，残留量的目标保留物可能保留在容器与目标保留物贮器之间的管道中，如图16所示。为了冲洗并收集管道中残留的目标保留物，打开相对于废滤液贮器的泵输入阀28(图17)，使废滤液通过管道18泵送直到废滤液将管道中的残留目标保留物推到目标保留物贮器中(图18)。
作为最终的系统冲洗，可使废滤液(例如血浆)通过系统冲洗。如图19所示，关闭相对于目标保留物贮器的泵输出阀，并且使废滤液通过系统泵送以冲洗出整个系统并将任何余留的子材料收集到容器中。然后，可将容器中收集的子材料收集到可与目标保留物贮器24交替使用或目标保留物贮器24以外的辅助滤液贮器中(图20)。
图1所示系统的过滤装置能够将细胞部分与例如外周血、脐带血和/或骨髓的复杂生物液体分离。下面提供系统10的过滤装置制备方法的实例。
系统10可包括其它辅助组件，例如存储装置，用于存储可通过该系统加工的有关各种材料、子材料和试剂的信息和数据以及可适于该系统的有关机械和环境变量的信息。可对系统进行编程以便在响应由系统传感器采集的信息和数据时，直观地调整指定处理的机构和条件。存储装置可包括任何合适的与处理器有关的硬盘内存，例如CPU(中央处理器)的ROM(只读存储器)、RAM(随机存储器)或DRAM(动态随机存储器)，或者任何合适的磁盘驱动存储装置，例如DVD或CD，或者zip驱动器或存储卡或存储条。可将存储装置放于远离系统但仍可通过任何合适的连接装置或通讯网络存取的位置，包括但不限于局域网、有限网络、卫星网络和互联网，无论是否是硬连接还是无线连接。处理器或CPU可包括微处理器、微控制器和数字信号处理器(DSP)。
所述系统还可包括录入装置和显示装置，使用户能够将信息输入系统，并存取和显示有关指定处理运行或多次运行的信息和数据，以编译信息和数据和/或产生报告。显示装置可包括能够显示数字图像的任何合适的装置，例如但不限于结合LCD或CRT的装置。
除非另有说明，否则冠词“一”是指被该冠词“一”修饰的词的一个/种或一个/种以上。除非另有说明，否则在所有情况下，表示成分、性质(例如分子量、反应条件)等用于本说明书和权利要求书的量的所有数字都应理解为被术语“约”修饰。因此，除非有相反的说明，否则在下面的说明书和随附权利要求书中给出的数值参数均为近似值，该近似值可随试图通过本发明获得的所需性质而变化。至少应根据报告的有效数的数值，并应用普通舍入技术，来解释每个数值参数，丝毫不限制且也不试图限制权利要求范围等同内容的教导的应用。
本文的“聚集剂”是指有助于促进血细胞聚集的分子。聚集剂的实例包括但不限于高分子量聚合物分子，例如某些蛋白质如血纤蛋白原或γ球蛋白；明胶和某些多糖如葡聚糖、羟乙基淀粉、喷他淀粉(pentastarch)和聚乙二醇(PEG)。
本文的“试剂盒”是指给定测定或试验所必需的一种或多种反应物、使用试剂盒中的反应物的整套说明、维持反应条件所需的任何缓冲液和其它任选材料，例如离心柱或微量离心管。
沉淀血细胞的本发明的方法和试剂盒一般包括加入一种或多种无毒增强剂(例如柠檬酸钠或琥珀酸钠)以加快RBC沉降。因为柠檬酸钠和琥珀酸钠早已经胃肠外用于医疗实践中，因此这些方法和试剂盒的无毒增强剂对于人类体内应用是安全的，且沉淀RBC后回收的细胞可用于治疗目的。
提高红细胞沉降的方法的一个或多个实例提高高度纯化的细胞(例如具有高细胞成活率的TNC)的回收率，这对于各种治疗应用是可取的。
用于一种或多种方法中的无毒增强剂提高沉降速率。用于一种或多种方法中的无毒增强剂的非限制性实例为柠檬酸钠、琥珀酸钠及其组合。
在一些实例中，细胞沉淀方法包括提供通过加入聚集剂和不同浓度范围的无毒增强剂进行处理的含有血细胞的样品。合适浓度范围的实例包括但不限于10mM-100mM、12.5mM-75mM、25mM-75mM和50mM-75mM。
在一些实例中，样品中细胞的沉淀方法包括提供通过加入终浓度范围为约12.5mM-约100mM聚集剂和无毒增强剂进行处理的血细胞，其中无毒增强剂为柠檬酸钠、琥珀酸钠或其组合。在一些实施方案中，聚集剂包括葡聚糖，无毒增强剂包括柠檬酸钠、琥珀酸钠或其组合。
沉淀细胞的试剂盒的一个或多个实施方案包括聚集剂和无毒增强剂。用于聚集细胞的试剂盒的一个或多个实施方案包括聚集剂和无毒增强剂，其中无毒增强剂包括柠檬酸钠或琥珀酸钠或其组合。用于聚集细胞的试剂盒的一个或多个实施方案包括聚集剂和无毒增强剂，其中聚集剂为葡聚糖。
回收具有高纯度和成活率的细胞的方法一般采用聚集剂与用于沉降的无毒增强剂的组合。例如在一个实例中，包括红细胞在内的样品通过加入聚集剂和无毒增强剂进行处理，接着温育样品，最终回收TNC。
从含红细胞的样品中回收某一百分比的TNC的一种或多种方法包括按预定浓度加入聚集剂和无毒增强剂，接着温育样品，最终回收总有核细胞。在某些实施方案中，增强剂为柠檬酸钠或琥珀酸钠或其组合。
实施例
根据下面的实施例可更全面地理解本发明的实施，本文提供的实施例仅用于举例说明，不应解释为以任何方式限制本发明。
实施例1
原料：人外周血用于本实验。本实施例使用的葡聚糖T500获自PharmacosmosA/s，Denmark；柠檬酸钠二水合物获自JTBaker；琥珀酸钠获自Sigma，St.Louise，Missouri。
在不同的生物相容性增强剂存在下，体外测定红细胞聚集的程度。将2.4ml血液样品与2.4ml含有3％葡聚糖T500的磷酸缓冲盐溶液(PBS)混合，然后温育，制备不含聚集增强剂的对照样品(葡聚糖的终浓度为1.5％)。也制备两个试验样品。将2.4ml血液样品与2.4ml含有3％葡聚糖T500和100mM柠檬酸钠的PBS混合，然后温育，制备第一试验样品(葡聚糖的终浓度为1.5％，柠檬酸钠的终浓度为50mM)。将2.4ml血液样品与2.4ml含有3％葡聚糖T500和100mM琥珀酸钠的PBS混合，然后温育，制备第二试验样品(葡聚糖的终浓度为1.5％，琥珀酸钠的终浓度为50mM)。对照和试验样品在室温下的温育时间约为20分钟。
在红细胞沉降后，回收上清液。然后测定回收上清液的体积。每个实验重复3次(n＝3)，计算每组的标准差。最终数据以图21的柱状图给出。对照(仅葡聚糖)较高的标准差值很可能是由不太压实和上清液的回收率降低所致。
图21描述了柠檬酸钠和琥珀酸钠对红细胞聚集的作用的实施例。在葡聚糖存在下回收的上清液体积用作对照，将其与在柠檬酸钠和葡聚糖存在下或在琥珀酸钠和葡聚糖存在下回收的上清液体积进行了比较。聚集程度反映了回收的上清液体积。压实提高导致更好的聚集，从而导致更好的上清液回收率。实验在室温下进行，聚集的温育时间在本实施例中约为20分钟。
实施例2
在不同浓度的无毒增强剂存在下体外测定了红细胞聚集的效率。在不含增强剂(用作对照)的情况下，将血液样品与1.5％葡聚糖T500一起温育。将2.0ml血液样品与2.0ml含有3％葡聚糖T500的PBS混合，制备对照样品。含有1.5％葡聚糖T500及12.5mM、25mM、50mM、75mM和100mM柠檬酸钠作为增强剂的血液样品用作试验样品。将2.0ml血液样品与2.0ml分别含有3.0％葡聚糖T500及25mM、50mM、100mM和150mM柠檬酸钠的PBS混合，制备试验样品，使得每个试验样品的葡聚糖达到1.5％的终浓度，相应试验样品的柠檬酸钠终浓度达12.5mM、25mM、50mM和75mM。将对照和试验组的样品在室温下温育20分钟。
在红细胞沉降后，回收液体。然后测定回收上清液的体积。每个实验重复3次(n＝3)，计算每组的标准差。最终数据以图22的柱状图给出。
虽然本文仅举例说明和描述了本发明的某些特征，但是本领域技术人员会想到许多修改和变动。因此，应理解，随附权利要求将包括落在本发明真实精神范围内的所有这类修改和变动。

Claims (7)

1.一种用于加工全血、脐带血或骨髓的方法，所述方法包括：
向容器中提供生物材料；
将聚集剂和聚集增强剂加入容器内的材料中，并将材料分成两种或更多种不同的子材料；其中所述聚集增强剂是柠檬酸钠、琥珀酸钠或其组合，并且其中所述聚集增强剂的浓度为10mM-100mM；
从容器中提取一种或多种子材料；
将余留在容器中的一种或多种子材料自动转运到过滤装置中；和
将包括有核细胞的所得的目标保留物收集到目标保留物贮器中。
2.权利要求1的方法，所述方法还包括检测所述容器中一种或多种子材料的存在。
3.权利要求1-2中任一项的方法，其中提取一种或多种子材料直到达到设定点。
4.权利要求1-2中任一项的方法，所述方法还包括将所得废滤液引入废滤液贮器中。
5.权利要求4的方法，所述方法还包括在所述目标保留物贮器中收集目标保留物后，用废滤液冲洗过滤装置。
6.权利要求1-2中任一项的方法，其中所述目标保留物包括有核细胞。
7.权利要求1-2中任一项的方法，其中所述目标保留物包括干细胞。
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