EA011829B1 - Полиалкиленгликоль с остатком для конъюгации биологически активного соединения - Google Patents

Полиалкиленгликоль с остатком для конъюгации биологически активного соединения Download PDF

Info

Publication number
EA011829B1
EA011829B1 EA200701386A EA200701386A EA011829B1 EA 011829 B1 EA011829 B1 EA 011829B1 EA 200701386 A EA200701386 A EA 200701386A EA 200701386 A EA200701386 A EA 200701386A EA 011829 B1 EA011829 B1 EA 011829B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
group
alkyl
substituted
saturated
biologically active
Prior art date
Application number
EA200701386A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200701386A1 (ru
Inventor
КоЧунг Лин
Р. Блэйк Пепински
Лин Лин Чэнь
Донна М. Хесс
Эдвард Й. Лин
Расселл К. Петтер
Даррен П. Бэйкер
Original Assignee
Байоджен Айдек Ма Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Байоджен Айдек Ма Инк. filed Critical Байоджен Айдек Ма Инк.
Publication of EA200701386A1 publication Critical patent/EA200701386A1/ru
Publication of EA011829B1 publication Critical patent/EA011829B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/31—Somatostatins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/34—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from hydroxy compounds or their metallic derivatives
    • C08G65/48—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L71/00—Compositions of polyethers obtained by reactions forming an ether link in the main chain; Compositions of derivatives of such polymers
    • C08L71/02—Polyalkylene oxides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L2203/00—Applications
    • C08L2203/02—Applications for biomedical use

Abstract

Изобретение относится к новым соединениям полиалкиленгликоля и способам их применения. В частности, соединения, содержащие новый конъюгат полиэтиленгликоля, применяют отдельно или в комбинации с противовирусными средствами для лечения вирусной инфекции, такой как хронический гепатит С.

Description

Область изобретения
Данное изобретение относится к новым соединениям полиалкиленгликоля, конъюгатам полимеров и белков и их применениям.
Предпосылка изобретения
Ковалентное связывание гидрофильных полимеров, таких как полимеры полиалкиленгликоля, также называемые полиалкиленоксидами, с биологически активными молекулами и поверхностями представляет интерес в биотехнологии и медицине.
В частности, многие исследования были сосредоточены на применении конъюгатов поли(этиленгликоля) (РЕО), также называемого поли(этиленоксидом) (ПЭО), для повышения растворимости и стабильности и пролонгирования времени полужизни молекул в системе кровообращения.
В своей наиболее общей форме РЕО является линейным полимером, заканчивающимся на каждом из концов гидроксильными группами
НО-СН2СН2О- (СН2СН2О) а-СН2СН2-ОН
Указанный выше полимер, альфа-, омега-дигироксиполи(этиленгликоль), также можно представить в виде НО-РЕО-ОН, при этом подразумевается, что символ -РЕО- означает следующую структурную единицу
-СН2СН2О- (СН2СН2О) П-СН2СН2где η обычно находится в пределах примерно от 4 до 10000.
РЕО обычно используют в виде метокси-РЕО-ОН, или тРЕО, в котором один конец представляет собой относительно инертную метоксигруппу, тогда как другой конец является гидроксильной группой, которая легко подвергается химической модификации. Кроме того, во многих применениях РЕО может быть заменен случайными или блок-сополимерами различных алкиленоксидов (например, этиленоксида и пропиленоксида), которые являются близко родственными РЕО по своей химической природе.
Чтобы связать РЕО с представляющей интерес молекулой, часто необходимо активировать РЕО путем получения производного РЕО, имеющего реакционноспособную функциональную группу по меньшей мере на одном конце. Функциональную группу выбирают на основе типа доступной реакционноспособной группы в молекуле, которая будет связана с РЕО.
РЕО является полимером, обладающим свойствами растворимости в воде и многих органических растворителях, отсутствием токсичности и отсутствием иммуногенности. Одним из применений РЕО является ковалентное связывание полимера с нерастворимыми молекулами, чтобы сделать полученный в результате «конъюгат» РЕО-молекула растворимым. Например, показано, что нерастворимое в воде лекарственное средство паклитаксел при связывании с РЕО становится водорастворимым. Сгееп\та1б с1 а1., 1. Огд. СЬст., 60: 331-336 (1995).
Способ на основе пролекарств, при котором лекарственные средства высвобождаются в результате деградации более сложных молекул (пролекарств) при физиологических условиях, является эффективным элементом доставки лекарственного средства. Пролекарства, например, можно образовать в результате связывания РЕО с лекарственными средствами посредством связей, которые разрушаются при физиологических условиях. Время жизни пролекарств на основе РЕО ίη νίνο зависит от типа функциональной группы(групп), образующих связи между РЕО и лекарственным средством. В общем, сложноэфирные связи, образованные в результате взаимодействия РЕО-карбоновых кислот или активированных РЕО-карбоновых кислот со спиртовыми группами лекарственного средства, гидролизуются в физиологических условиях, высвобождая лекарственное средство, тогда как амидные и карбаматные связи, образованные на основе аминогрупп лекарственного средства, стабильны и не гидролизуются с высвобождением свободного лекарственного средства. Показано, что гидролитическую доставку лекарственных средств из сложных эфиров РЕО можно в определенной степени легко регулировать посредством регулирования количества связывающих метиленовых групп в спейсере между концевым кислородом РЕО и карбонильной группой связанной карбоновой кислоты или производного карбоновой кислоты. Например, Напт8 е1 а1. в патенте США № 5672662 описывают РЕО-бутановую кислоту и РЕО-пропановую кислоту и их активированные производные в качестве альтернативы карбоксиметил-РЕО для соединений в тех случаях, когда желательна меньшая гидролитическая реакционная способность соответствующих сложноэфирных производных. В общем, см. публикацию РСТ \УО 01/46291.
Одним фактором, ограничивающим пригодность протеинизированных веществ для применений в лечебных целях, является то, что при парентеральном введении они элиминируются из организма в течение короткого периода времени. Указанная элиминация может происходить в результате деградации протеазами или в результате выведения с использованием обычных путей элиминации белка, таких как фильтрация в почках. Пероральное введение указанных веществ еще более проблематично, поскольку кроме протеолиза в желудке высокая кислотность желудка разрушает указанные вещества до того, как они достигают намеченной ткани-мишени. Проблемы, связанные с указанными путями введения белков, хорошо известны в фармацевтической промышленности, и при попытках их решения используются различные методики. Опубликовано много работ, связанных со стабилизацией белка. Известны различные способы конъюгации белков с полимерными материалами, включая использование декстранов, поливинилпирролидонов, гликопептидов, полиэтиленгликоля и полиаминокислот. Сообщается, что полученные
- 1 011829 в результате конъюгированные полипептиды сохраняют свои биологические активности и растворимость в воде для парентеральных применений.
Особый интерес представляет повышение биологической активности интерферонов наряду с уменьшением токсичности, вызванной применением указанных белков для лечения больных людей. Интерфероны являются семейством встречающихся в природе небольших белков и гликопротеидов, продуцируемых и секретируемых большинством ядерных клеток в ответ на вирусную инфекцию, а также другие антигенные стимулы. Интерфероны делают клетки резистентными к вирусной инфекции и проявляют широкое множество действий на клетки. Они проявляют свои клеточные активности посредством связывания со специфичными мембранными рецепторами на поверхности клеток. После связывания с клеточной мембраной интерфероны инициируют сложную последовательность внутриклеточных событий. Исследования ίη νίΐτο показали, что указанные активности включают индукцию некоторых ферментов; подавление пролиферации клеток, иммуномодулирующие активности, такие как усиление фагоцитарной активности макрофагов; увеличение специфичной цитотоксичности лимфоцитов по отношению к клеткам-мишеням и ингибирование репликации вирусов в инфицированных вирусом клетках.
Интерфероны тестировали при лечении различных клинических патологических состояний. Применение человеческого интерферона бета введено для лечения множественного склероза. Две формы рекомбинантного интерферона бета недавно лицензированы в Европе и в США для лечения данного заболевания: интерферон-бета-1а (ΑνΟΝΕΧ®, Βίοβοη. 1пс., СатЬпйдс, МА и ΒΕΒΙΕ®, 8стопо, Сспста. 8\\й/сг1апй) и интерферон-бета-1Ь (ΒΕΤΑ8ΕΚ.ΟΝ®, Вег1ех, Ктсйтопй, СА). Интерферон бета-1а продуцируется в клетках млекопитающих при использовании природной последовательности гена человека и гликозилируется, тогда как интерферон-бета-1Ь продуцируется в бактериях Е. сой при использовании модифицированной последовательности гена человека, которая содержит генетически сконструированную замену цистеина на серин в положении аминокислоты 17, и не гликозилируется.
Известно, что неиммунные интерфероны, которые включают как альфа-, так и бета-интерфероны, подавляют вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) как в остро инфицированных, так и в хронически инфицированных клетках. См. Рой апй Еаис1, 1992, ΑΙΌ8 Всксатсй апй Нитап Вс1готйи5с5 8 (2): 191-197. Благодаря своей противовирусной активности интерфероны, особенно альфа-интерфероны, привлекли большое внимание в качестве терапевтических средств для лечения заболевания, связанного с вирусом гепатита С (НСА). См. НооГпаДс с! а1., в: νίΓηΙ Нсра1111Б 1981 1Щсгпа1юпа1 Бутрокшт, 1982, РЫ1айс1рЫа, Егапкйп 1п8Й!и!с Ргекк; НооГпад1с с! а1., 1986, №\ν Епд. 1. Мсй. 315: 1575-1578; Тйоткоп, 1987, Ьапсс!, 1: 539-541; Ктуоката с! а1., 1983, в 2исксттап, сй., Мта1 Нсраййк апй БКсг Иксакс, А11сп К. Ькк, №\ν Уогк рр. 895-897; НооГпад1с с! а1., 1985, 8ст. Είν. Όίδ., 1985, 9: 259-263.
Конъюгаты интерферон-полимер описаны, например, в патенте США № 4766106, патенте США № 4917888, европейской заявке на выдачу патента № 0236987, европейской заявке на выдачу патента № 0510356 и в публикации международной заявки на выдачу патента № \¥О 95/13090.
Хронический гепатит С является коварным и медленно прогрессирующим заболеванием, оказывающим значительное влияние на качество жизни. Несмотря на улучшение качества пула донорской крови и недавнее внедрение тестирования сданной крови на ВИЧ, доля острой инфекции среди лиц, получавших переливание, составляет, согласно оценкам, от 5 до 10%. См. А1!сг с! а1., в 2исксттап, сй., νίπι1 Нсраййк апй Ытсг Оксакс, А11сп К. Ькк, №\ν Уогк, 1988, рр. 537-542. Таким образом, примерно из 3 млн человек, которым ежегодно проводят переливание в Соединенных Штатах, примерно у 150000 разовьется гепатит С. Хотя у многих пациентов, которые заразились гепатитом С, будет иметь место субклиническое или умеренное заболевание, примерно у 50% будет наблюдаться прогрессирование до хронического состояния болезни, характеризуемого флуктуирующими нарушениями сывороточной трансаминазы и воспалительными повреждениями в ткани печени. По оценкам, цирроз будет развиваться у части представителей данной группы, составляющей примерно до 20%. См. Котс!/ с! а1., 1985, СаЛгосШсгсИоду 88: 1251-1254.
Известно, что интерфероны влияют на множество клеточных функций, включая репликацию ДНК и синтез РНК и белка как в нормальных, так и аномальных клетках. Таким образом, цитотоксические действия интерферона не ограничены опухолевыми или инфицированными вирусом клетками, но также проявляются и в нормальных, здоровых клетках. В результате в ходе терапии интерферонами могут возникать нежелательные побочные эффекты, особенно в том случае, когда требуются высокие дозы. Введение интерферона может привести к миелосупрессии, тем самым, приводя к сниженному числу красных кровяных клеток и пониженным уровням белых кровяных клеток и тромбоцитов. Интерфероны обычно вызывают подобные гриппу симптомы (например, жар, усталость, головные боли и озноб), желудочнокишечные расстройства (например, анорексию, тошноту и диарею), головокружение и кашель. Часто долговременный ответ ВИЧ-пациентов на лечение непегилированным интерфероном является низким, и лечение может индуцировать тяжелые побочные эффекты, включая, но не ограничивая указанным, ретинопатию, тиреоидит, острый панкреатит и депрессию.
Нежелательные побочные эффекты, которые сопровождают лечение интерфероном, часто ограничивают терапевтическую пригодность схем лечения интерфероном. Таким образом, существует необхо
- 2 011829 димость в сохранении или повышении терапевтической пользы такого лечения при снижении или исключении нежелательных побочных эффектов.
Сущность изобретения
Изобретение относится к новым соединениям полиалкиленгликоля, конъюгатам указанных соединений и их применениям.
В одном аспекте изобретение относится к активированному полимеру полиалкиленгликоля, имеющему структуру согласно формуле I
Формула I где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 80, 8О2, ΟΟΝΚ', 8Ο2ΝΚ' или ΝΚ';
β означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил (включая конденсированные бициклические и связанные мостиками бициклические кольцевые структуры), замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С2о насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, сульфамоила, сульфоната, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
каждый К', Ζ и Ζ' независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С^С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтио группы;
К означает остаток, подходящий для образования связи между соединением формулы I и биологически активным соединением или его предшественником; т равно 0 или 1;
каждый η независимо равен 0 или является целым числом от 1 до 5 и р равно 1, 2 или 3.
Предпочтительно К выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбо ната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-№сукцини мидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Предпочтительно Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II Е- (0-СН2СН2)а-,
Формула II где Е означает водород или С1 -С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью и а является целым числом от 4 до 10000.
В другом варианте Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II Е- (О-СНгСН2) а-,
Формула II где Е является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы I и биологически активным соединением или его предшественником; и а является целым числом от 4 до 10000.
Предпочтительно Е является метилом.
В другом варианте предпочтительно Е выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидро
- 3 011829 ксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Еще в одном варианте Е имеет структуру согласно формуле III
К---НС—(СН^---00т--Ф--х— СУ/2С\¥2-Ζ »
Формула III где каждый О, X, Υ, Ζ, т и η независимо имеют значения, которые определены;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
К является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником.
В другом варианте Е имеет структуру согласно формуле IV
К'—нс—(СН^--X---Ζ ,
Формула IV где каждый X, Ζ и η независимо имеют значения, которые определены;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
К' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
Предпочтительно К'' выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Предпочтительно К''' выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимиди ла, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
В одном из вариантов настоящего изобретения Е является регистрируемой меткой.
Предпочтительно Е выбран из группы, состоящей из радиоактивных изотопов, флуоресцентных остатков, фосфоресцентных остатков, хемилюминесцентных остатков и квантовых меток.
В одном из вариантов изобретения 0 является замещенным или незамещенным алкарилом.
В другом аспекте изобетения относится к активированному полимеру полиалкиленгликоля, имеющему структуру согласно формуле Ει
Р—х—р---(¾--(СНЭг-ЧМ—к
Ζ ,
Формула 1а где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 80, 8О2, СОЫК', 8Ο2ΝΚ' или ΝΚ';
О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил (включая конденсированные бициклические и связанные мостиками бициклические кольцевые структуры), замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С^С20 насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, сульфамоила, сульфоната, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
каждый К' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный
- 4 011829 циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С2о насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
В означает остаток, подходящий для образования связи между соединением формулы I и биологически активным соединением или его предшественником;
т равно 0 или 1 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
Предпочтительно В выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Предпочтительно Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II
Е- (О-СН2СН2)а-,
Формула II где Е означает водород или С1 -С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью и а является целым числом от 4 до 10000.
В другом варианте предпочтительно Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II
Е- (О-СНгСИ2) а-,
Формула II где Е является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы I и биологически активным соединением или его предшественником; и а является целым числом от 4 до 10000.
Предпочтительно Е является метилом.
В одном из вариантов предпочтительно Е выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
В другом из вариантов предпочтительно Е имеет структуру согласно формуле III
К---НС—(СН2^---(У)т--Ф—х—с^гс^г-2
Формула III где каждый О. X, Υ, Ζ, т и η независимо имеют значения, которые определены;
каждый независимо означает водород или С1 -С7алкил и
В'' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением, или его предшественником.
Еще в одном из вариантов Е имеет структуру согласно формуле IV
К---нс—(СН2)^—X---Ζ ,
Формула IV где каждый X, Ζ и η независимо имеют значения, которые определены;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
В''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
Предпочтительно В'' выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сук
- 5 011829 цинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Предпочтительно К''' выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Предпочтительно Е является регистрируемой меткой.
При этом предпочтительно Е выбирают из группы, состоящей из радиоактивных изотопов, флуоресцентных остатков, фосфоресцентных остатков, хемилюминесцентных остатков и квантовых меток.
Предпочтительно О является замещенным или незамещенным алкарилом.
В другом аспекте изобретение относится к активированному полимеру полиалкиленгликоля, имеющий структуру согласно формуле V
где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 80, 8О2, СОЫК', 8О2ЫК' или ΝΚ';
Т1 и Т2 независимо отсутствуют или являются насыщенной или ненасыщенной С1-С2оалкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
каждый К' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
К является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы V и биологически активным соединением или его предшественником;
каждый Ь независимо является насыщенной или ненасыщенной С1 -С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1 -С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
т равно 0 или 1;
й равно 0 или является целым числом от 1 до 4 и
- 6 011829 η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
Предпочтительно К выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Предпочтительно Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II
Е- (О-СН2СН2) а~/
Формула II где Е означает водород или С1 -С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью и а является целым числом от 4 до 10000.
Предпочтительно Е является метилом.
В другом предпочтительном варианте Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II
Е- (О-СНгСНг) а-,
Формула II где Е является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы V и биологически активным соединением или его предшественником, и а является целым числом от 4 до 10000.
При этом Е предпочтительно выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Νсукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
В другом предпочтительном варианте Е имеет структуру согласно формуле III
й.·—НС—(СН^---00т--Ω—Х~С\У2С\У2-Ζ
Формула III где О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С20 насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
X, Υ, Ζ, т и η имеют значения, которые определены;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
К'' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником.
Еще в одном предпочтительном варианте Е имеет структуру согласно формуле IV к’--нс—(сн^—х—с¥/2сул>—
Ζ ,
Формула IV где X, Ζ и η имеют значения, которые определены;
каждый независимо означает водород или С1 -С7алкил и
К''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
Предпочтительно К'' выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцини
- 7 011829 мидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Предпочтительно Я' выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукциними дила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
В одном из вариантов Е является регистрируемой меткой.
При этом предпочтительно Е выбирают из группы, состоящей из радиоактивных изотопов, флуоресцентных остатков, фосфоресцентных остатков, хемилюминесцентных остатков и квантовых меток.
Предпочтительно X и Υ в случае присутствия являются кислородом.
В другом аспекте избретение относится к активированному полимеру полиалкиленгликоля, имеющему структуру согласно формуле VI
где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 80, 8О2, СОЫЯ', 8О2ЫЯ' или ЫЯ';
Т1 и Т2 независимо отсутствуют или являются насыщенной или ненасыщенной С1-С2оалкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью;
каждый Я' и Ζ независимо означают водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
каждый Ь независимо означает насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира или алкилтиогруппы;
т равно 0 или 1;
б равно 0 или является целым числом от 1 до 4 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
В одном из предпочтительных вариантов активированный полимер полиалкиленгликоля имеет
где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
Ζ означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1 -С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
В одном из предпочтительных вариантов активированный полимер полиалкиленгликоля имеет структуру согласно формуле VIII
Формула VIII где Р означает полимер полиалкиленгликоля и η является целым числом от 1 до 5.
- 8 011829
Предпочтительно Р является полиэтиленгликолем, имеющим структуру формулы II
Е- (О-СН2СН2) а-,
Формула II где Е означает водород, С1-С2оалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, регистрируемую метку или остаток, подходящий для образования связи между соединением формулы VIII и биологически активным соединением или его предшественником, и а является целым числом от 4 до 10000.
Предпочтительно заместители в цикле расположены в мета- или пара-положении.
Еще в одном из предпочтительных вариантов активированный полимер полиалкиленгликоля имеет структуру согласно формуле IX
где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
каждый η и и независимо равен 0 или является целым числом от 1 до 5 и
Ζ является водородом, насыщенной или ненасыщенной С1 -С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью.
Предпочтительно заместители в цикле расположены в мета- или пара-положении.
Предпочтительно Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II
Е- (О-СН2СН2)а-,
Формула II где Е означает водород, С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, регистрируемую метку или остаток, подходящий для образования связи между соединением формулы IX и биологически активным соединением или его предшественником, и а является целым числом от 4 до 10000.
В другом аспекте изобретение относится к композиции, содержащей активированный полимер полиалкиленгликоля формулы I и биологически активное соединение или его предшественник. При этом предпочтительно биологически активное соединение или его предшественник выбраны из группы, состоящей из пептида, аналога пептида, белка, фермента, малой молекулы, красителя, липида, нуклеозида, олигонуклеотида, аналога олигонуклеотида, сахара, олигосахарида, клетки, вируса, липосомы, микрочас тицы, поверхности и мицеллы.
В другом аспекте изобретение относится к полимерному конъюгату, имеющему структуру согласно формуле XIV
Формула XIV где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 80, 8О2, СОИК', 8Ο2ΝΚ.' или ΝΚ';
О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
каждый К', Ζ и Ζ' независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата,
- 9 011829 сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
Я* означает связывающий остаток;
В означает биологически активное соединение или его предшественник;
т равно 0 или 1;
каждый η независимо равен 0 или является целым числом от 1 до 5 и р равно 1, 2 или 3.
Предпочтительно Я* образован в результате взаимодействия остатка, выбранного из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля, с биологически активным соединением или его предшественником.
Предпочтительно Р является полиэтиленгликолем, имеющим структуру формулы II
Е- (О-СН2СН2)
Формула II где Е означает водород, С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью или регистрируемую метку и а является целым числом от 4 до 10000.
Предпочтительно Е является метилом.
В другом варианте предпочтительно Р является полиэтиленгликолем, имеющим структуру формулы II
Е- (О-СН2СН2)а-,
Формула II где Е является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы XIV и биологически активным соединением или его предшественником; и а является целым числом от 4 до 10000.
Предпочтительно Е образует связь с другим биологически активным соединением В. В другом варианте предпочтительно Е образует связь с биологически активным соединением, отличным от В. Еще в одном варианте Е образует дополнительную связь с биологически активным соединением В.
Предпочтительно Е выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
В одном из предпочтительных вриантов Е имеет структуру согласно формуле III
К---НС—(СН2Х;---00„--9--х— С\У2С1У2--Ζ
Формула III где каждый О. X, Υ, Ζ, т и η независимо имеют значения, которые определены;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
Я'' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником.
В другом предпочтительном варианте Е имеет структуру согласно формуле IV
К”---нс—(ΟΗ£ζ--х--СУ/2СЫ2--Ζ
Формула IV где каждый X, Ζ и η независимо имеют значения, которые определены;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
Я''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
Предпочтительно Я'' выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гид
- 10 011829 роксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Предпочтительно Я' выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Предпочтительно Е является регистрируемой меткой. При этом предпочтительно Е выбирают из группы, состоящей из радиоактивных изотопов, флуоресцентных остатков, фосфоресцентных остатков, хемилюминесцентных остатков и квантовых меток.
Предпочтительно О является замещенным или незамещенным алкарилом.
В другом аспекте изобретения предложен полимерный конъюгат, имеющий структуру согласно формуле Х1Уа
Р--X---о---(Υν~ (СН2)~СП—к*—в
Формула Х1Уа где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 80, 8О2, СОЫЯ', 8О2ЫЯ' или ЫЯ';
О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С2о насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
каждый Я' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
Я* означает связывающий остаток;
В означает биологически активное соединение или его предшественник;
т равно 0 или 1 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
Предпочтительно Я* образован в результате взаимодействия остатка, выбранного из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля, с биологически активным соединением или его предшественником.
В одном из предпочтительных вариантов Р является полиэтиленгликолем, имеющим структуру формулы II
Е- (О-СН2СН2) а-,
Формула II где Е означает водород, С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью или регистрируемую метку и а является целым числом от 4 до 10000.
Предпочтительно Е является метилом.
В другом предпочтительном варианте Р является полиэтиленгликолем, имеющим структуру формулы II
- 11 011829
Е- (О-СН2СН2) Β-,
Формула II где Е является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы XIV и биологически активным соединением или его предшественником, и а является целым числом от 4 до 10000.
Предпочтительно Е образует связь с другим биологически активным соединением В. Предпочтительно указанное биологически активное соединение отлично от В. В другом варианте предпочтительно Е образует дополнительную связь с биологически активным соединением В.
Предпочтительно Е выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
В одном из предпочтительных вариантов Е имеет структуру согласно формуле III
В---НС—(СН^---(¥)„--ф--х—С\¥2СХУ2-Ζ
Формула III где каждый О. X, Υ, Ζ, т и η независимо имеют значения, которые определены;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
В является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником.
В другом предпочтительном варианте Е имеет структуру согласно формуле IV
К---НС—(СН£й--X--εχν,(%ν2—
Ζ ,
Формула IV где каждый X, Ζ и η независимо имеют значения, которые определены;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
В''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
Предпочтительно В'' выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Предпочтительно В''' выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Предпочтительно Е является регистрируемой меткой. При этом предпочтительно Е выбирают из группы, состоящей из радиоактивных изотопов, флуоресцентных остатков, фосфоресцентных остатков, хемилюминесцентных остатков и квантовых меток.
Предпочтительно О является замещенным или незамещенным алкарилом.
В другом аспекте изобретения предложен полимерный конъюгат, имеющий структуру согласно формуле XV
где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 80, 8О2, СОЫВ', 8Ο2ΝΒ' или ΝΒ';
- 12 011829
Τι и Τ2 независимо отсутствуют или являются насыщенной или ненасыщенной С1-С2оалкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
каждый К' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
каждый Ь независимо означает насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
К* является связывающим остатком;
В является биологически активным соединением или его предшественником;
т равно 0 или 1;
б равно 0 или является целым числом от 1 до 4 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
Предпочтительно К* образован в результате взаимодействия остатка, выбранного из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля, с биологически активным соединением или его предшественником.
В одном из вариантов предпочтительно Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II Е- (О-СН2СН2)а-,
Формула II где Е означает водород, С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью или регистрируемую метку и а является целым числом от 4 до 10000.
При этом Е предпочтительно является метилом.
В другом предпочтительном варианте Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II
Е- (О-СН2СН2) а-,
Формула II где Е является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы XV и биологически активным соединением или его предшественником; и а является целым числом от 4 до 10000.
Предпочтительно Е выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцини
- 13 011829 мидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
В одном из предпочтительных вариантов Е имеет структуру согласно формуле III я—нс—(сн2^—(Υ)„—ф—х—су/2суг2— ζ
Формула III где О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
каждый X, Υ, Ζ, т и η независимо имеют значения, которые определены;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
В является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником.
В другом предпочтительном варианте Е имеет структуру согласно формуле IV ки---нс—(СН^--X--С\У2С1¥2--Ζ ,
Формула IV где X, Ζ и η имеют значения, которые определены;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
В''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
Предпочтительно В'' выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Предпочтительно В''' может быть выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Νсукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Предпочтительно Е является регистрируемой меткой. При этом предпочтительно Е выбирают из группы, состоящей из радиоактивных изотопов, флуоресцентных остатков, фосфоресцентных остатков, хемилюминесцентных остатков и квантовых меток.
Еще в одном аспекте изобретения предложен полимерный конъюгат, имеющий структуру согласно формуле XVI
где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 80, 8О2, СОЫВ', 8О2ЫВ' или ΝΒ';
Т1 и Т2 независимо отсутствуют или означают насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
каждый В' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
каждый Ь независимо означает насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С7,-С8 насыщенный или ненасыщенный цикличе
- 14 011829 ский алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С2о насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
К* является связывающим остатком;
В является биологически активной молекулой;
т равно 0 или 1;
равно 0 или является целым числом от 1 до 4 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
Предпочтительно К* является метиленовой группой и В является биологически активной молекулой, имеющей аминогруппу, при этом метиленовая группа образует связь с аминогруппой на В.
Предпочтительно амин выбирают из группы, состоящей из аминоконца пептида, амина боковой це пи аминокислоты в пептиде или амина гликозилирующего заместителя гликозилированного пептида. Предпочтительно амин является аминоконцом пептида. Предпочтительно пептид является интерфероном, где интерферон предпочтительно является интерфероном-бета, который, в свою очередь, предпочтительно является интерфероном-бета-1а.
В одном из предпочтительных вариантов полимерный конъюгат имеет структуру согласно формуле XVII
где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
Ζ является водородом, насыщенной или ненасыщенной С1 -С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью;
К* является связывающим остатком;
В является биологически активной молекулой и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
Предпочтиельно К* является метиленом и В является биологически активной молекулой, связанной посредством амина. Предпочтительно амин является аминоконцом пептида, где пептид предпочтительно является интерфероном, в частности предпочтительно интерфероном-бета, в частности предпочтительно интерфероном-бета-1а.
В другом предпочтительном варианте полимерный конъюгат имеет структуру согласно формуле XVIII
Формула XVIII где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
К* является связывающим остатком;
В является биологически активной молекулой и η равно 1 или 2.
Предпочтительно К* является метиленом и В является биологически активной молекулой, связанной посредством амина, где амин предпочтительно является аминоконцом пептида. Предпочтительно пептид является интерфероном, где интерферон-бета предпочтительно является интерфероном-бета-1а.
Предпочтительно Р является полиэтиленгликолем, имеющим структуру формулы II
Е- (О-СН2СНг) а-,
Формула II где Е означает водород, С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, регистрируемую метку или остаток, подходящий для образования связи между соединением формулы XVI и биологически активным соединением или его предшественником; и а является целым числом от 4 до 10000.
Предпочтительно Е является метилом.
Еще в одном предпочтительном варианте предложен полимерный конъюгат по п.94, имеющий структуру согласно формуле XIX
- 15 011829
Формула XIX где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
каждый η и и независимо равен 0 или является целым числом от 1 до 5;
Ζ означает водород насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
К* является связывающим остатком и
В является биологически активной молекулой.
Предпочтиттельно К* означает метилен и В означает биологически активную молекулу, связанную посредством амина, где амин предпочтительно является аминоконцом пептида. Предпочтительно пептид является интерфероном, предпочтительно интерфероном-бета, где интерферон-бета предпочтительно является интерфероном-бета-1а.
Предпочтительно Е выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-№сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
В одном из предпочтительных вариантов Е имеет структуру согласно формуле III
К.---НС—(СН^---0%--Р--X—СУ/2С\¥2-Ζ >
Формула III где β означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы; каждый X, Υ, Ζ, т и η независимо имеют значения, которые определены;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
К'' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником.
В одном из предпочтительных вариантов Е имеет структуру согласно формуле IV
Формула IV где X, Ζ и η имеют значения, которые определены; каждый независимо означает водород или С1 -С7алкил и К''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
Предпочтительно К'' выбирают из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбо ната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-№сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Предпочтительно К''' может быть выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидра
- 16 011829 зида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Νсукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Предпочтительно Е является регистрируемой меткой, которую предпочтительно выбирают из радиоактивных изотопов, флуоресцентных остатков, фосфоресцентных остатков, хемилюминесцентных остатков и квантовых меток.
Еще в одном аспекте предложенное изобретение относится к полимерному конъюгату согласно формуле XX
СХУ^’А'^О-СНгСНД,—х—т.
Ζ
Формула XX где каждый X и Υ независимо означает О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, ί.ΌΝΕ'. 8О2ЖК' или ΝΚ';
Т1 и Т2 независимо отсутствуют или означают насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
каждый К' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
каждый Ь независимо является насыщенной или ненасыщенной С1 -С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С20 насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира или алкилтиогруппы;
каждый независимо является водородом или С1 -С7алкилом;
К* и К** независимо являются связывающими остатками;
В и В' независимо являются биологически активными молекулами;
т равно 0 или 1;
б равно 0 или является целым числом от 1 до 4;
а является целым числом от 4 до 10000 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
Предпочтительно В и В' представляют собой одну и ту же биологически активную молекулу. В другом предпочтительном варианте В и В' являются разными биологически активными молекулами.
Еще в одном аспекте предложенное избретение относится к полимерному конъюгату согласно формуле XXI
Формула XXI где X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, №ΝΚ', 8О^К' или ΝΚ';
Т и Т2 независимо отсутствуют или означают насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
каждый К' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
- 17 011829 каждый Ь независимо является насыщенной или ненасыщенной С1 -С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С^С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
каждый независимо является водородом или С1 -С7алкилом;
Я* и Е** независимо являются связывающими остатками;
В и В' независимо являются биологически активными молекулами;
т равно 0 или 1;
б равно 0 или является целым числом от 1 до 4;
а является целым числом от 4 до 10000 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
Предпочтительно В и В' представляют собой одну и ту же биологически активную молекулу. В другом предпочтительном варианте В и В' являются разными биологически активными молекулами.
Еще в одном аспекте предложенного изобретения предлагается фамацевтическая композиция, содержащая активированный полимер полиалкиленгликоля формулы I и биологически активное соединение или его предшественник. Предпочтительно указанная композиция может содержать фармацевтически приемлемый носитель.
В другом аспекте предложенного изобретения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая полимерный конъюгат формулы XIV и фармацевтически приемлемый носитель.
В другом аспекте предложенного изобретения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая полимерный конъюгат формулы XV и фармацевтически приемлемый носитель.
В другом аспекте предложенного изобретения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая полимерный конъюгат формулы XVI и фармацевтически приемлемый носитель.
В другом аспекте предложенного изобретения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая полимерный конъюгат формулы XVII и фармацевтически приемлемый носитель.
В другом аспекте предложенного изобретения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая полимерный конъюгат формулы XX и фармацевтически приемлемый носитель.
В другом аспекте предложенного изобретения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая полимерный конъюгат формулы XXI и фармацевтически приемлемый носитель.
В другом аспекте предложенного изобретения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая продукт взаимодействия активированного полимера полиалкиленгликоля формулы I и биологически активного соединения или его предшественника.
Предпочтительно композиция содержит полимерный конъюгат, имеющий структуру согласно формуле XIV
Р--X---О---С%“ (СНг)—СН—К*—В
Ζ ,
Формула XIV где все переменные имеют значения, определенные выше; и где
Я* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия Я с химически активным остатком на биологически активном соединении или его предшественнике; и
В является биологически активным соединением или его предшественником.
Еще в одном аспекте изобретения предлагается композиция, содержащая продукт взаимодействия активированного полимера полиэтиленгликоля формулы V и биологически активного соединения или его предшественника.
Предпочтительно указанная композиция содержит продукт взаимодействия, имеющий структуру согласно формуле XV
где все переменные имеют значения, определенные выше; и где
Я* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия Я с химически активным остатком на биологически активном соединении или его предшественнике; и
- 18 011829
В является биологически активным соединением или его предшественником.
В другом предпочтительно варианте композиция содержит продукт взаимодействия, имеющий
где все переменные имеют значения, определенные выше; и где каждый независимо означает водород или С1-С7алкил;
К* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К с химически активным остатком на биологически активном соединении В или его предшественнике;
К** является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К'' с химически активным остатком на биологически активном соединении В' или его предшественнике; и
В и В' независимо являются биологически активным соединением или его предшественником.
Еще в одном предпочтительном варианте композиция содержит продукт взаимодействия, имеющий структуру согласно формуле XXI
Формула XXI где все переменные имеют значения, определенные выше; и где каждый независимо означает водород или С1-С7алкил;
К* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К с химически активным остатком на биологически активном соединении В или его предшественнике;
К** является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К''' с химически активным остатком на биологически активном соединении В' или его предшественнике; и
В и В' независимо являются биологически активным соединением или его предшественником.
Еще в одном аспекте настоящего изобретения предлагается композиция, содержащая продукт взаимодействия активированного полимера полиэтиленгликоля формулы VI и биологически активного соединения или его предшественника.
Предпочтительно композиция содержит продукт взаимодействия, имеющий структуру согласно формуле XVI
где все переменные имеют значения, определенные выше; и где
К* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К с химически активным остатком на биологически активном соединении или его предшественнике; и
В является биологически активным соединением или его предшественником.
Еще в одном аспекте настоящего изобретения предлагается композиция, содержащая продукт взаимодействия активированного полимера полиэтиленгликоля формулы VII и биологически активного со единения или его предшественника.
Предпочтительно композиция содержит продукт взаимодействия, имеющий структуру согласно формуле XVII
- 19 011829 где все переменные имеют значения, определенные выше; и где
К* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К с химически активным остатком на биологически активном соединении или его предшественнике; и
В является биологически активным соединением или его предшественником.
Еще в одном аспекте настоящего изобретения предлагается композиция, содержащая продукт взаимодействия активированного полимера полиэтиленгликоля формулы VIII и биологически активного соединения или его предшественника.
Предпочтительно композиция содержит продукт взаимодействия, имеющий структуру согласно формуле XVIII
Формула XVIII где все переменные имеют значения, определенные выше; и где
К* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К с химически активным остатком на биологически активном соединении или его предшественнике; и
В является биологически активным соединением или его предшественником.
Еще в одном аспекте настоящего изобретения предлагается композиция, содержащая продукт взаимодействия активированного полимера полиэтиленгликоля формулы IX и биологически активного соединения или его предшественника.
Предпочтительно композиция содержит продукт взаимодействия, имеющий структуру согласно формуле XIX
где все переменные имеют значения, определенные выше; и где
К* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К с химически активным остатком на биологически активном соединении или его предшественнике; и
В является биологически активным соединением или его предшественником.
В другом аспекте изобретения предлагается способ лечения пациента с поддающейся лечению вирусной инфекцией, включающий введение пациенту эффективного количества композиции, имеющей структуру согласно формуле XIV
Формула XIV где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОИК', 8О2ИК' или ΝΚ';
О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил (включая конденсированные бициклические и связанные мостиками бициклические кольцевые структуры), замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С20 насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
каждый К', Ζ и Ζ' независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокар
- 20 011829 бонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
К* означает связывающий остаток;
В является биологически активным соединением или его предшественником;
т равно 0 или 1;
каждый η равен 0 или является целым числом от 1 до 5 и р равно 1, 2 или 3.
Предпочтительно В является биологически активным пептидом, в частности интерфероном, предпочтительно интерфероном-бета-1а.
Предпочтительно композиция дополнительно содержит биологически активное средство, выбранное из группы, состоящей из противовирусной малой молекулы, противовирусной нуклеиновой кислоты и пептидного противовирусного средства.
Предпочтительно противовирусное средство выбрано из группы, состоящей из рибавирина, левовирина, 3ТС, ЕТС, МВ686, зидовудина, ацикловира, ганцикловира, вирамида, νΧ-497, νΧ-950 и [8[8-14803.
Предпочтительно вирусной инфекцией является хронический гепатит С.
В другом аспекте изобетения предлагается способ лечения пациента с поддающейся лечению вирусной инфекцией, включающий введение пациенту эффективного количества композиции, имеющей структуру согласно формуле ХТа
Р--X--О---(СНД—сн—К*—в
Ζ ,
Формула Х1Уа где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЫК', 8О2ЫК' или ЫК';
означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил (включая конденсированные бициклические и связанные мостиками бициклические кольцевые структуры), замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С20 насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
каждый К' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
К* означает связывающий остаток;
В является биологически активным соединением или его предшественником;
т равно 0 или 1;
η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
Предпочтительно В является биологически активным пептидом, предпочтительно интерфероном, предпочтительно интерфероном-бета-1а.
Предпочтительно композиция дополнительно содержит биологически активное средство, выбранное из группы, состоящей из противовирусной малой молекулы, противовирусной нуклеиновой кислоты и пептидного противовирусного средства.
Предпочтительно противовирусное средство выбрано из группы, состоящей из рибавирина, левовирина, 3ТС, ЕТС, МВ686, зидовудина, ацикловира, ганцикловира, вирамида, 7X497, 7X^50 и ^8-14803. Предпочтительно вирусной инфекцией является хронический гепатит С.
В другом аспекте изобретения предлагается способ лечения пациента с поддающейся лечению вирусной инфекцией, включающий введение пациенту эффективного количества композиции, имеющей структуру согласно формуле XV
- 21 011829
где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 80, 8О2, СОЫВ' , 8Ο2ΝΒ' или ΝΒ';
Т1 и Т2 независимо отсутствуют или являются насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
каждый В' и Ζ независимо означают водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С1-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
каждый Ь независимо означает насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
В* является связывающим остатком;
В является биологически активным соединением или его предшественником;
т равно 0 или 1;
равно 0 или является целым числом от 1 до 4 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
Предпочтительно В является биологически активным пептидом, предпочтительно интерфероном, предпочтительно интерфероном-бета-1 а.
Предпочтительно композиция дополнительно содержит биологически активное средство, выбранное из группы, состоящей из противовирусной малой молекулы, противовирусной нуклеиновой кислоты и пептидного противовирусного средства.
Предпочтительно противовирусное средство выбрано из группы, состоящей из рибавирина, левовирина, 3ТС, ЕТС, МВ686, зидовудина, ацикловира, ганцикловира, вирамида, УХ-497, УХ-950 и ^8-14803. Предпочтительно вирусной инфекцией является хронический гепатит С.
Еще в одном аспекте предложенное изобретение относится к способу лечения пациента с поддающейся лечению вирусной инфекцией, включающий введение пациенту эффективного количества композиции, имеющей структуру согласно формуле XVI
- 22 011829 где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЫК', 8О2ЫК' или ЫК';
Т1 и Т2 независимо отсутствуют или означают насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
каждый К' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
каждый Ь независимо означает насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
К* является связывающим остатком;
В является биологически активной молекулой;
т равно 0 или 1;
й равно 0 или является целым числом от 1 до 4 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
Предпочтительно В является биологически активным пептидом, предпочтительно интерфероном, предпочтительно интерфероном-бета-1а.
Предпочтительно композиция дополнительно содержит биологически активное средство, выбранное из группы, состоящей из противовирусной малой молекулы, противовирусной нуклеиновой кислоты и пептидного противовирусного средства.
Предпочтительно противовирусное средство выбрано из группы, состоящей из рибавирина, левовирина, 3ТС, ЕТС, МВ686, зидовудина, ацикловира, ганцикловира, вирамида, УК-497, УК-950 и ^8-14803. Предпочтительно вирусной инфекцией является хронический гепатит С.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения пациента с поддающейся лечению вирусной инфекцией, включающий введение пациенту эффективного количества композиции, имеющей структуру согласно формуле XX
Формула XX где каждый X и Υ независимо означает О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЫК', 8О2ЫК' или ЫК';
Т1 и Т2 независимо отсутствуют или означают насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
каждый К' и Ζ независимо означают водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил;
каждый Ь независимо является насыщенной или ненасыщенной С1 -С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С20 насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата,
- 23 011829 алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
К* и К** независимо являются связывающими остатками;
В и В' независимо являются биологически активными молекулами;
т равно 0 или 1;
й равно 0 или является целым числом от 1 до 4;
а является целым числом от 4 до 10000 и п равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
Предпочтительно В является биологически активным пептидом, предпочтительно интерфероном, предпочтительно интерфероном-бета-1а.
Предпочтительно композиция дополнительно содержит биологически активное средство, выбранное из группы, состоящей из противовирусной малой молекулы, противовирусной нуклеиновой кислоты и пептидного противовирусного средства.
Предпочтительно противовирусное средство выбрано из группы, состоящей из рибавирина, левовирина, 3ТС, ЕТС, МВ686, зидовудина, ацикловира, ганцикловира, вирамида, νΧ-497, νΧ-950 и Ι8Ι8-14803. Предпочтительно вирусной инфекцией является хронический гепатит С.
В другом аспекте предложенное изобретение относится к способу лечения пациента с поддающейся лечению вирусной инфекцией, включающий введение пациенту эффективного количества композиции, имеющей структуру согласно формуле XXI
Формула XXI где каждый X и Υ независимо означает О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, ΤΌΝΕ', 8Ο2ΝΚ' или ΝΚ';
Τ1 и Т2 независимо отсутствуют или означают насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
каждый К' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил;
каждый Ь независимо является насыщенной или ненасыщенной С1 -С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
К* и К** независимо являются связывающими остатками;
В и В' независимо являются биологически активными молекулами;
т равно 0 или 1;
й равно 0 или является целым числом от 1 до 4;
а является целым числом от 4 до 10000 и каждый п равен 0 или является целым числом от 1 до 5.
Предпочтительно В является биологически активным пептидом, предпочтительно интерфероном, предпочтительно интерфероном-бета-1а.
Предпочтительно композиция дополнительно содержит биологически активное средство, выбранное из группы, состоящей из противовирусной малой молекулы, противовирусной нуклеиновой кислоты и пептидного противовирусного средства.
Предпочтительно противовирусное средство выбрано из группы, состоящей из рибавирина, левовирина, 3ТС, ЕТС, МВ686, зидовудина, ацикловира, ганцикловира, вирамида, νΧ-497, νΧ-950 и Ι8Ι8-14803. Предпочтительно вирусной инфекцией является хронический гепатит С.
Если не оговорено особо, все технические и научные термины, используемые в данном описании, имеют такое же значение, которое обычно подразумевается специалистом в данной области, к которой относится изобретение. Хотя на практике или при проверке данного изобретения можно использовать
- 24 011829 способы и вещества, сходные или эквивалентные способам и веществам, описанным в данной заявке, подходящие способы и вещества описаны далее. Все публикации, заявки на выдачу патентов, патенты и другие ссылки, упоминаемые в данном описании, включены в виде ссылки в полном объеме. В случае конфликта данное описание, включая определения, будет проверено. Кроме того, вещества, способы и примеры являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения.
Другие признаки и преимущества изобретения будут понятны из следующего подробного описания и из формулы изобретения.
Краткое описание чертежей
Данное изобретение будет более понятным из следующего описания со ссылками на фигуры, на которых на фиг. 1 представлен восстанавливающий δΌδ-ПААГ-гель, показывающий чистоту немодифицированного ШЫ-рЧа и модифицированного 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом [ΡΝ-β-Ιη. Дорожка А: маркеры молекулярной массы (сверху вниз; 100, 68, 45, 27 и 18 кДа, соответственно). Дорожка В: 4 мкг немодифицированного ШЫ-рЧа. Дорожка С: 4 мкг модифицированного 20 кДа тРЕС-О-2метилпропиональдегидом ШЫ-рЧа;
на фиг. 2 изображены кривые эксклюзионной хроматографии по размеру немодифицированного ШЫ-рЧа и модифицированного 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом ШЫ-рЧа. Панель А: стандарты молекулярной массы. Панель В: модифицированный 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом ШЫ-рЧа. Панель С: немодифицированный ШЫ-рЧа;
на фиг. 3 изображена кривая эксклюзионной хроматографии по размеру модифицированного 20 кДа тРЕС-О-мета-метилфенил-О-2-метилпропиональдегидом ШЫ-рЧа;
на фиг. 4 представлен восстанавливающий δΌδ-ПААГ-гель, показывающий чистоту немодифицированного ШЫ-рЧа и модифицированного 20 кДа тРЕС-О-парафенилацетальдегидом ШЫ-рЧа. Дорожка А: 2,5 мкг модифицированного 20 кДа тРЕС-О-парафенилацетальдегидом ГРЫ-рЧа. Дорожка В: 2,5 мкг немодифицированного ШЫ-рЧа. Дорожка С: маркеры молекулярной массы (сверху вниз; 100, 68, 45, 27 и 18 кДа, соответственно);
на фиг. 5 изображены кривые эксклюзионной хроматографии по размеру модифицированного 20 кДа тРЕС-О-парафенилацетальдегидом ШЫ-рЧа. Панель А: стандарты молекулярной массы. Панель В: модифицированный 20 кДа тРЕС-О-парафенилацетальдегидом ШЫ-рЧа;
на фиг. 6 представлен восстанавливающий δΌδ-ПААГ-гель, показывающий стабильность модифицированного 20 кДа тРЕС-О-парафенилацетальдегидом ШЫ-рЧа. Дорожка А: маркеры молекулярной массы (сверху вниз; 100, 68, 45, 27, 18 и 15 кДа, соответственно. Дорожки В, С, Ό и Е: 2 мкг модифицированного 20 кДа тРЕС-О-парафенилацетальдегидом ШЫ-рЧа, взятого для анализа в 0, 2, 5 и 7 день, соответственно;
на фиг. 7А-В показана противовирусная активность различных пегилированных образцов ШЫ-рЧа человека в виде функции концентрации белка. Фиг. 7А: немодифицированный ШЫ-рЧа (о), модифицированный 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом ШЫ-рЧа (□), модифицированные 20 кДа тРЕСО-параметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом ШЫ-рЧа (Δ) и модифицированный 20 кДа тРЕС-Ометаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом ШЫ-рЧа (◊). Фиг. 7В: немодифицированный ШЫ-рЧа (о), модифицированный 20 кДа тРЕС-О-2-парафенилацетальдегидом ШЫ-рЧа (□), модифицированные 20 кДа тРЕС-О-парафенилпропиональдегидом ШЫ-рЧа (Δ) и модифицированный 20 кДа тРЕС-О-метафенилацетальдегидом ШЫ-рЧа (◊).
Фиг. 8А-В представляют собой графики, на которых изображена фармакокинетика немодифицированного и различных пегилированных образцов ШЫ-рЧа человека. Фиг. 8А: немодифицированный ШЫр-1а (верхняя панель) и ШЫ-рЧа, модифицированный 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом (нижняя панель). Фиг. 8В: ШЫ-рЧа, модифицированный 20 кДа тРЕС-О-параметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом (верхняя панель) и 20 кДа тРЕС-О-парафенилацетальдегидом (нижняя панель).
Фиг. 9А-В представляют собой графики, на которых изображена фармакокинетика немодифицированного и различных пегилированных образцов ШЫ-рЧа человека. Фиг. 9А: немодифицированный ШЫр-1а (верхняя панель) и ШЫ-рЧа, модифицированный 20 кДа тРЕС-О-парафенилпропиональдегидом (нижняя панель). Фиг. 9В: ШЫ-рЧа, модифицированный 20 кДа тРЕС-О-метафенилацетальдегидом (верхняя панель) и 20 кДа тРЕС-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом (нижняя панель).
Фиг. 10 представляет собой гистограмму, на которой сравнивается однократное введение модифицированного 20 кДа РЕС-О-2-метилпропиональдегидом ШЫ-рЧа с ежедневным введением немодифицированного ШЫ-рЧа по восстановлению количества радиально ориентированных новых сосудов у мышей пи/пи, несущих клетки злокачественной меланомы человека §К-МЕЬ-1: однократное лечение контрольным наполнителем только в 1 день (столбик А); лечение 1 Ми (5 мкг) немодифицированного ШЫ-рЧа ежедневно в 1-9 дни включительно (столбик В); лечение 1 МИ (10 мкг) модифицированного 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом ШЫ-рЧа только 1 раз в 1 день (столбик С) и лечение контрольным наполнителем ежедневно в 1-9 дни включительно (столбик Ό).
- 25 011829
Подробное описание изобретения
Изобретение направлено на соединения и способы, применимые для лечения различных заболеваний и расстройств. Как объясняется более подробно ниже, такие заболевания и расстройства, в частности, включают заболевания и расстройства, которые поддаются терапевтическому лечению интерфероном, включая, но не ограничиваясь указанным, вирусные инфекции, такие как инфекции гепатита.
Описаны новые активированные соединения полиалкиленгликоля согласно формуле I
Р--X--О---(Υ)-—(сна—сн—К
Формула I где Р является водорастворимым полимером, таким как полимер полиалкиленгликоля.
Неограничивающий список таких полимеров включает другие гомополимеры полиалкиленоксидов, такие как полипропиленгликоли, полиоксиэтиленированные полиолы, их сополимеры и их блок-сополимеры. Другие примеры подходящих водорастворимых и непептидных полимерных основных цепей включают поли(оксиэтилированный полиол), поли(олефиновый спирт), поли(винилпирролидон), поли(гидроксипропилметакриламид), поли(а-оксикислоту), поли(виниловый спирт), полифосфазен, полиоксазолин, поли(Ы-акрилоилморфолин) и сополимеры, тройные сополимеры и их смеси. В одном варианте основной цепью полимера является поли(этиленгликоль) или монометоксиполиэтиленгликоль (тРЕС), имеющий среднюю молекулярную массу примерно от 200 до 400000 Да. Следует понимать, что другие родственные полимеры также подходят для применения в практике данного изобретения и подразумевается, что в этом отношении использование термина «РЕС» или «поли(этиленгликоль)» является включающим, а не исключающим указанное. Термин «РЕС» включает поли(этиленгликоль) в любых его формах, включая алкокси-РЕС, бифункциональный РЕС, мультиветвящийся РЕС, раздвоенный РЕС, разветвленный РЕС, РЕС с подвешенными группами или РЕС с деградируемыми связями в молекуле.
В классе соединений, представленных формулой I, имеется от 0 до 5 метиленовых групп между Υ и атомом углерода, содержащим Ζ (например, η равно 0 или является целым числом от 1 до 5) и т равно 0 или 1, например Υ присутствует или отсутствует.
X и Υ независимо являются О, 8, СО, СО2, СО8, 80, 8О2, СОЫК', 8О2ЫК' или ΝΚ'. В некоторых вариантах X и Υ являются кислородом.
О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил (включая конденсированные бициклические и связанные мостиками бициклические кольцевые структуры), замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С20 насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу. Заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, сульфамоил, сульфонат, силил, простой эфир или алкилтиогруппа.
Заместитель Ζ является водородом, насыщенной или ненасыщенной С1 -С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1 -С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой. Заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, силил, простой эфир или алкилтиогруппа.
В том случае, когда X или Υ является ΝΚ', К' может быть водородом, насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой. Заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, силил, простой эфир или алкилтиогруппа.
К является химически активной функциональной группой, т. е. активирующим остатком, способным взаимодействовать с образованием мостика или связи между соединением формулы I и биологически активным соединением или его предшественником. Таким образом, К представляет собой «активирующую
- 26 011829 группу» активированных соединений полиалкиленгликоля (РОС), представленных формулой I. Я может быть, например, карбоновой кислотой, сложным эфиром, альдегидом, гидратом альдегида, ацеталем, гидроксильной группой, защищенный гидроксильной группой, карбонатом, алкенилом, акрилатом, метакрилатом, акриламидом, замещенным или незамещенным тиолом, галогеном, замещенным или незамещенным амином, защищенным амином, гидразидом, защищенным гидразидом, сукцинимидилом, изоцианатом, изотиоцианатом, дитиопиридином, винилпиридином, йодацетамидом, эпоксидом, гидроксисукцинимидилом, азолом, малеимидом, сульфоном, аллилом, винилсульфоном, трезилом, сульфо-Ы-сукцинимидилом, дионом, мезилом, тозилом или глиоксалем. В конкретных вариантах Я является гидратом альдегида.
Конкретные примеры Я в литературе включают Ν-сукцинимидилкарбонат (см., например, патенты США № 5281698, 5468478), амин (см., например, Висктапп е! а1., Макгото1. СЬет. 182: 1379 (1981), ΖαρΙίρκΚν е! а1., Еиг. Ро1ут. 1. 19: 1177 (1983)), гидразид (см., например, Апбгекх е! а1. Макгото1. СЬет. 179: 301 (1978)), сукцинимидилпропионат и сукцинимидилбутаноат (см., например, О1коп е! а1. в Ро1у(е!йу1епе д1усо1) СйешГйу апб Вю1одюа1 Аррйсабопк, ρρ. 170-181, Натк апб Ζаρйρкку Ебк., АС8, ^акЫпдЮп, ОС, 1997; см. также патент США № 5672662), сукцинимидилсукцинат (см., например, АЬис1ю\\ък| е! а1., Сапсег Вюсйет. В^йук. 7: 175 (1984) и .^ρ^Ι е! а1., Масго1о1. СЬет. 180: 1381 (1979)), сложный сукцинимидиловый эфир (см., например, патент США № 4670417), карбонат бензотриазола (см., например, патент США № 5650234), глицидиловый эфир (см., например, Рййа е! а1., Еиг. 1. Вюсйет. 94: 11 (1979), Е1йпд е! а1., Вю!есй. Αρρ1. Вюсйет. 13: 354 (1991)), оксикарбонилимидазол (см., например, ВеаисЬатρ е! а1., Апа1. Вюсйет. 131: 25 (1983), ТопбеШ е! а1., 1. Сопйойеб Яе1еаке 1: 251 (1985)), паранитрофенилкарбонат (см., например, Vе^оηеке е! а1., Αρρ1. Вюсйет. Вю!есй., 11: 141 (1985); и 8айоге е! а1., Αρρ1. Вюсйет. Вю!есй., 27: 45 10 (1991)), альдегид (см., например, Натк е! а1., 1. Ро1ут. 8ск Сйет. Еб. 22: 341 (1984), патент США № 5824784, патент США 5252714), малеимид (см., например, Оообкоп е! а1., Вю/Тесйпо1оду 8: 343 (1990), Яоташ е! а1. в СйетГйу ок Реρйбек апб Рго!етк 2: 29 (1984); и Кодап, 8уп(йейс Сотт. 22: 2417 (1992)), ортопиридилдисульфид (см., например, ХУодЫгеп е! а1., Вюсоп). Сйет. 4: 314 (1993)), акрилол (см., например, 8а^йпеу 15 е! а1., Масгото1еси1ек, 26: 581 (1993)), винилсульфон (см., например, патент США № 5900461). Кроме того, две молекулы полимера согласно данному изобретению также могут быть связаны с аминокислотой лизином с образованием дизамещенного лизина, который затем можно дополнительно активировать Ы-гидроксисукцинимидом с образованием активного остатка Ы-сукцинимидила (см., например, патент США № 5932462).
Термины «функциональная группа», «активный остаток», «активная группа», «активирующая группа», «активирующий остаток», «реакционноспособный участок», «химически активная группа» и «химически реакционноспособный остаток» используют в данной области и в данном описании для указания отдельных, определяемых частей и элементов молекулы. Термины до некоторой степени являются синонимами в области химии и используются в данном описании для того, чтобы указать части молекул, обладающие характерной химической активностью и которые обычно химически активны по отношению к другим молекулам. Подразумевается, что термин «активный» при использовании в связи с функциональными группами включает те функциональные группы, которые легко взаимодействуют с электрофильными или нуклеофильными группами других молекул, в отличие от тех групп, которые требуют сильных катализаторов или в значительно степени трудно осуществимых условий реакций для взаимодействия. Например, как может быть понятно в данной области, термин «активный сложный эфир» может включать такие сложный эфиры, которые легко взаимодействуют с нуклеофильными группами, такими как амины. Как правило, активный сложный эфир будет взаимодействовать с амином в водной среде в течение минут, тогда как некоторые сложные эфиры, такие как сложные метиловый или этиловый эфиры, требуют сильного катализатора для того, чтобы взаимодействовать с нуклеофильной группой.
В соединениях согласно изобретению, которые определены выше, функциональная группа Я становится связывающим остатком, Я*, после того, как она прореагировала с биологически активной молекулой с образованием связывания или связи между активированным соединением полиалкиленгликоля (РОС) и биологически активным соединением. Таким образом, В является биологически активным соединением после конъюгации с РОС, а Я* является остатком, образованным в результате взаимодействия Я на активированном РОС с одной или несколькими химически активными функциональными группами на биологически активном соединении В, так что в результате возникает одна ковалентная связь между РОС и биологически активным соединением. В предпочтительном варианте Я* является остатком, образованным в результате взаимодействия Я на активированном РОС с одной химически активной функциональной группой на биологически активном соединении, так что в результате происходит ковалентное связывание между активированным соединением полиалкиленгликоля (РОС) и биологически активным соединением.
Присутствие РОС предпочтительно не оказывает неблагоприятного воздействия на биологически активное соединение или его предшественник (В). Кроме того, В либо естественно имеет функциональную группу, которая способна взаимодействовать и образовать связь с активированным РОС, либо модифицировано так, чтобы оно содержало такую реакционноспособную группу.
В используемом в данном описании смысле предшественник В является неактивной или менее активной формой В, которая превращается в активную или более активную форму, соответственно, при
- 27 011829 контактировании с физиологическими условиями, например при введении субъекту. Такие изменения могут быть конформационными или структурными изменениями, включая, но не ограничивая указанным, превращение защищенной формы в незащищенную форму В. В используемом в данном описании смысле такое изменение не включает высвобождение конъюгированных РОС согласно данному изобретению.
Как подразумевается в данной области, термин «защищенный» относится к присутствию защитной группы или остатка, который препятствует взаимодействию химически активной функциональной группы при определенных условиях реакции. Защитная группа будет варьировать в зависимости от типа защищаемой химически активной группы. Например, если химически активной группой является амин или гидразид, защитная группа может быть выбрана из группы трет-бутилоксикарбонила (ΐ-Вос) и 9-флуоренилметоксикарбонила (Бтос). Если химически активной группой является тиол, защитной группой может быть ортопиридилдисульфид. Если химически активной группой является карбоновая кислота, такая как бутановая или пропионовая кислота, или гидроксильная группа, защитной группой может быть бензил или алкильная группа, такая как метил или этил. Другие защитные группы, известные в данной области, также могут быть использованы в изобретении.
Термины «связывающий остаток», «связывание» или «линкер» в данном описании используются по отношению к остаткам или связям, которые образуются в результате химической реакции и, как правило, являются ковалентными связями. Таким образом, связывание, представленное связью К*-В в указанных выше формулах, возникает в результате реакции между активированным остатком К в РОС с биологически активным соединением, т.е. В'. К* является связывающим остатком, образованным из К при взаимодействии с В', и В является биологически активным соединением, конъюгированным с РОС в результате взаимодействия функциональной группы в В' с К.
В используемом в данном описании смысле термин «биологически активное соединение» относится к таким соединениям, которые демонстрируют один или несколько биологических ответов или действий при введении субъекту и содержат химически активные остатки, которые способны взаимодействовать и конъюгировать по меньшей мере с одним активированным РОС согласно изобретению. Термин «биологически активная молекула», «биологически активный остаток» или «биологически активное средство» при использовании в данном описании означает любое вещество, которое может влиять на любые физические или биохимические свойства любого субъекта, включая, но не ограничивая указанным, вирусы, бактерии, грибы, растения, животных и человека. В частности, в используемом в данном описании смысле биологически активные молекулы включают любое вещество, предназначенное для диагностики, облегчения, лечения или профилактики заболевания человека или других животных или для улучшения иным образом физического или психического здоровья людей и животных.
Примеры биологически активных молекул включают, но не ограничены указанным, пептиды, аналоги пептидов, белки, ферменты, малые молекулы, красители, липиды, нуклеозиды, олигонуклеотиды, аналоги олигонуклеотидов, сахара, олигосахариды, клетки, вирусы, липосомы, микрочастицы, поверхности и мицеллы.
Классы биологически активных средств, которые подходят для применения в случае данного изобретения, включают, но не ограничены указанным, хемокины, лимфокины, антитела, растворимые рецепторы, противоопухолевые средства, седативные средства, гормоны, факторы роста, антибиотики, фунгициды, фунгистатические средства, противовирусные средства, стероидные средства, противомикробные средства, гермицидные средства, антипиретики, антидиабетические средства, бронходилататоры, антидиарейные средства, средства расширения коронарных сосудов, гликозиды, спазмолитики, противогипертонические средства, антидепрессанты, успокоительные средства, другие психотерапевтические средства, кортикостероиды, анальгетики, контрацептивы, нестероидные противовоспалительные лекарственные средства, средства, понижающие уровень глюкозы в крови, средства, понижающие уровень холестерина, противосудорожные средства, другие противоэпилептические средства, иммуномодуляторы, антихолинергические средства, симпатолитики, симпатомиметики, сосудорасширяющие средства, антикоагулянты, противоаритмические средства, простагландины, имеющие различные фармакологические активности, диуретики, вспомогательные средства для сна, антигистаминные средства, противоопухолевые средства, онколитические средства, антиандрогены, противомалярийные средства, противолепрозные средства и различные другие типы лекарственных средств. См. Оообтап апб ОПтап'8 ТНе Важ οί ТНегарен11С5 (Νίπΐΐι ЕбШоп, Регдатоп Рге§8, Шс., И8Л, 1996) и ТНе Мегск Шбех (Т1нг1ееп111 ЕбШоп, Мегск апб Со., Шс., И8Л, 2001), каждая из которых включена в данное описание в виде ссылки.
Биологически активные соединения включают любое соединение, которое демонстрирует биологический ответ в своей имеющейся форме, или любое соединение, которое демонстрирует биологический ответ в результате химического превращения его структуры из его имеющейся формы. Например, биологически активные соединения будут включать любое соединение, которое содержит защитную группу, которая при отщеплении приводит в результате к соединению, которое вызывает биологический ответ. Такое отщепление может быть, например, результатом взаимодействия соединения ш у|уо с эндогенными ферментами или реакции соединения перед введением, включая его взаимодействие с активированными РОС согласно данному изобретению. В качестве следующего примера биологически активные соединения также будут включать любое соединение, которое подвергается стереопревращению ш у!уо или ех νί\Ό с образованием соединения, которое вызывает биологический ответ или действие.
- 28 011829
Биологически активные соединения обычно содержат несколько химически активных участков, в которых возможно ковалентное связывание активированного РОС. Например, аминогруппы могут подвергаться ацилированию, сульфгидрильные группы могут подвергаться реакциям присоединения и алкилированию, карбонильные и карбоксильные группы могут подвергаться ацилированию и альдегидные и гидроксильные группы могут подвергаться аминированию или восстановительному аминированию. Одну или несколько из указанных реакций можно использовать при получении модифицированных полиалкиленгликолем биологически активных соединений согласно изобретению. Кроме того, биологически активные соединения можно модифицировать с образованием реакционноспособных остатков в соединении, которые облегчают такие реакции и получаемую в результате конъюгацию с активированным РОС.
Специалистам в данной области будут известны многочисленные имеющиеся механизмы реакций для облегчения конъюгации активированного РОС с биологически активным соединением. Например, в том случае, когда активирующим остатком Я является группа гидразида, она может быть ковалентно связана с сульфгидрилом, остатками сахара и карбонильным остатком в биологически активных соединениях (после того, как указанные остатки подвергаются окислению с получением альдегидов). В реакции активирующих остатков гидразида (Я) с альдегидами в биологически активных соединениях (В') создается гидразонная связь (Я*-В). В том случае, когда Я является малеимидной группой, она может взаимодействовать с сульфгидрильной группой с образованием стабильной тиоэфирной связи. Если сульфгидрильные группы не присутствуют в биологически активном соединении, то их можно создать посредством восстановления дисульфида или посредством тиолирования 2-иминотиоланом или 8АТА. Когда Я является сложным имидоэфиром, он может взаимодействовать с первичными аминами в В' с образованием имидоамидной связи. Конъюгация сложного имидоэфира обычно осуществляется в диапазоне рН 8,5-9,0. При связывании активированных РОС с биологически активными белками сложные имидоэфиры обеспечивают преимущество по сравнению с другими Я-группами, так как они не влияют на общий заряд белка. Они несут положительный заряд при физиологическом рН, как и первичные амины, которые они заменяют. Реакции со сложными имидоэфирами проводят в диапазоне от 0°С до комнатной температуры (например, при 4°С) или при повышенных температурах в безводных условиях. Когда Я является сложным ΝΗδ-эфиром, его главной мишенью являются первичные амины. Доступные αаминогруппы, например группы, присутствующие на Ν-концах пептидов и белков, взаимодействуют со сложными ΝΗδ-эфирами с образованием ковалентной амидной связи.
В некоторых вариантах Я*-В является гидролитически стабильной связью. Гидролитически стабильная связь означает, что связь в значительной степени стабильна в воде и не взаимодействует с водой при используемых значениях рН, например связь является стабильной при физиологических условиях в течение длительного периода времени, возможно даже бесконечно. В других вариантах Я*-В является гидролитически нестабильной или деградируемой связью. Гидролитически нестабильная связь означает, что связь разрушается в воде или в водных растворах, включая, например, кровь. Энзиматически нестабильные или деградируемые связи также означают, что связь может быть разрушена одним или несколькими ферментами.
Как известно в данной области, полиалкилен и родственные полимеры могут содержать деградируемые связи в основной цепи полимера или линкерную группу между основной цепью полимера и одной или несколькими концевыми функциональными группами молекулы РОС. Например, сложноэфирные связи, образованные в результате взаимодействия, например, карбоновых кислот РОС или активированных карбоновых кислот РОС со спиртовыми группами в биологически активном соединении, обычно гидролизуются при физиологических условиях с высвобождением средства. Другие гидролитически деградируемые связи включают карбонатные связи; иминные связи, возникающие в результате взаимодействия амина и альдегида (см., например, ОисЫ с1 а1., Ро1утег РгсрппК 38 (1): 582-3 (1997)); связи сложного фосфатного эфира, образованные в результате взаимодействия спирта с фосфатной группой; ацетальные связи, которые являются продуктом реакции альдегида и спирта; связи сложных ортоэфиров, которые являются продуктом реакции формиата и спирта; пептидные связи, образованные аминогруппой, например, на конце РОС и карбоксильной группой пептида; и олигонуклеотидные связи, образованные фосфорамидитной группой, например, на конце полимера и 5'-гидроксильной группой олигонуклеотида.
Полиалкиленгликоль Р может быть полиэтиленгликолем, имеющим структуру формулы II
Е~ (О-СН2СН2)а-,
Формула II где а является целым числом от 4 до 10000 и
Е является водородом или С1-С20алкильной группой с прямой или разветвленной цепью, регистрируемой меткой или остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы I и биологически активным соединением или его предшественником.
Таким образом, когда Е является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы I и биологически активным соединением или его предшественником, Е может быть карбоновой кислотой, сложным эфиром, альдегидом, гидратом альдегида, ацеталем, гидроксильной группой, защищенной гидроксильной группой, карбонатом, алкенилом, акрилатом, метакрилатом, акриламидом, замещенным или незамещенным тиолом, галогеном, замещенным или незамещенным амином, защищенным амином, гидразидом, защищенным гидразидом, сукцинимидилом, изоцианатом, изотиоцианатом, дитио
- 29 011829 пиридином, винилпиридином, йодацетамидом, эпоксидом, гидроксисукцинимидилом, азолом, малеимидом, сульфоном, аллилом, винилсульфоном, трезилом, сульфо-И-сукцинимидилом, дионом, мезилом, тозилом или глиоксалем. Должно быть понятно, что Е должен быть совместим с К, так чтобы не происходила реакция между Е и К.
Под «регистрируемой меткой» имеется в виду любая метка, поддающаяся регистрации. Неограничивающие примеры включают радиоактивные изотопы, флуоресцентные остатки, фосфоресцентные остатки, хемилюминесцентные остатки и квантовые метки. Другие регистрируемые метки включают биотин, цистеин, гистидин, гемагглютинин, тус- или Пад-метки.
В некоторых вариантах Е имеет структуру согласно формуле III или IV
В---нс—(СН2Х;---(Ύ)η,--Р---Х—СУ72СУ72--Ζ »
Формула III
К'---НС—(СН2^--X---СУ?2СУГ2--Ζ .
Формула IV
Каждый О. X, Υ, Ζ, т и η имеет значения, определенные выше, и каждый независимо означает водород или С1-С7алкил.
В данном классе соединений К'' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником; и К''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
К'' и К''' могут быть карбоновой кислотой, сложным эфиром, альдегидом, гидратом альдегида, ацеталем, гидроксильной группой, защищенной гидроксильной группой, карбонатом, алкенилом, акрилатом, метакрилатом, акриламидом, замещенным или незамещенным тиолом, галогеном, замещенным или незамещенным амином, защищенным амином, гидразидом, защищенным гидразидом, сукцинимидилом, изоцианатом, изотиоцианатом, дитиопиридином, винилпиридином, йодацетамидом, эпоксидом, гидроксисукцинимидилом, азолом, малеимидом, сульфоном, аллилом, винилсульфоном, трезилом, сульфо-Νсукцинимидилом, дионом, мезилом, тозилом или глиоксалем. Должно быть понятно, что К'' и К''' должны быть совместимы с К, так чтобы не происходила реакция с К.
В используемом в данном описании смысле К'' и К''' при конъюгации с биологически активным соединением или его предшественником образуют связывающие остатки, которые определены выше. Таким образом, К** является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К''-группы или К'''-группы на активированном РОС с реакционноспособной функциональной группой на биологически активном соединении, так что происходит ковалентное связывание между РОС и биологически активным соединением. К и К'' или К''' могут представлять собой одни и те же остатки, и биологически активные соединения, связываемые с каждым из них, могут быть одинаковыми или разными.
В используемом в данном описании смысле термин «алкил» относится к радикалу насыщенных алифатических групп, включая алкильные группы с прямой цепью, алкильные группы с разветвленной цепью, циклоалкильные (алициклические) группы, замещенные алкилом циклоалкильные группы и замещенные циклоалкилом алкильные группы. В предпочтительных вариантах алкил с прямой цепью или разветвленной цепью содержит 30 или меньше атомов углерода в своей основной цепи (например, С1-С30 в случае прямой цепи, С3-С30 в случае разветвленной цепи) и более предпочтительно 20 или меньше. Подобным образом, предпочтительные циклоалкилы содержат 3-10 атомов углерода в своей циклической структуре и более предпочтительно содержат 5, 6 или 7 атомов углерода в своей циклической структуре.
Кроме того, подразумевается, что термин «алкил» (или «низший алкил») включает как «незамещенные алкилы», так и «замещенные алкилы», последние из которых относятся к алкильным остаткам, содержащим заместители, замещающие водород у одного или нескольких атомов углерода основной углеводородной цепи. Такие заместители могут, например, включать галоген, гидроксил, карбонил (такой, как карбоксил, алкоксикарбонил, формил или ацил), тиокарбонил (такой, как сложный тиоэфир, тиоацетат или тиоформиат), алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппу, амидогруппу, амидин, имин, цианогруппу, нитрогруппу, азидогруппу, сульфгидрил, алкилтиогруппу, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидогруппу, сульфонил, гетероциклил, аралкил или ароматический или гетероароматический остаток. Специалистам в данной области будет понятно, что остатки, введенные в качестве заместителей углеводородной цепи, сами по себе могут быть замещены, если это уместно. Например, заместители замещенного алкила могут включать замещенные и незамещенные формы аминогруппы, азидогруппы, иминогруппы, амидогруппы, фосфорила (включая фосфонат и фосфинат), сульфонила (включая сульфат, сульфонамидогруппу, сульфамоил и сульфонат) и силильной группы, а также простые эфиры, алкилтиогруппы, карбонилы (включая кетоны, альдегиды, карбоксилазы и сложные эфиры), -СР3,
- 30 011829
-СЫ и т.п. Циклоалкилы, кроме того, могут быть замещены алкилами, алкенилами, алкоксигруппами, алкилтиогруппами, аминоалкилами, замещенными карбонилом алкилами, -СР3, -СЫ и т.п.
Термин «аралкил» в используемом в данном описании смысле относится к алкильной группе, замещенной арильной группой (например, ароматической или гетероароматической группой). Примеры аралкильных групп включают, но не ограничены указанным, бензил и в более общем виде (СН2)ПРЬ, где РЬ означает фенил или замещенный фенил и η равно 1, 2 или 3.
Термины «алкенил» и «алкинил» относятся к ненасыщенным алифатическим группам, аналогичным по длине и возможному замещению описанным выше алкилам, но которые содержат по меньшей мере одну двойную или тройную связь, соответственно.
Если количество атомов углерода не оговорено особо, «низший алкил» в используемом в данном описании смысле означает алкильную группу, которая определена выше, но содержащую от 1 до 10 атомов углерода, более предпочтительно от 1 до 6 атомов углерода в своей структуре основной цепи. Подобным образом «низший алкенил» и «низший алкинил» имеют сходные длины цепей. Предпочтительными алкильными группами являются низшие алкилы. В предпочтительных вариантах заместитель, указанный в данном описании как алкил, является низшим алкилом.
Термин «арил» в используемом в данном описании смысле включает 5-, 6- и 7-членные однокольцевые ароматические группы, которые могут содержать от 0 до 4 гетероатомов, например бензол, пиррол, фуран, тиофен, имидазол, оксазол, тиазол, триазол, пиразол, пиридин, пиразин, пиридазин, и пиримидин, и т.п. Указанные арильные группы, содержащие гетероатомы в кольцевой структуре, также могут быть названы «арильными гетероциклами» или «гетероароматическими соединениями». Ароматический цикл может быть замещен в одном или нескольких положениях цикла такими заместителями, которые описаны выше, например галогеном, азидом, алкилом, аралкилом, алкенилом, алкинилом, циклоалкилом, гидроксилом, алкоксилом, аминогруппой, нитрогруппой, сульфгидрилом, иминогруппой, амидогруппой, фосфонатом, фосфинатом, карбонилом, карбоксилом, силилом, простым эфиром, алкилтиогруппой, сульфонилом, сульфонамидогруппой, кетоном, альдегидом, сложным эфиром, гетероциклилом, ароматическими или гетероароматическими остатками, -СР3, -СЫ или т.п. Термин «арил» также включает полициклические кольцевые системы, содержащие 2 или более циклических колец, в которых 2 или более атомов углерода являются общими для двух соседних колец (кольца являются «конденсированными кольцами»), в которых по меньшей мере одно из колец является ароматическим, например другие циклические кольца могут быть циклоалкилами, циклоалкенилами, циклоалкинилами, арилами и/или гетероциклилами.
Термины «орто», «мета» и «пара» применяются по отношению к 1,2-, 1,3- и 1,4-дизамещенным бензолам, соответственно. Например, названия 1,2-диметилбензол и ортодиметилбензол являются синонимами.
Термины «гетероциклил» или «гетероциклическая группа» относятся к 3-10-членным кольцевым структурам, более предпочтительно 3-7-членным кольцам, циклические структуры которых содержат от 1 до 4 гетероатомов. Гетероциклы также могут быть полициклами. Гетероциклические группы включают, например, тиофен, тиантрен, фуран, пиран, изобензофуран, хромен, ксантен, феноксатиин, пиррол, имидазол, пиразол, изотиазол, изоксазол, пиридин, пиразин, пиримидин, пиридазин, индолизин, изоиндол, индол, индазол, пурин, хинолизин, изохинолин, хинолин, фталазин, нафтиридин, хиноксалин, хиназолин, циннолин, птеридин, карбазол, карболин, фенантридин, акридин, пиримидин, фенантролин, феназин, фенарсазин, фенотиазин, фуразан, феноксазин, пирролидин, оксолан, тиолан, оксазол, пиперидин, пиперазин, морфолин, лактоны, лактамы, такие как азетидиноны и пирролидиноны, сультамы, сультоны и т.п. Гетероциклическое кольцо может быть замещено в одном или нескольких положениях заместителями, которые описаны выше, такими, например, как галоген, алкил, аралкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гидроксил, аминогруппа, нитрогруппа, сульфгидрил, иминогруппа, амидогруппа, фосфонат, фосфинат, карбонил, карбоксил, силил, простой эфир, алкилтиогруппа, сульфонил, кетон, альдегид, сложный эфир, гетероциклил, ароматический или гетероароматический остаток, -СР3, -СЫ или т.п.
Термин «карбоцикл» в используемом в данном описании смысле относится к ароматическому или неароматическому кольцу, в котором каждый атом кольца является атомом углерода.
Гетероциклы и карбоциклы включают конденсированные бициклические и связанные мостиками бициклические кольцевые структуры.
В используемом в данном описании смысле термин «нитрогруппа» означает -ЫО2; термин «галоген» означает -Р, -С1, -Вг или -I; термин «сульфгидрил» означает -8Н; термин «гидроксил» означает -ОН и термин «сульфонил» означает -§О2-.
Термины «амин» и «аминогруппа» являются общепризнанными в данной области и относятся как к незачещенным, так и замещенным аминам, например остатку, который может быть представлен общей формулой
в которой К9, К10 и К'10, каждый независимо означает водород, алкил, алкенил, -(СН2)т-К8. или К9 и К!0 вместе с атомом Ы, с которым они связаны, достраивают гетероцикл, имеющий от 4 до 8 атомов в коль
- 31 011829 цевой структуре;
Я8 означает арил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероцикл или полицикл и т равно 0 или является целым числом в пределах от 1 до 8.
Термин «алкиламин» в используемом в данном описании смысле означает аминогруппу, которая определена выше, имеющую связанный с ней замещенный или незамещенный алкил, т.е. по меньшей мере один из Я9 и Я10 является алкильной группой.
Термин «ациламиногруппа» является общепризнанным в данной области и относится к остатку, который может быть представлен общей формулой
где Я9 имеет значение, определенное выше; и
Я'11 означает водород, алкил, алкенил или -(СН2)т-Я8, где т и Я8 имеют значения, определенные выше.
Термин «амидогруппа» является общепризнанным в данной области как аминозамещенный карбонил и включает остаток, который может быть представлен общей формулой
где Я9, Я10 имеют значения, определенные выше.
Предпочтительные варианты амида не будут включать имиды, которые могут быть нестабильными.
Термин «амидин» является общепризнанным в данной области как группа, которая может быть представлена общей формулой
где Я9, Я10 имеют значения, определенные выше.
Термин «гуанидин» является общепризнанным в данной области как группа, которая может быть представлена общей формулой
где Я9, Я10 имеют значения, определенные выше.
Термин «алкилтиогруппа» относится к алкильной группе, которая определена выше, имеющей связанный с ней радикал серы. В предпочтительных вариантах «алкилтио-остаток» представлен одним из следующих остатков: -8-алкил, -8-алкенил, -8-алкинил и-8-(СН2)т-Я8, где т и Я8 определены выше. Ти пичные алкилтиогруппы включают метилтиогруппу, этилтиогруппу и т.п.
Термин «карбонил» является общепризнанным в данной области и включает остатки, которые могут быть представлены общей формулой
О О
-Н-Х-ТЦх , где X является связью или означает кислород или серу и
Я11 означает водород, алкил, алкенил, -(СН2)т-Я8 или фармацевтически приемлемую соль;
Я'11 означает водород, алкил, алкенил или -(СН2)т-Я8, где т и Я8 имеют значения, определенные выше.
В том случае, когда X является кислородом и Я11 или Я'11 не являются водородом, формула представляет «сложный эфир». В том случае, когда X является кислородом и Я11 имеет значение, определенное выше, остаток в данном описании называют карбоксильной группой, и в частности, когда Я11 является водородом, формула представляет «карбоновую кислоту». Когда X является кислородом и Я'11 является водородом, формула означает «формиат». В общем, когда атом кислорода в указанной выше формуле заменен серой, формула означает «тиолкарбонильную» группу. Когда X является серой и Я11 или Я'11 не
- 32 011829 является водородом, формула означает «сложный тиоэфир». Когда X является серой и К11 является водородом, формула означает «тиокарбоновую кислоту». Когда X является серой и К'11 является водородом, формула означает «тиоформиат». С другой стороны, когда X является связью и К11 не является водородом, указанная выше формула означает «кетонную» группу. Когда является связью и К11 является водородом, указанная выше формула означает «альдегидную» группу.
Термины «алкоксил» или «алкоксигруппа» в используемом в данном описании смысле относятся к алкильной группе, которая определена выше, имеющей связанный с ней кислородный радикал. Типичные алкоксильные группы включают метокси-, этокси-, пропилокси-, трет-бутоксигруппу и т. п. «Простой эфир» представляет собой два углеводорода, ковалентно связанных кислородом. Соответственно, заместитель алкила, который превращает данный алкил в простой эфир, является или имеет сходство с алкоксилом, таким, который может быть представлен одной из групп -О-алкил, -О-алкенил, -О-алкинил, -О-(СН2)т-К8, где т и К8 имеют значения, описанные выше.
Термин «сульфонат» является общепризнанным в данной области и включает остаток, который может быть представлен общей формулой
в которой К41 является электронной парой, водородом, алкилом, циклоалкилом или арилом.
Термин «сульфат» является общепризнанным в данной области и включает остаток, который может быть представлен общей формулой ί
о в которой К41 имеет значение, определенное выше.
Термин «сульфонамидогруппа» является общепризнанным в данной области и включает остаток, который может быть представлен общей формулой
в которой К9 и К'11 имеют значения, определенные выше.
Термин «сульфамоил» является общепризнанным в данной области и включает остаток, который может быть представлен общей формулой
в которой К9 и К10 имеют значения, определенные выше.
Термин «сульфонил» в используемом в данном описании смысле относится к остатку, который может быть представлен общей формулой
О в которой К44 выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, гете роциклила, арила или гетероарила.
Термин «сульфоксидогруппа» в используемом в данном описании смысле относится к остатку, который может быть представлен общей формулой
О
II —8’й.4 в которой К44 выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, гетероциклила, аралкила или арила.
Будет понятно, что «замещение» или «замещенный» включает подразумеваемое условие, что такое замещение находится в соответствии с допустимой валентностью замещаемого атома и заместителя и что результатом замещения является стабильное соединение, например соединение, которое спонтанно не подвергается такому превращению, как при перестановке, циклизации, элиминировании и т. д.
Предполагается, что в используемом в данном описании термин «замещенный» включает все допустимые заместители органических соединений. В широком аспекте допустимые заместители включают ациклические и циклические, разветвленные и неразветвленные, карбоциклические и гетероциклические, ароматические и неароматические заместители органических соединений. Иллюстративные замес
- 33 011829 тители включают, например, заместители, описанные выше. Допустимых заместителей может быть один или несколько, и они могут быть одинаковыми или разными в случае соответствующих органических соединений. В целях данного изобретения гетероатомы, такие как азот, могут иметь водородные заместители и/или любые допустимые заместители органических соединений, описанные в данной заявке, которые удовлетворяют валентностям гетероатомов. Имеется в виду, что данное изобретение никоим образом не ограничено допустимыми заместителями органических соединений.
Полный список сокращений, используемых химиками-органиками, специалистами в данной области, публикуется в первом выпуске каждого тома 1оита1 о Г Огдаше СНетМгу; данный список обычно представлен в таблице, озаглавленной «Стандартный список сокращений». Сокращения, имеющиеся в указанном списке, и все сокращения, используемые химиками-органиками, специалистами в данной области, включены таким образом в виде ссылки.
В некоторых вариантах соединения согласно изобретению имеют структуру согласно формуле V
где X, Υ, т, η, Ζ и В' имеют значения, определенные выше; и
В является активирующим остатком, который определен выше, подходящим для образования связи между соединением формулы V и биологически активным соединением или предшественником. В конкретных вариантах В является гидратом альдегида;
Р имеет значение, определенное выше, и может быть представлен формулой II
Е- (О-СН2СН2)а-,
Формула II где Е имеет значение, описанное выше, и в некоторых вариантах может быть представлен формулой III или IV;
Т1 и Т2 независимо отсутствуют или являются насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой. Заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, силил, простой эфир или алкилтиогруппа.
Когда 6 равен 0, дополнительных заместителей (Ь) в ароматическом цикле нет. Когда 6 является целым числом от 1 до 4, заместителями (Ь) могут быть насыщенная или ненасыщенная С1-С20алкильная или гетероалкильная группа, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенная или незамещенная арильная или гетероарильная группа или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С,-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильная группа. Заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, силил, простой эфир или алкилтиогруппа.
В том случае, когда В является альдегидом, соединения относятся к соединениям, представленным формулой VI
Формула VI где все другие переменные имеют значения, определенные выше.
Например, когда X и Υ являются кислородом, а В является альдегидом, соединения согласно изобретению представлены соединением I
- 34 011829
где заместители Т1 и Т2 могут быть в орто-, мета- или пара-положении.
В том случае, когда заместители Τι и Т2 являются алкильными группами с прямой цепью и б равно 0, соединения представлены формулой IX
где каждый и независимо равен 0 или является целым числом от 1 до 5, а все другие переменные имеют значения, определенные выше.
В конкретных вариантах Ζ является водородом или метилом.
Конкретные классы соединений, относящихся к формуле IX, могут быть представлены формулами VII и VIII
Формула VIII
Некоторые типичные активированные соединения полиалкиленгликоля включают следующие соединения, в которых полимер полиалкиленгликоля является РЕО или тРЕО:
»
В некоторых вариантах соединения согласно изобретению представлены формулой X
где, как указано выше, η равно 0 или является целым числом от 1 до 5 и X означает О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЖЕ', 8О;\К' или ΝΚ'.
Формула X
- 35 011829
В том случае, когда X является ЫК', К' может быть водородом, насыщенной или ненасыщенной С1С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира или алкилтиогруппы. Ζ может быть насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой. При наличии заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, силил, простой эфир или алкилтиогруппа.
Как определено выше, К является активирующим остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы X и биологически активным соединением или его предшественником. В некоторых вариантах К является гидратом альдегида.
Р является полимером полиалкиленгликоля, который определен выше, и может быть представлен формулой II
Е- (О-СН2СН2>а-,
Формула II где Е и а имеют значения, описанные выше, и в некоторых вариантах могут быть представлены формулой III или IV. В некоторых вариантах Е является метилом и, следовательно, Р представляет собой тРЕС.
В том случае, когда К является альдегидом и X является кислородом, соединения относятся к структуре согласно формуле XI
где Р, Ζ и η имеют значения, определенные для формулы X.
В том случае, когда Р является тРЕС, соединения описываются формулой XII
СН3 (ОСНзСНД.О---(СН^.
Формула XII и, когда η равно 1 и Ζ является метилом, соединение представлено формулой XIII
где а является целым числом от 4 до 10000.
Примеры путей синтеза для получения соединений согласно изобретению приведены в примерах ниже.
Изобретение также включает в себя композиции активированных соединений полиалкиленгликоля (РСС) согласно изобретению и одного или нескольких биологически активных соединений. Как описано выше, биологически активными соединениями являются такие соединения, которые демонстрируют биологический ответ или действие при введении субъекту. Кроме соединений согласно изобретению
- 36 011829 субъекту могут быть введены неконъюгированные биологически активные соединения. Кроме того, биологически активные соединения могут содержать химически активные группы, которые способны взаимодействовать и конъюгировать по меньшей мере с одним активированным РОС согласно изобретению.
Изобретение также включает в себя конъюгаты новых РОС с биологически активными соединениями. Описаны конъюгаты, которые образуются из соединения формулы I и биологически активного соединения (В) и описываются согласно формуле XIV
Р--X---О---СЮй— (СНД—сн—к*—в
Ζ ,
Формула XIV
Как указано выше, т равно 0 или 1, так что Υ присутствует или отсутствует, η равно 0 или является целым числом от 1 до 5 и X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЫВ', 8О2ЫВ' или ΝΒ'.
О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил (включая конденсированные бициклические и связанные мостиками бициклические кольцевые структуры), замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С20 насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу. В том случае, если заместители присутствуют, заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, силил, простой эфир или алкилтиогруппа.
Каждый В' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы.
В* означает связывающий остаток, образованный в результате взаимодействия В с соответствующей функциональной группой на биологически активном соединении В, как описано выше. Например, В* образован в результате взаимодействия такого остатка, как функциональная группа карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксила, защищенного гидроксила, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила или глиоксаля с биологически активным соединением или его предшественником.
Р является полимером полиалкиленгликоля, который определен выше, и может быть представлен формулой II
Е- (О-СН2СН2) а-,
Формула II где Е означает водород, С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью (например, метил), регистрируемую метку или остаток, подходящий для образования связи между соединением формулы XIV и биологически активным соединением или его предшественником.
Как указано выше, а является целым числом от 4 до 10000.
В том случае, когда Е является регистрируемой меткой, метка может быть, например, радиоактивным изотопом, флуоресцентным остатком, фосфоресцентным остатком, хемилюминесцентным остатком или квантовой меткой.
Когда Е является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы XIV и биологически активным соединением или его предшественником, Е может образовывать связь с другой молекулой биологически активного соединения (В), так что активированное соединение полиалкиленгликоля связано на каждом конце с молекулой одного и то же типа биологически активного соединения с образованием димера молекулы.
В некоторых вариантах Е образует связь с другим биологически активным соединением, отличным от В, с созданием гетеродимера биологически активных соединений или их предшественников.
В других вариантах Е образует дополнительную связь с биологически активным соединением В, так что как Е, так и В связаны посредством разных функциональных групп одной и той же молекулы биологически активного соединения или его предшественника.
- 37 011829
В том случае, когда Е способен образовывать связь с биологически активной молекулой или ее предшественником, Е может быть таким же, как К, или отличным от К и выбран из остатков карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Когда Е способен образовывать связь с биологически активной молекулой или ее предшественником, Е может иметь структуру согласно формуле III или IV
К---НС—---(Υ)„--О--X— СУ/2СТ/2--Ζ
Формула III к*·---нс—(СН2)-—х—с\у2суг2— ζ
Формула IV где каждый 0, X, Υ, Ζ, т и η независимо имеют значения, которые определены выше;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил;
К'' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником; и
К''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
К'' и К''' независимо выбраны из остатков карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Когда 0 в формуле XIV является замещенным или незамещенным алкарилом, конъюгат образуется из активированного полиалкиленгликоля формулы V и биологически активной молекулы (В) и описывается согласно формуле XV
где Т1 и Т2 независимо отсутствуют или являются насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой. В том случае, если присутствуют заместители, заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, силил, простой эфир или алкилтиогруппа.
В некоторых вариантах Т1 и Т2 в случае присутствия являются насыщенной или ненасыщенной С1С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью.
ά равно 0 (например, в ароматическом цикле нет заместителей Ь) или является целым числом от 1 до 4.
Каждый Ь в случае присутствия означает насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным
- 38 011829 или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу. Заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, силил, простой эфир или алкилтиогруппа.
Все другие переменные имеют значения, описанные выше, включая Р, который означает полимер полиалкиленгликоля и может быть представлен формулой ΙΙ
Е~ (О-СН2СН2) а-,
Формула II где Е означает водород, С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью (например, метил), регистрируемую метку или остаток, подходящий для образования связи между соединением формулы Χν и биологически активным соединением или его предшественником.
Как указано выше, а является целым числом от 4 до 10000.
В том случае, когда Е является регистрируемой меткой, метка может быть, например, радиоактивным изотопом, флуоресцентным остатком, фосфоресцентным остатком, хемилюминесцентным остатком или квантовой меткой.
Когда Е является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы Χν и биологически активным соединением В, Е может образовывать связь с другой молекулой биологически активного соединения (В), так что активированное соединение полиалкиленгликоля связано на каждом конце с молекулой одного и то же типа биологически активного соединения с образованием димера молекулы.
В некоторых вариантах Е образует связь с другим биологически активным соединением, отличным от В, с созданием гетеродимера биологически активных соединений или их предшественников.
В других вариантах Е образует дополнительную связь с биологически активным соединением В, так что как Е, так и К связаны посредством разных функциональных групп одной и той же молекулы биологически активного соединения или его предшественника.
В том случае, когда Е способен образовывать связь с биологически активной молекулой или ее предшественником, Е может быть таким же, как К, или отличным от К и выбран из остатков карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-№сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
Когда Е может образовывать связь с биологически активным соединением или его предшественником, Е может быть представлен формулой ΙΙΙ или Ιν
К---НС—(СН2)^---(¥)го--<3---X— С^2(ДУ2--Ζ >
Формула III
К.”--НС— (СН^—х—с\у2сль-Ζ ,
Формула IV где каждый О, Χ, Υ, Ζ, т и п независимо имеют значения, которые определены выше;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил;
К'' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы ΙΙΙ и биологически активным соединением или его предшественником; и
К''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы Ιν и биологически активным соединением или его предшественником.
К'' и К''' независимо выбраны из остатков карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-№сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
В случае связывания на обоих концах с биологически активным соединением или его предшественником данные бифункциональные молекулы могут быть представлены согласно формуле ΧΧ или ΧΧΙ
- 39 011829
Формула XXI где каждый X и Υ, Τι и Т2, К' и Ζ, Ь, О, т, и, а и η имеют значения, описанные выше; и каждый независимо означает водород или С1-С7алкил;
К* и К** независимо являются связывающими остатками, образованными в результате взаимодействия К и К'' с биологически активным соединением или его предшественником; и каждый В и В' является биологически активным соединением или его предшественником после конъюгации с К и К'', соответственно.
В некоторых вариантах В и В' представляют собой один и тот же тип биологически активного соединения. В других вариантах В и В' являются разными биологически активными соединениями. Кроме того, в других вариантах В и В' являются одной и той же биологически активной молекулой. В дополнительных вариантах К* и К** являются одинаковыми. В других вариантах К* и К** являются разными. Например, в некоторых вариантах Е может образовывать связь с другой молекулой биологически активного соединения (В=В'), так что активированное РОС на каждом конце связано с молекулой одного и того же типа биологически активного соединения с образованием димера молекулы. В некоторых вариантах Е образует связь с другим биологически активным соединением, отличным от В (В не является В') с образованием гетеродимера биологически активных соединений или их предшественников. В других вариантах Е образует дополнительную связь с биологически активным соединением В, так что и Е (посредством К'' или К'''), и К связаны посредством разных функциональных групп одной и той же молекулы биологически активного соединения или его предшественника.
В некоторых вариантах К* или К** является метиленовой группой и В или В' является биологически активной молекулой, содержащей аминогруппу, при этом метиленовая группа образует связь с аминогруппой на В. Например, амин может быть аминоконцом пептида, амином боковой цепи аминокислоты в пептиде или амином гликозилирующего заместителя гликозилированного пептида. В некоторых вариантах пептид является интерфероном, таким как интерферон-бета, например интерферон-бета-1а. В некоторых вариантах указанный тип связи образуется в результате реакции восстановительного алкилирования.
В том случае, когда заместители Т и Т2 формулы XV являются алкильными группами с прямой цепью, X и Υ являются кислородом и б равно 0, конъюгаты представлены формулой XIX
где каждый и независимо равен 0 или является целым числом от 1 до 5 и все другие переменные имеют значения, определенные выше.
В конкретных вариантах Ζ является водородом или метилом.
Конкретные классы соединений, относящихся к формуле XV, могут быть представлены формулами XVII и XVIII и образованы в результате взаимодействия соединений формул VII и VIII, соответственно, с биологически активным соединением или его предшественником
- 40 011829
Ф ормула XVI11 где η равно 0 или является целым числом от 1 до 5;
Р означает полимер полиалкиленгликоля, который описан выше;
Ζ означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу; Я* является связывающим остатком, который описан выше;
В является биологически активной молекулой.
Данные соединения могут быть бифункциональными или монофункциональными в зависимости от особенностей Е, которые описаны выше.
В некоторых вариантах Я* является метиленовой группой и В является биологически активной молекулой, содержащей аминогруппу, при этом метиленовая группа образует связь с аминогруппой на В. Например, амин может быть аминоконцом пептида, амином боковой цепи аминокислоты в пептиде или амином гликозилирующего заместителя гликозилированного пептида. В некоторых вариантах пептид является интерфероном, таким как интерферон-бета, например интерферон-бета-1а. В некоторых вариантах указанный тип связи образуется в результате реакции восстановительного алкилирования.
Описаны также конъюгаты, которые могут быть образованы в результате взаимодействия соединений согласно формуле X с биологически активным соединением или его предшественником с образованием конъюгатов согласно формуле XXII
Формула XXII где В является биологически активной молекулой, как описано выше; и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5;
X означает О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЫЯ', 8О2ЫЯ' или ЫЯ', в том случае, когда X является ЫЯ', Я' означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С]-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу. В случае наличия заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, силил, простой эфир и алкилтиогруппа;
Ζ означает насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу. Заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, силил, простой эфир и алкилтиогруппа;
Я* означает связывающий остаток, образованный в результате взаимодействия Я с соответствующей функциональной группой на биологически активном соединении В, которое описано выше. Например, Я* образуется в результате взаимодействия такого остатка, как функциональная группа карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксила, защищенного гидроксила, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, гало гена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила или глиоксаля, с биологически активным соединением или его предше ственником.
В некоторых вариантах Ζ является метилом и η равно 1.
Р означает полимер полиалкиленгликоля, который определен выше и может быть представлен формулой II
Е- (О-СН2СН2) а-,
- 41 011829
Формула II где Е означает водород, С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью (например, метил), регистрируемую метку или остаток, подходящий для образования связи между соединением формулы XXII и биологически активным соединением или его предшественником.
Как указано выше, а является целым числом от 4 до 10000.
В том случае, когда Е является регистрируемой меткой, метка может быть, например, радиоактивным изотопом, флуоресцентным остатком, фосфоресцентным остатком, хемилюминесцентным остатком или квантовой меткой.
Когда Е является остатком, подходящим для образования связи с биологически активной молекулой или ее предшественником, в результате образуется бифункциональная молекула. Е может образовывать связь с другой молекулой биологически активного соединения (В), так что активированное соединение полиалкиленгликоля связано на каждом конце с молекулой одного и то же типа биологически активного соединения с образованием димера молекулы.
В некоторых вариантах Е образует связь с другим биологически активным соединением, отличным от В, с созданием гетеродимера биологически активных соединений или их предшественников.
В других вариантах Е образует дополнительную связь с биологически активным соединением В, так что как Е, так и К связываются посредством разных функциональных групп одной и той же молекулы биологически активного соединения или его предшественника.
В том случае, когда Е способен образовывать связь с биологически активной молекулой или ее предшественником, Е может быть таким же, как К, или отличным от К и выбран из остатков карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-№сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
В некоторых вариантах Е может иметь структуру согласно формуле III или IV
К---НС--(СН^---(Υ)Μ--Ц--X— СУЛ,СУ/2--Ζ >
Формула III
В'---НС—(СН^--X---САУ2С1У2--А ,
Формула IV где каждый β, X, Υ, Ζ, т и η независимо имеют значения, которые определены выше;
каждый независимо означает водород или С1 -С7алкил;
К'' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником; и
К''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
К'' и К''' независимо выбраны из остатков карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-№сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля и могут быть такими же, как К, или отличными от К.
В случае связывания на обоих концах с биологически активным соединением или его предшественником данные бифункциональные молекулы могут быть представлены согласно формуле XXIV или XXV
Формула XXIV
- 42 011829
Формула XXV где каждый X и Υ независимо означает О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОИК', 8О2ИК' или ИК', и каждый К' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалькильную группу с прямой или разветвленной цепью;
О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил (включая конденсированные бициклические и связанные мостиками бициклические кольцевые структуры), замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С20 насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу. В случае присутствия заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, сульфамоил, сульфонат, силил, простой эфир или алкилтиогруппа;
каждый независимо означает водород или С1-С7алкил;
т равно 0 или 1;
а является целым числом от 4 до 10000 и каждый η независимо равен 0 или является целым числом от 1 до 5;
К* и К** независимо являются связывающими остатками, которые описаны выше;
В и В' независимо являются биологически активными молекулами и могут быть одинаковыми или разными.
Е (посредством К'' или К''') может образовывать связь с другой молекулой биологически активного соединения (В), так что активированное соединение полиалкиленгликоля связывается на каждом конце с молекулой одного и того же типа биологически активного соединения с образованием димера молекулы.
В некоторых вариантах Е (посредством К'' или К''') образует связь с другим биологически активным соединением, отличным от В, с образованием гетеродимера биологически активных соединений или их предшественников.
В других вариантах Е (посредством К'' или К''') образует дополнительную связь с биологически активным соединением В, так что и Е, и К связываются посредством разных функциональных групп одной и той же молекулы биологически активного соединения или его предшественника.
К'' и К''' могут быть такими, как К, или отличными от К и выбраны из остатков карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-И-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
В некоторых вариантах К* или К** является метиленовой группой и В или В' является биологически активной молекулой, содержащей аминогруппу, при этом метиленовая группа образует связь с аминогруппой на В. Например, амин может быть аминоконцом пептида, амином боковой цепи аминокислоты в пептиде или амином гликозилирующего заместителя гликозилированного пептида. В некоторых вариантах пептид является интерфероном, таким как интерферон-бета, например интерферон-бета-1а. В некоторых вариантах указанный тип связи образуется в результате реакции восстановительного алкилирования.
Конъюгаты согласно изобретению могут быть получены посредством связывания биологически активного соединения с соединением полиалкиленгликоля, как описано в примерах. В некоторых вариантах связывание осуществляется посредством реакции восстановительного алкилирования.
Представляющие интерес биологически активные соединения включают любое вещество, предназначенное для диагностики, облегчения состояния, лечения или профилактики заболевания человека или других животных или для улучшения иным образом физического или психического здоровья людей и животных. Примеры биологически активных молекул включают, но не ограничены указанным, пептиды, аналоги пептидов, белки, ферменты, малые молекулы, красители, липиды, нуклеозиды, олигонуклеотиды, аналоги олигонуклеотидов, сахара, олигосахариды, клетки, вирусы, липосомы, микрочастицы, поверхности и мицеллы. Данный класс соединений также включает предшественники указанных типов молекул. Классы биологически активных средств, которые подходят для применения в случае данного изобретения, включают, но не ограничены указанным, цитокины, хемокины, лимфокины, растворимые
- 43 011829 рецепторы, антитела, антибиотики, фунгициды, противовирусные средства, противовоспалительные средства, противоопухолевые средства, сердечно-сосудистые средства, седативные средства, гормоны, факторы роста, стероидные средства и т.п.
Биологически активным соединением может быть пептид, такой как интерферон, включая интерферон-бета (например, интерферон-бета-1а) или интерферон-альфа.
Так как модификация полимером РОС согласно изобретению снижает антигенные ответы, не требуется, чтобы чужеродный пептид был полностью аутологичным для того, чтобы его использовать в качестве терапевтического средства. Например, пептид, такой как интерферон, используемый для получения полимерных конъюгатов, может быть получен из экстракта из млекопитающего, как интерферон человека, жвачного животного или быка, или может быть получен синтетическим или рекомбинатным способом.
Например, в одном аспекте изобретение относится к соединениям и способам лечения состояний, которые поддаются лечению интерфероном альфа или бета. Введение конъюгированного с полиалкиленгликолем интерферона бета (в дальнейшем «РОС ШЫ-бета», «РОС ШЫ-», например «РЕС ШЫ-бета», «РЕС ШЫ-», «пегилированный ШЫ-бета» или «пегилированный ШЫ-») обеспечивает улучшенный терапевтический эффект наряду с существенным снижением или полным исключением нежелательных побочных эффектов, обычно связанных с обычно используемыми на практике схемами лечения интерфероном альфа или бета.
РСС ШЫ-бета может быть получен посредством связывания полиалкиленового полимера с концевой аминогруппой молекулы ШЫ бета. Одна молекула активированного полиалкиленгликоля может быть конъюгирована с Ы-концом ШЫ бета в результате реакции восстановительного алкилирования.
Конъюгат РОС ШЫ-бета может быть приготовлен, например, в виде жидкости или лиофилизованного порошка для инъекции. Целью конъюгации ШЫ бета с РОС является улучшение доставки белка при значительном пролонгировании его времени полужизни в плазме и, тем самым, обеспечение продолжительной активности ШЫ бета.
Термин «интерферон» или «ШЫ» в используемом в данном описании смысле означает семейство высокогомологичных видоспецифичных белков, которые ингибируют репликацию вирусов и пролиферацию клеток и модулируют иммунный ответ. Интерфероны человека сгруппированы в два класса: тип I, включающий α- и β-интерферон, и тип II, который представлен только γ-интерфероном. Сконструированы и коммерчески доступны рекомбинантные формы каждой группы. Подтипы в каждой группе основаны на антигенных/структурных признаках.
Термины «бета интерферон», «бета-интерферон», «бета ШЫ», «бета-ШЫ», «β интерферон», «β-интерферон», «β ШЫ», «β-ШЫ», «интерферон бета», «интерферон-бета», «интерферон β», «интерферон-β», «ШЫ бета», «ШЫ-бета», «ШЫ β», «ШЫ-β» и «интерферон фибробластов человека» используются в данном описании взаимозаменяемо, чтобы описать представителей группы интерферонов бета, которые имеют особые аминокислотные последовательности, которые идентифицированы с помощью выделения и секвенирования ДНК, кодирующей пептиды.
Кроме того, термины «бета интерферон 1а», «бета интерферон-1а», «бета-интерферон 1а», «бетаинтерферон-1а», «бета ШЫ 1а», «бета ШЫ-1а», «бета-ШЫ 1а», «бета-IЕΝ-1а». «β интерферон 1а», «β интерферон-1а», «β-интерферон 1а», «β-интерферон-1а», «β ШЫ 1а», «β !ЕЫ- 1а», «β-ШЫ 1а», «β-IЕΝ-1а». «интерферон бета 1а», «интерферон бета-1а», «интерферон-бета 1а», «интерферон-бета-1а», «интерферон β 1а», «интерферон β-1а», «интерферон-β 1а», «интерферон-β-1а», «ШЫ бета 1а», «ШЫ бета-1а», «ШЫбета 1а», «ШЫ-бета-1а», «ШЫ β 1а», «ШЫ β-Ει», «ШЫ-β 1а», «IЕΝ-β-1а» используются в данном описании взаимозаменяемо, чтобы описать рекомбинантно или синтетически полученный интерферон бета, который имеет аминокислотные последовательности, встречающиеся в природе (дикого типа).
Появление технологии рекомбинантной ДНК, применяемой для получения интерферона, позволило успешно синтезировать несколько интерферонов человека, тем самым, сделав возможным крупномасштабную ферментацию, продуцирование, выделение и очистку различных интерферонов до гомогенности. Рекомбинантно полученный интерферон сохраняет некоторые или большинство его противовирусных и иммуномодулирующих активностей ίη νίΐτο и ίη νίνο. Также понятно, что рекомбинантные способы также могут включать сайты гликозилирования для добавления остатка углевода к рекомбинантно полученному полипептиду.
Также предполагается конструирование рекомбинантных ПЫЛ-плазмид, содержащих последовательности, кодирующие по меньшей мере часть интерферона фибробластов человека, и экспрессия полипептида, обладающего иммунологической или биологической активностью интерферона фибробластов человека. Конструирование гибридных генов бета-интерферона, содержащих комбинации последовательностей различных подтипов, можно осуществить способами, известными специалистам в данной области.
Типичные подходящие рекомбинантные бета-интерфероны, которые можно использовать в практике изобретения, включают, но не ограничены указанным, интерферон бета-1а, такой как АVΟΝЕX®, доступный от Вюдещ Шс., СатЬпбде, МА, и интерферон-бета-1Ь, такой как ВЕТА8ЕВОЫ®, доступный от Вег1ех, Вю^то^, СА.
- 44 011829
Существует множество механизмов, с помощью которых ШЫ-индуцированные генные продукты обеспечивают защитное действие против вирусной инфекции. Такое ингибирующее действие на вирусы происходит на разных стадиях жизненного цикла вирусов. См. патент США № 6030785. Например, ГЕЫ может ингибировать снятие оболочки вирусных частиц, проникновение и/или слияние, вызванное вирусами.
Состояния, которые можно лечить согласно данному изобретению, обычно представляют собой состояния, которые поддаются лечению интерфероном. Например, поддающиеся лечению состояния включают состояния, которые могут положительно или благоприятно отвечать (как указанные термины известны в области медицины) на терапию, основанную на интерфероне бета. В целях данного изобретения состояния, которые можно лечить с помощью терапии интерфероном бета, описанной в данной заявке, включают такие состояния, при которых лечение интерфероном бета проявляет определенную эффективность, но при которых отрицательные побочные эффекты лечения с помощью ГЕЫ-Р перевешивают полезный результат. Лечение согласно способам согласно изобретению приводит к значительным сниженным побочным эффектам или их исключению по сравнению с обычным лечением интерфероном бета. Кроме того, состояния, традиционно считаемые неподдающимися лечению с помощью ШЫ-β, или состояния, которые невозможно лечить достигаемой дозой ГЕЫ-β, можно лечить способами согласно данному изобретению.
Соединения РСС ШЫ-β согласно изобретению можно использовать отдельно или в комбинации с одним или несколькими средствами, применимыми для лечения конкретного состояния. Проведено по меньшей мере одно пилотное исследование рекомбинантного интерферона бета-1а для лечения хронического гепатита. См., в основном, публикацию НаЬсг5с1хсг еГ а1., Ыует 30: 437-441 (2000), включенную в данное описание в виде ссылки. Например, соединения можно вводить в комбинации с известными противовирусными средствами для лечения вирусной инфекции. См. Какити е! а1., Са51тоеп!ето1оду 105: 507-12 (1993) и Рерткку, е! а1., 1. Рйаттасо1оду апй Ехрептеп!а1 ТйегареиПск, 297: 1059-1066 (2001), включенные в данное описание в виде ссылки.
В используемом в данном описании смысле термин «противовирусные средства» может включать, например, малые молекулы, пептиды, сахара, белки, молекулы, полученные из вирусов, ингибиторы протеаз, аналоги нуклеотидов и/или аналоги нуклеозидов. «Малая молекула» в качестве термина, который используется в данном описании, относится к органической молекуле примерно менее 2500 а.е.м. (атомные единицы массы), предпочтительно примерно менее 1000 а. е. м. Примеры подходящих противовирусных соединений включают, но не ограничены указанным, рибавирин, левовирин, МВ6866, зидовудин 3ТС, ЕТС, ацикловир, ганцикловир, вирамид, МК-497, МК-950 и ^8-14803.
Примерные состояния, которые можно лечить с помощью интерферона, включают, но не ограничены указанным, нарушения пролиферации клеток, в частности множественный склероз, злокачественную опухоль (например, лейкоз ворсистых клеток, саркому Капоши, хронический миелогенный лейкоз, множественную миелому, карциному базальных клеток и злокачественную меланому, рак яичника, кожную Т-клеточную лимфому) и вирусные инфекции. Без ограничения лечение интерфероном можно использовать для лечения состояний, при которых лечение успешно в результате ингибирования репликации чувствительных к интерферону вирусов. Например, интерферон можно использовать отдельно или в комбинации с А7Т при терапии против вируса иммунодефицита человека (ВИЧ)/СПИД или в комбинации с рибавирином при терапии против НСУ. Вирусные инфекции, которые можно лечить согласно изобретению, включают, но не ограничены указанным, гепатит А, гепатит В, гепатит С, другой не-А/не-В гепатит, вирус герпеса, вирус Эпитейна-Барр (ЕВУ), цитомегаловирус (СМ^, простой герпес, вирус герпеса человека типа 6 (ННV-6), папиллому, поксвирус, пикорнавирус, аденовирус, риновирус, Т-лимфотропный вирус человека типа 1 и 2 (НΤ^V-1/-2), ротавирус человека, бешенство, ретровирусы, включая ВИЧ, энцефалит и респираторные вирусные инфекции. Способы согласно изобретению также можно использовать для модификации различных иммунных ответов.
Обнаружена корреляция между генотипом НСV и ответом на терапию интерфероном. См. патент США № 6030785; Епото!о е! а1., Ы. Еп§1. 1. Мей. 334: 77-81 (1996); Епото!о е! а1., 1. С1ш. Шуек!. 96: 22430 (1995). Процент ответа у пациентов, инфицированных НСV-1Ь, составляет менее 40%. См. патент США № 6030785. Сходные низкие проценты ответа также наблюдались у пациентов, инфицированных НСУЛа. См. там же; НооГпаде1 е! а1., [п1ег^/1го1оду 37: 87-100 (1994). Однако процент ответа у пациентов, инфицированных НСV-2, составляет около 80%. См. патент США № 6030785; Елей е! а1., 8етш. Ыует Όίδ. 15: 82-91 (1995). В действительности, обнаружено, что аминокислотная последовательность отдельной области белка Ы85А НСV-генотипа 1Ь коррелирует с чувствительностью к интерферону. См. патент США № 6030785, включенный в данное описание в виде ссылки. См. также Епото!о е! а1., 1996; Епото!о е! а1., 1995. Данная область идентифицирована как область, определяющая чувствительность к интерферону (ШБК). См. там же.
Конъюгат РСС ШЫ-бета вводят в фармакологически эффективном количестве для лечения любого из описанных выше состояний, и он основан на активности ШЫ бета полимерного конъюгата. Термин «фармакологически эффективное количество» означает количество лекарственного средства или фармацевтического средства, которое будет вызывать биологический или терапевтический ответ ткани, систе
- 45 011829 мы, животного или человека, которого добивается исследователь или клиницист. Это такое количество, которое достаточно для того, чтобы в значительной степени повлиять на положительный клинический ответ при сохранении пониженных уровней побочных эффектов. Количество РОС ΓΕΝ-бета, которое можно вводить нуждающемуся в этом субъекту, находится в пределах 0,01-100 мкг/кг или более предпочтительно 0,01-10 мкг/кг, вводимых в виде однократной или дробных доз.
Введение описанных доз можно осуществлять через день, но предпочтительно его осуществляют раз в неделю или через неделю. Дозы вводят в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 24 недели, путем инъекции.
Введение дозы может осуществляться пероральным, местным, внутривенным, подкожным, внутримышечным или любым другим приемлемым системным способом. По усмотрению лечащего врача, количество вводимого лекарственного средства и используемая схема лечения, конечно, будут зависеть от возраста, пола и истории болезни пациента, подвергаемого лечению, числа нейтрофилов (например, тяжести нейтропении), тяжести конкретного состояния болезни и толерантности пациента к лечению, о которой свидетельствует местная токсичность и системные побочные эффекты.
На практике конъюгаты согласно изобретению вводят в количествах, которые будут достаточны для подавления или предотвращения нежелательных состояний здоровья или заболевания у субъекта, такого как млекопитающее, и используются в форме, наиболее подходящей для таких целей. Композиции предпочтительно приспособлены для внутреннего применения и содержат эффективное количество фармакологически активного соединения согласно изобретению отдельно или в комбинации с другими активными средствами с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями. Соединения особенно полезны, так как они обладают очень низкой токсичностью, если таковая имеет место.
Конъюгаты, описанные в данной заявке, могут составлять активный ингредиент фармацевтической композиции, и обычно их вводят в смеси с подходящими фармацевтическими разбавителями, эксципиентами и носителями (вместе называемыми в данном описании «веществами-носителями»), соответствующим образом выбранными в соответствии с предполагаемой формой введения, то есть в форме пероральных таблеток, капсул, эликсиров, сиропов и т. п. Как правило, композиции будут содержать эффективное количество активного соединения или его фармацевтически приемлемой соли и, кроме того, также могут содержать любые вещества-носители, которые обычно используются в фармацевтической области. В зависимости от предполагаемого способа введения, композиции могут быть в твердой, полутвердой или жидкой дозированной форме, такой, например, как инъекционные препараты, таблетки, суппозитории, пилюли, капсулы замедленного высвобождения, порошки, жидкости, суспензии и т. п., предпочтительно в дозированной лекарственной форме.
Обычные фармацевтические композиции, содержащие фармакологически эффективное количество конъюгата, например РОС ΓΕΝ-бета, вместе с фармацевтически приемлемыми носителями, адъювантами, разбавителями, консервантами и/или солюбилизаторами, можно использовать в практике данного изобретения. Фармацевтические композиции интерферона содержат разбавители различных буферов (например, аргинин, трис-НС1, ацетат, фосфат), имеющих пределы рН и ионной силы, носители (например, сывороточный альбумин человека), солюбилизаторы (например, твин, полисорбат) и консерванты (например, бензиловый спирт). См., например, патент США № 4496537.
Введение активных соединений, описанных в данной заявке, может осуществляться с помощью любых приемлемых способов введения терапевтических средств. Указанные способы включают системное или местное введение, такое как пероральный, назальный, парентеральный, трансдермальный, подкожный или местный способы введения.
Например, для перорального введения в форме таблетки или капсулы (например, желатиновой капсулы) активный компонент лекарственного средства можно комбинировать с пероральным, нетоксичным фармацевтически приемлемым инертным носителем, таким как этанол, глицерин, вода и т. п. Кроме того, при желании или необходимости в смесь также могут быть включены подходящие связующие, лубриканты, дезинтегранты и красители. Подходящие связующие включают крахмал, алюмосиликат магния, крахмальную пасту, желатин, метилцеллюлозу, натрийкарбоксиметилцеллюлозу и/или поливинилпирролидон, сахара, кукурузные подсластители, природные и синтетические камеди, такие как аравийская камедь, трагакантовая камедь или альгинат натрия, полиэтиленгликоль, воски и т.п. Лубриканты, используемые в указанных дозированных формах, включают олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия, диоксид кремния, тальк, стеариновую кислоту, ее магниевую или кальциевую соль и/или полиэтиленгликоль и т. п. Дезинтегранты включают без ограничения крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь, крахмалы, агар, альгиновую кислоту или ее натриевую соль или шипучие смеси и т.п. Разбавители включают, например, лактозу, декстрозу, сахарозу, маннит, сорбит, целлюлозу и/или глицин.
Конъюгаты согласно изобретению также можно вводить в таких пероральных дозированных формах, как таблетки или капсулы с рассчитанным по времени высвобождением и замедленным высвобождением, пилюли, порошки, гранулы, эликсиры, настои, суспензии, сиропы и эмульсии.
Жидкие, в частности инъекционные, композиции можно, например, приготовить растворением, диспергированием и т.д. Активное соединение растворяют или смешивают с фармацевтически чистым
- 46 011829 растворителем, таким как, например, вода, физиологический раствор, водная декстроза, глицерин, этанол и т.п., чтобы таким образом образовать инъекционный раствор или суспензию. Кроме того, можно приготовить твердые формы, подходящие для растворения в жидкости перед инъекцией. Инъекционные композиции предпочтительно представляют собой водные изотоничные растворы или суспензии. Композиции могут быть стерилизованными и/или могут содержать вспомогательные вещества, такие как консерванты, стабилизаторы, увлажнители или эмульгирующие агенты, активаторы растворения, соли для регулирования осмотического давления и/или буферы. Кроме того, они также могут содержать другие терапевтически полезные вещества.
Конъюгаты согласно данному изобретению можно вводить в виде внутривенной (например, в виде болюса или инфузии), внутрибрюшинной, подкожной или внутримышечной формы, все используемые формы хорошо известны специалистам в области фармации. Инъекционные препараты могут быть приготовлены в обычных формах, либо в виде жидких растворов, либо суспензий.
Парентеральное инъекционное введение обычно используют для подкожных, внутримышечных или внутривенных инъекций и инфузий. Например, в том случае, когда используют подкожную инъекцию для доставки 0,01-100 мкг/кг или более предпочтительно 0,01-10 мкг/кг пегилированного ΓΕΝ-бета в течение 1 недели, можно вводить две инъекции по 0,005-50 мкг/кг или более предпочтительно 0,005-5 мкг/кг, соответственно, в 0 и 72 ч. Кроме того, в одном из способов парентерального введения используют имплантацию системы медленного высвобождения или длительного высвобождения, которая обеспечивает сохранение постоянного уровня дозы, согласно патенту США № 3710795, включенному в данное описание в виде ссылки.
Кроме того, предпочтительные для данного изобретения конъюгаты можно вводить в интраназальной форме посредством местного применения подходящих интраназальных наполнителей, или посредством трансдермальных путей, используя формы трансдермальных кожных пластырей, которые хорошо известны специалистам в данной области. При введении в форме системы трансдермальной доставки введение дозы конечно будет непрерывным, а не периодическим в ходе всего режима дозирования. Другие предпочтительные местные препараты включают кремы, мази, примочки, аэрозоли, спреи и гели, при этом вводимое количество может быть 10-100-кратным по сравнению с дозой, обычно вводимой при парентеральном введении.
Для твердых композиций можно использовать эксципиенты, которые включают фармацевтически чистый маннит, лактозу, крахмал, стеарат магния, сахарин натрия, тальк, целлюлозу, глюкозу, сахарозу, карбонат магния и т.п. Активное соединение, определенное выше, также может быть приготовлено в виде суппозиториев с использованием в качестве носителя, например, полиалкиленгликолей, например пропиленгликоля. В некоторых вариантах суппозитории преимущественно готовят из жировых эмульсий или суспензий.
Конъюгаты согласно данному изобретению также можно вводить в форме липосомных систем доставки, таких как небольшие однослойные везикулы, крупные однослойные везикулы и многослойные везикулы. Липосомы могут быть образованы из множества фосфолипидов, включающих холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины. В некоторых вариантах пленка липидных компонентов гидратирована водным раствором лекарственного средства с образованием липидного слоя, инкапсулирующего лекарственное средство, как описано в патенте США № 5262564.
Конъюгаты согласно данному изобретению также могут доставляться с использованием слияний с иммуноглобулином, используемых в качестве отдельных носителей, с которыми связаны молекулы соединений. Соединения согласно данному изобретению также могут быть связаны с растворимыми полимерами в качестве направляемых к мишени носителей лекарственных средств. Такие полимеры могут включать поливинилпирролидон, сополимер пирана, полигидроксипропилметакриламидфенол, полигидроксиэтиласпанамидфенол или полиэтиленоксидполилизин, замещенный остатками пальмитоила. Конъюгаты также могут быть связаны с белками, такими, например, как рецепторные белки и альбумин. Кроме того, соединения согласно данному изобретению могут быть связаны с классом биодеградируемых полимеров, применимых для достижения контролируемого высвобождения лекарственного средства, например полимолочной кислотой, полиэпсилонкапролактоном, полигидроксимасляной кислотой, сложными полиортоэфирами, полиацеталями, полидигидропиранами, полицианоакрилатами и сшитыми или амфипатическими блок-сополимерами гидрогелей.
При желании, вводимая фармацевтическая композиция также может содержать минорные количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как увлажнители или эмульгирующие агенты, агенты для рН-буферов и другие вещества, такие, например, как ацетат натрия, олеат триэтаноламина и т.д.
Режим дозирования с использованием конъюгатов выбирают в соответствии с множеством факторов, включая тип, вид, возраст, массу, пол и состояние здоровья пациента; тяжесть состояния, которое необходимо лечить; путь введения; функционирование почек и печени пациента и конкретное используемое соединение или его соль. Во внимание также принимаются активность соединений согласно изобретению и чувствительность пациента к побочным эффектам. Специалист, лечащий врач или ветеринар, легко может определить и назначить эффективное количество лекарственного средства, необходимое для предотвращения, оказания противодействия или сдерживания прогрессирования состояния.
Пероральные дозы согласно данному изобретению при использовании для получения идентичных
- 47 011829 эффектов будут находится в диапазоне примерно 0,01-100 мкг/кг/сутки перорально или более предпочтительно 0,01-10 мкг/кг/сутки перорально. Композиции предпочтительно готовят в форме таблеток с насечками, содержащих 0,5-5000 мкг или более предпочтительно 0,5-500 мкг активного ингредиента.
Для любого пути введения можно использовать дробные или однократные дозы. Например, соединения согласно данному изобретению можно вводить ежедневно или еженедельно в виде одной дозы или суммарную дозу можно водить дробными дозами в виде 2, 3 или 4 доз.
Любая из указанных выше фармацевтических композиций может содержать 0,1-99, 1-70 или предпочтительно 1-50% активных соединений согласно изобретению в качестве активных ингредиентов.
Как описано выше, за течением заболевания и его ответом на лечение лекарственными средствами можно следить с помощью клинического обследования и данных лабораторных исследований. Эффективность терапии согласно изобретению определяют по степени, с которой ослабляются описанные ранее признаки и симптомы состояния, например хронического гепатита, и степени, в которой исключаются или существенно снижаются обычные побочные эффекты интерферона (т.е. подобные гриппу симптомы, такие как повышенная температура, головная боль, озноб, миалгия, усталость и т.д., и симптомы, связанные с центральной нервной системой, такие как депрессия, парестезия, нарушение концентрации и т.д.).
В некоторых вариантах полиалкилированное соединение согласно изобретению (например, пегилированный интерферон) вводят вместе с одним или несколькими фармацевтическими средствами, применимыми для лечения конкретного состояния. Например, полиалкилированный белок можно вводить в комбинации с известными противовирусным средством или средством для лечения вирусной инфекции. Такие противовирусные соединения включают, например, рибавирин, левовирин, МВ6866 и зидовудин, 3ТС, РТС, ацикловир, ганцикловир, вирамид, νΧ-497, νΧ-950 и I§I§-14803.
Конъюгат и противовирусное средство можно вводить одновременно (например, средства вводят пациенту вместе); вводить последовательно (например, средства вводят пациенту один за другим) или вводить попеременно (например, средства вводят в виде повторяющейся серии, такой как агент А, затем агент В, затем агент А и т.д.).
В практике изобретения предпочтительный РОС ГРЫ-бета (например, РЕС ГЕЫ-бета) можно вводить пациентам, инфицированным вирусом гепатита С. Предпочтительно применение РЕС ШЫ-бетаЛа.
Пациентов для лечения выбирают из пациентов, позитивных по анти-НСV-антителам с документально подтвержденным с помощью биопсии активным хроническим гепатитом.
Для того, чтобы следить за ходом репликации НСV у субъектов в ответ на лечение лекарственным средством, можно измерять НСV-РНК в образцах сыворотки, например, с помощью анализа групповой полимеразной цепной реакции, в которой используют два набора праймеров, полученных из неструктурных областей генов Ы83 и Ы84 генома ΗΟν. См. Рагс1 е! а1., 1991, Ыете Епд. I. Меб. 325: 98-104. И1псЬ е! а1., 1990. I. С1ш. Шуек!., 86: 1609-1614.
Противовирусную активность можно измерить по изменению титра ΗΟν-РНК. Данные о ΗСVРНК можно анализировать путем сравнения титров в конце лечения с измерением исходного уровня до лечения. Снижение ΗСV-РΗК к 4 неделе дает доказательство противовирусной активности соединения. См. К1е!ег е! а1., 1993, АпбткгоЬ. Адеп!к СЬето!Ьег. 37 (3): 595-97; Оп!о е! а1., 1995, I. Меб1са1 ^го1о§у, 46: 109-115. Изменения величин по меньшей мере на два порядка (>2 1од) интерпретируют как доказательство противовирусной активности.
У человека, страдающего в результате хронической инфекции гепатитом С, может проявляться один или несколько из следующих признаков или симптомов: (а) повышенный уровень аланинаминотрансферазы (АЬТ) в сыворотке, (Ь) положительный тест на анти-НС^антитела, (с) присутствие НС^ о чем свидетельствует положительный тест на ΗСV-РΗК, (б) клинические признаки хронической болезни печени, (е) повреждение клеток печени. Такие критерии могут быть использованы не только для диагностики гепатита С, но могут быть использованы для оценки реакции пациента на лечение лекарственным средством.
Известно, что повышенный уровень аланинаминотрансферазы (АЬТ) и аспартатаминотрансферазы (А8Т) возникает в случае неконтролируемого гепатита С, и завершенный ответ на лечение обычно определяют как нормализацию уровней указанных ферментов в сыворотке, особенно АЬТ. См. Иау1к е! а1., 1989, Ыете Епд. I. Меб. 321: 1501-1506. АЬТ является ферментом, высвобождаемым, когда разрушаются клетки печени, и является симптомом ΗСV-инфекции. Интерферон вызывает синтез фермента 2',5'-олигоаденилатсинтетазы (2'5'ОА8), который, в свою очередь, приводит к деградации вирусной мРНК. См. Ноид1ит, 1983, С11шса1 РЬагтасо1о§у 2: 20-28. Увеличения уровней 2'5'ОА8 в сыворотке соответствуют снижению уровней АЬТ.
Гистологические исследования образцов биопсии печени можно использовать в качестве второго критерия для оценки. См., например, Кпобе11 е! а1., 1981, Нера!о1о§у 1: 431-435, предложенный которым гистологический индекс активности (портальное воспаление, мелкоочаговый или мостовидный некроз, лобулярное повреждение и фиброз) обеспечивает способ оценки активности заболевания.
Безопасность и толерантность или эффективность лечения можно определить по клиническим оценкам и измерению количества лейкоцитов и нейтрофилов. Это можно оценить посредством периодического мониторинга гематологических параметров, например количества лейкоцитов, нейтрофилов, тромбоцитов и эритроцитов.
- 48 011829
Могут быть приготовлены различные другие препараты замедленного или длительного высвобождения с использованием обычных способов, хорошо известных в данной области.
Как будет понятно специалистам в данной области, может быть осуществлено множество модификаций и изменений данного изобретения, не отходя от сути и не выходя за рамки объема. Приведенные в данном описании конкретные варианты предложены только в качестве примера, и изобретение должно быть ограничено только условиями прилагаемой формулы изобретения, вместе с полным объемом эквивалентов, на которые указанная формула изобретения дает право. Все патенты и публикации, цитиро ванные в данном описании, включены в виде ссылки.
Примеры
Пример 1. Синтез активированных полиалкиленгликолей.
А) Алкилирование спиртов.
Активированные полиалкиленгликоли синтезировали с помощью алкилирования полиалкиленгликоля, имеющего свободную концевую гидроксильную функциональную группу. Общая реакция изображена на схеме I.
Полиалкиленгликоль (Р-ОН) подвергают взаимодействию с алкилгалогенидом (А) с образованием простого эфира (В). Затем соединение В гидроксилируют с образованием спирта (С), который окисляют до альдегида (Ό). В указанных соединениях η является целым числом от 0 до 5 и Ζ может быть насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью. Ζ также может быть С3-С7 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенной или незамещенной алкарильной (алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом) или гетероалкарильной группой. В случае замещенных соединений заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, силил, простой эфир или алкилтиогруппа. Обычно Р-ОН является полиэтиленгликолем (РЕО) или монометоксиполиэтиленгликолем (тРЕО), имеющим молекулярную массу от 5000 до 40000 Да.
Например, синтез тРЕО-О-2-метилпропиональдегида изображен на схеме II.
Схема II затем
1.ВН3/ТГФ
2. Н2О2, №ОН
тРЕО-ОН с молекулярной массой 20000 Да (тРЕО-ОН 20 кДа; 2,0 г; 0,1 ммоль, 8ипЬю) обрабатывали ЖаН (12 мг; 0,5 ммоль) в ТГФ (35 мл). Затем к смеси добавляли 50 экв. 3-бром-2-метилпропена (3,34 г; 5 ммоль) и каталитическое количество КГ Полученную в результате смесь кипятили с обратным холодильником в течение 16 ч. Затем добавляли воду (1 мл) и растворитель удаляли в вакууме. К остатку добавляли СН2С12 (25 мл) и органический слой отделяли, сушили над безводным Жа28О4 и объем уменьша
- 49 011829 ли примерно до 2 мл. Указанный СН2С12-раствор по каплям добавляли к эфиру (150 мл). Полученный в результате белый осадок собирали, получая 1,9 г соединения 1. 1Н ЯМР (СЭС13. 400 МГц): δ 4,98 (с, 1Н), 4,91 (с, 1Н), 1,74 (с, 3Н).
К соединению 1 (1,9 г; 0,1 ммоль) в ТГФ (20 мл) и СН2С12 (2 мл) при 0°С добавляли ВН3 в ТГФ (1,0М; 3,5 мл). Смесь перемешивали на бане со льдом в течение 1 ч. К полученной смеси медленно добавляли ЫаОН (2,0М; 2,5 мл), затем 30% Н2О2 (0,8 мл). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 ч. Следуя описанному выше способу обработки (СН2С12, осаждение из эфира), получали 1,8 г соединения 2 в виде белого твердого вещества. 'Н ЯМР (СОС13, 400 МГц): δ 1,80 (м, 1Н), 0,84 (д, 3Н).
Соединение 2 (250 мг) растворяли в СН2С12 (2,5 мл) и добавляли периодинан Десс-Мартина (ΌΜΡ; 15 мг) при перемешивании в течение 30 мин при комнатной температуре. К смеси добавляли насыщенный ЫаНСО3 и Ыа282О3 (2 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Следуя описанному выше способу обработки, получали соединение 3 (тРЕС-О-2-метилпропиональдегид, 120 мг) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (СОС13, 400 МГц): δ 9,75 (с, 1Н), 2,69 (м, 1Н), 1,16 (д, 3Н).
Сходному способу следуют в случае ароматических спиртов, как показано на схеме III.
В общем, ароматический спирт (Е) подвергают взаимодействию с алкилгалогенидом (А) с образованием простого моноэфира (Е). Затем оставшуюся спиртовую группу соединения Е превращают в галогенид (например, бромид) в соединении С, которое подвергают взаимодействию с полиалкиленгликолем (Р-ОН), получая простой эфир (Н). Затем полученное соединение превращают в альдегид (1) через гидроборирование до первичного спирта (I) с последующим окислением. В указанных соединениях η является целым числом от 0 до 5, ά равно 0 или является целым числом от 1 до 4 и Ζ может быть насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью. Ζ также может быть С3-С7 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенной или незамещенной алкарильной (алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом) или гете
- 50 011829 роалкарильной группой. В случае замещенных соединений заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, силил, простой эфир или алкилтиогруппа.
Кроме того, Т1 и Т2 независимо отсутствуют или являются насыщенной или ненасыщенной С1С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью и могут быть в орто-, мета- или пара-положении друг к другу. Каждый Ь (если присутствует) независимо является насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С7 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой. Заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, силил, простой эфир или алкилтиогруппа.
Обычно Р-ОН является полиэтиленгликолем (РЕО) или монометоксиполиэтиленгликолем (тРЕО), имеющим молекулярную массу от 5000 до 40000 Да.
Например, синтез тРЕО-О-параметилфенил-О-2-метилпропиональдегида (8) показан на схеме IV.
Схема IV
СН3 2
затем $(>экв. 5
Кат. К]
8
К раствору 4-гидроксибензилового спирта (2,4 г; 20 ммоль) в ТГФ (50 мл) и воде (2,5 мл) сначала добавляли гидроксид натрия (1,5 г; 37,5 ммоль), а затем 3-бром-2-метилпропен (4,1 г; 30 ммоль). Полученную реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 16 ч. К смеси добавляли 10% лимонную кислоту (2,5 мл) и растворитель удаляли в вакууме. Остаток экстрагировали этилацетатом (3x15 мл) и объединенные органические слои промывали насыщенным №1С1 (10 мл), сушили и концентрировали, получая соединение 4. (3,3 г; 93%). 1Н ЯМР (СОС13, 400 МГц): δ 7,29 (м, 2Н), 6,92 (м, 2Н), 5,14 (с, 1Н), 5,01 (с, 1Н), 4,56 (с, 2Н), 4,46 (с, 2Н), 1,85 (с, 3Н).
Мезилхлорид (М§С1; 2,5 г; 15,7 ммоль) и триэтиламин (ТЕА; 2,8 мл; 20 ммоль) добавляли к раствору соединения 4 (2,0 г; 11,2 ммоль) в СН2С12 (25 мл) при 0°С и реакционную смесь помещали в холодильник на 16 ч. Обычная обработка давала бледно-желтое масло (2,5 г; 87%). 'Н ЯМР (ΟΌΟ’Γ. 400 МГц): δ 7,31 (м, 2Н), 6,94 (м,2Н), 5,16 (с, 1Н), 5,01 (с, 1Н), 5,03 (с, 2Н), 4,59 (с,2Н), 4,44 (с, 2Н), 3,67 (с, 3Н), 1,85 (с, 3Н).
Полученное масло (2,4 г; 9,4 ммоль) растворяли в ТГФ (20 мл) и добавляли Ь1Вг (2,0 г; 23,0 ммоль). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч и затем охлаждали до комнатной температуры. К смеси добавляли воду (2,5 мл) и растворитель удаляли в вакууме. Остаток экстрагировали этилацетатом (3x15 мл) и объединенные органические слои промывали насыщенным №1С1 (10 мл), сушили над безводным №28О4 и концентрировали, получая требуемый бромид 5 (2,3 г; 96%) в виде бледно-желтого масла. !Н ЯМР (СПС13, 400 МГц): δ 7,29 (м, 2Н), 6,88 (м, 2Н), 5,11 (с, 1Н), 4,98 (с, 1Н), 4,53 (с, 2Н), 4,44 (с, 2Н), 1,83 (с, 3Н).
- 51 011829 тРЕО-ОН 20 кДа (2,0 г; 0,1 ммоль, 8ипЫо) обрабатывали ЫаН (12 мг; 0,5 ммоль) в ТГФ (35 мл) и к смеси добавляли соединение 5 (0,55 г; 22,8 ммоль) с каталитическим количеством КГ Полученную в результате смесь кипятили с обратным холодильником в течение 16 ч. К смеси добавляли воду (1,0 мл) и растворитель удаляли в вакууме. К остатку добавляли СН2С12 (25 мл) и органический слой отделяли, сушили над безводным Ыа28О4 и объем уменьшали примерно до 2 мл. Добавление по каплям в раствору эфира (150 мл) давало белый осадок, который собирали, получая 6 (1,5 г) в виде белого порошка. 1Н ЯМР (СОС13, 400 МГц): δ 7,21 (д, 2Н), 6,90 (д, 2Н), 5,01 (с, 1Н), 4,99 (с, 1Н), 4,54 (с, 2Н), 4,43 (с, 2Н), 1,84 (с, 3Н).
К раствору соединения 6 (1,0 г; 0,05 ммоль) в ТГФ (10 мл) и СН2С12 (2 мл), охлажденному до 0°С, добавляли ВН3/ТГФ (1,0М; 3,5 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. Медленно добавляли 2,0М раствор ЫаОН (2,5 мл) и затем 30% Н2О2 (0,8 мл). Реакционной смеси давали возможность нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 ч. Следуя описанному выше способу обработки (СН2С12, осаждение из эфира), получали соединение 7 (350 мг) в виде белого твердого вещества. Ή ЯМР (СПС13, 400 МГц): δ 7,21 (д, 2Н), 6,84 (д, 2Н), 4,54 (с, 2Н), 2,90 (м, 2Н), 1,96 (д, 3Н).
Соединение 7 (150 мг; 0,0075 ммоль) растворяли в СН2С12 (1,5 мл) и добавляли ΌΜΡ (15 мг) при перемешивании реакционной смеси при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Ή ЯМР (СЭСТ,. 400 МГц): δ 9,76 (с, 1Н), 7,21 (д, 2Н), 6,78 (д, 2Н), 4,44 (с, 2Н), 4,14 (м, 2Н), 2,85 (м, 1Н), 1,21 (д, 3Н).
К смеси добавляли насыщенный ЫаНСО3 (0,5 мл) и Ыа282О3 (0,5 мл) и перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 1 ч. Следуя описанному выше способу обработки (раствор СН2С12, осажденный из эфира), получали соединение 8 (92 мг) в виде белого твердого вещества.
Подобным образом синтезировали тРЕО-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегид (9), как изображено на схеме V.
Схема V
Η0'ΎϊΓ' ™ СНз сн3 1. М1СЬ ТЕА
1Р 1ЛВГ η
.он тРКГ ЫжН затем $0 экв. И СНз
В
1. ВН/ТГФ
-
ϋ ί
К раствору 3-гидроксибензилового спирта (2,4 г; 20 ммоль) в ТГФ (50 мл) и воде (2,5 мл) сначала добавляли гидроксид натрия (1,5 г; 37,5 ммоль), а затем 3-бром-2-метилпропен (4,1 г; 30 ммоль). Полученную реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 16 ч. К смеси добавляли 10% лимонную кислоту (2,5 мл) и растворитель удаляли в вакууме. Остаток экстрагировали этилацетатом (3x15 мл) и объединенные органические слои промывали насыщенным ЫаС1 (10 мл), сушили и концентрировали, получая соединение 10 (3,2 г; 90%). Ή ЯМР (СЭСТ,. 400 МГц): δ 7,26 (м, 1Н), 6, 94 (м, 2Н), 6,86 (м, 1Н), 5,11 (с, 1Н), 5,01 (с, 1Н), 4,61 (с, 1Н), 4,44 (с,2Н), 1,82 (с, 3Н).
М§С1 (2,5 г; 15,7 ммоль) и ТЕА (2,8 мл; 20 ммоль) добавляли к раствору соединения 10 (2,0 г; 11,2 ммоль) в СН2С12 (25 мл) при 0°С и реакционную смесь помещали в холодильник на 16 ч. Обычная обработка давала бледно-желтое масло (2,5 г; 87%). Ή ЯМР (СПС13, 400 МГц): δ 7,31 (м, 1Н), 7,05 (м, 2Н), 6,91 (м, 1Н), 5,16 (с, 1Н), 5,04 (с,1Н), 4,59 (с, 1Н), 4,46 (с, 2Н), 3,71 (с, 3Н), 1,84 (с, 3Н).
Полученное масло (2,4 г; 9,4 ммоль) растворяли в ТГФ (20 мл) и добавляли Ь1Вг (2,0 г; 23,0 ммоль). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч и затем охлаждали до комнатной температуры. К смеси добавляли воду (2,5 мл) и растворитель удаляли в вакууме. Остаток экстрагировали этилацетатом (3x15 мл) и объединенные органические слои промывали насыщенным ЫаС1 (10 мл), сушили над безводным Ыа28О4 и концентрировали, получая требуемый бромид 11 (2,2 г; 92 %) в виде бледно-желтого масла. Ή ЯМР (СПС13, 400 МГц): δ 7,29 (м, 1Н), 6, 98 (м, 2Н), 6,85 (м, 1Н), 5,14 (с, 2Н), 4,98 (с, 2Н), 4,50 (с, 2Н), 4,44 (с, 2Н), 1,82 (д, 3Н).
- 52 011829 тРЕС-ОН 20 кДа (2,0 г; 0,1 ммоль, 8ипЫо) обрабатывали NаН (12 мг; 0,5 ммоль) в ТГФ (35 мл) и к смеси добавляли соединение 11 (0,55 г; 22,8 ммоль) с каталитическим количеством ΚΙ. Полученную в результате смесь кипятили с обратным холодильником в течение 16 ч. К смеси добавляли воду (1,0 мл) и растворитель удаляли в вакууме. К остатку добавляли СН2С12 (25 мл) и органический слой отделяли, сушили над безводным №ь8О4 и объем уменьшали примерно до 2 мл. Добавление по каплям к раствору эфира (150 мл) давало белый осадок, который собирали, получая соединение 12 (1,8 г) в виде белого порошка. 1Н ЯМР (СПС13, 400 МГц): δ 7,19 (м, 1Н), 6,88 (м, 2Н), 6,75 (м, 1Н), 4,44 (с, 2Н), 4,10 (м, 2Н), 1,82 (д, 3Н).
К раствору соединения 12 (1,0 г; 0,05 ммоль) в ТГФ (7,5 мл) и СН2С12 (2,5 мл), охлажденного до 0°С, добавляли ВН3/ТГФ (1,0М; 3,5 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. Медленно добавляли 2,0М раствор №ОН (3 мл), затем 30% Н2О2 (0,85 мл). Реакционной смеси давали возможность нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 ч. Следуя описанному выше способу обработки (СН2С12, осаждение из эфира), получали соединение 13 (450 мг) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (СПС13, 400 МГц): δ 7,15 (м, 1Н), 6,84 (м,2Н), 6,69 (м, 1Н), 4,50 (с, 2Н), 2,90 (м, 2Н), 1,95 (д, 3Н).
Соединение 13 (200 мг; 0,01 ммоль) растворяли в СН2С12 (1,5 мл) и добавляли ЭМР (20 мг) при перемешивании реакционной смеси при комнатной температуре в течение 1 ч. 1Н ЯМР (СОС13, 400 МГц): δ 9,74 (с, 1Н), 7,17 (м, 1Н), 6,86 (м, 2Н), 6,74 (м, 1Н), 4,48 (с, 2Н), 4,15 (м, 2Н), 2,78 (м, 1Н), 1,22 (д, 3Н).
К смеси добавляли насыщенный NаНСΟ3 (0,5 мл) и №1282О3, (0,5 мл) и перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 1 ч. Следуя описанному выше способу обработки (СН2С12-раствор, осаждение из эфира), получали соединение 9 (142 мг) в виде белого твердого вещества.
В) Получение посредством взаимодействия с ароматическими спиртами.
Активированные полиалкиленгликоли синтезировали с помощью реакции Митсунобу между полиалкиленгликолем, имеющим свободную концевую гидроксильную функциональную группу, и ароматическим спиртом. Схема реакции изображена на схеме νΙ.
Полиалкиленгликоль (Р-ОН) подвергают взаимодействию со спиртом (К) с образованием простого эфира (Ь). В указанных соединениях т равно 0 или 1, й равно 0 или является целым числом от 1 до 4 и п равно 0 или является целым числом от 1 до 5. Υ означает О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, ΤΌΝΕ', 8О2ХК' и ΝΚ'. Т1 и Т2 независимо отсутствуют или являются насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью.
К' и Ζ независимо означают водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью.
Каждый Ь (если присутствует) независимо является насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С7 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом. Алкил является С1-С2и насыщенным или ненасыщенным алкилом или гетероалкарильной группой, и заместителями могут быть галоген, гидроксил, карбонил, карбоксилат, сложный эфир, формил, ацил, тиокарбонил, сложный тиоэфир, тиоацетат, тиоформиат, алкоксил, фосфорил, фосфонат, фосфинат, аминогруппа, амидогруппа, амидин, имин, цианогруппа, нитрогруппа, азидогруппа, сульфгидрил, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидогруппа, сульфонил, гетероциклил, аралкил, ароматический остаток, гетероароматический остаток, иминогруппа, силил, простой эфир или алкилтиогруппа.
Р означает полимер полиалкиленгликоля. Обычно Р-ОН является полиэтиленгликолем (РЕС) или монометоксиполиэтиленгликолем (тРЕС), имеющим молекулярную массу от 5000 до 40000 Да.
Например, синтез тРЕС-О-парафенилацетальдегида (16) изображен на схеме УЛ.
- 53 011829
Схема VII кхМкн~г^г “* ν Η РРЦ, и сНгО,
1«
4-Гидроксифенилацетальдегид (15) синтезировали, как описано в Не1егосус1ез, 2000, 53, 777-784. 4Гидроксифенетиловый спирт (соединение 14; 1,0 г; 7,3 ммоль; Л1бпс11) растворяли в диметилсульфоксиде (8 мл; Л1бпс11). Медленно при перемешивании добавляли ТЕА (2,2 мл; 16 ммоль; Л1бпс11). Комплекс пиридин-триоксид серы (8О3-ру) (2,5 г; 16 ммоль; Л1бпс11) полностью растворяли в диметилсульфоксиде (9 мл, Л1бпс11) и полученный раствор по каплям добавляли к спирту при энергичном перемешивании. После перемешивания в течение 1 ч при комнатной температуре реакционную смесь разбавляли СН2С12, затем промывали ледяной водой. Органический слой сушили над Ыа28О4, фильтровали и концентрировали досуха. Очистка с использованием хроматографии на силикагеле со смесью гексан-этилацетат в качестве элюента (5:1, затем 2:1) давала 488 мг (49%) 4-гидроксифенилацетальдегида (15).
тРЕС-ОН 20 кДа (101 мг; 0,005 ммоль) и 4-гидроксифенилацетальдегид (15) (39 мг; 0,29 ммоль) подвергали четырехкратной азеотропной перегонке с толуолом, затем собирали безводным СН2С12 (2 мл, Л1бпс11). К полученному раствору при перемешивании добавляли трифенилфосфин (РР113; 66 мг; 0,25 ммоль; Л1бпс11) и затем диизопропилазодикарбоксилат (ΌΜΩ; 49 мкл; 0,25 ммоль; Л1бпс11). После перемешивания в течение 3 дней при комнатной температуре реакционную смесь по каплям добавляли к энергично перемешиваемому диэтиловому эфиру. Полученный в результате осадок выделяли фильтрованием и 3 раза промывали диэтиловым эфиром. Неочищенный продукт собирали в СН2С12 и промывали водой. Органический слой сушили над Ыа28О4, фильтровали и концентрировали досуха. Продукт собирали в минимальном количестве СН2С12, затем осаждали, добавляя по каплям к перемешиваемому диэтиловому эфиру. Полученный продукт собирали фильтрованием, 3 раза промывали диэтиловым эфиром и сушили, получая 63 мг (62%) тРЕС-О-парафенилацетальдегида (16).
Синтез тРЕС-О-парафенилпропиональдегида (17) осуществляли сходным образом.
4-Гидроксифенилпропиональдегид получали в результате синтеза, аналогичного синтезу 4-гидроксифенилацетальдегида (Не1егосус1ез, 2000, 53, 777-784). 3-(4-Гидроксифенил)-1-пропанол (1,0 г; 6,6 ммоль, Л1бпс11) растворяли в диметилсульфоксиде (8 мл, Л1бпс11). Медленно при перемешивании добавляли ТЕЛ (2,0 мл; 14 ммоль; Л1бпс11). Комплекс пиридин-триоксид серы (8О3-ру) (2,3 г; 15 ммоль; Л1бпс11) полностью растворяли в диметилсульфоксиде (9 мл, Л1бпс11) и полученный раствор по каплям добавляли к спирту при энергичном перемешивании. После перемешивания в течение 1 ч при комнатной температуре реакционную смесь разбавляли СН2С12, затем промывали ледяной водой. Органический слой сушили над Ыа28О4, фильтровали и концентрировали досуха. Очистка с использованием хроматографии на силикагеле со смесью гексан-этилацетат в качестве элюента (5:1, затем 2:1) давала 745 мг (75%) 4-гндроксифенилпропиональдегнда.
тРЕС-ОН 20 кДа (100 мг; 0,005 ммоль) и 4-гидроксифенилпропиональдегид (40 мг; 0,27 ммоль) подвергали четырехкратной азеотропной перегонке с толуолом, затем собирали безводным СН2С12 (2 мл, Л1бпс11). К полученному раствору добавляли трифенилфосфин (66 мг; 0,25 ммоль; Л1бг1сП) и затем диизопропилазодикарбоксилат (49 мкл; 0,2 5 ммоль; Л1бпс11) при перемешивании. После перемешивания в течение 3 дней при комнатной температуре реакционную смесь по каплям добавляли к энергично перемешиваемому диэтиловому эфиру. Полученный в результате осадок выделяли фильтрованием и 3 раза промывали диэтиловым эфиром. Неочищенный продукт собирали в СН2С12 и промывали водой. Органический слой сушили над Ыа28О4, фильтровали и концентрировали досуха. Продукт собирали в минимальном количестве СН2С12, затем осаждали, добавляя по каплям к перемешиваемому диэтиловому эфиру. Полученный продукт собирали фильтрованием, 3 раза промывали диэтиловым эфиром и сушили, получая 60 мг (60%) тРЕС-О-парафенилпропиональдегида (17).
Таким образом также получали тРЕС-О-метафенилацетальдегид (18).
1>
- 54 011829
3-Гидроксифенилацетальдегид получали в результате синтеза, аналогичного синтезу 4-гидроксифенилацетальдегида (Не1егосус1е§, 2000, 53, 777-784). 3-Гидроксифенетиловый спирт (1,0 г; 7,5 ммоль; Л1бпс11) растворяли в диметилсульфоксиде (8 мл, Л1<!пс11). Медленно при перемешивании добавляли ТЕА (2,0 мл; 14 ммоль, АИлсй). Комплекс пиридин-триоксид серы (8О3-ру) (2,4 г; 15 ммоль; А1бпс11) полностью растворяли в диметилсульфоксиде (8 мл, АИлсй) и полученный раствор по каплям добавляли к спирту при энергичном перемешивании. После перемешивания в течение 1 ч при комнатной температуре реакцию гасили ледяной водой, затем экстрагировали СН2С12. Органический слой сушили над Иа28О4, фильтровали и концентрировали досуха. Очистка с использованием хроматографии на силикагеле со смесью гексанэтилацетат в качестве элюента (3:1, затем 1:1) давала 225 мг (22%) 3-гидроксифенилацетальдегида.
тРЕО-ОН 20 кДа (307 мг; 0,015 ммоль) и 3-гидроксифенилацетальдегид (117 мг; 0,86 ммоль) подвергали четырехкратной азеотропной перегонке с толуолом, затем собирали безводным СН2С12 (5 мл, А1бпс11). К полученному раствору добавляли трифенилфосфин (200 мг; 0,76 ммоль, А1бпс11) и затем диизопропилазодикарбоксилат (147 мкл; 0,75 ммоль; А1бпс11) при перемешивании. После перемешивания в течение 3 дней при комнатной температуре реакционную смесь по каплям добавляли к энергично перемешиваемому диэтиловому эфиру. Полученный в результате осадок выделяли фильтрованием, и 3 раза промывали диэтиловым эфиром, и сушили, получая 284 мг (93%) тРЕО-О-метафенилацетальдегида (18).
Хиральные соединения РЕО-циннамат-И-гидроксисукцинимата (ИН8) получали, например, как показано на схемах VIII и IX.
- 55 011829
Соединения РЕС-дигидроуроканат-ЫН8 также получали с помощью реакции Митсунобу, как показано на схеме X.
Соединения РЕС-дигидроциннамат-ЫН8 также создавали из ароматического спирта, как показано на схеме XI.
Схема XI
РЕС-бензофураны и РЕС-индолы получали, как показано на схемах XII и XIII. Схема XII
Схема XIII
- 56 011829
С) Получение с помощью реакции РЕС-аминов.
РЕС-амины подвергали взаимодействию с алкилгалогенидами с образованием РЕС-амидов. Пример образования конъюгата РЕС-амидбициклооктан-ΝΗδ показан на схеме XIV.
РЕС-первичный амин конъюгируют с арилгалогенидом с образованием конъюгата РЕС-вторичный амин, который затем подвергают взаимодействию в условиях Хека (стереоспецифичное катализируемое палладием связывание алкена с органическим галогенидом или трифлатом в отсутствие β-атомов водорода при 8р3-гибридизованных атомах) с ΝΗδ-алкеном с образованием требуемого РЕС-конъюгата. Синтез содержащего пиримидин конъюгата показан на схеме XV.
Подобным способом также синтезируют конъюгаты РЕС-сульфонамид, как показано на схеме XVI. Схема XVI
дигидроциннамат-3-сульфонамид
дигидроциннамат-4-сульфонамид
- 57 011829
Ό) Соединения, образованные в результате реакции с гетероциклами.
РЕС-соединения подергают взаимодействию с находящимися в цикле или не в цикле атомами азота в гетероциклах с образованием химически активных видов РЕС. Типичные реакции показаны на схемах XVII для аминопирролидина и XVIII для различных пиперазинов.
Схема XVII
ГЕИсунАти ХНцМ
₽Е<ЧО^^«<
Ζ Пиперазин
3. $-6ромпропилмалеимид
1. Ангидрид трифторметансульфоновой кислоты Основание Хюнига
X Пиперазин
3. Акрилонитрил
4. НаВИЛОСЬ
1. Ангидрид трифторметансульфоновой кислоты Основание Хюн ига
2. Пиперазин
3. Янтарный ангидрид
4. ЕХХУНО-НН5
РЕ6. ^0' он
о-мна
Пример 2. Получение пептидных конъюгатов.
Пептидные конъюгаты согласно данному изобретению можно получить в результате взаимодействия белка с активированной молекулой РСС. Например, интерферон (ГЕЫ) можно подвергнуть взаимодействию с РЕС-альдегидом в присутствии восстановителя (например, цианборогидрида натрия) посредством восстановительного алкилирования, чтобы получить конъюгат РЕС-белок, связанный амидной связью. См., например, европейский патент 0154316 В1.
ГЕЫ-в-1а человека пегилировали следующими активированными полиалкиленгликолями согласно изобретению: 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом, 20 кДа тРЕС-О-параметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом, 20 кДа тРЕС-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом, 20 кДа тРЕС-Опарафенилацетальдегидом, 20 кДа тРЕС-О-парафенилпропиональдегидом и 20 кДа тРЕС-О-метафенилацетальдегидом. Пегилированные белки очищали до гомогенности от соответствующих реакционных смесей и подвергали серии характеристических тестов, чтобы идентифицировать, выяснить чистоту и эффективность модифицированных белков.
Подробное описание получения и характеризации ГЕЫ-в-1а человека, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом, 20 кДа тРЕС-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом и 20 кДа тРЕС-О-парафенилацетальдегидом, приведено ниже.
А) Получение и характеристика модифицированного 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропинальдегидом ГЕЫ-3-1 а.
ГЕЫ-в-1а человека пегилировали по его Ы-концу 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом. Продукт химической реакции восстановительного алкилирования, используемой для включения РЕС в основную цепь ГЕЫ-в-1а, приводил к образованию аминной связи, которая очень стабильна по отношению к деградации. Пегилированный ГЕЫ-в-1а подвергали всесторонней характеристике, включая анализ с помощью 8Э8-ПААГ, эксклюзионной хроматографии по размеру (8ЕС), пептидного картирования и оценки активности при анализе противовирусной активности ίη νίίτο. Чистота продукта, которую оцени
- 58 011829 вали с помощью 8Э8-ПААГ и 8ЕС, составляла более 90%. В пегилированном образце не было признаков агрегатов. Остаточные уровни немодифицированного [ΕΝ-β-1η в продукте были ниже предела количественного определения, но, по-видимому, составляли примерно 1% продукта.
Удельная активность пегилированного ШЖ-в-1а в анализе противовирусной активности была снижена примерно в 2 раза по сравнению с немодифицированным ШЖ-в-1а (ЕС50=32 пг/мл для ШЖ-в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-2-метилпропиональдегидом, по сравнению с ЕС50=14 пг/мл для немодифицированного IΕN-β-1а). Основную массу пегилированного ШЖ-в-1а готовили в концентрации 30 мкг/мл в фосфатно-солевом буфере (РВ8), рН 7,3, содержащем 14 мг/мл сывороточного альбумина человека (ЧСА), подобно составу, используемому для АVОЖЕX® (ВОден, СатЬпбде, МА), который был подвергнут всесторонней характеристике. Продукт предоставляли в виде замороженной жидкости, которую хранили при -70°С.
Свойства ШЖ-в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-2-метилпропиональдегидом, суммированы в табл. 1.
Таблица 1
Свойства ШЖ-в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-2-метилпропиональдегидом Эффективность пегилирования >90%
Отношение ΙΓΝ- -1а/РЕС 1:1
Чистота >90%
Положение связывания Ν-конец
Противовирусная активность ЕС50 32 пг/мл
1. Получение ШЖ-в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-2-метилпропиональдегидом.
мл АVОЖЕX®, не приготовленного в виде препарата (нефасованный промежуточный продукт ГОЖ-вИа, клиническая партия нефасованного лекарственного средства, которая прошла все испытания для применения на человеке, в концентрации 250 мкг/мл в 100 мМ фосфате натрия, рН 7,2, 200 мМ ЖаС1), разбавляли 12 мл 165 мМ МЕ8, рН 5,0, и 50 мкл 5Ж НС1. Образец наносили на колонку ЕЕ с 8Р-сефарозой объемом 300 мкл (Рйагтааа). Колонку промывали 3x300 мкл 5 мМ фосфата натрия рН 5,5, 75 мМ ЖаС1 и белок элюировали 5 мМ фосфатом натрия рН 5,5, 600 мМ ЖаС1. Элюированные фракции анализировали в отношении поглощения при 280 нм и концентрацию IЕN-β-1а в образцах оценивали, используя коэффициент экстинкции 1,51 для раствора 1 мг/мл. Фракции пика объединяли, получая раствор с концентрацией ШЖ-в-1а 3,66 мг/мл, который затем разбавляли до 1,2 мг/мл водой.
К 0,8 мл IЕN-β-1а из разбавленного пула элюата с 8Р-сефарозы добавляли 0,5М фосфат натрия рН 6,0 до 50 мМ, добавляли цианоборогидрид натрия (А1бпс11) до 5 мМ и добавляли 20 кДа тРЕО-О-2-метилпропиональдегид до 5 мг/мл. Образец инкубировали при комнатной температуре в течение 16 ч в темноте. Пегилированный ШЖ-в-1а очищали из реакционной смеси на ЕЕ-колонке с 8Р-сефарозой объемом 0,5 мл следующим образом. 0,6 мл реакционной смесь разбавляли 2,4 мл 20 мМ МЕ8 рН 5,0 и наносили на колонку с 8Р-сефарозой. Колонку промывали фосфатом натрия рН 5,5, 75 мМ ЖаС1 и затем пегилированный ШЖ-в-1а элюировали с колонки с помощью 25 мМ МЕ8 рН 6,4, 400 мМ ЖаС1. Затем пегилированный ШЖ-в-1а очищали на фракционирующей по размеру колонке 8ирего5е 6 НК 10/30 ЕРЬС, используя 5 мМ фосфат натрия рН 5,5, 150 мМ ЖаС1 в качестве подвижной фазы. Фракционирующую колонку (25 мл) элюировали при 20 мл/ч и собирали фракции по 0,5 мл. Элюированные фракции анализировали в отношении содержания белка по поглощению при 280 нм, объединяли и определяли концентрацию белка в пуле. Концентрацию пегилированного ШЖ-в-1а выражали в эквивалентах ШЖ, так как остаток РЕО не вносит вклада в поглощение при 280 нм. Отбирали образцы пула для анализа и остаток разбавляли до 30 мкг/мл буфером для приготовления препарата, содержащим ЧСА, делили на аликвоты 0,25 мл/флакон и хранили при -70°С.
2. УФ-спектр очищенного ШЖ-в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-2-метилпропиональдегидом.
УФ-спектр (240-340 нм) ШЖ-в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-2-метилпропиональдегидом, получали с использованием предварительно приготовленного в виде препарата с ЧСА нефасованного образца. Пегилированный образец проявлял максимум поглощения при 278-279 нм и минимум поглощения при 249-250 нм, что согласуется с данными, наблюдаемыми в случае немодифицированного нефасованного промежуточного продукта ШЖ-в-1а. Концентрацию белка пегилированного продукта оценивали на основании спектра, используя коэффициент экстинкции ε280 0,1%=1,51. Концентрация белка в пегилированном нефасованном продукте составляла 0,23 мг/мл. В образце не было мутности, о чем свидетельствует отсутствие поглощения при 320 нм.
3. Характеристика ШЖ-в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-2-метилпропиональдегидом, с помощью 8Э8-ПААГ.
мкг немодифицированного и модифицированного 20 кДа тРЕО-О-2-метилпропиональдегидом
- 59 011829
ШЫ-рЧа подвергали электрофорезу в 8Б8-ПААГ в восстанавливающих условиях в геле с 10-20% градиентом. Гель окрашивали Кумасси бриллиантовым синим В-250, и он показан на фиг. 1 (дорожка А, маркеры молекулярной массы (сверху вниз; 100, 68, 45, 27 и 18 кДа, соответственно); дорожка В, немодифицированный ШЫ-рЧа; дорожка С, ШЫ-рЧа, модифицированный 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом). Анализ в 8Б8-ПААГ модифицированного 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом ШЫ-рЧа выявил одну основную полосу с кажущейся массой 55 кДа, что согласуется с модификацией одним РЕС. Не выявлено форм с более высокой массой, возникающих в результате присутствия дополнительных групп РЕС. В очищенном пегилированном продукте обнаружен немодифицированный ШЫ-рЧа; однако, его количество ниже предела количественного определения. Уровень немодифицированного ШЫ-рЧа в препарате, по оценкам, составляет только около 1% суммарного белка.
4. Характеристика ШЫ-рЧа, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом, с помощью эксклюзионной хроматографии по размеру.
Немодифицированный и модифицированный 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом ШЫ-рЧа подвергали 8ЕС на аналитической фракционирующей колонке 8ирего§е 6 НВ10/30, для РРЬС используя РВ8 рН 7,2 в качестве подвижной фазы. Колонку элюировали при 20 мл/ч и элюент контролировали в отношении поглощения при 280 нм, как показано на фиг. 2: панель А: стандарты молекулярной массы (670 кДа, тиреоглобулин; 158 кДа, гамма-глобулин; 44 кДа, овальбумин; 17 кДа, миоглобин; 1,3 кДа, витамин В12); панель В: ШЫ-рЧа, модифицированный 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом; панель С: немодифицированный ШЫ-рЧа. Модифицированный 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом ШЫ-рЧа элюировался в виде отдельного острого пика с кажущейся молекулярной массой примерно 200 кДа, что согласуется большим гидродинамическим объемом РЕС. Не наблюдалось признаков агрегатов. В препарате выявляли немодифицированный ШЫ-рЧа, но его количество было ниже предела количественного определения. На основании величины пика количества немодифицированного ШЫ-рЧа составляли 1% или меньше всего продукта, что согласуется с наблюдениями с использованием 8Б8-ПААГ.
5. Анализ ШЫ-рЧа, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом, с помощью пептидного картирования.
Специфичность реакции пегилирования оценивали пептидным картированием. Немодифицированный и модифицированный 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом ШЫ-рЧа расщепляли эндопротеиназой Ьук-С из АсйготоЬас1ег (\Уако Вюргобиск) и полученные в результате продукты расщепления фракционировали обращенно-фазовой ВЭЖХ на колонке Vубас С4, используя 30-минутный градиент от 0 до 70% ацетонитрила в 0,1% ТФУ. Элюент из колонки контролировали по поглощению при 214 нм.
Все предполагаемые пептиды, получаемые при расщеплении ШЫ-рЧа эндопротеиназой Ьук-С, идентифицированы ранее Ы-концевым секвенированием и масс-спектрометрией (Рершкку е1 а1., (2001) 1. Рйагтасо1оду апб Ехрептеп1а1 Тйегареибск 297: 1059), и из них только пептид, который содержит Ы-конец ШЫ-рЧа, был изменен модификацией 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом, о чем свидетельствует его исчезновение на пептидной карте. Таким образом, данные картирования свидетельствуют, что остаток РЕС специфично связывается с данным пептидом. Данные, кроме того, свидетельствуют, что мишенью модификации РЕС является Ы-конец белка, так как только Ы-концевая модификация может приводить к специфичной утрате данного пептида.
В) Получение и характеристика ШЫ-рЧа, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-метаметилфенил-О2-метилпропиональдегидом.
IΡЫ-р-1а человека пегилировали по его Ы-концу 20 кДа тРЕС-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом. Продукт химической реакции восстановительного алкилирования, используемой для включения РЕС в основную цепь ШЫ-рЧа, приводил к образованию аминной связи, которая очень стабильна по отношению к деградации. Пегилированный ШЫ-РЧа подвергали всесторонней характеристике, включая анализ с помощью 8Б8-ПААГ, 8ЕС, пептидного картирования и оценки активности при анализе противовирусной активности ίη νίΙΐΌ. Чистота продукта, которую оценивали с помощью 8Ό8ПААГ и 8ЕС, составляла более 95%. В пегилированном образце ШЫ-рЧа не было признаков агрегатов. Остаточные уровни немодифицированного ШЫ-рЧа в продукте были ниже предела количественного определения, но, по-видимому, составляли примерно 1% продукта. Удельная активность пегилированного ШЫ-рЧа при анализе противовирусной активности была снижена примерно в 2 раза по сравнению с немодифицированным ШЫ-рЧа (ЕС50=31 пг/мл для ШЫ-рЧа, модифицированного тРЕС-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом, по сравнению с ЕС50=14 пг/мл для немодифицированного IΡΝ-β1а). Основную массу пегилированного ШЫ-рЧа готовили в концентрации 30 мкг/мл в РВ8, рН 7,2, содержащем 15 мг/мл ЧСА, подобно составу, используемому для АVΟΝЕX®, который был подвергнут всесторонней характеристике. Продукт предоставляли в виде замороженной жидкости, которую хранили при -70°С.
Свойства ШЫ-рЧа, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом, обобщены в табл. 2.
- 60 011829
Таблица 2
Свойства ШИ-вЛа, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом Эффективность пегилирования >80%
Отношение ΙΓΝ- ~1а/РЕС 1:1
Чистота >95%
Положение связывания Ν-конец
Противовирусная активность ЕС50 31 пг/мл
1. Получение ШН-вЛа, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом.
мл ΑΥΌΝΕΧ®, не приготовленного в виде препарата (нефасованный промежуточный продукт ΖΕΝ-β-^, клиническая партия нефасованного лекарственного средства, которая прошла все испытания для применения на человеке, в концентрации 254 мкг/мл в 100 мМ фосфате натрия, рН 7,2, 200 мМ №1С1) разбавляли 96 мл 165 мМ МЕ8, рН 5,0, и 400 мкл 5Ν НС1. Образец наносили на колонку ΕΕ с 8Р-сефарозой объемом 1,2 мл (РБагтас1а). Колонку промывали 6,5 мл 5 мМ фосфата натрия рН 5,5, 75 мМ №1С1 и белок элюировали 5 мМ фосфатом натрия рН 5,5, 600 мМ №С1. Элюированные фракции анализировали в отношении поглощения при 280 нм и концентрацию IΕN-β-1а в образцах оценивали, используя коэффициент экстинкции 1,51 для раствора 1 мг/мл. Фракции пика объединяли, получая раствор с концентрацией ШК-в-1а 4,4 мг/мл. К 2,36 мл ШК-в-1а с концентрацией 4,4 мг/мл из пула элюата с 8Р-сефарозы добавляли 0,5М фосфат натрия рН 6,0 до 50 мМ, дианоборогидрид натрия (А1<1пс11) до 5 мМ и 20 кДа тРЕО-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегид до 10 мг/мл. Образец инкубировали при комнатной температуре в течение 21 ч в темноте. Пегилированный ШК-в-1а очищали из реакционной смеси на ΕΕ-колонке с 8Р-сефарозой объемом 8,0 мл следующим образом. 9,44 мл реакционной смеси разбавляли 37,7 мл 20 мМ МЕ8 рН 5,0 и наносили на колонку с 8Р-сефарозой. Колонку промывали фосфатом натрия рН 5,5, 75 мМ №1С1 и затем пегилированный ШК-в-1а элюировали с колонки с помощью 25 мМ МЕ8 рН 6,4, 400 мМ №С1. Затем пегилированный IΕN-β-1а очищали на фракционирующей по размеру колонке 8ирего§е 6 НЯ 10/30 для ЕРЬС, используя 5 мМ фосфат натрия рН 5,5, 150 мМ №1С1 в качестве подвижной фазы. Фракционирующую колонку (25 мл) элюировали при 24 мл/ч и собирали фракции по 0,25 мл. Элюированные фракции анализировали в отношении содержания белка с помощью 8Э8-ПААГ. объединяли и определяли концентрацию белка в пуле. Концентрацию пегилированного ШК-в-1а выражали в эквивалентах ΣΕΝ после корректировки, связанной со вкладом РЕО в поглощение при 280 нм, используя коэффициент экстинкции 2 для раствора 1 мг/мл пегилированного ШК-вЛа. Отбирали образцы пула для анализа и остаток разбавляли до 30 мкг/мл буфером для приготовления препарата, содержащим ЧСА, делили на аликвоты 0,25 мл/флакон и хранили при -70°С.
2. УФ-спектр очищенного IΕN-β-1а, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом.
УФ-спектр (240-340 нм) IΕN-β-1а, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом, получали с использованием предварительно приготовленного в виде препарата с ЧСА нефасованного образца. Пегилированный образец проявлял максимум поглощения при 278-279 нм и минимум поглощения при 249-250 нм, что согласуется с данными, наблюдаемыми в случае немодифицированного нефасованного промежуточного продукта IΕN-β-1а. Концентрацию белка пегилированного продукта оценивали на основании спектра, используя коэффициент экстинкции ε280 0,1%=2,0. Концентрация белка в пегилированном нефасованном продукте составляла 0,42 мг/мл. В образце не было мутности, о чем свидетельствует отсутствие поглощения при 320 нм.
3. Характеристика IΕN-β-1а, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом, с помощью 8Э8-ПААГ.
2,1 мкг модифицированного 20 кДа тРЕО-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом ΣΕΝв-1а подвергали электрофорезу в 8Э8-ПААГ в восстанавливающих условиях в 10-20% градиентном геле. Гель окрашивали Кумасси бриллиантовым синим Я-250. Анализ в 8Э8-ПААГ модифицированного 20 кДа тРЕО-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом IΕN-β-1а выявил одну основную полосу с кажущейся массой 55 кДа, что согласуется с модификацией одним РЕО. В очищенном пегилированном продукте обнаружен немодифицированный IΕN-β-1а; однако, его количество ниже предела количественного определения. Оценено, что уровень немодифицированного IΕN-β-1а в препарате составляет только около 1% суммарного белка.
4. Характеристика IΕN-β-1а, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом, с помощью эксклюзионной хроматографии по размеру.
Модифицированный 20 кДа тРЕО-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом IΕN-β-1а подвергали 8ЕС на аналитической фракционирующей колонке 8ирего§е 6 НЯ10/30 для ЕРЬС, используя
- 61 011829
РВ8 рН 7,2 в качестве подвижной фазы. Колонку элюировали при 20 мл/ч и элюент контролировали в отношении поглощения при 280 нм. Пегилированный [ΗΝ-β-Ια элюировался в виде отдельного острого пика, при этом не было признаков агрегатов (фиг. 3).
5. Анализ ΓΡΝ-β-1α, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом, с помощью пептидного картирования.
Специфичность реакции пегилирования оценивали пептидным картированием. 13,3 мкг немодифицированного и модифицированного 20 кДа тРЕС-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом IΡN-β-1а расщепляли 20% (мас./мас.) эндопротеиназой Ьук-С из ЛсНготоЬас1сг (\Уако Вюргойис^) в РВ8, содержащем 5 мМ ДТТ, 1 мМ ЕЭТЛ при рН 7,6 при комнатной температуре в течение 30 ч (конечная концентрация=100 мкл). Затем добавляли 4 мкл 1М ДТТ и 100 мкл 8М мочевины и образцы инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Пептиды разделяли обращено-фазовой ВЭЖХ на колонке Vуйас С18 (214ТР51), используя 70-минутный градиент 0-63% ацетонитрила в 0,1% ТФУ с последующим 10-минутным градиентом 63-80% ацетонитрила в 0,1% ТФУ. Элюент с колонки контролировали в отношении поглощения при 214 нм.
Все предполагаемые пептиды, получаемые при расщеплении ΣΡΝ-β-13 эндопротеиназой Ьук-С, идентифицированы ранее Ν-концевым секвенированием и масс-спектрометрией (Рершкку с1 а1., (2001) I. Ркагтасо1о§у апб ЕхрептегШй Ткегареийск 297: 1059), и из них только пептид, который содержит Ν-конец ΓΕΝ-β-1α, был изменен модификацией 20 кДа тРЕС-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом, о чем свидетельствует его исчезновение на карте. Таким образом данные картирования свидетельствуют, что остаток РЕС специфично связывается с данным пептидом. Данные, кроме того, свидетельствуют, что мишенью модификации РЕС является Ν-конец белка, так как только Ν-концевая модификация может приводить к специфичной утрате данного пептида.
С) Получение и характеристика ΣΕΝ-β-13, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-парафенилацетальдегидом.
ШИ-в-1а человека пегилировали по его Ν-концу 20 кДа тРЕС-О-парафенилацетальдегидом. Продукт химической реакции восстановительного алкилирования, используемой для включения РЕС в основную цепь ШИ-в-1а, приводил к образованию аминной связи, которая очень стабильна по отношению к деградации. Пегилированный ШИ-в-1а подвергали всесторонней характеристике, включая анализ с помощью 8Э8-ПААГ. 8ЕС, пептидное картирование и оценку активности при анализе противовирусной активности ίη νίΙΐΌ. Чистота продукта, которую оценивали с помощью 8Э8-ПААГ и 8ЕС, составляла более 95%. В пегилированном образце ШИ-в-1а не было признаков агрегатов. Остаточные уровни немодифицированного ШИ-в-1а в продукте были ниже предела количественного определения, но, по-видимому, составляли примерно 1% продукта. В тесте на стабильность не наблюдали агрегации и деградации ΓΕΝβ-1 а, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-парафенилацетальдегидом, в трис-буфере с рН 7,4 в ходе инкубации при 37°С до 7 дней. Удельная активность пегилированного ШИ-в-1а в анализе противовирусной активности была снижена примерно в 2 раза по сравнению с немодифицированным ГЕЪ1-в-1а (ЕС50=31 пг/мл для ШИ-в-1а, модифицированного тРЕС-О-парафенилацетальдегидом, по сравнению с ЕС50=14 пг/мл для немодифицированного ΣΕΝ-β-13). Основную массу пегилированного ШИ-в-1а готовили в концентрации 30 мкг/мл в РВ8, рН 7,3, содержащем 14 мг/мл ЧСА, подобно составу, используемому для ΑVΟNЕX®, который был подвергнут всесторонней характеристике. Продукт предоставляли в виде замороженной жидкости, которую хранили при -70°С.
Свойства ΣΕΝ-β-13, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-парафенилацетальдегидом, обобщены в табл. 3.
Таблица 3 >80%
1:1
Свойства ШИ-вЧа, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-парафенилацетальдегидом Эффективность пегилирования Отношение ΙΓΝ- -1а/РЕО >95%
Чистота
Положение связывания Ν-конец
Противовирусная активность ЕС50 31 пг/мл
1. Получение ШМ-в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-пара-фенилацетальдегидом.
мл ΑVΟNЕX®, не приготовленного в виде препарата (нефасованный промежуточный продукт ΓΕΝ-β-^, клиническая партия нефасованного лекарственного средства, которая прошла все испытания для применения на человеке, в концентрации 250 мкг/мл в 100 мМ фосфате натрия, рН 7,2, 200 мМ №С1) разбавляли 24 мл 165 мМ МЕ8, рН 5,0, и 400 мкл 5Ν НС1 и 24 мл воды. Образец наносили на колонку РР с 8Р-сефарозой объемом 600 мкл (Рйагтааа). Колонку промывали 2x900 мкл 5 мМ фосфата натрия рН 5,5, 75 мМ №1С1 и белок элюировали 5 мМ фосфатом натрия рН 5,5, 600 мМ №С1. Элюированные фракции анализировали в отношении поглощения при 280 нм и концентрацию ШМ-в-1а в образцах оценива
- 62 011829 ли, используя коэффициент экстинкции 1,51 для раствора 1 мг/мл. Фракции пика объединяли, получая раствор с концентраций [ΕΝ-β-1;·ι 2,3 мг/мл. К 1,2 мл !ΕΝ-β-1;·ι из пула элюата с 8Р-сефарозы добавляли 0,5М фосфат натрия рН 6,0 до 50 мМ, цианоборогидрид натрия (А1бпсй) до 5 мМ и 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегид до 10 мг/мл. Образец инкубировали при комнатной температуре в течение 18 ч в темноте. Пегилированный ГРЫ-в-1а очищали из реакционной смеси на РР-колснке с 8Р-сефарозой объемом 0,75 мл следующим образом. 1,5 мл реакционной смесь разбавляли 7,5 мл 20 мМ МЕ8 рН 5,0, 7,5 мл воды и 5 мкл НС1 и наносили на колонку с 8Р-сефарозой. Колонку промывали фосфатом натрия рН 5,5, 75 мМ ЫаС1 и затем пегилированный ШЫ-вЧа элюировали с колонки с помощью 20 мМ МЕ8 рН 6,0, 600 мМ ЫаС1. Затем пегилированный ΓΕΝ-β-13 очищали на фракционирующей по размеру колонке для З^зего^ 6 НЯ 10/30 РРЬС, используя 5 мМ фосфат натрия рН 5,5, 150 мМ ЫаС1 в качестве подвижной фазы. Фракционирующую колонку (25 мл) элюировали при 20 мл/ч и собирали фракции по 0,5 мл. Элюированные фракции анализировали в отношении содержания белка по поглощению при 280 нм, объединяли и определяли концентрацию белка в пуле. Концентрацию пегилированного ГРЫ-в-1а выражали в эквивалентах ΣΡΝ после корректировки, связанной со вкладом РЕО (20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегид имеет коэффициент экстинкции при 280 нм, равный 0,5 для раствора 1 мг/мл) в поглощение при 280 нм, используя коэффициент экстинкции 2 для раствора 1 мг/мл пегилированного ГРЫ-в-1а. Отбирали образцы пула для анализа и остаток разбавляли до 30 мкг/мл буфером для приготовления препарата, содержащим ЧСА, делили на аликвоты 0,25 мл/флакон и хранили при -70°С.
2. УФ-спектр очищенного ШЫ-вЧа, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом.
УФ-спектр (240-340 нм) ШЫ-вЧа, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом, получали с использованием предварительно приготовленного в виде препарата с ЧСА нефасованного образца. Пегилированный образец проявлял максимум поглощения при 278-279 нм и минимум поглощения при 249-250 нм, что согласуется с данными, наблюдаемыми в случае немодифицированного нефасованного промежуточного продукта ШЫ-вЧа. Концентрацию белка пегилированного продукта оценивали на основании спектра, используя коэффициент экстинкции ε280 0,1%=2,0. Концентрация белка пегилированного нефасованного средства составляла 0,10 мг/мл. В образце не было мутности, о чем свидетельствует отсутствие поглощения при 320 нм.
3. Характеристика ШЫ-вЧа, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом, с помощью δΌδ-ПААГ.
2,5 мкг немодифицированного и модифицированного 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом ШЫ-вЧа подвергали электрофорезу в δΌδ-ПААГ в восстанавливающих условиях в 10-20% градиентном геле. Гель окрашивали Кумасси бриллиантовым синим Я-250, и он показан на фиг. 4 (дорожка А: кРЫ-в1а, модифицированный 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом; дорожка В: немодифицированный ШЫ-вЧа; дорожка С: маркеры молекулярной массы (сверху вниз; 100, 68, 45, 27 и 18 кДа, соответственно)). Анализ в δΌδ-ПААГ модифицированного 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом ШЫ-вЧа выявил одну основную полосу с кажущейся массой 55 кДа, что согласуется с модификацией одним РЕО. Не выявлено форм с более высокой массой, возникающих в результате присутствия дополнительных групп РЕО. В очищенном пегилированном продукте обнаружен немодифицированный ШЫ-вЧа; однако, его количество ниже предела количественного определения. Оценено, что уровень немодифицированного ШЫ-вЧа в препарате составляет только около 1% суммарного белка.
4. Характеристика ШЫ-вЧа, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом, с помощью эксклюзионной хроматографии по размеру.
Модифицированный 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом ШЫ-вЧа подвергали ЗЕС на аналитической фракционирующей колонке Змеюке 6 НЯ10/30 для РРЬС, используя РВЗ рН 7,2 в качестве подвижной фазы. Колонку элюировали при 20 мл/ч и элюент контролировали в отношении поглощения при 280 нм, как показано на фиг. 5: панель А: стандарты молекулярной массы (670 кДа, тиреоглобулин; 158 кДа, гамма-глобулин; 44 кДа, овальбумин; 17 кДа, миоглобин; 1,3 кДа, витамин В12), панель В: IРЫв-1а, модифицированный 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом. Пегилированный IРЫ-β-1а элюировался в виде отдельного острого пика с кажущейся молекулярной массой около 200 кДа, что согласуется с большим гидродинамическим объемом РЕО. Не наблюдалось признаков агрегатов. В препарате выявляли немодифицированный IРЫ-β-1а, но его количество было ниже предела количественного определения. На основании величины пика количества немодифицированного IРЫ-β-1а составляли 1% или меньше от всего продукта, что согласуется с наблюдениями с использованием δΌδ-ПААГ.
5. Анализ ШЫ-вЧа, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом, с помощью пептидного картирования.
Специфичность реакции пегилирования оценивали пептидным картированием. Немодифицированный и модифицированный 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом IРЫ-β-1а расщепляли эндопротеиназой Ьук-С из АсйготоЬас!ег (^ако В^юбисй) и полученные в результате продукты расщепления фракционировали обращено-фазовой ВЭЖХ на колонке Vубас С4, используя 30-минутный градиент от 0 до 70% ацетонитрила в 0,1% ТФУ. Элюент с колонки контролировали в отношении поглощения при 214 нм.
- 63 011829
Все предполагаемые пептиды, получаемые при расщеплении ГЕИ-р-1а эндопротеиназой Ьук-С, идентифицированы ранее И-концевым секвенированием и масс-спектрометрией (Рерткку е1 а1., (2001) Σ. РНагтасо1оду апб Ехрептеп1а1 Тйегареийск 297: 1059), и из них только пептид, который содержит И-конец ГЕИ-в-1а, был изменен модификацией 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом, о чем свидетельствует его исчезновение на карте. Таким образом, данные картирования свидетельствуют, что остаток РЕО специфично связывается с данным пептидом. Данные, кроме того, свидетельствуют, что мишенью модификации РЕО является И-конец белка, так как только И-концевая модификация может приводить к специфичной утрате данного пептида.
6. Стабильность ШИ-рЧа, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом.
Чтобы тестировать стабильность ШИ-рЧа, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом, образцы разбавляли до 0,1 мкг/мл 100 мМ трис-НС1-буфером, рН 7,4, и затем инкубировали при 37°С до 7 дней. Образцы объемом 20 мкл (2 мкг) отбирали в 0, 2, 5 и 7 дни и анализировали в 8Э8-ПЛАГ в восстанавливающих условиях, как показано на фиг. 6: дорожка А: маркеры молекулярной массы (сверху вниз; 100, 68, 45, 27, 18 и 15 кДа, соответственно); дорожки В, С, Ό и Е: ШИ-рЧа, модифицированный тРЕО-О-парафенилацетальдегидом, отобранный в 0, 2, 5 и 7 дни, соответственно. Не наблюдали признаков агрегации или деградации пегилированного ГЕИ-р-1 а даже после 7 дней при 37°С.
Пример 3. Удельная активность ГЕИ-в-1а человека в анализе противовирусной активности ίη νίίτο.
Удельную противовирусную активность образцов пегилированного !ЕИ-р-1 а тестировали на клетках карциномы легкого человека (клетки А549), которые были подвергнуты воздействию вируса энцефаломиокардита (ЕМС), и используя метаболический краситель 2,3-бис[2-метокси-4-нитро-5-сульфофенил]-2Н-тетразолий-5-карбоксианилид (МТТ; М-5655, 81дта, 8ί. Ьошк, МО) в качестве меры метаболически активных клеток, оставшихся после экспонирования с вирусом. Коротко, клетки А549 предварительно обрабатывали в течение 24 ч либо немодифицированным, либо пегилированным ГЕИ-в-1а (начиная с 66,7 пг/мл, проводя серийные разведения в 1,5 раза до 0,8 пг/мл) перед заражением вирусом. Затем клетки заражали в течение 2 дней вирусом ЕМС в разведении, которое давало полную гибель клеток в отсутствие ГЕИ. Затем планшеты проявляли с помощью МТТ. Маточный раствор МТТ готовили в концентрации 5 мг/мл в РВ8 и стерильно фильтровали и 50 мкл полученного раствора разбавляли в культурах клеток (100 мкл на лунку). После инкубации при комнатной температуре в течение 30-60 мин раствор МТТ/среда сливали, клетки промывали 100 мкл РВ8 и, наконец, метаболизируемый краситель солюбилизировали в 100 мкл 1,2И НС1 в изопропаноле. Жизнеспособные клетки (которые определяли по наличию красителя) количественно оценивали по поглощению при 450 нм. Данные анализировали, нанося на графике поглощение против концентрации ШИ-рЧа, и активность ШИ-рЧа определяли в виде концентрации, при которой погибало 50% клеток, т.е. наблюдалось 50% цитопатическое действие (ЕС50) или 50% от максимума ОО450. Анализ проводили 8 раз для немодифицированного ШИ-рЧа и от 3 до 4 раз для разных пегилированных образцов ШИ-рЧа. Для каждого анализа получали точки данных в двух повторах для каждой концентрации белка. Типичные графики жизнеспособности клеток против концентрации немодифицированного или пегилированного ШИ-рЧа показаны на фиг. 7А и 7В. На фиг. 7А символы означают следующее: немодифицированный ШИ-рЧа (о), ШИ-рЧа, модифицированный 20 кДа тРЕОО-2-метилпропиональдегидом (□), ШИ-рЧа, модифицированный 20 кДа тРЕО-О-параметилфенил-О-2метилпропиональдегидом (Δ), и ШИ-рЧа, модифицированный 20 кДа тРЕО-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом (◊). На фиг. 7В символы означают следующее: немодифицированный ШИ-рЧа (о), ШИ-рЧа, модифицированный 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом (□), ШИ-рЧа, модифицированный 20 кДа тРЕО-О-парафенилпропиональдегидом (Δ), и ШИ-рЧа, модифицированный 20 кДа тРЕО-О-метафенилацетальдегидом (◊).
Значения ЕС50 (концентрация при полумаксимальной защите от вируса) для ШИ-рЧа, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-2-метилпропиональдегидом, 20 кДа тРЕО-О-параметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом, 20 кДа тРЕО-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом, 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом, 20 кДа тРЕО-О-парафенилпропиональдегидом и 20 кДа тРЕО-О-метафенилацетальдегидом, показаны в табл. 4. Все пегилированные ШИ-рЧа модифицировали и очищали до гомогенности, по существу, как описано для ХЕИ-рЧа, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-2-метилпропиональдегидом, ШИ-рЧа, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом, и ШИ-рЧа, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом, как описано выше.
- 64 011829
Таблица 4
Удельная противовирусная активность немодифицированного и пегилированного [ΕΝ-β-1η
Средняя ЕС50
Белок
Немодифииированный ΙΓΝ- -1а
ΙΓΝ- -1а, модифицированный кД тРЕб-О14 (пределы
12-16)
2-метилпропиональдегидом
ΙΓΝ- -1а, модифицированный пара-метилфенил-О-220 кД тРЕС-О32 (пределы (пределы
26-37)
36-47) метилпропиональдегидом
ΙΓΝ- -1а, модифицированный кД тРЕ6-0мета-метилфенил-0-231 (пределы
27-35) метилпропиональдегидом
ΙΓΝ- -1а, модифицированный кД тРЕС-Опара-фенилацетальдегидом (пределы
25-39)
ΙΓΝ- -1а, модифицированный кД тРЕС-Опара-фенилпропиональдегидом (пределы
27-34)
ΙΓΝ- -1а, модифицированный 20 кД тРЕС-Омета-фенилацетальдегидом (пределы
25-29)
Пример 4. Фармакокинетика вводимого внутривенно немодифицированного и пегилированного Ш№в-1а у крыс.
Канюлированным самкам крыс Ьеюк внутривенно вводили либо 80 мкг/кг немодифицированного ΓΕΝ-β-^, либо 24 мкг/кг одного из следующих пегилированных ΓΕΝ-β-^: ΓΕΝ-β-^, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-2-метилпропиональдегидом, Ш^в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-параметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом, ]Е№в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-парафенилацетальдегидом, Ш№в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-парафенилпропиональдегидом, Ш^вЧа, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-метафенилацетальдегидом, и Ш^вИа, модифицированного 20 кДа тРЕО-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом. Как немодифицированный, так и пегилированные белки готовили в виде препарата в присутствии 14-15 мг/мл ЧСА в качестве носителя. В случае немодифицированного белка кровь (0,2 мл) получали через канюлю в разных временных точках; непосредственно перед введением и в 0,083, 0,25, 0,5, 1,25, 3 и 5 ч после введения. В случае пегилированных белков кровь (0,2 мл) получали через канюлю непосредственно перед введением и в 0,083, 0,25, 0,5, 1,25, 3, 24, 48 и 72 ч после введения. Цельную кровь собирали в пробирки для отделения сыворотки (Веск1оп Оюкнъоп № 365956) и инкубировали при комнатной температуре в течение 60 мин, давая возможность свернуться. Свернувшуюся кровь центрифугировали в течение 10 мин при 4°С, и извлекали сыворотку, и хранили при -70°С вплоть до анализа.
Затем образцы сыворотки размораживали и тестировали в анализах на противовирусную активность. Образцы сыворотки разбавляли 1:50 в содержащей сыворотку среде (модифицированная по Дульбекко среда Игла, содержащая 10% (об./об.) фетальной сыворотки теленка, по 100 ед. пенициллина и стрептомицина и 2 мМ Ь-глутамина) и тестировали в анализах на противовирусную активность. Образцы титровали в размеченные лунки 96-луночного планшета для культуры ткани, содержащие клетки карциномы легкого человека (А549, #ССЬ-185, АТСС, КоскуШе, ΜΌ). На каждом планшете анализировали разведения стандарта (66,7, 44,4, 29,6, 19,8, 13,2, 8,8, 5,9, 3,9, 2,6, 1,7, 1,2 и 0,8 пг/мл той же самой формы IΕN-β-1а, вводимого крысам) и три образца сыворотки. Клетки А549 предварительно обрабатывали разведенными образцами сыворотки за 24 ч до заражения вирусом энцефаломиелокардита (ЕМС). После 2 дней инкубации с вирусом жизнеспособные клетки красили раствором МТТ (в концентрации 5 мг/мл в фосфатном буфере) в течение 1 ч, промывали фосфатным буфером и солюбилизировали с помощью 1,2Ν НС1 в изопропаноле. Затем лунки считывали при 450 нм. Стандартные кривые немодифицированного или пегилированного Ш№в-1а получали для каждого планшета и использовали для определения количества немодифицированного или пегилированного Ш№в-1а в каждом тестируемом образце. Затем рассчитывали фармакокинетические параметры, используя непараметрический анализ с помощью компьютерной программы Уш№пЬш, версия 3.0 или 3.3.
- 65 011829
На фиг. 8А показана концентрация против временных точек для немодифицированного [ΕΝ-β-1η (верхняя панель) и ГЕ№в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом (нижняя панель), и на фиг. 8В показана концентрация против временных точек для ГЕ№в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-параметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом (верхняя панель) и 20 кДа тРЕС-О-парафенилацетальдегидом (нижняя панель). Точки данных являются средними из измерений на 3 крысах.
В табл. 5 показаны фармакокинетические параметры Стах (максимально наблюдаемая концентрация), 11/2 (время полуэлиминации), АИС (площадь под кривой), У88 (объем распределения в стационарном состоянии), скорость клиренса и МКТ (среднее время удержания) для немодифицированного ΓΕΝ-β1а и указанных форм пегилированного ШЫ-в-1а. Данные, показанные на фиг. 8А и 8В и в табл. 5, получали в одном и том же исследовании.
На фиг. 9А показана концентрация против временных точек для немодифицированного ШЫ-в-1а (верхняя панель) и ШЫ-в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-р-фенилпропиональдегидом (нижняя панель). Точки данных являются средними из измерений для 2 крыс. На фиг. 9В показана концентрация против временных точек для ШЫ-в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-метафенилацетальдегидом (верхняя панель) и 20 кДа тРЕС-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом (нижняя панель). Точки данных являются средними из измерений для 3 крыс.
В табл. 6 показаны фармакокинетические параметры для немодифицированного ШЫ-в-1а и указанных форм пегилированного ШЫ-в-1а. Данные, показанные на фиг. 9А и 9В и в табл. 6, получали в одном и том же исследовании, независимо от данных, показанных на фиг. 8А и 8В и в табл. 5.
Как очевидно из данных, показанных на фиг. 8А, 8В, 9А и 9В и в табл. 5 и 6, пегилирование ΕΡΝ-β1а молекулами РЕС согласно изобретению улучшает фармакокинетические свойства ШЫ-в-1а. Во всех случаях пегилированные белки подвергались клиренсу менее быстро, чем немодифицированный ΚΝ-β1а, что приводило к скоростям клиренса 3,9-8,3 мл/ч/кг по сравнению с 160-170 мл/ч/кг для немодифицированного белка. Вследствие сниженных скоростей клиренса среднее время удержания (МКТ) возрастало примерно с 1 ч для немодифицированного белка до 4,8-7,6 ч для пегилированных белков. Подобным образом время полуэлиминации (11/2) возрастало примерно от 1 ч для немодифицированного белка до 5,213 ч для пегилированных белков. Значения площади под кривой (АИС) также существенно увеличивались при пегилировании ШЫ-в-1а. Для немодифицированного ШЫ-в-1а АИС составляла примерно 0,5 мкг-ч/мл, тогда как для пегилированных белков значения АИС находятся в пределах примерно от 3 до 6 мкг-ч/мл, несмотря на тот факт, что дозы пегилированных белков были на уровне в 3,3 раза ниже, чем уровень немодифицированного белка. Для максимально наблюдаемой концентрации (Стах) значения были, как правило, выше для немодифицированного ШЫ-в-1а, чем для пегилированных белков, отражая более низкую дозу вводимых модифицированных белков. Для объема распределения в стационарном состоянии (У88) значения для всех пегилированных белков были ниже, чем для немодифицированного ΕΡΝ-β-^, что свидетельствует об ограничении их способности существовать в центральном отделе кровообращения.
Таблица 5 Фармакокинетические параметры для немодифицированного IΕN-β-1а, IΕN-β-1а, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом, IΕN-β-1а, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-параметилфенилО-2-метилпропиональдегидом, и IΕN-β-1а, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-парафенилацетальдегидом, после внутривенного введения крысама
Параметр Единицы Немодифицированный ΙΕΝ- -1а ΙΓΝ- -1а, модифицированный 20 кД тРЕС-О-2метилпропиональдегидом ΙΓΝ- -1а, модифицированный 20 кД тРЕ<3-О-параметилфенил-О-2метилпропиональдегидом ΙΓΝ- -1а, модифицированный 20 кД тРЕС-О-парафенилацетальдегидом
Сщэх пг/мл 1400000 720000 710000 590000
Ϊ1/2 час 0,98 13 11 6, 8
Аис пг*час/мл 510000 4800000 4500000 2900000
У55 мл/кг 160 39 40 53
Клиренс мл/час/кг 160 5,0 5, 3 8,3
мкт час 0, 98 7,6 7 ,4 6,4
Показанные фармакокинетические данные для немодифицированного и пегилированного ΕΡΝ-βполучали в одном и том же исследовании.
- 66 011829
Таблица 6 Фармакокинетические параметры для немодифицированного !ЕЫ-в-1а. ШЫ-в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-парафенилпропиональдегидом, ШЫ-в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-метафенилацетальдегидом, и ШЫ-в-1а, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-метаметилфенил-О-2-метилпропиональдегидом, после внутривенного введения крысама
Параметр Единицы Немодифицированный ΙΕΝ- -1а ΙΕΝ- -1а, модифицированный 20 кД тРЕС-Опарафенилпропиональдегидом ΙΓΝ- -1а, модифицированный 20 кД тРЕС-О-метафенилацетальдегидом ΙΕΝ- -1а, модифицированный 20 кД кпРЕС-О-метаметилфенил-О-2метилпропиональдегидом
Стах пг/мл 670000 930000 550000 700000
час 0, 92 5,2 7,7 7,1
лис пг*час/мл 470000 4700000 3800000 6200000
Ϋ53 мл/ кг 140 25 46 21
Клиренс мл/час/кг 170 5,1 6,4 3, 9
МКТ час 0, 81 4,8 7,2 5,5
а Показанные фармакокинетические данные для немодифицированного и пегилированного ШЫ-в-1а получали в одном и том же исследовании.
Пример 5. Сравнительная фармакокинетика и фармакодинамика немодифицированного и пегилированного ШЫ-в-1а человека у приматов, отличных от человека.
Сравнительные исследования однократных и повторяющихся доз проводили, используя немодифицированный и пегилированный ШЫ-в-1а, чтобы определить их относительную стабильность и активность у приматов, отличных от человека. В указанных исследованиях фармакокинетику и фармакодинамику конъюгатов пегилированного ШЫ-в-1а сравнивают с фармакокинетикой и фармакодинамикой немодифицированного ШЫ-в-1а, и обоснованные выводы могут быть распространены на человека.
Животные и способы
Исследование 1 (повторяющиеся дозы).
Данное исследование представляет собой исследование повторяющейся дозы в параллельных группах для оценки сравнительной фармакокинетики и фармакодинамики немодифицированного и пегилированного ШЫ-в-1а. Для данного исследования используют здоровых приматов (например, макак-резус). Перед введением доз ветеринарный врач оценивает всех лабораторных животных в отношении признаков нарушения здоровья 2 раза в пределах 14 дней до введения тестируемого продукта; при этом одна оценка должна проводиться в пределах 24 ч до первого введения тестируемого продукта. Тестируемый продукт получают только здоровые животные. Оценки включают общий медицинский осмотр и заборы крови до введения дозы для определения исходного уровня клинической патологии и исходного уровня антител к ШЫ-в-1а. Всех животных взвешивают и регистрируют температуру тела в пределах периода времени, равного 24 ч, до введения тестируемого продукта. Набирают 12 субъектов и распределяют по группам из 3 субъектов для получения ими 1х106 ед./кг немодифицированного или пегилированного ШЫ-в-1а, но в других отношениях идентичного ШЫ-в-1а. Введение проводят либо подкожным (п/к), либо внутривенным (в/в) способами. 6 животных мужского пола получают тестируемый продукт в/в путем (по 3 на обработку), другие 6 животных мужского пола получают тестируемый продукт п/к путем (по 3 на обработку). Ни одно из животных не должно было ранее подвергаться обработке ШЫ-β. Каждому животному вводят дозу 2 раза, дозы разделены периодом, составляющим 4 недели. Объем дозы составляет 1,0 мл/кг. Отбор крови для фармакокинетического тестирования проводят в 0, 0,083, 0,25, 0,5, 1, 1,5, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 48, 72 и 96 ч после каждой инъекции. Образцы крови для измерения ШЫ-индуцируемого маркера биологического ответа, неоптерина сыворотки, отбирают в 0, 24, 48, 72, 96, 168, 336 и 504 ч после введения исследуемого лекарственного средства. Оценки во время периода исследования включают клинические исследования, проводимые через 30 мин и 1 ч после введения дозы для выявления признаков токсичности. Проводят ежедневные наблюдения в клетках и регистрируют общий вид, симптомы токсичности, дискомфорта и изменения в поведении. Массу тела и температуру тела регистрируют с регулярными интервалами на протяжении 21 дня после введения дозы.
Исследование 2 (однократная доза).
Данное исследование представляет собой исследование однократной дозы в параллельных группах для оценки сравнительной фармакокинетики и фармакодинамики немодифицированного и пегилированного ШЫ-в-1а. Для данного исследования используют здоровых приматов (например, макак-резус). Перед введением доз ветеринарный врач оценивает всех лабораторных животных в отношении признаков нарушения здоровья 2 раза в пределах 14 дней до введения тестируемого продукта; при этом одна оценка
- 67 011829 должна проводиться в пределах 24 ч до первого введения тестируемого продукта. Тестируемый продукт получают только здоровые животные. Оценки включают общий медицинский осмотр и заборы крови до введения дозы для определения исходного уровня клинической патологии и исходного уровня антител к IЕΝ-β-1а. Всех животных взвешивают и регистрируют температуру тела в пределах периода времени, равного 24 ч, до введения тестируемого продукта. Набирают 20 субъектов и распределяют их в одну из 5 групп, состоящих из 4 животных (2 самца и 2 самки на группу), для получения ими 1х106 ед./кг немодифицированного или пегилированного IЕΝ-β-1а внутримышечно (в/м) или 2х105, 1х106 или 5х106 ед./кг пегилированного IЕΝ-β-1а внутривенно (в/в). Ни одно из животных не должно было ранее подвергаться обработке ГЕЫ-β. Объем дозы обычно составляет 1,0 мл/кг. Отбор крови для фармакокинетического тестирования проводят в 0, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 36, 48 и 96 ч и в 7, 14, 21 и 28 день после введения исследуемого лекарственного средства. Образцы крови для измерения ШЫ-индуцируемого маркера биологического ответа, 2'-5'-олигоаденилатсинтазы (2'-5'-ОА8), отбирают в 0, 12, 24, 48, 72 и 96 ч и в 7, 14, 21 и 28 день после введения исследуемого лекарственного средства. Оценки во время периода исследования включают клинические исследования, проводимые через 30 мин и 1 ч после введения дозы для выявления признаков токсичности. Проводят ежедневные наблюдения в клетках и регистрируют общий вид, симптомы токсичности, дискомфорта и изменения в поведении. Массу тела и температуру тела регистрируют с регулярными интервалами на протяжении 28 дней после введения дозы.
Способы анализа
Уровни IЕΝ-β-1а в сыворотке количественно оценивают с использованием биоанализа цитопатического действия (СРЕ). В анализе СРЕ измеряют уровни опосредованной ШЫ противовирусной активности. Уровень противовирусной активности в образце отражает число молекул активного ШЫ, находящегося в данном образце во время отбора крови. Указанный способ был стандартным способом для оценки фармакокинетики ШΝ-β-1а. Анализ СРЕ выявляет способность ГЕЫ-β защищать клетки карциномы легкого человека (А549, #ССЬ-185, АТСС, ВоскуШе, ΜΌ) от цитотоксичности, обусловленной вирусом энцефаломиокардита (ЕМС). Клетки предварительно инкубируют в течение 15-20 ч с образцами сыворотки, обеспечивая индукцию и синтез ШЫ-индуцируемых белков, которые ответственны за противовирусный ответ. Затем добавляют вирус ЕМС и инкубируют еще в течение 30 ч до того, как проводят оценку цитотоксичности с использованием кристаллического фиолетового красителя. Внутренний стандарт ШЫβ, а также внутренний стандарт пегилированного ШЫ^-Ш тестируют одновременно с образцами на каждом планшете для анализа. Указанный стандарт калибруют относительно стандартного образца природного ШЫ фибробластов человека (Второй международный стандарт интерферона ВОЗ, фибробласты человека, ОЬ-23-902-53). Каждый планшет для анализа также содержит лунки контроля клеточного роста, не содержащие ни одного вида ШЫ-β, ни ЕМС, и лунки для вирусного контроля, которые содержат клетки и ЕМС, но не содержат ШЫ-β. Также готовят контрольные планшеты, содержащие стандарт и образцы, чтобы определить влияние, если таковое существует, образцов на рост клеток. Указанные планшеты красят без добавления вируса. Образцы и стандарты тестируют в двух повторах на каждом из двух планшетов для параллельного анализа, получая четыре точки данных на образец. Указывается геометрическая средняя концентрация четырех повторов. Предел определения в данном анализе составляет 10 ед./мл. Концентрации неоптерина в сыворотке определяют в единицах, принятых в клинической фармакологии, используя коммерчески доступные анализы. Концентрации 2'-5'-ОА8 в сыворотке определяли в лаборатории по контракту, используя утвержденный коммерчески доступный анализ.
Фармакокинетические и статистические способы
Используют компьютерную программу В§1пр™ (МюгоМаШ, Шс., 8а11 Ьаке Ску, ИТ) для включения данных в фармакокинетические модели. Геометрические средние концентрации откладывают на графике по временным точкам для каждой группы. Так как результаты анализа выражают в разведениях, геометрические средние считаются более подходящими, чем арифметические средние. Уровни ШЫ в сыворотке корректируют относительно значений исходного уровня и нерегистрируемые концентрации в сыворотке устанавливают на уровне 5 ед./мл, который соответствует половине нижнего предела определения. Для данных в случае в/в инфузии двухпараметрическую модель в/в инфузии подгоняют к регистрируемым концентрациям в сыворотке каждого субъекта и данные п/к введения подгоняют к двухпараметрической модели инъекции.
Рассчитывают следующие фармакокинетические параметры:
(ί) наблюдаемую пиковую концентрацию, Стах (ед./мл);
(ίί) область под кривой от 0 до 48 ч, АИС (ед.хч/мл), используя формулу трапеций;
(ίίί) период полуэлиминации (ч) и, на основании данных в/в инфузии (при в/в использовании):
(ίν) полупериод распределения (ч);
(ν) клиренс (мл/ч/кг);
(νί) кажущийся объем распределения V6 (мл/кг).
Компьютерную программу ХУтЫонШ! (версия 1.0, Зйепбйс СощиНтд Шс., Арех, ЫС) используют для расчета периода полуэлиминации после в/в и п/к инъекции. Для неоптерина и 2'-5'-ОА8 представле
- 68 011829 ны арифметические средние для каждой группы. Рассчитывают Етах, максимальное изменение от исходного уровня. Стах, АИС и Етах подвергают однофакторному дисперсионному анализу, чтобы сравнить группы дозирования. Стах и АИС подвергали логарифмическому преобразованию перед анализом; представлены геометрические средние.
Пример 6. Антиангиогенное действие пегилированного ΙΗΝ-β-1 а человека; способность пегилированного ГЕЫ-Ь-1а ингибировать пролиферацию эндотелиальных клеток ш νίΙΐΌ.
Эндотелиальные венозные клетки человека (Сс11 8уДст8, кат. № 2У0-Р75) и эндотелиальные клетки капилляров кожи человека (Сс11 8уДст8, кат. № 2М1-С25) поддерживают в культуре с использованием набора для среды С8-С (Сс11 8уДст8, кат. № 4Ζ0-500). За 24 ч до эксперимента клетки обрабатывают трипсином и ресуспендируют в среде для анализа, 90% М199 и 10% фетальной сыворотки теленка (ЕВ8) и доводят до требуемой плотности клеток. Затем клетки высевают на покрытые желатином 24- или 96-луночные планшеты, при плотности либо 12500 клеток/лунку, либо 2000 клеток/лунку, соответственно. После инкубации в течение ночи среду для анализа заменяют свежей средой, содержащей 20 нг/мл рекомбинантного основного фактора роста фибробластов человека (ЬЕСЕ) (Всс!оп ЭкИпкоп, кат. № 40060), и добавляют различные концентрации немодифицированного или пегилированного ΙΗΝ-β-1 а согласно изобретению или позитивный контроль (в качестве позитивного контроля можно использовать эндостатин, а также антитело к ЬЕСЕ). Конечный объем доводят до 0,5 мл в 24-луночном планшете или 0,2 мл в 96-луночном планшете. Через 72 ч клетки обрабатывают трипсином для подсчета на Сои1!сг, замораживают для регистрации флуоресценции на СуОиаШ или метят [3Н]-тимидином. С помощью указанного анализа ш νίΙΐΌ проводят тестирование пегилированных молекул ΙΗΝ-β-1 а человека согласно изобретению в отношении влияния на пролиферацию эндотелиальных клеток, которое может быть показателем антиангиогенного действия ш νί\Ό. См. О'КсШу, с! а1., Сс11 88: 277-285 (1997).
Пример 7. Модели ш νί\Ό для тестирования антиангиогенного и неоваскуляризующего действия пегилированного ΙΓΝ-β-1η человека и пегилированного ΙΗΝ-β-1 а грызунов.
Немодифицированный ΙΡΝ-β-13 и ΙΡΝ-β-13, модифицированный 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом, тестировали в отношении их способности ингибировать образование радиально ориентированных сосудов, проникающих на периферию опухолей злокачественной меланомы человека 8К-МЕЬ-1 у бестимусных гомозиготных голых мышей (пи/пи). Клетки 8К-МЕЬ-1 выращивали в культуре до 80% слияния и затем 2х106 клеток инокулируют интрадермально (объем 0,1 мл в 0 день) сбоку от средней аксиллярной линии бестимусным гомозиготных голых мышей (пи/пи) ЫСК (Тасошс, Ссгтап!о^п, ΝΥ) трехнедельного возраста. Спустя 24 ч (день 1) группам из 3 мышей в каждой вводят следующие подкожные дозы контрольного наполнителя, немодифицированного ΙΓΝ-β-1η или ΙΗΝ-β-Ει, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом:
группа А: 0,1 мл сывороточного альбумина человека в концентрации 45,6 мг/мл (контрольный наполнитель) только 1 раз в 1 день;
группа В: 0,1 мл сывороточного альбумина человека в концентрации 45,6 мг/мл, содержащего 1 МИ (5 мкг) немодифицированного IЕN-β-1а ежедневно в 1-9 дни включительно;
группа С: 0,1 мл сывороточного альбумина человека в концентрации 45,6 мг/мл, содержащего 1 МИ единиц (10 мкг) IЕN-β-1а, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом только 1 раз в 1 день;
группа Ό: 0,1 мл сывороточного альбумина человека в концентрации 45,6 мг/мл (контрольный наполнитель) ежедневно в 1-9 дни включительно.
Мышей забивали на 10 день (авертин, 0,5 мл внутрибрюшинно) и оценивали место инокуляции опухоли в отношении образования новых сосудов, измеряемого исследователем вслепую, не зная групп обработки. Сосуды подсчитывали при постоянном увеличении под препарационной лупой. Каждый радиально ориентированный сосуд, проникающий в периферию опухоли, считали как один сосуд. Каждая группа состояла из 3 мышей.
Как показано на фиг. 10, однократное введение 1 МИ ΙΗΝ-β-Ει, модифицированного 20 кДа тРЕСО-2-метилпропиональдегидом (группа С), было так же эффективным в снижении количества новых сосудов, как и ежедневное введение 1 МИ немодифицированного ΓΕΝ-β-^ (группа В). Однако действие ΙΗΝ-β-^, модифицированного 20 кДа тРЕС-О-2-метилпропиональдегидом, более выражено, если учесть, что ежедневное введение одного наполнителя оказывает некоторое ингибирующее действие (сравните группу А, однократное введение наполнителя, с группой Ό, ежедневное введение наполнителя).
Также разработано множество других моделей, которые можно использовать для тестирования антиангиогенного действия и действия, направленного против образования новых сосудов, пегилированных молекул согласно изобретению. Некоторые из указанных моделей описаны в патентах Соединенных Штатов 5733876 (Маг. 31, 1998: «Мс1йой оГ шЫЬШпд апдюдспскк») и 5135919 (Аид. 4, 1992: «Мс!1ой апй а рйагтассийса1 сотрокйюп Гог 11с шЫЬШоп оГ апдюдспскк»). Другие анализы включают анализ обнаженной хориоаллантоисной мембраны (САМ) Тау1ог апй Ео1ктап; Ыа!игс 297: 307 (1982) и Сгит с! а1., 8с1спсс 230: 1375 (1985); модель антиангиогенеза на основе методики дорсального воздушного мешка у мышей Ео1ктап с! а1.; 1. Ехр. Мсй.133: 275 (1971) и анализ микрокарманов роговицы крыс С1тЬгопс, 1г.
- 69 011829 е! а1., I. Ыа!1. Сапсег Им. 52: 413 (1974), в котором индуцируют васкуляризацию роговицы у взрослых самцов крыс линии 8ргадие-Оа^1еу (СЬаг1ек К1уег, 1арап) путем имплантации в каждую роговицу шариков из сополимера этилен-винилацетата, пропитанных 500 нг ЬЕСЕ (бычий, К & Ό 8ук!етк, Шс.). Кроме того, существует модель, в которой ангиогенез индуцируют у мышей ЫШ-^кк или бестимусных голых мышей (пи/пи) после имплантации клеток карциномы легкого МСР-7 или клеток карциномы яичников ЫIΗ-ОVСАК-3, как описано Ьшбпег апб Вогбеп; Ш!. I. Сапсег 71: 456 (1997). Также можно использовать дополнительные линии опухолевых клеток, включая (но не ограничивая указанным) клетки злокачественной меланомы человека 8К-МЕБ-1, чтобы индуцировать ангиогенез, как описано выше. Различные дозы с различной частотой дозирования и в течение разных по продолжительности периодов можно тестировать как в случае немодифицированного, так и пегилированного белков ШЫ-рЛа согласно изобретению.
Другие способы тестирования пегилированного мышиного и крысиного ШЫ-рЛа в отношении антиангиогенного действия в модели на животных включают (но не ограничены указанным) протоколы скрининга новых потенциально противоопухолевых агентов, как описано в исходном Сапсег СЬето!Ьегару Керогк, Раг! 3, ^1. 3, № 2, 8ер!етЬег 1972 и в приложении Ш νί\Ό Сапсег Мобек, 1976-1982, ЫШ РиЬНсабоп № 84-2635, ЕеЬгиагу 1984. Из-за видовой специфичности интерферонов типа I для оценки антиангиогенной активности пегилированного ШЫ-р в моделях на грызунах получают препараты пегилированного ШЫ-грызунов (например, мыши и крысы). Примером таких способов скрининга является протокол тестирования антиангиогенного действия пегилированного мышиного ШЫ-р на имплантированную подкожно карциному легкого Льюиса.
Источник опухолевой линии
Данная опухолевая линия возникла спонтанно в 1951г. как карцинома легкого у мышей С57ВИ/6.
Краткое изложение способа тестирования
Фрагмент опухоли имплантируют подкожно в подмышечную область мыши Β6Ό2Ε1. Тестируемое средство (т.е. пегилированный интерферон согласно изобретению) вводят в различных дозах подкожно (п/к) или внутрибрюшинно (в/б) в разные дни после имплантации опухоли. Измеряемым параметром является среднее время выживания. Результаты выражены в виде процента от контрольного времени выживания.
Животные.
Размножение: мыши С57ВИ/6.
Тестирование: мыши Β6Ό2Ε1.
Масса: мыши с изменением по массе в пределах 3 г, при этом минимальная масса составляет 18 г для самцов и 17 г для самок.
Пол: и для тестируемых, и для контрольных животных в одном эксперименте использовали один пол. Источник: по возможности один источник для всех животных в одном эксперименте.
Объем эксперимента.
животных на группу тестирования.
Пересадка опухоли.
Размножение:
фрагмент: готовят фрагмент размером 2-4 мм п/к опухоли донора;
время: 13-15 дни;
место: имплантируют фрагмент п/к в аксиалярную область с помощью пункции в паховую область. Тестирование:
фрагмент: готовят фрагмент размером 2-4 мм п/к опухоли донора;
время: 13-15 дни;
место: имплантируют фрагмент п/к в аксиалярную область с помощью пункции в паховую область. Схема тестирования.
День 0: имплантируют опухоль. Размножают бактериальные культуры. Тестируют соединение позитивного контроля в каждом эксперименте с нечетным номером. Готовят материалы. Регистрируют гибель за сутки.
День 1: проверяют культуры. Отбраковывают эксперимент в случае загрязнения. Рандомизируют животных. Обрабатывают согласно инструкции (в 1 день и последующие дни).
День 2: повторно проверяют культуры. Отбраковывают эксперимент в случае загрязнения.
День 5: день взвешивания 2 и день начальной оценки токсичности тестируемого средства.
День 14: день контроля ранней гибели.
День 48: день контроля отсутствия поглощения.
День 60: окончание и оценка эксперимента. Оценка легких в отношении опухоли.
Качественный контроль.
Регистрируют соединение позитивного контроля (Ы8С2 6271; цитоксан в дозе 100 мг/кг/инъекцию) в каждом эксперименте с нечетным номером, схема введения которого представляет собой внутрибрюшинное введение только в 1 день. Нижний предел тест/контроль для позитивного контроля составляет 140%. Допустимое среднее время выживания в случае контроля без обработки составляет 19-35,6 дня.
- 70 011829
Оценка.
Измеряемым параметром является среднее время выживания. Подсчитывают средние массы тела животных в день 1 и день 5, подсчитывают отношение тест/контроль для всех тестируемых групп. Подсчитывают средние массы тела животных в день определенного этапа и день конечной оценки. Отношение тест/контроль рассчитывают для всех тестируемых групп при > 65% оставшихся в живых на 5 день. Значение отношение тест/контроль <86% свидетельствует о токсичности. Завышенную разницу в изменении массы тела (тест минус контроль) также можно использовать для оценки токсичности.
Критерии активности.
Исходное отношение тест/контроль, большее или равное 140%, считается необходимым для доказательства умеренной активности. Воспроизводимое значение отношения тест/контроль, большее или равное 150%, рассматривается как значительная активность.
Пример 8. Модели ίη νίνο для тестирования антипролиферативного и противоопухолевого действия пегилированного ГЕЫ-в-1а человека и пегилированных ГЕЫ-грызунов.
Имеются различные модели ίη νίνο для тестирования антипролиферативного и противоопухолевого действия немодифицированного и пегилированного ГЕЫ-в-1а человека согласно изобретению. В модели, описанной Βαί1οη с( а1., Вюсои)ида1:е Сйеткйу 12: 195 (2001), голым бестимусным мышам (Наг1ав) подкожно имплантируют 2х106 клеток почки человека А498, клеток почки человека АСНЫ или клеток почки человека С402 с задней стороны и дают возможность развиваться опухолям в течение 3-6 недель. Затем вводят немодифицированный или пегилированный ГЕЫ-в-1а человека в разных дозах, с разной частотой дозирования и в течение периодов времени разной продолжительности, и измеряют объем опухоли, и проводят сравнения между обработками. В другой модели, описанной Ыийнег апй ΒοΓ^η, ί. йаегТегоп СуШкте Кек. 17: 681 (1997), бестимусным самкам голых мышей ВАЬВ/с (ни/ни), подвергнутым овариэктомии, имплантируют 2х106 клеток МСЕ-7 (плюс эстрадиол), МОА-МВ-231, МИА-МВ-468 или клеток карциномы легкого человека ВТ-20, клеток карциномы яичника человека ЫIН-ΟVСАК-3, клеток карциномы ободочной кишки человека НТ-29 или клеток злокачественной миеломы человека 8К-МЕЬ-1 или ЕЕМ^, в дерму, покрывающую молочные железы, ближе всего к подмышечной впадине, и оценивают размер опухолей как функцию времени. Затем вводят немодифицированный или пегилированный ГЕЫ-β1 а человека в разных дозах, с разной частотой дозирования и в течение периодов времени разной продолжительности, и измеряют объем опухоли, и проводят сравнение между обработками. Другие модели для тестирования антипролиферативного и противоопухолевого действия пегилированного [ЕЫ-β-Ι а человека включают (но не ограничены указанным) модели локального и метастизирующего рака легкого, описанные Οίη е( а1., Μο1еси1а^ Тйегару 4: 356 (2001), и модели ксенотрансплантатов у голых мышей метастазов злокачественной опухоли ободочной и прямой кишки из печени человека, описанные Тайа е( а1.,
I. Сйшса1 [ηνΌΚΐίβηΙίοη 108: 83 (2001).
Другие способы тестирования пегилированного ГЕЫ-β мыши и крысы в отношении антипролиферативного и противоопухолевого действия в моделях на животных включают (но не ограничены указанным) модель злокачественной мезотелиомы у мышей, описанную Ойака е( а1., Сансег Кек. 61: 6201 (2001), модели локальной и метастазирующей злокачественной опухоли легкого, описанные Οίη е( а1., Μο1еси1а^ Тйегару 4: 356 (2001), и модели метастазов злокачественной опухоли ободочной и прямой кишки в печени у сингенных мышей, описанные Тайа е( а1., ί. Сйшса1 [пуекйда1юп 108: 83 (2001).
Пример 9. Модели ίη νίνο для тестирования противовирусного действия пегилированного ГЕЫ-β мыши и пегилированного [ЕЫ-β-Ι а человека.
Имеется мышиная модель ίη νίνο для тестирования влияния немодифицированного и пегилированного мышиного ЕЕЫ-β на уровни вируса гепатита В человека (НВУ) у НΒV-трансгенных мышей 8СГО. Ьагкт е( а1., ЫаШге Мейюте 5: 907 (1999). В указанной модели трансгенные мыши 8СЮ, несущие димер голова-к-хвосту генома НΒV человека, имеют регистрируемые уровни репликативных форм НΒV и прегеномной РНК в печени и вируса НΒV в сыворотке. Гепатоциты трансгенных мышей также позитивны в отношении белков НВкАд, НВсАд и НЬхАд, показателей репликации вируса. Пример протокола для сравнения немодифицированного и пегилированного мышиного ЕЕЫ-β в данной модели приведен ниже.
мышей (5 групп по 5, плюс 5 резервных) со сравнимым титром вируса титруют в двух независимых временных точках (по меньшей мере с разницей в 1 неделю), чтобы установить титр исходного уровня и удостовериться, что их титры остаются постоянными до введения дозы мышиного ШЫ-в. Группам по 5 мышей вводят дозу 3 раза в неделю (понедельник, среду и пятницу) подкожно, используя следующие образцы, которые указаны в табл. 7.
- 71 011829
Таблица 7 Группа Образец дозирования
Контрольный наполнитель (1 мг/мл мышиного сывороточного альбумина (МСА) ед. немодифицированного мышиного ΙΓΝ- в 1 мл/мл
МСА
300 ед. немодифицированного мышиного ΙΓΝ- в 1 мл/мл
МСА
3000 ед. немодифицированного мышиного ΙΡΝ- в 1 мл/мл
МСА
30 ед. пегилированного мышиного ΙΓΝ- в 1 мл/мл МСА
300 ед. пегилированного мышиного ΙΓΝ- в 1 мл/мл МСА
3000 ед. пегилированного мышиного ΙΓΝ- в 1 мл/мл МСА
Титры вирусов определяют еженедельно во время введения доз и определяют еженедельно каждые 2 недели в течение 6 месяцев после введения доз. Строят графики титра вируса против времени для сравнения животных, обработанных наполнителем и ШЖ-в в отношении клиренса и повторного установления титра вирусов. Затем проводят второе исследование с соответствующими дозами немодифицированного и пегилированного мышиного ШЖ-в, используя 10-20 мышей на группу, всего 30-60 мышей (1020 для контроля, 10-20 для немодифицированного мышиного ШЖ-в и 10-20 для пегилированного мышиного ШЖ-в). Титры вирусов оценивают, как описано выше, и при забивании сыворотку анализируют в отношении титра вирусов, а также в отношении НЬкАд с помощью 8Э8-ПЛАГ и Вестерн-блоттинга. Также извлекают печень, замораживают и фиксируют, как это требуется, и красят на наличие НЬкАд, НЬсАд и НЬхАд. На образцах сыворотки и ткани также можно проводить другие подходящие гистологические, гистохимические или биохимические тесты, знакомые специалистам в данной области.
Также имеется мышиная модель ίη νίνο для тестирования влияния немодифицированного и пегилированного ШЖ-в-1а человека на уровни вируса гепатита С человека (НСУ) у мышей, несущих химерную печень человека. Мегсег е1 а1., ЖаШге Мебюте 7: 927 (2001). В данной модели нормальные гепатоциты человека трансплантируют мышам 8СШ, несущим трансген активатора плазминогена (А1Ь-иРА), и мышам инокулируют сыворотку людей, инфицированных различными генотипами НСV. Привитые клетки печени человека становятся инфицированными вирусом, и вирус реплицируется. С помощью ПЦР могут быть количественно оценены уровни РНК НСV в сыворотке, а также уровни положительной и отрицательной (репликативной формы) РНК в клетках печени. Осуществляют соответствующий протокол исследования, подобный (но не ограничивающий) протоколу, описанному выше для немодифицированного и пегилированного мышиного IЕN-β у трансгенных по НВV мышей 8СШ, чтобы оценить эффективность немодифицированного и пегилированного ШЖ-в-1а человека в данной модели, т.е. чтобы определить влияние обработки на титр НСV, гистологию печени, уровни АЬТ в сыворотке и наличие репликативных форм НСУ в трансплантированной ткани печени человека. На образцах сыворотки и ткани также можно поводить другие подходящие гистологические, гистохимические или биохимические тесты, знакомые специалистам в данной области.

Claims (194)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Активированный полимер полиалкиленгликоля, имеющий структуру согласно формуле I где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЖК', 8О2ЖК' или ЖК';
    О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил (включая конденсированные бициклические и связанные мостиками бициклические кольцевые структуры), замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С20 насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруп
    - 72 011829 пы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, сульфамоила, сульфоната, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    каждый Я', Ζ и Ζ' независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    Я означает остаток, подходящий для образования связи между соединением формулы I и биологически активным соединением или его предшественником;
    т равно 0 или 1;
    каждый η независимо равен 0 или является целым числом от 1 до 5 и р равно 1, 2 или 3.
  2. 2. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.1, где Я выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-N-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  3. 3. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.1, где Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II
    Е- (О-СН2СН2) , где Е означает водород или С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью и а является целым числом от 4 до 10000.
  4. 4. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.1, где Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II
    Е- (О-СН2СН2)а-, где Е является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы I и биологически активным соединением или его предшественником; и а является целым числом от 4 до 10000.
  5. 5. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.4, где Е является метилом.
  6. 6. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.4, где Е выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-N-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  7. 7. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.4, где Е имеет структуру согласно формуле III
    К---НС—(СН^---(У)т 9--X—СТГ2СТУ2-Ζ где каждый Ц, X, Υ, Ζ, т и η независимо имеет значения, которые определены;
    каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
    Я'' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником.
  8. 8. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.4, где Е имеет структуру согласно формуле IV
    К”---НС—(СН^--X---СТГ2С1ЛГ2--Ζ , где каждый X, Ζ и η независимо имеет значения, которые определены;
    каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
    Я''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
  9. 9. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.7, где Я'' выбран из группы, состоящей из
    - 73 011829 карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  10. 10. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.8, где Я''' выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  11. 11. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.4, где Е является регистрируемой меткой.
  12. 12. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.11, где Е выбран из группы, состоящей из радиоактивных изотопов, флуоресцентных остатков, фосфоресцентных остатков, хемилюминесцентных остатков и квантовых меток.
  13. 13. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.1, где О является замещенным или незамещенным алкарилом.
  14. 14. Активированный полимер полиалкиленгликоля, имеющий структуру согласно формуле I;·!
    Р—х—ς----(γ)_--(СН2)Ц—СН—к
    Ζ , где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЫЯ', 8О2ЫЯ' или ЫЯ';
    О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил (включая конденсированные бициклические и связанные мостиками бициклические кольцевые структуры), замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С20 насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, сульфамоила, сульфоната, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    каждый Я' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    Я означает остаток, подходящий для образования связи между соединением формулы I и биологически активным соединением или его предшественником;
    т равно 0 или 1 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
  15. 15. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.14, где Я выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  16. 16. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.14, где Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II
    Е- (О-СН2СН2) , где Е означает водород или С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью и а является целым числом от 4 до 10000.
    - 74 011829
  17. 17. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.14, где Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II
    В- (О-СН2СН2)а-, где Е является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы I и биологически активным соединением или его предшественником; и а является целым числом от 4 до 10000.
  18. 18. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.17, где Е является метилом.
  19. 19. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.17, где Е выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  20. 20. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.17, где Е имеет структуру согласно формуле III
    К---нс—(СНз);---(У)т--0---X— СХУ2СУ/2--Ζ *
    где каждый О, X, Υ, Ζ, т и η независимо имеет значения, которые определены;
    каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
    В'' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником.
  21. 21. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.17, где Е имеет структуру согласно формуле IV
    К---НС--(СН^---X---θν/2θνν2--Ζ , где каждый X, Ζ и η независимо имеет значения, которые определены;
    каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
    В''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
  22. 22. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.20, где В'' выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  23. 23. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.17, где В''' выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  24. 24. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.17, где Е является регистрируемой меткой.
  25. 25. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.24, где Е выбран из группы, состоящей из радиоактивных изотопов, флуоресцентных остатков, фосфоресцентных остатков, хемилюминесцентных остатков и квантовых меток.
  26. 26. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.14, где О является замещенным или неза- мещенным алкарилом.
  27. 27. Активированный полимер полиалкиленгликоля, имеющий структуру согласно формуле V где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2 СО8, 8О, 8О2, СОЫВ', 8О2ЫВ' или ЫВ';
    Т1 и Т2 независимо отсутствуют или являются насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или
    - 75 011829 гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    каждый В' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    В является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы V и биологически активным соединением или его предшественником;
    каждый Ь независимо является насыщенной или ненасыщенной С1 -С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1 -С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    т равно 0 или 1;
    б равно 0 или является целым числом от 1 до 4 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
  28. 28. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.27, где В выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  29. 29. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.27, где Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II
    Е- (О-СН2СН2)а-, где Е означает водород или С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью и а является целым числом от 4 до 10000.
  30. 30. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.29, где Е является метилом.
  31. 31. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.27, где Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II
    Е- (О-СН2СН2)а-, где Е является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы V и биологически активным соединением или его предшественником; и а является целым числом от 4 до 10000.
  32. 32. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.31, где Е выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
    - 76 011829
  33. 33. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.31, где Е имеет структуру согласно формуле III
    К---нс—(СН^---(¥)т—О--X—СИГ2С\Уг-Ζ >
    где О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С20 насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    X, Υ, Ζ, т и п имеют значения, которые определены;
    каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
    Я'' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником.
  34. 34. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.31, где Е имеет структуру согласно формуле IV
    К’----НС--(СН^---X---С\У2С¥/2--Ζ , где X, Ζ и п имеют значения, которые определены;
    каждый независимо означает водород или С1 -С7алкил и
    Я''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
  35. 35. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.33, где Я'' выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  36. 36. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.34, где Я''' выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  37. 37. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.31, где Е является регистрируемой меткой.
  38. 38. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.37, где Е выбран из группы, состоящей из радиоактивных изотопов, флуоресцентных остатков, фосфоресцентных остатков, хемилюминесцентных остатков и квантовых меток.
  39. 39. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.27, где X и Υ в случае присутствия являются кислородом.
  40. 40. Активированный полимер полиалкиленгликоля, имеющий структуру согласно формуле VI где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    X и Υ независимо означают О, δ, СО, СО2, СОЗ, δθ, δθ2, СОЫЯ', ЗО2ЫЯ' или ЫЯ';
    Т1 и Т2 независимо отсутствуют или являются насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью;
    каждый Я' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
    каждый Ь независимо означает насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероариль
    - 77 011829 ную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С,-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира или алкилтио группы;
    т равно 0 или 1;
    6 равно 0 или является целым числом от 1 до 4 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
  41. 41. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.40, имеющий структуру согласно формуле VII где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    Ζ означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
  42. 42. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.41, имеющий структуру согласно формуле VIII где Р означает полимер полиалкиленгликоля и η является целым числом от 1 до 5.
  43. 43. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.42, где Р является полиэтиленгликолем, имеющим структуру формулы II
    Е- (О-СН2СН2)а-, где Е означает водород, С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, регистрируемую метку или остаток, подходящий для образования связи между соединением формулы VIII и биологиче ски активным соединением или его предшественником; и а является целым числом от 4 до 10000.
  44. 44. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.42, где заместители в цикле расположены в мета- или пара-положении.
  45. 45. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.40, имеющий структуру согласно формуле IX где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    каждый η и и независимо равен 0 или является целым числом от 1 до 5 и
    Ζ является водородом, насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью.
  46. 46. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.45, где заместители в цикле расположены в мета- или пара-положении.
  47. 47. Активированный полимер полиалкиленгликоля по п.45, где Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II
    Е- (О-СН2СН2)а-, где Е означает водород, С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, регистрируемую метку или остаток, подходящий для образования связи между соединением формулы IX и биологически активным соединением или его предшественником; и а является целым числом от 4 до 10000.
  48. 48. Композиция, содержащая активированный полимер полиалкиленгликоля по п.1 и биологически активное соединение или его предшественник.
  49. 49. Композиция по п.48, где биологически активное соединение или его предшественник выбраны из группы, состоящей из пептида, аналога пептида, белка, фермента, малой молекулы, красителя, липида, нуклеозида, олигонуклеотида, аналога олигонуклеотида, сахара, олигосахарида, клетки, вируса, липосо мы, микрочастицы, поверхности и мицеллы.
    - 78 011829
  50. 50. Полимерный конъюгат, имеющий структуру согласно формуле XIV где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЯН', 8О2ЛК' или ΝΚ';
    О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    каждый К', Ζ и Ζ' независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтио группы;
    К* означает связывающий остаток;
    В означает биологически активное соединение или его предшественник;
    т равно 0 или 1;
    каждый η независимо равен 0 или является целым числом от 1 до 5 и р равно 1, 2 или 3.
  51. 51. Полимерный конъюгат по п.50, где К* образован в результате взаимодействия остатка, выбранного из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метак рилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Н-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля, с биологически активным соединением или его предшественником.
  52. 52. Полимерный конъюгат по п.50, где Р является полиэтиленгликолем, имеющим структуру формулы II
    Е- (О-СН2СН2) а-, где Е означает водород, С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью или регистрируемую метку и а является целым числом от 4 до 10000.
  53. 53. Полимерный конъюгат по п.52, где Е является метилом.
  54. 54. Полимерный конъюгат по п.50, где Р является полиэтиленгликолем, имеющим структуру формулы II
    Е- (О-СН2СН2)а-, где Е является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы XIV и биологически активным соединением или его предшественником; и а является целым числом от 4 до 10000.
  55. 55. Полимерный конъюгат по п.54, где Е образует связь с другим биологически активным соединением В.
  56. 56. Полимерный конъюгат по п.54, где Е образует связь с биологически активным соединением, отличным от В.
  57. 57. Полимерный конъюгат по п.54, где Е образует дополнительную связь с биологически активным соединением В.
  58. 58. Полимерный конъюгат по п.54, где Е выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидро
    - 79 011829 ксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-И-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  59. 59. Полимерный конъюгат по п.54, где Е имеет структуру согласно формуле III к----НС—(СН2);---(У)„—ς--X— СУ/2С\У2-Ζ >
    где каждый Ц, X, Υ, Ζ, т и η независимо имеет значения, которые определены;
    каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
    К'' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником.
  60. 60. Полимерный конъюгат по п.54, где Е имеет структуру согласно формуле IV
    К---НС (СН^--X--СйГ2С1ЛГ2—
    Ζ где каждый X, Ζ и η независимо имеет значения, которые определены;
    каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
    К''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
  61. 61. Полимерный конъюгат по п.59, где К'' выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-И-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  62. 62. Полимерный конъюгат по п.60, где К''' выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-И-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  63. 63. Полимерный конъюгат по п.52, где Е является регистрируемой меткой.
  64. 64. Полимерный конъюгат по п.63, где Е выбран из группы, состоящей из радиоактивных изотопов, флуоресцентных остатков, фосфоресцентных остатков, хемилюминесцентных остатков и квантовых меток.
  65. 65. Полимерный конъюгат по п.50, где О является замещенным или незамещенным алкарилом.
  66. 66. Полимерный конъюгат, имеющий структуру согласно формуле XIVа
    Р—X--О--—к»—в
    Ζ , где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОИК', 8О2ИК' или ИК';
    О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    каждый К' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила,
    - 80 011829 сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероаромагического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    К* означает связывающий остаток;
    В означает биологически активное соединение или его предшественник;
    т равно 0 или 1 и п равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
  67. 67. Полимерный конъюгат по п.66, где К* образован в результате взаимодействия остатка, выбранного из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля, с биологически активным соединением или его предшественником.
  68. 68. Полимерный конъюгат по п.66, где Р является полиэтиленгликолем, имеющим структуру формулы II
    Е- (О-СН2СН2)а-, где Е означает водород, С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью или регистрируемую метку и а является целым числом от 4 до 10000.
  69. 69. Полимерный конъюгат по п.68, где Е является метилом.
  70. 70. Полимерный конъюгат по п.66, где Р является полиэтиленгликолем, имеющим структуру формулы II
    Е- (О-СН2СН2)а-, где Е является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы XIV и биологически активным соединением или его предшественником; и а является целым числом от 4 до 10000.
  71. 71. Полимерный конъюгат по п.70, где Е образует связь с другим биологически активным соединением В.
  72. 72. Полимерный конъюгат по п.70, где Е образует связь с биологически активным соединением, отличным от В.
  73. 73. Полимерный конъюгат по п.70, где Е образует дополнительную связь с биологически активным соединением В.
  74. 74. Полимерный конъюгат по п.70, где Е выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  75. 75. Полимерный конъюгат по п.70, где Е имеет структуру согласно формуле III
    К---нс—(СН^---(Υ)„--Ц--X— С\¥2СУ/2-Ζ > где каждый О, X, Υ, Ζ, т и п независимо имеет значения, которые определены;
    каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
    К'' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником.
  76. 76. Полимерный конъюгат по п.70, где Е имеет структуру согласно формуле IV к··—нс— (СНг^__х—ον/2σνν2— где каждый X, Ζ и п независимо имеет значения, которые определены;
    каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
    К''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
  77. 77. Полимерный конъюгат по п.75, где К'' выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, за
    - 81 011829 щищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  78. 78. Полимерный конъюгат по п.75, где К''' выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  79. 79. Полимерный конъюгат по п.68 где Е является регистрируемой меткой.
  80. 80. Полимерный конъюгат по п.79, где Е выбран из группы, состоящей из радиоактивных изотопов, флуоресцентных остатков, фосфоресцентных остатков, хемилюминесцентных остатков и квантовых меток.
  81. 81. Полимерный конъюгат по п.66 где О является замещенным или незамещенным алкарилом.
  82. 82. Полимерный конъюгат, имеющий структуру согласно формуле XV где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЫК', 8О2ЫК' или ЫК';
    Т1 и Т2 независимо отсутствуют или являются насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    каждый К' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    каждый Ь независимо означает насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    К* является связывающим остатком;
    В является биологически активным соединением или его предшественником;
    т равно 0 или 1;
    й равно 0 или является целым числом от 1 до 4 и п равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
  83. 83. Полимерный конъюгат по п.82, где К* образован в результате взаимодействия остатка, выбранного из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, аце
    - 82 011829 таля, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля, с биологически активным соединением или его предшественником.
  84. 84. Полимерный конъюгат по п.82, где Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II
    Е- (О-СН2СН2) а-, где Е означает водород, С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью или регистрируемую метку и а является целым числом от 4 до 10000.
  85. 85. Полимерный конъюгат по п.84 где Е является метилом.
  86. 86. Полимерный конъюгат по п.82, где Р означает полиэтиленгликоль, имеющий структуру формулы II
    Е- (О-СН2СН2)а-/ где Е является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы XV и биологически активным соединением или его предшественником; и а является целым числом от 4 до 10000.
  87. 87. Полимерный конъюгат по п.86, где Е выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  88. 88. Полимерный конъюгат по п.86, где Е имеет структуру согласно формуле III
    К---нс—(СН^---(Υ)„--ς--X— С\У2С\У2-Ζ >
    где О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    каждый X, Υ, Ζ, т и η независимо имеет значения, которые определены;
    каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
    В'' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником.
  89. 89. Полимерный конъюгат по п.86 где Е имеет структуру согласно формуле IV
    К---НС—(СН£^--X---СХ¥2СТ¥2--где X, Ζ и η имеют значения, которые определены;
    каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
    В''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
  90. 90. Полимерный конъюгат по п.88, где В'' выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  91. 91. Полимерный конъюгат по п.89, где В''' может быть выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида,
    - 83 011829 защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  92. 92. Полимерный конъюгат по п.84, где Е является регистрируемой меткой.
  93. 93. Полимерный конъюгат по п.92, где Е выбран из группы, состоящей из радиоактивных изотопов, флуоресцентных остатков, фосфоресцентных остатков, хемилюминесцентных остатков и квантовых меток.
  94. 94. Полимерный конъюгат, имеющий структуру согласно формуле XVI где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЫК', 8О2ЫВ' или ЫК';
    Т1 и Т2 независимо отсутствуют или означают насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
    каждый В' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
    каждый Ь независимо означает насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    В* является связывающим остатком;
    В является биологически активной молекулой;
    т равно 0 или 1;
    6 равно 0 или является целым числом от 1 до 4 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
  95. 95. Полимерный конъюгат по п.94, где В* является метиленовой группой и В является биологически активной молекулой, имеющей аминогруппу, при этом метиленовая группа образует связь с аминогруппой на В.
  96. 96. Полимерный конъюгат по п.95, где амин выбран из группы, состоящей из аминоконца пептида, амина боковой цепи аминокислоты в пептиде или амин гликозилирующего заместителя гликозилированного пептида.
  97. 97. Полимерный конъюгат по п.96, где амин является аминоконцом пептида.
  98. 98. Полимерный конъюгат по п.97, где пептид является интерфероном.
  99. 99. Полимерный конъюгат по п.98, где интерферон является интерфероном-бета.
  100. 100. Полимерный конъюгат по п.99, где интерферон-бета является интерфероном-бета-1а.
  101. 101. Полимерный конъюгат по п.94, имеющий структуру согласно формуле XVII
    Ζ где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    Ζ является водородом, насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью;
    В* является связывающим остатком;
    В является биологически активной молекулой и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
  102. 102. Полимерный конъюгат по п.101, где В* является метиленом и В является биологически активной молекулой, связанной посредством амина.
  103. 103. Полимерный конъюгат по п.102, где амин является аминоконцом пептида.
  104. 104. Полимерный конъюгат по п.103, где пептид является интерфероном.
  105. 105. Полимерный конъюгат по п.104, где пептид является интерфероном-бета.
    - 84 011829
  106. 106. Полимерный конъюгат по п.105, где интерферон-бета является интерфероном-бета-1а.
  107. 107. Полимерный конъюгат по п.94, имеющий структуру согласно формуле ΧνΙΙΙ где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    К* является связывающим остатком;
    В является биологически активной молекулой и п равно 1 или 2.
  108. 108. Полимерный конъюгат по п.107, где К* является метиленом и В является биологически активной молекулой, связанной посредством амина.
  109. 109. Полимерный конъюгат по п.108, где амин является аминоконцом пептида.
  110. 110. Полимерный конъюгат по п.109, где пептид является интерфероном.
  111. 111. Полимерный конъюгат по п.110, где интерферон-бета является интерфероном-бета-1а.
  112. 112. Полимерный конъюгат по п.94, где Р является полиэтиленгликолем, имеющим структуру формулы ΙΙ
    Е- (О-СН2СН2)<-, где Е означает водород, С1-С20алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, регистрируемую метку или остаток, подходящий для образования связи между соединением формулы ΧνΙ и биологически активным соединением или его предшественником; и а является целым числом от 4 до 10000.
  113. 113. Полимерный конъюгат по п.112, где Е является метилом.
  114. 114. Полимерный конъюгат по п.94, имеющий структуру согласно формуле ΧΙΧ где Р означает полимер полиалкиленгликоля; каждый п и и независимо равен 0 или является целым числом от 1 до 5;
    Ζ означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
    К* является связывающим остатком и
    В является биологически активной молекулой.
  115. 115. Полимерный конъюгат по п.114, где К* означает метилен и В означает биологически активную молекулу, связанную посредством амина.
  116. 116. Полимерный конъюгат по п.115, где амин является аминоконцом пептида.
  117. 117. Полимерный конъюгат по п.116, где пептид является интерфероном.
  118. 118. Полимерный конъюгат по п.117, где интерферон-бета является интерферонрм-бета-1а.
  119. 119. Полимерный конъюгат по п.112, где Е выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, за щищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  120. 120. Полимерный конъюгат по п.112, где Е имеет структуру согласно формуле ΙΙΙ
    К---нс—(СН^---(У)т--О--X—С\У2СУЛ>-Ζ >
    где О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    каждый Χ, Υ, Ζ, т и п независимо имеет значения, которые определены;
    каждый независимо означает водород или С1-С7алкил и
    - 85 011829
    В'' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы III и биологически активным соединением или его предшественником.
  121. 121. Полимерный конъюгат по п.112, где Е имеет структуру согласно формуле IV
    К.---НС—(СНг)^—X---СТУ2С1¥2--Ζ , где X, Ζ и η имеют значения, которые определены;
    каждый независимо означает водород или С1 -С7алкил и
    В''' является остатком, подходящим для образования связи между соединением формулы IV и биологически активным соединением или его предшественником.
  122. 122. Полимерный конъюгат по п.120, где В'' выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  123. 123. Полимерный конъюгат по п.121, где В''' может быть выбран из группы, состоящей из карбоновой кислоты, сложного эфира, альдегида, гидрата альдегида, ацеталя, гидроксильной группы, защищенной гидроксильной группы, карбоната, алкенила, акрилата, метакрилата, акриламида, замещенного или незамещенного тиола, галогена, замещенного или незамещенного амина, защищенного амина, гидразида, защищенного гидразида, сукцинимидила, изоцианата, изотиоцианата, дитиопиридина, винилпиридина, йодацетамида, эпоксида, гидроксисукцинимидила, азола, малеимида, сульфона, аллила, винилсульфона, трезила, сульфо-Ы-сукцинимидила, диона, мезила, тозила и глиоксаля.
  124. 124. Полимерный конъюгат по п.112, где Е является регистрируемой меткой.
  125. 125. Полимерный конъюгат по п.124, где Е выбран из группы, состоящей из радиоактивных изотопов, флуоресцентных остатков, фосфоресцентных остатков, хемилюминесцентных остатков и квантовых меток.
  126. 126. Полимерный конъюгат согласно формуле XX где каждый X и Υ независимо означает О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЫВ', 8О2ЫВ' или ЫВ';
    Т1 и Т2 независимо отсутствуют или означают насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
    каждый В' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
    каждый Ь независимо является насыщенной или ненасыщенной С1 -С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1 -С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    0 означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С20 насыщенный или ненасыщеньый алкил, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира или алкилтиогруппы;
    каждый независимо является водородом или С1 -С7алкилом;
    В* и В** независимо являются связывающими остатками;
    В и В' независимо являются биологически активными молекулами;
    - 86 011829 т равно 0 или 1;
    б равно 0 или является целым числом от 1 до 4;
    а является целым числом от 4 до 10000 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
  127. 127. Полимерный конъюгат по п.126, где В и В' представляют собой одну и ту же биологически активную молекулу.
  128. 128. Полимерный конъюгат по п.126, где В и В' являются разными биологически активными молекулами.
  129. 129. Полимерный конъюгат согласно формуле XXI где X и Υ независимо означает О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЫЯ', 8О2ЫЯ' или ЫЯ';
    Т и Т2 независимо отсутствуют или означают насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
    каждый Я' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
    каждый Ь независимо является насыщенной или ненасыщенной С1 -С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1 -С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    каждый независимо является водородом или С1 -С7алкилом;
    Я* и Я** независимо являются связывающими остатками;
    В и В' независимо являются биологически активными молекулами;
    т равно 0 или 1;
    б равно 0 или является целым числом от 1 до 4;
    а является целым числом от 4 до 10000 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
  130. 130. Полимерный конъюгат по п.129, где В и В' представляют собой одну и ту же биологически активную молекулу.
  131. 131. Полимерный конъюгат по п.129, где В и В' являются разными биологически активными молекулами.
  132. 132. Фармацевтическая композиция, содержащая композицию по п.48 и фармацевтически приемлемый носитель.
  133. 133. Фармацевтическая композиция, содержащая полимерный конъюгат по п.50 и фармацевтически приемлемый носитель.
  134. 134. Фармацевтическая композиция, содержащая полимерный конъюгат по п.82 и фармацевтически приемлемый носитель.
  135. 135. Фармацевтическая композиция, содержащая полимерный конъюгат по п.94 и фармацевтически приемлемый носитель.
  136. 136. Фармацевтическая композиция, содержащая полимерный конъюгат по п.101 и фармацевтически приемлемый носитель.
  137. 137. Фармацевтическая композиция, содержащая полимерный конъюгат по п.126 и фармацевтически приемлемый носитель.
  138. 138. Фармацевтическая композиция, содержащая полимерный конъюгат по п.129 и фармацевтически приемлемый носитель.
  139. 139. Композиция, содержащая продукт взаимодействия соединения по п.1 и биологически активного соединения или его предшественника.
  140. 140. Композиция по любому из пп.132-138, содержащая полимерный конъюгат, имеющий структуру согласно формуле XIV р—х--о---(Υ)—- (СН^—СН—к*—в
    - 87 011829 где все переменные имеют значения, определенные выше; и где
    К* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К с химически активным остатком на биологически активном соединении или его предшественнике; и
    В является биологически активным соединением или его предшественником.
  141. 141. Композиция, содержащая продукт взаимодействия соединения по п.27 и биологически актив- ного соединения или его предшественника.
  142. 142. Композиция по п.141, формуле XV содержащая продукт взаимодействия, имеющий структуру согласно где все переменные имеют значения, определенные выше; и где
    К* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К с химически активным остатком на биологически активном соединении или его предшественнике; и
    В является биологически активным соединением или его предшественником.
  143. 143. Композиция по п.141, содержащая продукт взаимодействия, имеющий структуру согласно формуле XX где все переменные имеют значения, определенные выше; и где каждый независимо означает водород или С1-С7алкил;
    К* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К с химически активным остатком на биологически активном соединении В или его предшественнике;
    К** является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К'' с химически активным остатком на биологически активном соединении В' или его предшественнике; и
    В и В' независимо являются биологически активным соединением или его предшественником.
  144. 144. Композиция по п.141, содержащая продукт взаимодействия, имеющий структуру согласно формуле XXI где все переменные имеют значения, определенные выше; и где каждый независимо означает водород или С1-С7алкил;
    К* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К с химически активным остатком на биологически активном соединении В или его предшественнике;
    К** является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К''' с химически активным остатком на биологически активном соединении В' или его предшественнике; и
    В и В' независимо являются биологически активным соединением или его предшественником.
  145. 145. Композиция, содержащая продукт взаимодействия соединения по п.40 и биологически активного соединения или его предшественника.
  146. 146. Композиция по п.145, содержащая продукт взаимодействия, имеющий структуру согласно формуле XVI где все переменные имеют значения, определенные выше; и где
    К* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К с химически активным остатком на биологически активном соединении или его предшественнике; и
    - 88 011829
    В является биологически активным соединением или его предшественником.
  147. 147. Композиция, содержащая продукт взаимодействия соединения по п.41 и биологически активного соединения или его предшественника.
  148. 148. Композиция по п.147, содержащая продукт взаимодействия, имеющий структуру согласно формуле XVII
    Ζ где все переменные имеют значения, определенные выше; и где
    К* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К с химически активным остатком на биологически активном соединении или его предшественнике; и
    В является биологически активным соединением или его предшественником.
  149. 149. Композиция, содержащая продукт взаимодействия соединения по п.42 и биологически активного соединения или его предшественника.
  150. 150. Композиция по п.149, содержащая продукт взаимодействия, имеющий структуру согласно формуле XVIII где все переменные имеют значения, определенные выше; и где
    К* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К с химически активным остатком на биологически активном соединении или его предшественнике; и
    В является биологически активным соединением или его предшественником.
  151. 151. Композиция, содержащая продукт взаимодействия соединения по п.45 и биологически актив ного соединения или его предшественника.
  152. 152. Композиция по п.151, содержащая продукт взаимодействия, имеющий структуру согласно формуле XIX где все переменные имеют значения, определенные выше; и где
    К* является связывающим остатком, образованным в результате взаимодействия К с химически активным остатком на биологически активном соединении или его предшественнике; и
    В является биологически активным соединением или его предшественником.
  153. 153. Способ лечения пациента с поддающейся лечению вирусной инфекцией, включающий введение пациенту эффективного количества композиции, имеющей структуру согласно формуле XIV
    ΓΖΊ где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, ΟΌΝ^', 8О^К' или ΝΒ';
    О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил (включая конденсированные бициклические и связанные мостиками бициклические кольцевые структуры), замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С20 насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    каждый К', Ζ и Ζ' независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетеро
    - 89 011829 арильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    К* означает связывающий остаток;
    В является биологически активным соединением или его предшественником;
    т равно 0 или 1;
    каждый η равен 0 или является целым числом от 1 до 5 и р равно 1, 2 или 3.
  154. 154. Способ по п.153, где В является биологически активным пептидом.
  155. 155. Слособ по п.154, где В является интерфероном.
  156. 156. Способ по п.155, где В является интерфероном-бета-1а.
  157. 157. Способ по п.153, где композиция дополнительно содержит биологически активное средство, выбранное из группы, состоящей из противовирусной малой молекулы, противовирусной нуклеиновой кислоты и пептидного противовирусного средства.
  158. 158. Способ по п.157, где противовирусное средство выбрано из группы, состоящей из рибавирина, левовирина, 3ТС, ЕТС, МВ686, зидовудина, ацикловира, ганцикловира, вирамида, VX-497, VX-950 и ^8-14803.
  159. 159. Способ по п.153, где вирусной инфекцией является хронический гепатит С.
  160. 160. Способ лечения пациента с поддающейся лечению вирусной инфекцией, включающий введение пациенту эффективного количества композиции, имеющей структуру согласно формуле XIVа
    Р--X--О---(У^ССНД—СН—к*—в
    2 , где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЫК', 8О2ЫК' или ЫК';
    О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил (включая конденсированные бициклические и связанные мостиками бициклические кольцевые структуры), замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С20 насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    каждый К' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    К* означает связывающий остаток;
    В является биологически активным соединением или его предшественником;
    т равно 0 или 1;
    η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
  161. 161. Способ по п.160, где В является биологически активным пептидом.
  162. 162. Способ по п.161, где В является интерфероном.
  163. 163. Способ по п.162, где В является интерфероном-бета-1а.
  164. 164. Способ по п.160, где композиция дополнительно содержит биологически активное средство, выбранное из группы, состоящей из противовирусной малой молекулы, противовирусной нуклеиновой кислоты и пептидного противовирусного средства.
  165. 165. Способ по п.164, где противовирусное средство выбрано из группы, состоящей из рибавирина,
    - 90 011829 левовирина, 3ТС, ЕТС, МВ686, зидовудина, ацикловира, ганцикловира, вирамида, νΧ-497, νΧ-950 и ^8-14803.
  166. 166. Способ по п.160, где вирусной инфекцией является хронический гепатит С.
  167. 167. Способ лечения пациента с поддающейся лечению вирусной инфекцией, включающий введение пациенту эффективного количества композиции, имеющей структуру согласно формуле XV где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, ΟΌΝ^', 8Ο2NЯ' или ΝΚ'.
    Τι и Т2 независимо отсутствуют или являются насыщенной или ненасыщенной С1-С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    каждый Я' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    каждый Ь независимо означает насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    Я* является связывающим остатком;
    В является биологически активным соединением или его предшественником;
    т равно 0 или 1;
    ά равно 0 или является целым числом от 1 до 4 и η равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
  168. 168. Способ по п.167, где В является биологически активным пептидом.
  169. 169. Способ по п.168, где В является интерфероном.
  170. 170. Способ по п.169, где В является интерфероном-бета-1а.
  171. 171. Способ по п.167, где композиция дополнительно содержит биологически активное средство, выбранное из группы, состоящей из противовирусной малой молекулы, противовирусной нуклеиновой кислоты и пептидного противовирусного средства.
  172. 172. Способ по п.171, где противовирусное средство выбрано из группы, состоящей из рибавирина, левовирина, 3ТС, ЕТС, МВ686, зидовудина, ацикловира, ганцикловира, вирамида, 7X497, 7X^50 и ^8-14803.
  173. 173. Способ по п.167, где вирусной инфекцией является хронический гепатит С.
  174. 174. Способ лечения пациента с поддающейся лечению вирусной инфекцией, включающий введение пациенту эффективного количества композиции, имеющей структуру согласно формуле XVI
    - 91 011829 где Р означает полимер полиалкиленгликоля;
    X и Υ независимо означают О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЫК', 8О2ЫК' или ЫК';
    Т1 и Т2 независимо отсутствуют или означают насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
    каждый К' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
    каждый Ь независимо означает насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил является С1-С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    К* является связывающим остатком;
    В является биологически активной молекулой;
    т равно 0 или 1;
    й равно 0 или является целым числом от 1 до 4 и п равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
  175. 175. Способ по п.174, где В является биологически активным пептидом.
  176. 176. Способ по п.175, где В является интерфероном.
  177. 177. Способ по п.176, где В является интерфероном-бета-1а.
  178. 178. Способ по п.174, где композиция дополнительно содержит биологически активное средство, выбранное из группы, состоящей из противовирусной малой молекулы, противовирусной нуклеиновой кислоты и пептидного противовирусного средства.
  179. 179. Способ по п.178, где противовирусное средство выбрано из группы, состоящей из рибавирина, левовирина, 3ТС, ЕТС, МВ686, зидовудина, ацикловира, ганцикловира, вирамида, 7X497, 77-950 и ^8-14803.
  180. 180. Способ по п.174, где вирусной инфекцией является хронический гепатит С.
  181. 181. Способ лечения пациента с поддающейся лечению вирусной инфекцией, включающий введение пациенту эффективного количества композиции, имеющей структуру согласно формуле XX где каждый X и Υ независимо означает О, 8, СО, СО2, СО8, 8О, 8О2, СОЫК', 8О2ЫК' или ЫК';
    Т1 и Т2 независимо отсутствуют или означают насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
    каждый К' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
    каждый независимо означает водород или С1-С7алкил;
    каждый Ь независимо является насыщенной или ненасыщенной С1 -С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1 -С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    - 92 011829
    О означает С3-С8 насыщенный или ненасыщенный циклический алкил или циклический гетероалкил, замещенную или незамещенную арильную или гетероарильную группу или замещенный или незамещенный алкарил, где алкил означает С1-С20 насыщенный или ненасыщенный алкил, или гетероалкарильную группу, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    Я* и Я** независимо являются связывающими остатками;
    В и В' независимо являются биологически активными молекулами;
    т равно 0 или 1;
    б равно 0 или является целым числом от 1 до 4;
    а является целым числом от 4 до 10000 и п равно 0 или является целым числом от 1 до 5.
  182. 182. Способ по п.181, где В является биологически активным пептидом.
  183. 183. Способ по п.182, где В является интерфероном.
  184. 184. Способ по п.183, где В является интерфероном-бета-1а.
  185. 185. Способ по п.181, где композиция дополнительно содержит биологически активное средство, выбранное из группы, состоящей из противовирусной малой молекулы, противовирусной нуклеиновой кислоты и пептидного противовирусного средства.
  186. 186. Способ по п.185, где противовирусное средство выбрано из группы, состоящей из рибавирина, левовирина, 3ТС, РТС, МВ686, зидовудина, ацикловира, ганцикловира, вирамида, VX-497, 7X^50 и ^3-14803.
  187. 187. Способ по п.181, где вирусной инфекцией является хронический гепатит С.
  188. 188. Способ лечения пациента с поддающейся лечению вирусной инфекцией, включающий введение пациенту эффективного количества композиции, имеющей структуру согласно формуле XXI где каждый X и Υ независимо означает О, δ, СО, СО2, СОЗ, δθ, δθ2, СОЫЯ', ЗО2ЫЯ' или ЫЯ';
    Т1 и Т2 независимо отсутствуют или означают насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
    каждый Я' и Ζ независимо означает водород, насыщенную или ненасыщенную С1-С20алкильную или гетероалкильную группу с прямой или разветвленной цепью;
    каждый независимо означает водород или С1-С7алкил;
    каждый Ь независимо является насыщенной или ненасыщенной С1 -С20алкильной или гетероалкильной группой с прямой или разветвленной цепью, С3-С8 насыщенным или ненасыщенным циклическим алкилом или циклическим гетероалкилом, замещенной или незамещенной арильной или гетероарильной группой или замещенным или незамещенным алкарилом, где алкил является С1 -С20 насыщенным или ненасыщенным алкилом, или гетероалкарильной группой, где заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбонила, карбоксилата, сложного эфира, формила, ацила, тиокарбонила, сложного тиоэфира, тиоацетата, тиоформиата, алкоксила, фосфорила, фосфоната, фосфината, аминогруппы, амидогруппы, амидина, имина, цианогруппы, нитрогруппы, азидогруппы, сульфгидрила, сульфата, сульфоната, сульфамоила, сульфонамидогруппы, сульфонила, гетероциклила, аралкила, ароматического остатка, гетероароматического остатка, иминогруппы, силила, простого эфира и алкилтиогруппы;
    Я* и Я** независимо являются связывающими остатками;
    В и В' независимо являются биологически активными молекулами;
    т равно 0 или 1;
    б равно 0 или является целым числом от 1 до 4;
    а является целым числом от 4 до 10000 и каждый п равен 0 или является целым числом от 1 до 5.
  189. 189. Способ по п.188, где В является биологически активным пептидом.
  190. 190. Способ по п.189, где В является интерфероном.
  191. 191. Способ по п.190, где В является интерфероном-бета-1а.
  192. 192. Способ по п.188, где композиция дополнительно содержит биологически активное средство, выбранное из группы, состоящей из противовирусной малой молекулы, противовирусной нуклеиновой кислоты и пептидного противовирусного средства.
    - 93 011829
  193. 193. Способ по п.192, где противовирусное средство выбрано из группы, состоящей из рибавирина, левовирина, 3ТС, РТС, МВ686, зидовудина, ацикловира, ганцикловира, вирамида, УК-497, УК-950 и ^8-14803.
  194. 194. Способ по п.188, где вирусной инфекцией является хронический гепатит С.
EA200701386A 2002-01-18 2003-01-17 Полиалкиленгликоль с остатком для конъюгации биологически активного соединения EA011829B1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US34991702P 2002-01-18 2002-01-18

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200701386A1 EA200701386A1 (ru) 2007-10-26
EA011829B1 true EA011829B1 (ru) 2009-06-30

Family

ID=27613339

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200701386A EA011829B1 (ru) 2002-01-18 2003-01-17 Полиалкиленгликоль с остатком для конъюгации биологически активного соединения
EA200400962A EA009783B1 (ru) 2002-01-18 2003-01-17 Полиалкиленгликоль с остатком для конъюгации биологически активного соединения

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200400962A EA009783B1 (ru) 2002-01-18 2003-01-17 Полиалкиленгликоль с остатком для конъюгации биологически активного соединения

Country Status (35)

Country Link
US (2) US8017733B2 (ru)
EP (3) EP1476181B1 (ru)
JP (5) JP2005526151A (ru)
KR (1) KR100964411B1 (ru)
CN (2) CN101700401B (ru)
AU (1) AU2003210564B2 (ru)
BE (1) BE2016C040I2 (ru)
BG (1) BG66525B1 (ru)
BR (1) BRPI0306993B8 (ru)
CA (4) CA2473526C (ru)
CY (2) CY2016027I2 (ru)
CZ (1) CZ2004877A3 (ru)
DK (2) DK3025726T3 (ru)
EA (2) EA011829B1 (ru)
EE (1) EE05509B1 (ru)
ES (2) ES2566797T3 (ru)
GE (2) GEP20064024B (ru)
HK (3) HK1072721A1 (ru)
HU (4) HUE047557T2 (ru)
IL (1) IL163006A (ru)
IS (1) IS2989B (ru)
LU (1) LU93162I2 (ru)
ME (2) MEP35608A (ru)
MX (1) MXPA04006855A (ru)
NL (1) NL300826I2 (ru)
NO (3) NO339857B1 (ru)
NZ (1) NZ534708A (ru)
PL (2) PL213322B1 (ru)
PT (1) PT3025726T (ru)
RS (1) RS55578B1 (ru)
SI (2) SI3025726T1 (ru)
SK (1) SK3102004A3 (ru)
UA (1) UA82184C2 (ru)
WO (1) WO2003061577A2 (ru)
ZA (1) ZA200406555B (ru)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101700401B (zh) 2002-01-18 2013-08-14 比奥根艾迪克Ma公司 具有用于共轭生物活性化合物的部分的聚亚烷基二醇
US20150246097A9 (en) * 2002-01-18 2015-09-03 Biogen Idec Ma Inc. Polyalkylene Polymer Compounds and Uses Thereof
NZ538624A (en) 2002-09-09 2007-01-26 Nektar Therapeutics Al Corp Water-soluble polymer alkanals
US8129330B2 (en) 2002-09-30 2012-03-06 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof
RS20050501A (en) * 2002-12-26 2007-08-03 Mountain View Pharmaceuticals Inc., Polymer conjugates of cytokines,chemokines,growth factors, polypeptide hormones and antagonists thereof with preserved receptor-binding activity
PT1667708E (pt) * 2002-12-26 2012-09-14 Mountain View Pharmaceuticals Conjugados de interferão-beta-1b e polietileno glicol apresentando uma potência biológica in vitro aumentada
US7432331B2 (en) 2002-12-31 2008-10-07 Nektar Therapeutics Al, Corporation Hydrolytically stable maleimide-terminated polymers
AR044926A1 (es) 2003-06-26 2005-10-12 Control Delivery Sys Inc Sistema de suministro de farmacos gelificante in situ
TWI367103B (en) 2003-06-26 2012-07-01 Psivida Inc Bioerodible sustained release drug delivery systems
US20090312344A1 (en) * 2004-05-31 2009-12-17 Mohammad Salman Arylpiperazine derivatives as adrenergic receptor antagonists
KR101320936B1 (ko) 2004-12-21 2013-10-23 넥타르 테라퓨틱스 안정화된 중합체성 티올 시약
US20070004635A1 (en) * 2005-06-02 2007-01-04 Schering Corporation Method of treating interferon non-responders using HCV protease inhibitor
CA2614200A1 (en) * 2005-07-08 2007-01-18 Elan Pharmaceuticals, Inc. Preparation of polymer conjugates of therapeutic, agricultural, and food additive compounds
EP2019690A2 (en) * 2006-05-22 2009-02-04 Elan Pharmaceuticals Inc. Preparation of polymer conjugates of vla-4 antagonists via a mitsunobu's reaction
US20100222546A1 (en) * 2006-11-28 2010-09-02 David Crich Methods for the preparation of functionalized peptides, proteins and carbohydrates and their conjugates
EP2175878A4 (en) * 2007-07-11 2014-12-03 Belrose Pharma Inc POLYMER DRUG DISPENSING SYSTEM WITH A MULTIPLE SUBSTITUTED AROMATIC PART
JP2010533233A (ja) * 2007-07-11 2010-10-21 エンゾン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド 芳香族アリル酸を含むポリマー性薬剤送達システム
CL2008002399A1 (es) * 2007-08-16 2009-01-02 Pharmaessentia Corp Conjugado sustancialmente puro que posee una porcion polimerica, una porcion proteica (interferon alfa 2b) y un ligante alifatico de 1 a 10 atomos de carbono, util en el tratamiento de las hepatitis b o c.
CA2727026A1 (en) * 2008-06-05 2009-12-10 Zymogenetics, Llc Use of pegylated type iii interferons for the treatment of hepatitis c
UA104146C2 (ru) * 2008-07-31 2014-01-10 Фармаиссеншиа Корп. ПОЛИМЕРНЫЕ КОНЪЮГАТЫ ФРАГМЕНТОВ ИНТЕРФЕРОНА-β, ЭРИТРОПОЭТИНА И ГОРМОНА РОСТА
GB0823309D0 (en) 2008-12-19 2009-01-28 Univ Bath Functionalising reagents and their uses
EP2439736A1 (en) 2009-06-02 2012-04-11 Panasonic Corporation Down-mixing device, encoder, and method therefor
UA109646C2 (uk) * 2009-12-10 2015-09-25 Терапевтичне застосування кон'югатів білка з полімером
US20130225789A1 (en) * 2012-02-29 2013-08-29 Yi Sun Polyethylene Glycol Having Hetero Multiple Functional Groups
US8993614B2 (en) 2012-03-15 2015-03-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Substituted pyrrolidine-2-carboxamides
KR101475630B1 (ko) * 2013-05-31 2014-12-22 동국대학교 산학협력단 포도근 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 c형 간염의 예방 또는 치료용 조성물
KR101671501B1 (ko) * 2014-07-24 2016-11-03 에이비온 주식회사 페길화된 인터페론-베타 변이체
DK3183264T3 (da) 2014-08-19 2020-11-02 Biogen Ma Inc Pegyleringsfremgangsmåde
GB201419108D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Glythera Ltd Materials and methods relating to linkers for use in antibody drug conjugates
ES2966888T3 (es) 2014-11-06 2024-04-24 Pharmaessentia Corp Régimen de dosificación para el interferón pegilado
ES2831079T3 (es) * 2017-06-28 2021-06-07 Construction Research & Technology Gmbh Dispersante para partículas inorgánicas
US11472894B2 (en) 2018-07-23 2022-10-18 Carnegie Mellon University Enzyme-assisted ATRP procedures
CN109232898A (zh) * 2018-08-02 2019-01-18 张玲 一种具有抗凝血功能的聚酰亚胺新材料的制备方法
CN111534458B (zh) * 2020-04-13 2022-01-14 浙江工业大学 无色杆菌tbc-1及其在降解1,3,6,8-四溴咔唑中的应用
CN113716982B (zh) * 2021-08-24 2022-05-06 重庆云瑞肥业有限公司 一种食品垃圾回收用发酵制肥装置

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5252714A (en) * 1990-11-28 1993-10-12 The University Of Alabama In Huntsville Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde
US5990237A (en) * 1997-05-21 1999-11-23 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines
WO2000023114A2 (en) * 1998-10-16 2000-04-27 Biogen, Inc. Polymer conjugates of interferon beta- 1a and their uses
US20010046481A1 (en) * 1999-12-23 2001-11-29 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable carbamate derivatives of poly(ethylene glycol)
US20020044921A1 (en) * 2000-09-29 2002-04-18 Seoju Lee Pegylated interleukin-10
US20020091288A1 (en) * 1995-10-19 2002-07-11 The University Of Washington Discrete-length polyethylene glycols
WO2002060929A2 (en) * 2001-02-01 2002-08-08 Biogen, Inc. Polymer conjugates of neublastin and methods of using same
WO2003049699A2 (en) * 2001-12-11 2003-06-19 Sun Bio, Inc. Novel monofunctional polyethylene glycol aldehydes

Family Cites Families (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3710795A (en) 1970-09-29 1973-01-16 Alza Corp Drug-delivery device with stretched, rate-controlling membrane
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4002531A (en) 1976-01-22 1977-01-11 Pierce Chemical Company Modifying enzymes with polyethylene glycol and product produced thereby
DE3262575D1 (en) 1981-12-23 1985-04-18 Schering Corp Stabilised interferon formulations and their preparation
WO1985003934A1 (en) * 1984-03-06 1985-09-12 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein and process for its preparation
GB8334102D0 (en) 1983-12-21 1984-02-01 Searle & Co Interferons with cysteine pattern
EP0154316B1 (en) 1984-03-06 1989-09-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified lymphokine and production thereof
EP0206448B1 (en) 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
WO1987000056A1 (en) 1985-06-26 1987-01-15 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4766106A (en) 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4917888A (en) 1985-06-26 1990-04-17 Cetus Corporation Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
JP2514950B2 (ja) 1986-03-10 1996-07-10 エフ・ホフマン―ラ ロシユ アーゲー 化学修飾蛋白質，その製造法および中間体
US4894226A (en) 1986-11-14 1990-01-16 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polyproline conjugation
US5080891A (en) 1987-08-03 1992-01-14 Ddi Pharmaceuticals, Inc. Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols
US5135919A (en) 1988-01-19 1992-08-04 Children's Medical Center Corporation Method and a pharmaceutical composition for the inhibition of angiogenesis
US5116964A (en) 1989-02-23 1992-05-26 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
US5286637A (en) * 1989-08-07 1994-02-15 Debiopharm, S.A. Biologically active drug polymer derivatives and method for preparing same
US5595732A (en) 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
US5281698A (en) 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation
WO1993012145A1 (en) 1991-12-19 1993-06-24 Baylor College Of Medicine Pva or peg conjugates of peptides for epitope-specific immunosuppression
ZA933926B (en) 1992-06-17 1994-01-03 Amgen Inc Polyoxymethylene-oxyethylene copolymers in conjuction with blomolecules
US5382657A (en) * 1992-08-26 1995-01-17 Hoffmann-La Roche Inc. Peg-interferon conjugates
US5262564A (en) 1992-10-30 1993-11-16 Octamer, Inc. Sulfinic acid adducts of organo nitroso compounds useful as retroviral inactivating agents anti-retroviral agents and anti-tumor agents
US5298410A (en) 1993-02-25 1994-03-29 Sterling Winthrop Inc. Lyophilized formulation of polyethylene oxide modified proteins with increased shelf-life
US5681811A (en) 1993-05-10 1997-10-28 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized therapeutic agent compositions, delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5359030A (en) 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5874075A (en) 1993-10-06 1999-02-23 Amgen Inc. Stable protein: phospholipid compositions and methods
US5951974A (en) 1993-11-10 1999-09-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates
HUT75533A (en) 1993-11-10 1997-05-28 Schering Corp Improved interferon polymer conjugates
US5446090A (en) 1993-11-12 1995-08-29 Shearwater Polymers, Inc. Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules
US5639725A (en) 1994-04-26 1997-06-17 Children's Hospital Medical Center Corp. Angiostatin protein
US5730990A (en) * 1994-06-24 1998-03-24 Enzon, Inc. Non-antigenic amine derived polymers and polymer conjugates
US5650234A (en) 1994-09-09 1997-07-22 Surface Engineering Technologies, Division Of Innerdyne, Inc. Electrophilic polyethylene oxides for the modification of polysaccharides, polypeptides (proteins) and surfaces
US5824784A (en) 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5738846A (en) 1994-11-10 1998-04-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates and process for preparing the same
CN1168694A (zh) 1994-12-07 1997-12-24 诺沃挪第克公司 具有减弱的变应原性的多肽
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
US5672662A (en) 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
SE9503380D0 (sv) * 1995-09-29 1995-09-29 Pharmacia Ab Protein derivatives
US5702717A (en) 1995-10-25 1997-12-30 Macromed, Inc. Thermosensitive biodegradable polymers based on poly(ether-ester)block copolymers
US5908621A (en) 1995-11-02 1999-06-01 Schering Corporation Polyethylene glycol modified interferon therapy
US5747639A (en) 1996-03-06 1998-05-05 Amgen Boulder Inc. Use of hydrophobic interaction chromatography to purify polyethylene glycols
JP2001508783A (ja) 1997-01-29 2001-07-03 ポリマスク・ファーマシューティカルズ・パブリック・リミテッド・カンパニー Ｐｅｇ化法
AU726374B2 (en) 1997-03-05 2000-11-02 University Of Washington Novel screening methods to identify agents that selectively inhibit hepatitis C virus replication
US6448369B1 (en) 1997-11-06 2002-09-10 Shearwater Corporation Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation
US7642323B2 (en) 1997-11-06 2010-01-05 Nektar Therapeutics Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation
US6180095B1 (en) 1997-12-17 2001-01-30 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
WO1999030727A1 (en) * 1997-12-17 1999-06-24 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
US5985263A (en) 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
US5981709A (en) 1997-12-19 1999-11-09 Enzon, Inc. α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same
US5965119A (en) 1997-12-30 1999-10-12 Enzon, Inc. Trialkyl-lock-facilitated polymeric prodrugs of amino-containing bioactive agents
WO1999045964A1 (en) 1998-03-12 1999-09-16 Shearwater Polymers, Incorporated Poly(ethylene glycol) derivatives with proximal reactive groups
SI1421956T1 (sl) 1998-04-28 2007-10-31 Serono Lab Postopek za stopenjsko vezavo polietilenglikola (peg) na polipeptid
US6703381B1 (en) 1998-08-14 2004-03-09 Nobex Corporation Methods for delivery therapeutic compounds across the blood-brain barrier
JP2003503367A (ja) * 1999-06-11 2003-01-28 シアウォーター・コーポレイション キトサンとポリ（エチレングリコール）または関連ポリマーから得られるヒドロゲル
US6531122B1 (en) * 1999-08-27 2003-03-11 Maxygen Aps Interferon-β variants and conjugates
KR20020034181A (ko) 1999-08-27 2002-05-08 맥시겐 에이피에스 새로운 인터페론 베타-유사 분자
US7144574B2 (en) 1999-08-27 2006-12-05 Maxygen Aps Interferon β variants and conjugates
DE60026073T2 (de) 1999-12-22 2006-09-28 Nektar Therapeutics Al, Corp., Huntsville Sterisch gehinderte derivate von wasserlöslichen polymeren
US7053150B2 (en) 2000-12-18 2006-05-30 Nektar Therapeutics Al, Corporation Segmented polymers and their conjugates
TW593427B (en) 2000-12-18 2004-06-21 Nektar Therapeutics Al Corp Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives
IL156059A0 (en) 2001-02-27 2003-12-23 Maxygen Aps NEW INTERFERON beta-LIKE MOLECULES
US7009033B2 (en) 2001-07-02 2006-03-07 Polymer Source Inc. Heterofunctional polyethylene glycol and polyethylene oxide, process for their manufacture
KR100974842B1 (ko) * 2001-10-18 2010-08-11 넥타르 테라퓨틱스 아편양 길항제의 중합체 공액
CN1608079A (zh) * 2001-11-20 2005-04-20 法玛西雅公司 化学修饰的人生长激素缀合物
US7041855B2 (en) 2001-12-11 2006-05-09 Sun Bio, Inc. Monofunctional polyethylene glycol aldehydes
US6916962B2 (en) 2001-12-11 2005-07-12 Sun Bio, Inc. Monofunctional polyethylene glycol aldehydes
KR100488351B1 (ko) 2001-12-11 2005-05-11 선바이오(주) 신규한 폴리에틸렌글리콜-프로피온알데히드 유도체
US6956135B2 (en) 2001-12-11 2005-10-18 Sun Bio, Inc. Monofunctional polyethylene glycol aldehydes
CN101700401B (zh) * 2002-01-18 2013-08-14 比奥根艾迪克Ma公司 具有用于共轭生物活性化合物的部分的聚亚烷基二醇
NZ538624A (en) 2002-09-09 2007-01-26 Nektar Therapeutics Al Corp Water-soluble polymer alkanals
PT1667708E (pt) 2002-12-26 2012-09-14 Mountain View Pharmaceuticals Conjugados de interferão-beta-1b e polietileno glicol apresentando uma potência biológica in vitro aumentada
US20110165122A1 (en) * 2009-11-10 2011-07-07 The Regents Of The University Of California Method for targeted and sustained antiviral therapy

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5252714A (en) * 1990-11-28 1993-10-12 The University Of Alabama In Huntsville Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde
US20020091288A1 (en) * 1995-10-19 2002-07-11 The University Of Washington Discrete-length polyethylene glycols
US5990237A (en) * 1997-05-21 1999-11-23 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines
WO2000023114A2 (en) * 1998-10-16 2000-04-27 Biogen, Inc. Polymer conjugates of interferon beta- 1a and their uses
US20010046481A1 (en) * 1999-12-23 2001-11-29 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable carbamate derivatives of poly(ethylene glycol)
US20020044921A1 (en) * 2000-09-29 2002-04-18 Seoju Lee Pegylated interleukin-10
WO2002060929A2 (en) * 2001-02-01 2002-08-08 Biogen, Inc. Polymer conjugates of neublastin and methods of using same
WO2003049699A2 (en) * 2001-12-11 2003-06-19 Sun Bio, Inc. Novel monofunctional polyethylene glycol aldehydes

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Database CAPLUS on CAS, AN 1997:758014, SHERMAN et al., 'Conjugation of high-molecular weight poly(ethylene glycol) to cytokines,' ACS Symposium Series, 1997 *
Database CAPLUS on CAS, AN 2002 235344, ZACCHIGNA et al., 'Syntheses, chemical and enzymatic stability of new poly(ethylene glycol)-acyclovir prodrugs,' Farmaco, volume 57, no 3, 2002 *
Database CAPLUS on CAS, AN 2002:594875 & WO 02060929 A2, (BIOGEN) 08 August 2002 (08.08.02) *

Also Published As

Publication number Publication date
CA2473526C (en) 2013-10-22
CA2753899C (en) 2014-03-25
AU2003210564B2 (en) 2008-10-23
CA2840490C (en) 2017-02-28
NL300826I2 (ru) 2017-03-16
HUE028163T2 (en) 2016-11-28
RS55578B1 (sr) 2017-06-30
SI1476181T1 (sl) 2016-10-28
US20050107277A1 (en) 2005-05-19
UA82184C2 (ru) 2008-03-25
HUS1600035I1 (hu) 2016-10-28
JP2016014022A (ja) 2016-01-28
CZ2004877A3 (cs) 2004-12-15
US8017733B2 (en) 2011-09-13
BRPI0306993B1 (pt) 2020-03-10
JP2009235409A (ja) 2009-10-15
EP1476181A4 (en) 2008-11-19
WO2003061577A3 (en) 2003-10-02
PL397261A1 (pl) 2012-03-26
NO2017013I1 (no) 2017-04-10
EP3025726B1 (en) 2019-11-20
NO20043422L (no) 2004-10-11
NO20151082A1 (no) 2015-08-26
CY1122841T1 (el) 2021-10-29
JP2012255156A (ja) 2012-12-27
HK1143553A1 (en) 2011-01-07
EE200400105A (et) 2004-12-15
BRPI0306993B8 (pt) 2021-05-25
HUP0500457A2 (hu) 2005-08-29
ES2566797T3 (es) 2016-04-15
EP1476181B1 (en) 2016-03-23
CY2016027I1 (el) 2017-06-28
US20120014916A1 (en) 2012-01-19
PT3025726T (pt) 2020-01-09
HUP0500457A3 (en) 2012-09-28
EP3025726A1 (en) 2016-06-01
EA200400962A1 (ru) 2005-06-30
EE05509B1 (et) 2012-02-15
CA2753899A1 (en) 2003-07-31
HK1072721A1 (zh) 2005-09-09
ES2774801T3 (es) 2020-07-22
EP3669887A1 (en) 2020-06-24
PL372728A1 (en) 2005-08-08
IL163006A (en) 2011-01-31
CA2840490A1 (en) 2003-07-31
CA2952488C (en) 2019-05-07
DK3025726T3 (da) 2019-12-09
HK1224185A1 (zh) 2017-08-18
MEP35608A (en) 2011-02-10
WO2003061577A8 (en) 2008-11-20
EA009783B1 (ru) 2008-04-28
IS2989B (is) 2017-11-15
GEP20074024B (en) 2007-01-10
HUE047557T2 (hu) 2020-04-28
EA200701386A1 (ru) 2007-10-26
CN101700401B (zh) 2013-08-14
CA2952488A1 (en) 2003-07-31
KR20040081463A (ko) 2004-09-21
CY2016027I2 (el) 2017-06-28
HU230473B1 (hu) 2016-07-28
IS7353A (is) 2004-07-15
MXPA04006855A (es) 2005-04-19
CN101700401A (zh) 2010-05-05
ME00239B (me) 2011-05-10
PL213322B1 (pl) 2013-02-28
BR0306993A (pt) 2005-09-06
GEP20064024B (en) 2007-01-10
JP2013136756A (ja) 2013-07-11
DK1476181T3 (en) 2016-05-23
WO2003061577A2 (en) 2003-07-31
JP2005526151A (ja) 2005-09-02
EP1476181A2 (en) 2004-11-17
JP6030717B2 (ja) 2016-11-24
JP5275125B2 (ja) 2013-08-28
CN1630530A (zh) 2005-06-22
SI3025726T1 (sl) 2020-03-31
BE2016C040I2 (ru) 2022-05-17
KR100964411B1 (ko) 2010-06-15
NO339857B1 (no) 2017-02-06
SK3102004A3 (sk) 2005-01-03
BG108839A (bg) 2005-04-30
NO344612B1 (no) 2020-02-10
BG66525B1 (bg) 2016-04-28
NZ534708A (en) 2007-05-31
CA2473526A1 (en) 2003-07-31
RS63504A (en) 2007-02-05
LU93162I2 (fr) 2016-10-03
NO2017013I2 (no) 2018-08-20
US8524660B2 (en) 2013-09-03
ZA200406555B (en) 2005-11-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA011829B1 (ru) Полиалкиленгликоль с остатком для конъюгации биологически активного соединения
JP2005526151A5 (ru)
AU2003210564A1 (en) Polyalkylene glycol with moiety for conjugating biologically active compound
US20170049904A1 (en) Polyalkylene polymer compounds and uses thereof
US7708978B2 (en) Targeted hydrophilic polymer, binders with interferon and medical composite comprising above binders
WO2015032981A1 (en) Erythropoietin conjugates having oral bioavailability

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM

TC4A Change in name of a patent proprietor in a eurasian patent