HU230473B1 - Polialkilén polimervegyületek és azok alkalmazása - Google Patents

Polialkilén polimervegyületek és azok alkalmazása Download PDF

Info

Publication number
HU230473B1
HU230473B1 HU0500457A HUP0500457A HU230473B1 HU 230473 B1 HU230473 B1 HU 230473B1 HU 0500457 A HU0500457 A HU 0500457A HU P0500457 A HUP0500457 A HU P0500457A HU 230473 B1 HU230473 B1 HU 230473B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
group
modified
beta
biologically active
alkyl
Prior art date
Application number
HU0500457A
Other languages
English (en)
Inventor
Kochung Lin
R. Blake Pepinsky
Ling Ling Chen
Donna M. Hess
Edward Y. Lin
Russell C. Petter
Darren P. Baker
Original Assignee
Biogen Idec Ma Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biogen Idec Ma Inc. filed Critical Biogen Idec Ma Inc.
Publication of HUP0500457A2 publication Critical patent/HUP0500457A2/hu
Publication of HUP0500457A3 publication Critical patent/HUP0500457A3/hu
Publication of HU230473B1 publication Critical patent/HU230473B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/31—Somatostatins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/34—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from hydroxy compounds or their metallic derivatives
    • C08G65/48—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L71/00—Compositions of polyethers obtained by reactions forming an ether link in the main chain; Compositions of derivatives of such polymers
    • C08L71/02—Polyalkylene oxides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L2203/00—Applications
    • C08L2203/02—Applications for biomedical use

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Polyethers (AREA)

Description

A találmány űj políaikilénglikol vegyöletekre, a polimerek és fehérjék könjpgtemfea és azok alkalmazásaira vonatkozik,
Hidrofil polimerek mint pölíalkilénglikol polimerek, melyek polialkilénoxidokként is ismertek - biológiailag aktív molekulákhoz és .telületekhez való kovalens' kapcsolása érdeklődésre tan számot a biotechnológia és a gyógyszerészet területem
Különösen poií(etíiéngiikoi) (PBG)S ami poli(etílén-omd) (PBO) néven jelentése Ismert alkalmazáaára koueentrálnak a kutatások, mivel azok konh^áótmai jobb oldákonysággal és
W stabilitással rendelkeznek és meghosszabbítják a molekulák vérkeringésbeli felezési idejét. Legáltalánosabb formában a PEG egy lineáris polimer, amelynek mindkét vége lúdroxilesoporítal van lezárva:
HÖ-CH2CBiaCCHáCH2GVCll2CH2-C3íl
A fenti polimer ···· az alfa,otnega~dlhídroxipoli(eúléngiíkol} - a HO-PEG-OH képlettel is jellemezhető, amelyben a ~PBG~rész a következő szerkezeit egységet jelenti:
-CHaCHíO-CCHsCHiOVCHzCHs-, áltól n jelentése tipikusan a kb, 4 ~ kb, 10 ÖÖO intervaiitmtha tartozik, A PBG-et általában metoxi-PBG-OH (mPEG) formában alkalmazzuk, amelyben az egyik végen egy relatíve Inért metoxiesoport, míg a másik végén egy hidroxilcsopott található, amely utóbbi könnyen alávethető kémiai átlákitásoknak, Bzen túlmenően különféle alkllén-oxldok {például etilen-oxid és propilén-oxld) különféle random- vagy blokk-kopolimeríei, amelyek közel állnak a PEG-oez Kémiai szerkezeinket nézve, számos alkahnazésban Fbti-gd heh eftesítKelek
A FBG-nek a kiválasztod nxdeknláhox. való kapcsolásánál gyakran, szükséges a PEG-et aktiválni oly módon, hogy a PBö-nek egy olyan származékát állítjuk elő, amely legalább az egyik végén reaktív funkciós csoporttal rendelkezik, A funkciós csoportot a PEG-hez kapcsolandó molekulán található megfelelő reaktív csoport típusa határozza meg,
A PBG egy olyan polimer, amely vízben és számos szerves oldószerben oldódik, nem toxikus és nem immnnogén, Amennyiben a PBG-el kovalensen kapcsoljuk egy oldhatatlan molekulához, akkor egy oldható PBÖ/moleknla konjugátamot kapunk. Például ismertették már, hogy a vízben oldhatatlan paelitaxei gyógyszer FBö-hez való kapcsolással vízoldékonnyá tehető (Greenwl.d és társai 3, örg, Chem., 60:331-336 (1995)},
Az elövegyület alkalmazása esetén, amikor egy gyógyszert egy komplex molekula (elövegyület) fiziológiai körülmények között történő degradál ásával szabadítunk fel, fontos komponens a győgyszerbotdozö. Az elővegynietékG előállíthatjuk például dgyf hogy a PBG-sí fiziológiai körölmények között bontható kapcsolódással kötjük a gyógyszerhez A FEG-elövegyüleíek m vrra élettartama függ a PEG és a gyógyszer közötti kapcsolódást kialakító funkciós csoportok) típusától. Például PEG-kathonsavak vagy aktivált PEG-karbonsavak és a vegyiUet.cn található alkoholcsoportok reakciójával keletkező észáerkapesolódások fiziológiai körülmények között hiárolMbak és igy felszabadul a gyógyszer, míg a gyógyszeren található mninesoportokböl kialakított amid- és karbaxnátkapesolödások stabilak és nem szogáltatják a szabad gyógyszert hidmlizíses ótöm Bemutatták, hogy PBG~ész.terekhől származó hidroliükus gyógyszerhordozók. bizonyos ménekig előnyösen kötMröllálhatök a terminális PEG-ofogén és a kapcsolódó karbonsav vagy karbonsavszármazék karbomlesoportjn közötti térkitöltőben (spaeer) helyet foglaló meülénesoportok számával. Példáid Harrís és társai az 5 672 őö2 számú amerikai szabadalmi iratban PBG-bníánsaval és PEG-propánssvat és azok aktivált származékait írják le alternatívákként a karboximettl-PEG helyett olyan vegyietek esetében, amelyeknél az észterszármazék: kisebb hídrolitlkas reaktivitása az előnyös (lásd általában a WO 01/46291 számú szabadalmi iratban feltártakat^
A fehéfieszerii anyagoknak orvosi kezelésekben való alkalmazhatóságának egyik korlátozó tábora az, hogy azok parenterális adagolás esetén rövid időn belül eliminálódnak a testbők Az. elimináció oka a proteázok által végzett lebontás vagy a szokásos úton történő fehéíjeklsfálasztás, például a vesék szőrőhatása révén. Az ilyen anyagok orális adagolása még problemsfikusabh, meri a gyomorban lezaj ló proteolízlsen kívül a gyomor erős savassága Is roncsolja az anyagokat, mielőtt elérnék a megcélzott szövetet; A fehérjék adagolást módozataihoz kapcsolódó problémák jól ismertek a gyógyszeriparban és azokat többféle stratégiával igyekeznek megoldani. Számos olyan megoldási publikáltak, amely a tehérjestabilizálással foglalkozik. Sok esetben a fehérjéket polimer típusú anyagokkal konjugálják, ahol példán! a kővetkezőket alkalmazzák ilyen célra: dexttánok, poutvlnil-pin‘0lidon)-ok, ghkopeptidek, poliefiiénglikoiok és polianúnosavak:, A kapott konjugált pohpeptidekrol leírták, hogy megtartják biológiai aktivitásokat és parenterális alkalmazáshoz szükséges vízben való oldékonyságúkat. Különös nagy érdeklődés kíséri az interferonok biológiai aktivitásának a növelését, a tozieitását csökkentése mellem ami a humán betegek kezelése során jelentkezik. Az interferonok a természetben előforduló kisméretű fehérjék és glikoproiemek egy családját képezik, amelyeket a sejtmaggal rendelkező sejtok legtöbbje termel vírusos fertőződések és egyéb antigén sthnulnsok hatására. Az interferonok rezlnszíensaé teszik a sejteket vírusos fertőzésekkel szemben és számos egyéb hatással is bírnak a sejtekre nézve. Sejtnktivitósuk kifejtése során a sejtfel színen található specifikus mernbránreceptórokhoz. kötődnek. A sejtmembránhoz való kötődést kővetően az Interferonok intrasejtnlárís események komplex sorozatát índitják el, /« vővo tanulmányok bemutatták, hogy ezek közé tartoznak a következők; bizonyos enzimek indukálása; sejts^poítas elnyomása, imrainnuoduláeiős hatások, mint matecíagok fagoeita aktivitásának a növelése; & célsejtekre irányúié llmtoeiták specifikus eítotcxlcltásának a növelésé; a vírussal fertőződ sejtekben a vímsrepfikádó gátlása.
Az Intcrfecuckat többféle klinikai betegség kezelésében tesztelték. A humán interferonnak szklerézls multiplex kezelésében való alkalmazhatósága megalapozódnak bizonyuk.
A rekombinfe mtorterombéianak két formáiét gyártják Európában és az USA-ban ezen betegség kezelése céljára: mterteron-béta-la ÍAYONEX ®, Biogen, Inc., Cambridge, MA és Β.ΕΒΙΡΦ, Semno, öenf Svájc) és inlerferon~béta4b (BETASERON^, Berlex, Richmoud,
CA). Interferon-béta-la-t emlős sejtekben termeltetik természetes humán génszekvenciát, alkalmazva, és a termék gUkozliczert, míg az mterféwn-béta-1 b-t £, coll baktériumban termeltelik olyan módosított humán génszekveadával amely génsebészeti úton végrehajtod. ciszteb ~v szerm cserét tartalmaz az .ammosav 17~es pozielójában, és a termék nem gidtozilezctt.
Nem-itnninnogén mterferonok, melyek közé tartóznák az alfa- és béta interferonok, a banán immunhiányosságot okozó vírus (O1Y) ellen, hatnak mind akuton, mind krónikusan fertőzött sejtekben [lásd Poii és Fanéi, AIDS Research and Humán Retrovíruses & 2 k 131-197, (1932}]. Az Interferonokra, ezen belül az alfa-interferonokra jelentős figyelem irányul, vírusellenes hatásuk miatt a hepatitisz-C vírussal (HCV) kapcsolatba hozható betegségek kezelésénél [lásd Höofhagle és társai, Vísal Hepatitis, International Symposmm (1981), Philadelphia,
Pmnklm insfitute Press (1982); Hoofeagle és társai, New Eng, I Med, 315:1575 -1578, (1986); Thomson. Láncét 1:539-541 (1987); Kiyosaw&és társai, Zeekerman, ed., Yiral Hepatitis aad kiver Dísease; Alién K. üss, New York, 895-897 oldalak (1983); floofhagle és társai, Sem. Elv. D j.s 9:259-203, (1985}.]
Interferon-polimer kcmjngátnmokaf ismertetnek például a következő szabadalmi iratok25 tat U J. 4.766 106, Ü.S. 4 917 888, KP 0 236 987, EP 0 510 356 és WO 95/13090,
A WO 00/23114 irat interferon béta- la polimer konjngátnmail és azok alkalmazását ismerteti.
A krónikus hepatkbz-C egy alattomos és lassan fejlődő betegség, ami jelentős kihatással van az életminőségre. A véradások biztonságának növelése és az adott vér HCV-re való tesztelése ellenére a transzfúzién átesett egyének kb. 5-10 %-a akut fertőzést, szenved el a teslések szerint, [lásd Altér és társai, Zuekerman, ed., Yíral Hepatitis and Elver Dlsease, Alton K t iss. New York, 537-542. oldalak (1988)j. így az Amerikai Egyesült Államokban az évente tmnszfbz.iót kapó kb. 3 millió emberből kb. 150 000 akut. hepatítlsz-C fertőzést kap. Míg a hepaiíhsz-€ vírussal érintkező betegek közöl sok nem mutat kbmkaf tünetet vagy csak enyhe lefolyású a betegség, az esetek kb. 50 %-áhan kialakul a krónikus betegség állapota, ami változó szárúm tmnszammáz abnormahtásokkai és májhlopsziákhan mutatkozó gyulladósós láziókkal jellemezhető. Ezen csoport kb< 20 %-áig terjedő mériékhen fejlődik ki clnózis [lásd Koretzés társai, Gastroenferology 88:1251-1254 (1984)].
Az interferonokról ismert, hogy számos módon hatnak a sejtfunkciókra, ideértve a
DXS-replikáeióh az ENS- és fehér]eazintézisi, mind normális mind abnormális sej tekben, így az interferon eímtoxikus hatását nem korlátozzuk csak rákos vagy virusfertőzőtt sejtekre, hanem megjelenik normális, egészséges sejtekben is. Ennek eredményeképpen nem kívánatos mellékhatások jelentkezhetnek az interferon terápia alatt, kOnbsen .amikor négy dózis szűk10 ségeltetík. Az interferon adagolás vezethet míeloszupresszióhoz, azaz vörösvérsejtszám-esökkónést eredményezhet, továbbá csökkentheti a fehérvérsejt- és a vérlemezke-sziuteket. Az interferon általában növeli a nátha jellegű szúnptórnákat (például láz, remegés, fejfájás és fazás), gyomor-hélmndnaeií rendellenességeket (például anorexia, émelygés, hasmenés), szédülés és köhögés, A BCV -betegek gyakran kismértékben reagálnak bosszú távon a nem
IS PEG-ilezett interferon kezelésre, és a kezelés számba komoly mellékhatást okozhat, ideértve többek között a retmopáíiát, a pajzsmírigy-gyullaá^ akut pankmatitíszt én a depressziót.
Az interferon terápiával gyakorta kapcsolódó nem kívánatos mellékhatások korlátozzák az interferon kezelések terápiás hasznosságát. így folyamatosan fennáll az igény az. ilyen kezelés terápiás előnyeinek a növelésére, miközben a.nem kívánatos mellékhatások csökkennek vagy eliminálódnak,
A jelen feltárás tárgyát áj polialkiiénghkol vegyöletek, ezek korpugátumal és alkalmazásuk képezik,
A feltárás alapján a jelen találmány a (XXIIa) általános képlettel rendelkező konjogátumekat szolgáltatja, ahol
F jelentése egy puli aikil énglíkoi polimer;
X jelentése O;
Z jelentése egyenes vagy elágazó láncú, telített vagy telítetlen Cj - aikil- vagy hetsroalkil-csoport, Cs - Cs telített vagy telítetlen, gyűrűs aikil- vagy gyáros beteroalkU-csoport, helyettesített vágy helyettesítetlen tói- vagy heterotói-caoport. vagy helyetekéit vagy helyettesítette alkarilescport, ahol az alkilcscjmrt jelentése C? - C^e telített vagy telítetten aikil- vsgy heteroalktól-esoport, ahol a szteztltuensek jelentése a következők közűi választott csoport: balogén&tom. bídroxlH karbon!!-, karboxílát-, észter-, fb.rm.h-, ae.ll-, fiokarbonil-, iioészrer-, tioacetát-, doformiát, alkom-, fosztod!-, foszforét-, foszflnát-, amino-, amidé-, •«midin-, imm~, cmuo-s ohm-, azidö», smüihiánh, sznlfáó, szuifonát-, smhíkmoh-, szulfónami5 do-, szulfónlK hetetoeikiil·, arabul-, aromás csoport, hetcroaromáa csoport, i«$ho~, s&üil-, éter- és alklltloosoport;
Kijelentése egy kapesoiócsoport. amely az alábbiak közül választód csoport és egy biológiailag aktív molekula közötti reakcióval képződik; aldehid, aldehid-hidrát és acetál;
B jelentése egy biológiailag aktív molekula vagy annak prekurzora, ahol a biológiailag aktív molekula egy míerfeton-héíar és n jelentése ö vagy 1 - 5 értékű egész szám.
Egy kapcsolódó .megközelítésben a találmány gyógyszerkészítményeket szolgáltat tégelyek a találmány szerinti konjugátumot és gyégyazerészetileg elfogadható vivoanyagot tártál· máznák.
Egy további megközelítésben a találmány konjugátumot szolgáltat vírusfertőzésre érzékeny betegek kezelésében történő alkalmazásit.
Bgy további megközelítésben a találmány konjngátmnot szolgáltét autoimmun betegséggel rendelkező betegek kezelésében történő alkalmazásra.
Egy további megközelítésben a találmány konjugátumot szolgáltat terápiában történő alkalmazásra.
A jelen találmány és megvalósítási módjai a mellékelt igénypontokban kerülnek meghatározásra.
Hacsak másképpen nem jelezzük, az összes technikai es tudományos kifejezés jelentése megegyezik a találmány szakterülete szerinti szakemberek által általánosan éAedekkek Bár a gyakorlatban vagy a jelen találmány tesztelésénél a leírtakhoz hasonló vagy azokkal ekvivalens módszerek és anyagok alkalmazhatok, az alábbiakban ismertetünk néhány alkalmas .módszeri és anyagot. Ezenkívül a, megadott anyagok, módszerek és példák csupán a bemutatást szolgálják, a korlátozás szándéka nélkül.
A találmány további jellemzői és előnyei nyilvánvalóak a kővetkező részletes ismertetés és az Igénypontok alapján.
AZ ÁBRÁK RÖVID ISMERTETÉSE
A jelen feltárást, amely magában foglalja a jelen találmány szerinti megoldást, & mellékelt ábrákkal szemléltetjük, ahol az 1. ábra. egy redukáló SDS-PAGE gélt ábrázol, amely a nem-módosított ΙΕΝ-β-la és a 20 kö mPECí-Ö-2-mctílpröpíonaldebiddel módosított IFN'-p- la. tisztaságát mutatja; A-sáv; molekulatömeg markerek (lentről lefelé; 100 KD, 6S kD, 45 kik 27 kik illetve 13 kD); B-sáv: 4 pg nem-módosított ΙΓΝ-β-la; C-sáv; 4 pg 20 kD mPEG-O-2-metilproplonaldehiddel otédosított ΙΕΝ-β-Ί a;
ο a 2, ábra a nem-módosított IFN-p-la ás a 20 k.D mPBG-O-S-meíilpropionaldehiddel módosított ΙΡΝ-β-la nnbetkízárásos kromatográfiás elemzésének. képét mutatja; A panel: molekulatömeg standardok; B panel; 20 ki) mFBG-O-2-xnetÜpropiottaIdehIdd.el módosított IFN-β-Ia; C panel, nem-módosított ΙΒΜ-β-la;
a 3. ábra a 20 kD mPBG-O-m-metilfenil-O-2-meúlpropionaldehíddel módosított ÍFN-β4 a méretkizárásos kromatográfiás elemzésének képét múlana;
a 4. ábra egy redukáló SDS-PAOB gélt ábrázol, amely a nem-módosított IFN-jMa és a 20 Wa mFBG-O-p-femiaeetaldeblddel módosított IFN-p-Ia. tisztaságát mutatta: A«: molekulatömeg markerek; A-sáv: 2,5 gg 20 kD mPBG-Ö-p-fbnílaoetaldeiúádel módosított Π?Ν-β10 -la; B~sáv: 2,5 gg nem-módosított IFN-p-la; C-sáv: molekulatömeg markerek (lentről lefelé: 100 ki), 6S kD, 45 kD, 2? kD, illetve 18 kD);
az 5. ábra a 20 kD mPBG-O-p-Fenilaeetsldehiddel módosított íFN-p-la méretkizárásos kromatógtáfiáa elemzésének képét mutatja; A panel: molekulatömeg standardok; B panel:
kD mPBG-0~p-fbmÍaoetaldehiddel módosított IFFHMa;
í 5 a. ö. ábra egy redukáló SDB-PAGB gélt ábrázol, amely a 20 kDa mPBG-O-p-iénilaeetaldelúddel módosított íFN-p-la. stabilitását mutatja; Á-sáv; molekulatömeg márkerek (felülről lefelé: 100 kD, 68 ki), 45 kD, 27 kD, 18 kD, illetve 15 kD); B-. C-, D- és E-sávok: 2 gg 20 kD mFBG-Ö-/>fenilaeetafdehiddel módosítod IFIM-β-la, a vizsgálat Ö,, 2., 5., illetve 7. napján vett mintából;
a 7 A és 7B ábra kttíöub&ő FBG-médositott JFN-β-1 a minták vírusellenes aktivitását mutálja a protemkoneentráeíés függvényében: 7A ábra: nem-mődosított íFN-j)~la (o), 20 kD mFEG-Q-2~menlproplonaldehiddeí módosított lFN-β-Ι a (n); 20 k.D mPEG-O-p-metllfenil-G-2-mcíUpropionáldehiíldel módosított ΙΕΝ-β-la (\) es 20 kD mPFG-Oou-nmttlibml-O-2-medifn'gronaldehiddd módosított íí'Njl-lu sók 7B ábra, uem-mődofimtt ΙΓΝ-β-ls D-k .25 20 kí) mifiÍG~Oy>fenilaeetaldebíddei módosított ΙΡΝ-β-l a (□); 2t) kD mFEG-O-p-tenílpropioualdebíddel módosított ΙΒΝ-β-la (Δ) és 20 kD mPBG-O-m-&mlaeetnldebiddel .módosított ffN-b-la (0);
a 8Λ és 8B ábra a nem-módosított és különböző PEG-módosított humán ϊΡΝ-β-Ιη minták' far.nmkoklneiik.al tulajdonságainak grafikonjait matatja: FA ábra: nem-módosított IFN-β30 -la (felső panel) és 20 kD mPBG-ö-2-mefilpropionaldehíddel módosított ΪΡΝ-β-Ιη (alsó panel); 8B ábra: 20 kD mPBG-G-p~metilfenil-G~2~metílpropiottaldebiddeí (felső panel), illetve 20 kD .rnFE.(?f-()y.j-fenilacetaldehiddel módosított IFN-jl-la;
a 9á és 0B ábra a nem-módosított és különböző FBG-móáosltott humán ΪΡΝ-β-Ιη minták fannakokinetlkai tulajdonságainak grafikonjait mutatja; 9A ábra: nem-módosított ίΕΝ-β7 a (felső panel) és 20 kD mPEG-O-p-femlpwpioöaldebíddel módosított ΪΕΝ-β-la (alsó panel); 9B ábra: 20 kD mPEG-O-m-femlacetaldehiddel (felsőpanel), illetve 20 kD .mPEG-O-nn -matilfemÍ-O-2~nietilpropionaldehiddel módosított ΙΡΝ-β-la (abó panel);
a 10. ábra. a '20 kDa mPEG-Q-2-metilpröpionaldehiddel módosított lEM-fMa egyszeri adagjának és a nem-módosított IEN- β-1a napi adagolásának összehasonlítása oszlopdiagrammját mutatja, SK-MEL-i humán malignns melanoma sejteket hordozó mm egerek esetén az újonnan kialakuló, radiálisán orientált véredények számának csökkentésére nézve; A oszlop: vivőanyagos kontroll, kezelés csak az 1. napon; B oszlop: 1 MU (5 pg) nem-módosított ΙΡΝ-β-la, kezelés naponta az 1-9, napon; C oszlop; 1 MU (10 p.g) 20 kD mPEG10 -0-2~meíilpropkmaIöehidáel módosított lFN-β-1 a, kezelés csak az 1. napon egyszer; D oszlop: vivőnnyagoa kontroll, kezelés naponta az 1-9. napon.
A téltárás olyan vegyietekre és eljárásokra irányuk amelyek sokféle betegség és rendellenesség kezelésében haslmálhatók. Amint azt az. alábbiakban részletesen taglaljuk, ezek a betegségek és rendellenességek különösen azok, amelyek érzékenyek az ínteferouteáplára, ide értve - nem korlátozó jelleggel ~~ a vírusos fertőzéseket rahtt a hepatitisz fertőzést és az autnimman betegségekek mint a szMérozis multiplex.
A jelen feltárás szerinti vegyületek közé tartoznak az (I) általános képletü aktivált polislkílenghkoi vegyületek, ahol a képletben P jelentése egy vízoldékony polimer, mist például peiialkiléngiikol polimer. A megfelelő polimerek nem korlátozó felsorolásába tartoznak a következők; pollalkilén-oxid homopolimerek, mist polipropilés-gllkoiok, polioxíehlénezett poiioíok, ezek kopolimetjeí és blokk-kopolime-rjei. A megfelelő vízoldékony és nem pepíiöszerű polimer alapvázakra a példák a következők; poh(oxietífez.etí pehely poliíolefmes alkohol), poH(vjnílpin-olidon). poli(hidroxlpropllmetakriianűd)5 poH{a~hídroxisavg poliívirál-alkohol), politKszfezán, póltoxazolm, poli(N~akriloilmorfolm) és ezek kopoliroerjeL terpolhnerjei és keverékei. Az egyik megvalósításban a polimer alapváz egy pohetilén-ghkol vagy monomefexi-polietlléuglikoi (mPEG), amelynek átlagos molekulatömege kb. 200 Da kb. 4O0 0O0 Da. Megjegyezzük. hogy más hasonló polimerek szintén megfelelőek a jelen feltárás gyakorlati megvalósítása során, és a PEG vagy poli(etilén-glikol) kifejezés klterjesztőleg, nem pedig szűkítően értendő. A PEG kifejezés magába foglalja a polietilén30 -ghkol) minden formáját, ide értve a kővetkezőket: alkoxt-PEO, dtfunkdős PEG, többkarú PEG, víllalakű PEG, elágazó PEG, oldalágó PEG vagy lebontható kapcsolódást tartalmazó PEG.
Az (1) általános képleté vsgyületek egyik osztályában 0 - 5 mettiéncsoport található az Y csoport és a Z-t hordozó szénatom között (példáid n jelentése Ö vagy 1 - 5 értékű egész szám) és m jelentése 0 vagy I, példáid Y jelen van vagy hiányzik.
X és Y jelentése egymástól függetlenül G, S, CO, Cöa, COS, Sö, SOp CÖNR', SÖxN'R5 5 vagy NRk Számos megvalósttásl &rtttáhan X és Y jelentése oxigénatom.
Q jelentése C3 - Cg telített vagy telítetlen gyűrűs alkll- vagy gyűrűs hetemalkil-csoport (ideértve: kondenzált kétgyűrüs és áthidalt kétgyürűs szerkezetek), helyettesített vagy helyettestieden mái vagy heícroari! csoport vagy helyettesített vagy heiyettesitetlen alkarhcsopött, ahol az alkilrész Q - Qc· telített vagy telítetlen alkii- vagy hcíeroalkaril-csoport, A
IG szohszthnens lehet halogénatom, hiároxíl·, karhonil-, karboxílál·, észter-, fonni!-, ac.il-, tiokarbcmil·, íioészter-, tloaeetát-, tioformiát-, alkoxi-, foszfozil·, fosz&nát-, foszfinát-, amtao, atnldo-, amiűm-, Imin-, elán»-, nitro-, azido-, sztdihiddk szulfát-, szulfonamido-, sznlfhnil-, hetotóeiklií-, araik!!-, aromás csoport, hetoroaromás csoport, műno~s sztüfkmoil·, szállónál·, szíhl·, éter- vagy alkiitíoesoport.
AZ sznhsztitucns jelentése hidrogénatom, egyenes vagy elágazó láncú, telített vagy lehleden (\ -12c mhú- wgi heieto&ikd-e^opi'U. C; - í ,>e telített wgv ic'íietlcn gsxhus altul vagy gyűrűs hcíeroalkil-esoport, helyettesített vagy helyettesítődön árit- vagy hetcroard-csoport vagy helyettesített vagy heiyettesitetlen aikarílesoport, ahol az alkilrész C5 - C20 telilen 1 agy' telítetlen alkll vagy heteroaíkaí'll-csopott, A sznhsztimens lehet halogénatöm, hldroxál·, karhoüik karboxiiát~s észter-, forrni!-, acik tiokarboml·., tloészmr-, óoacetál·, Űofbmúát-, alkom-, foszforik, fesziénál·, lószfmát-, amhio-, amido-, rnnidin-. urdu-, ciano-, ráíró-, azido-, sztüfeidtíl·, szálfát-, sznlfonát-, szulíamoii-, sztdfenamido-. sznlfonil-, heteinciki! !~, aralkil·, aromás csoport, hetoroaromás csoport, homo-, szolfamoil-, sznlfonát-, szüli-, éter- vagy alkilífeesoport
Amennyiben X vagy Y jelentése NR‘, R‘ lehet hidrogénatom» egyenes vagy elágazó láncú, telített, vagy telítetlen G) - C20 alkii- vagy heteroaikü-esoporg a C? - €?$ telített vagy telítetlen gyűrűs alkll- vagy gyűrűs heteroalkil-esoport, helyettesített \ag> helyettemtetten arilvagy hetercarii-esopctt. vagy helyettesített vagy heiyettesitetlen alkart!, ahol az alkilrész Cj Cjö telített vagy telítetlen alkii vagy heíeroalkahl csoport. A szohsztitnens lehet halogénatöm»
3Ö hldroxi!-, karhonit-, karboxiiaí-, észter-, főműi-, acil·, tiökarbonil. hoészíer-, tioacetál·, rioíormiát-, alkoxl·» íoszferít-, fesziénál·, fószfinál·, arnlno-, amido-, amidbe Imin-, eiaoo~s niü'O, azido-, szulíhldrll·, szulfát-, szállónál-, szulíamoil·, szul.fooam.ido-, sznifenil-, hetctoei.kl.ii-, aralk.il-, aromás csoport, heteroarornás csoport, imino-, szálfámtól·, sznlfonát-, szilit-, éter- vagy alkilttocsoporí.
R jelentése egy reukti\ funkciós csoport, azaz egy olyan aktiváló csoport, amely képes olyan reakcióra, ami kapcsolódást vagy kötést hoz létre az. (I) általános képleté vegyület és egy bínlógiailag aktív vegyület vagy' annak prctazorjn között. így B. jelenti az ti) általános képlettel megadott aktivált polialkiléngtikol vegyületek (PGC-kt aktiváló csoportját'’. R lehet példázd, karbonsav-, észter-, aldehid-, aldehid-hidrát-, aeetál hidroxti-, védett hidroxil karbonát-, elkeni!-, akrilát-, metakrílát-, akribmtd-, helyettesített vagy helyettesieden tioh halógénatom, helyettesített vagy helyeüesítetiea amin-, védett amin-, lúdrazid-, védett hidrazid-, sztikcinimidil·, izoci tatát-, izotíocianáf-, dííiopiridin--, vimlphidin-, jódacetamid-, epoxid-, hidroxlsznkcinimidil, ázol·, rnalehnld~, szállón-, áliik vinüsz.uÍíon-> trezll·, sznifo-N~ szukeinimídll·, dión-, mezt!-, toxil· vagy glioxálcsoport. Bizonyos megvalósításokban Rjelentése aldehid-hidrát.
Az R csoport irodalomban előforduló speciális példái közé tartoznak a következők; N-ίΩ^ο1η^η<ϋ.Μ£ίβίχ>ηέί (lásd példán! 5 281 698 és 5 468 478 számú USA-beü szabadalmi iratok), amin [lásd például Bnckmann és társai. Makróméi. Chem, 182:1379 (1981), Xapüpsky és társai, Enz Polym, 1 19:1177 (1983)), hidrazid (lásd példám Andresz és társai. Makróméi.
Chem. 179:301 (1978)]. szidLcinlmídö-propionát és sa&cimmi^l-hutam>át [lásd például Olson és társai, Poly (eihyteue glycol) Chemisiry & Biológiád Applications, 170-181. oldalak, Marxis & Zaplípsky, kiadó; ÁCS, Washington, DC (1997); lásd. még 5 672 662 számú ÜSA-beh szabadalmi irat)], sznkehti.m.idil-sznkdnát (lásd például Ahachowski és társai, Cancer
Biochem, Blophys. 7:175 (1984) és Joppieh és társai, MacroloL Chem. 180; 1381 11974)], szukemimídíl-észter (lásd példán! 4 670 417 számó USA-heli szabadalmi irat], beuzotnazel· -karbonát (lásd például 5 650 234 számú USA-beü szabadalmi irat], glicidil-éter [lásd például Fiiba és társai, Búr. X Btoehem. 94:11 (1979), ElIIng és társat Biotech. Appl. Bioobem. 13:354 (1991.)], ozikarbomümidazol [lásd például Beanehamp, és társai,,Ánat Bíoehem 131:25 (1983), Tondelli és társai, X Controlled Release 1:25.1 (1985)], p-nirtoteml-karhonát (lásd például Verouese és társat, Appl. Bíoehem. Bioteeh,, I í: 141 (1985); és Surtore és társai, Appl. Bíoehem. Biotech.. 27:45 10 (1991)], aldehid [lásd például Harcis és társai, X Polym. Sok Cbem, Ed. 22:341 (1984), 5 824 784 és 5 252 714 számú US A-beii szabadalmi .irat]), mslélmid (lásd például Cnodson és társai, Bb.'Tecbnology 8:343 (1990), Romául, és tárttal,
Chemisiry ot'Peptrdes és Proteirts 2:29 (1984) és K.ogart, Synthetic Comm. 22:2417 (1992)1 ortopmdMszulféi [lásd például Wogbíren, és társai, Bioconj, Chem. 4:314 (1993)], ákrciol (lásd például Sawhney 15 és társai, . Macromoleeulea, 26:581 (1993)), vimlszuhón (lásd például 5 900 461 számú USA-heli szabadalmi Irat). Ezen túlmenően kettő, feltárás szerinti polimer molekula kapcsolódhat ©gy aminosav lizinhez, és Így egy diszuhszthnált Hsán alakul ki, amit ezt követően tovább aktiválhatunk N-hidroxiszukcinimíddeh és így alakul ki egy N-ozukcmímidil-osoport (lásd például 5 932 462 számú US A-beli szabadalmi Irat).
A funkciós csoport, '‘aktív csoport (aktív gyök), “aktiváló csoport, (aktiváló gyök), reaktív hely, kémiailag reaktív csoport (kémiailag reaktív gyök) a szakterületen használt kifejezések, és itt is egy molekula különálló és nseghatározható részét vagy egységét jelölik. A ki felezések szinonim értelműek a kémia területén. és a. molekulák azon részének jelölésére használjuk, amelyek karakterisztikus kémiai aktivitással rendelkeznek és tipikusan képesek egyéb molekníákkal reagálni Az aktív kifejezés, amennyiben egy funkciós csoporttal kapcsolatban kerül említésre, azon iunkciös csoportokat szándékozik felületet, ame10 Ivek- készségesen reagálnak az egyéb molekulákon található elektrolit vagy nnkleoftl csoportokkal, széniben azon csoportokkal, amelyek a reakciójukhoz erős katalizátort vagy komoly gyakorlati problémát felvető körülményeket követelnek meg. Például, ahogy ózt a szakirodalomban megjegyzik, az aktív észter kifejezés felöleli azokat az. észtereket, amelyek készségesen reagálnak aukleofil csoportokkal, mint aminokkak Tipikusan egy aktív észter percek alatt reagál vizes közegben egy aminnal, míg bizonyos észterek, mim például a rnedl- vagy chléaztcmk, erőteljes katalízist követelnek meg, amennyiben nukleofil csoporttól kívánjuk reagáltatai azokat,
A fentiekben meghatározott feltárás szerinti vegyületekben az R funkciós csoport egy R* kapesolöesoportiá alakni a biológiailag aktív molekulával történő reakciót követben, és így egy kapcsolódást vagy kötést hoz létre az aktivált poliaíkilénglikol vegyület (POC) és a biológiailag aktív vegyület között. így 8 jelentése egy biológiailag aktív vegyület amely a PGC-hez kapcsolódik, aminek során R* csoport alakul ki az aktivált PGC-n található R csoportnak & B biológiailag aktív vegyületen található egy vagy több reaktív funkció? csoporttal hekövetkezett reakciójával, így egy egyszeres kovalens kapcsolódás alakul ki a POC és a hiö~ lögiailsg aktív vegyület között. Egy' előnyös megvalósítási formában R* jelentése egy olyan csoport, amely az aktíváit PGC-n található R csoport és a biológiailag aktív vegyületen található reaktív funkciós csoport reakciójából alakul ki, és így egy kovalens kapcsolódás keletkezik az aktivált poliaíkilénglikol vegyület (PGC) és a biológiailag aktív vegyület között.
A biológiailag aktív vegyület vagy annak preknrzotját (B) előnyös esetben nem érinti hátrányosan a RGC jelenléte. Ezen túlmenően B vagy természetesen rendelkezik egy olyan funkciós csoporttal, amely képes magáim az aktivált FGC-vei és Így tud ahhoz kapcsolódni, vagy úgy van módosítva, hogy tartalmazzon egy ilyen reaktív csoportot.
jelen alkalmazásban a B vegyület prekurzorja egy inaktív vagy kevésbé aktív formája a B vegynletnek, amely az aktív vagy aktívabb formává alakul fiziológiai körülmények között, például a Kezelendő egyénnek történő adagolás sétám Ilyen válfózíatások lehetnek kotdbrntáelődeit vagy szetkezetbeli változások Ide értve - nem korlátozó jelleggel - a védett formájú B vegyületnek nem védett formájúvá alakítását A jelen leírásban ez a változás nem foglalja magába a feltárás szerinti konjugált PGC~k félszebedulását
Amint az a szakirodalomban ismert, a védett” kifejezés olyan védőcsoport vagy gyök jelenlétem utal, amely megakadályozza a kémiailag reaktív funkciós csoport bizonyos reakciókörülmények közötti elreagálását, A védőcsoport a megvédendő kémiailag reaktív csoport típusától függően változik. Például amennyiben a kémiailag reaktív csoport, egy amin vagy agy bídmzid, a védöesoportot. válmth&ljuk a tere-butíloxikarboiui (t-Boe) és 9W -iluorenilmetoxikarbonü (Fmoc) közöl. Amennyiben a kémiailag reaktív csoport egy tiolesopoxl, akkor a védőcsoport lehet egy ortopirídíldiszulftd. Amennyiben a kémiailag reaktív csoport egy karbonsav, mint például hutánsav vagy propánsav, vagy egy hiároxilcsoport, a védöesoport lehet herrzál- vagy alkilcsoport, mint például rnetil- vagy etilcsoport.. A jelen feltárásában alkalmazhatunk továbbá egyéb szakirodalomból ismert védőcsoportokat.
I5 A kapcsolőosoport, kapcsolódás vagy kapcsolás a jeles alkalmazásban olyan csoportokra (gyököm) vagy kötésekre vonatkozik, amelyek kémiai reakciók eredményeképpen alakulnak ki és tipikusan kovalens kapcsolódások. így a fenti képletekben szereplő R*~S kötéssel megadott kapcsolódás a FGC-tt található R aktivált csoport és a 8’ biológiailag aktív vegyület B! közötti reakció eredményeképpen alakul kí. Áz R* kapcsolöesoport az R-böi ala29 kel ki a B'-vei végrehajtott reakció során, és a B a biológiailag aktív vegyület, amely a PGC~ -hez kapcsolódik a B-en található funkciós csoportnak az R-rel végrehajtott reakciója során,
A biológiailag aktív vogyálet kifejezés a jelen leírásban olyan vegyűierre vonatkozik, amely egy vagy több biológiát választ vagy hatást léit ki, amennyiben egy kezelendő egyénnek adagoljuk azt, és olyan reaktív csoportokat, tartalmaz, amely olyan reaktív gyököket tar25 talrnaz, amely képes reagálni és hozzákapcsolódat legalább egy feltárás szerinti, aktíváit PGC-hez. A biológiailag aktív molekula, biológiailag aktív csoport (gyök)” és biológiailag aktív szer kifejezések a jelen leírásban bármilyen olyan anyagot jelenthetnek, amelyek képesek hatni a fizikai vagy biokémiai tulajdonságaim egy egyénnek, ide értve - nem korlátozó jelleggel - a utasokat bakiét somokat, gombákat, növényeket, állatokat és embereket. A jelen leírásban a biológiailag aktív molekulák olyan anyagokra vonatkoznak, amelyek diagnózis, kúra, timciénybííéa, kezelés vagy megelőzés céljára hasznáihatnnk emberekben és egyéb éllatokban, vagy más módon javítják az emberek vagy állatok fizikai vagy mentális állapotát,
A biológiailag aktív molekulák nem korlátozó példái közé tartoznak a következők: peptidek, pepddanalőgök, fehérjék, enzimek, kis molekulák, festékek, hpidek, nokieozidok, oligonnkleotldok, olígonukleotíd analógok, cukrok, ollgoszaoharldok, sejtek, vírusok, líposzómák, mikrorészecskék, felületek és míeeHák.
A feltárás szerinti felfetsztmlásban megfelelően alkalmazható biológiai aktív szerek osztályai közé tartoznaknem korlátozó jelleggel - a kővetkezők: kemokiuek, llmfokmek, a«tí~ festek, oldható receptorok, daganatellenes szerek, nyngiátősxerek. hormonok, növekedési faktorok, antibiotikumok, hmglcidsk, funglsztatikus szerek, vírnsellenes szerek, szterokl szerek; antimikfebláiis szerek, germitíd széfek, anfiphetikus szerek, anftdtabeflkus szerek, hörgötágh tők, hasmenéselleni szerek, szivkosxomériágkók, glikoxidek, spazrnolilikomok, vémyomásesőkkentő-sxerek, atttídepress Ások, styugtatók, egyéb fizikoterápiás szerek, koríikoszteroídok, fajdalömeslllapitók, fogamzásgátlók, uemszteroíd gyulladásgátlő gyógyszerek, vérglüközszint-csökkentö szerek, koleszterinszint-csökkentő szerek, görcsoldók, egyéb epilepszia ellem szerek, Immunmodulátorok, anfikoiloergek, szhnpatoliílkumok, szimpatomimetikumok, ériágiiószerek, véralvadásgátlők, rilomszavat elleni szerek, különféle ferrnakoiögtaí aktivitással bíró prosxíaglandmok, vízkajtők, altatók, antiklsztamin szerek, da15 ganatelienes szerek, onkoHfikus szerek, aotlandrogének, maláriáéi lenes szerek, lepra ellent szenek és egyéb más típusú, gyógyszerek [lásd Goodman és Oílmao’s llte Basis of Therapeufics (Niotli Bdrtion, Pergamon Press, Inc,, USA, (1996) és The Merek Index (Thírteenth Editioa, Merck & Co., Inc., USA (2001), melyekre referenciaként hivatkozunk).
A biológiailag aktív vegyüietek közé tartoznak azok, amelyek biológiai választ fejtenek ki aktuális formájukban, vagy bármilyen olyan vegyület, amely biológiai választ fejt ki aktuális formájuk kémiai konverzióval történő szerkezetváltozása eredményeképpen. Például a biológiailag aktív vegyüietek közé tartoznak azok, amelyek védöcsoportot tartalmaznak, amelyek lebasifásával kapjuk a biológiai választ kifejtő vegyuietet. Az ilyen hasítást eredtnehyezhei például a vegyül etnek endogén enzimekkel történő m vívó reakciója vagy a vegyidet ad&goiá25 sa, ideértve a feltárás szerinti aktivált. PEG-ekkel történő reakciókat, A biológiai aktív vegyü letek további példájaként említjük azokat a vegyu.lete.ket, amelyek sztereotra.nszfbrmá.dónak vethetők alá m vívó vagy ez vívó körülmények között és Így alakul ki a biológiai választ vagy hatást kifejtő vegyület.
A biológiailag aktív vegyüietek általában több olyan reaktív hellyel rendelkeznek, ame30 iy ekbez megfelelően tud kovalens módon kapcsolódni az aktivált PGC. Például az aminoesoportok aelleződbefnek, a szulfludrilesoportók adáielös reakciókban és alkilezödésben vehetnek részt, a karbonil- és karboxiiosoportok aoileződhetnek, és az aldehidés hídfexdesoportok anrinálödhatnak és fedaktív amlnálásban vehetnek részá. Ezek közül a reakciók közül egyet vagy többet alkalmazbátunk a feltárás szerinti polialtólengiikol13
-módosított biológiailag aktív vegyületek előállításában, Ezen túlmenően a biológiailag aktív vegyieteket módosíthatjuk úgy, hogy reaktív gyökökéi alakítunk ki a vegyületen, ezzel segítve elő az ilyen reakciókat és az aktivált PGC kapcsolódását.
Egy szakember számos reakciómechanizmust ismer, amellyel megoldható az aktivált PGC-knek a biológiailag aktív vegyhlethez való kapcsolódása. Például amennyiben az R aktiváló csoport egy hidrazidesoport, ez kovalens módon kapcsolódhat a biológiailag aktív vegyűleten található szutíhídrih, cukor- és karbomlesoportokhoz (ezután ezek a csoportok aldehideket eredményezően oxidálódnak), A hidrszld aktiváló csoportok (R) a biológiailag aktív (R *), Amennyiben R jelentése egy inaleinud csoport, ez reagáltatható egy szniíhldríiesoportial és Így egy stabil tioéterkapesolódás alakul ki. Árnennyiben sznlBidrilesoportok nem találhatók a biológiailag aktív vegytílefen, akkor azokat kialakíthat·' juk dísztdbdos redukcióval vagy 2-tminotíölánnai vagy SATA-val végrehajtott tlolesoport kialakításon keresztül, Amennyiben R jelentése tniidoészter, akkor az reagál a B! molekulán ta15 látható primer aminocsoportokkaL és így egy hnidoamid kapcsolódás alakul ki. Az imidoészter-kapcsolódás általában 8,5 - 9,0 pH-érték között játszódik le. Amikot az aktivált FGC-ket kapcsoljuk a biológiailag aktív fehérjékhez, az unidoészterek előnyösek az egyéb R, csoportokhoz képest, mivel nem hatnak a fehérje össAöitésére. Fiziológiai pH-értéken pozitív töltést hordoznak, hasonlóan a helyettesített primer ammesoportokhoz. Az hnidoészter reak.20 eiőkat 0 6C és szobahőmérséklet közötti hőmérsékleten (például 4 öC-on) vagy emelt hömórsékleten hajtjuk végre vízmentes körülmények között. Amennyiben R jelentése egy NHS-észter, ennek elsődleges célpontját a primer aminek képezik. Az elérhető a-ammoesoportok, például a peptiöek és fehérjék N-tenninálísán jelenlévők, N'HS-eszterckkel reagálva alakítják k.t a kovalens amidkölést
Számos megvalósítási formában R*-Ö jelentése egy hidrolitíkusán stabil kapcsolódás. A hídrolhikusan stabil kapcsolódás azt jelenti, hogy az alapvetően stabil vízben és nem reagál a vízzel megtelelő pH-értékekcn, például a kapcsolódás stabil fiziológiai körülmények között huzamosabb időn át, például akár meghatározatlan ideig. Egyéb megvalósításokban az R*-B egy hidrolitíkusán instabil vagy lebontható kapcsolódás, A hídrolhiknsan instabil kapcsolódás olyan kapcsolódásra vonatkozik, amely vízben vagy vizes oldatban - Ide értve a vért - leromlik. Az enzimatikns instabil vagy lebontha tó kapcsolódások olyan kapcsolódásokat is jelentenek, amelyek egy vagy több enzim hatására bomlanak le,
A szakterületen Ismert, hogy a poliálkilének és hasonló polimerek fartahnazltatoak lebeníhatő kapcsolódásokat a polimervázban vagy a kapcscdöesopertban, ami a polimerváz és a
PöC egy vagy több terminális funkciós csoportja között helyezkedik cl Példád észterkapesolódás alakul ki a PGC-karbonssvak vagy aktivált PGC-karbonsavak és a biológiailag aktív vegyöiet alkoholos csoportjai közötti reakciója során, amelyek általában clhidrolizáinák fiziológiai körülmények között, ás így felszabadni belőlük a hatóanyag, Egyéb hldroliüknsan bontható kapcsolódások közé tartoznak a kővetkezők; karbonátkapcsolódások; imiokapcsolódások, amelyek egy amin és egy aldehid reakciójából keletkeznek (lásd például Onehi és társai Poíymer Preprints, 38(1):582-3 (1997}); foszfátészter kapcsolódások, melyek egy alkohol és egy foszfátesoporl reakciójából keletkeznek; aeetálos kapcsolódások, amelyek egy aldehid és egy alkohol reakciójából keletkeznek; ortoészter kapcsolódások, amelyek, egy fonalát és egy alkohol reakciójából keletkeznek; peptides kapcsolódások, melyek egy aminesoport - amely például a PGC vágón helyezkednek el - és egy pepiid karkmlcsoportja közötti reakcióból alakul ki; ohgormkleotiáos kapcsolódás, amely egy foszforamldit csoport amely lehet például, a polimer végén - és egy oligonnkleotid S’-hidrtoxUcsoporhía közölt alakul ki.
A. P jelű polialkilénglikol lehet egy (II) általános képiért! pelieltléngltkol, ahol a jelentése 4 -lÖOOí) értékű egész szám és E jelentése hidrogénatom vagy egyenes vagy elágazó láncú C5 - C20 alkilcsoport, egy detektálható címkézés vagy egy csoport, amely képes kötést kialakítani a (1) általános képlete vegyöiet és egy biológiailag aktív vegyület vagy prekurzoíja között, így amennyiben E jelentése egy olyan csoport, amely képes kötést képezni az (1) általános képiéin vegyület és a biológiailag aktív vegyöiet vagy prekurzorja között, B lehet egy karbonsav-, észter-, aldehid-, aldehid-hidrái-, acetál-, iddroxil-, védett hidroxil-, karbonát-, altod-, aktitál-, metakrilát-, átoamid-, helyettesített vagy helyettesltctlén hol-, halogénatom, helyettesíted vagy holycttesttetlen amin-, védett amin-, hldrazíd-» védett hidmztd-, szukcimrmdil-, ixocianái-, izoíioeianát-, öhiopirldln-, virülpiridln-, jódacetanüd-, epoxid-, hidroxis?nkcmm-ndf azol·» maleimrd-, szórton-, allil-, viniiszolfon-, trez.il-, szulíó-Nszakchvnudö- dmu-, mcz.il-, tozll- vagy gllöxálesoport. Megjegyezzük, hogy B-nek kompatibilisnek kell lenn? R-rel, hogy ne játszódjon le reakció E és R között,
A detektálható címkézés jelentése bármely olyan címke lehet, amely detektálható,
Nem korlátozó példákként emlíljnk a kővetkezőket; radioaktív Izotópok, tlooreszeens csoportok, foszlbraszcens csoportok, kernilaminiszcena csoportok és kvantampontok. Egyéb detektálható címkézések közé tartoznak, a kővetkezők: bioim, cisztcin, hísztldln, hemaggíntmm, mtc vagy jelzövég.
Számos msgvtdösdásí íonnában E jelentése egy (Hí) vagy (IV)
SLíI w,í «ΧΙΟ 5 &Op.i v£ «
ΙΟ port.
Az összes Q, X, Y, X, m és n jelentése a fentiekben, megadott, és az összes W jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy Ci - C? alkilesoport,
A vegyületek ezen osztályában IV jelentése egy olyan csoport amely képes kötést kialakítani a (111) általános képleté vegyidet és a biológiailag aktív vegyidet vagy prekurzona között; és R‘” jelentése egy olyan csoport, amely kötést képez a (IV) általános képlett! vegyület és a biológiailag aktív vegyidet vagy prekurzoria között.
R” és Rm lehet karbonsav-, észter-, aldehid-, aldebid-bldtút-, acetál-, hldroxd-, védett hldnudl-, karbonát-, alken.il-, akrilát-, metakrilát-, akrilatoid-, helyettesített vagy helyetteshetlen dél-, halogénaíotn, helyettesített vagy helyettesítette» amin-, védett amin-, hidrazid-, védett hiteid-, szűkeim midik ízoeianát-, izotíoetanáb, diiiopiridin-, vinilpindin-, jödacetamid-, epoxid-, hidroxisznkcinimídil-, azok, malehnid-, sztdíon-. aUib. vimlsztdíon-, ttezIK szul&-N-szukeimmldil-, dión-, saezíl-, iozií- vagy gíioxálcsoport. Megjegyezzük, hogy R~nek és Rf“~nek kompatibilisnek kell lenniük R.-rel, hogy ne játszódjon le R-rei reakció.
A jelen leírásban R” és R’ a fentiek szerinti kapcsolóesoporiokat alakítják ki a biológiadag aktív vegyidéihez vagy prekurzorjához történő kapcsolódása során. így R** jelentése egy kapcsolőcsöport, amely az aktivált POC-o található R* vagy R'4' csoportnak és a biológiailag aktív vegyüleien található reaktív funkciós csoportnak a reakciójából képződik, igy kovalens kapcsolódást eredményez & PöC és a biológiailag aktív vegyidet között R. és R“ vagy R'” lehet megegyező vagy eltérő csoport és az azokhoz kapcsolódó biológiailag aktív vegyidet lehet megegyező vagy eltérő.
A jelen leírásban az ”alkif! kifejezés telheti alifás csoportokból származó gyökökre vonatkozik, ideértve az egyenes láncú addlesoportokat, az elágazó láncú alkílesopörtökat, a eikloalkil-esoportokat (alicíkiusos csoportok), alkiíszubxzfiteáit cikloalkdcsopöriokat és cikloalkilsznbszíituált alkilcsoportokst. Az előnyős megvalósításokban az egyenes vagy elágazó láncú alkdíánc 30 vagy kevesebb szénatommal rendelkezik a vázban (például C} - Cjö egyenes láncú, C$ - C3Ö elágazó láncú csoportok), és még előnyösebb 20 vagy kevesebb szénatommal rendelkezik a láncban. Hasonló módon az előnyős cikloalkilcsoportok 3-.10 szénatomot és még előnyösebben 5 vagy 7 szénatomot tartalmaznak a gyortkendszerben.
Továbbá az. alkd (vagy kis szénaiornxzámú alkii'j kifejezés felölelni szándékozik mind a helyettesítette» alkilesoportok mind a helyettesített alkilesoportok' kifejezést, amelyek közül az utóbbi olyan aíkdcsoportokra utal, amelyekben a szénhidrogén alapváz egy vagy több szénatomján helyet foglaló Ibdrogénatomot szehsztlluensekkel helyettesitetttfok.
Az ilyen szabsztlmensek lehetnek többek között: balogénak»»» hlttroxík, hmhoníl- (nttat karhoz!!-, aikozikathonil·, foimlk vagy acílcsoport), ttokafbonál» (mint iteészter», tioaeetátvagy tioformáícsoport), alkoxi-, foszfort!-, foszfortól-, foszforát-, amino-, amido-, amidül-, hűin-, ciano··, nitxo, ezído-, szulfoidril-, alkilífo, szulfát-, szulfonát-, szálfámon-, sznlfonamldo»5 sxttl&ttíl-, hetetoeikhl-, atalkiícsoport vagy aromás vagy hetcroarotnás csoport, Egy szakember számára, ismert, hogy a szénhidtogénláneon helyet foglaló helyettesíti csoportok önmagukban is helyettesítettek lehetnek, amennyiben ez szükséges, Például a helyettesített alkltesoport sxuhsztríőeoseí lehetnek helyettesített vagy helyettesítette» amino-, amino-, azido-, manó-, amidé», foszfor!!» (Ideértve: foszfonát- és íoszilnáfosoport), sznl.fo.ml» (ideértve: szulfát», ,sznlfonamido-, sznlfatnoik és szuííonótcsoport), és szilílesoportok, valamint éterek, alkuké-, kmlvmtlesoporfok (ideértve: ketonok, aldehidek, karhoxíláfok és észterek), -Clő, -CN és hasonlók. A eíkloalktfosoporfok lehelnek továhbhelyettesitettek alktl·, alkernl-, alkoxi-, alkdtio-, ammealkil-esoporfokfad, karhonílsznbsztítttált alkílesoportokka!, -Cfo, -CN csoporttal és hasonlókkal,
A jelen leírásban az “aralkO kifejezés olyas xálkílesoportra vonatkozik, amely egy árucsoporttal helyettesített (lehet például aromás vagy heteroaromás csoport). Az araikitesoportok példái köze tartoznak - nem korlátozó jelleggel - a benzlfoaoport és még áh talármsabbau a í€lh)»Ph csoport, ahol Fh jelentése fenik vagy helyettesített feniiesoport és n jelentése 1,2 vagy 3.
A alkenif’ és “alkinil” kifejezések olyan telítetlen alifás csoportokra vonatkoznak, amelyek hesszóságbao és lehetséges helyetteshéshen a fentiekben leírt alkilcaoportokkal arndóÁmennyiben nincs másképpen meghatározva, a jelen leírásban ‘'kis szónaíomszámű 25 alkil’* kifejezés egy olyan fontiekben meghatározott alkileomoríra vonatkozik, amely 1-10 szénatomot, előnyösebben l~ő szénatomot tartalmaz az alapvázban. Hasonló módon a “kís sz&mtenszámú alkeni! és “kis széuatotnszámú alkünk* kifejezések hasonló lánehossxúságra vonatkoznak. Előnyős alkifosoporfok közé tartoznak a kis szénatomszámn idkilcsrgmrtnk. Előnyős megvalósításokban az alkuként megjelölt helyettesítők a kis szénatomszámú alkil csoportok,
A jelen leírásban az **anf * kifejezés 5-, ő~ és 7-tagű egyszeres aromás gyűrűs csoportokra vonatkozik, amelyekben 0 - 4 heteroafom lehet, példáid benzol, pírról, ferán, tinién, hmdozoi, ozazol, liazel, irtazol, pirazol, píridtn, pirazln, püídazln és plfofodm. Azokat az árucsoportokat, amelyék héteröatomokat tartalmaznak a gyűrűreodszerben, fovatkozhatfek *adi. heterogyürökkéní vagy heteroaromásokkéulC Az aromás gyűrű egy vagy több gyűrű·· pofodéban helyettesített lehet a fenfckbco említett. helyettesttökkel, például a következőkkel·, halogénatom, axid-f alkih, arslkll·# fokemfo alkíatK dkloalkik hiároxíl-, altat-# amino-# nifro-» s^tlöűdnl-» hníno-, snűdo-·, foszfotál-, karbomV# karboxil-, sailil-» éter-# alkiitio-, szelibn.il-, szdfetwnldo-# keton-# aldehid-# észter-» hetetooikfilesoportok, aromás vagy heteroaromás csoportok, -CF«, -CN vagy hasonlók. Az '‘aril” kifejezés magába foglalja továbbá azokat a policlklnsos gyánűrendszcreket, amelyek kettő vagy több ciklusos gyűrűt tartalmaznak, amelyekben kettő vagy több szénatom közős a két kapcsolódó gyűrűben (a gyűrákét kondenzált, gyűrűknek nevezzük)# áltól legalább az egyik gyűrű aromás. a másik gyűrű pedig lehet például ciktoalkíl-» eikioalkenil-, cikloaíkinü-# arü- és/vagy heíetociklü-osoport.
Az orm, wm és poro kifejezéseket az 1,2-, 1,3- és 1,4-diszubsztífeáh benzolokra alkalmazzuk, Például ox, 1,2-Óimetilbenzol és az orto-dimctilbenzoi nevek szinoním kifejezések, A heíetociklil vagy heterociklusos (heterogyőrűs) csoport kifejezések 3-10 gyürütagú szerkezetekre vonatkoznak# még előnyösebben 3-7 gyűrűtagó rendszerekre, almi a gyűrűk .15 14 heteroatomol tartalmaznak. A heteroeiklnsok lehetnek polieiklnsok Is, A heietocikül csoportok közé tartoznak például a következők; tiofen, tiantrén, túrán# pite, izolrenzoinrán, krómén, xantén, fonoxadm, pózol, mtldazoi# pírazol-, lxodazo.1, izozazol, pitidül-, pirasín, pidmidin, píddazin, ínóolizin, tzoindol, indok mdazol-, pun»# kinollzin, izokinolin, kinolin, talaxin, naffeidin, kinovalin, kioaxolio, einnolin, pisridnu karbazol, körteim fenanöidin, ekridin, pirimiáln, fouanfrolin, fonazin, fenarsazín, fenoöafon# forszán# fenoxazin, pkrolidm, oxolán# fiolán, oxazoi-, piperidm, piperééin, motfolin, lakfonok, laktámok, mint azetidinonok és pírroiidinonok, szoltátnok, szultonok és hasonlók. /1 heterociklusos gyűrök egy vagy több pozícióban helyettesítettek lehetnek a fentiekben leírt, szubaztitnensekkel, például a kővetkezőkkel; halogénacom# alkik zfálkih alkcnil··, alkunk eikloalkik hidroxil-» amino-, nifro-, szulfhidrik imino-# amidé-, foszfonát-, foszforát··, karbont!-, karboxil-# szüli-, éter-, alkilűo··, szulfonü-, keton-# aldehid··, észter-, betetoeikli!-, aromás vagy heteroaromás csoport, -CF.n -CN.
A karbociklnsos íkarhogyűrűs) kifejezés a jelen leírásban olyan aromás vagy nem aromás gyűrűt jelent, amelyben az összes gyoniatorn szénatom,
A heteroeiklnsok és á karteciklusok közé tartoznak a kondenzált kondenzált kétgyűrüs és az áthidalt kétgyűrüs remiszerek,
A jelen leírásban a oltro kifejezés a ~N(% csoportot jelenti; a halogénafom kifejezés -F, -Cl, -Br vagy -1 csoportokat jelenti; a szulthidrű kifejezés jelentése -Síi csoportot jelenti; a hidrofor kifejezés jelentése -OH; és a '‘szaifonil kifejezés jelentése -SCte u
Az tóa” és hnmno” kifejezések a szakterületen mind a belyertesitcden» mind a helyet teshert aminokm vonatkozik, például az (a) és (b) általános képlett! csoportokra, ahol R$, í<ie és Rbö jelentése egymástól Rlggetlenöl hidrogénatom, alkik, alken.il, ~(Cd-i2}m~Rg csoport vagy R$> és R'^ együtt a kapcsolódó nitrogénatommíd egy, a gyűrűs szerkezetben 4 - 8 atomot tartalmazó heteroctklusl alkotnak; Kg jelentése arti-, dkloalkil·, eikloalkenik hetemcikiil -vagy poUctklilcsoport; és m jelentése 1) vagy f-8 egész szám,
A jelen leírásban Mkilamm* kifejezés egy fentiekben meghatározott anunosoporteí jelent, amelyhez helyettesített vagy liélyettesiíetlea alktiesoport kapcsolódik, azaz az. R§ és RIO csoportok kézül legalább egy jelentése alkilcsoport
Az aeilarmno kifejezés a szakfertűeten ismert és a (c) általános képlettel jellemezhető, ahol R§ jelentése a tértitekben megadott, R!n jelentése hidrogénatom, alkll-, alkenil vagy -(CWíK-Rg csoport, ahol m és R8 jelentése a fentiekben megadott
Az !!amído!! kifejezés a szakterületen ismert, mint az anttnohelyetfesttert feattonílesoporí, és egy (d) általános képleéü csoportot tartalmaz, almi Rs, Rjg jelentése a tértid tíekben megadott Az amidok előnyős példái közé nem tartoznak az itoídek, amelyek nem stabilak.
Az ^aortáin* kifejezés a szakterületen ismert, és az (e) általános képlettel jellemezhető, ahol R§ és Ksö jelentése a tontlekhen megadott.
A gnanldttf kifejezés a szakterületen Ismert és az (1) általános képlettel jellemezhető,
2(1 ahol R§ sé R k jelentése a fontiekbca megadott.
Az aikiltlo” kifejezés egy olyan fentiekbe» meghatározott alkilesoportra vonatkozik, amely kéngyőkőn keresztül kapcsolódik. Előnyős megvalósításokban az ”alkilt!ocsoporf' az -S« -alkik, Smlkenil, S-alkmil- és ~8~<0%)κΑ csoporttal jellemezhető, ahol m és Rs$ jelentése fentiekben megadoiLAz alklltíoesoport reprezentánsai közé tartozik a meiiltim, eíiltfocsoport,
A karbon!!” kifejezés a szakterületen ismert, és a (g) és a (h) általános képleté ©söpörtokkal jellemezhető, ahol ahol X jelentése egy kötés vagy oxigén vagy .kénatom, és Rn jelentése hidrogénatom, alkik, alkenik, -{CHíkki vagy győgyáazahlag elfogadható só, Rfo jelentése hidrogénatom, alkik, athéni!- vagy -(CH^-Rss csoport, ahol m és R$ jelentése a fentiek ben megadott. Amennyiben X jelentése oxigénatom és Rn és Kj jelentése hidrogénatomtól elférő, akkor a képlet egy észtert” jelent Amennyiben X jelentése oxigénatom és Rn jelentése a fentiekben megadott, a csoportot karboxilesoportként hivatkozzak a jelen leírásban, ás amennyiben Rg jelentése hidmgénatom, a. képlet karbonsavat jelent. Amennyiben X jelentése oxigénatom és Rfo jelentése hidrogénatom, a képlet egy formiátttt jelent, Általában, amennyi19 ben a fenti képletben az oxigénatomot bánatommal helyettesítjük, a képiét egy tiokarbonil csopöítet jelent. Amennyiben X jelentése kénatom és Rn vagy R’tt jelentése hidrogénatomtól eltérő, akkor a képlet tioészierf! jelent Amennyiben X jelentése kéantom és Rj $ jelentése hidrogénatom, a képlet tlokmbonsavat jelent,. Amennyiben X jelentése kénatom és Rj $ je~ leölése hidrogénatom, a képlet tioformtátot jelent. Másrészről, amennyiben. X jelentése kötés és Ru jelentése hidrogénatomtól eltérő, a fenti képlet, egy “keloncsopotlöt jelent. Amenynyiben X jelentése kötés ésXn jelentése hidrogénatom a fenti képlet, egy aldehldcsoporíot jelent.
Az slköxiF vagy alkom a jelen leírásban a fentiekben meghatározott olyan alktlcsoportm vonatkozik, amely oxigéngyökön keresztül kapcsolódik. Az alkoxicsoport példái közé tartozik a mctoxb, etnxb, propiloxi-, tem-bntoxi-esoport. Az éter kifejezés oxigénatommal kovalensen kötött két. szénhidrogénre vonatkozik. Ennek megfelelően az alkilcsoport azon helyettesítője, amely azt. éterré alakiba, egy alkcndesoport, amely az
-Ö-aíktl, -0-aÍkenll-, -O-alkintl, -Ö-(CH2)ssrRt képietekkel jellemezhető, ahol m és R§ jelenté15 se a fentiekben megadott
A szuifonát” kifejezés a szakirodalomban isméd és jellemezhető az (1) általános képlettel, ahol Rn jelentése egy eiektronpár, hidrogénatom alkil-, cikloalkii- vagy árucsoport
A szulfát. kifejezés a szakirodalomban ismert és jellemezhető az (?) általános képlettel, ahol Ru jelentése a fentiekben megadott.
A sznlfenamldo” kifejezés a szakirodalomban ismert és j ellemezhető a (k) általános képlettel, ahol R§ és R‘n jelentése a fentiekben megadott.
A “sxulfamoil kifejezés a szakirodalomban ismert és jellemezhető az (1) általános képlettel, ahol R§ és jelentése a fentiekben megadott.
A szuifonil” kifejezés a jelen leírásban az (m) általános képlettel jellemezhető csopor25 tokra vonatkozik, ahol R44 jelentése a következők közűi választott; hidrogénatom, alkil-, elkeni!-, alkinil cikloalkii-, hetotoeikhi-, aril- vagy heteroarllesoport,
A “szulfoxidö” kifejezés a jelen leírásban az (n) általános képlettel jellemezhető csoportokra vonatkozik, ahol B44 jelentése a következők közül választott; hidrogénatom, aikib. alkenil-, alkimi-, cikloalkii-, heteíoeikl.il~, aralkll- vagy élcsoport.
3Ö Megjegyezzük, hogy a helyettesítés vagy helyetteshetf ‘ kifejezések magukba foglalják azt a feltételt, hogy a helyettesítés (szubsztitúció) a helyettesített atom és a szuhsztituens vegyértékei által megengeded, és a hehettesítés egy stabil vegyületet eredményez, amely nem alakul át spontán módon például átrendeződéssel, eiklizádóval, eliminációval, st.b.
Á jelen leírásban a !!szubsztituá!t!< kifejezés felölelni szándékozik a szerves vegytdetek összes lehetséges sznhsztituensét. Széles értelemben véve a lehetséges sztűtéztíbrensek közé tartóznék a kővetkezők: aeiklnsos és ciklusos, elágazó és nem elágazó, karboctklusos és heterociklttsos, aroás és nem aromás szuhsztkuenseí a. szerves vegyűleteknek,. ílbsztrattv sznbszútueasre példaként említjük például a fentiekben megadottakat. A tehetséges szubsztitnens(ek) leheti neki egy vagy több megegyező vagy különböző, a szerves vegyűletek. számára elfogadható szuhsz.títnens(ek), A jelen találmány szempontjából a beteroatomok ··· mint például a mírogánatotn - rendelkezhetnek, hidrogén szubsztltnenssel és/vagy bármely fentiekben leírt szerves vegyidet, tehetséges azubsztlfuensóvol, amelyek megfelelnek a heteroatom vegyértékének. A jelen találmányt semmilyen szempontból nem kívánjuk korlátozni a szerves vegyűletek lehetséges sztibsziiteenseí oldaláról,
Egy átlagos tudású szerves kémikus által alkalmazod rövidítések átfogó felsorolását találjuk meg a Journal of Organie Chemístry minden egyes kötetének 1. kiadásában, amely lista tipikusan a j datipns című táblázatban található.
Számos megvalósítási módban a feltárás szerinti vegyűletek az (V) általános képlettel jellemezhetők, áltól a képletben
X, Y, m, η, X, és R! jelentése a fentiekben megadott, és R jelentése egy fentiekben megadott aktiváló csoport, amely képes kötést kialakítani a (V) általános képiem vegyidet és a biológiailag aktív vegyidet vagy prekurzmja közöd. Bizonyos megvalósításokban B jelentése egy aldehid-hidrát.
P jelentése a fentiekben megadott és jellemezhető a (11) általános képlettel, ahol
E jelentése a fentiekben megadott, és számos megvalósításban a (III) vagy (IV) általános képlettel jellemezhető,
T$ és T-r egymástól Ifsggetlenül jelentés nélküli vagy egyenes vagy elágazó láncú, telíted vagy telítetlen C5 - Cxo alkil - vagy heteroatkil-eseport, Cd ~ Q telíted vagy telítetlen gyűrűs alkil- vagy gyűrűs heíeroalkil -esoport, helyettesített vagy helyettesítetlen aríl- vagy heteroaríl-csoport vagy helyettesített vagy hehedesitetien alkarilcsoport, álról az alkilresz Ch - C»o telített vagy telítetlen alkil vagy heteroalkaríl csoport.. A sznhszűmens lehet halogénatom, hidreedl-, karbonlk, karboxiláí-, észter-, főmül-, aeíl-, tiokarboml-, tioészter-, tioacetát-, tiofomüát-, alkom-, foszferd-, fbszfonát-, foszflnát-, ami.no-, amidé-, amidío~s ínün-, eiano-.
nit.ro-, aztdo-, szuifhídrd-, szulfát-, szulfonát-, szulfamoil.-, szulfőnarmdo-, szul.tóuib, hetetoeíkltl-, aralkil-, aromás csoport, heteroaromás csoport, Imino-, szili!-, éter- vagy aikílnocsoport.
Amennyiben d jelentése 0, nincs további L szubsztitóens az. aromás gyűrűn. Amennyiben d jelentése 1 - 4 értékű egész szám, az L szobsztitüéns lehet egyenes vagy elágazó láncú, telített, vagy telítetlen Cj - Q>e alkll- vagy heteroalkíl-esoport, C3 - C$ telített vagy telítetlen gyűrűs attól· v<y gyűrös heternaltól-esoport, helyettesített vagy helyettesítefien aril· vagy beférmmi-esopöÁ vagy helyettesített vagy helyetteshetien alkanlcsoport, ahol az altóirész €$ €28 telített vagy telítetlen áltól vagy heterealkaril csoport, A szubsztituens lehet halogénatom, hickotól-, karbont!», karhoxíláfo észter-, íormil- aell-, bokarbon.il-, íloészter-, tloaeetót», tlofbrmiát-, alkod-, foszforig íoszűmát-, íbszíinát-, umino-, amtdo-, amidin, inon-, eíano-, rnfro-, szidó-, sznlfhidni-, szulfát-, szoííbnát-, szulfaruoll·, sznlfonanudo-, smüfoníi-, hetótol ö elkltl-, araitól·, aromás csoport, heteroaromás csoport, ímrno-, szili!-, éter- vagy aldlíloesopori.
Amennyiben R. jelentése aldehídesopoA, a vegyűletek a (VI) általános képlet alá tartoznak, ahol az Összes szimbólum jelentése a fentiekben megadott.
Példán! amikor X és Y jelentése oxigénatom és R jelentése aldelndesoport a feltárás szerinti vegyületók (J) általános képlettel jellemezhetők, almi Tj és 1/ sznhszíituensek orto, méta vagy pata helyzetben lehetnek.
Ahol a T$ és Tj szabsztlíuensek egyenes lánca alkilosóporfok, és d jelentése 0, a vegyik letek a (IX) általános képlettel jellemezhetők, eltol az összes n jelentése egymástól függetlenül 0 vagy 1 - 5 értékű egész szárn és az összes szimbólum jelentése a fentiekben megadod. Bízóid nyes megvalósításokban Z jelentése hidrogénatom vagy mefiiesoport,
A vegyűletek egy külön osztóivá! képezik a (IX) általános képiem vegyületcken belül a (VB) és (Vili) általános képletű vegyűletek.
Jellemző aktivált políaikilénglikol vegyűletek közé tartoznak. a (8), (9),'(ló), (1?) és (18) képletű vegyűletek, amelyekben a políaikilénglikol PEG vagy mPEG polimer.
Számos megvtóösítósl formában a feltárás szerinti vegyűletek a (X) általános képlettel jellemezhetők, ahol, mint fent, n jelentése 11 vagy 1 - 5 értékű egész szám, és X jelentése O, 9, CG, CÖi, COS, SO, S02, CONR’, SOjNR’ vagy NE),
Amennyiben X jelentése NRk K’ lehet, hidrogénatom, egyenes vagy elágazó lánca, telitód vagy tólíteflen €5 - €^: áltól- vagy heferoaltól-caeport, C-* - C$ telített vagy telítetlen gyű3Ó tus áltól- vagy gyűrűs heteroaltól-esoport, helyettesített vagy helyeKesttótieo aril- vagy hetóroartl-csoporí vagy helyettesített vagy helyettesítette alkanlesopod, ahol az altóirész €$ €;$ telített vagy telítetlen áltól- vagy hetóroalkaril-esoport, ahol a helyettesítők a következők közül választóttók; hatógénatom, hídroxd-, kmboníl-, karbotóiát», észter-, fordul·, acrl·, iiokarboml·, doészter-, tioaeetát-, böímmíát-, alkotó-, fosztbríl·, foszfortól», fószfútót-, amlno-, amido-, arnklin-, imm-s ciano··, nrtro-, szidó-, szttiílndül-, szülét-, szulfenát-, szultamoíl-, szrdfenanüdo-, szulmnil-, hetetesk.Hk aralk.il-, aromás csoport, heteroaromás csoport, .imíso -, szüli-, éter- vagy alkiltloesoport. 2. tehet egyenes vagy elágazó láncú, telített vagy telítetlen Ci»Czo aikll- vagy heferoalkil-osoport, C3 - Cg telített vagy telítetlen gyűrűs slkil- vagy gyű5 rüs hotsroalkil-csoport, helyettesített vagy helyettesítette aríl- vagy beteroaril-csoport vagy helyettesített vagy helyettesítetten alkarilcsoport, almi az alklhész Cj - Cjc ieíhett vagy telítetten alkil- vagy heteroaíkaríl-csoport. Amennyiben jelen von, 0 szubsxiünens tehet halogénatom, hidroxik karbont!-, karboxílát-, észtet-, forrni!-, eeil-, tlokarbonik úoészter-, tíoacetát-, tloforudát-, alkoxí-, foszibrik, fosssfonák fosztínát-, amlon-, amldo-, amldín-, Imin-, etee-, nitro-, szidó-, sznlthldrfi-, szulfát-, szulfőnát-, sznílatnoik szulfenamido-x sznifonik hcteiociklík araik!!-, aromás csoport, heteroaromás csoport, lnn.no-, sziki-, éter- vagy aíkiUioesoporí.
Mist az a fentiekben megadott, R. jelentése .aktiváló csoport, amely képes kötést klalaklían! a (X) általános képletű vegyület és a biológiailag aktív vegyület vagy pmkttrzorja. között
Számos megvalósítást formában R jelentése aldehid-hidrát.
P jelentése egy fentiekben megadott, polialkiléngltel polimer, amely a (II) általános képlettel jellemezhető, ahol
B és a j elentése a fentiekben megadott, és számos megvalósításban a (ül) vagy (IV) általános képlettel jcltentezheío. Számos megvalósítási formában B jelentése, metilcsoport, és ennélfogva F jelentése mPBG.
Amennyiben R jelentése aldehid és X jelentése oxigén, a vegytlleiek a fXI) általános képlet alá esnek, ahol F, 2 és n jelentése megegyezik a (XI általános képieméi a fentiekben megadottakkal.
Amennyiben F jelentése mPEG, a vegyületek a (XII) általános képlettel írhatók le, Ás amennyiben n jelentése 1 és 2 jelentése mettl, a vegyületek a (XHi) általános képlettel jellemezhetők, ahol a jelentése 4 - 1ÖÖ00 értékű egész szám.
A. feltárás szerinti vegyületek előállítására szolgáló szintetikus utak példáit, az alábbi példákban adjuk meg.
A feltárás vonatkozik továbbá az aktivált poliaíkilénglikol vegyűleíeket íFGC-ek) és
311 egy vagy több biológiailag aktív vegyületet tartalmazó készítményekre. Amint a fentiekben megadott, a biológiailag aktív vegyületek. azok, amelyek biológiai választ vagy hatást fejtenek ki azon egyénben, akinek azt adagolták. Az egyénnek adagolhatunk nem konjugált biológiailag aktív vegynletoket is a .feltárás szerinti vegyieteken kívül. Továbbá a biológiailag aktív vegytűeiek. far&hnazhafoak reatóv csoportokat, melyek képesek reagálni, és így kapcsolódni legalább egy feltárás szerinti aktíváit PöC-vet
A feltárás vonatkozik továbbá az új PG€~k biológiailag aktív vegynletekkeí alkotott ksnjngátntnaira. Az egyik megvalósítási formában a konjngátnmok az (I) általános képletű vegyietekből és a (B) biológiailag aktív vegyietekből vannak kialakítva, a (XIV) általános képletnek megfelelően# ahol a fontiekkel összhangban nr jelentése 0 vagy L igy Y jelen van vagy' hiányzik, n jelentése Ó vagy 1 - 5 értékű egész szám, és X. és ¥ jelentése egymástól függetlenül 0, S, CG, CO2, COS, SO, SO,, COHRk SOjNIC vagy NIC,
Q jelentése- €3 - €$ telített vagy telítetlen gyűrűs aíkil- vagy gyűrűs heteroalkll-csoport lö (ideértve; kondenzált kéígyűrűs és áthidalt kétgyűrős szerkezetek), helyettesített vagy beiyettesítetlen ati!~ vagy heteroaríl-esoport vagy helyettesített vagy helyettesltetlen alkarücsoport, ahol az alkílfosz O; - Qs telített vagy telítetlen alkíl- vagy heteroalkaribesoport. Amennyiben jelén ven, a sznbsztítnens lehet halogénatom, hidto.xdl-, karbomb, karboxilát··, észter-, fonóik, acrl-, tiókafoonil-, tioészíer--, tioacefát-, üoformiát-, ídkoxi~. foszfort!-. foszfonát-, főszámát-,
I5 arnino-, árnído-, amldin-, Imin-, cián©-, nítro-, azido-, szulíbidfd-, szulfát-, sznlfonáí-, szaifamoll-, szolfonamtdo-, szttifonik hetetoeíklik aralkil-, aromás csoport, heforoaroióás csoport, intíno-, szii.Il-, éter- vagy alkuúoesoporL
Az. összes R.* és Z jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, egyenes vagy elágazó lánon, telített vagy telítetlen C; - alkíl- vagy heíeroalkil-esoport, (A - €§ telített vagy íelt20 tétlen gyűrűs alkíl- vagy gyűrűs heleroafkil-csoport, helyettesített vagy helyetteshetien szilvágy heteroaril-cscport vagy helyettesített vagy helyettesltetlen alkarílesoport, ahol az alkdrész €j ~ <A?i telített vagy telítetlen alkíl- vagy hetemalkaríl-nsoport, almi a helyettesítők a következük közűi választotok; halögénfoom, lódtoxfo, karhoníl-, karboxilM-, észter-, forrni!--,· aeil-, íiokarhonii-, Üoészter-, tloacetát-, thíoformlát-. slkoxk foszfor!!-, foszforát-, foszSnát-, arnino-, amidé-, amidén-, Imin-, eiano-, nit.ro-, azido-, szfofoidril-, szálfát-, szektorát-, szolfomoll, sztdforamtdn-, szuifomí-, heteioeiklíl-, aralkil-, aromás esoport, hetemaromás csoport, Imin©-, szÜib, étet- és alkíltioesoport;
R* jelentése egy kapesoíócsoport, amely az R csoport és a biológiailag aktív vegyűlctea található megfelelő fonkcíős csoport, 8, reakciójából keletkezik, amint az a fontiekben meglő adott. Például R* kialakulhat egy karbonsav-, észter-., aldehid-, aídehid-hídtát-, aceiál·, hldroxih, védett hidroxil·, karbonát-, alkenil-, akníáfo metaknláí-, akrílanűd-, helyettesített vagy helyettesltetlen ttot-, halogenatom, helyettesített vagy belyettesiteflen amin-, védett amin-, hidrazid-, védett hidrazid-, szukdtnmidil-, ízoeianát-, izotiocíanáí-, dUiopiridhu, vhulpiridm-, jödacetamid-, epoxid-, bidroxíazukdnhnidíl-, azok, mafoímid-, szállón-, allií-.
vmllszulfon-, uezil-, szulfo-N-szűkeim midik, dión-, meziE tozil- vagy gUoxálcsoport és egy hiolőgialíag aktív vegyület vagy prekorzoga közti reakcióval,
P jelentése egy a fentiekben megadott pollaUdlénglikoi polimer, amely a (II) általános képlettel jellemezhető, ahol £ jelentése hidrogénatom, egyenes vagy elágazó láncú Cj - Q® alkilcsoport (például metiksopotí), egy detektálható címkézés vagy egy olyas csoport, amely kötést képez a (XIV) általános képletü vegyület és a biológiailag aktív vegyület vagy ptekutzorjn között A fentiekkel összhangban a jelentése 4 - 10ÖO0 értékű egész szám,
Amennyiben £ jelentése egy detektálható címkézés, a címke lehet például egy radioaktív izotóp, egy fluoreszcens csoport, egy feszforeazeens csoport, egy kemilomineszeens cso10 pori vagy egy kvantumpont.
Amennyiben E jelentése egy olyan csoport, amely kötést képez a (XÍV) általános képiétu vegyület és a biológiailag aktív vegyidet vagy pfekutzorja között, E UuUKühut egy kötést egy másik biológiailag aktív vegyidéitől, B, Így az aktivált polialkílcugllkol vegyület mindkét végén egy hasonló típusú biológiailag aktív vcgyüfeíhez kapcsolódik, ezzel egy átmér mole15 kólát eredményezve.
Szamos megvalósítani hmnáhan £ kötést képez egy B-tól eltérő biológiailag aktív vegyüleitel, és tgy a biolögnnlag aktív vegyületek vagy prekurzorjainak beterodimerlét kapjuk.
Egyéb megvalósításokban E egy további kötést képez a biológiailag aktív vegvöleüe.1,
B, oly módon, hogy £ és R ugyanazon biológiailag aktív vegyűletnek vagy prekorzorjának különböző funkciós csoportjaihoz kapcsolódnak.
Amennyiben E képes egy kötést kialakítani a biológiailag aktív molekulával vagy preknrzorjávai, E lehet R-rel megegyezd vagy attól elférő és választható a kővetkezők közök karbonsav-, észter-, aldehid-, aldehid-hidrát-, acetáí-, hídfőm!-, védett hidroxll-, karhonátí, alkenil-, akdlát-, metakrilát-, akrdantíd-, helyettesített vagy helyctíesrfetlen tíoh, halogén» atom, helyettesített vagy hslyettesiietíen amin-, védett amin-, hidrazid-, védett hidrazid-, sznkcmmodíl-, izocianát-, izotíocianáf-, ditíopiridln-, vútílpiridin-, jódacetamid-, epoxld-, hiároxi$zukci.mmkUl-, ázol-, maleimid-, szuifon-, aiiik vinilsztdiou-, trezll-, szulfe-Nszukefeimidil-, dión-, mez! I-, tozil- és ghoxálcsoport.
Amennyiben E képes egy kötést kialakítani a biológiailag aktív molekulával vagy preknrzoriával, E rendelkezhet a (ΊΠ) vagy (IV) általános képletü szerkezettel, ahol a képletekben az összes Q, X, ¥, 2, m és u jelentése egymástól föggetíenül a fentiekben meghatározott, az összes W jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy a Ch - €? alkllcsoport, R!t jelentése egy olyan csoport, amely kötést képez a (III) általános képletó vegyület és a biológiailag aktív vegyidet vagy pmhuzorja között, és R!ÍS jelentése egy olyan csoport, amely kö25 tést képez a (IV) általános képiem vegyület és a biológiailag aktív vegyület vagy preknrzona között.
R” és R’“ jelentésé egymástól függetlenül a következők közül választott: karbonsav-, észter-, aldehid', aldehid-hidrát-, ecetéi-, hídroxik védett hidroxil-, karbonát-, aíkeml-, nkzöát-, metakrilát-, akrilamld-, helyettesített vagy helyettesítette» iloi-s haiogénátom, helyettesített vagy helyettesiteílen, mn-, védett amin-, hidrazld védett hidrazld-, szukeinimídü-, ízoclanát-, izothaeianák, dítiopiiidín-, siuilpiridín-, jődaeeíatnid-, epoxíd-, hidroxiszuketnímiátl-, azol-, malehníd-, szul&n-, aiili-, vmlbznlfon-, trezik, szalfó-bi-szukeimmidll-, dióm, mozik tozll- és gliozálesoport lö Amennyibe» a (X ÍV) általános képletben szereplő Q jelentése helyettesített vagy helyettestieden alkaréi, a konjugátum az (V) általános képlett! aktivált políalkilénglikeiből és egy biológiailag aktív rnoiekulhóí, B, álakul ki, és a (XV) általános képleüól jellemezliefö, ahol T{ és 'k egymástól függetlenül jelentés nélküli vagy egyenes vagy elágazó láncú, telített vagy telítetlen C} - €χ> aikil- vagy heteroalkil-csoport, Cs - €s telített vagy telítetlen gytírős aíldl15 vagy gyűrűs heieroalkíkesoporl, helyettesített vagy helyettesítette áril- vagy heteroaríi-esopotí vagy helyettesített vagy heíyettesítetlen alkarílesoport, ahol az alkllrész Cj - fk fehtott vagy telítetlen aikil- vagy heteroalkadl-esoport Amennyiben jelen van, a. szobsztituens lehet bnlogénatom, hidroxll-, karboníl··, karboxilát-, észter-, íormtk acü-» hokathotűi-, tioészter-, tioacetát-, tiofomiiát-, alkod-, foszíorik tosztbnát-, foszimát-, snréno-, ttmido-, auúdm-, intim, cíano-, πίϋο-, szidó-·, szniihidrik szulfát-, szttlfonát-, szaUhtnoik sznlfónatnido~, szuHhník, betetoelkill··, araikik, aromás csoport, heteroaromás csoport, inúno-, szilíi-, éter- vagy slkiltioesoport, Számos megvalósítási formában Ί) és T2, amennyiben jelen vannak, egyenes vagy elágazó láncú telített vagy telítetlen vagy C, - aikil- vagy heteroalkil-esoponot jelentenek, d jelentése Ö (például nincs L szubsztituens az aromás gyűrűn) vagy 1 - 4 értékű egész szám. Az Összes t, amennyiben jelen vw, egyenes vagy elágazó láncú, telített vagy telítetlen Cl - Cís aikil- vagy hetcroalkí Ι-csoport, Cj - C$ telített vagy telítetlen gyűrűs álkik vagy gyűrűs heteroaikil-esoport, helyettesített vagy heíyettesítetlen érik vagy heíemazil-csoport vagy helyettesített vagy heíyettesítetlen alkarílesoport, ahol az alkllrész C5 - Cjv telített vagy telhet30 len aikil- vagy heteroaikaril-esoport A sznhsztitnens lehet halogénatom, hídroxik Kézbőrök karboxilák észter-, formik acik, Éiokarboaik fioésztez-, tioacetát-, tiofomiiát'. alhoxk, ibszíörik főszámát-, főszámát-, amino-, amidé-, amidin-, in»n··, eiano-, nit.ro-, azido··, sznifhidrii·', szulfát-, szultbnát-, szólta moll·, sznííbutonido··, szulfonii-, betetociklíl-, araik!!-, aromás csoport, hcteroaromás csoport, imino-, szilik éter- vagy alkiltiocsoport.
Az Összes egyéb stmtböinm jelentése a feuttekben megadott, ídeeme P-ι, amely egy polialkilóngltkol polimer, amely a (H) általános képlettel jellemezhető, ahol E jelentése hidro10 génatom, egyenes vagy elágazd láncú Cs - aikücsoport (például metilcsoport), egy d Ülhető címkézés vagy egy olyan csoport, amely kötést képez a (XV > általános képlete vegyület és a biológiailag aktív vegyület vagy pmkmzorja között. A fentiekkel összhangban ajelentése 4 - l.ÖÖOÖ értékű egész szám .
Amennyiben E jelentése egy detektálható címkézés, a címke lehet például egy radioaktív izotóp, egy fluoreszcens csoport, egy foszforeszcens csoport, egy k&míimmneszcens csoport vagy egy kvanünupont.
Amennyiben E jelentése egy olyas csoport, amely képes kötést kialakítani a (XV) általános képleté vegyület és a biológiailag aktív vegyület, B, között, E kialakíthat egy kötést egy másik biológiailag aktív vegyülettel. B, Így az aktivált pollelkiléngllkol vegyület mindkét végén egy hasonló típusú biológiailag aktív vegyülethez kapcsolódik, ezzel egy dimer:
eredményezve.
Számos megvalósítási formában B kötést képez egy B-töl eltérő biológiailag aktív vsgyülsítel, és így a biológiailag aktív vegyietek vagy prelmrzorjainak heterodímetjét kapjuk.
Egyéb megvalósításokban E egy további kötést képez a biológiailag aktív vegyüleftel.
B, oly módon, bogv E és R ugyanazon biológiailag aktív vegyüleinek vagy preknrzíujának különbőzó funkciós csoportjaihoz kapcsolódnak.
Amennyiben E képes egy kötést kialakítani a biológiailag aktív molekulával vagy prekurzcrjával. E lehet R-rel megegyező vagy attól eltérő és választható a kővetkezők közül; karbonsav-, észter··, aldehid-, akiehíd-hidrát-, acetárt. hitirozii-, védett hidrox.il-, karbonért, álként!-, akrilárt, metaknlát-, akrihrníd-, helyettesített vagy helyettesítette» íiol-> 'halogénatom, helyettesített vagy helyettesítetlen amin-, védett amin-, hídmzid-, védett hídrazid-, sztAcitúmídil··, izocianát-, izotiocianát-, ditíopíndin-, vínilpirtdin-, jóöacetomid-, epoxld-, iudroxiszuketnímidil-, azok, maleimid-, sznlfon-, allirt, viudsztdion-. treztrt. sztűfo-Nsznkclnimíűll-, dión-, mezík, tozíh és glloxálcsoport.
3Ö
Amennyiben E képes egy kötést kialakítani a biológiailag aktív molekulává! vagy pretezorlávaí, E rendelkezhet a (Hl) vagy (IV) általános képlete szerkezetteh ahol a képletekben az összes Q, X, Y, Z, m és n. jelentése egymástól függetlenül a fentiekben meghatározott, az összes W jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy a C$ - ü? alkilcsoport, R jelentése egy olyan csoport, amely kötést képez a. (1.Π) általános képlete vegyület és a bio27 lógfeilag aktív vegyidet vagy prekurzorja között, és Rí!! jelentőse egy olyan csoport, amely kötést képez a (IV) Óltalános kőpletú vegyület és a biológiailag aktív vegyület vagy prekímzogs között.
R és R!!: jelentése egymástól függetlenül a kővetkezők közül választott; karbonsav-, észter-, aldehid-, aldehid-hidrát-, aceiál-, bidroxil-, védett hidrcxib, karbonát-, alkenil-, akrt.lái-, rnefekriíát-·, akrilamid-, helyettesített vagy bclyeheehette tíol-, ha.Iogéoatom5 helyettesíted vagy helyettesítette amin-, védett amin-, hhirazid-, védett hidrazid-, szukeinimidik izoeteátí, izotíoeianák ditíophidin, vmílpiddiu-, iődacetamid-, epetek hídfoxiszukcimmidik azok, maleinud-, szelte-, allik vinilszul.tbn-, totók szulfo-N10 -sznkcinimidil-, dión-, mezik tozib és glioxálesoport.
Amennyiben a biológiailag aktív vegyidet vagy prekm'zorjának mindkét végén kötés van, á megfelelő hifunkelös molekulák a (XX) és (XXI) általános képietekkel jellemezhetők, áltól az összes X és Y,T; és Τχ, R' és X, E, Q, m, n, á, és n jelentése a fentiekben megadott, és az összes W jelentése egymástól függctteül hidrogénatom vagy a Cj - C? alkllesöport. R* és
M** jelentése egymástól függetlenül kapesolóesoport, ami az R és R csoportok és egy bioiégbilag aktív vegyület. vagy prekurzorja közti reakcióban alakul ki, ahol B és B’ a biológiailag aktív vegyület vagy prekmzorja, az R és R* csoportokkal történő kapcsolódás után.
Számos megvalósítási formában B és B' azonos típusé biológiailag aktív vegyület Egyéb megváltásokban R és B! eltérő biológiailag aktív vegyület Még további megvalósí20 fásokban 8 és B! ugyanazon biológiailag aktív molekula. Még további megvalósításokban R* és íte megegyező. Egyéb megvalósításokban R* és R** különböző. Például számos megvalósításban E kialakíthat egy .kötést a biológiailag aktív vegyület egy másik mofeknlájávai .(Bs:: B'>, W s® aktivált PGC 'mindkét végén ugyanazon típusú biológiailag aktív vegyületmolekula kapcsolódik, Így a molekula dimerjét kapjuk. Számos megvalósítási fermában B kötést hoz létre 8-től ekére biológiailag aktív vegyülettel (B és B‘ eltérő), és így a biológiailag aktív ve~ gyületek vagy prekurzorjaik heterodinrerjét kapjuk. Egyéb megvalósításokban B egy további kötést alakit ki a biológiailag aktív vegyülettel, B, Így mind B <R vagy R*í! csoporton kérésztök mind R a biológiailag aktív vegyület vagy prekurzorja ugyanazon molekulájának különböző funkciós csoportján keresztül kapcsolódnak.
Számos megvalósítási formában R* vagy R** jelentése metiléncsoport és B vagy B! jetetőse anünocsoportot tartalmazó bmlógiaiiag aktív vegyület, ahol a metíléncsoport alkotja a kötést a B-n található mniwcsoporrtal. Például az amin lehet egy pepiid végén található ammoesopork egy pepiid mnmosav oldalláueáoak amincsoporlja vagy egy glikozilezett pepiid gíikozifező sznbszöíueosének az ammesoporija, Számos megvalósítási fermában a pepiid egy interferon, mint mterferonA példád interferon-Ű-la. Számos megvalósítási formában a kötés reduktív aikilálást reakcióval vau kialakítva.
Amennyiben a (XV) általános képletű vegyület T{ és ?2 szubsztituensei elágazó láncú aikÜcsopottok, X és Y jelentése oxigénatom és d jelentése 0, a konjugátamot a (XIX) általa5 nos képiedéi jellemezhetjük, ahol az összes u jelentése egymástól függetlenül 0 vagy 1 - 5 értékű egész szám és az összes szimbólum jelentése a fentiekben megadott. Bizonyos megválóadásokban. Z jelentése hidrogénatom vagy meíilcsopott.
A vegyieteknek a (XV) általános képlet alá eső bizonyos osztályai a (XVII) és (XVHI) általános képletekkel jellemezhetők, mehek a dleae t Vili) általános képiem vagyaié' ö leknek egy biológiailag aktív vegyüietoek vagy prekurzotjának .reakciójával állíthatók elő. A (XVI1) és (XViií) általános képletben n jelentése 0 vagy I - 5 értékű egész szám, P jelentése a íentiekben megadott pobalkiléngllkol polimer, Z jelentése iűdrogénafom, egyenes vagy elágazó láncú, telített vagy telítetlen C-, - O·» alkll- vagy heteroalkil-csopon, R* jelentése fentiekben megadott kapcsolócsoport, B jelentése biológiailag aktív .molekula. Ezek a vegyületek lelő bet bi- vagy .monofnnkciősok, az E minőségétől függően, összhangban a fentiekkel ledlákkak Számos megvalósítási tormában R* jelentése .metíiéncsoport és B egy biológiailag aktív molekula, amely egy ammocsoportot tartalmaz, ahol a metíiéncsoport alkotja a kötést a B-n található amínoesoporttal, Például az amin lehet egy pepiid végén található amiuoesoport egy pepiid aminosav oldalláneának ami»csoportja vagy egy glikozllezett pepiid gllkoztlező sznbszdtuensének az aminesoportja. Számos megvalósítási formában a pepiid egy interferon, mint ínterferon-E, például imerferon-B-la. Számos megvalósítási formában a kötés reduktív aikilálást reakcióval som kialakítva,
A feltárás szerinti konjugátumoknf kialakíthatjuk a (X) általános képletíi vegyületek és egy biológiailag aktív vegyület vagy prekurzorja közti reakcióval, és Így kapjuk & (ΧΧΠ) álta25 lánca képlett! koojugátumokat, ahol 8 jelentése egy a fentiekben megadott biológiailag. aktív molekula, és n jelentése ö vagy 1 - 5 értékű egész szám.
X jelentése O, S, CO, CO2, COS, Sö, SO2, CÖNR, S02Ws vagy W, amennyiben X jelentése NIC, R’ jelentése hidrogénatom, egyenes vagy elágazó lánca, telített vagy- telítetlen Cj - C2S alkll- vagy heteroalkil-esoport, C3. - C§ telített vagy telítetlen gyűrűs alkll- vagy gyű30 rűs heteroalkil-csoport, helyettesített vagy helyettesítene» aril- vagy heteroar.ll-csopo.tt vagy feelyettesitett vagy helyettesttetlen alkarHcoopott, ahol az alkihész. C} ~ telített vagy telítetlen alkll- vagy beteroalkarll-csoport. Amennyiben jelen van, a helyettesítő lehet halogénatom, hidroxii-, kárbonib, karbozilát-, észter-, ibrmil-, aclí-, tíokatbonll-, tíoészter-, tloacetát-, tíoformlátt, alkrnd-, fbszM-, fbszfbnát-, fosztínat-, ámroc, auűdo-, anűdm-, műn-, eiano-.
tűim-, azido-, szuiíhídnl·, szulfát-, szállónál-, szórtamon-, szulfonemído-, sznifoml-, heteíoetkhl-, araikÜ-, aromás esöpert, heíeroarotnás csoport, isiin»-, szili!-, éter- vagy jelentése egyenes vagy elágazó láncú, telített vagy telítette €> - Cba alkil- vagy betaroalkll-csoport, Q - Cg telített vagy telítetlen gyűrűs aik.il- vagy gyűrűs heferoartdl-csoport, helyettesített vagy helyettesítette atíl- vagy héteroartl^eseport vagy helyettesített vagy beiyatterttetíen álkaolesoport, ahol o alkllrész Cj - Cfe telített vagy telítetlen alkilvagy heteroalkarti-esoport. A szuhsxtííuens lehet halógénatom, habozik karbont!-.
karbozílát-, észter-, fonni!-, acli-, tiokarbonil-, tioészten-, tíoaeeíát~, tíolbrmíát-, alkod-,, foszfort!-, fos? fonat-·, főszámát-, amano-, amido-, anndm-, Imin-, eia.no», nitro-, azido-, sztütíddril-, szálfát-, szalfonát-, szaltetoib, szuliteamióö-, szntíóeál-, hetetoctkiil-, aralkíl·, aromás csoport, heteroaromás csoport, imíno-, szüli-, étet- vagy alkiitíoesoporh
R* jelentése egy kapeaoiőesoport, amely az R csoport és a hiológíatlag aktív vegyületeu található megfelelő funkciós csoport, B, reakciójából keletkezik, amint az a fentiekben megadott, Például R* kialakulhat egy karbonsav-, észter-, aldehid-, aldehid-hidrát-, ueetál-, Indrotd-, védeti hidroxi!-, karbonéi-, aikcoib, aktilat-, memkulát-. akrílumid-, hely<pesüctí vagy helyettesítette tini-, halogénatom, helyettesített vagy helyettesítette amin-, védett amin-, hidrazid-, védett bidtaald-, sxtdmimmidü-, Izoeianái-, izotíocianát-, dillopiridín-, vinilplddtn-, jődacetamid-, epoxid-, hidroztszukclnműdíh·, ázol-, maletnűd-, szülte-, allil-, vmtbzullóm, trezilsznifb-N-szukclmmidd-, dión-, maxii-, íozil- vagy giioxálosogort és egy biológiailag aktív vegyület vagy preknrzorja közti reakcióval
Számos megvalósításban 2 jelentése metílcspport és n jelentése 1.
F jelentése egy a fentiekben megadott poilaikilénglikol polimer, amely a (Π) általános képlettel jellemezhető, ahol E jelentése hidrogénatom, egyenes vagy elágazó láncú €> - €2» álkilesoport (például mettlosoport), egy detektálható címkézés vagy egy olyan csoport, amely kötést képez a (XXII) általános képletű vegyület és a biológiailag aktív vegyölet vagy preknnzotja között, A fent lekkel összhangban a jelentése 4 - 1Ü0ŰÖ értékű egész szám.
Amennyiben £ Kiöntése egy detektálható etnúe?e\ a címke lehet példáid egy radioaktív izotóp, egy fluoreszcens csoport, egy foszíoreszceos csoport, egy kérni lumineszcens csoport vág)·' egy .kvantumpont,
Ámennythen E jelentése egy olyan csoport, amely kötést képez a biológiailag aktív vegytíiettel vagy preknrzoriával, egy bifnnkciős molekulát kanunk. E kialakíthat egy kötést egy másik biológiailag aktív vegyöletíel, B, igy az aktíváit poilaikilénglikol vegyület mindkét vé30 gén egy hasonló típusú biológiailag aktív vegyidéihez kapcsolódik, ezzel egy dimer molekulát eredményezve,
Számos megvalósítási formában B kötést képez, egy B-töl eltérő biológiailag aktív vegyülettel, és Így a biológiailag aktív vegyülelek vagy preknrzorjainak heterodimorjét kagíoL
Egyéb rncgvalósitésokhan £ egy további kötést, képez a biológiailag aktív vegyotetteh
B, oly módon, hogy B és R ugyanazon biológiailag aktív vegyidéinek vagy preknrzorjának különböző funkciós csoportjaihoz kapcsolódnak
Amennyiben £ képes egy kötést kialakítani a biológiailag aktív molekulával vagy prekarzorjávai, B lehet R-rel megegyező vagy attól eltérő és választható a következők közök iö karbonsav-, észter-, aldehid-, aldehid-hidrát-, acetál-, hidroxil-, védett hidroxil-, karbonát-, siketül-, akrllát-, metakrllát-, akriíamid-, helyettesíted vagy helyteteshetien tiol.-, halogénafotn, helyettesített vagy helyettesítetlen amin··, védett amin-, hidmzid-, védett hidrazíd-, sznkemmtídii-, izoeianát-, ízotfoeíaoát-, ditíopíridin-, vteüpirídm-, jődaeetamid-, epoxid-, hldroxísznkeimmldil-, ázol-, maleimid-, sznlibn-, allil·, vínílszulion-, írezil·, szulfo-N15 sznkchnnddil-, dión-, mezil-, íoztl- és giíoxélcsopork
Számos megvalósításban £ a (Ili) vagy (IV) általános képiem szerkezettel jellemezhető, ahol a képletekben az összes Q, X, Y, Z, m és n jelentése egymástól függetlent! a fentiekben meghetámzott, az összes W jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy a Ct - C7 slkíleseperi, R” jelentése egy olyan csoport, amely kötést képez á (III) általános képlett), velő gyület, és a biológiailag aktív vegyidet vagy prekurzorja között, és Rífi jelentése egy olyan, csoport, amely kötést képez. & (IV) általános képiéin vegyülte és a biológiailag aktív vegyidet vagy prekurzorja. között.
R!í és R™ jelentése egymástól íhggetlenttl a kővetkezők közöl választott; karbonsav-, észter-, aldehid-, aldehid-hidrát-, acetál-, hidroxil-, védett hidroxil·, karbonát-, elkenik akrllát-, metakrllát-, akrüamid-, helytetesittet vagy helytetesíttelen tiok huíogénaíom, helyettesített vagy helyettesítetlen amin-, védett amin-, hidrazíd-, védett hidrazíd-, sznkcinímidil·, izoeianát-, izotioclanát-, ditlophidin-, vinüpírídin-, jődneetemid-, epoxid-, hidroxiszukemimidll-, ázol-, maleirníd-, szolfon-, allil-, vinilszolfon-, trez.ll-, szniib-N-szukcíntmiáil-, dión-, mezil-, tezü- és glioxélcsoporh
Amikor egy biológiailag aktív vegyület vagy prcknrzora mindkét végéhez, kötődnek, ezen hiíankdős molekulák lehetnek, a (XX.1Y) vagy (XXV) általános képlet szerinti vegyüíetek, ahol az Összes X és Y jelentése egymástól függetleníti ö, S, €0, Cöj, COS, SO, SQj, CONR’, SOjNR* vagy NR!, és az összes R’ és Z jelentése egymástól függetlenül hidrogén31 atom, egyenes vagy elágazó láncú, telített vagy telítetlen Ci - Qs áltól· vagy heie.roslkíi-CSOpOrt.
Q jelentése €3 - C§ telített vagy telítetlen, gyúrás altól· vagy gyúrás teterotótól^soport (ideértve: kondenzált kétgyürás és áthidalt kétgyárás szerkezetek), helyettesített, vagy helyek testtetbn ar.il· vagy heíeroaril-csoport vagy helyettesített vagy helyettesítette» alkanlésopott, afeni az altólrész Cj - Cee telített vagy telítetlen altól· vagy heteroalkadl-csoport. Amennyiben jelen van, a helyettesítő lehet Megértetem, hidtotól-, karbont!-, karbotóiát-, észter-, tani-, acil·, tiökarboml-, tíoészter-, tioaceták tlnfermiát, alkotó-, foszfort!-, rbszfbnát-·, foszfinát-, amho~s amidé-, smídítn, hm»-, eiane-, rntto-, szidó-, sznlfeldn!-, szülték szulfenát-,
IÖ sxehhmoil-, axtdfónamido-, szulíbnlh, hetetoeitóil·, araitól·, aromás csoport, hetemaroxnás csoport, imme-, stóiíl·, éter- vagy alkíhíoesöporl.
Ázösszes W jelentése egymástól függetlenít! hídrogénatenvagy a C< - C? aíkílesöpori, m jelentése Ö vagy 1, a jelentése 4 - 10Ö0Ű értékű egész szám, és az. összes n jelentése egymástól függetlenül 0 vagy I - 5 értékű egész szám.
R* és R** jelentése egy mástól függetlenül a fentiekben megadott kapcsolőcsoport, B és
B! jelentése egymástól függetlenül hologiailag aktív molekula, és lehetnek azonosak vagy különbözőek.
E (R*-n vagy R*‘-n kérésztől) léírehozhat egy kötési & biológiailag aktív vegyidet (B) másik moletódájához, úgy hogy aktivált polialtólénglíkol vegyület az azonos típusé biológiai20 Ing aktív vegyület molekulájának bármelyik végéhez kötődik, igya molekula dimerjéi htt létre.
Számos megvalósítási formában E (ΙΓ-η vagy R!~n keresztül) B-től eltérő biológiailag aktív vegyületle! egy kötést képez, így biológiailag aktív vegyületek vagy ptekurztuaik heterodimegét hozza létre..
Egyéb megvalósításokban B (Rő-a vagy R.‘”-n keresztül) egy további kötést képez a B biológiailag aktív vegyülertel ágy, hogy mind E, mind R a biológiailag aktív vegyület vagy prekurzorja azonos molekulájának különböző funkciós csoportjain keresztül kötődnek.
R” és R:!< lehet R-ret megegyező vagy attól ehe.ro, és a következők közül választott: karbonsav-, észter-, aldehid-, aldehid-hidrát··, aeetál-, hidroxil-, védett hidroxil-, karbonát-,
3(1 alkarok akrilát-, metakrílát-, akrilarníck helyettesített vagy helyetteshetlen bel·, halogénatom, helyettesített vagy helyetlesttetlen amin··, védett amin-, hidrazid-, védett hidrazid-, szttkeinimidil-, izoclanát-, izotiöeiaaál·, dirtopindin-, vmiipirldln-, jódacetamid-, epoxid-, hidroxiszukeimmidil-, ázol-, maíetmld-, sznlfon-, all.il-, vmibzulfom-, trezll·, szulfo-N~szuke.Inirnid.il-, dión-, mex.il·, totói- és glioxálcsoport.
Számos megvalósítási fomiáte R* vagy R** jelentése medlénest)porí, és B vagy B jelentése egy antínocsoportot tartalmazó biológiailag aktív molekula, ahol a metllénesopott egy kötést hoz létre az minocsoportíal B molekulán. Például az amin lehet e-gv poptid amin-vőge, egy pepiid amloosav oldaliáneának arninja. vagy egy gliboxilezelt pepiid glikozilezési szuhsztitnensének arninja, Számos megvalósítást formában a pepiid egy Interferon, így példa«1 interferon-béta. például lnterferon-béta-1 a. Számos megvalósítási formában az. Ilyen típusú kötés reduktív aikllezési makóié útján képződik.
mbernk vagy állatok fizikai vagy szellemi jóllétének egyébként! növelésére szánnak. Bioló-
gok, proteinek, enzimek, kis molekulák, festékek, lipidek, imkleozidok, oiigonukieotidoL
szecskák, felőletek és micellák. A vegyületek ezen csoportja magában foglalja ezen molekula
gok csoportjaiba tartoznak - korlátozás nélkül - öltőidnek, kerneleinek, hmlbkinek, oidékouy
hafőanyagok, daganatellenes hatóanyagok, kardlovaszkuláris hatóanyagok, szorongás elleni hatóanyagok, hormonok, növekedési faktorok, sztetoid hatóanyagok,
polimer konjngainmok előállítására használunk fel, előállítható emlős emraktumból, mint amilyen például a. humán, a kérődző vagy a marha, interferon, vagy lehet szintetikusan vagy mkombioánsén előállított
«X «X
-P) beadása megnövekedőit terápiás előnyöket biztosit, egyidejűleg lényegesen csökkenti vagy teljesen kiküszöböli azokat a nemkívánatos mellékhatásokat, amelyek nomálisan konvenelonálisan gyakorolt interferon-alfa vagy -béta kezelési rendekkel függnek össze,
A PöC IFN-béta előállítható egy polialkilén polimernek az íFN'-héta molekula terminá5 Ms aminoesoporrjához történő kapcsolásával Egy egyedülálló aktíváié poitalkilénglíkol molekula knnjugálhaló az ÍFN-bétaN-végélmz reduktív alkilezésí reakció útján.
A FOG IFN-béta konjugátnm kiszerelhető például feiyadékkéni vagy HoElizált porként injekcióhoz. Áz IFIM-bétának FGC-vol történő konjugációjának célja a proteínleadásnak növelése plazmslele/ést idejének jelentős magnósa mofeusu útján. e.\ rzdhal az II N-béta megnő vekedett. akthútásának biztosítása,
Az interferon vagy 1FN kifejezések a jelen leírásban alkabmva. nagymértékben homológ ^specifikus proteinek családját jelentik, amelyek gátolják a Mmsrepltkaeiöí és a cellulárís proiiferáeiőt és szabályozzák az immunválaszt.. A humán interferonok kél csoportba sorolhatók: az l típus, amelynek körébe tartozik az n- és a jVhtterferon, és a 11. típus, amelyet csak a y-imerferon képvisel. Minden egyes csoport rekombiuáns formait kifejlesztették, ás azok a kereskedelmi forgalomban kaphatok. Minden egyes csoport altípusai antigén/szerkezeti jellegzetességeken alapulnak,
A béta interferon”, béta-interferon, béta IFN, béia-IFN, β interferon, β-interférőn, β IFN, β-ÍFN, interferon béta”, Interferon-béta”, interferon β, interferon-β,
IFN béta, 'TO-hétá', IFN β, IFN-β, és «humán hbrohlaszt interferon kifejezéseket a jelen leírásban egymással feícserélhetően alkalmazzuk az interferon béták csoportjának tagjai ismertetésére, arnehek megkülönböztető nmmoan s/eMeeernkku; remi Ikecnek amim azt a peptideket kódoló DNS izoláláséval és szekvenálásával azondshöhafc.
Továbbá, a béta interferon la, béta Interferon-Iá’ béta-ínterferon la, béta-lntor25 feron-Ia, béta IFN la, béta IFN-la, béfe-IFN la, béta-lFN-la, β interferon la, β im ferfemn-la, β-interferon la, ^-iuferferomía, ”β ÍFM la, β IFN-la, β-IFNla, β-ΪΡΝ-b, mterferonbéta la, interferon béfa-la. Interferon-béta la, interferon-béín-la, interferon β la, interferon β-la, mterferou-β la, ínterferoo-jl-la, IFN béta la, IFNbétn-fe, IFN-béta la”, IFN»héta-Ia, fFN β la, ÍFN β-la, «IFN-β la”, IFN-p-b kifejezéseket a alhtoh nuerfemn béta megjelölésére, amely a természetben elölmdulo twd típusút ammoasv szekvenciákkal rendelkezik.
Az interferon előállításához alkalmazott rekoniöináns DNS technológia fejlődése lehetővé tette több humán interferon sikeres szintetizáláséi, ezáltal lehelségessé téve az ipart lép34 íékü fermentálást előállítást, izolálást és különböző iatoxfenosok homogenitásig történő tisztítását A rekouünnánsan előállított interferon megtartja m várna és m wn vitusellenes ás lmmunszabáiyoző aktivitásainak egy részét vagy nagy részét Érthető az is, hogy a rekombináns foehmkák körébe tartozhat egy giikolizálási hely alkalmazása egy szénhidrátosoport addfciő5 jához a rekombmánsan előállított poHpepdden,
Á humán flbroplaszt hne.rferon legalább egy részét kódoló szekvenciákat tartalmazó rekomblnáns DNS piazmidok előállítása ás a humán íibrohlaszt interferon immunológiai vagy biológiai aktivitásával rendelkező polipeptid ezpmsszálása is a találmány tárgyához tartozik. Különböző altípus szekvenciák kombináelöit tartáhnazó hibrid béta-interferon gének elöállíI 0 tása végrehajtható a szakember számára ismert technikák segítségévet
Tipikus megfelelő rekomblnáns héta-ínterferonok, amelyek felhasználhatók a találmány megvalósí tásában - korlátozás nélkül -- az interferon béta-la, így példánl az AVÖNEX^, amely a Biogen, Inc., Cambridge, MA vállalattól szerezhető be, és az interferon-béta-lh, így például a ÖETASERON^, amely a Bérlés, Ríchnmnd, CA vállalattól szerezhető be.
Sok mechanizmus van, amelyek útján 1 FN-indukáli gén termékek védöhatásokat biztosítanak vfetsferfözéssel szemben. Ilyen víms-inhibitor hatások a vírus-életciklus különböző fázisainál jelentkeznek. Lásd; ő 030 785 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, Példánl az 1FN gátolhatja vírosrészeoskék. féltőmsét, vírusok által okozott penetrációt és/vagy láziéi.
A találmánnyal összefüggésben. kezelhető állapotok általában azok, amelyek Interferon kezelésre érzékenyek,. Például érzékeny állapotok, körébe tartoznak azok, amelyek pozitívan vagy előnyösen reagálnának (amint ezen kifejezések ismertek az orvosi gyakorlatban) ínterfetón béta-alapú terápiára. A találmány céljaira azon állapötök kőmbe, amelyek kezelhetők a jelen leírásban ismertetett interferon béta terápiával, tartoznak azon. állapotok, amelyekben egy interferon bétával történő kezelés bizonyos mértékű hutást mutat, de az ΙΡΝ-β kezelés negatív mellékhatásai kisebbek az előnyöknél. A feltárás szénád eljárásokkal történő kezelés konvencionális interferon béta kezeléshez képest lényegesen csökkent vagy kiküszöbölt mellékhatásokat eredményez. Továbbá, az lFN-β kezelésre tradicionálisan alkalmatlannak gondolt állapotok, vagy azon állapotok, amelyekre nem praktikus az lPN-β kezelési dózisával történő ke30 zeíés, kezelhetők a feltárás szerinti eljárásokkal.
A feltárás szerinti FGC í.FN-β vegyűletek alkalmazhatok önmagokban vagy egy konkrét állapot kezelésére alkalmazhatók egy vagy több hatóanyaggal kombinációban, Legalább egy kísérleti vizsgálatot hajtottunk végre krónikus hepatitís-C kezelésére reknmbiuáns Interferon héta.-ia-vaí. Lásd; általában Llabersetzer és tárná, kiver 30:437-441 (2ÖÖŐ) szakiredálmi he35
Ivet, amelyet azúteu .referenciaként leírásunk részének tekintünk. Például a vegyületek beadhatók vimsíértózés kezelésére szolgáló ismert vírusellenes hatóanyagokkal kombináclőhan. Lásd: a Kakumu és társai, Oastroenterology 105:507-1.2 (1993) és Fepmsky és társai. J. Pharmaeology és az Experímental Thempeutics, 297; 1059-1066 (2001) szakirodalmi hlvatko5 zásokat
A jelen leírásban alkalmazva a víruselleui hatóanyagok kifejezés magában foglal például kisméretű molekulákat, peptídeket, cukrokat, proteineket, vírusból származó molekulákat, prníeáz inhibitorokat, nnkleotld analógokat és/vagy nnkleozíd analógokat .Egy kisméretű molekula” kdéj ezés a jel en leírásban alkalmazva egy olyan szerves molekulára utal, amelynek molekulatömege kisebb, mint körülbelül 2500 ama (atomi tőmegegység), előnyösen kisebb, mint 1000 amn, Megfelelő vírusellenes vegyületek példáinak kóréhe tartoznak kodám/ás nőikül - a nbavmn, a leves mm az MBo8o6, a fiam udm ’ l C,' FTí' az actk lovig a ganeikiovir, a viramkí, a VX-497, a VX-950 és az 1SÍS-14803.
Interbronnai kezelhető állapotok példáinak kóréhe tartoznak - korlátozás nélkül - sejt15 bnrjánzásos rendellenességek, konkrétan a szklerózis multiplex, a rák (például csillóssejt-leukémia, a Kaposí-szarkoma, a krónikus rniefegén-leukémia, a többszörös mlelőma, a hazába sejtkareinóma es a rosszindulatú melanóma, a méhrák, a fonón T-sejt limloma) és νί~ rnsfertózések. Korlátozás nélkül az interfemnoal történő kezelés alkalmazható olyan állapotok kezelésére, amelyek előnyösen változnak interferon-érzékeny vírusok replikáeíőjának gáfiásá2Ö tői. Például az interferon alkalmazható önmagában vagy kombinációban AZT-vei humán ímmunhiányos vírus (HÍV)/AIDS kezelésében vagy kombináoíőhan rihavírmnel 1-1CV kezelésében. Víruslértózések, amelyek a talámáonyal összhangban kezelhetők - korlátozás nélkül - a feepatítisz-A, a hepadtísz-B, a hepatítisz-C, más nem-A/nem-B hepatitisz, a berpeszvfcas, az BpMem-Barr víros (EBV), a eitomegalovírus tCMV k a herpesz-szimplex, a ó-típusú humán herpesz vírus (HHV-ó), a papilioma, a poxvirus, a pikornavlnts, az adenovirus, a rinovirus, az
1- és 2-típnsú humán T limfotropikus vírus ίΗ'Π..ν~1/~2), a humán rotavírns, a veszettség, retro vírusok; ezen belül a HÍV, az enkefahtisz és légúti vírusfertőzések. A feltárás szerinti eljárások felfeasztrálhatók különböze inununválaszok mödosüááárs Is,
A HC V genotípus és az interferon terápiára adott válaszreakció közötti összefüggést vizsgáltuk. Lásd: 6 030 785 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás; Enomoto és társai. N. hugi .1. Med. 334:77-81 (1996); Enomoto és társai, 3. (Ilin. lovast 96:224-30 (1995) szákirodalmi helyek. A HCV-ib-vel fertőzött betegekben a válaszreakció aránya kisebb, mim 40%, Lásd: 6 0.10 78S számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás. Ha36 sonlóan alacsony váisszt'eakclő-arényokaf állapítottak meg HCV-la~vul fertőzött betegekben is. Lásd: a Hooíhagel és társai, Intervirology 37:87-100 t1994) szakirodalmi helyet. Azonban a váiasztnakeiő-arány H€V-2-vel fertőzőit betegekben közel BÖ%< tied: ő 030 785 számú amertkal egyesült államokbeli szabadalmi leírás; Feled· és tárnái, Sémin, ti ver Dis, 15:82-91 (1995) szakirodalmi hely. Valójában a HCV-ib genotípus NS5A proteinje diszkrét régiójának aminosav szekvenciájáról ügy találták, hogy az Interferonra való érzékenységgel összefüggésben áll. Lásd: ő 030 785 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leints, amelynek teljes tartalmát ezúton referenciákért! .leírásunk részének tekintjük. Lásd továbbá: az Bnomofo ős társai, 1996; az Bnomoto én társon 1995 szakirodalmi helyek. Ezt a régiót az interferon10 fenzékenység meghatározó régidként (1SDR) azonosltotfák. Lásd: ugyanott.
A FÖL IFN-hőta konjngáfumot gyögyászatll&g hatásos mennyiségben adjuk be bármely fent ismertetett állapot kezelésére, és az a polimer konfegátom 1FH béta aktivitásán alapok A gyógyámtilag hatásos mennyiség” kifejezés jelentése egy hatóanyagnak, vagy egy gyógyszernek azon mennyisége, amely kiváltja egy szövet, egy rendszer, egy állat vagy ember bio15 lógtál vagy orvosi válaszuvakelőját, amelyet a knlutó vagy a. klinikai orvos kíván. Fz egy olyan mennyiség, amely elegendő, hogy jelentősen befolyásoljon egy pozitív klinikai válaszreakciót, egyidejűleg fenntartsa a mellékhatások csökkent szintjeit. A FGC IFR-héta azon mennyisége, amely beadható egy arra szoruló alanynak a 0,01-10(1 gg/kg tartományban vagy előnyösebben a 0,01 -10 pgékg tartományban van egyszeri vagy oszlott dózisokban beadva.
Az ismertetett dózisok beadása tőrténlref minden második napon, de előnyösen hetente egyszer vagy minden második héten egyszer történik. A dózisokat legalább egy 24 hetes periódus alatt injekció útján adjak be.
A dózis beadása lehet orális, helyi, Intravénás, szuhknlán, miramuszknlárts vagy más elfogadható szervezeti beadási mód. A kezelő klimkai orvos megítélése alapján, a beadott Kató25 anyag mennyisége és az alkalmazott kezelési rend természetesen függ a kezeit Üteg életkorától, nemétől és kőrtörtőnefélől, a aeubofil számtól (például a neníropénia súlyossága), a konkrét betegség súlyosságától és a betegnek a kezeléssel szembeni foleraneiájátöl, amelyet lokális toxieitás és szervezeti mellékhatások bizonyítanak.
Gyakorlatban a jelen találmányt magában foglaló feltárás szerinti konjugátnmokat olyan mmmyiségékben adjuk be, amelyek elegendők egy alanyban nem-klvánatos orvosi állapotok vagy betegség meggátlására vagjvmegakadáiyozás&a példán! egy emlősben; és ezen anyagokat az Ilyen célokhoz legmegfelelőbb .formában használjuk fel. A készítmények előnyösen megfelelők belső alkalmazásra és egy feltárás szétlőtt gyógyászatilag aktív vegyidet hatásos mennyiségét önmagában, vagy más hatóanyagokkal konfoluáíüőban egy vagy több gyógyásza37 tiiag elfogadható vivöanyaggal tartalmazzák. A vegyűletek különösen megfelelőek annyiban, hogy igán alacsony ioxleiíásúak, ha egyáltalán tapasztalható túxfeitás.
Az Itt ismertetett konjugátumok képezhetik egy gyógyászati készítmény hatóanyagát, és azokat a tipikusan megfelelő gyógyászati kíghőszerekkel, segédanyagokkal vagy vivőanya5 gokkal (amelyekre gyűjtőnéven ezúttal vivoanyagokként hivatkozunk) keverékben adjak be, amely anyagokat a beadás szándékolt formájára tekintettel megfelelően választjuk ki, azaz orális tabletták, kapszulák, elbdrek, szirupok formájában adjuk be, A készítmények tipikusan a hatóanyag vagy annak gyögyászatífog elfogadható sója hatásos mennyiségét tartalmazzák és ezen kivid tartalmazhatnak bármely vivőanyagot, amelyek szokásosan alkalmazottak a
I θ gyógyszerészet szakterületén, A beadás szándékolt. módjától függően a készítmény lehet aztIánk félsz! lárd vagy folyadék dózísformában, például injektálható készítmények, tabletták, kúpok, pirulák, időben szabályozott leadásó kapszulák, porok, folyadékok, szuszpenziók vagy hasonlók, előnyösen egységdózhok tormájában.
Konvencionális gyógyászati készítmények, amelyek egy konjugátom, például FGC
IFM-béta gyógyászatilag hatásos mennyiségét gyógyászatilag elfogadható vivőanyagokkal, segédanyagokkal, hígftőszerckkck tartósító szerekkel és/vagy szolnbdlzáld szerekkel együtt tartalmazzák, felhasználhatók a találmányt magában foglaló feltárás megvalósításakor. Az interferon gyógyászati. készítményei különböző puíTer hígítőszereket (például arginin, Trb-H€l, aeefát, foszfát). amelyek megbatározott kémhaffo-tartomármyul és ionerősséggel rendi) delkeznek, vivóanyagokat (például humán szérum albumín), szohrbihzáló szereket (például íween, pohszorbán és tartósító szereket (például benzdnlkohol} tartalmaznak, lásd példáid: 4 49Ö 537 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi bejelentés,
A jelen leírásban ismertetett hatóanyagok beadása történhet terápiás hatóanyagokra a beadás elfogadott módszerei bármelyekével. Ezen módszerek körébe tartoznak szervezed vagy helyi beadások,. így példán! orális, nazális, parenterábs, íranszdermális, szubkntán vagy helyi beadási módok.
Például egy tabletta vagy kapszula (például zselatin kapszula) tonnájában történő orális beadásra a hatóanyag-komponens kombinálható egy orális, nem-toxikus gyógyászatilag elfogadható, közömbös vivöanyaggal, így például ciánodul, glicerinnel, vízzel és hasonlóval. To~ vábbá, amikor az kívánt vagy szükséges, megfelelő kötőanyagok, kenőanyagok, szétesést elősegítő szerek és színanyagok is a keverékbe foglalhatók,. Megfelelő kötőanyagok körébe tartoznak a keményítő, a magnézium-akunmium-szliikát, a keményítő paszta, a zselatin, a metil'Celiulóz, a náirinm-karboximedíeellulóz és/vagy polívinilpirroUdon, cukrok, kukorica-édesítőszerek, természetes és szintetikus gumik, így példáid az akácig, a tmgakant vagy a nátrí38 um-alginát, a poheulénglrkol, viaszok és hasonlók. Az ezen dözisformában alkalmazott kenőanyagok körébe tartó-mák a nátrium-eleát, a nátrium-sztearát, a magnéAmn-sztearái, a nénium-benzoát, a nátónm-aeetát, a nátnum-klond, a sAlika, a fölkum, a sztearinsav, annak magnézium- vagy kálmumsőja és/vagy a poiietilénglikoi és hasonlók. Á szétesést elősegítő szerek köréire tartoznak - korlátozás nélkül - a keményítő, a metileellulóz,. az agat, a hentent, xantángenu keményítők, az agat; az alginsav és annak nátrtnmsőla vagy habzó keverékek és hasonlók. A higítÓszerek körébe tartoznak például a lakiőz, a dexttóz, a szacharóz, a mamiik a szorhí k a cellulóz éa'vagy a glicfo.
A találmányt magában foglaló föltárás szerinti konjugáramok beadhatók ilyen orális dőlő zisformákhan időben szabályozott leadása és elnyújtott. leadást? tabletták vagy kapszulák, pirulák, porok, granulátumok, elbtírek, tinktórák, sznszpenAök, szirupok és emulziók formájában.
Folyékony, konkrétan injektálhatő kásaáttöények döállíthatók például feloldással, díszpergélással stb. A hatóanyagot feloldjuk vagy összekeverjük egy gyógyászatilag tiszta oidö15 szerrel, Így például vízzel. sőoldattal, vizes deztróz oldattal, glicerinnek elánokul és hasonlóval, így injektálható oldatot vagy szuszpenziót állítunk elő. Továbbá egy folyadékban injektálás előtt történő fclokiáum megfelelő szúáfo forrnák alakuhatok A. Az mjekialhato keszmne' nyék előnyösen vizes izotőnlás oldatok vagy szuazpenzlők. A készítmények .sterilizálhatok és/vagy tartalmazhatnak adjutánsokat, így például tartósító-, stabilizáló-, nedvesítő- vagy emulgeálószereket, oldódást elősegltőket, sókat az ozmotikus nyomás szabályozására és/vagy puífereket Továbbá azok tartalmazhatnak más, terápiásán értékes anyagokat is.
A találmányt magában foglaló föltárás szerinti konjngátmnok beadhatók intravénás (például bólttsz vagy míbzlös), inímperitoneális, sznbkmén vagy intramuszkuláris formában, amelyek mindegyike a gyógyszerészet szakterületén jártas szakember által ismert formákat alkalmazza. Az injektálható készítmények előálldbatók konvenefonálís formákban, akár- folyékony oldatokként, akár szaszpenAókként.
Parenteráhs injektálható készítmények beadását alkalmazzuk általában a szhhkotán, intmnmszkulárís vagy Intravénás injekciókhoz és ísfóziökhoz. Például amikor azubktdán injekciót alkalntaznnk 0,01-100 pg/kg vagy előnyösebben 0,01-10 ag/kg FBö-ilezetí iW-béta egy héten át történő beadásához, két 0,005-50 gg/kg vagy előnyösebben 0,005-5 gg/kg dózisé injekciói adhatunk be 0 és 72 óra időpontokban. Továbbá, egy megoldás paretéeráhs beadásra lassú leadásé vagy elnyújtott leadásé rendszer implamátumáí alkalmazva, amely biztosítja, hogy a dózis állandó szintje legyen fenntartva, a 3 7.10 795 számú amerikai egyesült államok39 beli szabadalmi leírásban ismertetetlek szerinti# amely szabadalmi dokumentumot ezúton míorandaként leírásunk részének tekintjük.
Továbbá# a találmányt magában foglaló feltárás szerinti előnyös konjugáíumok beadhatók intranazáiis formában, megfelelő iníranazáiis vívőanyagok helyi alkalmazása útján vagy tmnszderrnális módokon, a szakterületen jártas szakember ál tal jói ismert tomszdermáUs börtapászok formáinak alkalmazásával. Transzdermális beadási rendszer formájában történő beadáshoz a dózisforma természetesen inkább folyamatos leadású, mint megszakított a dózisbeadásr rend során., Más előnyős helyi készítmények körébe tartoznak krémek, kenőcsök,, bmosók, aeroszolok, sprayk és gélek, amelyekben a beadott mennyiség lÜ-WÖ-szoros dózis a pareníeráiks beadás útján tipikusan beadotthoz képest.
A szilán! készíünényekhez alkalmazható segédanyagok körébe tartoznak a gyógyszerészeti ú&ztaságú twmh. lakfőz, keményítő, magnézinm-sztearák uátemm-szztchadn, talkum, cellulóz, glükóz# szacharóz, magnézium-karbonát és hasonlók, A fent meghatározott hatóanyag kiszerelhető kúpokként ts# például polh&iiénglíkolok, példán! propltengilkol vi vőanyagként történő alkalmazásával, Néhány megvalósításban kúpokat előnyösen zsíros emulziókból vagy szuszpenxíókböl állítunk elő.
A találmányt magában foglaló feltárás szerinti konjugáíumok beadhatók, bposzómaleadásl rendszerek formájában is, így példád kismérető umlameilária vezlkulomok# nagyméretű umlamelláxb vezlkulomok és nmltllameílárh vezlkulomok formájában, l.lposzőmák kialakíthatók különböző toszíoltpidekhól, amelyek koleszterint, sztearilamlm vagy föszf&íídilkölmokar tartalmaznak. Néhány megvalósításban lipídkomponensek filmjét a hatóanyag vizes oldatával hidratáljuk# így a hatóanyagot magában foglaló iípidréteget állítunk élő# amint azt az 5 262 564 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban ismertetik.
A jelen feltárás szerinti konjugáíumok beadhatok immunglobulin-fúziók mint egyedi vivőanyagok alkalmazásával, amelyekhez, a vegyületrooiekulák kapcsolódnak. A feltárás .szerinti vegyületek kapcsolhatók megfelelő polimerekkel mint eélbajotntíhaíó hatóanyag-sdvöauyagokkal is. Az. ilyen polimerek körébe tartozhatnak a polívhúlpirrohdon# a pinán kopolímer. a íV'iihidíoxipropibtuetakrdmnid-fenoL a poblndro\ietil-as?ivtnatnid'íenol vag> a pólietliénoxid-poiíUzm pataitól! egységekkel helyettesítve, A konjugáíumok kapcsolhatók proteinekhez, így például receptor proteinekhez és alhummhox is. Továbbá, a feltárás szerinti vegyületek kapcsolhatók biológiailag lebontható olyan polimerek csoportjához, amelyek alkalmazhatók egy hatóanyag szabályozott leadásának eléréséhez, így például poíitejsavhoz# pollepszilon-kaptolaktonh.oz, pollhidroxí-vaj savhoz, pohortoészterekitez» pokaeetálokhoz# polidíhidropiránoldtox, polfeianoakrílátokhoz. és térhálós vagy arnőpatíkus htárogéi-blökk kopolimerekhez.
Kívánt esetben s beadandó gyógyászati készítmény tartalmazhat kisebb mesnylségő nem-toxikus segédanyagokat, így példád nedvesítő- vagy etmtlgeálőszereket pil-pnffémió szereket és más anyagokat, így például nátríum-aeetátot, trietanolamin-oleátot stb.
A konjttgátumokai alkalmazó beadási rendet különböző tényezőkkel összhangban választjuk meg, ezek körébe tartozik a beteg típusa, faja, életkora, testtömege, neme és orvosi állapota; a kezelendő állapot súlyossága; a beadás módja; a beteg vese- és májfunkciója; és az alkalmazott konkrét vegyület vagy annak sója, A feltárás szerinti vegyületek aktivitásét és a betegnek a mellékhatásokra való érzékenységét Is figyelembe vesszük. Egy átlagos képzettséggel rendelkező orvos vagy állatorvos könnyen képes meghatározni és előírni a betegség megelőzéséhez,, meggátláséhoz vagy le&tasának leállításához szükséges hatóanyag hatásos mennyiségét.
A jelen feltárás szerinti orális dózisok ··· amikor azokat a javallott hatások eléréséhez alkalmazzuk orális beadáskor - a körülbelül 0,01400 μ/fcg/mp, előnyösebben a 0,01-10 gg/kgőisp közötti tartományban vannak. A készítményeket előnyősért számozott tabletták biztosítjuk, amelyek 0,5-5000 pg vagy előnyösebben íl.S-500 gg hatóanyagot tarA beadás bármely modteko' osztott \ agy leges do.ovA alkalma, hatók Például a ta iálmány szerinti vegyületek beadhatók naponta vagy hetente egysegdozlsbau, vagy az összdóz.is beadható két, három vagy négy osztott dózisban.
A fenti gyógyászati készítmények közül bármelyik tartalmazhat 0,1-99%;, 1 -70% vagy előnyösen 1-50% feltárás szerinti aktív vegyületei mist hatóanyagot.
Amint fentebb ismertettük, a betegség lefutása és annak válaszreakciója a hatóanyag kezelésekre követhető klinikai vizsgálattal vagy laboratóriumi kísérletekkel. A találmány szerinti terápia hatásosságát meghatározzuk olyan mértékig, hogy annak következtében a korábban ismertetett állapot .jelei és tünetei, például a krónikus hepatitisz enyhülnek, és olyan mértékig, hogy az interferon normális mellékhatásai (azaz inOuenzaszerü tünetek, így például láz., fejfájás, hidegrázás, mialgiá, kimerültség stb. és a központi idegrendszerrel összefüggő tünetek, így például depresszió, p&resztézia, esőkként koncentráció stb.) kiküszöbölődnek vagy lényegesen esőkkexmek.
Néhány kiviteli alakban egy feltárás szerinti pollslküezett vegyületet (például egy ?EG~ -ilezert interferont) egy vagy több, egy konkrét állapot kezelésére alkalmazható gyógyászati hatóanyaggal együtt adunk be. Például egy polialkílezert protein beadható kombinációban egy
Ismert vimselíenes hatóanyaggal vagy egy vírusfertőzés kezdésére szolgáló hatóanyaggal. Ilyen vírusellenes vegyületek körébe tartoznak például a rifeavinn, a levovirin, az MBőSőó és a zidovudin 3TC> az FTC, az. aoiklovlr, a ganelklovh', a viramld, a VX-497, a YX-95Ö és az .ÍÜB44S03.
A konjogátem és a vírusellenes hatóanyag beadható egyidejűleg (például a hatóanyagok beadhatók a betegnek, együtt); beadhatók egymást követően (például a hatóanyagukat a beteg ne.k egyiket a .másik után adjuk be); vagy beadhatók alternatív módon (például a hatóanyagok beadhatók ismétlődő sórozaíokhaxu Így például A hatóanyag, majd B hatóanyag, majd A ha10 A febams ntegt alóshAsáhan xtz előnyös VGC if N-betu spekbnú ΓΙ G IPX-béta) heaáixa tó a hepatitisz-C vírussal fertőzöd betegeknek. .A PEG IFN-héía-la alkalmazása előnyös.
A betegeket a. kezelésre anti-HCV antheat-pozítív betegekből választjuk, akik biopszxa'dokumentáll. krónikus aktív hepatitiszben szenvednek,
A HCV replikádé lefutásának követésére hatóanyagkezelésre váteszmukeiöt adó ala15 nyákban, a HCV RNS mérhető szénxmmlniákban például poiimer-iánereákeió vizsgálat útján, amely primerek két olyan sorozatát alkalmazza, amelyek a HCV genom NS3 ésNS4 nemStrukturális génréglőiből származnak. Lásd. Faréi és tárral, NewBng, 1 Med. 325:98404 (1991); Ulrieh és társai, 1 €Ua» hívest., 16094 614 (1990),
A vírusellenes aktivitás mérhető a HCV-RNS-ílterben bekövetkező változások útján, Á. 21) HUV-RNS adatok analizálhatók a litereknek összevetésével a kezelés végén a kezelés előtti alapvonal-méréssel, A HCV-RNS-ben bekövetkező csökkenés a 4. hét után bizonyítékot biztosit egy vegyület vírusellenes aktivitására. Lásd: Kleter és társai, Anthm'erob. Agents Chexnoiher, 37(3):505-97 (1993); Örito és társak J, Medinai Vúology, 46:109415 (1995), Legalább két nagy;ságrendnyx (»2 lóg) változást vírusellenes aktivitás. bizonyítékaként értei25 mezünk,
Bgy krónikus hepatitisz-C tértözésíőí szenvedő személy a következő jelek vagy tünetek közül egyet vagy többet mutátkat:
(a.t megemelkedett szérum miauin anúnotranszíéráz (ALT), (b) pozitív teszt antí-BCV antitestekre, (e) HCV jelenléte, amint azt pozitív teszt demonstrálja BGV-RNS-re, (d) krónikus májbetegség klinikai jelel, (e) hepatoeellulárís károsodás.
Az ilyen kritériumokat nemcsak hepadtisz-C diagnosztizálására alkalmazhaijuk, de felhasználhatók egy beteg hatóanyag-kezelésre adott válaazreakelójának értékeléséhez is.
A megemelkedett aiöiún-aminoíraaszferáaról (ALT) és aszpartát-arulnotomazferázről (ÁST) ismeretes, hogy kezeletlen hepatitisz-C-ben fordulnak elő, és egy kezelésre adott teljes választ általában ezen szérutn-enzlmek, különösen az ALT normalizálódásaként határoznak meg. Lásd: Davis és társai, New Eng. 1 Med, 321:1501-15Ö6 (1989), Az ALT egy enzim, amely akkor szabadni fel, amikor a májsejtek pusztainak, és ez a HCV-fertőzés tünete. Az interferon a 2’ ,5!-ol!goadem.lát-szintetáz (2'5'OAS) enzim szintézisét okozza, amely másrészről, a vírus mRNB csökkenését eredményezi. Lásd: Hougium, CImieal Phanuacology 2:20-28 (1983). A 2'5'OAS szérumaxintjemek növekedései egybeesnek, az ALT-szintek csökkenésé vet
Májbiopszía-minták szövettani vizsgálata felhasználható másodlagos kritériumként az értékeléshez. Lásd; Knodell és társai, Hepaíology 1:431--435 (1931), amely értékelési eljárást biztosit a betegség aktivitásához.
A biztonság és a tolerálhaiöság vagy a kezelés meghatározható klinikai vizsgálatokkal és a fehérvérsejt- és nenu-oBiszámok mérésével Bz mérhető hematológiai pataméferek, pél15 dául fehérvérsejt-, ueutroSÍ-, vérlemezke- és vörös vérseltszámok periodikus követésén keresztül,
Különböző más kiterjedt vagy elnyújtott leadásit készfenéuyek állíthatók elő a szakíerüléten jól Ismeri, konvencionális eljárásokkal.
FMÁK L példa
Aktíváit pnlb&tíéngllkolok szintézise
Aktivált polialkilén glikoíokat szintetizálunk szabad terminális hidrox.il25 -fenkciósesoporhal rendelkező poiialkílengUkoi alküezése útján. Egy általános makeiőt az 1 5 eakUovázlaíhan mutatunk be,
A polialkiiénglikolt (P-OH) alkil-báliddal (A) reagálíatjuk, Így az étert állítjuk elő ÍB).
A (B) vegyületeí azután hidrozilezzük, így az alkoholt (C) állítjuk elő, amelyet az aldehiddé (D) oxidálunk. Ezen vegyüietekben n jelentése 0 - 5 értékű egész szám és X lehet egyenes vagy elágazó láncú, telített vagy telítetlen €$ - Q«> alkil- vagy heteroalkd-csoport, Z lehet egy C3 - C? lelheti vagy telítetlen gyűrűs alkil- vagy gyűrűs heteroalkil-, heh enesüert vagy helyetíesiíetlen aril- vagy heteroaril-csoport vagy helyettesített vagy helyettesítette» alkati!- (az alkil jelentése egy C5 - telített vagy telítetlen alkil-) vagy heteroalkarll-csoporí. Helyettesített vegytíletskhez a sznhsxri Inensek lehetnek a kővetkezők; halogénstöm, hidrotó!-, karbon!!-, karboxílát-, észter-. fermife aeil-, Üokarhoníl-, tioé.szter-, tioaeetát-, tíoformiát-, alkoxÜ-, foszfbrií-, foszíonát-, íoszftnát-, amfeo-, amido-, armídln, Imin-, cíano-, rníro-, azido-, szulfhidrib, szulfát-, szuifonát-, szulfemoli-, sztd&namido-, szulfomk heíetociklil-, aralkife aromás csoport, hetemaromás csoport, feh.no-, sztlil-, éter- vagy alklldoosopoA. Tipikusan P~OH jelentése olyan poHeííléagUkol (PEG) vagy monometoxí-poliefíléngllkol (mPEG), amelynek molelmitíötoege 5000 - 40000 Halton (Da).
Például az mPEG-O-2-metiÍp.mpionaldefed szintézisét a 0. reakciővázlatban nuitaijuk be.
200O0 Da tnolekulafömegü mPEGOH-t (mPEG-OH 20 kDa; 2,0 g5 0,1 mmol, Stmhfe) NsH-vál kezelünk (1,2 mg, 03 mmol) THF-ban (35 mi). 50 ekvivalens 3bróni-2-metiip.ropéut (3,34 g, 5 mmol) és katalitikus mennyiségű Kd~t adunk ezután az eiegyhez, Á keletkező elegyet 16 órára visszafelyásl hőmérséklete melegítjük. Vizet (1 ml) adunk ezután hozzá, és az oldószert vákuumban elfávfefeuk. A. maradékhoz CEhClK (25 mi) adunk és a szerves fázist elválasztjuk, vízmentes Na>SO4-on szárítjuk és a térfogatot körülbelül 2 ml-re csökkentjük. Ezen CHaCb-oldatot eseppeukéut éterhez (150 ml) adjuk, Á keletkező fehér színű csapadékot összegyűjtjük, így 1,9 g of 1 vegyület kapunk.
Az d'l-NMib'Spektrutn (CÍ)CÍ3í 400 MHz) δ; 4,95 (s, Hl), 4,91 (s, 1H), 1,74 ís5 3H).
Az 1 vegyidéihez (1,9 g, 0,1 mmol) THE-hso (20 ml) és CHXTh-h&n (2 ml) 0 öC~on THF-hcu lévő Blb-t (1,0 M, 3,5 ml) adunk. Az elegyet jégfurdőhen 1 óráig követjük, Ezen eiegyhez lassan NaOH-t (2,0 M, 2,5 ml), majd 30%-os H3Ö2 (0,S ml) adunk, A reakeióeiegyet szobahőmérsékletre melegítjük és lő éráig keverjük. A. fenti feldolgozási eljárást követjük (CHaCb, éterből kicsapva), így 1,5 g 2 vegyüíetet fehér szfeu, szilárd anyag Tonnájában kapunk.
?H-NMR-spekttum (CDGb, 400 MHz) <5: 1,50 (rn, 1H), 034 (d, 3H),
A 2 vegyüíetet (250 mg) CH3CI3~ban (2,5 ml) feioídunkés Hsss-Murtfeperjodfeátot (DM0; 15 mg) adunk hozzá 30 percig, szobahőmérsékleten történő keverés mellett. Az elegyhez telített NaHCÖs-mat és Na3SO3-rnat. (2 mi) adunk, és az «legyet szobalfemérsékleten .1 óráig keverjük. A fenti feldolgozási eljárást hajtjuk végi-e, Így 3 vegyüíetet (rnPEö-O-2~ -metíipropionaldehid, 120 mg) fehér színű, szilárd .anyag tormájában kapunk.
^H-HMR-spektrum (CDCb, 400 MHz) Ó: 9,75 (s, IH), 2,69 (m, Ι.Η), I,lő (d, 3H1
Hasonló eljárást hajtunk végre aromás alkoholokra, amim az a 1ÍL reakcíővázlathan látható.
Általában az aromás alkoholt (E) az alkil hálíddal (A) reagáltatjuk, így a monoétert (F kapjuk. A maradék (F) vegyület alakít30 juk a (CB vegySletta, amelyet a polialkilénglikollal (P-OB) reagaltatunk, így az éten (B) kúpjai. Ezt a xegyületet ezután az aldehiddé íB alakítjuk a printer alkohollá (B történő hídrobomláson, majd oxidáción keresztül. Ezen vegyietekben n jelentése 0 · 5 értékű egész szám, d értéke Ö vagy 1 - 4 értél ü egész szánt, és Z jelentése lehet egyenes vagy elágazó Ián5 oú, íellted vagy telítetlen Cj - C^o add!- vagy heteroalksl-csoport, Z leltet C3 - C? telített vagy telítetlen, gyűrűs alkil- vagy gyűrűs heteroalkll-csoport, helyettesített vagy helyedesítéllen arib- vagy heteroaril-csoport vagy helyettesített vagy helyettesffetlen alkarll- (az alkilesopotí jelentése Ch - C&> telített vagy telítetlen alkllcsopor!) vagy heteroalkarilesopork A helyettesi tett vpgyületekliez a helyettesítő lehet halogénafom, hídroxil-, karbon.il, karboxilát-, észtet, iormil-, aeil, tiokarbonil-, tioészter-, tioaeetát-, tiotórmiát-, alkmdí-, foszfort!-, íoszíonát-, foszlinát, amin©-, amidé-, auűám-, Imin··, oiano·, nitro-, azid©-, sztdfhldr.il-, szulfát-, sztdlbnát-., szulfamoíl··, sznlíonamidn-, sztdíbníí-, betetociklíl», araikik, aromás csoport, heteroaromás csoport, tnuno-, szilll-, éter- vagy ulkiliioesnport.
Továbbá 1) és Ta egymástól függetlenül vagy jelentés nélküli vagy jelentése egyenes
IS vagy elágazó láncú, telített vagy telítetlen €j - C?8 alkil- vagy heteroaMl-esoport, és egymáshoz képest lehet orto-, méta- vagy pata-helyzetben. Az összes L (amikor jelen van) jelentése egymástól függetlenül egyenes \ agy elágaz© lánca, telített vagy telítetlen V? -1A alkil- \ag\ heteroalkrl-csopori, €3 - C? telített vagy telítetlen gyűrűs alkil- vagy gyűrűs heteroalkllesopori, helyettesített vagy helyettesítetlen aril- vagy heternariicsopnrt vagy helyettesített vagy hcíyeteítetten alksrilesoport, ahol az alkilceoporf jelentése C? - C30 telített vagy telítetlen alkil- vagy heteroalkarilesöpört. A szobszíttuensek lehetnek halogénatom, hidroz.il-, karbon!!-, karbexilát··, észter-, fonnií-, adl-, tiokarbonil-, tioészter-, ttoaeeiát-, tíoformíán, alkom!-, íoszfbril-, fbszfosát, íoszflnál», anno©-, amidé-, amidin-, kein-, elann-, nitro-, szid©-, sznlihidr!!-, szulfát-, sznlfbnáí-, szulhnnöil, sznlíbnandd-, szulíhni!-, hetetocíklll-, áradd!-, aromás csoport, heteroaromás csoport, imino-·, szilll··. éter- vagy alkíltioesoport.
Általában P-OH jelentése polledlénglikol (PISG) vagy rnonomefoxi-poiietilénglikol (mP.EG), amelynek molekulatömege 5Ü00 ··· 400ÜÖ Da.
Például nd>E(I~0-y>men!feniI~Ö-2~meti!propionaldehíd (ú) szintézisét a IV. reakcióváz latban moteljükbe,
4-Rídroxíbenzilalkohol (2,4 g, 20 tantól) Hl P-bau (50 ml) és vízben (2,5 ml) képzett oldatához először nátrium-hidroxídot (1,5 g, 37,5 minői), majd 3-hróm-2.-metilpropént (4,1 g, 30 mmo!) adunk. Ezen reakcíóelegyet ló órára visszaíolyási hőmérsékletre melegítjük. Az elegyhez 10%-os eitroinsavat (2,5 ml) adunk, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. Ama45 radékot etü-seetáttal (3 x 15 ml) extraháltul és az egyesített szerves fázisokét telített NaCMel. (10 ml) mossuk, szárítjuk és töményitjük, így a 4 vegyületet kapjuk (.3,3 g, 93 %).
5H~NMR~spetam fCDCfe, 400 MHz) Ó; 7,29 (ms 2H)S 6,92 (m, 2H), 5,14 (s, IH),
5,1)1 (s, IH), 4,56 ís, 2H), 4,46 (s, 2N), 1,85 (s, 3H),
MeríMdoridot (MsCl; 2,5 g, 15,7 mmol) és tríetO-ammt (TEA; 2,8 ml,20 mmol) adunk a 4 vegyület (2,0 g, 11,2 mmol) CH^Cli-ben (25 ml) képzett oldatához 0 *€ hőmérsékletéé, és a reakcióelegyet hűtőszekrénybe helyezzük 16 órára. Általános feldolgozással halványsárga színű olajat (2,5 g, 87%) kapunk.
{H-NMR-sp«tom <CDCÍ3,400 MHz) Ő: 7,31 (m, 2H), 6,94 (m, 2H), 5,16 <s, IH),
5,01 % 1H\ 5,03 ts. 211), 4.5<%s, 2Hk 4.44 (s. 21h, te? ís, 3M 1.35 is, Mh
F/eu olajat (2,4 g, 9,4 mmol) feloldjuk IBF-ban (20 ml) és LiSr-t. <2,0 g, 23.0 mmol) adunk hozzá. A reakcióelegyet 1 órára vísszathlyási hőmérsékletre melegítjük, majd szobahőmérsékletre hüíjilk. Vizet (2,5 ml) adunk az elegyhez és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot etíhaeetáttal (3x15 ml) extruháijuk és sz egyesített szerves fázisokat telített
NaCMel (10 ml) mossuk, vízmentes Na^SO^-on szárítjuk ás töményitjük, így a kívánt δ bromldot. <2,3 g, 96%) halványsárga színű olaj formájában kapjuk.
Ái-NMItepeklmm (CDCl3> 400 MHz) 5: 7,29 (m, 211), 6,88 (m, 2H), 5,11 (s, I H)s 4,98 (s, IH), 4,53 (s, 2H), 4,44 (s, 2H), 1,83 (s, 3H)..
kDa mPEG-OH-t (2,0 g, 0,1 mmol, Sunblo) THF~ban (35 ml) NaH-val <12 mg, 0,5 mmol) kezelünk és 5 vegyületet (0,55 g, 22,8 mmol) kataliökus mennyiségű Kl-val adunk az elegyhez, A keletkező eiegyet ló órára visszafolyásí hőmérsékletre melegítjük. Vizet (1,0 ml) adunk az Hegyhez, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk, A maradékhoz CHzCl2-t <25 ml) adtmk, és a szerves- fázist elválasztjuk, vhupeniés NáaSQröú szárítjuk és a térfogatot körülbelül 2 ml-re csökkentjük. Éter-oldat (150 ml) eseppenkéthi hozzáadásával fehér színű csapadékot kapunk, amelyet összegyűjtünk, így 6 vegyületet (1,5 g) fehér színű por tormájában kapunk, JR-NMR-spektram (CDCb, 400 MHz) 6:7,2.1 (d, 2H), 6,90 (d, 2H), 5,01 <s, IH), 4,99 <s, IH), 4,54 (s, 2H), 4,43 <s, 2H), 1,84 <s, 3H)<
vegyület <1,0 g, 0,05 mmol) THF-ban (10 ml) és ClbCb-han (2 ml) képzett, 0 CC hőmérsékletre hűtött oldatához BH3/THF4 <1,0 M, 3,5 ml) adunk, és a reakcióelegyet 1 óráig keverjük.. Lassan 2,0 M NaÖH-old&lot (2,5 mik majd 30% íHOa-t. (0,8 ml) adunk hozzá. A reakcióelegyet szobahőmérsékletre engedjük melegedni, és 16 óráig keverjük. A fenti feldolgozási eljárást kővetjük <CI I2Ch, éterből kicsapva), így 7 vegyületet <350 mg) fehér színű, szilárd anyag formájában kapunk,
Ái-HMR-apektrum (CDCh, 400 MHz) 0: 7,21 (d, 2H), 6,84 (d, 2H), 4,54 (s, 2H), 2,90 tót 2H), 1,96(d, 3H).
vegyület (150 mgs O,ÖÖ?S mmol) CH2Ch~hen (1,5 ml) feloldunk és BMP-í (15 mg) adunk hozzá, mialatt a mkeióelegyeí szobaliómérsékleten 1,5 óráig keverjük.
Az 5H-KMR-spekttum a következő értékeket mutatja;
(CDCh, 400 MHz) ó: 9,76 (s, 1H), 7/21 (d, 2H), 6,78 (d, 2H), 4,44 (s, 2H), 4,14 (m,
2H), 2,85 (m, 1H), 1,21 Cd, 3H).
Az elegyhez telitett N&HCOj-mal (0,5 ml) és NaaSsOs-mat (0,5 ml) adunk, és a keverést szobahőmérsékleten 1 óráig folytatjuk. A fenti feldolgozást eljárást követjük (CHjCh-oldat, éterből kicsapva), így 8 yegyületet (92 mg) fehér színű, szilárd anyag formájában kapunk.
Hasonlóan. mP.llG-O-m-meúlfenikO-d-meftiproptónaldehldet (9) szmtehzáltmk az V.
mkcióvédstbss· ismettetettek szerint.
3~HldroxibenzÍlalkohol (2,4 g, 20 mmol) THF-bau (50 mi) és vízben (2sS ml) képzett oldatához először nátrium htfeoxfeot^kő g, 37,5 mmol), majd 3-bröm-2-omtllpropénC (4,1 g,
39 mmol) adónk. Ezen roakmocloyvot 1 o mára viaszafblyást hőmérsékletre melegítjük. Az elegyhez IÖ%~O3 citromom. at »2,5 mh adunk, és :az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot eiil- acetáttol (3 x 15 ml) extraháljuk és az egyesíted szerves fázisokat telített N&Cl-lel (19 ml) mossuk, szárítjuk és töményhjük, Így 10 vegyület.et (3,2 g, 90 %) kapunk.
Ί-1-NMR.-spektn.mt (CDCh,409 MHz) m 7,2b (ta, 1H), 6,94- Cm, 211), 6,36 (m, 1.H),
5,.11 (a, IHk 5,91 (s, 1H), 4,6.1 (s, ÍR). 4,44 (s, 2H), 1,82 (s, 3H).
MsCl-t (2,5 gs 1.5,7 mmol) és TEA-í (2,8 ml, 29 mmol) adunk ö ®C hőmérsékleten a 19 vegyület (2,9 g, I1,2 mmol) CH2Cl2-ben (25 mi) képzett oldatához, és a reakmóelegyet 16 órára hűtőszekrénybe helyezzük. Általános feldolgozási eljárással halványsárga szinti olajat <2,5 g, 87%) kapunk,
Ál -NME-spektrum (CDCh, 490 MHz) ő; 7.31 (m, 1H). 7,05 (m, 2H), 6,91 (m, IH),
5,16 (s, IH), 5,04 (s, 1H), 4,59 (s, Hl), 4,46 (s, 2H), 3,71 is, 3PI3, 1,84 (s, 3H).
Ezen olajat (2,4 g, 9,4 mmol) THF-ban (29 ml) feldoldjuk és I.lBr-í (2,0 g, 23,9 mmol) adunk hozzá. A reakdóefegyet 1 órára, visszafolytó hőmérsékletre melegítjük, majd szobahőmérsékletre hűljük. Az elegyhez vizet (2,5 ml) adunk, és az oldószert vákuumban eltávoltf30 juk. A. maradékot etíl-aceiáttal (3 x 1 5 ml) extraháljnk, és az egyesített szerves fázisokat telített Nád-dal (19 ml) mossuk, vízmentes Na^bb-on szárítjuk és töményhjük, így a kívánt Π btomidot. (2S2 g, 92 %) halványsárga színt olaj formájában kapjuk.
ÁbNMR-spektrum; {CDCh, 400 MHz) Ő; 7,29 (m, IH), 6,93 írn, 2H), 6,35 (m. Hl), 5,14 (s, 2H), 4,98 is, 2H), 4,59 (a, 2H), 4,44 (s, 211), .1,82 <d, 3.H).
4?
2(1 kDa mPBG~ÖH~t <2,0 g, 0,1 mmol, Sunbfo) IHF-ban (35 ml) NaK-vfo (12 mg, 0,5 mmol) kezelünk és 11 vegyüietet (0,55 g, 22,8 mmol) katalitikus mennyiségű KJ-vfo adunk az elegyhez, A keletkező ©legyet ló órám visszafolyási hőmérsékletre melegig. Vizei (1,0 ml) ndnnk az elegyhez, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk.. A maradékhoz, CH^CM
C2S ml) adunk, és a szerves fázist elválasztjuk vízmentes Ra^SOron szárítják és a térfogatot körülbelül 2 ml-r© csökkentjük. Éter-oldat (ISO ml) eseppenkénti hozzáadásával Mér színű csapadékot kapunk, amelyet összegyűjtünk, Így .12 vegyüietet (1,8 g) fehér színű por formájában kapunk.
?H-NMR-speim-um (CI>C13,400 MHz) §; 7,19 (m, 1H), 6,88 (ng 2H), 6,75 (m, 1H),
4,44 (s, 211), 4,10 (m, 2H), 1,82 ín, 3H),
A12 vegyidet (1,0 g, 0,05 romol) THF-ban (7.5 ml) és CH^Cb-hen (2,5 ml) képzett, *C hőmérséklete hűtött oldatéhoz '11Κ/ΓΗΡ-ν(150 Μ, 3.5 ml) adunk, és a reak.oióalegyst 1 óráig keverjük. Lassan 2,0 M-os NaöH-oldatot (3 ml), majd 30%-os HAH (0,85 ml) adunk hozzá. A reakűőckgyel szobahőmérsékletre engedjük melegedni, és lő óráig keverjük.
A fonti feldolgozást eljárást hajtjuk végre (CR3C 12, éterből kicsapva), igy 13 vegyöietet (450 mg) fehér színű, szilárd anyag formájában kapunk.
sH-WR-spektrum (CDC13,400 MHz) ik 7,15 (m, IH), ő,§4 (m, 2H), 6,69 (m, ÍR),
4,50 (a, 2H), 2,90 (m, 2H), 1,95 (d, 3R).
A 13 vegyöietet (200 mg, Ö,Ö1 mmol) CH>€l-<~ben (1.5 mh feloldjuk és DMP-t (20 rng) adunk hozzá, mialatt a reakelóelcgyet szobahőmérsékleten 1 óráig keverjük.
Az. !R-NMR-spekírnm a következőket mutatja’.
(CDCh, 400 MHz) ő; 9,74 (s, IHl7,17 (m, Hí) 6,86 (m, 2H), 6,74 (m, 1H), 4,48 (s, 2H>, 4,15 (m, 2Hy 2,78 (m, 1H), 1,22 (d, 3H).
Az Hegyhez telített HaRCOs-mat (0,5 ml) és Ra2S203~maí (0,5 ml) adunk, és a keverést szobahőmérsékleten 1 óráig folytatjuk, A fonti feldolgozási eljárást hajtjuk: végre (CH^Ch, éterből kicsapva), így 9 vegyüietet (142 mg) fehér színű, szilárd anyag formájában kapunk.
Aktíváit polialkilénglikolokat szlutetizáinnk szabad terminális hldroxll-fhnkcióscsoporttal rendelkező polialkilénglikol és egy aromás alkohol közötti Mitsnnobu30 -reakcióval. A reakció menetét a VL reakcióvázlatban mutatjuk be.
Apohalkiléngiikoh (P-ÖH) egy alkohollal (K.) magákat) uk, Így az étert (L) fokijuk elő.
Ezen vegyületekben m értéke 0 vagy 1, d értéke 9 vagy 1 - 4 értékű egész szám, és n értéke 0 vagy 1 - 5 értékű egész szám. Y jelentése Ö, 3, €0, CO2, COS, 30, SO2, COHR) S02W és
W, Tj és Tj jelentés nélküli# vagy jelentése egymástól függetlenül egyenes, vagy elágazó láncú, lelheti vagy telítetlen C} - C20 aik.il- vagy heteroalkii-esoport,
W és Z jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom# egyenes vagy elágazó láncú, tehtett vagy telítetlen Cj - alkil- vagy heteröalkil-esoport
Minden egyes L (ha jelen w) jelentése egymástól függetlenül egyenes vagy elágazó láncú, telített vagy telítetlen Cj»C2o alkil- vagy heteroalkil-esoport, Q - C? telített vagy telítetlen gyűrűs alkil- vagy gyűrűs heteroaíkil-csopori, helyettesített vagy helyettesltetlen arilvagy heteroaril-csőpört vagy helyettesített vagy helyettesltetlen alkarilesoport. Az alkil jelentése Cj ~ C20 telített vagy teiiteüea alkíl- vagy heteroalkaril-csoport, és a szubszómensek tehernek a következők; halogénatom. lűdroxih, karböttii-, karhoxilás-, észter-, tóműt-, adl~, űokarhodl-, tioészíer-, rioacetűt-, tioíormiát-, alkox.il-, foszfcnl», lősztőnáí -, fcszfmát-, amfeo-# aando-, tömin*» Imin-, dnno-, ráíró-, azido--, szdhűdrth, szulfát-, szulhmát-, sztdíamoil-, szulfonamido-, sz.ulíbnik hetetoelklil-, aralkil-, aromás csoport, heletoaromás csoport, imnio-, szilit-, éter- vagy aikilíioesoport.
P jelentése egy polialktlénglikoi-polimen Általában JM3H jelentése pohetilértgiike! (PBG) vagy monometoxi-polieíiléngiikoi (mPEG)# amely 5ÖÖ0 -- 40000 Da moiektdatömnggekmdelkezik.
Például ntPED-O-p-femlacetaldelúd (Jé) szintézisét a YII. reakcióvázlatban matatjuk be.
4~llAiroxifenil.-acetatdehi.det (15) szintetizálunk a Hetemcycles, 53,227-784 (2000) azskirodahni helyen ismertetett eljárás szerint. 4-HidroxÍfénetIl-alkoholt (M vegyidet, .1,0 g,
7,3 mtnol, Aidrich) dúnetilszulfoxidhan (g ml, Áldrích) feloldunk. Keverés mellett TEÁ~t (2,2 ml, lő mmöl, Áldridt) adunk hozzá lassan. Pirid! n-kénttioxid tSOj.py) komplexe; (2,5 g, ló mmol, Atdrich) teljesen feloldunk dimedlsznlfoxtdban (2 tnl, Aldrich) és ezen oldatot eseppenkóní, élénk keverés mellett az alkoholhoz, adjuk. .1 óra szobahőmérsékleten történő keverés után a reakciód egyet CHjCVvet hígítjuk, majd jéghideg vízzel mossuk, A szerves fázist NazbOá-on szárítjuk, szűrjük és szárazra pároljuk, Szüikagélkromatográftás eljárással hexán-eíil-acetát eiuenskénd alkalmazásával (5:1, majd 2;l) történő tisztítással 488 mg (4054) 4-lűdroxifenil-aeeíaldeindet (15) kapunk, kDa mPEG-öfl-hől (101 mg, 0,005 mmol) és ó-hiároxífeml-acetaldeiudból (15) (39 mg, 0,29 mmol) négysz.er toluollal azeotropot képzőnk, majd vízmentes CPbCMóen (2 ml, Áldridi) felvesszük, Bzen oldathoz, trifemlfoszünt (PPh.g bő mg, 0,25 mmol, Aldridt), majd diizxtpropnazödikarboxitátof (DIÁD; 49 pl, 0,25 mmol, Atdrich) adunk keverés mellett, nap azohahőmérsékleten történő keverés után a reakdőelegyet cseppenként élénken kevert dfetli-éterhez adjak, A keletkező csapadékot szűréssel elválasztjuk és háromszor dfehl-étetrol mossuk, A nyers anyagot CHsCk-ben felveszük és vízzel mossuk. A szerves fázist AlsoSEk-on szárítjuk, szűrjük és szárazro pároljuk.. Az anyagot kevés CHbClr ben felvesszük, majd esep~ peoként kevert dledhélerhez történő hozzáadással kicsapjuk. Ezen anyagot szűréssel össze5 gyűjtjük, háromszor diettl-éteeí mossuk és szárítjuk, így 63 mg (62%) mPEG-O~p~ -feutlaeeísldehldet (.16) kapunk.
roPEG-ö-p-fenllproplonaldehld (17) szintéziséi hasonló módon hajtjuk végre. 4-fíidroxÍfeml-propÍonaldelüdet a 4-hidroxífemÍ-acetaidehid szintézisével amalóg eljárással állítunk elő |'(Heterocycles, 53, 777-784 (2(100)) analóg eljárással, 3-(4~ludroxííéni.l)-l··
W -propánok (1,0 g, 6,6 mmol, Aldrich) diroetilsznlfezidhan (8 ml, Aldrich) feloldunk, TEA~t (2,0 ml, 14 romol, Aldrich) adunk hozzá, lassan, keverés mellett Piridm-kén-trioxid-komplexet (2,3 g, 15 mmol, Aldríeh) teljesen feloldunk dimerilszuUoxídban (9 mL, Akinek) és ezt az. oldatot csípettként, élénk keverés mellett az alkoholhoz adjuk. 1 óra szobahőmérséklete. történő keverés urán a reakctőefegyot. CH^CVvel hígítják, majd jéghideg vízzel mos.15 suk. A szerves fázist NajSO^-oo szárítjuk, szűrjük, és szárazni pároljuk. Szílikagélkromatögráfiás eljárással., hexáo-etii-aoelát (5:1, .majd 2:1) eluenskéroí alkalmazásával végrehajtott tisztítással 745 mg (75%) 4-hldroxtfenil-prnpion^ldehídet kapunk.
kDa roPEG-OH-hól (100 mg, 0,005 mmol.) és 4~hidrozlferoí~propionaldehidböl (40 mg, 0,27 romol) toluollal négyszer axotrópot képzőnk, majd vízmentes CH.jGb-ben <2. ml,
Aldríctn felvesszük. Ezen oldathoz tníeniífesxfro.t (66 mg, 0,25 romol, Aldrich), majd keverés mellen diízopropii-azodlkarboxilátot (49 uh 0,25 mmol, Aldrich) adunk. Három nap szobahőmérsékleten történő keverés után a reakcíóelegyet eseppenkém élénken kevert dieíi l-éterhez adjuk. A keletkező csapadékot szűréssel elválasztjuk és háromszor diefil-éierrel mossuk. A. nyers anyagot Cl%€i>-ben felvesszük és vízzel mossuk, A szerves fázist. Na^SÖ^n szárítjuk, szűrjük és szárazra pároljuk. Á anyagot kevérs CH^Clj-ben .tefeesszőle, majd csempénként kevert dfetli-étorhéz történő adással kicsapjuk. Ezen anyagot szűréssel összegyűjtjük, háromszor dietd-éterroi mossuk és szárítjuk. igy 60 mg (60%) roPEG-O-p-feniipropkro.aldebidef (17) kapunk, mPEG-O-m-femlacetaldehidét (IS) is ezzel ez eljárással álltok elő.
3-Hidroxifenii-acetaldehidet álltok elő a 4-hidroxifeoii-acetaldehid szintézisével [(Heterocycles, 53,777-7S4 (2000)] analóg eljárással. 3-Hidroxifenetil alkoholt (1,0 g, 7,5 romol, Aldrich) dímeúlszulfoxidban (8 roh Aldrich) feloldunk. Lassan, keverés melled TF.AA (2,{) ml 14 mmol, Aldrich) adunk hozzá, Firídm-kéntrloxid (SOa,py) komplexet (2,4 g. 15 mmol, Aldrich) teljesen feloldunk dtotiíszulíuxídban (8 ml, Aldrich) és ezen oldatot csap50 penként, élénk keverés mellett az alkoholhoz adjuk. 1 óra szobahőmérsékleten történő keverés után a reakciót jéghideg viszel leállítjuk és az elegyül CH/Eb-vel exímháljuk. A szerves fázist NaiSOron szárítjuk, szűrjük és szárazta pároljuk. Szilíkagélkro.maiográEá.s eljárással, hexán-eül-acetát (3:1, majd 1:1) ebemként történő alkalmazásával végrehajtott tisztítással
225 mg (22%) 3-|üdroxiíeníkacetaldehÍdet kapunk.
kDa mFEG-OB-ból (307 mg, 0,015 mmol) és 3-hidroxtfenii-aeetaidehidból (117 mg,
0,86 mmol) négyszer toluoilai azeotrópoí képzőnk, majd vízmentes Cll>CE-ben (5 mk Aldrich) felvesszük. Ezen oldathoz tófenilfoszíiní (2ÖÖ mg, Ö,7ö nimols Aldrich), majd diizoiaopilazodlkarboxildtöt (147 pl, 0(75 mmól, Aldrioh) adónk keverés mellett. 3 nap szó10 btútömét'sékleíen történő keverés okán a reakeióelegyet cseppenként, élénken kevert dietíl-éterhez adjuk. A keletkező csapadékot szűréssel elválasztjuk és háromszor dletil-étemd mossuk. és szűritjnk, Így 284 mg (93%) mPEG-Ö-m-fenilacetaldehidet (18) kapunk,
Királis PEGfehmmnát-Ndúdrote-szttkeimmár (MBS) származékokat állítunk elő például a Vili és IX. reakeíóvázlatokban bemutatott eljárással,
PEG-díhidrouroknná?-NHS származékokat előállítunk Mnsnnobu-reakeióo keresztül is a X. feáhrtóvázlaihan bemutatottak szerint
FEG-dlhidroclnnatnát-NBS származékokat aromás alkoholból is előállítónk a XI. reakdovázlatban bemutatottak szerint.
PBö-benzo&aáoökat és FEG-mdolokat állítunk elő a XII, és ΧΪ.Π. makcmvázlaíokhan bemutatottak szerint.
PEÖ-ammokat reagáiíatüük alkil-balidokkaE így FEö-amidokar állítunk elő. Egy EEG>%
-nmid-bicÍklookíén~NH8 konjugátom előállításának példáját mutatjuk be a XIV. re&k.píóvázhtban.
Egy PEG-prímer amint konjngálunk aril-haliddal, így egy PEG-szekander amin konjngátümoí állítunk clÖ, amelyet azután Heck-reakeiókörölmények között (egy alkén szíerenspeertlkus pailádkmr·katalizált kapcsolása egy szerves buliddal vagy spJ hibridizáit β-hidtögénekkel nem rendelkező trillánál) reagáltatjuk egy NHS-alkénnel, így a kívánt FEG30 -konjugáítnooí kapjuk. Egy pirimídm-tarüdmú konjugátan szintézisét a XV. reakelóvázlatban
PEG-szttlfonamd konjugátumotó Is szintetizálunk ezzel az eljárással a XVE reakcióvtóatbaa bemutatottak szerint
FEö-száxmazékoknt gyürüalkotó vagy nem-gyürüalkotó nittogénaíomokkat reagáló ttmk héterociklnsos vegyietekbe^» így reaktív PBÖ-származékokat kapunk. Jellegzetes n eióknt mutatunk be aXVIL raakcíóvizlaíban amixtopirtoMdixire, és a XVI1L reaknióváziaö (-«tó . példa
A feltárás szemű. peptid-konjngáttnnok előállíthatók egy proteinnek egy aktivált PCK310 -molekulával történő;
tó egy í glikolí jr (például náídum-otóofeorohidnd) jelenlétében reduktív resztül, így & FBG-prnteín knníugáiumot állítjuk elő, amely egy amímkőtésm keresztül kapcsolódik. Lásd: például Öl 54316 Bt számú európai szabadakul tóás..
zünk a következő feltárás «szerinti aktivált polialkílén: 20 WamFBG-G-2-medípröpdonaklehid··, 21) kDs mFEG-O-p~mefllféxül~Ö-2-mediproplonaídehid-, 20 &0&^ΡΕΡ-0~^^οΰ1^ί1~Ρ-2^δ&ρχορ1οηδΐ0δ1ήά-} 20 kDa mFEGO-p-fenllaeetaldehid-, 20 kDa xnPEG-O~p-feniipropionaláefeid- és 20 kPa mPEG-O-xn-ferúláoeiáldebid. A PEG-nexett proteineket homogenitásig tlsztttiuk azok. megfelelő reskeíóelegyéböl, és jellemzési tesztek somzatáusk vetjük alá az azonoság, a tisztaság és amőáo20
201 na mset kDa m?B0~Ö-m-stóltóxl~O-2-metö20 kPa mFEG-O-p-feniiaoetaldehiddol módosított humán IFM-β-Ι a Öulbiását és jellemzését a következőkben részletesen ismertetjük.
^yA2Ö.MÍAOG^2nneMlnmmxüMglüdd<.tnúdosrtmt^4^jn^§lőéhhá^^jeílegmg Humán IFN-p-la-í N-tetrnmálisán 20 kP méretű rnFEG-'O-2-.metilpropionaídehld segítségével FBö-végződéssel láttunk el. Á FBG-végződés ΙΡΗ-β-la-vázra történő beviteléhez alkalmazott reduktív aikllezéat módszerrel olyan auén-kötést kaptunk, amely degradódással szemben különösen stabil. A FBö-módositott lKN~p-la~t több szempontból jel30 lemeztük, így $DS-P.AGE-&lemzésnek, mérettózárásos bomatográEának (SEC) és pepöd- -térképezésnek vetettük alá valamint ín vám vizsgálatban. meghatároztuk vírusellenes aktivitásét. A termék SPÉ-FAGB- és SEC-eleanzéssel mért tisztasága 9Ö?A-nál. nagyobb volt, .A PEG-mődosítoit mintában asm rnntatkozutt aggregálódásm utaló jel. Á termékben a nem-módosított maradék ΙΒΝ-β-Ιδ mértéke a mennyiségi mérhetőség határa alatti volt.
: Λ ί-V ügy tűnt, hogy a terméknek mintegy 1%-át teszi ki, A vírusellenes aktivitási
PBG-módositott (FN-p-la specifikus aktivitása körülbelül kétszeresen csökkent a nem-módosítóit ΙΒΝ-β-la-hoz képest (a 20 kD mPHGO-2-medlpropionaldetdddei módosított esetén BCsítGz pg/ml, míg a nem-módosított IFN'-p-la esetén ECsa^U pg/ml), A
PEG-rnődoaítotí XFN-p-la terméket 30 pg/ml koncentrációban fornmlélínk, 14 mg/ml humán szémmalbnmmt (HSA) tartalmazó, foszfáttal pufféról! konyhasóoí dalban (PBS, pH”7,3), az ÁVÖNEX ‘ (Blogen, Cambridge, MA) fiotulálásához hasonlóan, amelyet sok szempontból jellemeztek. Az anyagot fagyasztott folyadék formájában -70 ®C~on tároltok.
A 20 kD mPBö-O-2~meülpropianáldehlddel módosított ΙΡΝ-β-la tulajdonságait az
L táblázatban foglaltuk össze:
tuprnpionaldehiádel módosított PBö-móáosítás hatékonysága >90% -la/PBG arány röKapcsolás helye Vírusellenes aktivitás
1:1 >9030
N-ferwináiis 32 pg/ml Í-S-Sö sasa nem-formuláit AY0NEX ~t (IFN-p-ia intermedier, egy hatóanyag klinikai tétele, amely az emberi alkalmazásra vonatkozó összes teszten átesett, 250 pg/ml koncentrációban, löömmohl náhinm-íószíát, pH:s7,2,200 tnntoi/1 nátnum-klorid összetételű oldatban) 12 ml 165 mmol/i~es MBS-sei φΗ™5,0) és 50 μ.1 5 ntol/l-es sósavval hígítottunk. A mintát 300 pl-es SP-Sepharose FF oszlopra (Pharmacia) töltöttük Az oszlopot háromszor 300 pl 5 intnol/l nátrium-foszfát (pH~S3), 75 mmoÍ/1 N&C1 összetételű oldattal mostuk, és a. proteint 5 mmold nénimn-fosztat (pH»*5,5), 600 mmobl NaCI összetételű oldattal elnáhnk. Az élűéit frakciók abszorbanciáját 280 mn~néi mértük, és a minták XFN-p-la. koncentrációját becsültük,
1,51 értékű extínkeiós koeíHoiens alkalmazásával az 1 tugűul koncentrációjú oldatra. A csúcs-ímkoiókai összegyűjtöttük, így 3,ÖÖ mg/ml koncentrációjú IFH-D-la oldatot kaptunk, amelyet vízzel ís2 mg/ml koncentrációra hígítottunk.
A hígított SP-Sephsrose-eiuáíumből CkS túl (FN-jí-la-hoz hozzáadtunk 0,5 ruold-es náMam-femáKtot (ρΗ^ό,ό) 50 mm©l/I koneeertmcióig, nánínm-ejanobösiüdrldet (Atdriefe) 5 nmtótd koncentrációig, valamint 20 kD mBBG-G2~metdpropienaldebidet 5 mg/ml koncentrációig. A mintát sötétben 16 óra hosszat szobahőmérsékleten ínkubáltnk. A PEü~mödosított
IFbl-β- Ia~t & reakolóelegyhöi 0.5 ml.-es SP~Sepharose FF oszlopon a következő módon tisztítottuk; 0,ő ml reakcióelegyet 2,4 ml 20 mmol/l-es MES-sel fpH-'-'-5,0} hígítottunk, és az S.Prffepharose oszlopra töltöttük. Az oszlopot náhinm-foszfát (pí-F-'-Cp), 75 nnnold NaCl Összetételű oldattal mostuk, majd a PEG-mődosított iFN-p-la-t 25 mrnol/1 MES (p.H-6,4), 400 mtnol/i WCI összetételű oldattál elnáltok A .FBG-mőáosított IFN-jbla-í Suporose ó BR 10/30 FPBC nferetkizórásos oszlopon tovább tisztítottak mobil tézisként 5 ntmol/1 nátrinm-főszfat (pBA5,5), 150 mmol/i NaCl Összetételű oldatot alkalmaztunk. A mémtkízárásos oszlopot (25 ml) 20 mVőm átfolyási sebességgel feltettük, és 0,5 mí-es frakciókat gyűjtöttünk. Az élűéit ífekeiókát protelntartnlomra nézve a 280 mn-nél mért ahszorbaneia alapján elernea10 lük, összegyűjtöttük, és az összegyűjtött oldat proteín-koneentráciőját meghatmoztuk. A PEö-módosított ΙΡΝ-β-la. koncentrációját ÍFN-ekvivalensekbe.u adjuk meg, mivel a PBö-esoporf 280 nm-nél nem járni hozza az ábszerbandához. Az elemzéshez mintákat vettünk az összegyűjtött elnáttutthöl, és a maradékot HSA-tnrtalmú fommlálő-pnifertel 30 ggűnl koneentráoi15
.20 g 0,25 mk'ftöla adagokba kitöltöttük, és -70 öC-on tároltuk
A 20 kÖ rnPEö~Ö-2-,tnetilpropionaideItiddel módosított ΙΡΝ-β-la CY-spekűnmát (240-340 nm) pre-HSA-val formuláit, mintán hatkoztuk meg, A PEO-módosftott minta 278-.279 nm-nél mutatott abszorbaneia-maxlmumot és 249-250 nm-nél abszorbaneia -miuímumot., ami konzisztens a nem-módosított IRGÖ-la intermedier esetén megfígyelhetSvel A PBG-modosított termék proteinkoncentráeíöját a spektrum alapján, sxtínkeiós koefficiens alkalmazásával becsültök A FBö-mödositott minta proteinkoneentráeioja 0,23 mg/ml volt, A minta nem volt zavaros, amint a 320 nm-nél mérhető abszorbancla hiánya mutatta.
3.A2Ö jdeniddel tnódosífettlFN-O-la SÍ gg nem-módosított és 20 kl> mPEG-Ö-2-metílpropionaldehiddel módosított ΙΕΝ-β25 -la-t redukáló körülmények között 10-20%-os gradiens gélen SDS-PAGE-elemzésuek vetettünk alá, A gélt Coomassíe-ferilliant-kék R-250 festékkel festettük, és az L ábrán mutatjuk be [A~sáv; molekrűatömeg-markerek (fenttől lefelé; 100 ki), ö§ kÖ, 45 kÜ, 27 ki), illetve 18 kD); B-sáv: nem-módosított ΙΡΝ-β-la; C-sáv; 20 kB mPEö-G-2-meti.Ipropíonaldelúddel módosított ΙΒΗ-β-laj. A 20 kí) nű5E(?s~Ö-2-méttlpS'Opionaldehiddel módosított, IFN-β-la SDS30 -PAöB-elemzése egyetlen nagy csikót mutatott ki, 55 ki) látszólagos tömeggel, ami konzhztens az egyetlen PBG-esoporttal való módosítással. Nem detektáltunk nagyobb, további PEG-csoportok jelenlétéből adódó tömegét. A ttsztttott, PEG-mödosított termékben, nem-mődostíott IFH-p-la-í detektálttmk, azonban ennek mértéke a mennyiségi meghatározható54 ; alatti volt. A nem-módosított XFN-jMa. mennyisége csupán mintegy 154 értékre becsülhető az összes protemtartalomra számítva.
4. zl20„ffi.ptPBG~.Q-2-medforoaionáldóldddel módosifótt IFH-6-i a jellemzése méretki^t
Nem-módosított és 20 kD mPEG~O-2-mefilpropíonaIdehIddel módosított lEN-jMa-t
SBC-elemzésnek vetettünk alá analitikai Superose 6 HR 10/30 FBBC méret-kizárásos oszlopon, mobil fázisként PBS-t (pH~7,2) alkalmaztunk. Az. oszlopot 20 ml/óra átfolyási sebességnél futtattuk, és az <te$ abszorbanciáját 280 nm-nál ügyeltük, o eredményeket a 2. ábrán mutatjuk be; A-panel: molekulatömeg standardok (67(1 kD tiroglobnlín; 158 ki) garuma10 -gfobulug 44 kD ovalbunibi; 17 kD .mioglobin; 1,3 kD B 53-vitamin); B-panel: 20 kD mPEGΟ-2-meölpropÍonaldeliiddeÍ módosított IFN-jMa; Opanek nem-módosított ÍFN-p-la. Á 20 kD rnFEG-O-2-metilpropionaÍdehidde.Í módosított ΙΡΝ-β-la egyetlen éles csúcs formájában eínálódott, Rörülbeídl 200 kD látszólagos molekulatömeggel, ami konzisztens a FBG nagy bidroálmtnkus térfogatával. Aggwgátnmokrn utaló jel nem volt megfigyelhető. A preparáló' tumbau uem-oiódosiíoíí. lEbb-p-la-t detektáltunk, azonban ennek mértéke a menuyiségí meghatározhatóság határértéke alatti volt. A csúcs mérete alapján a oem-módoshort ΙΒΝ-β-la mennyisége a termék egészére számítva 1% vagy ennél kevesebb volt, ami konzisztens az
SDS-PAGE-eletnzésnél megfígyelttel.
A FEG-taődosítási reakció speeiffoitását pepúd-iérképezéssel értékeltük ki. Nem-módosított és 20 kD mPBG-ö-2-raetílpropfonaldehíddel módosított IFN-^-la-t Aeúromoóoeföí-ből származó Lys-C endopeptídázzai (Wako Bioproducts) emésztettük, és a kapod hasítási termékeket fordított fázisú. HPÍ..C útján Rukeionáhnk Vydac C4 oszlopon,
0,1%-os TFÁ-bao 0 -» 7054 aeatomtnl 30 perces gradiensének alkalmazisával. Az oszlop ehxensét 214 nm-néí mért abszorbanela alapján Egyeltük.
Az lEN-p-ls Lys-C endopeptidázos emésztésével kapott összes megjósolt pepiidet előzőleg azonosítottuk N-termínálls szekvenáhbsal és tdrnegspektrometríával [Fepinsky ef«/., J .FAarmneníb^y arof 297:1059 (2001)), ezek közül csak az ÍFN30 -β-la N-tennmálisát tartabnazó pepiid változott a 20 kD nrPBG-ö-S-nietílpropionaldehíddel végzett módosítás következtében, amist ezt a peptid-térképrői való eltűnése mutatja. így a térképezési adatok arra utalnak, hogy a FEG-csoporl speeRíkusan. ebhez a pepiidhez kapcsolódik. Az adatok továbbá azt matatják, hogy a PBö-mődosííás a. protein 'N-termináilsáí veszi óéiba, mivel csak az N-termfuália módosítás eredméuyezheti e peptid speoáÉkus elvesztését.
jellemzése
Humán IFN--p~la~t N-termniálisáu 20 W méretű mPBG-Ö-»»~meíSfeil~O“2~ iebid segítségével PBG~végzédé$sel láttok eL A PBG-végződés történő beviteléhez alkalmazott reduktív alkilezésí módszerrel olyan amm-kőtést kaptok, amely degradődássul szemben különösen stabil. A PBö-mődoaított ΙΡΝ-β-Ιη-ί sok szempontból jellemeztük, így SGS-PAÖB-elemzésnek, SEG-elemzésnek és pepdd-térképezésnek vetettük alá, valamint úr vön? vizsgálatban meghatároztuk vforsellen.es aktivitását A termék SDS-PAGB- és SEC-elemzésael mért tisztasága 95%-nál nagyobb volt A FBG-mddosított ΙΒΝ-β-ίη mintában nem mutatkozott aggregálódásra utaló jel A termékben a nem-módosított maradék ΙΕΝ-β-Ιζ mértéke a mennyiségi mérhetőség határa alatti volt, azonban ügy tűnt, hogy a terméknek mintegy 1%-át teszi ki. A vírusellenes aktivitási vizsgálatban a PEG-módosított ΙΒΝ'-β-la specifikus aktivitása körülbelül kétszeresen csökkeni a nam-mődosítoft ΙΡΝ~β~Ιη»όοζ képest, (a 20 kD mPEö-ö-m'-metiÍfeniEÖ-2~rnetiIpropionuideluddel módosított IBN-fMa esetén BCstrSl pgto, mig a nem-módesitotf IFH-p-la esetén ECArdő pgrml). A PBG-mŐdosítoft ΙΒΝ-β-Ia terméket 30 pg/ml koncentrációban formuláitok, 15 górd HSA-t tartalmazó PBS-ben (ρΗ«7,2), az AVONBX^ fbnmdálásához hasonlóan, arneadek, Az anyagot fagyasztott újában »?Ö G-nn tá20
A 20 kD mPBG~Ö-m~metilfeml~Ö-2gait a 2. táblázatban foglaltuk össze;
liott IFN-6-la tu2. táblázat
PEí3-mődosÍtás hatékonysága ΙΡΝ-β-la/PBG arány ipCSÖiZS Vínsseltoe^ aktivitás BC59 >SÖH hl >95%
N-tenmnáhs 31. pg/ml : IFN-8-H eleáhítáI.Á20kD
ÜO ml nem-iormóláli AVONBX -f (IBN~folu iutennedhsr, agy- hatóanyag klinikai rófele, amely az emberi alkahnazásra vonatkozó összes teszten átesett; 254 ug/ml koncentrációban, 100 mmol/í náfrimn-feszfát, ρΗ™?>2, 2ÖÖ mmold nátríum-klorid összetételű oldatban) 9d nü 165 mmol/l-es MES-sel (pl 1===5,0) és 400 μ| 5 nttü/l-cs sósavval higüotíunk. Λ mintát 1,2 ml-es SP-Sepharuse FI·’ oszlopra {Pharmacia) töltöttük. Az oszlopot 6,5 ml 5 inntoli nátrittm-íbszíát íplI 5,5}, 75 mmol/l NaCl összetételi oldattal mostuk, és a proteint 5 mmoí/l nátrium-ínszfát (pl 1-=5,5), 600 mmol/l NaCl összetételű oldattal eluáltuk, Az előáll frakciók abszorhanciájáí 280 nm-nél mértük, és a minták IFN-p-la koncentrációját becsültük, 1,51 értékű extinkciós koefficiens alkalmazásával az. 1 ntgónl koncentrációjú oldatra, A csúcs-frakciókat összegyűjtöttük, így 4,4 mg/ml koncentrációjú ΙΙ'Ν-β-la oldatot kaptunk, Az őszszegyüjiötí. 4.4 mg/ml koncentrációjú SP-Sepharose-e!uátumból 2,56 ml ΙΡΝ-β-la-hoz hozzáadtunk 0,5 mol/l-es nátrium-foszfátot (pl 1-6,0} 50 rnmol/l koncentrációig, nátrium10 -eianobörhidrídet (Altlrieh) 5 mmol/l koncentrációig, valamim 20 kD mPEG-O-n?~metiifení!D-2-metilpropionaldehideí 10 súgón! koncentrációig. A mintát sötétben 2 ! óra hosszat szobahosnémékk-ten mkubahuk. A PEG-modosümt IFN-O-la-t a re.tkcioelegyből 8,0 ml-es SP-Scpharose FF oszlopon a következő módon tisztítottuk: 9,44 ml reakcióelegyet 37,7 ml 20 mmol/l-es MES-sel (pl 1-=5,0} hígítottunk, és az. SP-Sepharose oszlopra töltöttük, Az oszlopot nátrium-foszfát (pí 1-5,5), 75 mmuk'l NaCl összetételű oldatta! mostuk, majd a PEG-módosüott ΙΕΝ-β-U-í 25 mmol/l MES (pl 1-=6,4), 400 mmol/l NaCl összetételű oklattal eluáltuk, A PEG-módosímtt ΪΓΝ-β-ia-t Superose 6 1IR. 10/30 FPLC méretkizárásos oszlopon tovább tisztítottuk, mobil fázisként 5 mmol/l nátrium-foszfát (ρΗ·-5,5), 150 mmol/l NaCl Öszszetéíeiú oldatta alkalmaztunk. A meretki/árasos oszlopot (25 ml) 24 ml/óra átfolyási sebes20 seggel futtattuk, és 0,2? ml-es frakciókat gyűjtöttünk. Az elműt frakciókat proteintartalnmra nézve S!)S-PAGE-e!emz.ésseí vizsgáltuk, összegyűjtöttük, és az. összegyűjtött oldat proiein-koneenirációját meghatároztuk. A PEG-módostíoü IFN-jl-la koncentrációját 1FN-ek\ t vakmsek ben adtuk üteg, a PBG-esoport 280 ntn-nél mért abszorbaneíához való hozzájárulásával való hozzáigazítás után, 2 értékű extinkciós koefficiens alkalmazásával, 1 mg/ml-es
PBG-módosűott IFN-f)~la oldatra. Az elemzéshez mintákat vettünk az összegyűjtött eJuátumból, és a maradékot I ISA-íartalmú formuláié-putTerfel 30 pg/ml koncentrációra hígítottuk, 0,25 mi/íiola adagokba kitöltöttük, és -70 í?C-on tároltuk.
3- AiisztüoUjlMklAH2Ík.Qri?í«
UVriüNklruma
A 20 kD mPECíO-aí-metií.fenihO-2-metÍlpropíonakiehíddel módosított ΙΕΝ-β-la fiV-spektrumát (240-340 nm) pre-HSA-val formuláit mintán határoztuk meg. A PEG-inódosüott minta 278-279 nm-nel mutatott ubx/othaneta-maximumot és 349-250 nnt-né! abszorbancia-minirnumot, ami konzisztens a nem-módosított ΙΕΝ-β-la intermedier esetén megtigyeIbetövd. A PEG-módoshoU termék proteinkoncentrációját a spektrum alapján.
«285^^2,0 extinkdös koetScfens alkalmazásával becsültük. Á PBG-mődosított minta proteinkotmentrációja 0,42 mg/ml volt. A minta nem volt zavaros, amint a 320 nm-nél mérhető afeorbancia hiánya mutatja.
2,1 gg 20 kD mPBG-ö~m-.metilfeml-Ö-2-metllpropionaldebiddsl módosított ΙΡΝ-β-la-t redukáló körülmények között 4-20%-ns gradiens gélen SGS-PAGE elemzésnek vetettünk alá. A gólt Coomassle-hrtlharit-kék R.-250 festékké! festettük. A 20- kD mPBO-O-m~metllfenÍl-O-2~metilpropionaldeh.uldcl módosított ΙΒΜ-β-Ιη SDS-KAGB-elemzése egyetlen nagy csíkot mutatott ki, 5.5 kD látszólagos tömeggel, ami konzisztens az egyetlen PEG-csoporttal való módosíttat A tisztított, FBG-rttődosííofl termékben nem-módosított ΙΡΝ-β-la~t detektáltunk, azonban ennek mértéke a mennyiségi meghatározhatóság határértéke alatti volt A nem-modosítótt ΙΡΝ-β-ύ mennyisége csupán mintegy 1% értékre becsülhető az feszes protmntartalomra számúvá.
4.
3Ü kD snPEG-Ö-?n~metilfeud-O~2-rnctilpropionaldehiddcl módosított ΙΡΝ-β-ia-t -élemzésnek. vetettünk alá analitikai Superose Ó HR 10/30 FFLC mérefeizérásos oszlopon, mobil fámaként PBB-t (ρΗ~ν,0) alkalmaztunk. Az oszlopot 24 rnkóra átfolyási sebességnél fintattuk, és az elucns abszorhaneiájáí 280 mn-nél .ügyeltük. A PBG-módosított IFN-p-la egyetlen éles csúcs tonnájában (lásd a 3, ábrát)..
utaló jel nem volt megfigyelhető mtaktetuddel módosított IPÁM-la elemzése
A PPG-módosítási reakció spéciitek peptld-térképezéssel értékeltük ki. 13,3 gg nem-módosított és 20 kD mBBG-ö-m-metíIfeml-ö-B-metllproptonaldehiddel módosított. IFN-8-ia-t 5 mmol/I DTT-t és .1 mm.ol/1 EDTA-f tartalmazó PBS-ben pH™7,6 értéknél szobahőmérsékleten 30 óra hosszat 100 pl végiérfbgathaa Aehromoőueter-böl származó 20 tömegió~os Lys-G endopeptldázzai (Wako Stöprödnels) emésztettünk. Ezután 4 ul 1 mol/I-es DTf-t és 100 μΐ 8 mol/i-es karbamldot adtunk a mintákhoz, és szobahőmérsékleten 1 óm hosszat iukuhálíük. A peptideket fordított fázisú HPLG útján frakciónál tok Vydac C;§ oszlopon (244TP51), 0,144-os TPA-ban 0 —» 63% acemnitrü 70 perces gradiensének, maid 0,1%-cs TPA-han 03 80% acetomtril 10 perces gradiensének alkahnazásávál. Az oszlop eluensét
214 nm-nél mért ahszofbancia«
Az IBN-^la Lys~C endopepttdázos emésztésével kapott Összes megjósolt előzőleg azonosítottuk N-termiuális szekvonálással és iÖmegspekttOmetriával (Pepinsky A uL X Plmmneo/ogy und .ákperóm?w/ Theenpartttes, 297:1059 (2001)], ezek közül csak az IPN-la N-tet a 20 kD mFBG-Ö-m-metílfernl-Ö-2rönaidehlddel végzett módosítás következtében, amurt ezt a peptid-térképtől való eltűnése mutatja. így a térképezési adatok arra utalnak, hogy a PBO-esopott specifikusan ebhez a pepiidhez kapcsolódik. Az adatok továbbá azt mutatják. hogy a PEö-módosttás a protein N~termíaáUsát veszi célba, mivel csak az Nttemúnális módosítás eredményozbéh e pepiid a elvesztését
Hmnán ÍFN-p-la-t N~temttoálíaá.u 20 kD méretű. mFBG-0-p-femlaeetaÍdehin segítségével. FBG-végződéssel láttunk el. Á FBÖ-végzodés IFN-ji-la-vázra történő beviteléhez alkalmazott reduktív alkilezési módszerrel olyan andn-kötést kapttmk, amely degradődsbssl szemben különösen stabil. A PBG-mórlosltott IPN-fMa-é sok szemponfeói jelIeoreAük, így
SOS-FÁGB-elemzésnek, SBG-eíemzésnek és peptrd-térkéitezésnek vetettük alá, valamint in vhzo vizsgálatban meghatároztuk vírusellenes atóvitását, A termék SBb-PAGB- és SBC~ -elemzéasei mért dszlasága 95%-náI nagyobb volt A BBG-módosltott IKN-jbla mintában nem mutatkozott uggregálódásm utaló jel. A termékben a nem-nrődosttott maradék ΙΡΝ-β-la mértéke a mermyhégt mérhetőség botára alatti volt. azonban úgy tini, hogy a terméknek mintegy 1%-át teszi ki, A stabilitási tesztben a 20 kD ntt^BG-O-p-femiaeetaidehíddei módosított W-p-la aggmgálődására vagy degradálódására utaló jel nem volt megfigyelhető Tris-putferben (pH-”7,4) 37 '’C-on 7 napig végzett inkubálás után. A vírusellenes aktivitási vizsgálatban a PBG-mödosttott ΙΡΝ-β-la specifikus aktivitása körtttheiűl kétszeresen csökkent & nem-mődosrtott ΙΡΝ-β-la-hoz képest (a 20 kD nrPBG-O-o-femlaeetaldehlddel mŐdositett ΙΒΝ-β-la eseté» EüssteH pgAnl, míg a nem-mődosttott IBN-fi-la esetén EC^ld pg/xnl), A BBO-módosttott ΙΡΝ-β-la terméket 30 pg/ml koncentrációban fórmuláltuk, 14 mgóni HSA-t tartelmaző PBS-ben (pö-7,3), az ÁYONBX® íormulálásához hasonlóan, amelyet sok szempontból jellemeztek. Az anyagot fagyasztott folyadék formájában -7ó AP-on tároltok,
A 20 kD rnPBO-ö-p-fenilaoetaldeldddel módosított IPN-fi-da tulajdonságait a 3. táblázatban .foglaltuk, össze;
3. táblázat >80%
ΙΡΝ-β-ίη/ΡΒΟ arány Tisztaság Kapcsolás helye Vfníseileees aktivitás BCsv
1:1 >95%
M-tcműnáhs 31 pg/ml
bán, Ϊ00 mmel/I náffinm-fószfát, pllw7,2, 300 mmold nátnum-kiorid összetételű oldatban) 24 ml 1Ö5 mmol/l-es MBS-sel (pB™5,Ö) és 100 pl 5 mol/l-ee sósavval hígítottunk. A mintát 6ÖÖ μΐ-es SP-Sepharose FF oszlopra (Pharmacia) töltöttük. Az oszlopot kétszer 900 μΐ 5 nnnol/í náffium-foazfát (pH™5,5), 75 mmol'I NaCI ÖSázetéfolű oldattal mostuk, és a proteint $ mmold nákinm-Toszfát (pH™5,5), 61)0 romold NaCl összetételi! oldattal eiuálíuk. Az ebiéit frakciók abszorhandájá* 28(5 nm-nél mértük, és a minták ,ΓΡΝ-β-Ιο koncentrációját. becsültük, 1,51 értékű ezönkeiós koefficiens alkalmazásával az 1 ntgónl koncentrációjú oldalra. A csúcs15 -frakciókat összegyűjtöttük, így 2,3 mg/ml koncentrációjú ΙΡΝ-β-'la oldatot kaptunk. Az Őszszegyühött SP-Sephsrose-eluámtnhól 1,2 ml IFN-p-la-hoz hozzáadtunk 0,5 meíd~es náffinm-foszfátot (ρΒ-ό,Ο) 50 mmoi 5 koncentrációig, nátnum-ciam>hórhidrídel (Aldrlch) 5 mmold koncentrációig, valamint 20 kt> mPEö-Öy?-fcmlaectaldéhidet 10 mg/ml koncentrációig. A mintát sötétken 18 óta hosszat szohahötnórsékleten inknbélíük. A PBG-módoslfott ΙΡΝ-β~1η4 a teakcióelegyböí 0,75 ml-es SP-Sepharose FF oszlopon a kővetkező módon tisAítoituk 1,5 ml reákeiőeíegyet 7,5 mi 20 mmol-T-es MBS-scl (pFfo5,0), 7,5 mi vízzel és 5 μΐ 5 r.uol/1-es sósavval hígítottunk, és az SP-Sepharose oszlopra (öltöttük. Az oszlopot, nátrium-foszfát (pFffi'5,5), 75 romold BaCl összetételű oldattal mostak, majd a PEG-médösított IFN-b-la-t 20 mmol/l MES (pH^ó.O), 600 mmold HaCI összetételű oldattal eluáitűk. A FFö-módosított
2.5 ΙΡΝ-β-la-f Sapeme ó HR 10/30 FPLC méretkizárásos oszlopon tovább tisztítottuk, mobil fázisként 5 mmol/l nátdütm&szfáí (pH“5,5), 150 mmol/l NáCl Összetételű oldatot alkalmaztunk.. A mémtkízárásos oszlopot (25 ml) 20 ml/őra átfolyási sebességgel fnttattuk, és 0,5 ml-es frakciókat gyűjtöttünk. Az eiuált ítakcíókaf protcíntartalomra nézve 280 urnáéi mért abszorbancla alapján elemeztük, összegyűjtöttük, és az összegyűjtött oldat protein30 -koncentrációját meghatároztuk. A FBCr-módosított ΒΝ-β-Ía köneenlráetóját IFNokadvslensekhen adtuk meg, a PEÖ-csoport (a 20 kD mPEG-Ö-n-fenllacetaldchld extikciós koefficiense 280 nm-nél 0,5 az 1 mg/ml koncentrációin oldatra) 280 nm-aél mért. ahszorbanclához való bozzéjáwlásához való hozzáigazítáa után, 2 értékű extmkctós k.oeffici60 sas alkalmazásával, 1 mg/ml-es FEG-módosított IFN-íMa oldatra. Az elemzéshez mintákat védünk az üaszegyüitőtt eiuátumból, és a ntarzáékot HSA-tartslmu formnláló-pnfierml 30 pg/ml konceuttáöóru hígítottuk, 0,25 nfi/ítola adagokba kttőHőttük, és -70 r'C-on tár öltük.
MWiMV^gekttugta
A 20 kD mFEG-O-n-feaífecetaldehiddei ruodötótoít IBN-p-la W-opektonát (240-34Ö ex») pre-HBA-val ibrmnláh mintán határoztuk meg, A FEG-módositod minta 278-279 mn-nél mutatott abszorbaneia-maxb.num.ot és 249-250 snr-nél abszorbaneia-miuimmnoi, ami kontószfens a nem-mddoshott ÍW-p-la infermedior esetén rttégfigyeiheíőveL A FEG-módosított termék proteínkonceníráóíóját a spektrum alapján, '“2,0 axtíokoids koeffi10 ciens alkalmazásával becsültük, A FEÖ-rnódositott minta proteínkonoeniráeiója 0,10 mg/m! volt. A minta nem volt zavaros, amint a 320 mn-nél mérhető ahszorbsneía hiánya mutatja.
2,5 pg nern-módoisított és 20 kD niFEG~ö-/?-íéutlacetaidehiddel módosított ΙΕΗ-β4a-t redukáló körülmények közöd 10-20%-os gradiens gélen. SDS-FAGE-el.etnzésnek vetettünk all A gélt Coornassíe-hrilliant-kék R-250 festékkel festettük, és a 4, autón mutatjuk be (A-sáv: 20 kD mPEG-O-p-fenilaeetaldelüddel módosított ΙΡΝ-β-la; δ-sáv; nem-módosított ΙΕΝ-β-la; C-sáv: moleknatörneg markerek [fenhől lefelé; 100 kD, 53 kD, 45 kD, 27 kD, illetve 18 kD]), A. '20 kD ruFEG-O-p-fembcetaldehiddel módosított lEN-p-la SDS-FAGB-efemxése egyetlen nagy csíkot mutatott ki, 55 kD látszólagos tömeggel ami konzisztens az egyetlen FBG-esoporítai való módosítással Nem detektáltunk nagyobb,, további FEG-csoportok jefenltéböl adódó tömeget. A tisztított, FBG-módosított termékben, nem-mödosüeít ff N~04a-l detektáltunk, azonban ennek mértéke a mennyiségi meghatározhatóság határértéke alatti volt A nem-módosított ΙΡΝ-β-Ι a mennyisége csupán mintegy 1% értékre becsülhető az; összen protslntartalomra számítva.
4. A. 2£LkD. mFPG-0-.o-fenüaeetuldehíddei
kD mPEG G-/Menilaeemldehíddel módosított ΙΡΝ-β-la-t. SEC-elemzésnek vetettünk alá analitikai Sopemse ö HK 10/30 FPLC .méretkizárásos oszlopom mobil fázisként FBS-t (píF:7,2) alkalmaztunk. Az oszlopot 20 tnVóra. átfolyási sebességnél futtattuk, és az ohmos ahszorbaneiaját 28(1 nm-nél figyeltük, az, eredményeket sz S, ábrán mutatjuk, be; A-paneí·. molekulatömeg standardok (570 kD íhoglobnihu 1S8 kD gamma-globnim; 44 kD ovaíbmmn; 17 kD mioglobiw 1,3 kD ffirtótamin); B-panek 2.0 .kD mEBG-O-p-fettilaoetnidefoddel. módosított ΙΕΝ-β-la. A FBG-módosííott ΙΓΝ-β-la egyetlen éles csúcs formájában eluálódod, mintegy 2ÖÍ) kD látszólagos melektdatömeggek ami konzisztens a ól utaló jel nem volt megfigyelt:
PBG prepataumban nem-módoaított BM-jMa-t dstektálMik, azonban ennek .mértéke a mennyiségi meghatámzhaióság határértéke alatti volt Á csúcs mérnie alapján a nem-módosított ΙΕΝ-βtyisé^e a termék egészére számítva 1% vagy ennél kevesebb volt, ami konfosfoem az czésnél megfigyeltíel.
A PBG-módosítási reakció specificiteát pepúd-térképczéescl értékeltük ki Nem-módosított és 20 kD inEBG-Ö-p-fenilacetaldehiddcl módosított WN-p-la-t .dcinwm.fomierSö -bél származó Lys-C endopeptidázzal (Wako Broproáucts) emésztettünk# és a kapott hasítási terméket fordított lázbú HFLC útján takefouáítuk Vydac C$ oszlopon, Ö,1H-gs TEA-ban 0—^70% aoetonííni 30 perces gradiensének alkalmazásával. Az oszlop eluensel 214 nm-nél
Az IFN-p-la Lys-C endopepfidázos emésztésével kapott összes megjósolt pepti előzőleg azonosítohnk N-terminálb szekvenáíásssl és lőmegapektromettlival [Fepinsky ar 4,,
Fáormncology óta Ezpartmenórt J^eröpautám 297:1059 (2001)], ezek közül csak az IFN-|l~la N-iermmábsát tartalmazó pepiid változott a 20 kD mPB,G-O-p-femlacetaldeblddel végzett módosítás következében, amint ezt a peptld-íérképról való eltűnése mutatja. így a térképezést adatok ama utalnak# hogy a FBG-csoport specifikusan ehhez a pepiidhez kapcsolódik,
Az adatok továbbá azt mutatják# hogy a FEG-mődositás a pro tein N-termlnábsát veszi célba, mivel csak az N-temúnális módosítás erefonényezhed e pepiid specifikus elvesztését,
A 20 kD .mF£G-O-p-.fcmlacetaldehiddel módosított ΙΕΝ-β-la stabilitásának vizsgálatáhúz a mintákat 100 mmold-es Tris-HCl pofiaméi (pH~7,4) 0,1 pg/ml koncentrációra hígítót25 tűk, és 37 öC-on 7 napig iotobáltuk. A 0,., 2,, 5. és 7. napon 20 pí-es mintát (2 pg) vertünk, és redukáló körttlményekközött SDS-PÁGB-elemzésnek vetettük alá# ez eredményeket a ó. ábrán mutatjuk be; A-sáv; moleknatómeg markerek (fentről lefelé; 1.00 kD# óS kD, 45 kD, 27 kD# IS kD# Illetve 15 k.D); B-, C-, D- és E-sáv; a 0.# 2>, S., illetve 7. napon vett 20 kD mlfoXi-Oy.>-.temlacetaldehiddel módosünrt ΙΒΝ-β-Ía minták, A PBG-módositort IFN-p-ia aggregálódására vagy degradálódására omló jelet nem figyeltünk meg 3? °C-on 7 napig történt iakotelás után.
A PEG-tmldoxlinit ΙΕΝ-β-la minták specifikus vírusellenes aktivitását humán tüdőkarcinóma sejtekben (A549 sejtek) vizsgáltuk, amelyeket eucepnalornyocardítts (EMC) vhusnák ietuak ki, és a maradék, ez után tnetabolikusatt aktív sejtek mérésére 2,3-blszF2-metoxb4-mfm3-mdfefeml]-2H-teRgzőnttm3-karbmíÍámhd (MTT; M-5Ő55, Sigma, St
Louis, MO) metsbolikus festéket alkshnazfunL Röviden; Ά549 sejteket a vírussal való fedőzés előtt nem-módosított, illetve PEG-módosított IFN~P-Ía-val 24 óra hosszat előkezeltünk (kezdeti koncentráció őő,7 pg/ml, majd 1,5-szórós soroznthigítással 0,S pg/ml-ig). A sejteket ezután 2 napig EMC vírussal kezeltük olyan hígításban, mely XFN hiányaim a sejtek teljes pusztulását okozta. A lemezeket ezután MTl'-vel kifejleszíettüR Az MMT-törzsoldmot 5 mg/ml koncentrációban PBS-sel készítettük és sterilre szűrtük., majd ebből 50 μΙ-t hígítottunk sej tenyészetbe (100 ttl mélyedésenként), 30-őG percig szobahőmérsékleten történt inkubélás után az MTT/tápkőzcg oldatot leöntöttük, a sejteket 100 pl PBS-sel mostuk, majd a meiabelizált fésfáket 100 izopropanolos 1,2 tnoIZbes sósavval szolubilízáltnk. Az életképes sejteket (amelyeket a festék jelenlétével mutattunk kb 450 rnn-uél mért abszorbsneia alapján .mennyiségileg meghámoztuk. Az adatokat elemeztük, az nbszorbaneia-értékeket gtahkusan ábrázoltuk az IFN-^~la koncentrációjának függvényében, és az ΙΡΝ-β-la aktivitását azon koneenttáotó formájában határoztuk meg, amelynél a sejtek 50%-a elpusztult, azaz. az 50%-os citotoxikus hatást (EC$s), illetve az OD^s maximumának. 50%-áí adtuk meg. A vizsgálatot a nem'módosított ΙΕΝ-β-la esetén nyolcszor, a különböző FEG-mődositott IFN-P-la -miták esetén pedig háromszor-négynzer végeztük eb Az egyes vizsgálatokban minden proteinkoncentticiő értékhez két adatot kaptunk.. A 7A és 7B ábrán a sejtek életképességének a nem-módosított, illetve a PEG-mődosífoft IFH-P-la koncentrációja függvényében ábrázolt reprezentatív diagmmjait mutatjuk be. A 7A ábrán a szimbólumuk jelentése a következő; sem-módosított lEN~p~'la (o), 20 kD mFEG-O-2-metílpropicmaldehlddel módosított ΙΕΝ-β-la (o); 20 kD ad’EG-O-p-metilíeuil-O-Z-mettlpmpioaaldeldddel módosított ΙΕΝ-β-la (Δ) és 20 kD mPBG-O^rn-metÍlfenibÖ-2-modipmpíonaldehiddel módosított. ÍFN-b-la (ő).A 7B ábrán a. szimbólumok jelentése a következő; nem-módosított IFN-p-la (og 20 kD nrPEG-O-o-feniíacetaidehiddeí módosított ΙΕΝ-β-la (□); 20 kD mPEG-O-p-fendproplonaldehiddel módosított 1Ε14-0Ί a (A) és 20 kD mPBG-O-ra-fenllacetaldehíddel módosított IPN~0~la(ö).
3Ö A 20 kD .mPEG~G-2-mehlpropioualdehiddei, 20 kD mPBG-(Ap~métiIfeml-()“2-metilpropíouátdehiddel, 20 kD mPEG-O-m-metilfenil~O-2.-meulpropionaldehiddel, 20 kD mPEG-O-p~fenibeotaldelüddeí, 20 kD inPEG-O-p-fenilpropionaldohiddel és 20 kD mPBG-ö-m-fanliaoetsldehiddel módosított IFN-jMa-m vonatkozó EC<<. értékeket (a mhusellenes védelem maximális értéke feléhez tartozó koncentrációkat) a 4. táblázatban foglaltuk össze.
Az összes PBG-végződéaael ellátott ΙΡΝ-β-la-t olyan módon módosítottuk és tisztítottuk lényegében véve homogenitásig, amint ezt a 20 kD mPEG-O-2-me.biprepionaldehíddeI módos!. ttstt IFN-β-Ιδ, 20 kD mPElö-0-»t-m«tilfemlO2-metílpropíorialdehiddo! módoshott XFN-p-la és 20 kD rnPEG-O-p-fenilncetaidehiddei módosítod ΙΡΝ-β-1 a esetén a fentiekben ismertettük, < táblázat ^AWrrdód^tptLésPBÁmád^
Protein ÁdagEC$,-(gg.'ml}
hám-módosított ΙΡΝ-β-1 a b': í 12-16 sorozat)
20 kD mPHO-O-2- metdpjepleaaldohktóel módosított SFN-jMa 32 <26-3? semmi)
20 ki? mPEG-O-p-metilfenil-Ö-2-meülpropionaldehiddel módosított ÍFN-β-ί a 41 (35-4? sorozat)
20 kD mPÉG~0-?n-rneríIfenil-0-2-m&tilpmpionrddehíddeí módosított ΙΡΝ-β-la 31 (27-35 sorozat)
20 kD ínPEtO-O-p-famj&oetaldehládöl módosított ΓΕΝ-β-ls 31 (25-39 sorozat)
20 kl> fnPEG-O-p-fsniípronion&ídeldddeí módosított ΙΕΝ-β-la 3.1 (27-34 sorozat)
20 kD mPEG-Ö-zn-fenikeetaldehíddel módosított IFM-B-ia 27 (25-29 sorozat)
4, példa
Intravénásán adagolt, nem-módosított és FE€b-módosított ΙΒ’Ν-β-la farmakoklnetikoi
Mnuüllel ellátott nőstény Lewís patkányoknak iatmvóuásaa adagoltunk 80 pgíkg nem-rnődositott IFN-p-Ia-t, illetve 24 ag/kg PEG-móáosdott ΙΡΝ-β-Ιη-Ι s. következők közül· 20 kD rnPEG-O-2-mettlpropíonnldehíddel módosított IFN-0-la; 20 kD tnPBG-O~p ~metyfe»iI-O-2-me01j^opio»aldehiddeí módosított IPN-p-la; 20 kD mPBG-O-p-ferdiaeeínldetóddel módosított IFN-p-la; 20 kD uiPEG-O-yMeniiproplonnldehiddel módosí15 tolt ΓΕΜ-β-Ίο; 20 kD mPBG~O-??i-fé.mlaeetnIdehiddel módosítod ΙΕΝ-β-Ιη és 20 kD rnPBG•-<)-p-meúlfen!l-€)~2-metíipropio.naídehíddel módosított ÍFN-β-la. Mind a nem-módosított, tttlttd á PBG-módosltod proteineket 14-15 mg/ml> vivőanyagként alkalmazott HSA jelenlétében formuláttnk. A nem-módosított protein esetén különböző Időpontokban, kdzveikmtil az adagolás előtt majd 0,083; 0,25; 0,5; 1,25; 3 és 5 étával az adagolás után vért (0,2 ml) vet20 tűnk a kanüiőa keresztül· A. PEG -módosított ΙΓΚ-β-la esetén közvetlenül, az adagolás előtt, msyd 0,083; 0,25; 0,5; 1,25; 3; 24; 48 és 72 órával &z adagolás után vettünk véri <0,2 m!) a kanülőn keresztül. A teljes vért szérumelváiasztö csövekbe (Beckíoa Dleklnson No. 3ö9Ső) gyűjtöttük, és S'zobahőinérsékleten 60 percig inknbállnk, hogy rnegalv&djon, A megaivadt vért 10 percig 4 ’0-öa eenttitugáltnk, a szérumot elválasztottuk, és a vizsgáiéiig -70 C-on táml25 ttik.
A szérnmmintákat azután folengedfertűk, és vírusellenes vizsgálatokban tesztetek. A mintákat 1:50 mértékben szérunttartzhnn közeggel (10 térf,% szarvasmarha-embrtó szérumot, 100-1ÖÖ egység penicBlint és strepfomyoint, valamint 2 mmol/1 E-gtetarnhtt tartalmazó iteibeeeo-Bie módosított tegles-közeg) hígítottuk, és vírusellenes vizsgálatokban tetetek,
A mintákat egy 96 nteyedóaes szövetfettyészlo lemez megjelölt mélyedéseibe teáitok, amelyek humán tüdökatenóma sejteket (A 549, ATCC COL·! §5; ATCC MD intézőtől) tartalmaztak- Egy standard hígításait (66,7; 44,4; 29,6; 19,S; 13,2; 8,8; 5,9; 3,9; 2,6; 1,7; 1,2 és 0,8 pgónl, a patkányóknak adagolt ÍFN-p-ia-'te megegyező forma), valamint három szémmnúntát vizsgáltunk nteden lemezem Az Ά459 sejteket az eneephalomyelomditis (BMC) vtessal történő fertőzés előtt 24 órával hígított szérnmmíntákkal előkezeltek, A víruste 2 napig történt mkuhálás után az életképes sejteket 1 óra hősszat MTT~oidaífal (5 mg/ml PBS-ben) festettek, foazfát-puffermi mostuk, és 1,2 mokt-es ízópmpanöios sósavval szolnbilbáltuk. Ezután. 45Ö nni-nél leolvasást végeztünk. Minden lemezhez felvertük a nem™ -módosított, illetve FBO-mőáös&rt lFN-8-la-hnz tartozó standard görbéket, amelyeket az egyes íesztotetákban levő nem-módosított, Illetve BBG-mödosítotf ΒΝ-β-la mennyiségének meghatározására használtunk, A íarmakokiuetikai paramétereket WínNonLin szoftver 3.0 vagy 3.3 verziójával végzett nem-szakaszolt analízis alkalntazásával számoltuk,
A SA ábra a nem-módosított IKK-β-la (felső panel) és a 20 ki) ruPBO-O-2-meftlpropfonaldehiddel módosított lEht-p-la (alsó panel), míg a SB ábra a 20 kD mFBG-O20' -p-rnettlfentl-Ö-2-metiÍpmpÍönaldehidde! (felső panel), illetve, a 20 kD mBEG-O-pdenilaeetaldebiddei módosított íFN-0~la (alsó panel) idő függvényében mért konoentrádőjá™ nak grafikonját mutatja. Az ábrázolt adatok 3 patkány esetén mért értékek adagét képviselik.
Az. 5.. táblázatban a nem-módosított ΙΕΝ-β-la és a fenti PEG-mödosttott ίΕΜ-β-ia formák következő farmakokinetlkai paramétereit foglaltuk Össze; C^; (maximális megfigyeli koneenttácró), tm (ehnwtóós felezési idő), AÜC (görbe alatti fenhet), Vss (eloszlást térfogát állandó Magéinál), kiürülést sebesség és MRT (átlagos tartózkodási Idő), A 8A és SB ábrán ábrázolt, valamint az 5. táblázatban összefoglalt adatokat ugyanabban a vizsgálatban kaptuk.
A 9A ábra a nem-módoshott ΪΕΝ-β-la (felső panel) és a .20 kD mPieG-O-pfemiproptonaldelűddel mődoshort DW(V'la (alsó panel) idő ^gvéayében mért koneenrtá30 dójának grafikonját mutatja. Az. adatok két patkány esetén mért értekek átlagát képviselik. A 9B ábra a 20 ki) urt^EG-O-m-fetúlaoetedehiddel (felső panel), illetve a 20 kD nrPBG-ö-m-m.ettlfeun-ö-2-ntetiÍpropÍonaldehiddeI módosított IFH-jMa (alsó panel) idő függvényében mórt koneentráoíöjának grafikonját mnlutja. Az ábrázolt adatok 3 patkány esetén mért értékek átlagát képviselik.
A ó, táblásaiban; n nem-módosított ΙΡΝ-β-Ιη. és a fenti PEG-módositott ΙΡΝ-β-la farmakokinetikal paramétereit foglaltok össze. A 9A és 9B ábrán ábrázolt, valamint a 6, lábItalba». összefoglalt adatokat ugyanabban a vfosgálatban kaptuk.
Amint a 8A, SB, M és 9B ábrán, valamint az 5. és 6. táblázatban bemutatott adetok5 bői látható, az ΙΕΗ-β-la feltárás szerinti FEG molekulák segítségével PEG-végzödéssel történő ellátása javítja az ΙΕΜ-β-U farmekokinetikai sajátságait. A. PEG-módositott proteinek minden esetben lassabban ürültek ki, mint a nem-módosított ΙΡΝ-β-la, 3,9-8,3 ml/óra/kg kiürülése sebességgel, a nem-módosított ΙΡΝ-β-Η esetén mért 160-170 ml/őm/kg értékkel szembem A csökkent kiürülést sebesség következtében az átlagos tartózkodást idő (MRT) a nem-módosított protein esetén mért. mintegy 1 óra értéktől a PEG-mődosított proteinek esetén 4,8-7,6 értékre növekedett. Hasonlóképpen az eliminációé felezési idő (tv?) a nem-módosított protein esetén mért mintegy .1 óra értékről a PPG-módosítod proteinek esetén 5,2-13 értékre növekedett. A görbe alatti terület (AUC) értékek szintén szignifíkánsan .növekedtek az Hfol-β4a PEO-módosMsfoak hatására, A nem-módosított ΙΕΜ-β-la esetén az AGG értéke mintegy
0,5 pg' őra/ml volt, míg a PÉG-módosított proteinek A1JC értékei mintegy 3 -6 pg - őra/rnl értéket nmtaitak, annak ellenére, hogy a PBG-mődosttott pmteineket 3,3-sznr alacsonyabb dózisban adagoltuk, mint a nem-módosított proteint. Á maximális megfigyelt konoeottáció (Cmss.) értékek általában magasabbak voltak a nem-módosított IW-jí-ia esetén, mint a PBG-módosított proteinek esetén, tekintettel arra, hogy ez móbbiaknl alacsonyabb dózisban ada2Ö goitok. Az. állandó állapotnál mért eloszlási térfogát (Yss) értékek. a PECf-módosltoli proteinek esetén alacsonyabbak voltak·, mist a nem-módosított ΙΡΝ-β-la esetén, ami arra utal, hogy kevésbé képesek kilépni a központi vér-kamrából.
5. táfeStat
Paraméter Egység Wem- -módosított IW-foia 28 ktt mPEG-O- -2-medÍpropioe- oldebiddal módé- W-Ra 2ö M> mF.EG-0- -p-metüfenPÖ-2~ -mattlpropmn- aldeldddel rnódo- sttott IFN-p-ia 20 ki) mPEG-O- -p-íeaüaeet- aldehíddei módosított ; W-Ra
c pg/mí 1 4ÖÖ Oüü 720 000 710 ÓÖO 590 000
tiíj ^AUC óra pg-ősu/ml | 510 ÖOÖ |
-'4·
m.t;kg
0.9
160 w
ÖJÍ I ' 7Λ nem-módosított IFN~p4a és a PBG-tedősítött ΓΡΝ-β-Ιη tmyanappan a vizsgáin:
is?
iKhSfföiés i jöi/óra/kg |
MRX r.......&
:Oáéáo^<IINjM^2Ö WjpÖ^Q^fenlto te teavénás olás tea* ölíemkOÁ aesa-módositotí IFN-p-la és a FEG-mödositoft IFN-p-Ia fonnák bemutatott kinetikai adatait ttgyanabíw a vizsgálatban kaptok.
W S.
Egyszeri és ismételt adagolással összehasonlító vizsgálatokat végeztünk nem-módosított és PEG-mödosiiott IFK-jMa-val relatív stabilitás és nem-humán főemlősökben való aktivitás tnkmteíében. Ezekben a vizsgálatokban a FEG-mődoshott ΙΕΝ-β-ίη konjugátnmok fmmakókhetikai és femakodlnamikai sajátságait a nem-módosííott ΙΡΝ-β-ía hasonlítottuk össze, antíaek alapján következtetések vonhatók le emberre nézve.
ő?
Ez a párhuzamos csoportokban, ismételt adagolással végzett vizsgálat a nem-módosított és EE-ö-módositott ΙΕΝ-β-U fatmakofcmettkai és tbrmakodinamlkai tul^fionságamnk összehasoniííáMra szolgák A vizsgálatba» egészséges,fbemlősőket (pl. Kteus maj5 mókát) alkalmaztunk. Az adagolás előtt 14 napon belül az állatokat a rossz egészség jeleire nézve kétszer ellenőrizte egy labomtérimni állatorvos, az egyik ellenőrzésnek az első adagolás előtt 24 órán belül kellett lennie. Csak egészséges állatok kaptak iesztsnyagot. Az ellenőrzéskor általános fizikai vizsgálat és adagolás előtti vérvétel történt a klinikai patológia alapértékének és az IFN-p-la elleni autóest alapértékének meghatározására. Az állatok testtömegét és tesfhőmémékletéf. a tesztanyag adagolása előtt '24 érán belül megmértük és feljegyeztük. Tizenkét egyedül osztottunk hármas csoportokba, es IxliE egységűig nem-módositott ΙΕΗ-β-la-t, Illetve EBC-mődosttort, azonban egyébként azonos IFK-p-la-t adagoltunk., Az adagé-, lést szubkután (s.o.) vagy intravénásán (tv.) végeztük,. Hat hím állat (kezelésenként három) t.v. úton kapott tesztanyagot, másik hat hím állat (kezelésenként három) pedig s.c. úton. Az összes állatnak naivnak kellett lennie IFN -Ha kezelésre nézve. Minden állat két alkalommal kapott kezelést, négyhetes intervallummal. Az adagolási térfogat 1,0 ml/kg volt. A fexmakokinedkai teszteléshez az egyes injektálások után 0; 0,083; 0,25; 0,5; 1; 1,5; 2; 4; Ó; 8; 12; 24; 48; 2 és 96 óta Időpoafiw vért vertünk. Az 1FN' által indukált biológiai válasz-markor, szérum-neoptertn méréséhez a teszta&yag adagolása után 0; 24; 48; 72; 9ő; 168; 336 és 594 óra. időpontban vettünk vérmintát A vizsgálat folyamán, az adagolások előtt 3 ö perccel és utána 1 órával klinikai megfigyelést végeztünk a ttíxicitás jeleire nézve. Napú ketrec melletti megfigyeléseket végeztünk, és az általános kinézetet, a toxleiíás jeleit, nem·jóllétet és a viselkedés megváltozását feljegyeztek, A testtömeget és a testhőmérsékletet az, adagolás utáni 21 napon rendszeresen mértük és feljegyeztük.
Bz a párhuzamos csoportokban, egyszeri adagolással végzett vizsgálat a nam-módosttott éa EBO-módosftotr Οόβ-la farmakokmetíkal és fánnákodmamikai tulajdonságainak összehasonlítására szolgál. A vizsgálatban, egészséges főemlősöket (pl. Rhesus majmokat) alkalmaztunk. Az adagolás előtt 14 napon belül az állatokat a rossz egészség jeleire nézve kétszer ellenőrizte egy lalmmíőrtumi állatorvos, az. egyik ellenőrzésnek az első adagolás előtt 24 órán belül kellett lennie. Csak egészséges állatok kaptak tesaíanyagoí. Az ellenőrzéskor általános fizikai vizsgálat és adagolás előtti vérvétel történt a klinikai patológia aiapéríékének és az 1ΕΝ~β~1η ollerú antitest alapértékének meghatározására. Az állatok testtömegét és testhőmérsékletét a tesztanyag adagolása előtt 24 órán belül megmértük és teljegyezlük.
ős
Hósz egyedef otóottok négyes csoportokba (csoportonként 2 hím és 2 nőstény), éa 1x10* egység/kg nem-mődoslfott IFN-0-la-t, illetve PEG-médosttott ΙΡΝ-β-U-t adagoltok ínnntnnszkulártsan (Lm.), valamint 2x11? egység/kg, IxK? egység/kg, illetve 5xl(? egység/kg FBö-módosítotl IFN-^-Iart inüwénásan (Lv.)„ Az összes állatnak naivnak kellett lesnie 1FN~ 5 -β-ia kezelésre nézve. Az adagolási térfogat «aláírni 1,0 ml/kg volt A fannakokmettkal teszteléshez az Injékíálss után 0; 0,5; 1; 2; 4; 6; 8; 12; 24; 48 és 96 óra időpontban» valamint a ?>» 14., 21. és 28. napon vért vettünk. Az IFM által Indukált biológiai válasz-rnarker, 2’-5’~ -ollgoadeniiezett szintez (SA-S’-GAS) méréséhez a tesztanyag adagolása után 0; 12; 24; 48; 72 és 96 óra időpontban, valamint a 14., 21, és 28, napon vettünk vérmintát. A vizsgálat ideje 10 alatt az: adagolások előtt 30 perccel és utána 1 órával klinikai megfigyelést végeztünk a tozieifis jeleire nézve. Napi, ketrec melletti megfigyeléseket végeztünk, és az általános kinézetei, a toxíeitás jelelt, nem-jóllétet és a viselkedés megváltozását téljegyeztük. A testtömeget és a tesüiómérséklefet az adagolás utáni 28 napon rendszeresen mértük és feljegyeztük,.
Wagálaü módszerek
Az ίΕΝ-β-Ιη azémmbell azintjét eltopattkus hatás (CPE) biológiai vizsgálattal határoztuk meg. A CPE vizsgálat az 1FN által közvetített vírusellenes aktivitás szintjét méri. Egy mintában a vhusellenes aktivitás szintje a mintában a vérvételkor jelen levő aktív ΓΕΝ mnletolák számára ntel, Ez a megközelítés standard módszer áz ΙΡΝ-β fkrmakoldnetlkájáuak feltárására.. A CPE vizsgálat azt detektálja, hogy az ΙΡΝ-β a humán tüdőkaroinőma sejteket (A549,
ATCC üCE-485) képes-e megvédem az encephaloxnyelocardítls (EMC) vfens által okozott ettotoxieltással szemben. A sejteket 15-20 óra hosszat szénmnniníákkál előinkubáimk, hogy a vírusellenes válaszért felelős IFN-indukálhaió proteinek szhüetizálódjanak és indukálódjanak.. Ezután hozzáadtuk az. EMC vírust, és további 30 óra hosszat inkubátor, majd kristály-ibolya testek alkalmazásával megbecsültük a clteíoxíchást. A mintákkal párhuzamosan minden le~ mezen belső standard ΓΕΝ-β-t, valamint belső standard PEG-módosított ΙΕΝ-β-ía-t is teszteltünk. Ezt a standardot egy természetes humán Obroblaszt IPN referencia-standardra (WHO Seeoad International Standard fór Intertéon, Humán Ptbroblast, Gfe-23-902-53) kalibráltak. Az egyes vizsgálati lemezek ezenkívül tartalmaztak aejtnövékedési kontroll mélyedéseket, amelyek sem az ,ΙΕΝ-β semmilyen formáját, sem EMC-i nem tartalmazzuk, továbbá vírus.
kontroll mélyedéseket, amelyek tartalmaztak sejteket ás EMC-f, de ΙΡΝ-β-t nem. Standardot és a mintákat tilalmazó kőmről! lemezeket szintén készítettünk, hogy meghatározzuk a minták sejmüveked-ésre gyakorolt hatását, ha egyáltalán van ilyen. Ezeket a lemezeket vírus adagolása nélkül festettük meg. A adtokat és a standardokat kél párhuzamos elrendezésben teszteltük, kéf-ket ismétlő vizsgálati lemez .mindegyikén, így mintánként négy adatot' kaptok. A, négy ismétlés mértani átfog koncentrációját adtuk meg, Ebben a vizsgálóban & detektálás határértéke 10 egység/ml volt A. neoptenn szérumba!! koncentrációit a klinikai iarmakológisi egység, kereskedelemben hozzáférhető vizsgálatokkal határozta meg. A. 2’~5’-0AS szérumbah kmieentoáoióii egy s^rzödéses labomtődntnbmh kereskedelemben hozzáérhető, jóváhagyott vfosgs
Az adatok farmakokinetikus modellekhez való Igazítására Katrip™ szoftvert (MicroM&th, ino., Saít Baké City, ül) használtunk Az egyes csoportokra nézve a mértani átlag konemrtácioértókeket ábrázoltok az idő függvényében Mivel a vizsgálati eredményeket hígítások formájában fejeztük ki, a mértani átlag inkább megfelelőnek tekinthető, mint a számtani átlag, A szérumheh WN szinteket az alapértékekhez igazítottuk, és a nem-detaktálh&iő szémmkoncenuáciőkat 5 egység/mi érteknek vettük, amely az álad detektálási határérték felének felel meg. Az tv. infúziós adatok esetén minden egyednél egy kéíegységes tv, infúziós modellt Illesztettünk a detektálható szérumkoneenteációklroz, mig az sx. adatokat egy kéíegységes injekciós modellhez Illesztettük.
A következő farmakokiuatikai paramétereket számoltuk:
(!) megfigyelt esooskoneeuttóekg 0««« (egység/ml):
(11) görbe alatti terület 0-48 órára nézve, AUC (egységxóra/ϊώ), a trapezoid szabályt al(hl) eiirnináolős felezési idő (óra); az tv. infúziós adatokból pedig íamennyrhen i.v, adagolás történt) (ív) eloszlás! felezési ídö (óra):
(v) kiürülés (mkór&d^);
(vi) eloszlási látszólagos térfogat, Vd (ml/kg).
Az i.v, és s.c. adagolás utáni eHmrnáeiós felezési Idők számításához WinNonlm szoftvert alkalmasunk (Lö verzió, Seienhflc Cönsukin Inc., Apex, NC). A neopterin ős a 2?~ -Ó’-GAS esetén minden csoportnál az idő szerinti számiam átlagot adtuk meg. Az alapvonalról való maximális változást, számoljuk. A C„iax, AUC ás bfo*.,. értékeket egymás varianoiaefomzésnek vetettük alá az adagolási csoportok összehasonlítására. A C«^ és AUC értékeket az elemzés előtt togaritmiknsan iranszformáltnk, es a mértani átlagot adtuk meg.
A PEG-mődnsítort humán IFN-jh.ta untiangiogén hutásat a EEG-mődosítort IFH-jUla
2a
Humán véna-beíhárnsejteket (Cell Systems, katalógusszám; 2.Y0-P75) és humán bŐr-mikroér belhámsejteket (Cell Systems, katalógusszám; 2M1-C25) tenyészetben tartottunk fenn. CS-C közeg készlettel (Cell Systems, kainlógttaszám 4£0~5OÖ). A. kísérlet előtt 24 órával a sejteket tripszümel kezeltük, vizsgálati közegben - 90% M199 és 1(1% szarvassaarha-embüó szérum (FBS) -- újrasznszpendáltuk, ég beállítottuk a kívánt aejtsműséget. A sejteket zselatinnal fedett, 24 vagy 9b mélyedéséé lemezeken szélesztettíik, 12 500 sejdmélyeáés, illetve 2000 sejVmélyedés mennyiségben. Bgy éjszakán át történő inkubálás után a vizsgálati közeget friss, 20 ngárd humán rekomhináns bázikns fibmbísszf növekedési faktort (bFGF) (Becton IMekúuon, kaidőguszsám 40060) turtoknazö közeggel cseréltük ki, és különböző Imneentrációkban nem-módositott ΙΡΝ-β-la-f, feltárás szériád FBG-mődosítoit ΙΡΝ-β-Ιη-ζ illetve pozitív kontrollt adagoltunk (pozitív kontrollként endostatmt alkalmazhaUmk, amint a h'FGP-hez egy antitestet lehet alkalmazöl). Á végtéríogntof a 24 mélyedéses lemezen 0,5 ml-te, a Óő mélyedésen lemezen 0,2. ml-re állítottuk be. 72 óra múlva a sejteket tripszmuel kezeltük a Cotdter-számláláshoz, lefagyasztottuk a GyQuaut íhuneszeeneiás leolvasáshoz. Illetve [’Hj-tímidnnel jelöltük. Ezzel az fe vfem vizsgálattal a találmány szerinti PBG-módosílott humán ΙΡΝ-β-la molekulák belhámsejtek szaporodására gyakorolt hatását mértük., ami jelzésértékű az ín vivő antiaugiogén hatásra, [lásd; O’Perlly ar ok CNI, 88:277-285 (1997)1.
stiá és PEG-mddositott rágcsáló IFN~ k fe vivő modelljei
Nem-módosított ΙΡΝ-β-la-f és 20 kD mPEG-O~2~metilprop.ionaldehiddel módosított XFN-p-Ia-t teszteltünk arra nézve, hogy képesek-e gátolni az SK-MEVl humán rnalíguos melanorua tornázok perifériáján belépő, radiálisén orientált véredényék képződését, dmusztoenies homozigóta csupasz (nufen) egereknél. Az SK-MEL-l sejteket 80%-o.s összefolyásig tenyésztettük, majd 2xRp sejtet Inuademuálisan iookulálnmk <0,1 ml a 0. napon) háromhetes hmnszmentes homozigóta csupasz (mrfen) NCR egerek (Taeonle, Öemiantosvn, NY) horgászába, a közép-axilláns vonalban. 24 óra múlva (az 1. napon) a hármas csoportokba osztott egerek mirktegyIke a következő, vlvőanyag kontroll, nem-módosított IFN-p-la, illetve 2.Ö kD xnPBG-0-2-mefiIpropÍonal.de.bIddel módosított ΙΡΝ-β-la szubfcatáu injekciót kap: 0,1 ml 4.5ső mg/ml-es humán szérumsfbmnm (vivőanyagos kontroll), csak az L napon egyszer;
?rt: 0,1 ml 45,ő mgúnl-es humán azérumalbmnrn, 1 MU (5 g.g) nem-módosított ΙΡΝ-βla-tartalommal, naponta az 1-9. napon;
ta;
0,1 ml 45,6 mgJml-es hömáa szérumaibnnrm, 1 Mü egység (10 μ§) 20 kD mFEG-G-2-.metilpropionaldéhiddel módosítod IFN'-p-la-textalommal, csak az L napon egyszer;
Pc88gajt£ Ö4 ml 45,6 mgőnl-es humán azérumalhnmm (vivőanyagos kontroll), naponta az 1napon.
Az egereket a 10. napon leöltök (Avertlu, 0,5 ml ínímperironedlmn), és a tnmm moknlálásának helyénél a neovaazkularízaeló becslése történ egy olyan személy áltat aki a kezelési csoportok beosztását nem ismerte (vak megfigyelés). A véredéuyeket rögzített nagyitágnál egy boncmikroszkőp alatt számláltuk. Minden, a tumor peáfénáján radiálisén elhelyez10 kedd véredény egyedi vércdényként kapott pontot Minden csoport három egérből állt
Amint a 10. ábrán látható, az 1 MU 20 ki) rnPEG-O-2-metilproplonaldehíddel módosított IFN-p-da egyszeri adagolása (C csoport) olyan hatékonyan csökkentette az űj véredényék számát, mint az 1 MII nem-módosított Ot-jMa népi adagolása (B csoport). A 20 kl> mFEG-O'2-metrlpropionaldehlddci módosított IFbl-β- la hatása azonban sokkal kifejezettebb, ha tekintetbe veszzük, hogy önmagában a vivőanyag adagolása is mutat némi gátlobatást (hasonlítsuk össze a vivőanyagot egyszer kapott A csoport eredményeit a D csoportéval, ahol az egerek naponta kaptak vivőanyagot).
Különböző további modelleket is kifejlesztettek, amelyek alkalmazhatók a találmány szerinti KEG-módosilitt molekulák antiangiogén és antmeovaszfodanzádős hatásának teszteléséte.. Ilyen modelleket fetwietnek például az IJS-5 733 §76 szama (1998. március 31; „Eljárás angicganexis gátlására”) és az US-5 135 919 számú (1992. augusztus 4; „Eljárás és kfőgyszerkészíunény angiogauezis gátlására”) írat. További vizsgálatok például a héjmentes körioailsntom membrán (CAM) vizsgálat (Taylor és Eolkmau, Akmra. 297:307 (1982); Crna at ml, Őefenee, 250:1375 (1905)1, az egér hátoldal! légzsák módszer angiogenezis-modell ptolkman ar M. A Axp. MM., I33;2?3 (1971)), valamint a patkány szaruhártya miktoxseb vizsgálat (Gimbroue, A, az ml, A AWá Cmeer Ané, 62:413 (1974)], amelyben mruhártya vaszkularízáeiőí indukálunk Sprague-Dawley törzsbe tartozó felnőtt patkányoknál (Charles Kiver, Japán) 500 ng, edié.n-vindaeeíát k.opollmer' peilettekbe impregnált feFGF (szarvasmarha, R í& D Systems, Inc.) Implautáiásával a. szanthártyákba. Ezenkívtl van egy olyan modell, amelyben angiogenezisf indukálnak NIH-Swlss vagy tinmszmoufes csupasz, (ntona) egerekben, MCE-7 emiőkaremórna vagy MIH~ÖYCA.R~3 petefészek-karomdma sejtek iroplantálása után (Llndner és Borúén, /m A Cmroer, 71:450 (1997)]. További mmor-scjtvonalak, például
- de nem kizárólag - az SK-MBL-I humán malignns melanúma sejtek szintén alkalmazhatok a fent Ismertetett aogiogenazís rndokálására. A nem-módosított, illetve a feltárás szerinti
PEG-mődosított lFN-β-1 a proteinek különböző dózisai tesztnlbetők különböző gyakorisággal, különböző ideig adagolva.
További, PEG-módositott egér és patkány ΙΡΝ-β autiangiogén hatásának tesztelésére szolgáló módszerek például - de jw kizárólag - az új, potenciálban rákellenes ágensek át~ vizsgálására szolgáló protokollok, amelyet az eredeti — Cnnw Cáwmíkerepy fieporfs, 3, kötete '2, szántának 3. részében (1972.. szeptember) ~ valamint a kiegészítőrészben - Jh Ew üoneer Medált, 297d-7P5P, ΚΊΗ Publication No. §4-2635 (1984. február) ··· ismertettek. Mivel az 1-ílposű interferon faj specifikus, a PEG~mőáositott lFN-β antiangiogén aktivitásának rágcsáló modellben való becsléséhez PBG-mŐdosítoti rágcsáló (pl. egér és patkány) ΙΕΝ-β kéül srftamyt kell készíteni, ilyen átvizsgálási módszer például a. PfiÖ-mődosított egér 1ΕΝ~β szubkután implantált Lewis tüdőkaminómára gyakorolt aníiangíogén hatásának tesztelésére szolgáló protokoll:
A tcmor aeityonsl eredete fiz a tumor séjtvonal. spontán módon, tüdökaminőmaként jött létre 1951-ben egy
C5713V6 egérben.
Atedzteitarás rpym ismertetése
Egy tnxoorfmgmensí lorplantáitmik sznfekmán úton egy BÓD2E1 egér axillárts területére. A tesztágenst (azaz egy találmány szerinti PEG-mődosított interferont) a tumor imphmáiásu után több napon különböző dózisokban szuhteián (s,.c.), illetve intraperitoneális (ép.) úton adagoltuk,. Paraméterként az átlagos túlélési időt mértük. Az eredményeket a kontroll túlélési idő százalékában fejeztük ki.
Szaporításhoz; CS7BL4S egér.
Teszteléshez: BŐD2E1 egér.
TesHöxneg: az egerek, testtömege egy 3 g-os tartományba esik, a hímek minimális tömege 18 g. a nőstényeké 17 g.
Mám: egy kísérleíbuu azonos nemű állatokat alkalmaztunk a tesztekhez és a kontrolihoz.
Forrás: egy kísérlethez egyetlen forráshői származó állatókat. alkalmazunk, ha lehetséges.
Tíz állat tesztcsoportonként
1T.AS:
árus: 24 saa íragmens egy s.o, donor tumorból Időpont: 13-15, nap
Hely: a fmgtrnmsi s.c. implaatálfck az tólltó területe egy a lágyék terül azúrássai.
TESZTELÉS:
Fragmens: 24 w fragmens egy s.o, donor tumorból Időpont; 13-15. nap r; a tegruenst s.o. imptentáljnk sz mdllátis területre egy a. lágyak területére szúrással.
CT nap: Tumor iruptemálása, Baktériumtenyésztés futtatása. A pozitív kontroll vegyöletek tesztelése minden páratlan számú kísérletben. Anyagok készítése. Az. elhullás feljegyzése naponta.
1. nap: Tenyészetek ellenőrzése. A kísérteti anyag kiöntése, ha szennyeződött Az állatok vétedenszeru besorolása. A kezelés elvégzése instrukolő szerint (az 1. napon és a következő napokon) .
2. nap: Tenyészetek újraellenőrzése, A kísérteti anyag kiöntése, ha szennyeződött.
5« nap: A 2. nap és a tesztágons tozteitás kezdőnapja kiértékelésének mérlegelése.
14. nap: A korai elhullás napjának ellenőrzése,
48, nap; Az adagolás nélküli nap ellenőrzése.
60, nap: Kiséleí vége és kiértékelése. A tüdők vizs£ ata tenorra nézve.
A pozitív kontroli vegyület feljegyzése (NSC 2Ú271; Cyioxao, 101) mg/kgÖujekoté) 25 minden páratlan számú ktsédetben, amelyben esák az 1. napon történik mteperrCnneálls adagolás, A pozitív kontroll esetén a testekontroll alsó határértéke 140%. Az elfogadható nem-kezelt kontroll átlagos túlélési idő 19-35,6 nap.
A mád paraméter az átlagos túlélési idő, Ssteoljnk az átlag-testtömeget sz 1, napra és az 5, napra, számoljuk a teszőkontroll mányi az összes teszteeoportra. Az Mhrg-testtömeget a kísérteibe vitel napjára és az utolsó kiértékelési napra számoljuk. A Céezt/kontroil arányt minden, 05%-nál több túlélőt mutató teazfeaoportra számoljuk az 5. napon. A 86%-nél kisebb teszt/kontrofl arány érték texieitásm tett A jelentős testtömeg-változáabell különbség (teszt mínusz, kontroll) szintén alkalmazható a toxteuás kiértékelésére.
?4 gesnmt a «
14Ö%-os vagy ennél nagyobb kezdeti teszt/kojhroll arány értékei tekintjük sztlkséaküviíás demoustfélására, A 150% vagy ennél nagyobb reprodukálható snnkteki
WWfealwIl arány értékei
A PBö-mődosítoit humán ÍW-p-Ia és PÍ£G-médúsított nágesáió IFN-f) tornák ánripndlfemlv és tumerelkmes hutásának » w modelljei
Különböző /» vívó modellek állnak. rendelkezésre a nem-módosított és a feltárás szerinti PBG-oaódoaított humán ΙΕΝ-β-la autiprohferatívés tunmmboues hatásának tesztelésére,, Bgy Ballon és munkatársat által ismerteted [Mmnn/ngm'e Chamh'hyy 12:195 (2001)] modellben ümtmsamfes csupasz egereknek (I-ferfen) azobkután implantálaak 2x1(1* humán vese A498, humán vese ACRN, illetve humán vese 0402 sejteket a hátulsó korpásába, és 3~6 hétig hagyják a tumorokat fejlődni. Ezután nem-módosított, illetve BEG-mődosított humán ΙΕΗ~β~ -k~t adagolnak különböző dózisokban, különböző gyakorisággal, különböző időn át, majd mérik a tumor térfogatát^ és kezelések közötti Összehasonlításokat végeznek, Bgy másik modellben (Líndner és Bordán, 2 őder/aroó Cymáw lev, 17:681 (1997)} íiumszmentes csupasz (nuóuí), petefészküktől megfosztott nőstény BALB/e egereknek 2>10é MCF-7 fplussz Ösziradiol), hlBA-híB-231, MOA-MB-4Ő8, illetve BT-20 humán emlőkareinóma sejteket, N1H-0YCAR-3 humán petefészekkarcínóma sejteket, HT-29 humán vastaghélkareinóma sejteket, Illetve SK-híBL-1 vagy FBMX humán mallgmus melanoma sejteket implantélnak a hónaljhoz legközelebbi emlőudrigyeí fedő bőrbe, és a tumor .méretét az idő függvényében mérik. Ezután nem-módosított és BBO-módosított humán ΙΤΝ-β-la-t adagolnak különböző dózisokban, különböző gyakorisággal, különböző időn ág majd mérik a tumor térfogatát, és kezelések közötti összehasonlítást végeznek. További, a BBG-mődosítoü humán IPN-fbla antipröüferadv és iomotenenes hatásának tesztelésére szolgáló .modellek például - de nem kizárólag - a Qah és munkatársai által ismertetett lokális és motasztázísos tüdőrák modellek (Mö/smdhr 4:356 (2001)], valamint a Tada és munkatársai által ismertetett, humán wiagWvégbéi-rák inájmetasztázisánsk csupasz egér zenograB modelljei [2 ömmeo/ őmamjpm'ou. 108:83 (2001)1.
További, a PLO-mődositott egér és patkány lFN-β aoripmliiemtív és tumórelfenes hatásának állatokban való tesztelésére szolgáló módszerek például - de nem kizárólag - a matígrms mezotehöma egér modellje (Gdaka eí al, Cmmer Asz, 61:6201 (20Ö'l)j, a Qnín és nmskatársai által Ismertetett lokális és metasztázbos tüdőrák modellek 'llerppg
4:356 (2001)], vateást a vastógbéVvégbél-rák májmetasztázisáuak szingenerites egér modelijei[Taáa«föl, <X CÉmon/Inverógohon, .188:83 (20Ö1)).
fN-p~la viraseítees hatásé5 oak 0? vfeo modeltf el
Van egy m vivő egér .modell a nem-módosított és PBG-módosított egér ΙΕΝ-β-nak a tetei Hepatitis B vírus (HBV) szintjére gyakorolt hatásának tesztelésére HBV-tmnszgenikua SCID egerekben (Larkln elírt., ..Vm'ars Afertkina, 5:907 (1999)].. Ebben a modellben a humán HBVgenom fej-láb ábnerjét hordozó hnnázgealkus SCiD egerek májában a HBV replikaíiv '10 formálnak ás a pm-gnnomikus RNS-nek detektálható szintje, a szántóiban pedig HBV vírus található. A rtaoszgemkns egerekből származó hepalooiták szintén pozitívak a BBsAg.HBeAg ás BBxAg proteineké nézve, ami Hrnsreplikációra ótól. A nem-,módosított és PBOegér IFN-β ezen modellben történd összehasonlításának protokollja a kővetkező; összevethető vúuzdterrel. rendelkező 30 egér (5 ötfős csoport plusz 5 tartalék) ikerét sn időpontban (legalább l hét különbséggel) az titer-alápérték meghatározására és annak biztosítására, hogy Éterük konstans marad az egér lFN-β adagolása előtt. 5 egérből álló csoportoknak hetente .háromszor (hétfőn, szerdán és pénteken) a kővetkező, 7.
Ártáblázat
Csoport Adagolt minta
1 Vivöanyag kontroll (1 mg-'mi egér szárumelbmnm, MSA)
2 30 egység nem-módosított egér lFN-β, 1 mg/ml-es MSÁ-ban
3 3O0 egység nem-módosított egér ΙΕΝ-β, 1 mg/ml-es MSA-ban
4 3000 egység nem-módosított egér ΙΡΗ-β, 1 mg/ml-es MSA-bun
S 30 egység FBG-módoaitott egér IFN-β, í mgőrú-es MS.A-ban
6 300 egység FBG-módosltoít egér lFN-β, 1 mg/ml~es MSA-ban
7 30O0 egység FEG-mődosított egér lFH-β, 1 mg/ml-es MSA-han
A vhnsötereket az adagolás folyamán hetente, az adagolás befejezése után pedig ő hónapig hetente-kéthetente meghatározzuk. A várótereket az idő Biggvényében ábtáaolptk a mvdany&ggal, illetve Bőd-jCval kezelt állatok vlrtasdierének eltűnésére és djm megjelenésére nézve történő összehasonlításához. Ezután egy második, vizsgálatot végzünk nem-mődosítoh és FEG-mődosított egér IFN-β megfelelő dózisaival 30-60 egéren. 10-20 fős csoportokba osztva (10-20 konttolk 10-20 nem-módosított egériPN-β és 10-20 PEG-módosííotí egér IPN~β), A vlmstítereket a fenti módon határozzuk meg, majd leölés után a szérumot, vírustitene, valamint BbaAg-ra nézve elemezzük SDS-PAGE és Wesrem-blot módszerrel Á májakat, kiemeljük, lefagyasztjuk vagy szükség esetén rögzítjük, majd HfesAg, HbcAg és KbxÁg jelen5 létének meghatározására festjük, További megfelelő, szakember számára ismert hfeztolögialj hisztokémiai vagy biokémiai tesztek szintén elvégezhetek a szérum- és szövetntintákom
Egy fe vivő egér modell szintén rendelkezésre áll a nem-módosított és PEÖ-mődositott humán IFN~p~la-nak a humán Hepatitis C vírus (HCY) szintjére gyakorolt hatásának tesztelésére kunéra humán májat hordozó egerekben [Mércét er ni, AWare Madridon,
1Ö 7:927 (2001)], Ebben a modellben normál humán hepatoehákat ojtimk plazminogén aktivátor transzként (díő-uFA) hordozó SC1D egerekbe, és az egereket HCY különböző genotípusaival fertőzött enmernktol vett szérumokkal Inokuláljnk, A megeredt humán májsejfek fertőződnek a vírussal és a vírus replikáttnnaival A HCV RNS szérűmben szintje PGR módszerrel menynylseglieg meghatározható, valamint a májsejtekben & pozitív és negatív (replikatív formáin)
RNS szintje Is. Egy megfelelő, a fentiekben a xtem-módosiíoit és PEG-módoshott egér 1FN-B Wmgenlkns HBY SCIB egnrkben való méréséhez ismertetetthez hasonló vizsgálati protokollt hajtunk végre (azonban nem csak ilyen végezhető) a nem-módosított és PBG-módosiiott humán ΙΕΝ'β-ía hatékonyságának becslésére ebben a modellben, azaz a kezeiéinek a HCY ötezre, máj hiszíolőgíára, szérum ALT szintekre és a HCY replikativ formáinak jelenlétére gyakorolt hatásának meghatározására a megeredt humán májsejtekben. További megfelelő, szakember számára ismert bisztológraí, hisztokémiai vagy biokémiai tesztek szintén elvégezhetők a szérum- és szövetmintákon.

Claims (19)

1. A (XXHa) általános képletü koajngátum, ahol
P jelentése egy polialkliéaglikol polimer;
30 X jelentése O;
Z jelentése egyenes vagy elágazó láneű, telített vagy műtétién Ch - Cns alkii- vagy heíemalkil-eaoporg C3 - C§ telített vagy telítetlen, gyűrűs nlkíl- vagy gyűrűs heteroalkH-csoport, helyettesített vagy helyeítesítetien stíl- vagy heteroarü-esoport vagy helyettesített vagy heiyettesitetlen alkarífesopntt, eltol az alkiiesopotí jelentése Ct - <%§ telített, vagy telítet?·;
te alkil- vagy heteroalkartl-esoport, ahol a ázobsztítnensekjelentése a következők közül választott csoport: halogénatom, hidtoxil·, karbon!!-, karbozilát-, észter-, forrni!-, ad!-, tiokarboml-, tioésztár-, tíoaeetát~s tio&rmiát, atkoz!-, foszfort!-, ibszfonát-, foszfínát-, amint)-, amíáo-, amidin-, Imit*-, oiauo-, nitro-, szidó-, szttíflűdrtl-, szulfát-, sztüfbnát-, szalfamoil·-, sztdíonantí5 de-, sxtdfontl-, hetetoeiklil·-, sralkil·, aromás csoport, heteroaromás csoport, imbo-, szili!-, éter- és Mkihiocsopotg
R* jelentése egy kapcsolócaoport, amely az alábbiak közül választott csoport és egy biológiailag aktív molekula közötti reakcióval képződik: aldehid, aldehid-hidrát és aeetál;
8 jelentése egy biológiailag aktív molekula vagy annak prekmzota, ahol a biológiailag IÖ aktív molekula egy interferon-bétn; és n jelentése 0 vagy 1-5 értékű egész szám,
2. Az L igénypont szerinti konjngáinm, ahol P jelentése egy (Π) általános képletű poheíiléngtlkol, ahol
E jelentése hidrogénatom, egyenes vagy elágazó láncú C{ - Cxe álkilesoport vagy egy
15 detektálható jolzfeopott’ és a jelentés® 4-10ÖÖŐ értékű egész szám,
3. A 2, igénypont szerinti konjugátum. ahol E jelentése metilesoporl '
4, A X Igényper at szerinti konjngátnnn ahol E jelentése egy detektálható jelzöcsoport.
5. A 4, Igénypont szerinti konjugálás», ahol E jelentése a kővetkezők közül választott 20 csoport: radioaktív izotópok, Enoreyzcens csoportok, foszábreszeens csoportok, kemilnmineszcens csoportok és kvantmnpoutok, §, Az előző Igénypontok bármelyüké szerinti konjugátsm, ahol Z jelentése naettíesoport és ö értéke egy,
7, Az előző igénypontok bármelyike szerinti konjngátum, ahol R* jelentése
25 metíléncsopost és 8 jelentése egy inrtvfenn-béta, amely egy aatínon keresztül kapcsolódik,
8, A 7. igénypont szerinti konjogátnm, ahol as amin a interferon-béta antín-tetmtnálisa.
9, Az előző igénypontok bármelyike szúrhtli konjngátmn, ahol az interteron-béta bteíeroo-béiada,
I. 0, Az előző igénypontok bármelyike szerinti konjngátínn, amely 20 kD mFBG-ö-2metílpropionaldehiddel módosított Interthron-bótn-l a, ahol az interferon-bétá-la az Ntemúnátísáo található sminesoporion keresztül kapcsolódik a 20 kD mPEö-0-2•metílpropmnaldehidhez.
II. Gyógyszerkészítmények, amelyek valamely ez 1-10. igénypontok bármelyike sze-
Ifognohato vrvőanyagot tartalmaznak.
12, Korgugáten az 1-I <X igénypontok bármelyike szerint vírusfertőzésre érzékeny bete
13, A 12. igénypont szerinti konjugáhnn alkalmazásra, ahol a kezelés tartalmazza továbbá a kővetkező csoportból választott virusellenee ágens adagolását; ribavirin, levovűm# 3TC# FTC, MBóŐöö, zidovudine, aeyelovlr# ganoydovu, virumide, VX-497, VX-95Ö és ISIS10
14. A12. igénypont szerinti konjugátum alkalmazásra, ahol a vírusfertőzés krónikus la C fertőzés.
15, Konfugátnm az 1-IÖ, igénypontok bármelyike szerint. autoimmun betegséggel rendelkező betegek kezelésében történő alkalmazásra.
lő. A15, Igénypont szerinti, kwíugáium alkahnazásrs# almi az autoimmun betegség szklemzls multiplex,
17. Konjugáten az l~10, igénypontok bármelyike szerint gyógyszerként történő alkalmazásra,
IS, Az 1, igénypont szerirdi konjugátum slkHraazása vírusfertőzés kezelésére szolgáié gyógyszer előállítására,
19, A18. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a képletben B jelentése interleron-béta-la
20, A 18. igénypont szerinti alkalmazás# ahol a gyógyszer tartalmaz továbbá egy vírusellenes ágenst a következők alkotta, csoportból választva: rib&vlrin# levovirín, 3TC, FTC# MBóSőő# zldovudlne# acyclovir, ganeyclovir, viramide# VX-49?# VX-950 és 1SIS-14803,
21, A18. igénypont szerinti alkalmazás# almi a vírusfertőzés krónikus Hepatitis € fertőzés,
22, Az I, igénypont szerinti konjugátum alkalmazása- szklerőzis multiplex kezelésére szolgáié gyógyszer előállítására.
23, A 22, igénypont szerinti alkalmazás, ahol a képletben B jelentése interferon-béta vagy pmkurzora,
24, A 23. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a képletben B jelentése interféron-béta-1 a.
HU0500457A 2002-01-18 2003-01-17 Polialkilén polimervegyületek és azok alkalmazása HU230473B1 (hu)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US34991702P 2002-01-18 2002-01-18
US60/349,917 2002-01-18
PCT/US2003/001559 WO2003061577A2 (en) 2002-01-18 2003-01-17 Polyalkylene glycol with moiety for conjugating biologically active compound

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP0500457A2 HUP0500457A2 (hu) 2005-08-29
HUP0500457A3 HUP0500457A3 (en) 2012-09-28
HU230473B1 true HU230473B1 (hu) 2016-07-28

Family

ID=27613339

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HUE03731987A HUE028163T2 (hu) 2002-01-18 2003-01-17 Polialkilén polimervegyületek és felhasználásuk
HUE15203017A HUE047557T2 (hu) 2002-01-18 2003-01-17 Polialkilén polimervegyületek és felhasználásuk
HU0500457A HU230473B1 (hu) 2002-01-18 2003-01-17 Polialkilén polimervegyületek és azok alkalmazása
HUS1600035C HUS1600035I1 (hu) 2002-01-18 2016-08-18 Polialkilén polimervegyületek és felhasználásuk

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HUE03731987A HUE028163T2 (hu) 2002-01-18 2003-01-17 Polialkilén polimervegyületek és felhasználásuk
HUE15203017A HUE047557T2 (hu) 2002-01-18 2003-01-17 Polialkilén polimervegyületek és felhasználásuk

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HUS1600035C HUS1600035I1 (hu) 2002-01-18 2016-08-18 Polialkilén polimervegyületek és felhasználásuk

Country Status (35)

Country Link
US (2) US8017733B2 (hu)
EP (3) EP1476181B1 (hu)
JP (5) JP2005526151A (hu)
KR (1) KR100964411B1 (hu)
CN (2) CN1630530A (hu)
AU (1) AU2003210564B2 (hu)
BE (1) BE2016C040I2 (hu)
BG (1) BG66525B1 (hu)
BR (1) BRPI0306993B8 (hu)
CA (4) CA2952488C (hu)
CY (2) CY2016027I1 (hu)
CZ (1) CZ2004877A3 (hu)
DK (2) DK1476181T3 (hu)
EA (2) EA009783B1 (hu)
EE (1) EE05509B1 (hu)
ES (2) ES2566797T3 (hu)
GE (2) GEP20074024B (hu)
HK (3) HK1072721A1 (hu)
HU (4) HUE028163T2 (hu)
IL (1) IL163006A (hu)
IS (1) IS2989B (hu)
LU (1) LU93162I2 (hu)
ME (2) ME00239B (hu)
MX (1) MXPA04006855A (hu)
NL (1) NL300826I2 (hu)
NO (3) NO339857B1 (hu)
NZ (1) NZ534708A (hu)
PL (2) PL397261A1 (hu)
PT (1) PT3025726T (hu)
RS (1) RS55578B1 (hu)
SI (2) SI1476181T1 (hu)
SK (1) SK3102004A3 (hu)
UA (1) UA82184C2 (hu)
WO (1) WO2003061577A2 (hu)
ZA (1) ZA200406555B (hu)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1476181B1 (en) * 2002-01-18 2016-03-23 Biogen MA Inc. Polyalkylene polymer compounds and uses thereof
US20150246097A9 (en) * 2002-01-18 2015-09-03 Biogen Idec Ma Inc. Polyalkylene Polymer Compounds and Uses Thereof
WO2004022630A2 (en) 2002-09-09 2004-03-18 Nektar Therapeutics Al, Corporation Water-soluble polymer alkanals
US8129330B2 (en) 2002-09-30 2012-03-06 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof
AU2003303635B2 (en) * 2002-12-26 2009-07-23 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates of interferon-beta with enhanced biological potency
TWI364295B (en) * 2002-12-26 2012-05-21 Mountain View Pharmaceuticals Polymer conjugates of cytokines, chemokines, growth factors, polypeptide hormones and antagonists thereof with preserved receptor-binding activity
US7432331B2 (en) 2002-12-31 2008-10-07 Nektar Therapeutics Al, Corporation Hydrolytically stable maleimide-terminated polymers
CA2530136C (en) 2003-06-26 2012-10-16 Control Delivery Systems, Inc. In-situ gelling drug delivery system
US8815284B2 (en) 2003-06-26 2014-08-26 Psivida Us, Inc. Bioerodible sustained release drug delivery systems
WO2005118537A2 (en) * 2004-05-31 2005-12-15 Ranbaxy Laboratories Limited Arylpiperazine derivatives as adrenergic receptor antagonists
AU2005318984B2 (en) 2004-12-21 2011-12-01 Nektar Therapeutics Stabilized polymeric thiol reagents
US20070004635A1 (en) * 2005-06-02 2007-01-04 Schering Corporation Method of treating interferon non-responders using HCV protease inhibitor
SG196786A1 (en) * 2005-07-08 2014-02-13 Elan Pharm Inc Preparation of polymer conjugates of therapeutic, agricultural, and food additive compounds
US8138272B2 (en) * 2006-05-22 2012-03-20 Elan Pharmaceuticals, Inc. Preparation of polymer conjugates of therapeutic, agricultural, and food additive compounds
WO2008066816A2 (en) * 2006-11-28 2008-06-05 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Derivatization or ligaton of peptides
EP2176404A4 (en) * 2007-07-11 2014-11-19 Belrose Pharma Inc POLYMERIC DRUG DELIVERY SYSTEMS WITH AN AROMATIC ALLYLIC ACID
CA2693616A1 (en) * 2007-07-11 2009-01-15 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Polymeric drug delivery system containing a multi-substituted aromatic moiety
CL2008002399A1 (es) * 2007-08-16 2009-01-02 Pharmaessentia Corp Conjugado sustancialmente puro que posee una porcion polimerica, una porcion proteica (interferon alfa 2b) y un ligante alifatico de 1 a 10 atomos de carbono, util en el tratamiento de las hepatitis b o c.
JP2011522834A (ja) * 2008-06-05 2011-08-04 ザイモジェネティクス リミテッド ライアビリティ カンパニー Ｃ型肝炎の治療のためのペグ化ｉｉｉ型インターフェロンの使用
BRPI0911722B1 (pt) * 2008-07-31 2022-09-13 Pharmaessentia Corp Conjugado de peptídeo-polímero
GB0823309D0 (en) * 2008-12-19 2009-01-28 Univ Bath Functionalising reagents and their uses
EP2439736A1 (en) 2009-06-02 2012-04-11 Panasonic Corporation Down-mixing device, encoder, and method therefor
UA109646C2 (uk) * 2009-12-10 2015-09-25 Терапевтичне застосування кон'югатів білка з полімером
US20130225789A1 (en) * 2012-02-29 2013-08-29 Yi Sun Polyethylene Glycol Having Hetero Multiple Functional Groups
US8993614B2 (en) 2012-03-15 2015-03-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Substituted pyrrolidine-2-carboxamides
KR101475630B1 (ko) * 2013-05-31 2014-12-22 동국대학교 산학협력단 포도근 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 c형 간염의 예방 또는 치료용 조성물
WO2016013911A1 (ko) * 2014-07-24 2016-01-28 에이비온 주식회사 페길화된 인터페론 -베타 변이체
SI3183264T1 (sl) * 2014-08-19 2021-03-31 Biogen Ma Inc. Metoda pegilacije
GB201419108D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Glythera Ltd Materials and methods relating to linkers for use in antibody drug conjugates
HRP20231732T1 (hr) 2014-11-06 2024-03-15 Pharmaessentia Corporation Režim doziranja pegiliranog interferona
ES2831079T3 (es) * 2017-06-28 2021-06-07 Construction Research & Technology Gmbh Dispersante para partículas inorgánicas
US11472894B2 (en) 2018-07-23 2022-10-18 Carnegie Mellon University Enzyme-assisted ATRP procedures
CN109232898A (zh) * 2018-08-02 2019-01-18 张玲 一种具有抗凝血功能的聚酰亚胺新材料的制备方法
CN111534458B (zh) * 2020-04-13 2022-01-14 浙江工业大学 无色杆菌tbc-1及其在降解1,3,6,8-四溴咔唑中的应用
CN113716982B (zh) * 2021-08-24 2022-05-06 重庆云瑞肥业有限公司 一种食品垃圾回收用发酵制肥装置

Family Cites Families (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3710795A (en) 1970-09-29 1973-01-16 Alza Corp Drug-delivery device with stretched, rate-controlling membrane
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4002531A (en) 1976-01-22 1977-01-11 Pierce Chemical Company Modifying enzymes with polyethylene glycol and product produced thereby
EP0082481B2 (en) 1981-12-23 1990-09-12 Schering Corporation Stabilised alpha-interferon formulations and their preparation
WO1985003934A1 (en) * 1984-03-06 1985-09-12 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein and process for its preparation
GB8334102D0 (en) 1983-12-21 1984-02-01 Searle & Co Interferons with cysteine pattern
EP0154316B1 (en) 1984-03-06 1989-09-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified lymphokine and production thereof
EP0206448B1 (en) 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
US4917888A (en) 1985-06-26 1990-04-17 Cetus Corporation Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4766106A (en) 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
JP2524586B2 (ja) 1985-06-26 1996-08-14 シタス コーポレイション ポリマ−接合を利用する医薬組成物用蛋白質の可溶化
JP2514950B2 (ja) 1986-03-10 1996-07-10 エフ・ホフマン―ラ ロシユ アーゲー 化学修飾蛋白質，その製造法および中間体
US4894226A (en) 1986-11-14 1990-01-16 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polyproline conjugation
US5080891A (en) 1987-08-03 1992-01-14 Ddi Pharmaceuticals, Inc. Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols
US5135919A (en) 1988-01-19 1992-08-04 Children's Medical Center Corporation Method and a pharmaceutical composition for the inhibition of angiogenesis
US5116964A (en) 1989-02-23 1992-05-26 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
US5286637A (en) * 1989-08-07 1994-02-15 Debiopharm, S.A. Biologically active drug polymer derivatives and method for preparing same
US5252714A (en) * 1990-11-28 1993-10-12 The University Of Alabama In Huntsville Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde
US5595732A (en) 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
US5281698A (en) 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation
WO1993012145A1 (en) 1991-12-19 1993-06-24 Baylor College Of Medicine Pva or peg conjugates of peptides for epitope-specific immunosuppression
ZA933926B (en) 1992-06-17 1994-01-03 Amgen Inc Polyoxymethylene-oxyethylene copolymers in conjuction with blomolecules
US5382657A (en) 1992-08-26 1995-01-17 Hoffmann-La Roche Inc. Peg-interferon conjugates
US5262564A (en) 1992-10-30 1993-11-16 Octamer, Inc. Sulfinic acid adducts of organo nitroso compounds useful as retroviral inactivating agents anti-retroviral agents and anti-tumor agents
US5298410A (en) 1993-02-25 1994-03-29 Sterling Winthrop Inc. Lyophilized formulation of polyethylene oxide modified proteins with increased shelf-life
US5681811A (en) 1993-05-10 1997-10-28 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized therapeutic agent compositions, delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5359030A (en) 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5874075A (en) 1993-10-06 1999-02-23 Amgen Inc. Stable protein: phospholipid compositions and methods
US5951974A (en) 1993-11-10 1999-09-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates
DK0730470T3 (da) 1993-11-10 2002-06-03 Enzon Inc Forbedrede interferonpolymerkonjugater
US5446090A (en) 1993-11-12 1995-08-29 Shearwater Polymers, Inc. Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules
US5639725A (en) 1994-04-26 1997-06-17 Children's Hospital Medical Center Corp. Angiostatin protein
US5730990A (en) * 1994-06-24 1998-03-24 Enzon, Inc. Non-antigenic amine derived polymers and polymer conjugates
US5650234A (en) 1994-09-09 1997-07-22 Surface Engineering Technologies, Division Of Innerdyne, Inc. Electrophilic polyethylene oxides for the modification of polysaccharides, polypeptides (proteins) and surfaces
US5824784A (en) 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5738846A (en) 1994-11-10 1998-04-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates and process for preparing the same
AU697440B2 (en) 1994-12-07 1998-10-08 Novozymes A/S Polypeptide with reduced allergenicity
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
US5672662A (en) 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
SE9503380D0 (sv) * 1995-09-29 1995-09-29 Pharmacia Ab Protein derivatives
EP0856026A1 (en) * 1995-10-19 1998-08-05 Receptagen Corporation Discrete-length polyethylene glycols
US5702717A (en) 1995-10-25 1997-12-30 Macromed, Inc. Thermosensitive biodegradable polymers based on poly(ether-ester)block copolymers
US5908621A (en) 1995-11-02 1999-06-01 Schering Corporation Polyethylene glycol modified interferon therapy
US5747639A (en) 1996-03-06 1998-05-05 Amgen Boulder Inc. Use of hydrophobic interaction chromatography to purify polyethylene glycols
JP2001508783A (ja) 1997-01-29 2001-07-03 ポリマスク・ファーマシューティカルズ・パブリック・リミテッド・カンパニー Ｐｅｇ化法
EP0975809A4 (en) 1997-03-05 2002-10-30 Univ Washington EXAMINATION PROCEDURE FOR DETECTING AGENTS FOR SELECTIVE INHIBITION OF HCV REPLICATION
US5990237A (en) * 1997-05-21 1999-11-23 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines
US7642323B2 (en) 1997-11-06 2010-01-05 Nektar Therapeutics Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation
US6448369B1 (en) 1997-11-06 2002-09-10 Shearwater Corporation Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation
US6180095B1 (en) 1997-12-17 2001-01-30 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
WO1999030727A1 (en) * 1997-12-17 1999-06-24 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
US5981709A (en) 1997-12-19 1999-11-09 Enzon, Inc. α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same
US5985263A (en) 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
US5965119A (en) 1997-12-30 1999-10-12 Enzon, Inc. Trialkyl-lock-facilitated polymeric prodrugs of amino-containing bioactive agents
PT1411075E (pt) * 1998-03-12 2008-08-05 Nektar Therapeutics Al Corp Método para a preparação de conjugados de polímeros
DK1421956T3 (da) 1998-04-28 2007-10-01 Applied Research Systems Polyol-IFN-beta-konjugater
US6703381B1 (en) 1998-08-14 2004-03-09 Nobex Corporation Methods for delivery therapeutic compounds across the blood-brain barrier
EP1656952B1 (en) * 1998-10-16 2013-12-18 Biogen Idec MA Inc. Polyalkylene glycol conjugates of interferon beta-1A and uses thereof
CA2376714A1 (en) * 1999-06-11 2001-01-04 Shearwater Corporation Hydrogels derived from chitosan and poly(ethylene glycol) or related polymers
US7144574B2 (en) 1999-08-27 2006-12-05 Maxygen Aps Interferon β variants and conjugates
US6531122B1 (en) 1999-08-27 2003-03-11 Maxygen Aps Interferon-β variants and conjugates
CZ2002521A3 (cs) 1999-08-27 2002-05-15 Maxygen Aps Nové molekuly podobné interferonu beta
AU781839B2 (en) * 1999-12-22 2005-06-16 Nektar Therapeutics Sterically hindered derivatives of water soluble polymers
US6413507B1 (en) * 1999-12-23 2002-07-02 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable carbamate derivatives of poly (ethylene glycol)
EP1324779B1 (en) * 2000-09-29 2011-07-20 Schering Corporation Pegylated interleukin-10
TW593427B (en) 2000-12-18 2004-06-21 Nektar Therapeutics Al Corp Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives
US7053150B2 (en) 2000-12-18 2006-05-30 Nektar Therapeutics Al, Corporation Segmented polymers and their conjugates
GEP20063916B (en) * 2001-02-01 2006-09-11 Biogen Idec Inc Polymer conjugates of neublastin and methods of using same
BR0207576A (pt) 2001-02-27 2004-04-27 Maxygen Aps Variante glicosilada de um polipeptìdeo de interferon beta precursor (ifnb), processos de aumentar a glicosilação in vivo de uma molécula de ifnb precursora, de produzir uma molécula de ifnb glicosilada, para preparar uma variante conjugada e de tratar um mamìfero com esclerose múltiplam composição farmacêutica, molécula de ifnb variante, sequência de nucleotìdeo, vetor de expressão, célula hospedeira de glicosilação conjugado, e, uso de um conjugado
US7009033B2 (en) 2001-07-02 2006-03-07 Polymer Source Inc. Heterofunctional polyethylene glycol and polyethylene oxide, process for their manufacture
DK1436012T3 (en) * 2001-10-18 2018-01-22 Nektar Therapeutics Polymer Conjugates of Opioid Antagonists
JP2005525302A (ja) * 2001-11-20 2005-08-25 ファルマシア・コーポレーション 化学的に修飾されたヒト成長ホルモンコンジュゲート
US7041855B2 (en) 2001-12-11 2006-05-09 Sun Bio, Inc. Monofunctional polyethylene glycol aldehydes
AU2002357806A1 (en) * 2001-12-11 2003-06-23 Sun Bio, Inc. Novel monofunctional polyethylene glycol aldehydes
KR100488351B1 (ko) 2001-12-11 2005-05-11 선바이오(주) 신규한 폴리에틸렌글리콜-프로피온알데히드 유도체
US6956135B2 (en) 2001-12-11 2005-10-18 Sun Bio, Inc. Monofunctional polyethylene glycol aldehydes
US6916962B2 (en) 2001-12-11 2005-07-12 Sun Bio, Inc. Monofunctional polyethylene glycol aldehydes
EP1476181B1 (en) * 2002-01-18 2016-03-23 Biogen MA Inc. Polyalkylene polymer compounds and uses thereof
WO2004022630A2 (en) 2002-09-09 2004-03-18 Nektar Therapeutics Al, Corporation Water-soluble polymer alkanals
AU2003303635B2 (en) 2002-12-26 2009-07-23 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates of interferon-beta with enhanced biological potency
US20110165122A1 (en) * 2009-11-10 2011-07-07 The Regents Of The University Of California Method for targeted and sustained antiviral therapy

Also Published As

Publication number Publication date
DK1476181T3 (en) 2016-05-23
EP3025726B1 (en) 2019-11-20
PL213322B1 (pl) 2013-02-28
PT3025726T (pt) 2020-01-09
GEP20074024B (en) 2007-01-10
HUE047557T2 (hu) 2020-04-28
NO2017013I2 (no) 2018-08-20
HK1224185A1 (zh) 2017-08-18
CZ2004877A3 (cs) 2004-12-15
BG108839A (bg) 2005-04-30
JP6030717B2 (ja) 2016-11-24
HK1072721A1 (zh) 2005-09-09
EP3669887A1 (en) 2020-06-24
HK1143553A1 (en) 2011-01-07
ZA200406555B (en) 2005-11-30
JP2016014022A (ja) 2016-01-28
MEP35608A (en) 2011-02-10
KR20040081463A (ko) 2004-09-21
JP2005526151A (ja) 2005-09-02
LU93162I2 (fr) 2016-10-03
HUE028163T2 (hu) 2016-11-28
CY1122841T1 (el) 2021-10-29
HUS1600035I1 (hu) 2016-10-28
NZ534708A (en) 2007-05-31
CA2952488A1 (en) 2003-07-31
NO2017013I1 (no) 2017-04-10
EA011829B1 (ru) 2009-06-30
CA2952488C (en) 2019-05-07
NL300826I2 (hu) 2017-03-16
NO20151082A1 (no) 2015-08-26
WO2003061577A2 (en) 2003-07-31
CA2473526A1 (en) 2003-07-31
AU2003210564B2 (en) 2008-10-23
PL372728A1 (en) 2005-08-08
GEP20064024B (en) 2007-01-10
US8524660B2 (en) 2013-09-03
IS7353A (is) 2004-07-15
HUP0500457A3 (en) 2012-09-28
ES2774801T3 (es) 2020-07-22
KR100964411B1 (ko) 2010-06-15
CN101700401A (zh) 2010-05-05
WO2003061577A8 (en) 2008-11-20
HUP0500457A2 (hu) 2005-08-29
CA2840490A1 (en) 2003-07-31
CA2753899C (en) 2014-03-25
MXPA04006855A (es) 2005-04-19
EP1476181B1 (en) 2016-03-23
DK3025726T3 (da) 2019-12-09
CA2840490C (en) 2017-02-28
WO2003061577A3 (en) 2003-10-02
CA2473526C (en) 2013-10-22
EA200400962A1 (ru) 2005-06-30
SI3025726T1 (sl) 2020-03-31
EE200400105A (et) 2004-12-15
BE2016C040I2 (hu) 2022-05-17
RS63504A (en) 2007-02-05
US20050107277A1 (en) 2005-05-19
IS2989B (is) 2017-11-15
ME00239B (me) 2011-05-10
US8017733B2 (en) 2011-09-13
NO20043422L (no) 2004-10-11
ES2566797T3 (es) 2016-04-15
BG66525B1 (bg) 2016-04-28
CA2753899A1 (en) 2003-07-31
PL397261A1 (pl) 2012-03-26
BR0306993A (pt) 2005-09-06
CN1630530A (zh) 2005-06-22
JP2009235409A (ja) 2009-10-15
JP2012255156A (ja) 2012-12-27
EP3025726A1 (en) 2016-06-01
NO339857B1 (no) 2017-02-06
CN101700401B (zh) 2013-08-14
EP1476181A4 (en) 2008-11-19
NO344612B1 (no) 2020-02-10
JP2013136756A (ja) 2013-07-11
CY2016027I2 (el) 2017-06-28
CY2016027I1 (el) 2017-06-28
EA009783B1 (ru) 2008-04-28
US20120014916A1 (en) 2012-01-19
EA200701386A1 (ru) 2007-10-26
JP5275125B2 (ja) 2013-08-28
BRPI0306993B1 (pt) 2020-03-10
RS55578B1 (sr) 2017-06-30
SI1476181T1 (sl) 2016-10-28
IL163006A (en) 2011-01-31
BRPI0306993B8 (pt) 2021-05-25
SK3102004A3 (sk) 2005-01-03
UA82184C2 (uk) 2008-03-25
EP1476181A2 (en) 2004-11-17
EE05509B1 (et) 2012-02-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU230473B1 (hu) Polialkilén polimervegyületek és azok alkalmazása
US20230131121A1 (en) Branched discrete peg constructs
US8754190B2 (en) Controlled release from macromolecular conjugates
WO2020156513A1 (zh) 双配体药物偶联体及其用途
US8426554B2 (en) In vivo polynucleotide delivery conjugates having enzyme sensitive linkages
CN1997661B (zh) 抗原性减弱的聚合物缀合物,其制备方法和应用
US7604804B2 (en) Enhancing anti-HIV efficiency through multivalent inhibitors targeting oligomeric gp120
JP2021006549A (ja) 多リガンド−薬物複合体及びその使用
CN103491982B (zh) 具有酶敏感性连接的多核苷酸体内递送偶联物
JP2010526091A5 (hu)
CN103492489A (zh) 高分子量的含两性离子的聚合物
EA022932B1 (ru) Димерные слитые белки vstm3 и связанные с ними композиции и способы
JP2010526091A (ja) 癌の処置のための生物学的な標的基の改変
EP2571496A1 (en) Controlled drug release from dendrimers
CN108289966A (zh) 用于减少转移的方法和组合物
CN106470707A (zh) 用于口服递送生物活性货物的cholix毒素衍生的融合分子
KR102279429B1 (ko) 멀티 암 표적 항암 콘쥬게이트
CN107530369A (zh) 具有生物可逆的二硫基的单核苷酸
NZ583831A (en) Protein-polymer conjugates comprising interferon-alpha
CN115590965B (zh) 用于治疗和/或预防hiv相关疾病的aptc偶联物及其应用
WO2022268202A1 (zh) 配体药物偶联物及其应用
CN115590976A (zh) 治疗和/或预防hiv相关疾病的apc偶联物及其制法和应用
JP2005538041A5 (hu)
CN113874393A (zh) 对hbv包膜蛋白具有特异性的结合分子
Samizadeh Anti-HIV drug conjugates for enhanced mucosal pre-exposure prophylaxis

Legal Events

Date Code Title Description
HC9A Change of name, address

Owner name: BIOGEN MA INC., US

Free format text: FORMER OWNER(S): BIOGEN IDEC MA INC., US