CN102803467B

CN102803467B - 生物样品纯化和富集的装置和方法

Info

Publication number: CN102803467B
Application number: CN201080058448.9A
Authority: CN
Inventors: C·埃里克松; J·卡斯特罗; L·文马尔
Original assignee: Ai Silaite Medical Co
Current assignee: Ai Silaite Medical Co
Priority date: 2009-12-22
Filing date: 2010-12-22
Publication date: 2015-07-22
Anticipated expiration: 2030-12-22
Also published as: WO2011078784A1; EP2516619A4; SE0951009A1; CN102803467A; JP2013514806A; KR20120121883A; RU2012122009A; CA2783007A1; EP2516619B1; US20120270312A1; BR112012015643A2; EP2516619A1

Abstract

一种用于样品纯化和富集的装置，包括具有过滤器和搅拌器的过滤单元，其中抽吸器将样品抽吸穿过所述过滤器，反洗器对在所述过滤器中收集的材料进行冲洗。在所述过滤器中收集的材料的量由控制所述抽吸器和反洗器的压力测量器所确定。

Description

生物样品纯化和富集的装置和方法

技术领域

本发明涉及生物样品纯化领域。更准确地说，本发明涉及能够将微量的靶细胞从含多种其他细胞和/或污染物的液体样品中分离出来的装置和方法。

背景技术

生物样品中各种组分的有效率和有效地分离对于研究和医学的多种领域都是有必要的。许多液体样品包含很多种很少或没有兴趣的细胞和/或污染物，以及很少的感兴趣的用于进一步评价的细胞。因此，能够从大量正常存在的细胞(例如血细胞或上皮细胞)中分离出微量的靶细胞是所希望的。

在本领域中已经存在多种技术用于满足这种需要。例如，已知可使液体样品穿过过滤器，从而纯化该样品中的某些组分。美国专利7,494,809B2公开了一种自动化方法，其中液体生物样品穿过一系列的过滤器并用试剂处理，以提供被染色和富集的细胞群用于分析。

一种可能感兴趣的细胞群为循环中的肿瘤细胞或CTC。这是因为在癌症患者中最大的死亡风险通常不是原位的恶性肿瘤，而是在远离原发性肿瘤的组织或器官中转移的形成。少量的细胞可摆脱原发性肿瘤并进入循环系统，成为CTC。虽然大部分不会存活，但是有些不仅仅存活，在有些点处还会穿过内皮壁，在周围组织中形成新的肿瘤。

CTC的检测主要依赖于基于抗体的阳性选择。然而，该技术受限于针对已知肿瘤细胞生物标记物的可用抗体。克服该缺点的一种方法是过滤技术。特别适合于从样品中分离循环中的肿瘤细胞的过滤器已经被描述过，比如参见已公开的专利申请US2006/0254972A1。

然而，尽管有了可用的技术，但是对能够提供将液体生物样品中的组分进行有效率和有效地纯化和富集的装置和方法，本领域仍然存在需要。

发明内容

因此，本发明的目的是提供对在液体生物样品中的组分进行有效率和有效地纯化和富集的装置和方法。

如上所述，通过使用现有技术，人们在评价样品时可能面临一种或多种问题，包括较低的靶细胞密度、污染物，还包括观察非天然细胞所需的专业化训练或设备。此外，现有技术的缺点会使得代价昂贵且耗时，也许是痛苦的重新取样。诊断的延迟会影响病人的结果，因为对于有转移可能的CTC的迅速和精确的检测能够极大增加生存率。

虽然将CTC从患者的血流中除去能够较为有用，但如果被移除的细胞处于足够用于分析的良好状态则更为有益。这种分析不仅可证实在样品中存在靶细胞，而且在其他方面也会有用，如可帮助预测疾病的可能性病程。

本发明满足了现有技术无法满足的这一需要，其方式不仅在于将靶细胞从液体样品中的多种其他细胞和/或污染物中分离出来，还在于提供了处在相对天然状态的被纯化、富集的靶细胞群。

本发明的另一有益效果可能是提供了更快的诊断信息。因为本发明使得可以迅速分离靶细胞，并且提供的细胞处于天然状态，因此从取样到靶细胞分析的时间被最小化。本发明的有效性也可降低对昂贵且耗时的重复采样的需要。

通过包括一系列通过搅动过滤器的液体转移的生理过程，靶细胞被有效和有效率地从更大的样品中移除并处于天然状态。本发明的进一步有益效果是样品中的非目标组分也可保持它们的天然状态。在许多情况下这些组分也同样是感兴趣的。能够观察和分析这些组分的装置和方法也因此是在本领域中的一个更大的进步。

根据本发明的第一实施例，用于样品纯化和富集的装置包括：过滤单元，所述过滤单元具有第一侧部和第二侧部且包括搅拌器；进样口，所述进样口与所述过滤单元的所述第一侧部选择性流体连通；第一贮液器，所述第一贮液器与所述过滤单元的所述第一侧部选择性流体连通；第一抽吸器件，所述第一抽吸器件具有第一抽吸贮器、且与所述过滤单元的所述第一侧部选择性流体连通；第二贮液器，所述第二贮液器与所述过滤单元的所述第二侧部选择性流体连通；压力测量器，所述压力测量器与所述过滤单元的所述第二侧部流体连通，并具有流动停止能力；以及第二抽吸器件，所述第二抽吸器件与所述过滤单元的所述第二侧部选择性流体连通。

所述第二抽吸器件可具有第二抽吸贮器。所述第一抽吸器件和所述第二抽吸器件中的至少一个可以是蠕动泵。压力测量器流动停止能力可涉及夹子或压电膜。

根据本发明的另一个实施例，提供了一种用于所发明的装置的滤筒(cartridge)，包括：过滤单元，所述过滤单元具有第一侧部和第二侧部且包括过滤器，并能够与搅拌器连接；进样口管，所述进样口管与所述过滤单元的第一侧部流体连通；第一贮液器管，所述第一贮液器管与所述过滤单元的第一侧部流体连通；第一抽吸贮器管，所述第一抽吸贮器管与所述过滤单元的第一侧部流体连通；第二贮液器管，所述第二贮液器管与所述过滤单元的第二侧部流体连通；和第二抽吸管，所述第二抽吸管与所述过滤单元的第二侧部流体连通，其中所述滤筒具有至少一个压力测量器的接入点。

在这种实施例中，所述过滤单元可包括搅拌器。

根据本发明的进一步实施例，提供了纯化样品的方法，包括如下步骤：向与过滤器的第一侧部流体连接的进样口提供样品，对过滤器的第二侧部进行抽吸，以将液体从所述进样口抽吸穿过所述过滤器，直到测量到预设的压力，将所述过滤器的第二侧部设置为与含液体的贮器专用地流体连通，对所述过滤器的第一侧部进行抽吸，以将液体从所述贮器抽吸穿过所述过滤器，和将从所述贮器中抽吸穿过所述过滤器的液体收集在容器中。所述过滤器在所述过程的至少很大一部分时间内接受搅动，所述纯化的样品被收集在所述容器中。

在这种方法中，预设的压力当用水柱进行测量时可处于约130-150，优选为135-145，更加优选为140mm H₂O的范围内。

虽然在本说明书中描述的本发明的有益效果经常通过指出被纯化和富集的靶细胞可进行形态学分析而停止，然而对于本领域技术人员显而易见的是，还有很多与此技术相关的下游应用。例如，评估转移的可能，筛选高危人群，诊断疾病，预测疾病，预测治疗结果，包括评估药物敏感性、监测疾病状态、监测治疗反应、优化治疗方案，以及开发新疗法，这只是几个例子。

除非另外声明，否则本说明书中使用的所有技术和科学术语与本领域技术人员所通常理解的含义相同。所泛泛提及的设备和方法均属广为人知并在本领域所经常应用到。

样品可从任何来源，例如有机体获得。样品可包括拭子提取物、痰、尿、或粪便样品、身体内侧区域的液体如支气管液、脐带血、骨髓穿刺液、腹水液，或内周或外周血液。其可包括添加剂如抗凝剂或稳定剂。

靶细胞是所感兴趣的特殊类型的细胞，可能会或可能不会存在于样品中。非靶细胞是那些优选被除去的细胞，即使对它们的分析可能是感兴趣的。

“过滤器”是指包括具有特殊尺寸的一个或多个开口或孔的结构，可使得比该尺寸小的颗粒通过到过滤器的另一侧，同时防止比其大的颗粒穿过所述过滤器。它可能由任何材料，例如，塑料、陶瓷、硅、金属或玻璃构成。所述过滤器可能是微制造或微机械的，或者，其可能是更为常规的过滤器，例如由尼龙、聚碳酸酯、纤维素等等制成的单纤维或多纤维的过滤器。过滤器可能被处理过以改变其表面性质，例如增加了亲水性。

在本说明书中，使用的与本发明有关的组件和材料通常被明确或隐含地描述为是一次性的。本领域技术人员应该意识到对于常常倾向于使用一次性的材料的这类装置和方法的无菌和去污的需要。此外，对所述一次性材料的消毒和记录所需要的时间和材料，以及发生错误的风险，通常使得这条路线不是那么有利。然而，这无论如何不应当被认为是在希望和适当的时候排除了对可回收材料的使用。

附图说明

参考附图，通过示例方式对本发明的各种方面进行描述，其中：

图1为本发明的一个实施例的示意图；

图2为本发明的一个进一步实施例的示意图；

图3示出了未处理的膀胱冲洗的样品；

图4示出了按照本发明处理后的图3的样品；

图5示出了未处理的腹水样品；和

图6示出了按照本发明处理后的图5的样品。

具体实施方式

如上所述，本发明涉及用于样品纯化和富集的装置和方法。通过参考图1的实施例，本发明的装置10包括过滤单元11，过滤单元11具有第一侧部12和第二侧部13且包括搅拌器(未示出)。过滤器的第一侧部12和第二侧部13总体上相对，但并不必须严格地彼此相对。根据实际过滤材料的配置和布局，过滤器的相对位置可能共同靠近或进一步分开。

过滤单元11包括过滤器(未示出)，该过滤器可以是本领域已知的任何合适的过滤器。所述过滤器的孔径应该基于对在样品中可能含有的感兴趣的靶细胞和预计的非靶细胞这两者和/或污染物的考虑来进行选择。例如，当使用本发明的装置10对包含血细胞的样品进行纯化和富集CTC时，优选处于10pm范围内的过滤器尺寸。所述过滤器本身的大小可根据装置和目的进行变化。在本发明的一个实施例中，使用的是标准商业化的22mm直径的过滤器，能够过滤约15,000-20,000个细胞。

设置的与所述过滤单元11连接的搅拌器使得在过滤期间能够使用机械振动，以最大化装置10的效率和精度。在任何方向上的机械搅动(相对于所述装置的全部方向)可能是有效的，然而，据发现在水平方向上的搅动对于本发明的装置10中的生物样品特别适宜。例如，对于包含一定的顶部空间用于气体来回水平运动的过滤单元进行搅动，可以使得所述过滤单元内的液体以环流进行旋动。这种运动看上去有效且同时温和。优选搅动的范围是1000-2000Hz。这一范围通常使得有效地利用了过滤器的完整表面积，同时不会强烈到对样品中的组分带来损害或导致破裂。

在本发明的装置10中，各种组件通过一系列的管14与彼此流体连通。该装置广泛的应用范围伴随着对于市场上可买到的管道的较大的选择度。优选使用对于生物液体和其组分无活性的材料。此外，当测定系统参数，例如速度和压力时，管道的长度和直径，尤其是内径就应该予以考虑。在某些情况下，可优选使用内径在2mm的范围内的硅管道。

虽然本说明书中描述的通常是弹性圆柱形式，本发明的管14可包括非弹性和/或非圆柱的材料。例如，玻璃或金属制成了圆柱体或其他形状。所述管道用于从本装置的各种组件和其之间运输液体的目的，以及同样地取决于整体单元所选择的尺寸和构造可能使用多种形式。本领域技术人员应该明白，所述管道的内部尺寸应该足够大到可容纳样品中的细胞，应该知道接近细胞尺寸的直径可导致装置内对于液流的脉冲的产生或其他不希望的影响。

提供了多种选择器件15，使得在装置的各种组件之间可选择性地流体连通。选择器件可通过手动或自动控制而引导和终止液流通道。例如，可使用双向阀，双向阀可被调节到第一位置处，使得第一组件与过滤器流体连通，然后旋转到第二位置处，使得第二组件与过滤器流体连通。在装置10的不同区域，选择器件15可能不同，例如有些可能是手动，有些可能是自动。

多种组件与过滤器12的第一侧部，包括进样口16、第一贮液器17和第一抽吸器件18流体连通。

进样口16可以是接口或其他器件，使得可向系统加入液体样品。或者，它可包括盛放器或容器，例如试管。在其最简单的形式中，其仅仅是管14的延伸部，可被设置为与样品连通，而该样品可通过例如试管而进行提供。由于对，即，污染物和安全的关心，样品中的内含物优选被封闭，例如通过以有塞试管而提供样品，并且将所述进样口配置为管端的针，该针被插入该有塞试管中。

向装置10设置第一贮液器17。在使用初期，在第一贮液器17中存有液体。其用途会在下面以示例进行进一步地描述，然而，能够注意到，第一贮液器中的液体至少用作一般的冲洗或漂清的目的，因此优选为生理中性的。合适的液体包括磷酸盐缓冲盐水(PBS)、Hank′s缓冲盐溶液、(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)缓冲液，以及其他的具有生理中性pH和约270-330mOsm/kg渗透压的缓冲液。

第一抽吸器件18能够向过滤器的第一侧部12提供抽吸，有效地将液体从过滤器的第二侧部13抽吸到过滤器的第一侧部12处。第一抽吸器件18设有第一抽吸贮器(未示出)，能够收集液体和其中悬浮的颗粒。在其最简单的形式中，第一抽吸器件18可为注射器，其塞子可被拉出以产生抽吸，其内腔提供贮器。或者，第一抽吸器件18可以是蠕动泵。

还有多种与过滤器的第二侧部13流体连通的组件，包括第二贮液器19、压力测量器20和第二抽吸器件21。

第二贮液器19最初设置到装置10上时含有液体。下面会对其用途做进一步描述，然而，该液体优选为生理中性的，因此使用的构成第二贮液器19的材料优选为非反应性的。第二贮液器19的大小和/或容量取决于装置10的计划的用途，也会取决于第二贮液器19是否适于作为固定部分或其是否在每次使用完装置10后进行互换。

压力测量器20使得用户(或自动监测装置)可监测装置内存在的真空度。通过校准，该测量会确定何时过滤器已经被靶细胞充分饱和。压力测量器20可包括显示器。

压力测量器20进一步使得用户可对样品进行标准化处理。通过依靠内部系统的压力，可以避免对于及时预筛选步骤的需要，而这一步骤会对测定样品中颗粒物质的浓度有益。由于样品和有机体的起源会有不同，因此也将样品进行评估。此外，在某些情况下用户可以选择稀释样品，使得其可被用于多种目的，或使得纯化和富集的方法最有效地起作用。

合适的压力测量器20的示例为水柱。当使用这种压力测量器20时，对于装置10的合理工作范围是130-150mm H₂O。优选135-145mm H₂O的范围。大约140mm H₂O可能是特别有效的。

如果装置10至少部分自动化，压力测量器20可能与选择器件15或其他流通控制器件连接，从而，在达到特定的预设压力时，该系统的这些方面进行啮合或解开。

尤其是对于希望自动化的，压力测量器20不必包括显示器件，因为其为水柱所固有。相反，其可包括探测压力的电子传感器。由压力测量器20获得的信息可被传输到中央控制单元，中央控制单元会发出命令，利用压力测量器20的流动停止能力，在装置所选择的区域处停止或启动流动。

流动停止能力可通过利用例如膜来实现。一种示例为压电膜。也可考虑简单的流动停止，例如夹子或卷边，能在啮合时将软管物理变形，从而停止穿过该管的流动。通过除去夹子或卷边，流动可再次开始。

在使用物理器件以实现压力测量器20的流动停止能力时，该物理器件并不一定需要位于该装置上的与压力测量器20完全相同的位置处。

压力测量器20可以是直接测量压力的器件；或者它能够收集用于计算压力的信息。

虽然压力测量器20在进行样品的初始穿过过滤单元11时起作用，但在随后的使用装置10的步骤中它可能不是必需的。但是，尤其是在自动化的系统中，可继续测量内部系统压力用于统计目的和/或作为安全检查，可能探测到系统中的故障。

第二抽吸器件21能够向过滤器的第二侧部13提供抽吸，有效地将液体从过滤器的第一侧部12抽吸到过滤器的第二侧部13处。可提供一种可选的第二抽吸贮器(未示出)，该抽吸贮器能够收集液体和其中悬浮的颗粒。

第二抽吸器件21可以是注射器，其塞子可被向外拉出以产生抽吸。如果需要的话，注射器的内腔可用作贮器。或者第二抽吸器件21可以是泵，例如是蠕动泵。装置10的用途会在下面进一步描述，然而可以注意到，如果对非靶细胞感兴趣的话，则优选提供第二抽吸贮器，以方便储存这些细胞。

本发明的装置10的进一步实施例在图2中示出。在该图中，为减少图示，并非管道14的每一部分均用附图标记进行标注。

在图2的实施例中示出了多个选择器件15。与过滤器的第一侧部12流体连通的选择器件15在本实施例中为三通阀，而与过滤器的第二侧部13流体连通的为双向阀。

图2的实施例具有一个可选的元件构造，通过单独的选择器件15和管14将所有与过滤器的第一侧部12连接的组件进行分组。与过滤器的第二侧部13连接的组件也与图1的实施例具有不同的构造；这里压力测量器20并非通过选择器件连接，而是通过一个第二贮液器连接，或者第二抽吸器件21可能与系统在任何时候进行流体连通。

对本领域技术人员应该是显而易见的是，进一步的构造是可能的且在本发明的范围内。此外，多个装置可依次连接或并联。

在对样品优选或甚至必须保持较低操作温度的情况下，例如，在非常希望可停止细胞活动以利于进一步分析或活动的情况下，根据本发明的完整装置可被设置在冷藏单元或冷藏室中。在其他情况下，可能足够将系统内使用的液体试剂设置在特定的温度下，例如，在约0-4℃之间。

如前所提及的，可考虑根据本发明的装置的大多数或所有组件可以是一次性的。具体地，可考虑与按照本发明的装置的组件一起提供一次性的滤盒或滤筒。这种盒优选包括条形码或粘附条形码的空间，以帮助利于样品的电子加工。另一种选择是可被结合进入或添加到所述盒中的电子识别器。

对于本发明有用的滤盒或滤筒包括过滤单元，可以包括搅拌器。或者，所述过滤单元可简单地能够通过搅拌器进行连接或啮合。也提供了多个管，分别将所述过滤单元的第一和第二侧部与所述装置的贮器和入口连接。至少设置了压力测量器的一个接入点，所述压力测量器本身可被归入盒中。所述接入点可以简单地为管道中插入传感器的位置。

本发明的装置可以手工操作；或者可以部分或完全自动化操作。为减少标记，图1被本处所引用到。

如果需要的话，所述系统和/或过滤器可以填充液体。向与过滤单元11流体连通的进样口16进样。可选地，样品在执行本发明的方法前进行预处理。例如，为减少细胞弯曲的倾向，从而能够穿过比它们的总体直径更小的孔，它们可被固定。

当分析血液样品时，血浆可与被标准0.37％甲醛溶液处理过的细胞分离开。PBS或其他中性液体继而可被加入最多为原始样品的量。虽然不希望被理论所束缚，但据认为，细胞在加入甲醛后会被固定或更加刚性，使得它们以与它们的直径更紧密相关的方式穿过或不能穿过过滤器，较少紧密地与它们能够弯曲穿过过滤器孔的能力有关。

相关的选择器件15被配置为使得第二抽吸器件21与过滤单元11流体连通。第二抽吸器件21被啮合，因此通过进样口16将液体和悬浮颗粒抽吸到过滤单元11中。

可使用合适范围的压力，取决于样品种类和装置的构造。通过使用压力测量器20，有可能大约计算出过滤单元11被靶细胞饱和到什么程度。在适当的时候，例如，当使用的水柱指示出大约140mm H₂O时，第二抽吸器件21停止使用抽吸，进样口16不再与过滤单元11流体连通。

这一步起到了将比过滤器的孔径小的非靶细胞和污染物抽吸通过过滤器的作用，使得靶细胞被留在过滤单元的第一侧部上。

另一种可选的预处理是使用已知的材料和方法以实现选择性的细胞裂解。这可以使得使用本发明的装置会更快或更有效地过滤。

第一贮液器17被设置为与过滤单元11流体连通，第二抽吸器件21再一次啮合，从第一贮液器17中抽吸液体穿过过滤单元11。

这一步起到了漂清或清洗残余的非靶细胞的系统的作用。第一贮液器17与过滤单元解除流体连通，第二贮液器19与系统连通。第一抽吸器件18被啮合，从第二贮液器19中抽吸出液体并穿过过滤单元11。因此被抽吸的液体被收集在第一抽吸贮器(未示出)中。

部分由于液体的流动，以及通过过滤器的振动进行增强，留在过滤器的第一侧部12上的靶细胞悬浮在穿过的液体中并被运送到第一抽吸贮器中。从该点处，它们可进行直接观测或分析、治疗或染色，或者转入另一个装置或存储器中。

优选地，第二抽吸器件21被再一次用于从第一贮液器17中抽吸液体穿过过滤单元11，随后通过第一抽吸器件18从第二贮液器19中抽吸其他的液体。更加优选的是刚刚上面提到的双向液体转移步骤被重复两次或三次或更多次。这些交换帮助保证样品中的颗粒从过滤器中被完全移除，帮助清洗装置10的内部组件。

使用按照本发明的装置10的一个实施例(包括第二抽吸贮器)进行的分析显示，样品中至少96％的细胞在第一或第二抽吸贮器中被捕捉到，显示了本装置出色的效率。

实施例1 被红细胞污染的膀胱冲洗

在生物体上进行膀胱冲洗，收集可能有悬浮细胞和污染物的冲洗液。对于样品的染色液滴进行的初步显微分析证实存在大量红细胞和少量的可能的靶细胞，参见图3。剩余的样品被加入到本发明的装置的进样口中并过滤。

处理时间约为10分钟。本装置在第一次抽吸样品穿过过滤器时达到的最大压力是140mm H₂O。在第一抽吸贮器中被捕捉到的材料放于玻片上并染色。通过显微镜观察，被纯化和富集的靶细胞以其天然状态被很容易地观测到，参见图4。

为了进行对照，使用了第二抽吸贮器。在第二抽吸贮器中被捕捉到的材料放于玻片上并染色。通过显微镜观察，显示了很多的红细胞和上皮细胞。基于对捕捉到的靶细胞和非靶细胞的分析，靶细胞的回收收率经计算≥95％。

实施例2 被上皮细胞污染的腹水液体

获得了腹水液体样品。该液体的染色液滴在显微镜下观察，显示出大量的上皮细胞和少量可能的靶细胞，参见图5。剩余的10ml样品被上样到200ml进样口管中，并用本发明的装置进行过滤。

该过程在大约10分钟内结束，在此期间，在样品穿过所述过滤器的第一次抽吸时达到的最大压力为140mm H₂O。在第一抽吸贮器中被捕捉到的材料放于玻片上并染色。通过显微镜观察，被纯化和富集的靶细胞以其天然状态被很容易地观测到，参见图6。

实施例3 二级纯化和富集

提供了含细胞(包括外周血细胞)的样品。所述细胞按照已知技术进行化学裂解。细胞内含物被上样在按照本发明的装置的进样口管中。

通过使用过滤器执行第一过程，所述过滤器的孔能够允许大多数亚细胞成分的自由穿过，但会保留最大的：细胞核。在所述系统的这次操作后，细胞核被留作后续使用，被收集在第二抽吸贮器中的其余的成分被除去。所述系统被再次准备使用，先前被收集在所述第二抽吸贮器中的成分被上样在进样口中。

使用过滤器执行第二过程，所述过滤器设的孔能够使大多数细胞成分自由通过，但从该部分中保留了大的线粒体。在该过程之后，收集在第二抽吸贮器中的细胞核、线粒体和剩余的成分被分别进行分析。该分析证实了所发明的装置能够利用多阶段分离策略进行使用，以较快和有效的方式获得液体样品中不同大小的成分，在该情况下为裂解细胞的亚细胞成分。这些因此被分离的成分均处于其天然状态且大部分上未受干扰，使得可以根据需要进行进一步地分析。

前面的描述和实施例仅仅是出于说明本发明的目的，而并非是对其的限制。由于本领域技术人员可以结合本发明的精神和内容对描述的实施例进行修改，因此本发明应该被广义地解释为包括了位于所附的权利要求和其等效物范围内的所有变型。

Claims

1.一种用于样品纯化和富集的装置，包括：

过滤单元，所述过滤单元具有第一侧部和第二侧部且包括搅拌器；

进样口，所述进样口与所述过滤单元的第一侧部选择性流体连通；

第一贮液器，所述第一贮液器与所述过滤单元的第一侧部选择性流体连通；

第二贮液器，所述第二贮液器与所述过滤单元的第二侧部选择性流体连通；

第二抽吸器件，所述第二抽吸器件与所述过滤单元的第二侧部选择性流体连通；

其特征在于，还具有

第一抽吸器件，所述第一抽吸器件具有第一抽吸贮器，且与所述过滤单元的第一侧部选择性流体连通；以及

压力测量器，所述压力测量器与所述过滤单元的第二侧部流体连通，且具有流动停止能力。

2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述第二抽吸器件具有第二抽吸贮器。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的装置，其特征在于，所述第一抽吸器件和所述第二抽吸器件中的至少一个为蠕动泵。

4.根据权利要求1或权利要求2所述的装置，其特征在于，所述压力测量器包括夹子或压电膜中的至少一种，所述夹子或压电膜能够停止或启动所述装置的至少一部分中的流动。

5.根据权利要求3所述的装置，其特征在于，所述压力测量器包括夹子或压电膜中的至少一种，所述夹子或压电膜能够停止或启动所述装置的至少一部分中的流动。

6.根据权利要求1或权利要求2所述的装置，其特征在于，所述搅拌器被设置为在水平方向上进行机械振动。

7.根据权利要求3所述的装置，其特征在于，所述搅拌器被设置为在水平方向上进行机械振动。

8.根据权利要求4所述的装置，其特征在于，所述搅拌器被设置为在水平方向上进行机械振动。

9.根据权利要求5所述的装置，其特征在于，所述搅拌器被设置为在水平方向上进行机械振动。

10.一种使用根据权利要求1-9任一项所述的装置纯化样品的方法，包括以下步骤：

向与过滤器的第一侧部流体连接的进样口提供样品；

对过滤器的第二侧部进行抽吸，以将液体从所述进样口抽吸穿过所述过滤器，直到测量到预设的压力；所述预设的压力当用水柱进行测量时处于130-150mm H₂O的范围内；

将所述过滤器的第二侧部设置为与含液体的贮器专用地流体连通；

对所述过滤器的第一侧部进行抽吸，以将液体从所述贮器抽吸穿过所述过滤器；和

将从所述贮器中抽吸穿过所述过滤器的液体收集在容器中；

其特征在于，所述过滤器在所述过程的至少很大一部分时间内接受搅动，

其中所述纯化的样品被收集在所述容器中。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述预设的压力当用水柱进行测量时处于135-145mm H₂O的范围内。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述预设的压力当用水柱进行测量时为140mm H₂O。

13.根据权利要求10-12中任一项所述的方法，其特征在于，所述搅动为水平方向的机械振动。

14.根据权利要求10-12中任一项所述的方法，其特征在于，在所述收集步骤以后进行至少一次如下的双向液体转移步骤：

将所述过滤器的第一侧部设置为与含液体的第一贮液器专用地流体连通；

对所述过滤器的第二侧部进行抽吸，以将液体从所述第一贮液器抽吸穿过所述过滤器；

将所述过滤器的第二侧部设置为与含液体的第二贮器专用地流体连通；

对所述过滤器的第一侧部进行抽吸，以将液体从所述第二贮器抽吸穿过所述过滤器；和

将从所述第二贮器中抽吸穿过所述过滤器的液体收集在容器中。

15.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，在所述收集步骤以后进行至少一次如下的双向液体转移步骤：

16.根据权利要求10-12中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品为生物样品。

17.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述样品为生物样品。

18.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述样品为生物样品。

19.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述样品为生物样品。

20.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述样品包括循环中的肿瘤细胞。

21.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述样品包括循环中的肿瘤细胞。

22.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述样品包括循环中的肿瘤细胞。

23.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述样品包括循环中的肿瘤细胞。