CZ2004877A3 - Polymerní sloučeniny na bázi polyalkylenu a jejich použití - Google Patents

Polymerní sloučeniny na bázi polyalkylenu a jejich použití Download PDF

Info

Publication number
CZ2004877A3
CZ2004877A3 CZ2004877A CZ2004877A CZ2004877A3 CZ 2004877 A3 CZ2004877 A3 CZ 2004877A3 CZ 2004877 A CZ2004877 A CZ 2004877A CZ 2004877 A CZ2004877 A CZ 2004877A CZ 2004877 A3 CZ2004877 A3 CZ 2004877A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
alkyl
group
substituted
saturated
composition
Prior art date
Application number
CZ2004877A
Other languages
English (en)
Inventor
Kochung Lin
R. Blake Pepinsky
Ling Ling Chen
Donna M. Hess
Edward Y. Lin
Russell C. Petter
Darren P. Baker
Original Assignee
Biogen Idec Ma Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biogen Idec Ma Inc. filed Critical Biogen Idec Ma Inc.
Publication of CZ2004877A3 publication Critical patent/CZ2004877A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/31—Somatostatins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/34—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from hydroxy compounds or their metallic derivatives
    • C08G65/48—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L71/00—Compositions of polyethers obtained by reactions forming an ether link in the main chain; Compositions of derivatives of such polymers
    • C08L71/02—Polyalkylene oxides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L2203/00—Applications
    • C08L2203/02—Applications for biomedical use

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Polyethers (AREA)

Description

. - # • ♦ • · · · ·· .· · · · · · • ··♦· · · ··♦ · · · ···« • « · · ··«·,;. ··· · ·· ·· ^ ·· · &*>9 -<P?Ž~
Polymerní sloučeniny na bázi polyalkylenu a jejich použití Oblast techniky Předložený vynález se týká polyalkylenglykolových sloučenin, konjugátů polymerů a proteinů a jejich použití.
Dosavadní stav techniky
Kovalentní vazba hydrofilních polymerů, např. polymerů na bázi polyalkylenglykolu, také známé jako polyalkylenoxidy, s biologicky aktivními molekulami a k povrchům je v předním zájmu biotechnologie a medicíny.
Konkrétně byl prováděn intenzívní výzkum zaměřený na použití konjugátů poly(ethylenglykolu) (PEG), také známého jako ... nebo poly(ethylenoxidu) (PEO), ke zvýšení rozpustnosti a stability a k prodloužení krevního oběhu poločasu molekul v krevním oběhu.
Ve své nej běžnější formě je PEG lineární polymer zakončený na každém konci hydroxylovými skupinami: H0-CH2CH20-(CH2CH20)„-CH2CH2-0H.
Shora uvedený polymer alfa-, omega-dihydroxylpoly(ethylenglykol), může být také reprezentován jako HO-PEG-OH, z čehož je zřejmé, že symbol -PEG-reprezentuje následující strukturní jednotku: -CH2CH20-(CH2CH20)„-CH2CH2-, kde n se typicky pohybuje v rozmezí od asi 4 do asi 10000. PEG je běžně používán jako methoxy-PEG-OH nebo mPEG, ve kterém jeden konec je relativně inertní methoxyskupina, zatímco další konec je hydroxylová skupina podléhající snadné chemické modifikaci. Dále náhodné nebo blokové kopolymery různých alkylenoxidů (např. ethylenoxid a propylenoxid), které jsou velmi blízké k PEG z hlediska své chemie mohou být v mnoha ze svých aplikací substituovány za PEG. K připojení PEG na požadovanou molekulu je ěasto nezbytné aktivovat PEG připravením jeho derivátu majícího reaktivní funkční skupinu alespoň na • · • · ·« · ···· · · · ··· · · jednom konci. Funkční skupina je vybrána na základě typu dostupné reaktivní skupiny na molekule, která bude připojována k PEG. PEG je polymer rozpustný ve vodě a v mnoha organických rozpouštědlech, není toxický a ani imunogenní. Jedno z použití PEG je kovalentní připojení polymeru k nerozpustným molekulám k vytvoření výsledného konjugátu PEG-molekula, který je rozpustný.
Například bylo prokázáno, že ve vodě nerozpustný lék paclitaxel se po připojení k PEG stává ve vodě rozpustným. Greenwald, et al., J. Org. Chem., 60: 331-336 (1995).
Proléčivový přístup, při kterém jsou proléčiva uvolňována degradací komplexnějších molekul (proléčiv) za fyziologických podmínek, patří mezí velmi účinná dodání léku do systému. Proléčiva mohou být například vytvořena vazbou PEG na léčiva via spojení, která jsou degradovatelná za fyziologických podmínek. Doba existence PEG proléčiv in vivo závisí na typu funkčních skupin tvořících vazby mezi PEG a lékem. Obecně jsou esterové vazby, vytvořené reakcí PEG karboxylových kyselin nebo aktivovaných PEG karboxylových kyselin s alkoholovými skupinami, hydrolyzovány za fyziologických podmínek za uvolnění léčiva, zatímco amidové a karbamátové vazby, vytvořené z aminových skupin na léčivu, jsou stabilní a nehydrolyzují se k uvolnění volného léčiva. Bylo prokázáno, že hydrolytické dodání léčiv z PEG esterů může být výhodně řízeno do určité míry regulací počtu vazeb methylenových skupin ve spaceru mezi koncovým kyslíkem PEG a karbonylovou skupinou připojené karboxylové kyseliny nebo derivátu karboxylové kyseliny. Například Harris et al. v patentu US č. 5 672 662 popisuje PEG butanovou kyselinu a PEG propanovou kyselinu a jejich aktivované deriváty jako alternativy vůči karboxymethyl PEG pro sloučeniny, ve kterých je žádoucí menší hydrolytická reaktivita v odpovídajících esterových derivátech. Viz obecně zvěř. přihláška PCT WO 01/46291.
Jeden faktor limitující použitelnost proteinových látek pro lékařské účely spočívá v tom, že v případě, kdy jsou proteinové látky podávány parenterálně, dochází k jejich rychlé eliminaci z těla. Tato eliminace se může vyskytovat jako důsledek degradace proteazámi nebo clearance normálními dráhami pro eliminaci proteinů, např. filtrací v ledvinách. Perorální podání těchto látek je ještě více problematické, protože kromě proteolýzy v žaludku, ničí vysoká kyselost v 3 k ·· »♦ · ···· · · ··» · · « · · ♦ ♦··· žaludku tyto látky před jejich dosažením cílových tkání. Problémy spojené s těmito způsoby podání proteinů jsou dobře známy z farmaceutického průmyslu a k vyřešení tohoto problému byly používány různé strategie. Bylo publikováno hodně prací zabývajících se stabilizací proteinů. Rovněž jsou známy různé konjugaění polypeptidy s polymerními látkami, včetně použití dextranů, polyvinylpyrrolidonů, glykopeptidů, polyethylenglykolu a polyaminokyselin. Bylo publikováno, že výsledné konjugované polypeptidy si udržují své biologické aktivity a rozpustnost ve vodě pro parenterální aplikace.
Zejména je žádoucí zvýšení biologické aktivity interferonů při snížení jejich toxicity spojené s použitím těchto proteinů při ošetření lidských pacientů. Interferony jsou rodinou přirozeně se vyskytujících malých proteinů a glykoproteinů produkovaných a sekretovaných většinou jaderných buněk při odpovědi na virovou infekci, jakož i při odpovědi na další antigenní stimuly. Interferony poskytují buňkám rezistenci vůči virové infekci a vykazují široké rozmezí působení na buňky. Uplatňují své buněčné aktivity vazbou na specifické membránové receptory na buněčném povrchu. Jakmile se navážou na buněčnou membránu, iniciují inteferony komplexní sekvenci intracelulárních dějů. In vitro studie ukázaly, že zahrnují indukci určitých enzymů, supresi buněčné proliferace, imunomodulační aktivity, např. zvýšení fagocytární aktivity makrofágů, nárůst specifické cytotoxicity lymfocytů pro cílové buňky a inhibici virové replikace ve virem infikovaných buňkách.
Interferony byly testovány při léčení různých klinických stavů onemocnění. Použití lidských interferonů beta bylo zavedeno při léčení roztroušené sklerózy. Dvě formy rekombinantního interferonů beta byly již dříve patentovány v Evropě a USA pro léčení tohoto onemocnění: interferon-beta-la (AVONEX®, Biogen, lne., Cambridge, MA and REBIF®; Serono, Geneva, Switzerland) a interferon-beta-lb (BETASERON®, Berlex, Richmond, CA). Interferon beta-la je produkován v savčích buňkách pomocí přirozené lidské sekvence genu a je glykosylován, zatímco inteferon beta lb je produkován v bakterii E. coli pomocí modifikované lidské sekvence genu, která obsahuje geneticky upravenou substituci cysteinu za serin v aminokyselinové pozici 17 a není glykosylován.
Neimunitní interferony, které zahrnují alfa i beta interferony, jsou známy, že potlačují virus lidské imunodeficience (HIV) u akutně i chronicky infikovaných 4 4
• · · • · · · • · ··· · ··· · · • · buněk. Viz Poli and Fauci, 1992, AIDS Research and Human Retroviruses 8(2):191-197. Díky své antivirové aktivitě byly inteferony, konkrétně alfa interferony, ve značném popředí zájmů jako terapeutické agens pro ošetření viru hepatitidy C (HCV). Viz Hoofnagle et al., in: Viral Hepatitis 1981 International Symposium, 1982, Philadelphia, Franklin Institute Press; Hoofnagle et al., 1986, New Eng. J. Med. 315: 1575-1578; Thomson, 1987, Lancet 1: 539-541 Kiyosawa et al., 1983, in: Zuckerman, ed., Viral Hepatitis and Liver Disease, Allen K. Liss, New York 895-897; Hoofnagle et al., 1985, Sem. Liv. Dis., 1985, 9: 259-263.
Konjugáty interferonu a polymeru jsou popsány např. v patentu US č. 4 766 106, č. 4 917 888, evropské přihlášce vynálezu č. 0 236 987, evropské přihlášce vynálezu č. 0 510 356 a mezinárodní přihlášce vynálezu ě. WO 95/13090.
Chronická hepatitida C je pozvolná a pomalu postupující onemocnění mající výrazný dopad na kvalitu života. Přes zlepšení kvality poolu donorové krve a posledních implementací testování darované krve pro HCV je odhadovaný výskyt akutní infekce mezi lidmi dostávajícími transfúzi 5 až 10%. Viz Alter et al., in: Zuckerman, ed., Viral Hepatitis and Liver Disease, Allen K. Liss, New York, 1988, 537-542. Tudíž přibližně z 3 milionů lidí, kteří dostanou každoročně transfúzi v USA, se u asi 150000 vyvine akutní hepatitida C. Zatímco velký počet pacientů, kteří se nakazí hepatitidou C, má subklinické nebo středně těžké onemocnění, tak přibližně u 50% z nich se vyvine chronický stav onemocnění charakterizovaný fluktuací abnormalit sérové transaminázy a zánětlivých lézí na jaterní biopsii. Odhaduje se, že cirhóza se vyvine až u asi 20% lidí z této skupiny. Viz Koretz et al, 1985, Gastroenterology 88: 1251-1254.
Je známo, že interferony ovlivňují různé buněčné funkce, včetně replikace DNA, syntézy RNA a proteinů, u normálních i abnormálních buněk. Tudíž cytotoxické účinky interferonu nejsou omezeny jen na nádorové nebo virem infikované buňky, ale jsou také zřejmé u normálních, zdravých buněk. V důsledku toho mohou během interferonové terapie vznikat nežádoucí vedlejší účinky, zejména pokud jsou třeba vysoké dávky. Podání interferonu může vést k myelosupresi, což vede k sníženému počtu červených krvinek a sníženému počtu bílých krvinek a hladin destiček. Interferony běžně způsobují symptomy chřipky (např. horečka, únava, bolesti hlavy a nachlazení), gastrointestinální poruchy (např. anorexie, nauzea a diarea), závratě a kašel. Často je postupná reakce t t ♦ · ·
• · • · « · ♦ ♦ · • ···· · · ♦ ··· · • · · · ♦ ··· I ·· ·· • · ♦ • * · · • · · · · · • · » «· ♦ 5 pacientů s HCV na non-PEGylovanou interferenovou léčbu pomalá a ošetření může vyvolat závažné vedlejší účinky, včetně, ale není to nikterak limitováno, retinopatie, tyreoiditidy, akutní pankreatitidy a deprese.
Nežádoucí vedlejší účinky, které jsou spojené s interferonovou terapií často limitují terapeutickou použitelnost režimů interferonové léčby. Tudíž zde existuje potřeba zachovat nebo zlepšit terapeutické výhody takové terapie při snížení nebo eliminaci nežádoucích vedlejších účinků.
Podstata vynálezu Předložený vynález se týká nových polyalkylenglykoíových sloučenin, konjugátů těchto sloučenin a jejich použití. V rámci jednoho aspektu se předložený vynález týká aktivovaného polymeru na bázi póly alky lenglykolu majícího strukturu podle obecného vzorce (I): r z'i
I p—x—((¾¾—Q—(Yfi—(cn2)r -c- (ciy;—κ p (I), kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR’ nebo NR1; Q je C3 až Os nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky) a substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, • · ·· ·· ·· · ··· ·♦·· ··· * *···*···*·♦ * ··♦· « · · Μ· · · · ···· « *♦··*··* ··· · ·· ·· ·· · 6 aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, sulfamoylu, sulfonátu, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé R', Z a Z' je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Cj až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, sulfamoylu, sulfonátu, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (I) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem; m je 0 nebo 1; každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a p je 1,2 nebo 3. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká aktivované polyalkylenglykolové sloučeniny (PGC) mající strukturu podle obecného vzorce (Ia):
P—X—Q— (¾-R 2 (Ia), kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu, m je nula nebo jedna, n je nula nebo celé číslo od jedné do pěti a X a Y jsou nezávisle O, S, CO, CO2, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR', Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Pokud jsou přítomné, pak substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, sulfamoyl, sulfonát, silyl, ether nebo alkylthioskupina. Heterocyklické a karbocyklické skupiny zahrnují kondenzované bicyklické a bicyklické kruhové struktury s můstky.
Každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina.
Sloučeniny, které mají chirální uhlíky, mohou mít R konfiguraci, S konfiguraci nebo mohou být racemické. R je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (I) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. V rámci jednoho provedení je R karboxylová kyselina, ester, aldehyd, hydrát aldehydu, acetal, hydroxyskupina, chráněná hydroxyskupina, karbonát, alkenyl, akrylát, methakrylát, akrylamid, substituovaný nebo nesubstituovaný thiol, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný amin, chráněný amin, hydrazid, chráněný hydrazid, sukcinimidyl, izokyanát, izothiokyanát, dithiopyridin, vinylpyridin, jodacetamid, epoxid, hydroxysukcinimidyl, azol, maleimid, sulfon, allyl, vinylsulfon, tresyl, sulfo-Af-sukcinimidyl, dion, mesyl, tosyl nebo glyoxalová část. 8 8 * · · « · • · • · « • ♦ ··« • · V určitých provedeních je P polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): E-ÍO-CHzCHj),- (n) kde E je atom vodíku nebo lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina a index a je celé číslo od 4 do 10000. Například E může být methylová skupina. V dalším provedení může být E detekovatelná značka, např. radioizotop, fluorescenční část, fosforescenční část, chemiluminiscenční část nebo kvantová tečka. V dalším provedení je E část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (I) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. Například E může být karboxylová kyselina, ester, aldehyd, hydrát aldehydu, acetal, hydroxyskupina, chráněná hydroxyskupina, karbonát, alkenyl, akrylát, methakrylát, akrylamid, substituovaný nebo nesubstituovaný thiol, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný amin, chráněný amin, hydrazid, chráněný hydrazid, sukcinimidyl, izokyanát, izothiokyanát, dithiopyridin, vinylpyridin, jodacetamid, epoxid, hydroxysukcinimidyl, azol, maleimid, sulfon, allyl, vinylsulfon, tresyl, sulfo-V-sukcinimidyl, dion, mesyl, tosyl nebo glyoxalová část. V dalších provedeních má E strukturu podle obecného vzorce (III) R*—HC-(CH2)r“-OOm—Q—x— ew2cw2—
I Z (HI) nebo obecného vzorce (IV): (IV)
R*—-HC—X*-'CWaCWjť Z kde každé Q, X, Y, Z, m a n má nezávisle shora definovaný význam; a každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl. 9 • « Μ ·« ·· · ··· ♦ · · · · · · • · * · · · · · » · · • ···· * · · ··· « · · ···· • · « « · · · · «·« · · · · · ·· · R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. Například R" a R'" mohou být karboxylová kyselina, ester, aldehyd, hydrát aldehydu, acetal, hydroxyskupína, chráněná hydroxyskupina, karbonát, alkenyl, akrylát, methakrylát, akrylamid, substituovaný nebo nesubstituovaný thiol, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný amin, chráněný amin, hydrazid, chráněný hydrazid, sukcinimidyl, izokyanát, izothiokyanát, dithiopyridin, vinylpyridin, jodacetamid, epoxid, hydroxysukcinimidyl, azol, maleimid, sulfon, allyl, vinylsulfon, tresyl, sulfo-V-sukcinimidyl, dion, mesyl, tosyl nebo glyoxalová část. R" a R'" mohou být stejné nebo jiné než R. V konkrétních provedeních je Q substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká aktivovaného PGC majícího strukturu podle obecného vzorce (V):
(CH^r-CH—-R Z (V) kde P, X, Y, R', Z, R, m a n mají zde definovaný význam a Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina. • · ·· ·* ·· * 4 ♦···#·♦··· • · · · · ♦ · t t · ·
4 » ···· ♦ · · Ml I I · MM • « · · lili • Μ · Μ Μ M * 10 L může chybět (např. d je nula) nebo může být jeden až čtyři (např. n je celé číslo od jedné do čtyř) L substituenty na aromatickém kruhu kromě Tj a T2 substituentů a každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Substituenty jsou vybrány z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, suífamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny. R je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce V a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. Například R je vybrán z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-Y-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. Y rámci jednoho provedení polymeru na bázi polyalkylenglykolu obecného vzorce (V) je P polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): iKCM^ay,- (II) kde E je atom vodíku nebo lineární nebo rozvětvená Cj až C20 alkylová skupina a index a je celé číslo od 4 to 10000. Například E může být methyl. V dalších provedeních je E detekovatelná značka, např. radioizotop, fluorescenční část, fosforescenční část, chemiluminiscenční část nebo kvantová tečka. V dalším aspektu je P polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce
kde E je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (V) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000. Například E je vybráno z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalových částí. V rámci dalšího aspektu má E strukturu podle obecného vzorce (III) nebo obecného vzorce (IV): r"-HC—(0½¾-00m-Q-X—CW2CW2- Z , (III) JL»-HC—(CHtfr—X-CW2CW2- Z , (IV) kde Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl; alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina a substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, 12
·· · • · ♦ • · ♦ · • ·♦ ··♦ • · « ·· ♦ acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina. X, Y, Z, m a n mají zde definovaný význam a každé W je nezávisle atom vodíku nebo Cj až C7 alkyl; a R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem, V určitých provedeních mohou být R"a R'" stejné nebo jiné než R a jsou vybrány z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalových částí. V rámci jednoho provedení sloučeniny obecného vzorce jsou V, X a Y, pokud jsou přítomny, kyslík. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká aktivovaného PGC majícího strukturu podle obecného vzorce (VI):
Z
P
H (VI) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu, m je nula nebo jedna, n je nula nebo celé číslo od jedné do pěti, X a Y jsou nezávisle O, S, CO, CO2, COS, • · ·· ·» ti · ·· · · · · · · · · « · t t · t i · tli • f«M t i · 9M · · i ···· • · t · lit· • tt · ·· M ♦· · 13 SO, SO2, CONR', SO2NR' nebo NR' a Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina.
Každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, d je nula nebo celé číslo od jedné do čtyř; a každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Substituenty jsou vybrány z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru nebo alkylthioskupiny. V rámci jednoho provedení má aktivovaný PGC podle obecného vzorce (VI) strukturu podle obecného vzorce (VII) nebo obecného vzorce (VIII):
V rámci jednoho provedení aktivovaných polyalkylenglykolových sloučenin obecných vzorců (VII) a (VIII) je P polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): 14 • · • » ·· • ·· · • • • · • • • • · · • • • · • • • · • · • ··· · • • ···· ♦ · • • • • • • ··# · • · *· • Ε-|043ϊ2€Η2)#! (Π) kde Ε je atom vodíku nebo lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina a index a je celé číslo od 4 do 10000. Například E může být methyl. V dalších provedeních je E detekovatelná značka, např. radioizotop, fluorescenční část, fosforescenční část, chemiluminiscenční část nebo kvantová tečka. V dalším aspektu je P polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): (n) kde E je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (VII) nebo (VIII) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000.
Například E je vybráno z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalových částí. V dalším aspektu má E strukturu podle obecného vzorce (III) nebo (IV) R"-HC—(012¾-(Y)m-0-X—CWíCWa z , (III) ——HC— (0¾—x—-ew2cw2- 1 (IV) 15 « • • 9 99 99 9 ·* • • • • 9 9 • 9 9 • · • • • 9 • 9 • · • 9999 ♦ · • 999 · • • ···· • 9 • 9 • • • • 9 9 9 • 99 • · 99 • kde Q je C3 až Os nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl; alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina. Heterocyklické a karbocyklické skupiny zahrnují kondenzované bicyklické a bicyklické kruhové struktury s můstky. X, Y, Z, m a n mají zde definovaný význam a každé W je nezávisle atom vodíku nebo Cj až C7 alkyl; a R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. V určitých provedeních mohou být R" a R'" stejné nebo jiné než R a jsou vybrány z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxy skupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxy sukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalových částí. V rámci jednoho provedení aktivované polyalkylenglykolové sloučeniny obecného vzorce (VIII) jsou substituenty kruhu v meta poloze. V dalším provedení jsou substituenty kruhu v para poloze. V dalším provedení má aktivovaná polyalkylenglykolová sloučenina podle obecného vzorce (VI) strukturu podle obecného vzorce (IX):
16 P
(CH2)u—“0'~”(CH2
(IX) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu, každé n a u jsou nezávisle nula nebo celé číslo od jedné do pěti; a Z je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina. V rámci jednoho provedení sloučenin obecného vzorce (IX) jsou substituenty kruhu lokalizovány v meta poloze. V dalším provedení sloučenin obecného vzorce (IX) jsou substituenty kruhu v para poloze. V dalším provedení sloučenin obecného vzorce (IX) je P polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): (II) E-(0-CH2CH2)a- kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina, detekovatelná značka nebo část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IX) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká aktivovaného polymeru na bázi polyalkylenglykolu majícího strukturu podle obecného vzorce (X):
(X) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; R' je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; Z a Z' jsou individuálně atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny, za předpokladu, že alespoň jedno Z nebo Z' není atom vodíku; R je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (X) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem; každý n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a p je 1,2 nebo 3. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká aktivovaného polyalkylenglykolové sloučeniny (PGC) mající strukturu podle obecného vzorce (Xa): 18 • ·* ·« ·· • ·· • • • • · • • • • · · • · • · • · • · ♦ ··#· • * ♦ ··» • · • ♦··· • « • • • • • * ··· • *· ·· • t •
p-X-(0¾-CH—R Ž (Xa) V těchto sloučeninách je P polymer na bázi polyalkylenglykolu, např. PEG nebo mPEG, X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR1, S02NR' nebo NR' a R', pokud je přítomno, je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny. Z je lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny. R je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (X) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem; a 19 • · ··· ♦ · n je O nebo celé číslo od 1 do 5 tak, aby mezi X a Z-obsahujícím uhlíkem bylo nula až pět methylenových skupin. V rámci jednoho provedení je R vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-A-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. V dalším provedení je P polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): •‘z'·' Z/ft kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina nebo detekovatelná značka; a je celé číslo od 4 do 10000. V dalším provedení může být E methyl. V ještě dalším provedení je P polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II), kde E je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (X) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000. V dalším provedení je E vybráno ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-A-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. Alternativně může mít E strukturu podle obecného vzorce (III): 20 11«.
:-(0¾-(Y>—q—x—CW2CW2- (III) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R' a každé Z mají nezávisle shora popsaný význam; m je 0 nebo 1; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. Heterocyklické a karbocyklické skupiny zahrnují kondenzované bicyklické a bicyklické kruhové struktury s můstky. V ještě dalším provedení má E strukturu podle obecného vzorce (IV):
z kde každé X, Z a n má nezávisle zde definovaný význam; (IV) 21
každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. V ještě dalším provedení je R" vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. V dalším provedení je R'" vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. V dalším provedení je E detekovatelná značka. Navíc E může být vybráno ze skupiny sestávající z radioizotopů, fluorescenčních částí, fosforescenčních částí, chemiluminiscenčních částí a kvantových teček. V ještě dalším provedení má aktivovaný PGC podle předloženého vynálezu strukturu podle obecného vzorce (XI):
O
Z kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; a n a Z mají shora definovaný význam. (XI) V dalším provedení má aktivovaný polyalkylenglykol strukturu podle obecného vzorce (XII):
(XII) kde n, a a Z mají shora definovaný význam. V jednom provedení může být Z methyl. V některých provedeních je n jedna. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká aktivované polyalkylenglykolové sloučeniny mající strukturu podle obecného vzorce (XIII):
(XIII) kde a je celé číslo od 4 do 10000. Předložený vynález se také týká kompozice aktivovaných polyalkylenglykolových sloučenin podle předloženého vynálezu a biologicky aktivní sloučeniny nebo jejího prekurzoru. V různých provedeních je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor vybrána ze skupiny sestávající z peptidu, analogu peptidu, proteinu, enzymu, malé molekuly, barviva, lipidu, nukleosidu, oligonukleotidu, analogu oligonukleotidu, sacharidu, oligosacharidu, buňky, viru, lipozómu, mikročástice, povrchu a micely. V dalším aspektu poskytuje předložený vynález kompozici mající strukturu podle obecného vzorce (XIV): (XIV) (XIV) 23 • ♦ ···♦ - Τ’ p—X—(€1¾-Q—<Υ£—CCHi)r ”C- (CH2)T“R*—Β ζ Ρ kde Ρ je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR’ nebo NR'; Q je C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé R', Z a Z' je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* je spojovací část; B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor; 24 24 • · · • · · · • · ···· • · · ·· * • · · ♦ · · Μ I · · · · • · · · · · · • ····*· · ··· • · · · · ··· · ·· ·· m je Ο nebo 1; každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a p je 1,2 nebo 3. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XIVa):
p—x-Q-(Y)a-(CH*-CH—R—B z , (XIVa) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky) nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonyíu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Cj až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, 25 • · ·· · • · • · · · * ···· I · · • · ·
esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* je spojovací část vytvořená reakcí substituentu R s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem; B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R; m je 0 nebo 1; a nje 0 nebo celé číslo od 1 do 5. V rámci jednoho provedení je R* spojovací část vytvořená reakcí substituentu R s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. Například R je část vybraná ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-Y-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. V dalším provedení je P polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): (II) E-ÍOCHjCHj),- kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina nebo detekovatelná značka; a index a je celé číslo od 4 do 10000. V tomto provedení může být E methyl. V dalším provedení je P polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): 26 26 (Π) E^OCHjCHg)** kde E je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (XIY) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000. V tomto bodě může v ještě dalším provedení E vytvářet vazbu s další biologicky aktivní sloučeninou, B. Alternativně může E vytvářet vazbu s biologicky aktivní sloučeninu jinou než B. E může také vytvářet další vazbu s biologicky aktivní sloučeninou, B. V různých provedeních může být E vybráno ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-JV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. V dalším provedení může mít E strukturu podle obecného vzorce (III): R'*-HC—(CHjfe—“00™-q—X— CW2CW2—
I Z , (III) kde každé Q, X, Y, Z, m a n má nezávisle zde definovaný význam, každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. V dalším provedení má E strukturu podle obecného vzorce (IV): "-HC”**" (0¾¾...............x—-CW2CW2 z (IV) 27 ·· • · ··· * ·· ·· • · · · • · · · • · ·Μ * • » · • t ·· ·· · • · · · • · ···· • · · ·· « kde každé X, Z a n má nezávisle zde definovaný význam, každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. V různých provedeních je R" vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-JV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
Podobně v dalších provedeních je R" vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu, V ještě dalších provedeních je E detekovatelnou značkou; například E může být vybráno ze skupiny sestávající z radioizotopů, fluorescenčních částí, fosforescenčních částí, chemiluminiscenčních částí a kvantových teček. V různých provedeních je Q substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XV): 28 ·« • · ···· ·· · • · ♦ • · · · • ·♦··· • · · ·· ·
B (XV) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; m je nula nebo jedna; d je nula nebo celé číslo od jedné do čtyř; a n je nula nebo celé číslo od jedné do pěti, X a Y jsou nezávisle O, S, CO, CO2, COS, SO, SO2, CONR', SO2NR' nebo NR'; a Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny.
Každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, 29 29 ·· t • * · • · · · • ····* • · · Μ · • · ·· · • · · • ···· • · • 9 Μ • · · · • · · · • · · · · · • · · sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny.
Každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formyíu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny. R* je spojovací část vytvořená reakcí substituentu R s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R.
Například R může být část vybraná ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-JV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. V dalším provedení je P polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): BKO-CHzCHa),- > (I]) kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená C] až C20 alkylová skupina nebo detekovatelná značka; a je celé číslo od 4 do 10000. V tomto provedení může být E methyl.
• ti ** • · * t · • · · · · · ···· · · · ··· · • · · · • ·· ·· ·» * • Φ · • · f • · 30 V rámci ještě dalšího aspektu je P polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): (II) I-(0-CH2CE2)r ? kde E je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (XV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000. Zde může být E vybráno ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-Af-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
Navíc E může mít strukturu podle obecného vzorce (III) : R,j·-—HO-(CH2)^” (Dra" Q—X CW5CW2 ** Z , (III) kde Q je C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé X, Y, Z, m a n má nezávisle zde definovaný význam; /
• 9 9 · ·· * 9 · · • · · · • · ··*« • * * ·· · ··· · · 31 každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. V dalším provedení může mít E strukturu podle obecného vzorce (IV): r-~HC—{CH2)~_X-CW2CW2· (IV) kde X, Z a n mají zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. V ještě dalším provedení je R" vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
Podobně v dalších provedeních může být R"' vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. V dalším provedení je E detekovatelná značka. Například E může být vybráno ze skupiny sestávající z radioizotopů, fluorescenčních částí, fosforescenčních částí, chemiluminiscenčních částí a kvantových teček. 32
V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XYI):
P
(XVI) kde m je 0 nebo 1, n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5, P je polymer na bázi polyalkylenglykolu, X a Y jsou nezávisle O, S, CO, CO2, COS, SO, SO2, CONR', SO2NR' nebo NR', Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Cj až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina a každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina; d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4 a každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Substituenty jsou vybrány z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosflnátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny. R* je spojovací část vytvořená reakcí substituentu R s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R.
Například R může být část vybraná ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, 33
substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. V rámci jednoho provedení je R* methylenová skupina a B je biologicky aktivní molekula mající aminoskupinu, kde methylenová skupina vytváří vazbu s aminoskupinou na B. V určitých provedeních je amin amino-konec peptidu, amin aminokyselinového bočního řetězce peptidu nebo amin glykosylačního susbstituentu glykosylovaného peptidu. Například peptid může být interferon, např. interferon-beta, např. interferon- beta-1 a. V některých provedeních má sloučenina podle obecného vzorce (XVI) strukturu podle obecného vzorce (XVII):
Z
(XVII) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu, Z je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5. R* je spojovací část vytvořená reakcí substituentu R s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R.
Například R může být část vybraná ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, 34 • · · · Μ · · • · · · • · · · • · · ··· • · · ·· ·· ·· · • · · • · · · • · · MM • · · Μ · jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-ŤV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. V rámci jednoho provedení je R* z obecného vzorce (XVII) je methylenová skupina a B je biologicky aktivní molekula mající aminoskupinu, kde methylenová skupina vytváří vazbu s aminoskupinou na B. V určitých provedeních je amin amino-konec peptidu, amin aminokyselinového bočního řetězce peptidu nebo amin glykosylačního susbstituentu glykosylovaného peptidu. Například peptid může být interferon, např. interferon-beta, např. interferon-beta-la. V dalším provedení má sloučenina podle obecného vzorce (XVI) strukturu podle obecného vzorce (XVIII):
P
(XVIII) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu, R* je spojovací část, B je biologicky aktivní molekula a n je jedna nebo dvě. V rámci jednoho provedení R* z obecného vzorce (XVIII) je methylenová skupina a B je biologicky aktivní molekula mající aminoskupinu, kde methylenová skupina vytváří vazbu s aminoskupinou na B. V určitých provedeních je amin amino-konec peptidu, amin aminokyselinového bočního řetězce peptidu nebo amin glykosylačního susbstituentu glykosylovaného peptidu. Například peptid může být interferon, např. interferon-beta, např. interferon-beta-la. V určitých provedeních sloučeniny podle obecného vzorce (XVI) je P polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): E<0-CH2CH2)a- (n) kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová (např. methylová) skupina, detekovatelná značka nebo část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (XVI) a biologicky aktivní sloučeninou nebo 35 • · ·· · • I · • ···· · • · ··· · Μ ·· I · · · • · · · • · · · · • · · ·· ·· jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000. Pokud je E detekovatelná značka, může být značka například radioizotop, fluorescenční část, fosforescenční část, chemiluminiscenční část nebo kvantová tečka. V dalším provedení, kde E je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (XVI) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem, je E vybráno z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. V dalším provedení má E strukturu podle obecného vzorce (III) nebo obecného vzorce (IV): r«—hc—(cm2yn—ΟΟτη—Q—x— cw2ew2 (III) (C%—X-CW2CW2- Z , (IV) kde Q je C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl; alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina a substituenty mohou být vybrány z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, 36
iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru nebo alkylthioskupiny. X, Y, Z, m a n mají zde definovaný význam a každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. V určitých provedeních mohou být R" a R'" stejné nebo jiné než R a jsou vybrány z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalových částí. V dalších provedeních sloučeniny podle obecného vzorce (XVI) může mít sloučenina strukturu podle obecného vzorce (XIX):
0-—(CH2)u
Z
B (XIX) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu, každé n a u je nezávisle nula nebo celé číslo od jedné do pěti, Z je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina. R* je spojovací část vytvořená reakcí substituentu R s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R. V rámci jednoho provedení je R* z obecného vzorce (XIX) methylenová skupina a B je biologicky aktivní molekula mající aminoskupinu, kde methylenová skupina vytváří vazbu s aminoskupinou na B. V určitých provedeních je amin amino-konec peptidu, amin aminokyselinového bočního řetězce peptidu nebo amin glykosylačního susbstituentu glykosylovaného peptidu. Například peptid může být interferon, např. interferon-beta, např. interferon- beta-1 a. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká kompozice podle obecného vzorce (XX):
B1 ^R—0|Η[-((ΙΗ2Χγ(Υ)ι^Ο“Χ,,,^^2^^2~(Ο^^^Ι^^Χ— Z
-TrtYfc-íCH^ z /jt*
,B (XX) kde m je 0 nebo 1, d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4, a je celé číslo od 4 do 10000 a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
Každé X a Y je nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR' nebo NR', Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina a každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina.
Pokud je přítomné, pak každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Substituenty jsou vybrány z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, 38 ·· • Φ φ • ·
• φ · φφφφ * · • ♦ • φ • · • · · • · φ • ·· · · φ nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny. Q je C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina.
Každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl.
Substituenty jsou nezávisle R* a R** spojovací části vytvořené reakcí substituentu R a R" s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B a B' jsou každá biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R, resp. R". V některých provedeních jsou B a B' stejné typy biologicky aktivní sloučeniny. V dalších provedeních jsou B a B' různé biologicky aktivní sloučeniny. V ještě dalších provedeních jsou B a B' stejné biologicky aktivní molekuly. Y dodatečných provedeních jsou R* a R** stejné. V dalších provedeních jsou R* a R** rozdílné. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká kompozice podle obecného vzorce (XXI):
C^H—(CH2)frX-CW2CW2”-(0.€H2CH2)a--X-T1 Z (XXI) 39
• · · · ► · · · I · · · » ♦ · · · ♦ » kde m je O nebo 1, d je O nebo celé číslo od 1 do 4, a je celé číslo od 4 do 10000 anje 0 nebo celé číslo od 1 do 5. X a Y jsou nezávisle O, S, CO, CO2, COS, SO, SO2, CONR', SO2NR' nebo NR', Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina.
Pokud je přítomné, pak každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny a každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl.
Substituenty jsou nezávisle R* a R** spojovací části vytvořené reakcí substituentu R a R" s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B a B’ jsou každý biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R, resp. R". V některých provedeních jsou B a B' stejné typy biologicky aktivní sloučeniny. V dalších provedeních jsou B a B' různé biologicky aktivní sloučeniny. V ještě dalších provedeních jsou B a B' stejné biologicky aktivní molekuly. V dodatečných provedeních jsou R* a R** stejné. V dalších provedeních jsou R* a R** rozdílné. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XXII): 40 • ψ • « Ρ—Χ“-(CH2)í Ζ'ί I ο I ζ (€Η2)5-^—β (XXII) kde Ρ je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; R' je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé Z a Z' je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny za předpokladu, že alespoň jedno Z nebo Z' není atom vodíku; R* je spojovací část; 41
• · ···· · • ·
B je biologicky aktivní molekula; každé n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a p je 1,2 nebo 3. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XXIIa):
P-x-(CH^-CH—R* B (XXIIa) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR’; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5. R' je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; Z je lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu,
42 • · • · • 9 • · • · 9 9« • 999 • I
thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* je spojovací část vytvořená reakcí substituentu R s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R. V rámci jednoho provedení je R* připraven reakcí části vybrané ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-AÍ-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. V ještě dalším provedení je P polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): (II) E-(0-CH2CH2)s· kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina nebo detekovatelná značka a index a je celé číslo od 4 do 10000. V tomto provedení může být E methyl. V dalším provedení je P polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): (II) E-CO-CH^CH^ 43 • · · Μ ··« • · ···· # · · • · · · • · ···· * · · ·· · kde Ε je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (II) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000. V tomto provedení se E může vázat na biologicky aktivní sloučeninu nebo její prekurzor, který je jiný než B. V dalších provedeních vytváří E další vazbu s biologicky aktivní sloučeninou B. V různých provedeních může být E vybráno ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-TV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. V dalším provedení má E strukturu podle obecného vzorce (III): R”--HC—(CH2)H-(Y)m-Q X—CW2CW2 (III) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; každé X a Y je nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfínátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, 44 • · · · • ···· · · • · · ··· ·
sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R' a každé Z má nezávisle zde popsaný význam; m je 0 nebo 1; každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5; R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem; a každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl. V dalším provedení má E strukturu podle obecného vzorce (IV): R*--HC—(CHjjfe—X-CW2CW2·
Z (IV) kde každé X, Z a n má nezávisle zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. V ještě dalších provedeních je R" vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. V dalším provedení je R'" vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, 45 ·♦ I·· • · • · · · • · ·· · f ♦ · • · · # t · ··· · # · ♦ • · f sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. V dodatečných provedeních je E detekovatelná značka, např. E může být vybráno ze skupiny sestávající z radioizotopů, fluorescenčních částí, fosforescenčních částí, chemiluminiscenčních částí a kvantových teček. V dalším provedení je R* methylen a B je biologicky aktivní molekula připojena přes amin. Například amin je amino-konec peptidu. V dalším provedení je peptid interferon, např. interferon-beta-la. V dalším provedení zahrnuje předložený vynález kompozici mající strukturu podle obecného vzorce (XXIII): CH3 íOCH2eH2)aO-(CI,2)b- R*
B z , (XXIII) kde n, a, R* B a Z mají shora definovaný význam. V dodatečném provedení je Z methyl a n je jedna. V rámci ještě dalšího aspektu zahrnuje předložený vynález kompozici podle obecného vzorce (XXIV):
Z
B’“R—€^-(CH2)„—(Y^—Q—X-CW2CW2-{0-CH2CT2)—X”(€Η2),Γ R
Z (XXIV) kde m je 0 nebo 1, a je celé číslo od 4 do 10000; a každé n je nezávisle nula nebo celé číslo od 1 do 5. Každé X a Y je nezávisle O, S, CO, CO2, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina; a každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl. 46
·· * • « I • · t · ψ · ♦··# • · « ·♦ · Q je C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklický kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny. R* a R** jsou nezávisle spojovací části vytvořené reakcí substituentu R a R" s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B a B' jsou každý biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R, resp. R". V některých provedeních jsou B a B' stejné typy biologicky aktivní sloučeniny. V dalších provedeních jsou B a B' různé biologicky aktivní sloučeniny. V ještě dalších provedeních jsou B a B' stejné biologicky aktivní molekuly. V dodatečných provedeních jsou R* a R** stejné. V dalších provedeních jsou R* a R** rozdílné. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká kompozice podle obecného vzorce (XXV):
Z
ch—(CH2)ír-X—cw2cw2-(0-CH2€H2)a—X—(CM2)n
Z (XXV) kde X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; a je celé číslo od 4 do 10000; a každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5. 47 47 «« ♦ ♦ ·
9 · · · · • ···· • » • · · · · • · f*t · · • · · · ·« ··
Každé a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, a každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl. R* a R** jsou nezávisle spojovací části vytvořené reakcí substituentu R a R" s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B a B' jsou každý biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R, resp. R". V některých provedeních jsou B a B' stejné typy biologicky aktivní sloučeniny. V dalších provedeních jsou B a B' různé biologicky aktivní sloučeniny. V ještě dalších provedeních jsou B a B' stejné biologicky aktivní molekuly. V dodatečných provedeních jsou R* a R** stejné. V dalších provedeních jsou R* a R** rozdílné. Předložený vynález se také týká farmaceutického přípravku obsahujícího kompozice podle předloženého vynálezu společně s farmaceuticky přijatelným nosičem. V různých provedeních také farmaceutický přípravek obsahuje další biologicky aktivní látky. Například biologicky aktivní látka může být vybrána ze skupiny sestávající z peptidu, analogu peptidu, proteinu, enzymu, malé molekuly, barviva, lipidu, nukleosidu, oligonukleotidu, analogu oligonukleotidu, sacharidu, o ligo sacharidu, buňky, viru, lipozómu, mikročástice, povrchu a micely. V dalším provedení je biologicky aktivní látka antivirotikum. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká kompozice obsahující produkt z reakce sloučeniny obecného vzorce (I) a biologicky aktivní sloučeniny nebo jejího prekurzoru (B). V rámci jednoho provedení má kompozice strukturu podle obecného vzorce (XIV):
p-X_Q-0% (CH2)“CH R*- B z (XIV) kde veškeré proměnné mají shora definovaný význam a R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině nebo jejím prekurzoru; a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor. 48 « · ·♦ · • · · • ···· • ♦ ··· ♦ ·· ·* 0 · * · • · · · » ♦ · 000 0 • * · ·· ·· ·· e ·* * • · 0 · · • ···· • · V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká kompozice obsahující produkt z reakce sloučeniny obecného vzorce (V) a biologicky aktivní sloučeniny nebo jejího prekurzoru. V jednom provedení má kompozice strukturu podle obecného vzorce (XV):
<CH2)r~CH-R*-B Z (XV) kde veškeré proměnné mají shora definovaný význam, R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině nebo jejím prekurzoru; a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor. V ještě dalším provedení má kompozice strukturu podle obecného vzorce (XX) nebo (XXI): z
?r\ I—d*'B
Bt-rtCII-(CH2)lr-(Y)1“Q-^CW2CW2(0-CH2CH2)r-X-T, (XX) S^ie-CjH—(CH2)n“X CW2CW2 (0-CH2CH2)a X Tj z
T2-(Y^(CH2),( ^R*"0 (XXI) kde veškeré proměnné mají shora definovaný význam, každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl, R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině, B, nebo jejím prekurzoru; R** je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R" nebo R'" s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině, B', nebo jejím prekurzoru; a B a B' jsou nezávisle 49 49 • ·
·· · • · · ♦ · · ♦ • · ··♦♦ • · · «· ♦ • ♦ ·· · biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor. V některých provedeních jsou B a B' stejné typy biologicky aktivní sloučeniny. V dalších provedeních jsou B a B' různé biologicky aktivní sloučeniny. Y ještě dalších provedeních jsou B a B' stejné biologicky aktivní molekuly. V dodatečných provedeních jsou R* a R** stejné. V dalších provedeních jsou R* a R** rozdílné. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká kompozice obsahující produkt z reakce sloučeniny obecného vzorce (VI) a biologicky aktivní sloučeniny nebo jejího prekurzoru. V rámci jednoho provedení má kompozice strukturu podle obecného vzorce (XVI):
Z
A*'® (XVI) kde veškeré proměnné mají shora definovaný význam, R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině nebo jejím prekurzoru; a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká kompozice obsahující produkt z reakce sloučeniny obecného vzorce (VII) a biologicky aktivní sloučeniny nebo jejího prekurzoru. V rámci jednoho provedení má kompozice strukturu podle obecného vzorce (XVII): p-0‘
'5 (XVII) 50 50 ·· · »· ·· ·· · l · I · · · · ·#· · ·· t · ♦ · · • ···· · · · ··· · · · ···· 9 % · · · · · ♦ ··· · ♦♦ ·· ·· * kde veškeré proměnné mají shora definovaný význam, R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině nebo jejím prekurzoru; a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká kompozice obsahující produkt z reakce sloučeniny obecného vzorce (VIII) a biologicky aktivní sloučeniny nebo jejího prekurzoru. V rámci jednoho provedení má kompozice strukturu podle obecného vzorce (XVIII): —f(CH> /V/ \ p-0 b (XVIII) kde veškeré proměnné mají shora definovaný význam, R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině nebo jejím prekurzoru; a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká kompozice obsahující produkt z reakce sloučeniny obecného vzorce (IX) a biologicky aktivní sloučeniny nebo jejího prekurzoru. V rámci jednoho provedení má kompozice strukturu podle obecného vzorce (XIX):
O (O^n—CH- -R* \
B (XIX) kde veškeré proměnné mají shora definovaný význam, R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině nebo jejím prekurzoru; a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor. ·» ·« ♦· · ♦ · ♦ · * · · • ·· · · ♦ · · • · ··· · · «···· • ♦ · · · · «· «· ·· « 51 V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká kompozice obsahující produkt z reakce sloučeniny obecného vzorce (X) a biologicky aktivní sloučeniny nebo jejího prekurzoru. V rámci jednoho provedení má kompozice strukturu podle obecného vzorce (XXII):
P-x-(αΐ2)η—~CH—R*-B
Z (XXII) kde veškeré proměnné mají shora definovaný význam, R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině nebo jejím prekurzoru; a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor. V dalším provedení má kompozice strukturu podle obecného vzorce (XXIV):
Z
R B B'—R-'“CH~(CH2)n““(Y)n;—Q-—X—CW2CW2—(OCHaCHala'—X (CH2)
Z (XXIV) kde veškeré proměnné mají shora definovaný význam, každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl, R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině, B, nebo jejím prekurzoru, R** je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R" s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině, Br, nebo jejím prekurzoru; a B a B’ jsou nezávisle biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor. V některých provedeních jsou B a B1 stejné typy biologicky aktivní sloučeniny. V dalších provedeních jsou B a B' různé biologicky aktivní sloučeniny. V ještě dalších provedeních jsou B a B' stejné biologicky aktivní molekuly. V dodatečných provedeních jsou R* a R** stejné. V dalších provedeních jsou R* a R** rozdílné. • · · · · · · • · ♦ · t · · • · • · · I · * · · ···· · · » ··· · · I ···· • · · · · · · • ·· ·· ·· · 52 V dalších provedeních má kompozice strukturu podle obecného vzorce (XXV):
B
Z
R (XXV) kde veškeré proměnné mají shora definovaný význam ve shora uvedených bodech, každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl. r* a r** jsou nezávisle spojovací části vytvořené reakcí substituentu R a R" s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B a B' jsou každý biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R, resp. R". V některých provedeních jsou B a B' stejné typy biologicky aktivní sloučeniny. V dalších provedeních jsou B a B' různé biologicky aktivní sloučeniny. V ještě dalších provedeních jsou B a B' stejné biologicky aktivní molekuly. V dodatečných provedeních jsou R* a R** stejné. V dalších provedeních jsou R* a R** rozdílné. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká způsobu ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, zahrnujícího podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XIV) pacientovi: l p—x—(0¾¾—Q~~(Y)S—(CH2)r|~c P , (XIV) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02) CONR', S02NR' nebo NR’; Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových 53 53
9999 9 · • · • · · ♦ 9 9 9 · • 9 999 9 · • 9 9 9 99 ·· struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé R', Z a Z' je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* je spojovací část; B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor; m je 0 nebo 1; každé n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a p je 1,2 nebo 3. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká způsobu ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, zahrnujícího podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XlVa) pacientovi: • 9 • · · • · · · ·
Z (XlVa) % • ·
• · • · • Μ ·· » • * · • · · · · • · • · · ♦ • · · · · · • · t 54 kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu, m je 0 nebo 1; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5, X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; a Q je C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny.
Každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Cj až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* je spojovací část vytvořená reakcí substituentu R s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R. V rámci jednoho provedení je B biologicky aktivní peptid, např. interferon. Například může být interferon interferon-beta-la. • · ·· ·· ·· # * ········;?. ··· ···· · · · ·# • ···· · · · ··· · · · ····
* · · · · v.· I ··· · ·· ·· ·· · 55 V dalších provedeních také kompozice zahrnuje biologicky aktivní látky vybrané ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu. Například může být antivirotikum vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX-497, VX-950 a ISIS-14803. V různých provedeních je virová infekce, při potřebě takového ošetření, chronická hepatitida C. V dalším aspektu se předložený vynález týká způsobu ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, zahrnujícího podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XV) pacientovi:
-(CH2)e—CH« i
~R*-B (XV) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; m je 0 nebo 1; d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4; n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'.
Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny.
Každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs 4 Μ 9999 9 9 99 99 9 9 9 9 9 9 9 9 9 99999 9 9 9 9 9 9 99 99 99 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 56 nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny.
Každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* je spojovací část vytvořená reakcí substituentu R s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R. V různých provedeních je B biologicky aktivní peptid, např. interferon. Například v jednom provedení je B interferon-beta-la. V dalším provedení kompozice dále obsahuje biologicky aktivní látka vybraná ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu. V dalších provedeních může být antivirotikum vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX-497, VX-950 a ISIS-14803. Navíc může být virová infekce chronická hepatitida C. 57 • ···· · · • ♦ • · • · • · · • ···« • · ♦ · ·· V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká způsobu ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, zahrnujícího podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XVI) pacientovi:
(L)d A
•T3—O%—(CíW 'R*" P X Xl 5 (XV!) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; m je 0 nebo 1; d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4; n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR1, SO2NR' nebo NR'; Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Cj až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina; a každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina.
Každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny. R* je spojovací část vytvořená reakcí substituentu R s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R. V různých provedeních je B biologicky aktivní peptid, např. interferon. Například může být B interferon-beta-la. * ·· · • · ♦ ·· · ·♦ ·· • · ♦ · • · · · • · t ··· ·· ··
• · • · · • ···· 58 V ještě dalších provedeních kompozice dále obsahuje biologicky aktivní látku vybranou ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu. Například může být antivirotikum vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX-497, VX-950 a ISIS-14803. V dalším provedení je virová infekce chronická hepatitida C. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká způsobu ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, zahrnujícího podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XX) pacientovi:
BwR21c^(CH2)n-(Y)rQ-XW2CW2(CW^€^)r-X--T1 jQ;j-Tr<Y)ir(CH2)* z (XX) kde m je 0 nebo 1; d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4; a index a je celé číslo od 4 do 10000; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
Každé X a Y je nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Cj až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina; a každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl.
Každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, 59
·· · • · ♦ · · • ·<·· • · fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny. Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny. R* a R** jsou nezávisle spojovací části vytvořené reakcí substituentu R a R" s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B a B' jsou každý biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R, resp. R". V některých provedeních jsou B a B' stejné typy biologicky aktivní sloučeniny. V dalších provedeních jsou B a B' různé biologicky aktivní sloučeniny. V ještě dalších provedeních jsou B a B' stejné biologicky aktivní molekuly. V dodatečných provedeních jsou R* a R** stejné. V dalších provedeních jsou R* a R** rozdílné. V různých provedeních je B biologicky aktivní peptid, např. interferon. Například v jednom provedení je B interferon-beta-la. V dalším provedení kompozice dále obsahuje biologicky látku vybranou ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu. Například může být antivirotikum vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX- 497, VX-950 a ISIS-14803. V dalším provedení je virová infekce chronická hepatitida C. ** · • · · «· ·· • · • ·
- « · · • ····· • « · ·· « 60 V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká způsobu ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, zahrnujícího podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XXI) pacientovi:
(XXI) kde m je 0 nebo 1; d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4; a je celé číslo od 4 do 10000; každé n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5; každé X a Y je nezávisle O, S, CO, CO2, COS, SO, S02, CONR', SO2NR' nebo NR'; T| a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina; a každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl.
Každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny. R* a R** jsou nezávisle spojovací části vytvořené reakcí substituentu R a R" s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B a B' jsou každé biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R, resp. R". V některých provedeních jsou B a B' stejné typy biologicky aktivní sloučeniny. V dalších provedeních jsou B a B' různé biologicky aktivní sloučeniny. V ještě dalších provedeních jsou B a B' stejné biologicky aktivní molekuly. V dodatečných provedeních jsou R* a R** stejné. V dalších provedeních jsou R* a R** rozdílné. V různých provedeních je B biologicky aktivní peptid, např. interferon. Například B může být interferon-beta-la. V dalším provedení kompozice dále obsahuje biologicky aktivní látky vybrané ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu. Například může být antivirotikum vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX- 497, VX-950 a ISIS-14803. V dalším provedení je virová infekce chronická hepatitida C. V rámci dalšího aspektu se předložený vynález týká způsobu ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, zahrnujícího podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XXII) pacientovi: P—X-(CH^r Z i ! •Ο Ι
-R*-B (XXII) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; R' je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, 62 62 • · ·· ♦ ♦ ♦ ·♦ « • · · • ···# • · • φ · » fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé Z a Z' je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny za předpokladu, že alespoň jedno Z nebo Z' není atom vodíku; R* je spojovací část; B je biologicky aktivní molekula, mje 0 nebo 1; každé n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a p je 1,2 nebo 3. V rámci ještě dalšího aspektu se předložený vynález týká způsobu ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, zahrnujícího podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XXIIa) pacientovi:
P_x-(CH2)n-CH*—R-B Z , (XXIIa) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; m je 0 nebo 1; n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5; X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; a R' je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Cj • # · · Μ · · · • · » ···· I · » « * « · I » ♦ · * · · • ···· · · · Μ» · · · #ΜΙ • · · · ···· • Μ · ·· ·» ti · 63 až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny. Z je lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny. R* je spojovací část vytvořená reakcí substituentu R s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R. V různých provedeních je B biologicky aktivní peptid, např. interferon.
Například B může být interferon-beta-la. V dalším provedení kompozice dále obsahuje biologicky aktivní látky vybrané ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu. Například může být antivirotikum vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, ·· · ·· · · · · · · ♦ · ··· ♦ · t ♦ · ··· • ···· · ♦ « ··· « · ··♦·· • · · · «··· *·· · ·* »· ·· t 64 MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX- 497, VX-950 a ISIS-14803. Y dalším provedení je virová infekce chronická hepatitida C. V ještě dalším aspektu se předložený vynález týká způsobu ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, zahrnujícího podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XXIV) pacientovi:
Z A-b B·—r^CH—(CH2)—(Y),í—Q-X—CW2CW2—(0-CH2CH2)—X—(CH2)n i (XXIV) kde m je 0 nebo 1; a je celé číslo od 4 do 10000; každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5; každé X a Y je nezávisle O, S, CO, CO2, COS, SO, SO2, CONR', SO2NR' nebo NR'; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina; a každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl. Q je C3 až Ce nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfmátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny. R* a R** jsou nezávisle spojovací části vytvořené reakcí substituentu R a R" s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B a B' jsou každý 65 • · · · · · Μ « • · · ···· ··· • * * ···« ··«· • ···· · · · ··· · I · ···· • f ·· · · ♦ · • * · * · * «> · · · ψ biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R, resp. a R". V některých provedeních jsou B a B' stejné typy biologicky aktivní sloučeniny. V dalších provedeních jsou B a B' různé biologicky aktivní sloučeniny. V ještě dalších provedeních jsou B a B' stejné biologicky aktivní molekuly. V dodatečných provedeních jsou R* a R** stejné. V dalších provedeních jsou R* a R** rozdílné. V různých provedeních je B biologicky aktivní peptid, např. interferon. Například B může být interferon-beta-la. V dalších provedeních kompozice dále obsahuje biologicky aktivní látky vybrané ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu. Například může být antivirotikum vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX- 497, VX-950 a ISIS-14803. V ještě dalších provedeních je virová infekce chronická hepatitida C. V dalším aspektu se předložený vynález týká způsobu ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, zahrnujícího podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XXV) pacientovi:
Z
B-—R—CH—(CH2)n—X--CW2CW2-(0-CH2CH2)a'-X (CH2)n 2 ’ (XXV) kde každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a je celé číslo od 4 do 10000; každý n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5; X je O, S, CO, CO2, COS, SO, SO2, CONR', S02NR' nebo NR'; a každé a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina. R* a R** jsou nezávisle spojovací části vytvořené reakcí substituentu R a R" s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B a B' jsou každý biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R, resp. a R". 66
·· · • · · • · · · ♦ · ♦··· • · · V některých provedeních jsou B a B' stejné typy biologicky aktivní sloučeniny. V dalších provedeních jsou B a B' různé biologicky aktivní sloučeniny. V ještě dalších provedeních jsou B a B' stejné biologicky aktivní molekuly. V dodatečných provedeních jsou R* a R** stejné. V dalších provedeních jsou R* a R** rozdílné. V různých provedeních je B biologicky aktivní peptid, např. interferon. Například B může být interferon-beta-la. V dalším provedení kompozice dále obsahuje biologicky látku vybranou ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu. Například může být antivirotikum vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX- 497, VX-950 a ISIS-14803. V ještě dalších provedeních je virová infekce chronická hepatitida C. Předložený vynález se také týká způsobu ošetření pacienta, který trpí hepatitidou C, zahrnujícího podání kombinace kterékoliv z kompozicí podle předloženého vynálezu a antivirotika. V různých provedeních jsou kompozice a antivirotikum podávány současně, po sobě nebo alternativně. V rámci jednoho provedení je antivirotikum ribavirin.
Pokud není uvedeno jinak, mají všechny technické a vědecké termíny používané v předloženém vynálezu stejný význam, který je běžně chápán odborníky v oboru, pro něž je tento vynález určen. Ačkoliv lze používat způsoby a látky, které jsou podobné nebo stejné způsobům a látkám popsaným zde, pro provádění nebo testování předloženého vynálezu jsou výhodné způsoby a látky popsané níže. Veškeré publikace, přihlášky vynálezů, patenty a další odkazy uvedené zde jsou v této přihlášce vynálezu používány v celistvosti jako odkaz. V případě konfliktu budou podlohy popisu, včetně definicí, zkontrolovány. Navíc látky, způsoby a příklady mají pouze ilustrativní charakter a nemají předložený vynález nikterak limitovat.
Další rysy a výhody předloženého vynálezu budou zřejmé z následujícího detailního postupu a z nároků. Přehled obrázků na výkresech 67 * ······ · ···«· *··· • · * · · · · · • ·* « · · *· ·* ♦ Předložený vynález bude dále pochopen z následujícího popisu s odkazy na tabulky, ve kterých:
Obr. 1 je redukční SDS-PAGE gel ukazující čistotu nemodifikovaného IFN-β-la a 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného ΙΡΝ-β-la: sloupec A: markéry pro molekulovou hmotnost (odshora až dolů; 100 kDa, 68 kDa, 45 kDa, 27 kDa a 18 kDa); Sloupec B: 4 pg nemodifikovaného ΙΡΝ-β-la;
Sloupec C: 4 pg 20 kDa PEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikované IFN-β- la.
Obr. 2 ukazuje stopy chromatografie s dělením podle rozdílné mol. hmotnosti (SEC) nemodifikovaného ΙΡΝ-β-la a 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného ΙΡΝ-β-la: panel A: standardy molekulových hmotností; panel B: 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného ΙΡΝ-β-la; panel C, nemodifikovaného ΙΡΝ-β-la.
Obr.3 ukazuje stopy chromatografie s dělením podle rozdílné mol. hmotnosti (SEC) 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného ΙΡΝ-β-la.
Obr. 4 je redukční SDS-PAGE gel ukazující čistotu nemodifikovaného ΙΡΝ-β-la a 20 kDa mPEG-0-/?-fenylacetaldehydem modifikovaného ΙΡΝ-β-la: Sloupec A: 2,5 pg 20 kDa mPEG-O-p-fenylacetaldehydem modifikovaného ΙΡΝ-β-la;
Sloupec B: 2,5 pg nemodifikovaného ΙΡΝ-β-la; Sloupec C: markéry molekulových hmotností (odshora až dolů; 100 kDa, 68 kDa, 45 kDa, 27 kDa, a 18 kDa).
Obr. 5 ukazuje stopy chromatografie s dělením podle rozdílné mol. hmotnosti (SEC) 20 kDa mPEG-0-/?-fenylacetaldehydem modifikovaného ΙΡΝ-β-la; panel A: standardy molekulových hmotností; panel B: 20 kDa mPEG-O-p-fenylacetaldehydem modifikovaného ΙΡΝ-β-la.
Obr. 6 je redukční SDS-PAGE gel znázorňující stabilitu 20 kDa mPF.G-O-/7-fenylacetaldehydem modifikovaného ΙΡΝ-β-la: Sloupec A: markéry molekulových hmotností (odshora až dolů; 100 kDa, 68 kDa, 45 kDa, 27 kDa, 18 kDa a 15 kDa); řádky B, C, D a E: 2 pg 20 kDa mPEG-0-/?-fenylacetaldehydem modifikovaného ΙΡΝ-β-la odebrané na testy v den 0,2, 5 a 7. ·» ♦· ·· · • · · · · ♦ · • · · ··· • · ··· · · · ··«· • · · · · · ·· »1 · 9 · • · ·· 4 ♦ · · • «··· · • · ··· · 68
Obr. 7A-B ukazují protivirovou aktivitu různých PEGylovaných lidských IFN-p-la vzorků jako funkci koncentrace proteinu: Obr. 7A; nemodifikovaný IFN-β-la (O), 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la (□), 20 kDa mPEG-0-j9-methylfenyl-0-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la (Δ) a 20 kDa mPEG-O-w-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la (O). Obr. 7B; nemodifikovaný IFN-P-la (O), 20 kDa mPEG-0-/>-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-p-la (□), 20 kDa mPEG-O-/?-fenylpropionaldehydem modifikovaný IFN-p-la (Δ) a 20 kDa mPEG-O-m-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-P-la (O).
Obr. 8 A-B jsou grafy znázorňující farmakokinetiky nemodifikovaných a různých PEGylovaných lidských IFN-p-la vzorků: Obr. 8A: nemodifikovaný IFN-p-la (horní panel) a IFN-P-la modifikované 20 kDa mPEG-O-2- methylpropionaldehydem (dolní panel); Obr. 8B: IFN-P-la modifikované 20 kDa mPEG-0-/>-methylfenyl-0-2-methylpropionaldehydem (horní panel) a 20 kDa mPEG-O-p-fenylacetaldehydem (dolní panel).
Obr. 9 A-B jsou grafy znázorňující farmakokinetiky nemodifikovaných a různých PEGylovaných lidských IFN-p-la vzorků: Obr. 9A: nemodifikovaný IFN-β-la (horní panel) a IFN-p-la modifikovaný 20 kDa mPEG-O-/?- fenylpropionaldehydem (dolní panel); Obr. 9B: IFN-P-la modifikovaný 20 kDa mPEG-O-iw-fenylacetaldehydem (horní panel) a 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem (dolní panel).
Obr. 10 je sloupcový graf srovnávající jednorázové podání 20 kDa PEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikované IFN-p-la s denním podáváním nemodifikovaného IFN-P-la při snižujícím se počtu radiálně orientovaných neocévek v nu/nu myších nesoucích lidské maligní melanomové buňky SK-MEL-1: ošetření kontrolním nosičem pouze v den 1 (sloupec A); ošetření s 1 MU (5 pg) nemodifikovaným IFN-p-la denně ve dnech 1-9 včetně (sloupec B); ošetřené 1 MU (10 pg) 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaným IFN-P-la pouze v den 1 (sloupec C); a ošetření kontrolním nosičem denně v dnech 1-9 včetně (sloupec D). 69 ♦ · ·» · · «· · ··· ♦ · · · · · » » « « · · · · · · · · • ···· · · t ··· · · · ·«·· • f « · · · · · ··· · ·· ·· · » ·
Detailní popis vynálezu Předložený vynález se týká sloučenin a způsobů použitelných pro ošetření různých onemocnění a poruch. Jak je vysvětleno níže, tak tato onemocnění a poruchy zahrnují zejména ta onemocnění a poruchy, které jsou citlivé na ošetření inteferonovou terapií zahrnující, ale není to nikterak limitováno, virové infekce, např. hepatitida a autoimunní choroby, např. roztroušenou sklerózu.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu zahrnují nové, aktivované polyalkylenglykolové sloučeniny podle obecného vzorce (I):
-R P—X—(CH*-Q—005— ť , (I) kde P je ve vodě rozpustný polymer, např. polymer na bázi polyalkylenglykolu. Nikterak nelimitující seznam takových polymerů zahrnuje jiné homopolymery na bázi polyalkylenoxidu, např. polypropylenglykoly, polyoxyethylenované polyoly, jejich kopolymery a blokové kopolymery. Další příklady vhodných ve vodě rozpustných a nepeptidových polymerních řetězců zahrnují poly(oxyethylovaný polyol), poly(olefinický alkohol), poly(vinylpyrrolidon), poly(hydroxypropylmethakrylamid), poly(a-hydroxy kyselina), poly(vinylalkohol), polyfosfazen, polyoxazolin, poly(W-akryloylmorfolin) a kopolymery, terpolymery a jejich směsi. V jednom provedení je polymerní řetězec poly(ethylenglykol) nebo monomethoxy-polyethylenglykol (mPEG) mající průměrnou molekulovou hmotnost v rozmezí od asi 200 Da do asi 400000 Da. Mělo by být zřejmé, že jiné příbuzné polymery jsou také vhodné pro používání předloženého vynálezu a používání termínu PEG nebo poly(ethylenglykol) je myšleno tak, aby je zahrnovalo a ne vylučovalo. Termín PEG zahrnuje poly(ethylenglykol) v kterékoliv z jeho forem, včetně alkoxy PEG, difunkční PEG, víceramenného PEG, rozdvojeného PEG, rozvětveného PEG, pendentního PEG nebo PEG s degradovatelnými vazbami. • ♦ ·· t · ♦ · ·· · · ··· • ···· « « · ··· · · · ««tt • · · · · « · · • ·· · «· ·· ·· · 70
Ve skupině sloučenin reprezentovaných obecným vzorcem (I) je nula až pět methylenových skupin mezi Y a Z obsahujícím uhlíkem (např. n je nula nebo celé číslo od jedné do pěti) a m je nula nebo jedna, např. Y je přítomné nebo chybí. X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'. V některých provedeních X a Y jsou kyslík. Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupina, sulfamoyl, sulfonát, silyl, ether nebo alkylthioskupina. Z substituent je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, sulfamoyl, sulfonát, silyl, ether nebo alkylthioskupina.
Pokud X nebo Y je NR', může R' být atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina a C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o »· ·· ·· ·· · ι· « * · · # é · t » « · · · · · · t * · • ···· · · · ··· · · · ·♦·· • t · · ···· ··· · ·· ·· ·· · 71 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, sulfamoyl, sulfonát, silyl, ether nebo alkylthioskupina. R je reaktivní funkční skupina, tzn. aktivující část schopná reakce za vzniku spojení nebo vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (I) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. Tudíž R reprezentuje "aktivující skupinu" aktivované polyalkylenglykolové sloučeniny (PGC) reprezentovaná obecným vzorcem (I) R může být například karboxylová kyselina, ester, aldehyd, hydrát aldehydu, acetal, hydroxyskupina, chráněná hydroxyskupina, karbonát, alkenyl, akrylát, methakrylát, akrylamid, substituovaný nebo nesubstituovaný thiol, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný amin, chráněný amin, hydrazid, chráněný hydrazid, sukcinimidyl, izokyanát, izothiokyanát, dithiopyridin, vinylpyridin, jodacetamid, epoxid, hydroxysukcinimidyl, azol, maleimid, sulfon, allyl, vinylsulfon, tresyl, sulfo-iV-sukcinimidyl, dion, mesyl, tosyl nebo glyoxal. V konkrétních provedeních je R hydrát aldehydu.
Specifické příklady substituentu R v literatuře zahrnují N-sukcinimidylkarbonát (viz např. Patenty US č. 5 281 698, 5 468 478), amin (viz např. Buckmann et al. Makromol. Chem. 182:1379 (1981), Zaplipsky et al. Eur.
Polym. J. 19:1177 (1983) ), hydrazid (viz např., Andresz et al. Makromol. Chem. 179:301 (1978) ), succinimidylpropionát a succinimidylbutanoát (viz např. Olson et al. in Polyethylene glycol) Chemistry & Biological Applications, 170-181,
Harris & Zaplipsky Eds., ACS, Washington, DC, 1997; viz also US patent č. 5 672 662), succinimidylsukcinát (viz např. Abuchowski et al. Cancer Biochem.
Biophys. 7:175 (1984) and Joppich et al. Macrolol. Chem. 180:1381 (1979), succinimidylester (viz např. Patent US č. 4 670 417), benzotriazolkarbonát (viz např., patent US č. 5 650 234), glycidylether (viz např., Pitha et al. Eur. J.
Biochem. 94:11 (1979), Elling et al, Biotech. Appl. Biochem. 13:354 (1991), oxycarbonylimidazol (viz např. Beauchamp, et al., Anal. Biochem. 131:25 (1983).
Tondelli et al. J. Controlled Release 1:251 (1985)), p-nitrofenylkarbonát (viz 72 * · • ♦ 4 * · · · · ·
• · • · · • · · * · • « ·· · např., Veronese, et al., Appl. Biochem. Biotech., 11:141 (1985); a Sartore et al., Appl. B iochem. Biotech. 27:45 10 (1991) ), aldehyd (viz např. Harris et al. J. Polym. Sci. Chem. Ed. 22:341 (1984), Patent US č. 5 824 784, patent US č. 5 252 714), maleimid (viz např. Goodson et al. Bio/Technology 8:343 (1990), Romani et al. in Chemistry of Peptides and Proteins 2:29 (1984)) a Kogan, Synthetic Comm. 22:2417 (1992) ), orthopyridyl-disulfid (viz např. Woghiren, et al. Bioconj. Chem. 4:314 (1993)), akrylol (viz např. Sawhney 15 et al., Macromolecules, 26:581 (1993)), vinylsulfon (viz např., patent US č. 5 900 461). Navíc dvě molekuly polymeru podle předloženého vynálezu mohou být také připojeny k aminokyselině lysinu za vzniku di-substituovaného lysinu, který se pak může dále aktivovat N-hydroxysukcinimidem za vzniku aktivní V-sukcinimidylové části (viz např. patent US č. 5 932 462).
Termíny "funkční skupina", "aktivní část", "aktivní skupina", "aktivující skupina", "aktivující část", "reaktivní místo", "chemicky-reaktivní skupina" a "chemicky reaktivní část" jsou zde používány podle literatury a vztahují se na jasné, definovatelné části nebo jednotky molekuly. Termíny jsou v chemických oborech poněkud synonymní a jsou zde používány k indikaci částí molekul majících charakteristickou chemickou aktivitu, a které jsou typicky reaktivní s jinými molekulami. Termín "aktivní", pokud je používán ve spojení s funkčními skupinami, má zahrnovat ty funkční skupiny, které snadno reagují s elektrofilními nebo nukleofilními skupinami na jiných molekulách na rozdíl od těch skupin, které vyžadují silné katalyzátory nebo velmi nepraktické reakční podmínky k reakci. Například, jak by mohlo být v oboru chápáno, tak termín "aktivní ester" by mohl zahrnovat ty estery, které snadno reagují s nukleofilními skupinami, např. aminy. Typicky bude aktivní ester reagovat s aminem ve vodném prostředí během několika minut, kdežto určité estery, např. methyl- nebo ethyl-estery, vyžadují silný katalyzátor k reakci s nukleofilní skupinou.
Ve shora definované sloučenině podle předloženého vynálezu se funkční skupina R stává vazebnou částí, R*, po jejím zreagování s biologicky aktivní molekulou za vzniku spojení nebo vazby mezi aktivovanou polyalkylenglykolovou sloučeninou (PGC) a biologicky aktivní sloučeninou. Tudíž B je biologicky aktivní sloučenina po konjugaci s PGC a R* je část vzniklá na biologicky aktivní sloučenině, B, tak, že vznikne jednoduchá kovalentní vazba mezi PGC a ♦ · ·* ·· #· · • · · ♦ « 9 t • · f · ♦ ♦ · »1·· • »··· · · · ··· · ♦ · «#·· * · «· · · · « • •i · «· ♦· #· ♦ 73 biologicky aktivní sloučeninou. Ve výhodném provedení je R* část vzniklá reakcí R na aktivovaném PGC s jednoduchou reaktivní funkční skupinou na biologicky aktivní sloučenině tak, že vznikne jednoduchá kovalentní vazba mezi aktivovanou polyalkylenglykolovou sloučeninou (PGC) a biologicky aktivní sloučeninou.
Biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor (B) výhodně není nepříznivě neovlivněn přítomností PGC. Dále B má buď přirozeně funkční skupinu, která je schopná reagovat a vytvořit spojení s aktivovaným PGC, neboje modifikována takovým způsobem, aby obsahovala takovou reaktivní skupinu.
Prekurzor B, jak je používán v předloženém vynálezu, je neaktivní nebo méně aktivní forma B, která se mění na aktivní nebo ještě aktivnější formu po kontaktu s fyziologickým prostředím, např. podáním subjektu. Tyto změny mohou být konformační nebo strukturní zahrnující, ale není to nikterak limitováno, změny z chráněné formy na nechráněnou formu B. Tato změna, jak je používána v předloženém vynálezu, nezahrnuje uvolnění konjugovaného PGC podle předloženého vynálezu.
Jak by mohlo být z dosavadní techniky zřejmé, tak termín "chráněný(á)" se vztahuje na přítomnost chránící skupiny nebo části, která zabraňuje reakci chemicky reaktivní funkční skupiny za určitých reakčních podmínek. Chrániči skupina se bude lišit v závislosti na typu chemicky reaktivní skupiny, která je chráněná. Například, pokud chemicky reaktivní skupina je amin nebo hydrazid, může být chránící skupina vybrána ze skupiny řerc-butyloxykarbonylu (t-Boc) a 9-fluorenylmethoxykarbonylu (Fmoc). Pokud chemicky reaktivní skupina je thiol, pak chránící skupina může být orthopyridyldisulfid. Pokud chemicky reaktivní skupina je karboxylová kyselina, např. butanová nebo propionová kyselina nebo hydroxylová skupina, pak chránící skupina může být benzylová nebo alkylová skupina, např. methyl nebo ethyl. Další chránící skupiny známé z dosavadní techniky mohou být také používány v předloženém vynálezu.
Termíny "vazebná část", "spojka" nebo "linker" jsou používány v předloženém vynálezu takovým způsobem, aby se vztahovaly na části nebo vazby, které vznikají v důsledku chemické reakce a typicky jsou to kovalentní vazby.
Tudíž spojení reprezentované vazbou R*-B ve shora uvedených vzorcích vyplývají z reakce mezi aktivovanou částí, R, na PGC s biologicky aktivní sloučeninou, tzn. • · <f ·· «# « • 9 9 · · · 9 · 19 • · · 9 9 9 9 9 9 1 « • 9999 · 9 9 99« 9 9 9«99« 9 · «9 9 9 9 9 • ·9 9 99 »9 99 9 74 B\ R* je spojovací část vzniklá s R po reakci s B', a B je biologicky aktivní sloučenina konjugovaná s PGC reakcí funkční skupiny na B' s R.
Termín "biologicky aktivní sloučenina" se vztahuje na ty sloučeniny, které vykazují jednu nebo více biologických odpovědí nebo účinků v případě, kdy jsou podány subjektu, a obsahují reaktivní skupiny, které obsahují reaktivní části, které jsou schopné reakce a konjugace alespoň s jedním aktivovaným PGC podle předloženého vynálezu. Termín "biologicky aktivní molekula", "biologicky aktivní část" nebo "biologicky aktivní látka", pokud je používán v předloženém vynálezu, znamená jakoukoliv látku, která ovlivňuje jakékoliv fyzické nebo biochemické vlastnosti kteréhokoliv subjektu zahrnující, ale není to nikterak limitováno, viry, bakterie, houby, rostliny, zvířata a lidi. Zejména biologicky aktivní molekuly, jak jsou používány v předloženém vynálezu, zahrnují kteroukoliv látku určenou pro diagnózu, léčbu, zmírnění, ošetření nebo prevenci onemocnění u lidí nebo jiných zvířat, nebo která jinak zvyšuje fyzický nebo duševní dobrý stav lidí nebo zvířat. Příklady biologicky aktivních molekul zahrnují, ale není to nikterak limitováno, peptidy, analogy peptidů, proteiny, enzymy, malé molekuly, barviva, lipidy, nukleosidy, oligonukleotidy, analogy oligonukleotidů, sacharidy, oligosacharidy, buňky, viry, lipozómy, mikročástice, povrchy a micely.
Skupiny biologicky aktivních agens, které jsou vhodné pro použití v předloženém vynálezu zahrnují, ale není to nikterak limitováno, chemokiny, lymfokiny, protilátky, rozpustné receptory, antitumorika, ataraktika, hormony, růstové faktory, antibiotika, fungicidy, fungistatické agens, antivirotika, steroidní agens, antimikrobiální agens, dezinficiens, antipyretika, antidiabetika, bronchodilatans, antidiaroika, koronární dilatans, glykosidy, spasmolytika, antihypertenziva, antidepresiva, antianxietika, jiné psychoterapeutické agens, kortikosteroidy, analgetika, kontraceptiva, nestereoidní protizánětlivé látky, prostředky snižující hladiny glukózy v krvi, prostředky snižující cholesterol, antikonvulziva, jiná antiepileptika, imunomodulátory, anticholinergika, sympatolytika, sympatomimetika, vazodilatátory, antikoagulans, látka proti arytmii, prostaglandiny mající různé farmakologické aktivity, diuretika, látka na spaní, antihistaminika, antineoplastika, onkolytika, antiandrogeny, antimalarika, antileprotika a různé další typy léčiv. Viz Goodman and Gilman's The Basis of Therapeutics (Nineth Edition, Pergamon Press, lne, USA, 1996) a The Merck • · ·· ·* ·« « ·· · t f « · t · « ♦ · · 9#·· « · · « ♦ ··♦· ♦ · « t·· t · · ·«·· ♦ · ♦ · ·«·« «·· · ·· »# ·· · 75
Index (Thirteenth Edition, Merck & Co., Inc, USA, 2001), vše je zde uvedeno jako odkaz.
Biologicky aktivní sloučeniny zahrnují kteroukoliv sloučeninu, která vykazuje biologickou odpověď ve své aktuální formě nebo kteroukoliv sloučeninu, která vykazuje biologickou odpověď v důsledku chemické přeměny její struktury z její aktuální formy. Například biologicky aktivní sloučeniny budou zahrnovat kteroukoliv sloučeninu, která obsahuje chráněnou sloučeninu, která, pokud je štěpena, umožní vzniknout sloučenině, jenž vykazuje biologickou odpověď.
Takové Štěpení může být výsledkem například in vivo reakce sloučeniny s endogenními enzymy nebo reakce sloučeniny před podáním zahrnující její reakci s aktivovaným PGC podle předloženého vynálezu. Jako další příklad budou biologicky aktivní sloučeniny také zahrnovat kteroukoliv sloučeninu, která podléhá stereotransformaci, in vivo nebo ex vivo, za vzniku sloučeniny, která vykazuje biologickou odpověď nebo účinek.
Biologicky aktivní sloučeniny typicky obsahují několik reaktivních míst, na kterých je možné kovalentní připojení aktivovaného PGC. Například aminové skupiny mohou podléhat acylacím, sulfhydrylové skupiny mohou podléhat adičním reakcím a alkylacím, karbonylové a karboxylové skupiny mohou podléhat acylacím a aldehydové a hydroxylové skupiny mohou podléhat aminaci a reduktivní aminaci. Jedna nebo více z těchto reakcí může být používána při přípravě polyalkylenglykolem modifikovaných, biologicky aktivních sloučenin podle předloženého vynálezu. Navíc biologicky aktivní sloučeniny mohou být modifikovány za vzniku reaktivních částí na sloučenině, jenž usnadňují tyto reakce a vedou ke konjugaci s aktivovaným PGC.
Odborníci v oboru jistě rozeznají velký poěet reakčních mechanizmů, které lze použít k usnadnění konjugace aktivovaného PGC s biologicky aktivní sloučeninou. Například, pokud je aktivující částí, R, hydrazidová skupina, lze ji kovalentně kopulovat se sulfhydrylem, sacharidem a karbonylovými částmi na biologicky aktivních sloučeninách (poté tyto části podléhají oxidaci za vzniku aldehydů). Reakce hydrazidových aktivujících částí (R) s aldehydy na biologicky aktivních sloučeninách (B') vytváří hydrazonovou vazbu (R*-B). Pokud je R maleimidová skupina, lze ji nechat reagovat se sulfhydrylovou skupinou za vzniku stabilní thioetherové vazby. Jestliže sulfhydryly nejsou na biologicky aktivní ··* · 9 · 9 · 9ft • 9999 9 9 f 999 9 9 9 999« * · 9 9 9 9 9 9 « · · · * · · * · * · 76 sloučenině přítomny, mohou být připraveny přes redukci disulfidu nebo thiolaci 2-iminothiolanem nebo ŠATA. Pokud R je imidoester, bude reagovat s primárními aminy na B' za vzniku imidoamidové vazby. Imidoesterová konjugace se obvykle provádí za pH v rozmezí od 8,5-9,0. Pokud se připojí aktivovaná PGC s biologicky aktivními proteiny, mají imidoestery výhodu nad jinými R skupinami, poněvadž neovlivňují celkový náboj proteinu. Nesou pozitivní náboj při fyziologickém pH jako primární aminy, které nahrazují. Imidoesterové reakce jsou prováděny v rozmezí teplot od 0°C do pokojové teploty (např. při teplotě 4°C) nebo při zvýšených teplotách za bezvodých podmínek. Pokud je R NHS-ester, jeho hlavním cílem jsou primární aminy. Dostupné α-aminové skupiny, například ty, které představují na A-konci peptidy a proteiny, reagují s NHS-estery za vzniku kovalentní amidové vazby. V některých provedeních je R*-B hydrolyticky stabilní vazba. Hydrolyticky stabilní vazba znamená, že vazba je výrazně stabilní ve vodě a nereaguje s vodou při použitelných pH, např. vazba je stabilní za fyziologických podmínek po delší dobu někdy i nekonečně dlouhou dobu. V dalších provedeních je R*-B hydrolyticky nestabilní nebo degradovatelná vazba. Hydrolyticky nestabilní vazba znamená, že vazba je degradovatelná ve vodě nebo ve vodných roztocích, včetně např. krve. Enzymaticky nestabilní nebo degradovatelné vazby také znamenají, že vazba může být degradována jedním nebo více enzymy.
Jak je chápáno v dosavadním stavu techniky, tak polyalkylen a příbuzné polymery mohou zahrnovat degradovatelné vazby v řetězci polymeru nebo linkeru mezi řetězcem polymeru a jednu nebo více terminálních funkčních skupin z PGC molekuly. Například esterové vazby vzniklé reakcí, např. PGC karboxylových kyselin nebo aktivovaných PGC karboxylových kyselin s alkoholovými skupinami, na biologicky aktivní sloučenině se obecně hydrolyzují za fyziologických podmínek za uvolnění agens. Další hydrolyticky degradovatelné vazby zahrnují karbonátové vazby; iminové vazby vytvořené reakcí aminu a aldehydu (viz např. Ouchi et al., Polymer Preprints, 38(1):582 - 3 (1997)); fosfát -esterové vazby vytvořené reakcí alkoholu s fosfátovou skupinou; acetalové vazby, které jsou produkty reakce aldehydu a alkoholu; orthoesterové vazby, které jsou produkty reakce formiátu a alkoholu; peptidové vazby vytvořené aminovou skupinou, např. na konci PGC, a karboxylovou skupinu peptidu; a 77 99 « 9 9 9
9 9 ♦ Μ·· ♦ 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 · • 9 999 9 9 9 9 9 9 99 99
oligonukleotidové vazby vytvořené fosforamiditovou skupinou, např. na konci polymeru, a 5'-hydroxylovou skupinou oligonukleotidu.
Polyalkylenglykol, P, může být polyethylenglykol mající strutkuru obecného vzorce (II): (Π) E-(0-CH2CH2)a· kde a je celé číslo od 4 do 10000 a E je atom vodíku nebo lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina, detekovatelná značka nebo část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (I) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
Pokud je tedy E část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (I) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem, může být E karboxylová kyselina, ester, aldehyd, hydrát aldehydu, acetal, hydroxyskupina, chráněná hydroxyskupina, karbonát, alkenyl, akrylát, methakrylát, akrylamid, substituovaný nebo nesubstituovaný thiol, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný amin, chráněný amin, hydrazid, chráněný hydrazid, sukcinimidyl, izokyanát, izothiokyanát, dithiopyridin, vinylpyridin, jodacetamid, epoxid, hydroxysukcinimidyl, azol, maleimid, sulfon, allyl, vinylsulfon, tresyl, sulfo-iV-sukcinimidyl, dion, mesyl, tosyl nebo glyoxal. Je samozřejmé, že E by mělo být kompatibilní s R tak, aby nedocházelo k reakci mezi E a R.
Termín "detekovatelná značka" se vztahuje na kteroukoliv značku schopnou detekce. Nelimitující příklady zahrnují radioizotopy, fluorescenční části, fosforescenční části, chemiluminscenční části a kvantové tečky. Další detekovatelná značky zahrnují biotin, cystein, histidin, hemaglutinin, myc nebo flag značky. V některých provedeních má E strukturu podle obecného vzorce (III) nebo obecného vzorce (IV): R*-HC—(0¾¾-COffl—Q—X—CWjQWjf
Z (III) 78 78 • 9 #9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 999 9 9 9 99 99 • 9 99 9 • 9 · 9 9999 · 9 9 • ·· · • 9 9 9 9 9 • 9 9 9 99 99999 9 9 9 99 · R" -HC> (IV) každý Q, X, Y, Z, m a n mají shora definovaný význam a každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl. V této skupině sloučenin je R" část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem; a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. R" a R'" mohou být karboxylová kyselina, ester, aldehyd, hydrát aldehydu, acetal, hydroxyskupina, chráněná hydroxyskupina, karbonát, alkenyl, akrylát, methakrylát, akrylamid, substituovaný nebo nesubstituovaný thiol, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný amin, chráněný amin, hydrazid, chráněný hydrazid, sukcinimidyl, izokyanát, izothiokyanát, dithiopyridin, vinylpyridin, jodacetamid, epoxid, hydroxysukcinimidyl, azol, maleimid, sulfon, allyl, vinylsulfon, tresyl, sulfo-V-sukcinimidyl, dion, mesyl, tosyl nebo glyoxal. Je samozřejmé, že R" a R'" by měly být kompatibilní s R tak, aby s ním nedocházelo k reakci. R" a R"', jak jsou používány v předloženém vynálezu, po konjugaci s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem, vytvářejí spojovací části mající shora definovaný význam. Tudíž R** je spojovací část vzniklá reakcí R" nebo R'" skupiny na aktivovaném PGC s reaktivní funkční skupinou na biologicky aktivní sloučenině tak, aby došlo ke kovalentní vazbě mezi PGC a biologicky aktivní sloučeninou. R a R" nebo R'" mohou být stejné části nebo různé části a biologicky aktivní sloučenina připojená ke každému ze substituentů může být stejná nebo rozdílná.
Termín "alkyl" se vztahuje na radikál nasycených alifatických skupin, včetně alkylových skupin s lineárním a rozvětveným řetězcem, cykloalkylových (alicyklických) skupin, alkylem substituovaných cykloalkylových skupin a cykloalkylem substituovaných alkylových skupin. Ve výhodných provedeních má alkyl s lineárním nebo rozvětveným řetězcem 30 nebo méně atomů uhlíku ve svém hlavním řetězci (např. C1-C30 pro lineární řetězec, C3-C30 pro rozvětvený řetězec), výhodněji 20 nebo méně. Podobně výhodné cykloalkyly mají od 3 do 10 atomů 79 ·♦ ♦ • · · • 9099 * ♦ ♦ • ·· * ·· ·♦ • · · · • · ♦ · 0 9 999 9 9 9 9 90 99 09 9 9 9 9 9 9 9 9 0 · ···* 9 9 9 00 9 uhlíku ve své kruhové struktuře, výhodněji mají 5, 6 nebo 7 uhlíků v kruhové struktuře.
Navíc termín "alkyl" (nebo "nižší alkyl") má zahrnovat "nesubstituované alkyly" i "substituované alkyly", přičemž substituované alkyly se vztahují na alkylové části mající substituenty nahrazující atom vodíku na jednom nebo více uhlíků uhlovodíkového řetězce. Tyto substituenty mohou zahrnovat například halogen, hydroxyl, karbonyl (např. karboxyl, alkoxykarbonyl, formyl nebo acyl), thiokarbonyl (např. thioester, thioacetát nebo thioformiát), alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupinu, amidoskupinu, amidin, imin, kyanoskupinu, nitroskupinu, azidoskupinu, sulfhydryl, alkylthioskupinu, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupinu, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl nebo aromatické nebo heteroaromatické části. Odborníkům v oboru bude jistě zřejmé, že části substituované na uhlovodíkovém řetězci mohou být sami substituovány, pokud je to vhodné. Například substituenty substituovaného alkylu mohou zahrnovat substituované a nesubstituované formy aminoskupiny, azidoskupiny, iminoskupiny, amidoskupiny, fosforylu (včetně fosfonátu a fosfinátu), sulfonylu (včetně sulfátu, sulfonamidoskupiny, sulfamoylu a sulfonátu), silylových skupin, jakož i etherů, alkylthioskupin, karbonylů (včetně ketonů, aldehydů, karboxylátů a esterů), -CF3, -CN, atp. Cykloalkyly mohou být dále substituovány alkyly, alkenyly, alkoxyskupinami, alkylthioskupinami, aminoalkyly, karbonylem substituovanými alkyly, -CF3, -CN, atd.
Termín "aralkyl", jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na alkylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou (např. aromatická nebo heteroaromatická skupina). Názorné příklady aralkylových skupin zahrnují, ale není to nikterak limitováno, benzyl a ještě obecněji (CHhjnPh, kde Ph je fenyl nebo substituovaný fenyl a n je 1,2 nebo 3.
Termín "alkenyl" a "alkynyl" se vztahuje na analoga nenasycených alifatických skupin v délce a možné substituci alkylů popsaných výše, která ale obsahují alespoň jednu dvojnou vazbu, resp. trojnou vazbu.
Pokud počet uhlíků není nijak specifikován znamená "nižší alkyl" v předloženém vynálezu alkylovou skupinu se shora definovaným významem, ale která má jeden až deset atomů uhlíku, výhodněji od jednoho do šesti atomů uhlíku ve strutkuře svého řetězce. Podobně mají "nižší alkenyl" a "nižší alkynyl" podobné 80 ·· • · « 80 ·· • · « ·· • · « • · · • ι«· • · • · · • · · * • · « »««· ♦ · · ·· 9 délky řetězců. Výhodně jsou alkylové skupiny nižší alkyly. Ve výhodných provedeních je substituent označený v předloženém vynálezu jako alkyl nižší alkyl.
Termín "aryl", jak je používán v předloženém vynálezu, zahrnuje 5-, 6- a 7-členné aromatické skupiny s jedním kruhem, které mohou zahrnovat nula až čtyři heteroatomy, např. benzen, pyrrol, furan, thiofen, imidazol, oxazol, thiazol, triazol, pyrazol, pyridin, pyrazin, pyridazin a pyrimidin, atd. Tyto arylové skupiny mající heteroatomy v kruhové struktuře mohou být také označovány jako "arylové heterocykly" nebo "heteroaromatické skupiny". Aromatický kruh může být substituovaný v jedné nebo více poloh v kruhu substituenty, které jsou popsány výše, např. halogen, azid, alkyl, aralkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, hydroxyl, alkoxyl, aminoskupina, nitroskupina, sulfhydryl, iminoskupina, amidoskupina, fosfonát, fosfinát, karbonyl, karboxyl, silyl, ether, alkylthioskupina, sulfonyl, sulfonamidoskupina, keton, aldehyd, ester, heterocyklyl, aromatické nebo heteroaromatické části, -CF3, -CN, atd. Termín "aryl" také zahrnuje polycyklické kruhové systémy mající dva nebo více cyklických kruhů, ve kterých jsou dva nebo více uhlíků společné dvěma sousedním kruhům (kruhy jsou "kondenzované kruhy"), kde alespoň jeden z kruhů je aromatický, např. další cyklické kruhy mohou být cykloalkyly, cykloalkenyly, cykloalkynyly, aryly a/nebo heterocyklyly.
Termíny ortho, meta a para jsou aplikovány na 1,2-, 1,3- a 1,4-disubstituované benzeny. Například názvy 1,2-dimethylbenzen a ortho-dimethylbenzen jsou synonyma.
Termíny "heterocyklyl" nebo "heterocyklická skupina" se vztahuje na 3- až 10-členné kruhové struktury, výhodněji 3- až 7-členné kruhy, jejichž kruhové struktury zahrnují jeden až čtyři heteroatomy. Heterocykly mohou být také polycykly. Heterocyklylové skupiny zahrnují například thiofen, thianthren, furan, pyran, izobenzofuran, chromen, xanthen, fenoxathiin, pyrrol, imidazol, pyrazol, izothiazol, izoxazol, pyridin, pyrazin, pyrimidin, pyridazin, indolizin, izoindol, indol, indazol, purin, chinolizin, izochinolin, chinolin, ftalazin, naftyridin, chinoxalin, chinazolin, cinnolin, pteridin, karbazol, karbolin, fenanthridin, acridin, pyrimidin, fenanthrolin, fenazin, fenarsazin, fenothiazin, furazan, fenoxazin, pyrrolidin, oxolan, thiolan, oxazol, piperidin, piperazin, morfolin, laktony, laktámy, např. azetidinony a pyrrolidinony, sultamy, sultony, atd. Heterocyklický 81 81 • · ·· φ φ φ φ • φφφφ • I ·♦· · φφ φ • φ φ • ♦ * · • # *»#· • · · ·· φ φ φ φ φ » φ ··# φ φ φ · φφ φφ kruh může být substituovaný do jedné nebo více poloh shora popsanými substituenty, např. halogen, alkyl, aralkyl, alkenyl, alkynyl, cykloalkyl, hydroxyl, aminoskupina, nitroskupina, sulfhydryl, iminoskupina, amidoskupina, fosfonát, fosfinát, karbonyl, karboxyl, silyl, ether, alkylthioskupina, sulfonyl, keton, aldehyd, ester a heterocyklyl, aromatické nebo heteroaromatické části, -CF3, -CN, atd.
Termín "karbocykl", jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na aromatický nebo nearomatický kruh, ve kterém každý atom kruhu je uhlík.
Heterocykly a karbocykly zahrnují kondenzované bicyklické a bicyklické kruhové struktury s můstky.
Termín "nitroskupina" znamená -NO2; termín "halogen" znamená -F, -Cl,-Br nebo -I; termín "sulfhydryl" znamená -SH; termín "hydroxyl" znamená -OH; a termín "sulfonyl" znamená -SO2-.
Termín "amin" a "aminoskupina" jsou v oboru dobře známy a vztahují se na nesubstituované a substituované aminy, např. části, které mohou být reprezentovány obecným vzorcem: p •p 1 K 10 1 + 0 r* 1 S5- I ^ nebo r9 kde každý ze substituentů R9, R10 a R'io nezávisle reprezentuje atom vodíku, alkyl, alkenyl, -(CH2)m-R8 nebo R9 a R10 spojené dohromady s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, za vzniku heterocyklu majícího od 4 do 8 atomů v kruhové struktuře; substituent Rs reprezentuje aryl, cykloalkyl, cykloalkenyl, heterocykl nebo polycykl; a m je nula nebo celé číslo v rozmezí od 1 do 8.
Termín "alkylamin", jak je používán v předloženém vynálezu, znamená shora definovanou aminovou skupinu mající substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl k ní připojený, tzn. alespoň jeden substituent R9 a R10 je alkylová skupina.
Termín "acylaminoskupina" je v oboru dobře znám a vztahuje se na část, která může být reprezentována obecným vzorcem:
O *R< N- R0 11 82 • · • 9 I • · · • 9999 · • · «·# « ·*ί 99 • 9 9 · • 9 9 9 • 9 999 9 • » 9 99 99 99 · r 9 9 • 9 9 9 • 9 9999 9 9 9 99 9 kde substituent Rg má shora definovaný význam a substituent R'n reprezentuje atom vodíku, alkyl, alkenyl nebo -(CH2)m-R8, kde m a substituent Rg mají shora definovaný význam.
Termín "amidoskupina" je v oboru dobře znám jako amino-substituovaný karbonyl a zahrnuje část, která může být reprezentována obecným vzorcem:
O N 3 ,/
Kio kde substituenty R9, R10 mají shora definovaný význam. Výhodná provedení amidu nebudou zahrnovat imidy, které mohou být nestabilní.
Termín "amidin" je v oboru dobře znám jako skupina, která může být reprezentována obecným vzorcem: NR»
>*Rio W R9 kde substituenty R9, R10 mají shora definovaný význam.
Termín "guanidin" je v oboru dobře znám jako skupina, která může být reprezentována obecným vzorcem:
R» i kde substituenty R9, R10 mají shora definovaný význam.
Termín "alkylthioskupina" se vztahuje na shora definovanou alkylovou skupinu mající k ní připojený radikál síry. Ve výhodných provedeních je "alkylthio" část reprezentována jedním členem ze skupiny -S-alkyl,-S-alkenyl,-S-alkynyl a -S-(CH2)m-Rg, kde m a substituent Rg jsou definovány výše. Reprezentativní alkylthioskupiny zahrnují methylthioskupinu, ethylthioskupinu, atd.
Termín "karbonyl" je v oboru dobře znám a zahrnuje části, které mohou být reprezentovány obecným vzorcem: kde X je vazba nebo reprezentuje kyslík nebo síru a substituent Rn reprezentuje atom vodíku, alkyl, alkenyl, -(CH2)m-R8 nebo farmaceuticky přijatelnou sůl, substituent R'n reprezentuje atom vodíku, alkyl, alkenyl nebo -(CH2)m-R8> kde m a substituent Rg mají shora definovaný význam. Pokud X je kyslík a substituent Rn nebo R'n není atom vodíku, vzorec reprezentuje "ester". Pokud X je kyslík a substituent Rn má shora definovaný význam, část je zde označována jako karboxylová skupina, zejména pokud substituentem Rn je atom vodíku, vzorec reprezentuje "karboxylovou kyselinu". Pokud X je kyslík a substituent R'n je atom vodíku, vzorec reprezentuje "formiát". Obecně pokud atom kyslíku ze shora uvedeného vzorce je nahrazen sírou, vzorec reprezentuje "thiolkarbonylovou" skupinu. Pokud X je síra a substituenty Rn nebo R'n nejsou atom vodíku, vzorec reprezentuje "thioester". Pokud X je síra a substituent Rn je atom vodíku, vzorec reprezentuje "thiokarboxylovou kyselinu". Pokud X je síra a substituent R'n je atom vodíku, vzorec reprezentuje "thioformiát". Naproti tomu pokud X je vazba a substituent Rn není atom vodíku, shora uvedený vzorec reprezentuje "ketonovou" skupinu, kde X je vazba a substituent Rn je atom vodíku, shora uvedený vzorec reprezentuje "aldehydovou" skupinu.
Termíny "alkoxyl" nebo "alkoxy skupina", jak jsou používány v předloženém vynálezu, se vztahují na shora definovanou alkylovou skupinu mající kyslíkový radikál k ní připojený. Reprezentativní alkoxylové skupiny zahrnují methoxyskupinu, ethoxyskupinu, propyloxyskupinu, řerc-butoxyskupinu, atd. "Ether" jsou dva uhlovodíky kovalentně spojené s kyslíkem. Tudíž substituent alkylu, který umožňuje, aby alkylový ether byl nebo se podobal alkoxylu, může být například reprezentován jednou částí vybranou ze skupiny -O-alkyl, -0-alkenyl, -O-alkynyl, -0-(CH2)m-Rs, kde m a substituent Rg jsou popsány výše.
Termín "sulfonát" je v oboru dobře znám a zahrnuje část, která může být reprezentována obecným vzorcem:
O 84 • · 84 • · ···· φ φ φφφ φ ve kterém substituent R41 je elektronový pár, atom vodíku, alkyl, cykloalkyl nebo aryl.
Termín "sulfát" je v oboru dobře znám a zahrnuje část, která může být reprezentována obecným vzorcem:
O
II -o—g—qr41
II
O ve kterém substituent R41 má shora definovaný význam.
Termín "sulfonamidoskupina" je v oboru dobře znám a zahrnuje část, která může být reprezentována obecným vzorcem:
O
II 11 “N—S-R'. 11 R§ 5 ve kterém substituenty R9 a R'n mají shora definovaný význam. Termín "sulfamoyl" je v oboru dobře znám a zahrnuje část, která může být reprezentována obecným vzorcem: O R,
O no /
—S-N R» n \ o ve kterém substituenty R9 a Rjo mají shora definovaný význam.
Termín "sulfonyl", jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na část, která může být reprezentována obecným vzorcem: —S-R« ve kterém substituent R44 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylu, alkenylu, alkynylu, cykloalkylu, heterocyklylu, arylu nebo heteroarylu.
Termín "sulfoxidoskupina", jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na část, která může být reprezentována obecným vzorcem:
O
II 44
-S-R ve kterém substituent R44 je vybrán ze skupiny sestávající z atomu vodíku, alkylu, alkenylu, alkynylu, cykloalkylu, heterocyklylu, aralkylu nebo arylu. 85
• · ··· · · • ·
• · • · · • MM • · Mělo by být zřejmé, že "substituce" nebo "substituovaný" zahrnuje implicitní výhradu spočívající v tom, že substituce je v souladu s přípustnou valencí substituovaného atomu a substituentu, a že substituce povede ke stabilní sloučenině, např. která nebude spontánně podléhat transformaci, např. přesmyku, cyklizaci, eliminaci, atd.
Termín "substituovaný", jak je používán v předloženém vynálezu, má zahrnovat všechny přípustné substituenty organických sloučenin. V širším aspektu zahrnují přípustné substituenty acyklické a cyklické, rozvětvené a nerozvětvené, karbocyklické a heterocyklické, aromatické a nearomatické substituenty organických sloučenin. Názorné substituenty zahrnují například shora uvedené substituenty. Přípustné substituenty mohou být jeden nebo více nebo stejné nebo rozdílné pro příslušné organické sloučeniny. Pro účely předloženého vynálezu mohou mít heteroatomy, např. dusík, vodíkové substituenty a/nebo kterékoliv přípustné substituenty organických sloučenin, které jsou popsány v předloženém vynálezu, jenž vyhovují valencím heteroatomů. Předložený vynález není nikterak limitován žádnými z přípustných substituentů organických sloučenin.
Celkový seznam zkratek používaných organickými chemiky, kteří jsou odborníky v oboru, lze nalézt v prvním vydání každého svazku Journal of Organic Chemistry, tento seznam je typicky uveden v tabulce označené jako Standard List of Abbreviations. Zkratky obsažené v tomto seznamu a všechny zkratky používané organickými chemiky, kteří jsou odborníky v oboru, je zde uveden jako odkaz. V některých provedeních mají sloučeniny podle předloženého vynálezu strukturu podle obecného vzorce (V):
P- (V) X, Y, m, n, Z a R' mají shora definovaný význam a R je shora definovaná aktivující část, která je vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného ♦ ♦ · ··· · · · · ··· ··♦ · ♦ · · ♦ ··» • ·♦·· ♦ · · ··· · · · ··*· • # · · · · · » ··· · ·· ·» ♦♦ · 86 vzorce (V) a biologicky aktivní sloučeninou nebo prekurzorem. V konkrétních provedeních je R hydrát aldehydu. P má shora definovaný význam a může být reprezentováno obecným vzorcem (II) B-tO-CHjOy,^ (II) kde E má shora popsaný význam a v některých provedeních může být reprezentováno obecným vzorcem (III) nebo (IV).
Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina a C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina.
Pokud d je nula, pak zde nejsou další substituenty (L) na aromatickém kruhu. Pokud d je celé číslo od 1 do 4 mohou být substituenty (L) lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina.
Pokud R je aldehyd, pak sloučeniny spadají do kategorie reprezentované obecným vzorcem (VI):
Z
kde všechny další proměnné mají shora definovaný význam.
Například pokud X a Y jsou kyslík a R je aldehyd, pak sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou reprezentovány sloučeninou J.
Sloučenina J
P-O (L)d
•T
T2—o
kde Ti a T2 substituenty mohou být v ortho, meta nebo para poloze.
Pokud Ti a T2 substituenty jsou alkylové skupiny s lineárním řetězcem a d je nula, pak sloučeniny jsou reprezentovány obecným vzorcem (IX):
kde každé u je nezávisle nula nebo celé číslo od jedné do pěti a všechny další proměnné mají shora definovaný význam. V konkrétních provedeních Z je atom vodíku nebo methyl.
Konkrétní skupiny sloučenin spadající do obecného vzorce (IX) mohou být reprezentovány obecnými vzorci (VII) a (VIII):
Některé reprezentativní aktivované polyalkylenglykolové sloučeniny zahrnují následující příklady, kde polymer na bázi polyalkylenglykolu je PEG nebo mPEG:
V některých provedeních jsou sloučeniny podle předloženého vynálezu reprezentovány obecným vzorcem (X):
p_X-(CH&-CH ~R
Z (X) 89 • ♦··« kde stejně jako výše je n nula nebo celé číslo od jedné do pěti a X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'.
Pokud X je NR', pak R' může být atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Ce nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru nebo alkylthioskupiny. Z může být lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Pokud jsou přítomny, pak substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina.
Jak je definováno výše, tak R je aktivující část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (X) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. V některých provedeních je R hydrát aldehydu. P je polymer na bázi polyalkylenglykolu mající shora definovaný význam a může být reprezentován obecným vzorcem (II): 90 90 ·· ·· ·♦ ♦ ·« · · · · · · ♦ · ··· ···· ··«· • ·♦·♦ · · · ··· t t ····· f ♦ · · ···· «·· ♦ ·· ·· ·· · kde E a index a mají shora definovaný význam a v některých provedeních může být reprezentován obecným vzorcem (III) nebo (IV). V některých provedeních je E methyl, a tudíž P je mPEG.
Pokud R je aldehyd a X je kyslík, sloučeniny spadají do struktury podle obecného vzorce (XI):
Z , (XI) kde P, Z a n mají význam definovaný u obecného vzorce (X).
Pokud P je mPEG jsou sloučeniny popsány obecným vzorcem (XII):
(XII) a kde n je jedna a Z je methyl je sloučenina reprezentována obecným vzorcem (XIII):
kde a je celé číslo od 4 do 10000. Příklady syntetických způsobů přípravy sloučenin podle předloženého vynálezu jsou uvedeny v příkladech níže. Předložený vynález také zahrnuje kompozice aktivovaných polyalkylenglykolových sloučenin (PGC) podle předloženého vynálezu a jednu nebo více biologicky aktivních sloučenin. Jak je popsáno výše, tak biologicky aktivní sloučeniny jsou ty sloučeniny, které vykazují biologickou odpověď nebo účinek, pokud jsou podávány subjektu. Kromě sloučeniny podle předloženého 91
• · * f « • ♦··· vynálezu mohou být subjektu podávány nekonjugované, biologicky aktivní sloučeniny.
Navíc biologicky aktivní sloučeniny mohou obsahovat reaktivní skupiny, které jsou schopné reakce a konjugace s alespoň jedním aktivovaným PGC podle předloženého vynálezu. Předložený vynález také zahrnuje konjugáty nových PGC s biologicky aktivní sloučeninami. V jednom provedení jsou konjugáty připraveny ze sloučeniny obecného vzorce (I) a biologicky aktivní sloučeniny (B) a jsou popsány podle obecného vzorce (XIV):
P-x-Q-0¾ (CHj)^ CH—R*—B Ž (XIV)
Jak je uvedeno výše, tak m je nula nebo jedna, aby Y bylo přítomno nebo chybělo, n je nula nebo celé číslo od jedné do pěti a X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR\ Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je C] až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Pokud jsou přítomny, pak substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina.
Každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Cj až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou 92 ·»
• · · • · · • ··· • · ··· · · • · ·· «· ♦ « » • ♦ ♦ • ♦ ♦ ♦ • ♦ · ♦ · t vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupinu, amidoskupinu, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonyl, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* je spojovací část vytvořená reakcí substituentu R s odpovídající funkční skupinou na biologicky aktivní sloučenině, B, jak je popsáno výše. Například R* je připraveno reakcí části, např. karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu nebo glyoxalu, s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. P je polymer na bázi polyalkylenglykolu mající shora definovaný význam a může být reprezentován obecným vzorcem (II): (II) EKO-CH2CH2)a- kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina (např. methyl), detekovatelná značka nebo část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (XIV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. Jak je uvedeno výše, tak index a je celé číslo od 4 do 10000.
Pokud E je detekovatelná značka, pak může být například radioizotop, fluorescenční část, fosforescenční část, chemiluminiscenční část nebo kvantová tečka.
Pokud E je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (XIV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem, pak E může tvořit vazbu k další molekule biologicky aktivní sloučeniny (B), aby aktivovaná polyalkylenglykolová sloučenina byla vázána buď na konci molekuly stejného typu biologicky aktivní sloučeniny za vzniku dimeru molekuly. V některých provedeních vytváří E vazbu s biologicky aktivní sloučeninou, která je jiná než B, čímž dochází ke tvorbě heterodimeru biologicky aktivní sloučeniny nebo jejich prekurzorů. V dalším provedení vytváří E další vazbu s biologicky aktivní sloučeninou, B, tak, aby E i R byly připojeny přes různé funkční skupiny stejné molekuly biologicky aktivní sloučeniny nebo její prekurzory.
Pokud E je schopná tvořit vazbu s biologicky aktivní molekulou nebo jejím prekurzorem, pak E je stejné nebo jiné než R a je vybráno z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalových částí.
Pokud E je schopná tvořit vazbu s biologicky aktivní molekulou nebo jejím prekurzorem, pak E může mít strukturu podle obecného vzorce (III) nebo (IV): r-HC—(CH2)s-(¥)—Q—X-CW2CW2— Z , (III) —HC——X-CWjCWj Z , (IV) kde každé Q, X, Y, Z, m a n mají nezávisle shora definovaný význam, každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl, R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi 94 ♦ ♦ ♦ · • · · · ♦ ···· · · • · · ··» ·
• · · ♦ • · #♦·♦ • · · ·· · ·♦ · • f « sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. R" a R'" jsou nezávisle vybrány z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
Pokud Q v obecném vzorci (XIV) je substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, pak je konjugát připraven z aktivovaného polyalkylenglykolu obecného vzorce (V) a biologicky aktivní molekuly (B) a je popsán podle obecného vzorce (XV)
P (XV) kde Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Pokud jsou přítomny, pak substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina. V některých provedeních Ti a 95
• · · » • · · · • M« » I • · · • · • · • · · • «··· • · T2, pokud jsou přítomny, jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená nebo Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina. d je nula (např. nejsou zde L substituenty na aromatickém kruhu) nebo celé číslo od 1 do 4. Každé L je, pokud je přítomno, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Cj až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina. Všechny další proměnné mají shora popsaný význam, včetně P, což je polymer na bázi polyalkylenglykolu a může být reprezentováno obecným vzorcem (Π) (Π) E-(0~CH2CH2)a· kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina (např. methyl), detekovatelná značka nebo část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (XV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. Jak je uvedeno výše, tak index a je celé číslo od 4 do 10000.
Pokud E je detekovatelná značka, pak značka může být například radioizotop, fluorescenční část, fosforescenční část, chemiluminiscenční část nebo kvantová tečka.
Pokud E je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (XV) a biologicky aktivní sloučeninou, B, pak E může tvořit vazbu k další molekule biologicky aktivní sloučeniny (B) takovým způsobem, aby aktivované polyalkylenglykolové sloučeniny byly vázány na kterémkoliv konci molekuly stejného typu biologicky aktivní sloučeniny za vzniku dimeru molekuly. • · ·· ·· ·· · ♦ ·· · ♦ · * · · · • · · · ·· · · ··· • ··*· · · · ··· · · · ···» • · · t ···· ··· · ·· ·· ·· · 96 V některých provedeních vytváří E vazbu s biologicky aktivní sloučeninou, která je jiná než B, čímž dojde k vytvoření heterodimeru biologicky aktivní sloučeniny nebo jejich prekurzorů. V dalších provedeních vytváří E další vazbu s biologicky aktivní sloučeninou, B, takovým způsobem, aby E a R byly vázány přes různé funkční skupiny stejné molekuly biologicky aktivní sloučeniny nebo jejich prekurzorů.
Pokud E je schopná tvořit vazbu s biologicky aktivní molekulou nebo jejím prekurzorem, pak E je stejné nebo jiné než R a je vybráno z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalových částí.
Pokud E může tvořit vazbu s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem, pak v některých provedeních může mít E obecný vzorec (III) nebo obecný vzorec (IV): r-Hp-CCHjJí-(Y)m--q-X—cw2cw2— Z , (III) R"—-110-(0¾—x·—cw2cw2— z I, (IV) kde každé Q, X, Y, Z, m a n mají nezávisle shora definovaný význam, každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl, R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi • · «· ·· ·♦ · ·· φ ···· φ · φ • · · · ·· φ · · · ♦ • φφφφ « · « ι·« ι · Φ ···· • φ Φ· φφφφ #·· · ·· ·· ·♦ · 97 sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. R" a R'" jsou nezávisle vybrány z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-JV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalových částí.
Pokud dojde k vazbě na oba konce biologicky aktivní sloučeniny nebo jejího prekurzoru, pak mohou být tyto bifunkční molekuly reprezentovány obecným vzorcem (XX) nebo obecným vzorcem (XXI): B'-I^C|H-{CH2)n-{Y)nrQ“x“CW2CWž(0-CH2CH2)a X”Tj <Wd
ZT2-(Y)iríCH2)/"R^
B (XX) Λ Ar r-j-TrCOs-W*
B X-CW2CW2-(0-cH2CH2)a—X—Tj z (XXI) kde každé X a Y, Tj a T2, R' a Z, L, Q, m, n, a a n mají shora popsaný význam, každé W je nezávisle atom vodíku nebo Cj až C7 alkyl. R* a R** jsou nezávisle spojovací části vytvořené reakcí substituentu R a R" s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a B a B' jsou každý biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor po konjugaci se substituentem R, resp. R". V některých provedeních jsou B a B' stejné typy biologicky aktivní sloučeniny. V dalších provedeních jsou B a B' různé biologicky aktivní sloučeniny. V ještě dalších provedeních jsou B a B' stejné biologicky aktivní molekuly. V dodatečných provedeních jsou R* a R** stejné. V dalších provedeních jsou R* a R** rozdílné. Například v některých provedeních může E tvořit vazbu k další molekule biologicky aktivní sloučeniny (B = B') tak, aby aktivované PGC bylo vázáno buď na konci molekuly stejného typu biologicky aktivní sloučeniny za vzniku dimeru molekuly. V některých provedeních vytváří E vazbu s biologicky aktivní sloučeninou, která je jiná než B (B není B'), čímž dojde k vytvoření heterodimeru biologicky aktivní sloučeniny nebo jejich prekurzorů. V dalších provedeních vytváří E další vazbu s biologicky aktivní sloučeninou, B, takovým způsobem, aby E (přes R" nebo R'") i R byly vázány přes různé funkční skupiny stejné molekuly biologicky aktivní sloučeniny nebo jejich prekurzory. V některých provedeních jsou R* nebo R** methylenová skupina a B nebo B' je biologicky aktivní molekula obsahující aminoskupinu, kde methylenová skupina vytváří vazbu s aminoskupinou na B. Například amin může být amino-konec peptidu, amin aminokyselinového bočního řetězce peptidu nebo amin glykosylačního susbstituentu glykosylovaného peptidu. V některých provedeních je peptid interferon, např. interferon-beta, např. interferon-beta-la. V některých provedeních tohoto typuje vazba připravena reduktivní alkylací.
Pokud Ti a T2 substituenty obecného vzorce (XV) jsou alkylové skupiny s lineárním řetězcem, pak X a Y jsou kyslík a d je nula, konjugáty jsou reprezentovány obecným vzorcem (XIX):
(XIX) kde každé u je nezávisle nula nebo celé číslo od jedné do pěti a všechny další proměnné mají shora definovaný význam. V konkrétních provedeních je Z atom vodíku nebo methyl. φ φ · φ φ φ ΦΦΦΦ φ φ φ φ φ φ ♦ φ φ φ φ φ · φ Φ «··· Φ Φ 4» ··· · · Φ ΦΦΦΦ # φ ΦΦ ΦΦΦΦ φφΦ Φ ΦΦ ΦΦ ΦΦ Φ 99
Konkrétní skupiny sloučeniny spadající do obecného vzorce (XV) mohou být reprezentovány sloučeninami podle obecných vzorců (XVII) a (XVIII) připravených reakcí vzorců (VII), resp. (VIII), s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem:
(XVII) (XVIII) kde n je nula nebo celé číslo od jedné do pěti, P je polymer na bázi polyalkylenglykolu. Jak je popsáno výše, tak Z je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, R* je spojovací část mající shora popsaný význam, B je biologicky aktivní molekula. Tyto sloučeniny mohou být bifunkční nebo mono funkční v závislosti na charakteru E, jak je popsáno výše. V některých provedeních je R* methylenová skupina a B je biologicky aktivní molekula obsahující aminoskupinu, kde methylenová skupina vytváří vazbu s aminoskupinou na B. Například amin může být amino-konec peptidu, amin aminokyselinového bočního řetězce peptidu nebo amin glykosylačního susbstituentu glykosylovaného peptidu. V některých provedeních je peptid interferon, např. interferon-beta, např. interferon-beta-la. V některých provedeních je tento typ vazby připraven reduktivní alkylací.
Konjugáty podle předloženého vynálezu mohou být také připraveny reakcí sloučeniny podle obecného vzorce (X) s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem za vzniku konjugátů podle obecného vzorce (XXII): 100 • Μ ·♦ ·· · • ···· · · · • · ···· · ♦ · · Μ·* * I · ··· · · · ···· • · · · · · · • ·· ·· ·· · Ρ «Α» řli ./^tl_Τ> * Vil Iv ~Β z , (XXII) kde Β je biologicky aktivní molekula mající shora popsaný význam a n je nula nebo celé číslo od jedné do pěti. X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR’ nebo NR', pokud X je NR', pak R' je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Pokud jsou přítomné, pak substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina. Z je lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina. R* je spojovací část vytvořená reakcí substituentu R s odpovídající funkční skupinou na biologicky aktivní sloučenině, B, jak je popsáno výše. Například R* je připraveno reakcí části, např. karboxylová kyselina, ester, aldehyd, hydrát 101
♦ · • ♦ M« · · ♦ · • · • ♦ • · • ♦··· aldehydu, acetal, hydroxyskupina, chráněná hydroxyskupina, karbonát, alkenyl, akrylát, methakrylát, akrylamid, substituovaný nebo nesubstituovaný thiol, halogen, substituovaný nebo nesubstituovaný amin, chráněný amin, hydrazid, chráněný hydrazid, sukcinimidyl, izokyanát, izothiokyanát, dithiopyridin, vinylpyridin, jodacetamid, epoxid, hydroxysukcinimidyl, azol, maleimid, sulfon, allyl, vinylsulfon, tresyl, sulfo-JV-sukcinimidyl, dion, mesyl, tosyl nebo glyoxalová funkční skupina, s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. V některých provedeních je Z methyl a n je jedna. P je polymer na bázi polyalkylenglykolu mající shora definovaný význam a může být reprezentován obecným vzorcem (II): (II) E-(0-CH2CH2)a* kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina (např. methyl), detekovatelná značka nebo část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (XXII) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. Jak je uvedeno výše, tak a je celé číslo od 4 do 10000.
Pokud E je detekovatelná značka, pak může být například radioizotop, fluorescenční část, fosforescenční část, chemiluminiscenční část nebo kvantová tečka.
Pokud E je schopná tvořit vazbu s biologicky aktivní molekulou nebo jejím prekurzorem, pak vznikne bifunkční molekula. E může tvořit vazbu k další molekule biologicky aktivní sloučeniny (B), aby aktivované polyalkylenglykolové sloučeniny byly vázány na kterémkoliv konci molekuly stejného typu biologicky aktivní sloučeniny za vzniku dimerní molekuly. V některých provedeních vytváří E vazbu s biologicky aktivní sloučeninou, která je jiná než B, čímž dojde k vytvoření heterodimeru biologicky aktivní sloučeniny nebo jejich prekurzorů. V dalších provedeních vytváří E další vazbu s biologicky aktivní sloučeninou, B, takovým způsobem, aby E i R byly vázány přes různé funkční skupiny stejné molekuly biologicky aktivní sloučeniny nebo jejich prekurzorů.
Pokud E je schopná tvořit vazbu s biologicky aktivní molekulou nebo jejím prekurzorem, je E stejné nebo jiné než R a je vybráno z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné • · ·· ·· ·· · ··· · · · ♦ ··· ··· ···· ···· • ···· · · · ··· · · ····· • · · * · · · · ··· · «· ·· ·· 9 102 hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalových částí. V některých provedeních může mít E strukturu podle obecného vzorce (III) nebo obecného vzorce (IV): R"-HC—(0¾--00ffl-q—X—CW2CW2— Z , (III) R"·-HC— (0¾ X CW2CW2 Z , (IV) kde každé Q, X, Y, Z, m a n má nezávisle shora definovaný význam, každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl, R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem. R" a R"' jsou nezávisle vybrány z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu a mohou být stejné nebo jiné než R. • · ·· ♦· ·· · • Φ φ · · · · ··· • · · φ φ φ φ φ φ φ φ • φφφφ φ φ φ φφφ · · · ···· • · φ φ φ φ φ φ ΦΦΦ · ΦΦ ΦΦ ·♦ · 103
Pokud jsou vázány na obou koncích s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem, mohou být tyto bifunkční molekuly reprezentovány obecným vzorcem (XXIV) nebo obecným vzorcem (XXV):
Z A-b (CH^—(Y)m—Q—X—CW2CW2—(0-CH2CH2)ir-X-“(CH2)n/ z (XXIV)
B CW2CW2-(0-CH2CH2)r-X—(CH2)„
R (XXV) kde každé X a Y je nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR' a každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina. Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Pokud jsou přítomné, pak substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina.
Každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl, m je nula nebo jedna, a je celé číslo od 4 do 10000 a každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5. • « ·· ·· ·♦ · ·· · · · ♦ · ··· • · · ♦ · ♦ · ···· • ··♦· · · ♦ ··· · · · ♦ ··· • · · ♦ · · · · ··· ♦ ♦· ·· ·♦ ♦ 104 R* a R** jsou nezávisle spojovací části mající shora popsaný význam, B a B' jsou nezávisle biologicky aktivní molekuly a mohou být stejné nebo rozdílné. E (přes R" nebo R'") může tvořit vazbu k další molekule biologicky aktivní sloučeniny (B), aby aktivované polyalkylenglykolové sloučeniny byly vázány buď na konci molekuly stejného typu biologicky aktivní sloučeniny za vzniku dimerní molekuly. V některých provedeních E (přes R" nebo R"') vytváří vazbu s biologicky aktivní sloučeninou, která je jiná než B, čímž dojde k vytvoření heterodimeru biologicky aktivní sloučeniny nebo jejich prekurzorů. V dalším provedení vytváří E (přes R" nebo R'") další vazby s biologicky aktivní sloučeninou, B, takovým způsobem, aby E i R byly vázány přes různé funkční skupiny stejné molekuly biologicky aktivní sloučeniny nebo jejich prekurzory. R" a R'" mohou být stejné nebo jiné než R a jsou vybrány z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-iV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalových částí. V některých provedeních je R* nebo R** methylenová skupina a B nebo B' je biologicky aktivní molekula obsahující aminoskupinu, kde methylenová skupina vytváří vazbu s aminoskupinou na B. Například amin může být amino-konec peptidu, amin aminokyselinového bočního řetězce peptidu nebo amin glykosylačního susbstituentu glykosylováného peptidu. V některých provedeních je peptid interferon, např. interferon-beta, např. interferon-beta-la. V některých provedeních je tento typ vazby připraven reduktivní alky lácí.
Konjugáty podle předloženého vynálezu mohou být připraveny kopulací s biologicky aktivní sloučeninou na polyalkylenglykolové sloučeniny, jak je popsáno v příkladech. V některých provedeních je kopulace dosaženo reduktivní alkylací. 105 • « ·· ·· ·· · ··· · · · ♦ · · · • · « · ·· · · · · · • ···* · · · ♦·« · · · ♦ ··· • · ι · ··»·
Požadované biologicky aktivní sloučeniny zahrnují kteroukoliv látku pro diagnózu, zmírnění léčby, ošetření nebo prevenci onemocnění u lidí nebo jiných zvířat, nebo jakékoliv jiné zlepšení fyzického nebo duševního stavu lidí nebo zvířat. Příklady biologicky aktivních molekul zahrnují, ale není to nikterak limitováno, peptidy, analoga peptidů, proteiny, enzymy, malé molekuly, barviva, lipidy, nukleosidy, oligonukleotidy, analoga oligonukleotidů, sacharidy, oligosacharidy, buňky, viry, lipozómy, mikročástice, povrchy a micely. Tato skupina sloučenin také zahrnuje prekurzory těchto typů molekul. Skupiny biologicky aktivních látek, které jsou vhodné pro použití podle předloženého vynálezu zahrnují, ale není to nikterak limitováno, cytokiny, chemokiny, lymfokiny, rozpustné receptory, protilátky, antibiotika, fungicidy, antivirotika, protizánětlivé látky, protinádorové látky, kardiovaskulární agens, ataraktika, hormony, růstové faktory, steroidní agens, atd.
Biologicky aktivní sloučeninou může být peptid, např. interferon, včetně interferon-beta (např. interferon-beta-la) nebo interferon-alfa. Díky polymerní modifikaci s PGC podle předloženého vynálezu dochází ke snížení antigenních odpovědí, není třeba, aby cizorodý peptid byl pro používání jako terapeutika zcela analogický. Například peptid, např. interferon, používaný k přípravě polymerních konjugátů může být vyroben ze savčího extraktu, např. lidského, přežvýkavců nebo bovinního interferonu, nebo může být vyroben synteticky nebo rekombinantně.
Například v rámci jednoho aspektu je předložený vynález zaměřen na sloučeniny a způsoby ošetření stavů, které jsou citlivé na ošetření interferonem alfa nebo beta.
Podání polalkylenglykolového konjugátu interferon-beta (dále "PGC IFN-beta", "PGC-IFN-β", např. PEG IFN-beta", "PEG IFN-β" "PEGylovaného IFN-beta" nebo "PEGylovaného IFN-β") poskytuje vylepšené terapeutické výhody, zatímco dochází k výraznému snížení nebo ke kompletní eliminaci nežádoucích vedlejších účinků, které jsou běžně spojené se standardním používáním léčebných režimů interferonu alfa nebo beta. PGC IFN-beta konjugát může být připraven připojením polymeru na bázi polyalkylenu ke koncové aminoskupině IFN beta molekuly. Jediný aktivovaný 106 ·♦ • · ♦ · « · ♦ ♦ • · ··· • · ♦ • · ♦ • · · · • · ···· ♦ · · polymer na bázi polyalkylenglykolu může být konjugován k N-konci IFN-beta reduktivní alkylací. PGC IFN-beta konjugát může být připraven např. jako tekutina nebo lyofilizovaný prášek pro injekci. Záměrem konjugace IFN beta s PGC je zlepšit dodání proteinu výrazným prodloužením jeho poločasu v plazmě, a tím poskytnout prodlouženou aktivitu IFN-beta.
Termín "interferon" nebo "IFN", jak je používán v předloženém vynálezu, znamená rodinu vysoce homologních proteinů specifických pro species, které inhibují virovou replikaci a buněčnou proliferaci a modulují imunitní odpověď. Lidské interferony jsou seskupeny do dvou skupin, typ 1, zahrnující a- a β-interferon, a typ 2, který je reprezentován pouze γ-interferonem. Byly vyvinuty rekombinantní formy z každé skupiny a jsou komerčně dostupné. Subtypy v každé skupině jsou na bázi antigenních/strukturních charakteristických vlastností.
Termín "beta interferon", "beta-interferon", "beta IFN", "beta-IFN", "β interferon", "β-interferon", "β IFN", "β-IFN", "interferon beta", "interferon-beta", "interferon β", "interferon-β", "IFN beta", "IFN-beta", "IFN ", "IFN-β" a "interferon lidských fibroblastů" jsou v předloženém vynálezu používány zaměnitelným způsobem tak, aby popisovaly členy skupiny interferonů beta, které mají odlišné aminokyselinové sekvence podle izolace a sekvenční analýzy DNA kódující peptidy.
Navíc termíny "beta interferon la", "beta interferon-1 a", "beta-interferon la", "beta-interferon-1 a", "beta IFN la", "beta IFN-la", "beta-IFN la", "beta-IFN-la", "β interferon la", "β interferon-1 a", "β-interferon la", "β-interferon-1 a", "β IFN la", "β IFN-la", "β-IFN la", "β-IFN-la", "interferon beta la", "β-interferon beta-la", "interferon-beta la", "interferon-beta-1 a", "interferon β la", "interferon β-la", "interferon-β la", "interferon^-la", "IFN beta la", "IFN beta-la", "IFN-beta-1 a", "IFN beta-la", "IFN β la", "IFN β-la", "IFN-β la", "IFN^-la" jsou v předloženém vynálezu používány zaměnitelným způsobem tak, aby popisovaly rekombinantně nebo synteticky produkovaný interferon beta, který má přirozené (normální) aminokyselinové sekvence.
Technologie rekombinantní DNA aplikované na výrobu interferonů umožnila úspěšnou přípravu několika lidských interferonů, čímž bylo možné • · ·♦ ♦♦ ·· · ··· · · · · ··· ··· · · · · · · · ♦ • ·#«» t « · ♦ ·· · · · ·*·· • · · · ♦ ♦ · ♦ ··· · ·· ·· · 107 provést velkokapacitní fermentaci, výrobu, izolaci a purifikaci různých interferonů s dobrou homogenitou. Rekombinantně vyrobený interferon si uchovává některé nebo téměř všechny ze svých in vitro a in vivo antivirových a imunomodulačních aktivit. Je také zřejmé, že rekombinantní techniky by také mohly zahrnovat glykosylační místo pro adici sacharidové části na rekombinantně připravený polypeptid.
Také je zamýšlena konstrukce rekombinantních DNA plasmidů obsahujících sekvence kódující alespoň část interferonů lidských fibroblastů a expresi polypeptidu majícího imunomodulační nebo biologickou aktivitu interferonů lidského fibroblastů. Konstrukce hybridních beta-interferonových genů obsahujících kombinace různých subtypových sekvencí může být také dosaženo technikami, které jsou známé odborníkům v oboru.
Typické vhodné rekombinantní beta-interferony, které mohou být používány při provádění předloženého vynálezu zahrnují, ale není to nikterak limitováno, interferon beta-la, např. AVONEX® dostupný u Biogen, lne., Cambridge, MA, a interferon-beta-lb, např. BETASERON® dostupný u Berlex, Richmond, CA.
Existují mechanizmy, kterými produkty genu indukovaného IFN poskytují chránící účinky proti virové infekci. Tyto inhibiční virové účinky se vyskytují v různých stádiích životního cyklu viru. Viz patent US č. 6 030 785. Například IFN může inhibovat nepokryté virové částice, penetraci a/nebo fúzi způsobenou viry.
Stavy, které mohou být léčeny podle předloženého vynálezu jsou obecně ty, které jsou citlivé na léčbu interferonem a zahrnují např. stavy, které by mohly pozitivně nebo výhodně (podle termíny z lékařské praxe) na terapii na bázi interferonů beta. Pro účely předloženého vynálezu zahrnují stavy, které mohou být léčeny terapií interferonů beta popsanou v předloženém vynálezu, ty stavy, ve kterých ošetření interferonem beta má nějakou účinnost, ale ve kterých převažují negativní vedlejší účinky ošetření IFN-β. Léčení způsoby podle předloženého vynálezu vede k výrazně sníženým nebo eliminovaným vedlejším účinkům v porovnání se standardní léčbou interferonem beta. Navíc stavy, které byly tradičně považovány za odolné vůči léčbě IFN-β, nebo ty stavy, u kterých je léčba rozumným dávkováním IFN-β neproveditelná, mohou být ošetřovány způsoby podle předloženého vynálezu. ··· · I · * * · · • · · ···· · ♦ · · • ···· · * · »·· · · · ···· é · ·· ···« *·· · ·· ·· ·* · 108 PGC IFN-β sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být používány samotné nebo v kombinaci s jedním nebo více agens použitelnými pro ošetření konkrétního stavu. Byla provedena alespoň jedna pilotní studie rekombinantního interferonu beta-1 a pro ošetření chronické hepatitidy C. Viz obecně Habersetzer et al. L iver 30:437-441 (2000), zde je uvedeno jako odkaz. Například sloučeniny mohou být podávány v kombinaci se známými agens pro ošetření virové infekce.
Viz Kakumu et al., Gastroenterology 105:507-12 (1993) a Pepinsky, et al., J. Pharmacology and Experimental Therapeutics, 297:1059-1066 (2001), zde je uvedeno jako odkaz.
Termín "antivirotikum", jak je používán v předloženém vynálezu může zahrnovat například malé molekuly, peptidy, sacharidy, proteiny, molekuly odvozené z virů, inhibitory proteáz, analoga nukleotidů a/nebo analoga nukleosidů. Termín "malé molekuly", jak je používán v předloženém vynálezu, se vztahuje na organickou molekulu, která má méně než asi 2500 amu (hmotnostních atomových jednotek), výhodně méně než asi 1000 amu. Příklady vhodných antivirových sloučenin zahrnují, ale není to nikterak limitováno, ribavirin, levovirin, MB6866, zidovudin 3TC, FTC, acyklovir, gancyklovir, viramid, VX-497, VX- 950 a ISIS-14803. Příklady stavů, které mohou být léčeny interferonem zahrnují, ale není to nikterak limitováno, poruchy proliferace buněk, zejména roztroušenou sklerózu, rakovinu (např. leukémii vlasových buněk, Kaposiho sarkom, chronickou, myeloidní leukémii, mnohočetný myelom, karcinom bazálních buněk a maligní melanom, rakovinu ovariálních buněk, lymfom kožních T-buněk) a virové infekce. Ošetření interferonem, ale není to nikterak limitováno, může být používáno k ošetření stavů, které by mohly mít výhody z inhibice replikace virů senzitivních na interferon. Interferon může být například používán samotný nebo v kombinaci s AZT při ošetření viru lidské imunodeficience (F1IV)/AIDS nebo v kombinaci s ribavirinem při ošetření HCV. Virové infekce, které mohou být ošetřovány podle předloženého vynálezu zahrnují, ale není to nikterak limitováno, hepatitidu A, hepatitidu B, hepatitidu C, jiné non-A/non-B hepatitidy, herpes virus, virus Epstein-Barrové (EBV), cytomegalovirus (CMV), herpes simplex, lidský herpes virus typ 6 (HHV-6), papillomavirus, poxvirus, picornavirus, adenovirus, rhinovirus, lidský T-lymfotropický virus typu 1 a 2 (HTLV-1/-2), lidský rotavirus, • · ·« ·« ·· * «ι i t # · ι · e · • i * ···· ···· » ··*« » i t »·· I I I ·#·· • · · · * · · · »•4 · ·· ·· · 109 rabies, retrovirus, včetně HIV, encefalitidu a respirační virové infekce. Způsoby podle předloženého vynálezu mohou být také používány k modifikaci různých imunitních odpovědí.
Byl pozorován vztah mezi HCV genotypem a odpovědí na terapii interferonem. Viz patent US č. 6 030 785; Enomoto et al, N. Engl. J. Med, 334:77-81 (1996); Enomoto et al, J. Clin. Invest. 96:224-30 (1995). Rychlost odpovědi u pacientů infikovaných HCV-1 je menší než 40%. Viz patent US ě. 6 030 785. Podobné, malé rychlosti odpovědí byly také pozorovány u pacientů infikovaných HCV-la; Hoofnagel, et al Intervirology 37:87-100 (1994). Nicméně rychlost odpovědi u pacientů infikovaných HCV-2 je téměř 80%. Viz patent US č. 6 030 785; Fried et al Semin. Liver Dis, 15:82-91 (1995). Vskutku, bylo zjištěno, že aminokyselinová sekvence diskrétní oblasti NS5A proteinu HCV genotypu lb koreluje s citlivostí na interferon. Viz Patent US č. 6 030 785, uveden zde jako odkaz. Viz také Enomoto et al 1996; Enomoto et al 1995. Tato oblast byla identifikována jako oblast determinující citlivost na interferon (ISDR). PGC IFN-beta konjugát je podáván ve farmakologicky účinném množství k ošetření kteréhokoliv ze shora popsaných stavů a je na bázi IFN beta aktivity polymerního konjugátu. Termín "farmakologicky účinné množství" znamená množství léčiva nebo farmaceutického agens, které vyvolá biologickou nebo medicinální reakci tkáně, systému, zvířete nebo lidí, která je výzkumníky nebo klinickými pracovníky požadována. Je to množství, které je dostatečné k výraznému ovlivnění reakce, zatímco dojde k udržení zmenšených hladin vedlejších účinků. Množství PGC IFN-beta, které může být podáváno subjektu, při potřebě takového ošetření, se pohybuje v rozmezí od 0,01-100 μg/kg, nebo výhodněji od 0,01-10 pg/kg, přičemž dávka se podává samotná nebo rozdělená do několika dávek.
Podání popsaných dávek může probíhat obden, ale výhodněji jednou týdně nebo ob týden. Dávky jsou podávány po dobu alespoň 24 týdenní periody injekcí.
Podání dávek může být perorální, místní, intravenózní, subkutánní, intramuskulární nebo kterýmkoliv jiným přijatelným systémovým způsobem. Na základě posouzení ošetřujícího lékaře bude množství léčiva podávaného a používaný léčebný režim záviset na věku, pohlaví a anamnéze pacienta, který je ošetřován, počtu neutrofílů (např. závažnost neutropenie), závažnosti stavu konkrétního onemocnění a toleranci pacienta k ošetření, o čemž svědčí lokální toxicita a systémové vedlejší účinky. V praxi budou konjugáty podle předloženého vynálezu podávány v množstvích, které budou dostatečné k inhibici nebo prevenci nežádoucích medicinálních stavů nebo onemocnění u subjektu, např. savců, a budou používány ve formě, která je nejvíce výhodná pro takové účely. Kompozice jsou výhodně vhodné pro vnitřní použití a zahrnují účinné množství farmakologicky aktivní sloučeniny podle předloženého vynálezu samotné nebo v kombinaci s dalšími aktivními agens společně s jedním nebo více farmaceuticky přijatelných nosičů. Sloučeniny jsou zejména použitelné z hlediska faktu, že mají nízkou, pokud vůbec nějakou mají, toxicitu.
Konjugáty popsané v předložené vynálezu mohou tvořit aktivní složku farmaceutického přípravku a jsou typicky podávány ve směsi s vhodnými farmaceutickými ředícími roztoky, excipienty a nosiči (kolektivní dále označováno jako "nosič"), které jsou vhodně vybrány s ohledem na zamýšlenou formu podání, tzn. perorální tablety, kapsle, léčebné nápoje, sirupy, atd. Kompozice budou typicky zahrnovat účinné množství aktivní sloučeniny nebo její farmaceuticky přijatelné soli a navíc mohou také zahrnovat kterýkoliv z nosičů, jenž jsou běžně používány ve farmaceutickém oboru. V závislosti na zamýšleném způsobu podání mohou být kompozice v pevné formě, polopevné formě nebo tekuté formě k dávkování, např. injikovatelné roztoky, tablety, čípky, pilulky, kapsle s časovým uvolňováním, prášky, tekutiny, suspenze, atp., výhodně v jednotkových dávkách.
Standardní farmaceutické přípravky obsahující farmakologicky účinné množství konjugátu, např. PGC IFN-beta, společně s farmaceuticky přijatelnými nosiči, adjuvans, ředícími roztoky, konzervačními látkami a/nebo solubilizátory mohou být používány při provádění předloženého vynálezu. Farmaceutické přípravky interferonu zahrnují ředící roztoky různých pufrů (např. arginin, Tris-HC1, acetát, fosfát) mající rozmezí pH a iontovou sílu, nosiče (např. lidský serumalbumin), solubilizátory (např. tween, polysorbát) a konzervační látky (např. benzylalkohol). Viz např. patent US č. 4 496 537.
Podání aktivních sloučenin popsaných v předloženém vynálezu může být provedeno prostřednictvím přijatelných způsobů podání pro terapeutické agens.
111 ··♦ ♦ ·♦
Tyto způsoby zahrnují systémové nebo místní podání, např. perorální, nazální, parenterální, transdermální, subkutánní nebo místní podání.
Například pro perorální podání ve formě tablety nebo kapsle (např. želatinové kapsle) může být aktivní složka léku kombinována s perorálním, netoxickým farmaceuticky přijatelným, inertním nosičem, např. ethanolem, glycerolem, vodou, atd. Navíc mohou být do směsi, pokud je požadováno nebo třeba, inkorporovány vhodná pojivá, lubrikans, dezintegrační agens a barvicí látky. Vhodná pojivá zahrnují škrob, hlinitokřemičitan hořečnatý, škrobový maz, želatinu, methylcelulózu, karboxymethylcelulózu sodnou a/nebo polyvinylpyrrolidon, sacharidy, kukuřičná sladidla, přirozené a syntetické gumy, např. klovatina, traganth nebo alginát sodný, polyethylenglykol, vosky, atp. Lubrikans používané v těchto dávkovačích formách zahrnují oleát sodný, stearát sodný, stearát hořečnatý, benzoát sodný, acetát sodný, chlorid sodný, oxid křemičitý, talek, stearovou kyselinu, její hořečnaté a vápenaté soli a/nebo polyethylenglykol, atd. Dezintegrátory zahrnují, ale není to nikterak limitováno, škrob, methylcelulózu, agar, bentonit, xanthanové škroby, agar, kyselinu alginovou nebo její soli, nebo efervescentní směsi, atd. Ředící roztoky zahrnují např. laktózu, dextrózu, sacharózu, mannitol, sorbitol, celulózu a/nebo glycin.
Konjugáty podle předloženého vynálezu mohou být také podávány v takových perorálních dávkovačích formách jako jsou tablety nebo kapsle s časovým a postupným uvolňováním, pilulky, prášky, granule, léčebné nápoje, tinktury, suspenze, sirupy a emulze.
Tekutina, zejména injikovatelné kompozice, mohou být např. připraveny rozpouštěním, dispergováním, atd. Aktivní sloučenina je rozpuštěna nebo smíchána s farmaceuticky čistým rozpouštědlem, např. vodou, fyziologickým roztokem, vodným roztokem dextrózy, glycerolem, ethanolem, atd., čímž dochází ke tvorbě injikovatelného roztoku nebo suspenze. Navíc mohou být formulovány pevné formy vhodné pro rozpouštění v tekutině před injekcí. Injikovatelné kompozice jsou výhodně vodné izotonické roztoky nebo suspenze. Kompozice mohou být sterilizovány a/nebo mohou obsahovat adjuvans, např. konzervační, stabilizační, smáčecí nebo emulgační prostředky, podpůrné prostředky pro rozpouštění, soli regulující osmotický tlak a/nebo pufry. Navíc také mohou obsahovat jiné terapeuticky hodnotné látky. 112
Konjugáty podle předloženého vynálezu mohou být podávány intravenózním (např. bolus nebo infúze), intraperitoneálním, subkutánním nebo intramuskulárním způsobem, resp. všemi použitelnými způsoby, které jsou dobře známé odborníkům v oboru. Injikovatelné roztoky mohou být připraveny ve standardních formách buď jako tekuté roztoky nebo suspenze.
Parenterální injikovatelné podání je obecně použitelné pro subkutánní, intramuskulární nebo intravenózní injekce nebo infúze. Například, pokud je subkutánní injekce používána k dodání 0,01-100 pg/kg, nebo výhodněji 0,01-10 pg/kg PEGylovaného IFN-beta v průběhu jednoho týdne, mohou být podávány dvě injekce 0,005-50 pg/kg, nebo výhodněji 0,005-5 pg/kg v 0 a 72 hodinách. Navíc jeden přístup pro parenterální podání využívá implantaci systému s pomalým nebo postupným uvolňováním, který zajišťuje, aby byla udržena konstantní hladina dávkování, podle patentu US č. 3 710 795, zde je uvedeno jako odkaz.
Kromě tohoto výhodné konjugáty podle předloženého vynálezu mohou být podávány v intranazální formě místním podáním vhodných intranazálních nosičů nebo transdermálními způsoby využívajícími ty formy transdermálních podávačích systémů, které jsou odborníkům v oboru dobře známé. Aby mohlo být dosaženo podání ve formě transdermálního podávacího systému, budou dávky aplikovány spíše kontinuálním než diskontinuálním režimem dávkování. Další výhodné místní preparáty zahrnují krémy, masti, lotion, spreje a gely, kde množství podávané kompozice by mohlo být 10-100 násobně vyšší než dávka, která je typicky podávána při parenterálním podání.
Pro pevné kompozice mohou být používány excipienty zahrnující manitol, laktózu, škrob, stearát hořečnatý, sodnou sůl sacharinu, talek, celulózu, glukózu, sacharózu, uhličitan hořečnatý, atd. s farmaceutickým stupněm čistoty. Aktivní sloučenina definovaná výše může být také formulována jako čípky pomocí např. polyalkylenglykolů, např. propylenglykolu, jako nosiče. V některých provedeních jsou čípky výhodně připraveny z mastných emulzí nebo suspenzí.
Konjugáty podle předloženého vynálezu mohou být také podávány formou lipozómových dodávacích systémů, např. malé unilamelární vezikuly, velké unilamelární vezikuly a multilamelární vezikuly. Lipozómy mohou být vytvořeny z různých fosfolipidů obsahujících cholesterol, stearylamin nebo fosfatidylcholiny. V některých provedeních film z lipidových složek je hydratován 113 • 0 · · ·· 113 • 0 · · ·· ··
• · · · 0 » · 0 • 0 • · · · • · · · · ••0 0 0 00000 0 0·· vodným roztokem léku za vzniku lipidové vrstvy zapouzdřující lék, jak je popsáno v patentu US č. 5 262 564.
Konjugáty podle předloženého vynálezu mohou být také dodávány použitím imunoglobulinových fúzí jako individuálního nosiče, ke kterým jsou molekuly sloučeniny kopulovány.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být také kopulovány s rozpustnými polymery jako směrované lékové nosiče. Takové polymery mohou zahrnovat polyvinylpyrrolidon, kopolymer na bázi pyranu, polyhydroxypropyl-methakrylamid-fenol, polyhydroxyethylaspanamidefenol nebo polyethylenoxidpolylysin substituovaný palmitoylovými zbytky. Konjugáty mohou být také kopulovány s proteiny, např. receptorové proteiny, a albuminem. Kromě toho mohou být sloučeniny podle předloženého vynálezu kopulovány se skupinou biologicky degradovatelných polymerů použitelných při provádění řízeného uvolňování léku např. polymléčná kyselina, polyepsilon kaprolakton, polyhydroxybutyrová kyselina, polyorthoestery, polyacetaly, polydihydropyrany, polykyanoakryláty a zesítěné nebo amfipatické blokové kopolymery hydrogelů.
Pokud je třeba, může také farmaceutický přípravek, který má být podáván, obsahovat minoritní množství netoxických pomocných látek, např. smáčecí nebo emulgační látky, pH pufrující látky a další látky, např. acetát sodný, triethanolaminoleát, atd. Dávkovači režim, který využívá konjugáty, je vybrán podle různých faktorů zahrnujících typ, species, věk, hmotnost, pohlaví a medicinální stav pacienta; závažnost onemocnění, které má být ošetřováno; způsob podání; renální a hepatickou funkci pacienta; a použití konkrétní sloučeniny nebo její soli. Aktivita sloučenin podle předloženého vynálezu a citlivost pacienta k vedlejším účinkům jsou také zvažovány. Standardně zkušený lékař nebo veterinář může snadno stanovit a předepsat účinné množství léku, které je potřeba k prevenci, léčení nebo zastavení progresu onemocnění.
Perorální dávky podle předloženého vynálezu, pokud jsou používány pro indikované účinky, se budou pohybovat v rozmezí asi 0,01-100 pg/kg/denně, nebo výhodněji 0,01-10 pg/kg/denně perorálně. Kompozice jsou výhodně poskytovány ve formě tablet s rýhou obsahující 0,5-5000 pg, nebo výhodněji 0,5-500 pg aktivní složky.
··· 114 • · • · • · ··· » · · ·· ·· • ♦ · • t · · ψ · ·♦··♦ • · · • · ·
Pro jakýkoliv způsob podání mohou být používány dělené dávky nebo jednorázové dávky. Například sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být podávány denně nebo týdně v jednorázové dávce nebo celková dávka může být podávána v dělených dávkách (dvě, tři nebo čtyři).
Kterákoliv z výše uvedených farmaceutických kompozic může obsahovat 0,1-99%, 1-70%, nebo výhodně 1-50% aktivních sloučenin podle předloženého vynálezu jako aktivních složek.
Jak je uvedeno výše, může být průběh onemocnění a její odpovědi na léčení lékem následované klinickým pozorováním a nálezy laboratorního vyšetření. Účinnost terapie podle předloženého vynálezu je determinována do té míry, do které se podaří shora popsané příznaky a symptomy stavu, např. chronická hepatitida, zmírnit a také do té míry, do které normální vedlejší účinky interferonu (např. symptomy podobné chřipce, např. horečka, bolest hlavy, nachlazení, myalgie, únava, atd. a související symptomy centrálního nervového systému, např. deprese, parestézie, narušená koncentrace, atd.) jsou eliminovány nebo výrazně sníženy. V některých provedeních je polyalkylovaná sloučenina podle předloženého vynálezu (např. PEGylovaný interferon) podávána společně s jedním nebo více farmaceutických agens použitelných pro ošetření konkrétního stavu. Například polyalkylovaný protein může být podáván v kombinaci se známým antivirotikem nebo agens pro ošetření virové infekce. Takové antivirální sloučeniny zahrnují např. ribavirin, levovirin, MB6866 a zidovudin 3TC, FTC, acyklovir, gancyklovir, viramid, VX-497, VX-950 a ISIS-14803.
Konjugát a antivirotikum mohou být podávány současně (např. agens jsou podávány pacientovi dohromady); postupně (např. agens jsou podávány pacientovi jeden po druhém); nebo odděleně (např. agens jsou podávány opakovaně, např. agens A, pak agens B, pak agens A, atd.) Při provádění předloženého vynálezu může být výhodný PGC IFN-beta (např. PEG IFN-beta) podáváno pacientům infikovaným virem hepatitidy C. Použití PEG IFN-beta-laje výhodné.
Pacienti jsou vybíráni pro ošetření z pacientů s pozitivním nálezem protilátky anti-HCV, kterým byla v rámci biopsie nalezena chronická aktivní hepatitida. 115 • » • ·*·· · • · * · · · «· · • I · * • · · ♦ · ··· ψ · · ···· 9 9 · · • · «· · • »
Ke sledování průběhu HCV replikace v subjektech při odpovědi na ošetření lékem, mohou být stanoveny hladiny HCV RNA ve vzorcích séra například provedením testu polymerázové řetězové reakce, která využívá dva sety primerů odvozených od NS3 a NS4 nestrukturních genových oblastí HCV genomu. Viz Farci et al., 1991, New Eng. J. Med. 325:98-104, Ulrich et al., 1990, J. Clin. Invest., 86:1609-1614.
Antivirová aktivita může být měřena změnami v HCV-RNA titru. HCV-RNA data mohou být analyzována srovnáním s titry na konci ošetření s měřením základních hodnot před ošetřením. Snížení HCV RNA během 4 týdnů je důkazem antivirové aktivity sloučeniny. Viz Kleter et al., 1993, Antimicrob. Agents Chemother. 37 (3):595-97; Orito et al. 1995, J. Medical Virology, 46:109-115. Změny alespoň ve dvou řádech (>2 log) jsou interpretovány jako důkaz antivirové aktivity. U subjektu trpícího chronickou infekcí hepatitidy C se může projevovat jeden nebo více z následujících příznaků nebo symptomů: (a) zvýšená hladina sérové alanin aminotransferázy (ALT), (b) pozitivní test na anti-HCV protilátky, (c) přítomnost HCV demonstrovaná pozitivním testem na HCV-RNA, (d) klinická stigmata chronického onemocnění jater, (e) hepatocelulární poškození. Tato kritéria mohou být používána nejen k diagnóze hepatitidy C, ale také k vyhodnocení reakce pacienta na léčení lékem. Ví se, že zvýšené hladiny alanin aminotransferázy (ALT) a asparát aminotransferázy (AST) se vyskytují při nekontrolovatelné hepatitidě C a celková reakce na léčení je obecně definována jako normalizace hladin těchto sérových enzymů, zejména ALT. Viz Davis et al, 1989, New Eng. J. Med. 321:1501-1506. ALT je enzym, který se uvolňuje v případě zničených jaterních buněk, a je symptomatickým znakem HCV infekce. Díky interferonu dochází k syntéze enzymu 2',5'-oligoadenylát syntetázy (2'5'OAS), což vede k degradaci virové mRNA. Viz Houglum, 1983, Clinical Pharmacology 2:20-28. Přírůstky sérových hladin 2'5'OAS koincidují s úbytkem hladin ALT.
Histologické vyšetření vzorků jaterní biopsie může být používáno jako druhé kritérium pro vyhodnocení. Viz např. Knodell et al. 1981, Hepatology 1:431-435, jejichž Histological Activity Index (portální zánět, postupná nebo 116
můstková nekróza, lobulární poranění a fibróza) poskytuje způsob vyhodnocení síly onemocnění.
Bezpečnost a tolerovatelnost nebo ošetření mohou být determinována klinickým vyhodnocením a měřením počtů bílých krvinek a neutrofilů, což může být provedeno periodickým monitorováním hematologických parametrů, např. počtu bílých krvinek, neutrofilů, destiček a červených krvinek.
Standarními způsoby, které jsou známy v dosavadní technice, lze připravit různé další formulace s prodlouženým nebo postupným uvolňováním.
Odborníkům v oboru je jistě zřejmé, že lze provést mnoho modifikací a variací tohoto vynálezu, aniž by došlo ke vzdálení se od jeho charakteru a rozsahu. Konkrétní provedení, která jsou popsána v předloženém vynálezu, mají pouze ilustrativní charakter a předložený vynález je limitován pouze termíny v připojených patentových nárocích společně se všemi ekvivalenty, k nimž jsou tyto nároky oprávněny. Všechny patenty a publikace citované v předloženém vynálezu jsou v něm uvedeny pouze jako odkaz. Příklady provedení vynálezu Příklad 1
Syntéza aktivovaných polyalkylenglykolů A) Alkylace alkoholů
Aktivované polyalkylenglykoly jsou syntetizovány alkylací polyalkylenglykolů majícího volnou koncovou hydroxylovou funkční skupinu. Obecné reakce jsou znázorněny na schématu I:
O
117 ·· ♦ · • • • · * • ♦ ♦ • · ·«· • · · • • · « ·· ♦
Polyalkylenglykol (P-OH) se nechá reagovat s alkylhalogenidem (A) za vzniku etheru (B). Sloučenina B se pak hydroxyluje za vzniku alkoholu (C), který se oxiduje na aldehyd (D). V těchto sloučeninách znamená n celé číslo od nuly do pěti a Z může být lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, Z může být také C3 až C7 nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl (alkyl je Ci až C20 nasycený nebo nenasycený alkyl) nebo heteroalkarylová skupina. U substituovaných sloučenin mohou být substituenty halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina. Typicky je P-OH polyethylenglykol (PEG) nebo monomethoxy-polyethylenglykol (mPEG) mající molekulovou hmotnost pohybující se v rozmezí od 5000 do 40000 Daltonů (Da).
Například syntéza mPEG-O-2-methylpropionaldehydu je znázorněna na schématu II.
mPES
OH nm H3 60 ekviv ^
THF kat Kí
mPEG «3 ,0.
f H3 mPEQ ^ ^ 2
t. BH3/THF '........™ »'...........................................>
2, H2Q2, NaOH mPEG-OH s molekulovou hmotností 20000 Da (mPEG-OH 20 kDa; 2,0 g, 0,1 mmol, Sunbio) se nechá reagovat s NaH (12 mg, 0,5 mmol) v THF (35 ml). Do směsi se pak přidá 50 ekvivalentů 3-brom-2-methylpropenu (3,34 g, 5 mmol) a katalytické množství KI. Výsledná směs se zahřívá k refluxu po dobu 16 hodin, « · « · · · · · * · · • ···* · · * «Μ · · ····· • · * · · · · ··· * Λ* *· ·· · 118 přidá se voda (1 ml) a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Do zbytku se přidá CH2CI2 (25 ml) a organická vrstva se oddělí, suší nad bezvodým Na2SC>4, objem se sníží přibližně na 2 ml. Tento CH2CI2 roztok se po kapkách přidá do etheru (150 ml). Výsledný bílý precipitát se spojí, ěímž se získá 1,9 g sloučeniny 1. *H NMR (CDCI3, 400 MHz) 5 4,98 (s, 1H), 4,91 (s, 1H), 1,74 (s, 3H).
Do sloučeniny 1 (1,9 g, 0,1 mmol) v THF (20 ml) a CH2CI2 (2 ml) při teplotě 0°C se přidá BH3 v THF (1,0 M, 3,5 ml). Směs se míchá v ledové lázni po dobu 1 hodiny. Do této směsi se pomalu přidá NaOH (2,0 M, 2,5 ml), poté 30% H2O2 (0,8 ml). Reakce se ohřeje na pokojovou teplotu a míchá po dobu 16 hodin. Postupuje se podle shora uvedeného postupu (CH2CI2, precipitace se provede z etheru), čímž se získá 1,8 g látky 2 ve formě bílé pevné látky. JH NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 1,80 (m, 1H), 0,84 (d, 3H).
Sloučenina 2 (250 mg) se rozpustí v CH2CI2 (2,5 ml) a za míchání v průběhu 30 minut a při pokojové teplotě se přidá Dess-Martinovo činidlo (DMP; 15 mg). Do směsi se přidá nasycený roztok NaHCC>3 a Na2S203 (2 ml) a směs se míchá při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Postupuje se podle shora uvedeného postupu, čímž se získá látka 3 (mPEG-O-2-methylpropionaldehyd, 120 mg) ve formě bílé pevné látky. JH NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 9,75 (s, 1H), 2,69 (m, 1H), 1,16 (d, 3H). 119 «+ *· *· · Μ · • · « • # · · · # · t · · · * • · * · · * · * • · ··# * · · ···* • » · < « · «* ·· «· ·
Podobně, jak je uvedeno na schématu III, se připraví pro aromatické ft)d HO-Ti P-O-T
alkoholy:
Obecně se aromatický alkohol (E) nechá reagovat s alkylhalogenidem (A) za vzniku monoetheru (F). Zbývající alkoholová skupina sloučeniny F se pak konvertuje na halogenid (např. bromid) ve sloučenině G, která se nechá reagovat s polyalkylenglykolem (P-OH), čímž se získá ether (H). Tato sloučenina se pak konvertuje na aldehyd (J) hydroborací na primární alkohol (I), poté oxidací. V těchto sloučeninách je n celé číslo od nuly do pěti, d je nula nebo celé číslo od jedné do čtyřech a Z může být lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina. Z také může být C3 až C7 nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, 120 • · ·· • * • «Μ • · * ♦ ♦ # • # ♦ • ♦ * ♦ 9 9 9999 substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl (alkyl je Ci až C20 nasycený nebo nenasycený alkyl) nebo heteroalkarylová skupina. U substituovaných sloučenin mohou být substituenty halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina.
Navíc Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina a mohou být navzájem v ortho, meta nebo para poloze. Každé L (pokud je přítomno) je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až C7 nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina. Substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina.
Obvykle je P-OH polyethylenglykol (PEG) nebo monomethoxy-polyethylenglykol (mPEG) mající molekulovou hmotnost pohybující se v rozmezí od 5000 do 40000 Da.
Například syntéza mPEG-0-/>-methylfenyl-0-2-methylpropionaldehydu (8) je uvedena na schématu IV;
Do roztoku 4-hydroxybenzylalkoholu (2,4 g, 20 mmol) v THF (50 ml) a vodě (2,5 ml) se nejprve přidá hydroxid sodný (1,5 g, 37,5 mmol), pak 3-brom-2-methylpropen (4,1 g, 30 mmol). Tato reakční směs se zahřívá k refluxu po dobu 16 hodin. Do směsi se přidá 10% kyselina citrónová (2,5 ml) a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se extrahuje ethylacetátem (3 x 15 ml) a spojené organické vrstvy se promývají nasyceným roztokem NaCl (10 ml), suší a koncentrují, čímž se získá sloučenina 4 (3,3 g, 93 %). [H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 7,29 (m, 2H), 6,92 (m, 2H), 5,14 (s, 1H), 5,01 (s, 1H), 4,56 (s, 2H), 4,46 (s, 2H), 1,85 (s, 3H).
Mesylchlorid (MsCl; 2,5 g, 15,7 mmol) a triethylamin (TEA; 2,8 ml, 20 mmol) se přidají do roztoku sloučeniny 4 (2,0 g, 11,2 mmol) v CH2CI2 (25 ml) při teplotě 0°C a reakce se umístní do chladícího boxu na 16 hodin. Standardním zpracováním se získá světle žlutý olej (2,5 g, 87%). NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 7,31 (m, 2H), 6,94 (m, 2H), 5,16 (s, 1H), 5,01 (s, 1H), 5,03 (s, 2H), 4,59 (s, 2H), 4,44 (s, 2H), 3,67 (s, 3H), 1,85 (s, 3H). Tento olej (2,4 g, 9,4 mmol) se rozpustí v THF (20 ml), přidá se LiBr (2,0 g, 23,0 mmol) a reakční směs se zahřívá k refluxu po dobu 1 hodiny, pak se ochladí na pokojovou teplotu, do směsi se přidá voda (2,5 ml) a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se extrahuje ethylacetátem (3 x 15 ml) a spojené organické vrstvy se promývají nasyceným roztokem NaCl (10 ml), suší nad bezvodým Na2SC>4 a koncentrují, čímž se získá požadovaný bromid 5 (2,3 g, 96%) ve formě světle žlutého oleje. lR NMR (CDC13, 400 MHz) δ 7,29 (m, 2H), 6,88 (m, 2H), 5,11 (s, 1H), 4,98 (s, 1H), 4,53 (s, 2H), 4,44 (s, 2H), 1,83 (s, 3H). mPEG-OH 20 kDa (2,0 g, 0,1 mmol, Sunbio) se nechá reagovat s NaH (12 mg, 0,5 mmol) v THF (35 ml) a sloučenina 5 (0,55 g, 22,8 mmol) se přidá do směsi s katalytickým množstvím KI. Výsledná směs se zahřívá k refluxu po dobu 16 hodin, pak se do směsi přidá voda (1,0 ml) a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Do zbytku se přidá CH2CI2 (25 ml) a organická vrstva se oddělí, suší nad bezvodým Na2SC>4 a objem se sníží přibližně na 2 ml. Přidáním (po kapkách) do etherového roztoku (150 ml) vznikne bílý precipitát, který se spojí za vzniku látky 6 (1,5 g) ve formě bílého prášku. *H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 7,21 (d, 2H), 6,90 (d, 2H), 5,01 (s, 1H), 4,99 (s, 1H), 4,54 (s, 2H), 4,43 (s, 2H), 1,84 (s, 3H).
Do roztoku sloučeniny 6 (1,0 g, 0,05 mmol) v THF (10 ml) a CH2CI2 (2 ml) ochlazeném na teplotu 0°C se přidá BH3/THF (1,0 M, 3,5 ml) a reakce se míchá po dobu 1 hodiny. Pomalu se přidá 2,0 M roztok NaOH (2,5 ml), poté 30% H2O2 (0,8 ml). Reakční směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 16 hodin. Postupuje se podle shora uvedeného postupu (CH2CI2, precipitace se provede z etheru), čímž se získá látka 7 (350 mg) ve formě bílé pevné látky. ]H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 7,21 (d, 2H), 6,84 (d, 2H), 4,54 (s, 2H), 2,90 (m, 2 H), 1,96 (d, 3H).
Sloučenina 7 (150 mg, 0,0075 mmol) se rozpustí v CH2CI2 (1,5 ml) a DMP (15 mg) se přidává za míchání reakční směsi při pokojové teplotě po dobu 1,5 hodiny. lU NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 9,76 (s, 1H), 7,21 (d, 2H), 6,78 (d, 2H), 4,44 (s, 2H), 4,14 (m, 2H), 2, 85 (m, 1H), 1,21 (d, 3H).
Do směsi se přidá nasycený roztok NaHCC^ (0,5 ml) a Na2S203 (0,5 ml) a v míchání se pokračuje při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Postupuje se podle shora uvedeného postupu (CH2CI2 roztok, precipitace se provede z etheru), čímž se získá látka 8 (92 mg) ve formě bílé pevné látky.
Podobně, jak je uvedeno na schématu V, se připraví mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehyd (9). 123 123 « « »* ♦· ·· · ··· · · · · · · · • · · «·#« · ♦ · · • ···# · * » ·#♦ t · ♦ ···· t · · · ···· ··« · ·· ♦ · ·♦ ·
12 |
Do roztoku 3-hydroxybenzylalkoholu (2,4 g, 20 mmol) v THF (50 ml) a vody (2,5 ml) se nejprve přidá hydroxid sodný (1,5 g, 37,5 mmol), pak 3-brom-2-methylpropen (4,1 g, 30 mmol). Tato reakční směs se zahřívá k refluxu po dobu 16 hodin. Do směsi se přidá 10% kyselina citrónová (2,5 ml) a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se extrahuje ethylacetátem (3 x 15 ml) a spojené organické vrstvy se promývají nasyceným roztokem NaCl (10 ml), suší a koncentrují, čímž se získá sloučenina 10 (3,2 g, 90 %). ]H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 7,26 (m, 1H), 6,94 (m, 2H), 6,86 (m, 1H), 5,11 (s, 1H), 5,01 (s, 1H), 4,61 (s, 1H), 4,44 (s, 2H), 1,82 (s, 3H).
MsCl (2,5 g, 15,7 mmol) a TEA (2,8 ml, 20 mmol) se přidají do roztoku sloučeniny 10 (2,0 g, 11,2 mmol) v CH2CI2 (25 ml) při teplotě 0°C a reakce se umístní do chladícího boxu na 16 hodin. Standardním zpracováním se získá světle žlutý olej (2,5 g, 87%). NMR (CDC13, 400 MHz) δ 7,31 (m, 1H), 7,05 (m, 2H), 6,91 (m, 1H), 5,16 (s, 1H), 5,04 (s, 1H), 4,59 (s, 1H), 4, 45 (s, 2H), 3,71 (s, 3H), 1,84 (s, 3H). Tento olej (2,4 g, 9, 4 mmol) se rozpustí v THF (20 ml), přidá se LiBr (2,0 g, 23,0 mmol) a reakční směs se zahřívá k refluxu po dobu 1 hodiny, pak ochladí na pokojovou teplotu. Do směsi se přidá voda (2,5 ml) a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Zbytek se extrahuje ethylacetátem (3 x 15 ml) a spojené organické vrstvy se promývají nasyceným roztokem NaCl (10 ml), suší nad bezvodým Na2SC>4 a koncentruje, čímž se získá požadovaný bromid 11 (2,2 g, 92 »· · ·· »« ·· · • ι · · · · · ··· · · ♦ t ···· • MM I · t Ml t · * ··*· « · t » I · * f ··· ♦ ·· ·· ·· · 124 %) ve formě světle žlutého oleje. lU NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 7,29 (m, 1H), 6,98 (m, 2H), 6,85 (m, 1H), 5,14 (s, 2H), 4,98 (s, 2H), 4,50 (s, 2H), 4,44 (s, 2H), 1,82 (d, 3H). mPEG-OH 20 kDa (2,0 g, 0,1 mmol, Sunbio) se nechá reagovat s NaH (12 mg, 0,5 mmol) v THF (35 ml) a sloučenina 11 (0,55 g, 22,8 mmol) se přidá do směsi s katalytickým množstvím KI. Výsledná směs se zahřívá k refluxu po dobu 16 hodin, do směsi se přidá voda (1,0 ml) a rozpouštědlo se odstraní za vakua. Do zbytku se přidá CH2CI2 (25 ml) a organická vrstva se oddělí, suší nad bezvodým Na2SC>4, objem se sníží přibližně na 2 ml. Přidáním (po kapkách) do etherového roztoku (150 ml) vznikne bílý precipitát, který se spojí za vzniku látky 12 (1,8 g) ve formě bílého prášku. 'H NMR (CDC13, 4G0 MHz) δ 7,19 (m, 1H), 6,88 (m, 2H), 6,75 (m, 1H), 4,44 (s, 2H), 4,10 (m, 2H), 1, 82 (d, 3H).
Do roztoku sloučeniny 12 (1,0 g, 0,05 mmol) v THF (7,5 ml) a CH2CI2 (2,5 ml) ochlazeném na teplotu 0°C se přidá BH3/THF (1,0 M, 3,5 ml) a reakce se míchá po dobu 1 hodiny. Pomalu se přidá 2,0 M roztok NaOH (3 ml), poté 30% H2O2 (0,85 ml). Reakční směs se nechá ohřát na pokojovou teplotu a míchá po dobu 16 hodin. Postupuje se podle shora uvedeného způsobu (CH2CI2, precipitace se provede z etheru), čímž se získá látka 13 (450 mg) ve formě bílé pevné látky. ’H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 7,15 (m, 1H), 6,84 (m, 2H), 6,69 (m, 1H), 4,50 (s, 2H), 2,90 (m, 2 H), 1,95 (d, 3H).
Sloučenina 13 (200 mg, 0,01 mmol) se rozpustí v CH2CI2 (1,5 ml) a za míchání reakční směsi při pokojové teplotě po dobu se přidá DMP (20 mg). *H NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 9,74 (s, 1H), 7,17 (m, 1H), 6,86 (m, 2H), 6,74 (m, 1H), 4,48 (s, 2H), 4,15 (m, 2H), 2,78 (m, 1H), 1,22 (d, 3H). Do směsi se přidá nasycený roztok NaHCC>3 (0,5 ml) a Na2S203 (0,5 ml) a v míchání se pokračuje při pokojové teplotě po dobu 1 hodiny. Postupuje se podle shora uvedeného způsobu (roztok CH2CI2, precipitace se provede z etheru), čímž se získá látka 9 (142 mg) ve formě bílé pevné látky. B) Příprava reakcí s aromatickými alkoholy
Aktivované polyalkylenglykoly jsou syntetizovány Mitsunobuovou reakcí mezi polyalkylenglykolem majícím volnou koncovou hydroxylovou funkční skupinu aromatickým alkoholem. Reakční schéma je znázorněno na schématu VI.
Ij
Polyalkylenglykol (P-OH) se nechá reagovat s alkoholem (K) za vzniku etheru (L). V těchto sloučeninách je m nula nebo jedna, d je nula nebo celé číslo od jedné do čtyřech a n je nula nebo celé číslo od jedné do pěti, Y je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' a NR’.
Tj a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina. R' a Z jsou nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina.
Každé L (pokud je přítomno) je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až C7 nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl. Alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina a substituenty mohou být halogen, hydroxyl, karbonyl, karboxylát, ester, formyl, acyl, thiokarbonyl, thioester, thioacetát, thioformiát, alkoxyl, fosforyl, fosfonát, fosfinát, aminoskupina, amidoskupina, amidin, imin, kyanoskupina, nitroskupina, azidoskupina, sulfhydryl, sulfát, sulfonát, sulfamoyl, sulfonamidoskupina, sulfonyl, heterocyklyl, aralkyl, aromatická část, heteroaromatická část, iminoskupina, silyl, ether nebo alkylthioskupina. 126 126 ·♦ « • · ·· ·♦ ··· · ♦ ♦ · · · ♦ • I · · ♦ ♦ · · ··♦ • ···* ♦ · ♦ ·♦· ♦ · · ·»·· • · · ♦ f · t · »·· · ·· #t ·· · P je polymer na bázi polyalkylenglykolu. Obvykle je P-OH polyethylenglykol (PEG) nebo monomethoxy-polyethylenglykol (mPEG) mající molekulovou hmotnost pohybující se v rozmezí od 5000 do 40000 Da.
Například syntéza mPEG-O-p-fenylacetaldehydu (16) je znázorněna na schématu VII. HO* SOj-py ^ /v TEA, DMSO ΌΒ 14 15
mPEG-QH DIAD, PPhj. CH2C12
4-Hydroxyfenylacetaldehyd 15 se syntetizuje podle Heterocycles, 2000, 53, 777-784. 4-Hydroxyfenethylalkohol (Sloučenina 14, 1,0 g, 7,3 mmol, Aldrich) se rozpustí v dimethylsulfoxidu (8 ml, Aldrich). Za míchání se pomalu přidá TEA (2,2 ml, 16 mmol, Aldrich). Pyridinium-sulfát (SC>3*py) komplex (2,5 g, 16 mmol, Aldrich) se zcela rozpustí v dimethylsulfoxidu (9 ml, Aldrich) a tento roztok se za intenzivního míchání přidá po kapkách do alkoholu. Po 1 hodinovém míchání při pokojové teplotě se reakce naředí CH2CI2, pak promyje ledově studenou vodou. Organická vrstva se suší nad Na2S04, filtruje a koncentruje do sucha. Purifikací chromatografií na sloupci silikagelu mobilní fází hexan-ethylacetát (5:1, pak 2:1) se získá 488 mg (49%) 4-hydroxyfenylacetaldehydu 15. mPEG-OH 20 kDa (101 mg, 0,005 mmol) a 4-hydroxyfenylacetaldehyd 15 (39 mg, 0,29 mmol) se čtyřikrát azeotropicky destilují s toluenem, pak vytřepávají v bezvodém CH2CI2 (2 ml, Aldrich). Do tohoto roztoku se přidá trifenylfosfín (PPI13; 66 mg, 0,25 mmol, Aldrich), pak za míchání diizopropylazodikarboxylát (DIAD; 49 μΐ, 0,25 mmol, Aldrich). Po 3 dnech míchání při pokojové teplotě se reakční směs přidá po kapkách do intenzivně míchaného diethyletheru. Výsledný precipitát se izoluje filtrací a promyje (3x) diethyletherem. Surová látka se vytřepe v CH2CI2 a promyje vodou. Organická vrstva se suší nad Na2S04, filtruje a koncentruje do sucha. Látka se vytřepe v minimálním množství CH2CI2, pak vyprecipituje přidáním (po kapkách) do míchaného roztoku diethyletheru, spojí filtrací, promyje (3x) diethyletherem a suší, čímž se získá 63 mg (62%) mPEG-O-p-fenylacetaldehydu (16).
Syntéza mPEG-O-p-fenylpropionaldehydu (17) se provede stejným způsobem.
4-Hydroxyfenylpropionaldehyd se připraví syntézou, která je analogická k 4-hydroxyfenylacetaldehydu (Heterocycles, 2000, 53, 777-784). 3-(4-
Hydroxyfenyl)-l-propanol (1,0 g, 6,6 mmol, Aldrich) se rozpustí v dimethylsulfoxidu (8 ml, Aldrich), pomalu se za míchání přidá TEA (2,0 ml, 14 mmol, Aldrich). Pyridinium-sulfát komplex (SC>3*py) (2,3 g, 15 mmol, Aldrich) se zcela rozpustí v dimethylsulfoxidu (9 ml, Aldrich) a tento roztok se za intenzivního míchání přidá po kapkách do alkoholu. Po 1 hodinovém míchání při pokojové teplotě se reakce zředí CH2CI2, pak promyje ledově studenou vodou. Organická vrstva se suší nad Na2S04, filtruje a koncentruje do sucha. Purifikací chromatografií na sloupci silikagelu mobilní fází hexan-ethylacetát (5:1, pak 2:1) se získá 745 mg (75%) 4-hydroxyfenylpropionaldehydu. mPEG-OH 20 kDa (100 mg, 0,005 mmol) a 4-hydroxyfenylpropionaldehyd (40 mg, 0,27 mmol) se azeotropicky destilují s toluenem (4x), pak vytřepávají v bezvodém CH2CI2 (2 ml, Aldrich). Do tohoto roztoku se přidá trifenylfosfin (66 mg, 0,25 mmol, Aldrich), pak za míchání diizopropylazodikarboxylát (49 μΐ, 0,25 mmol, Aldrich). Po 3 dnech míchání při pokojové teplotě se reakční směs přidá po kapkách do intenzivně míchaného roztoku diethyletheru. Výsledný precipitát se izoluje filtrací a promyje (3x) diethyletherem. Surová látka se vytřepává v CH2CI2 a promyje vodou. Organická vrstva se suší nad Na2S04, filtruje a koncentruje do sucha. Látka se vytřepe v minimálním množství CH2CI2, pak vyprecipituje přidáním po kapkách do míchaného roztoku diethyletheru. Tato látka se pak spojí filtrací, promyje (3x) diethyletherem a suší, čímž se získá 60 mg (60%) mPEG-O-p-fenylpropionaldehydu (17). W' 4« 128 ·« ·· • · · · • · · · » » · ·*· ♦ · ·* ·· 1 • · « • · · · • · ·· * · • · » ·· * mPEG-O-wz-fenylacetaldehyd 18 se také připraví tímto způsobem.
3-Hydroxyfenylacetaldehyd se připraví syntézou, která je analogická 4-hydroxyfenylacetaldehydu (Heterocycles, 2000, 53, 777-784). 3-
Hydroxyfenethyl-alkohol (1,0 g, 7,5 mmol, Aldrich) se rozpustí v dimethylsulfoxidu (8 ml, Aldrich), pomalu se za míchání přidá TEA (2,0 ml, 14 mmol, Aldrich). Pyridinium-sulfát komplex (SC>3»py) (2,4 g, 15 mmol, Aldrich) se zcela rozpustí v dimethylsulfoxidu (8 ml, Aldrich) a tento roztok se přidá po kapkách do alkoholu za intenzivního míchání. Po 1 hodinovém míchání při pokojové teplotě se reakce zháší ledově studenou vodou, pak extrahuje CH2CI2. Organická vrstva se suší nad Na2S04, filtruje a koncentruje do sucha. Purifikací chromatografií na sloupci silikagelu mobilní fází hexan-ethylacetát (3:1, pak 1:1) se získá 225 mg (22%) 3-hydroxyfenylacetaldehydu. mPEG-OH 20 kDa (307 mg, 0,015 mmol) a 3-hydroxyfenylacetaldehyd (117 mg, 0,86 mmol) se azeotropicky destilují s toluenem (4x), pak vytřepávají v bezvodém CH2CI2 (5 ml, Aldrich). Do tohoto roztoku se za míchání přidá trifenylfosfin (200 mg, 0,76 mmol, Aldrich), pak diizopropylazodikarboxylát (147 μΐ, 0,75 mmol, Aldrich). Po 3 dnech míchání při pokojové teplotě se reakční směs přidá po kapkách do intenzivně míchaného roztoku diethyletheru. Výsledný precipitát se izoluje filtrací a promyje (3x) diethyletherem a suší, čímž se získá 284 mg (93%) mPEG-O-m-fenylacetaldehydu (18).
Chirální PEG-cinnamát-V-hydroxy-sukcinimátové (NHS) sloučeniny jsou připraveny například způsobem, který je uveden na schématech VIII a IX:
129Schéma VIII * · 94 44 ·· 4 ·· · 4 • • · % • Λ • · · • · • · « • • · • ···· • · • »·· • · • Μ«· • · • • 4 • • • 444 · ·· 44 ·· c
dihydroxydihydrocinnamát
Schéma IX t, fcíšřĚÍSĚÍi 2. %wu 'l.lfc-iSMillMtaBto
M
m α-methyl- β -hydroxycinnamát PEG-dihydrourokanát-NHS sloučeniny je také možné Mitsunobuovou reakcí, jak je uvedeno na schématu X: připravit
Schéma X
n m PEG-dihydrocinnamát-NHS sloučeniny je také možné Mitsunobuovou reakcí, jak je uvedeno na schématu XI: připravit «I 131
Schéma XI
PEG-benzofurany a PEG-indoly lze připravit způsobem, který je uveden na schématech XII a XIII
Schéma XII
PEG
CHO a
Schéma XIII 132 • · ·· ·· ·· ♦ ·· · • ♦ ♦ · • · • • · · • · • · • « • · • ···· • · • • · · • · • • · · t • · • • • II • t • · · · • · • · • · •
Příprava reakcí PEG-aminů PEG-aminy se nechají reagovat s alkylhalogenidy k připravení PEG-amidů. Příklad přípravy PEG-amid-bicyklooktan-NHS konjugátu je uveden na schématu XIV:
Schéma XIV
PEG-primární amin se konjuguje s aryl-halogenidem za vzniku konjugátu PEG-sekundárního aminu, který se pak nechá reagovat za Heckových podmínek (stereospecifická kopulace alkenu s organickým halogenidem nebo triflátem bez hybridizovaných sp3 β-vodíků katalyzovaná palladiem) s NHS-alkenem za vzniku « · ·· · ·· · · ♦ · ♦ · · · t ····♦···#·· • ···· · · · ·♦♦ · · · »··· • · · ♦ ···« ··· · ·· ·♦ ·♦ · 133 požadovaného PEG-konjugátu. Syntéza konjugátu obsahujícího pyrimidin je uvedena na schématu XV:
Schéma XV:
Konjugáty PEG-sulfonamidu lze také připravit způsobem, který je uveden na schématu XVI.
Schéma XVI
-NHS a j Heckovy podmínky
dihydrocinnamát-3-sulfonamid 1 ·· · t « · ·· · · · · · ··«· ♦ · · ··♦ ♦ · · ··♦· • · · · · · · • ·· ·· «· · 134
Dihydrocinnamát-4-sulfonamid D) Sloučeniny připravené reakcí s heterocykly PEG sloučeniny se připraví reakcí heterocyklů, které mají nebo nemají dusíky v kruhu, za vzniku reaktivních PEG species. Reprezentativní reakce jsou uvedeny na schématech XVII pro aminopyrrolidin a XVIII pro různé piperaziny:
Schéma XVII
Schéma XVIII
1. trídát-iinhycJriíf
Htinigova hkm 2. pipera/.in 3. .1-bfompropyIroaleimid ....................................... .>». 1. iriflál-anhydríd
Hunigova béze 2, piperaísm 3.. ekřylonitřil 4. NaBH^CoCJj 5, H2C=CH-S02C! , ni i........................»·
PEC l.lrífláHmhydrid Hunigova bfe 2. pijserazioe 3. sukcínanhydrid 4. DCK*HO*OTS .................mmmmmmmmjf* Ρββ„
m Příklad 2
Peptidové konjugáty podle předloženého vynálezu mohou být připraveny reakcí proteinu s aktivovanou molekulou PGC. Například interferon (IFN) se může nechat reagovat s PEG-aldehydem v přítomnosti redukčního činidla (např. kyanoborohydridu sodného) reduktivní alkylací za vzniku konjugátu PEG-protein, který je připojen přes aminovou vazbu. Viz např. evropský patent 0154316 Bl.
Lidský IFN-P-la se PEGyluje následujícími aktivovanými polyalkylenglykoly podle předloženého vynálezu: 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehyd, 20 kDa mPEG-0-/?-methylfenyl-0-2- methylpropionaldehyd, 20 kDa mPEG-O-w-methylfenyl-O-2- methylpropionaldehyd, 20 kDa mPEG-0-/?-fenylacetaldehyd, 20 kDa mPEG-O-p-fenylpropionaldehyd a 20 kDa mPEG-O-m-fenylacetaldehyd. PEGylované proteiny se purifikují na homogenní stav ze svých reakčních směsí a podrobí sérii charakterizačních testů ke stanovení jejich identity čistoty a účinnosti modifikovaných proteinů.
Detailní popis přípravy a charakterizace lidského IFN-P-la modifikovaného 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem, 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O- • · ·· »· ·· · . ····«····· ·········#· I · ···· « · · ··· · · · ···· • · · · ···· ··· · ·· · · ·· · 136 2-methylpropionaldehydem a 20 kDa mPEG-O-p-fenylacetaldehydem bude popsán dále. A) Příprava a charakterizace 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-P-la
Lidský IFN-P-la byl PEGylován na svém N-konci 20 kDa PEG-O-2-methylpropionaldehydem. Produkt reduktivní alkylace používaný k inkorporaci PEG na IFN-p-la řetězec vedl k tvorbě amino vazby, která je extrémně stabilní vůči degradaci. PEGylovaný IFN-P-la byl podbroben rozsáhlé charakterizaci, zahrnující analýzu technikou SDS-PAGE, chromatografii s dělením podle rozdílné mol. hmotnosti (SEC), peptidovou analýzu ("peptide mapping"), stanovení aktivity in vitro antivirovým testem. Čistota produktu podle SDS-PAGE a SEC byla větší než 90%. V PEGylovaném vzorku nebyly zaznamenány žádné agregáty. Reziduální hladiny nemodifikovaného IFN-P-la v produktu byly nižší než hranice stanovení, ale ukázalo se, že reprezentují asi 1% produktu. Specifická aktivita PEGylovaného IFN-p-la v při testu antivirové aktivity byla snížena přibližně dvojnásobně v porovnání s nemodifikovaným IFN-p-la (EC50 = 32 pg/ml pro 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-p-la proti EC50 = 14 pg/ml pro nemodifikovaný IFN-P-la). PEGylovaný bulkový IFN-p-la byl připraven v 30 pg/ml ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem (PBS) pH 7,3 obsahujícím 14 mg/ml lidského sérum albuminun (HSA) podobným způsobem jako byla příprava používaná pro AVONEX® (Biogen, Cambridge, MA), který byl podroben rozsáhlé charakterizaci. Látka byla dodána jako zmrazená tekutina a byla skladována při teplotě -70°C.
Vlastnosti 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-p-la jsou shrnuty v tabulce 1:
Tabulka 1. Vlastnosti 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-p-la Účinnost pegylace > 90% IFN-p-la/PEG poměr 1: Čistota > 90% Místo připojení N-konec Antivirová aktivita EC50 32 pg/ml 137 • • • ♦ • · • · • ·· • • · • · • · • • ♦ · • • • · • · • · • #··· • · • ··· • · · ···· • • • · • • · • • · · • • · • · • · • 1. Příprava 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-P-la. 10 ml neformulovaného AVONEX (IFN-P-la bulk meziprodukt, klinická šarže hůlkového léku, který prošel všemi testy pro použití na lidech v 250 pg/ml v 100 mM fosfátu sodném, pH 7,2, 200 mM NaCl) bylo zředěno 12 ml 165 mM MES pH 5,0 a 50 μΐ 5 N HC1. Vzorek byl nanesen na 300 μΐ sloupec SP-Sepharose FF (Pharmacia). Sloupec byl promýván 3 x 300 μΐ 5 mM fosforečnanu sodného pH 5,5, 75 mM NaCl a protein byl eluován 5 mM fosfátem sodným pH 5,5, 600 mM NaCl. Vyeluované frakce byly analyzovány z hlediska absorbance při vlnové délce 280 nm a koncentrace IFN-P-la ve vzorcích byla stanovena s extinčním koeficientem 1,51 na 1 mg/ml roztoku. Frakce s absorbancí byly spojeny, čímž se získal IFN-P-la o koncentraci 3,66 mg/ml, jenž se následně zředil na 1,2 mg/ml vodou.
Do 0,8 ml IFN-P-la ze zředěného SP-Sepharosového spojeného eluátu bylo 0,5 M fosforečnanu sodného pH 6,0 přidáno do 50 mM, kyanoborohydrid sodný (Aldrich) byl přidán do 5 mM a 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehyd byl přidán do 5 mg/ml. Vzorek byl inkubován při pokojové teplotě po dobu 16 hodin za nepřístupu světla. PEGylovaný IFN-P-la byl dále purifíkován z reakční směsi na 0,5 ml sloupci SP-Sepharose FF následujícím způsobem: 0,6 ml z reakční směsi bylo zředěno 2,4 ml 20 mM MES pH 5,0 a naneseno na sloupec SP-Sepharose. Sloupec byl promyt fosforečnanem sodným pH 5,5, 75 mM NaCl, poté byl PEGylovaný IFN-P-la eluován ze sloupce 25 mM MES pH 6,4, 400 mM NaCl. PEGylovaný IFN-P-la byl dále purifíkován na Superose 6 HR 10/30 FPLC třídícím sloupci 5 mM fosforečnanem sodným o pH 5,5, 150 mM NaCl jako mobilní fází. Třídící sloupec (25 ml) se nechal protékat 20 ml/h mobilní fáze a byly odebírány 0,5 ml frakce. Vyeluované frakce byly analyzovány na obsah proteinu absorbancí při vlnové délce 280 nm, spojeny a byla změřena koncentrace proteinu ve spojených frakcích. Koncentrace PEGylovaného IFN-P-la byla uvedena v IFN ekvivalentech jako PEG část nepřispívající k absorbancí při 280 nm. Vzorky z poolu byly odebrány na analýzu a zbytek byl zředěn na 30 pg/ml 138 • · ·· · • « ···· · · • · ·· ·· • · · • · · ··
• · • » I · · • · · · · formulačním pufrem obsahujícím HSA, s alikvótním podílem 0,25 ml/vialka, a skladován při teplotě -70°C. 2. UV spektrum purifikovaného 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-P-la. UV spektrum (240-340 nm) 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-P-la bylo získáno pomocí pre-HSA-formulovaného hůlkového vzorku. PEGylovaný vzorek měl maximální absorbanci při 278-279 nm a minimální absorbanci při 249-250 nm, což je v souladu s hodnotami pozorovanými u nemodifikovaného IFN-p-la hůlkového meziproduktu. Koncentrace proteinu PEGylované produktu byla stanovena ze spektra s extinkčním koeficientem 8280°’1% = 1,51. Koncentrace proteinu PEGylovaného bulk byla 0,23 mg/ml. Ve vzorku nebyla přítomný žádný zákal, což bylo evidentní z absorbance při 320 mn. 3. Charakterizace 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-P-la technikou SDS-PAGE. 4 pg nemodifikovaného a 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-p-la bylo podrobeno SDS-PAGE za redukčních podmínek na 10-20% gradientovém gelu. Gel byl značen Coomassie brilliant blue R-250 a je uveden na obrázku 1 (Sloupec A, markéry molekulových hmotností (odshora až dolů; 100 kDa, 68 kDa, 45 kDa, 27 kDa a 18 kDa); Sloupec B, nemodifikovaný IFN-P-la; Sloupec C, 20 kDa PEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-p-la). SDS-PAGE analýza 20 kDa PEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-p-la odhalila jediný hlavní pás se skutečnou hmotností 55 kDa, což je v souladu s modifikací jediným PEG. Nebyly detekovány žádné vyšší formy vyplývající z přítomnosti dalších PEG skupin. V purifikovaném PEGylovaném produktu byl detekován nemodifikovaný IFN-P-la, nicméně jeho množství bylo nižší než jsou hranice stanovení. Hladina nemodifikovaného IFN-P-la v preparátu byla stanovena jako pouze 1% z celkového proteinu. 4. Charakterizace 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-P-la chromatografií na bázi dělení podle velikosti. 139 • • ·· • * • t • • · • • • • · • • • • • • • • • · • • • · • ···· • · • ·*· • · • ♦ ··· • • • • • • • • • • · • · • · •
Nemodifikovaný a 20 kDa PEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-p-la byl podroben SEC na analytickém třídícím sloupci Superose 6 HR10/30 FPLC s PBS pH 7,2 jako mobilní fází. Sloupec se nechal protékat mobilní fází rychlostí 20 ml/h a eluent byl sledován na absorbanci při 280 nm, jak je uvedeno na obrázku 2: panel A: standardy molekulových hmotností (670 kDa, thyroglobulin; 158 kDa, gamma globulin; 44 kDa, ovalbumin; 17 kDa, myoglobin; 1,3 kDa, vitamin B12), panel B: 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la; panel C: nemodifikovaný IFN-β-la. 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-P-la bylo eluováno jako jediný ostrý pík se skutečnou molekulovou hmotností přibližně 200 kDa, což je v souladu s obrovským hydrodynamickým objemem PEG. Nebyly pozorovány žádné agregáty. Y preparátu byl detekován nemodifikovaný IFN-p-la, ale hladina byla nižší než jsou hranice stanovení. Na základě velikosti píku bylo spočteno, že množství nemodifikovaného IFN-P-la je 1% nebo méně než produktu, což je v souladu s tím, co bylo pozorováno u SDS-PAGE. 5. Analýza 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-β-la technikou spočívající v analýze peptidu. Specificita PEGylační reakce byla určena analýzou peptidu. Nemodifikovaný a 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la byl štěpen endoproteinázou Lys-C z Achromobacter (Wako Bioproducts) a výsledné produkty štěpení byly frakcionovány HPLC na reverzní fázi na sloupci Vydac C4 s 30 minutovým gradientem od 0 do 70% acetonitrilu v 0,1% TFA. Byla sledována absorbance při 214 nm. Všechny předpokládané peptidy z endoproteinázy Lys-C štěpící IFN-P-la byly identifikovány předem N-koncovou sekvenční analýzou a hmotnostní spektrometrií (Pepinsky et al. (2001) J. Pharmacology a Experimental Therapeutics 297: 1059) a z těchto peptidů byl pouze peptid obsahující N-konec z IFN-P-la pozměněn modifikací s 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem, což je evidentní jeho zmizením z peptidové mapy. Tudíž z analytických dat dále vyplývá, že PEG modifikace je cílena na N-konec proteinu, poněvadž pouze N-koncová modifikace by mohla vést ke specifické ztrátě tohoto peptidu. 140 • · ·· *· 9»* « ··· · · · 9 9 « · • · 9 9 9 9 9 9 9 9 1 • 9919 9 9 · 999 9 9 99999 • · ·· 9 9 9 9 999 9 99 99 ·♦ «* Β) Příprava a charakterizace 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-P-la
Lidský IFN-p-la byl PEGylován na N-konci 20 kDa mPEG-O-w-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem. Produkt reduktivní alkylace, který byl používán k inkorporaci PEG na IFN-p-la řetězec, vedl ke tvorbě aminové vazby, která je extrémně stabilní proti degradaci. PEGylovaný IFN-p-la byl podroben rozsáhlé charakterizaci, zahrnující analýzy SDS-PAGE, SEC, analýzu peptidu a stanovení aktivity při in vitro antivirovém testu. Podle SDS-PAGE a SEC byla čistota produktu větší než 95%. V PEGylovaném IFN-p-la vzorku nebyla prokázána žádná existence agregátů. Reziduální hladiny nemodifikovaného IFN-p-la v produktu byly nižší než jsou hranice stanovení, ale představovaly asi 1% z produktu. Specifická aktivita PEGylovaného IFN-P-la při testu antivirové aktivity byla snížena přibližně dvojnásobně v porovnání s nemodifikovaným IFN-P-la (EC50 = 31 pg/ml pro 20 kDa mPEG-0-/n-methylfenyl-0-2- methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la oproti EC50 = 14 pg/ml pro nemodifikovaný IFN-P-la). PEGylovaný bulkový IFN-P-la byl připraven v 30 pg/ml v PBS pH 7,2 obsahujícím 15 mg/ml HSA, což je podobné jako formulace používaná pro AVONEX®, který byl podroben rozsáhlé charakterizaci. Materiál byl skladován jako zmrazený roztok při teplotě -70°C.
Vlastnosti 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-P-la jsou shrnuty v tabulce 2:
Tabulka 2
Vlastnosti 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-P-la Účinnost PEGylace > 80% IFN-P-la/PEG poměr 1:1 Čistota >95% Místo připojení N-konec
Antivirová aktivita EC50 31 pg/ml 141 • · 99 99 ·· 9 9* 9 9 9 9 9 • 9 9 • 99 • 9 9 · • 9 9 9 9 9999 • · 9 • •1 é 9 9 9999 9 9 • 9 • 9 9 9 999 9 ·· ·* 99 9 1. Příprava 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-p-la. 80 ml neformulovaného AVONEX® (IFN-P-la bulkový meziprodukt, klinická šarže hůlkového léčiva, která prošla všemi testy pro použití na lidech, v 254 pg/ml v 100 mM fosforečnanu sodného pH 7,2, 200 mM NaCl) byla zředěna 96 ml ze 165 mM MES pFI 5,0 a 400 μΐ 5 N HC1. Vzorek byl nanesen na 1,2 ml sloupec SP-Sepharose FF (Pharmacia). Sloupec byl promýván 6,5 ml z 5 mM fosforečnanu sodného pH 5,5, 75 mM NaCl a protein vyeluoval s 5 mM fosforečnanu sodného pFI 5,5, 600 mM NaCl. Vyeluované frakce byly analyzovány na absorbanci při 280 nm a byla stanovena koncentrace IFN-p-la ve vzorcích s extinkčním koeficientem 1,51 na 1 mg/ml roztoku. Frakce s pikem byly spojeny, čímž se získala koncentrace IFN-p-la 4,4 mg/ml. Do 2,36 ml z 4,4 mg/ml IFN-P-la ze SP-Sepharosového eluátového poolu byl do 50 mM přidán 0,5 M fosforečnan sodný pH 6,0, pak kyanoborohydrid sodný (Aldrich) do 5 mM a 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehyd do 10 mg/ml. Vzorek byl inkubován při pokojové teplotě po dobu 21 hodin za nepřístupu světla. PEGylovaný IFN-P-la byl čištěn z reakční směsi na 8,0 ml sloupci SP-Sepharose FF následujícím způsobem: 9,44 ml reakční směsi bylo zředěno 37,7 ml 20 mM MES pH 5,0 a naneseno na sloupec SP-Sepharose. Sloupec byl promýván fosforečnanem sodným pH 5,5, 75 mM NaCl a pak PEGylovaný IFN-P-la byl eluován ze sloupce 25 mM MES pH 6,4, 400 mM NaCl. PEGylovaný IFN-p-la byl dále purifikován na Superose 6 HR 10/30 FPLC třídícím sloupci 5 mM fosforečnanu sodného pH 5,5, 150 mM NaCl jako mobilní fází. Třídící sloupec (25 ml) se nechal protékat rychlostí 24 ml/h a byly spojovány 0,25 ml frakce, které se následně analyzovaly na obsah proteinu technikou SDS-PAGE, spojily a stanovila se koncentrace proteinu ve spojených frakcích. Koncentrace PEGylovaného IFN-β-la byla vyjádřena v IFN ekvivalentech po upravení příspěvku PEG k absorbanci při 280 nm s extinkčním koeficientem 2 na 1 mg/ml roztoku PEGylovaného IFN-β-la. Vzorky z poolu byly odebrány na analýzu a zbytek byl naředěn na 30 μ§/ιη1 formulačním pufrem obsahujícím HSA, s alikvótním podílem 0,25 ml/vialka, a skladován při teplotě -70°C. 142 ···· · · 2. UV spektrum puriflko váného 20 kDa mPEC-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-p-la. UV spektrum (240-340 nm) 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-P-la bylo získáno použitím předem připraveného HSA hůlkového vzorku. PEGylovaný vzorek vykazoval maximální absorbanci při 278-279 nm a minimální absorbanci při 249-250 nm, což je v souladu s hodnotami pozorovanými pro nemodifikovaný ΙΡΝ-β-la bulkový meziprodukt. Koncentrace proteinu PEGylovaného produktu byla stanovena ze spektra s extinkčním koeficientem S28o°’1% = 2,0. Koncentrace proteinu PEGylovaného bulk byla 0,42 mg/ml. Ve vzorku nebyla pozorována žádná turbidita, což je evidentní z nulové absorbance při 320 nm. 3. Charakterizace 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2- methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-β-Ιa technikou SDS-PAGE. 2,1 pg 20 kDa mPEG-0-/w-methylfenyl-0-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-P-la bylo podrobeno SDS-PAGE za redukčních podmínek na 4-20% gradientovém gelu, který byl značen Coomassie brilliant blue R-250. Analýza 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného ÍFN-p-la technikou SDS-PAGE ukázala jediný hlavní pás se skutečnou hmotností 55 kDa , což odpovídá modifikaci jediným PEG. V purifikovaném PEGylovaném produktu byl detekován nemodifikovaný IFN-p-la, nicméně jeho množství se pohybovalo pod hranicí stanovení. Bylo odhadnuto, že hladina nemodifikovaného IFN-P-la v preparátu se pohybuje pouze kolem 1% z celkového množství proteinu. 4. Charakterizace 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2- methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-P-la chromatografií s dělením podle rozdílné mol. hmotnosti (SEC). 20 kDa mPEG-O-w-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikované IFN-p-la byl podroben SEC na analytickém třídícím sloupci Superose 6 HR10/30 FPLC s PBS pH 7,0 jako mobilní fází. Sloupec se nechal 143 • · ·· · • · · • ···· • · t · · · • · • · · • · · • · · • · • · • · • « protékat mobilní fázi s rychlostí 24 ml/h a eluent byl monitorován na absorbanci při 280 nm. PEGylovaný IFN-p-la byl eluován jako jediný ostrý pík bez nalezení jakýchkoliv agregátů (Obrázek 3). 5. Analýza 20 kDa mPEG-0->w-methylfenyl-0-2-methylpropionaldehydem modifikovaného ΙΕΝ-β-la technikou spočívající v analýze peptidu.
Specificita PEGylační reakce byla vyhodnocena na základě analýzy peptidu. 13,3 pg nemodifikovaného 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného ΙΕΝ-β-la bylo štěpeno 20 hmotn.% endoproteinázy Lys-C z Achromobacter (Wako Bioproducts) v PBS obsahujícím 5 mM DTT, 1 mM EDTA, při pH 7,6, při pokojové teplotě po dobu 30 hodin (finální objem =100 μΐ). 4 μΐ 1 M DTT a 100 μΐ 8 M močoviny pak bylo přidáno a vzorky byly inkubovány po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě. Peptidy byly odděleny na HPLC s reverzní fází na sloupci Vydac Cjg (214TP51) za 70 minutového gradientu z 0-63% acetonitrilu v 0,1% TFA, poté 10 minutovým gradientem z 63-80% acetonitrilu v 0,1% TFA. Eluent byl monitorován na absorbanci při 214 nm. Všechny z předem určených peptidů z endoproteinázy Lys-C štěpící IFN-β-la byly předem identifikovány N-koncovou sekvenční analýzou a hmotnostní spektrometrií (Pepinsky et al. (2001) J. Pharmacology and Experimental Therapeutics 297: 1059), a z nich pouze peptid obsahující N-konec z ΙΡΝ-β-la byl změněn modifikací 20 kDa mPEG-O-ffí-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem, což je zřejmé z jeho vymizení z peptidové mapy. Data z analýzy tudíž ukazují, že PEG část je specificky připojena k tomuto peptidu. Data dále ukazují, že PEG modifikace byla zaměřena na N-konec proteinu, poněvadž pouze N-koncová modifikace by mohla vést ke specifické ztrátě tohoto peptidu. C) Příprava a charakterizace 20 kDa mPEG-O-jo-fenylacetaldehydem modifikovaného ΙΡΝ-β-la
Lidský ΙΡΝ-β-la byl PEGylován na N-konci 20 kDa mPEG-O-p-fenylacetaldehydem. Produkt reduktivní alkylace používaný k inkorporaci PEG na ΙΡΝ-β-la řetězec vedl ke tvorbě aminové vazby, která je extrémně stabilní vůči degradaci. PEGylovaná ΙΡΝ-β-la byla podrobena rozsáhlé charakterizaci, zahrnující analýzy technikou SDS-PAGE, SEC, peptidovou analýzu a stanovení aktivity při in vitro antivirovém testu. Čistota produktu podle techniky SDS-PAGE a SEC byla větší než 95%. V PEGylovaném IFN-P-la vzorku nebyly zjištěny žádné agregáty. Reziduální hladiny nemodifikovaného IFN-p-la v produktu se pohybovaly pod hranicí stanovení, ale představovaly asi 1 % z produktu. Při testu stability nebyla pozorována žádná agregace nebo degradace 20 kDa mPEG-O-p-fenylacetaldehydem modifikovaného IFN-P-la v Tris-pufru pH 7,4 po inkubaci při teplotě 37°C po dobu až 7 dnů. Specifická aktivita PEGylovaného IFN-P-la při testu antivirové aktivity byla snížena přibližně dvojnásobně v porovnání s nemodifikovaným IFN-p-la (EC50 = 31 pg/ml pro 20 kDa mPEG-O-/?-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-p-la proti EC50 = 14 pg/ml pro nemodifikovaný IFN-P-la). PEGylovaný hůlkový IFN-P-la byl připraven v 30 g/ml v PBS pH 7,3 obsahujícím 14 mg/ml HSA, podobně jako formulace používané pro AVONEX®, která byla podrobena rozsáhlé charakterizaci. Materiál byl dodáván ve formě zmrazené tekutiny, která byla skladována při teplotě -70°C.
Vlastnosti 20 kDa mPEG-O-p-fenylacetaldehydem modifikovaného IFN-P-la jsou shrnuty v tabulce 3:
Tabulka 3
Vlastnosti 20 kDa mPEG-0-/>-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-p-la Účinnost PEGylace > 80% IFN-P-la/PEG poměr 1: Čistota > 95% Místo připojení N-konec Antivirová aktivita EC50 31 pg/ml 1. Příprava 20 kDa mPEG-0-/?-fenylacetaldehydem modifikovaného IFN-P-la. 20 ml neformulovaného AVONEX® (IFN-p-la bulkový meziprodukt, klinická šarže hůlkového léčiva, která prošla všemi testy pro použití na lidech v 250 pg/ml v 100 mM fosforečnanu sodného pH 7,2, 200 mM NaCl) byla zředěna 24 ml ze 165 mM MES pH 5,0, 100 μΐ 5 N HC1 a 24 ml. Vzorek byl nanesen na 600 μΐ sloupec SP-Sepharose FF (Pharmacia). Sloupec byl promýván 2 x 900 μΐ z 5 mM fosforečnanu sodného pH 5,5, 75 mM NaCl a protein vyeluoval s 5 mM fosforečnanu sodného ph 5,5, 600 mM NaCl. Vyeluované frakce byly analyzovány na absorbanci při 280 nm a byla stanovena koncentrace IFN-P-la ve vzorcích s extinkčním koeficientem 1,51 na 1 mg/ml roztoku. Frakce s pikem byly spojeny, čímž se získala koncentrace IFN-p-la 2,3 mg/ml. Do 1,2 ml IFN-p-la ze SP-Sepharosového eluátového poolu se do 50 mM přidá 0,5 M fosforečnan sodný pH 6,0, pak byl přidán kyanoborohydrid sodný (Aldrich) do 5 mM a 20 kDa mPEG-O-/?-fenylacetaldehydu do 10 mg/ml. Vzorek byl inkubován při pokojové teplotě po dobu 18 hodin za nepřístupu světla. PEGylovaný IFN-p-la byl čištěn z reakční směsi na 0,75 ml SP-Sepharose FF sloupci následujícím způsobem: 1,5 ml reakční směsi bylo zředěno 7,5 ml z 20 mM MES pH 5,0, 7,5 ml vody a 5 μΐ 5 N HC1 a naneseno na sloupec SP-Sepharose. Sloupec byl promýván fosforečnanem sodným pH 5,5, 75 mM NaCl, pak PEGylovaný IFN-P-la byl vyeluován ze sloupce 20 mM MES pH 6,0, 600 mM NaCl. PEGylovaný IFN-p-la byl dále puriflkován na Superose 6 HR 10/30 FPLC třídícím sloupci s 5 mM fosforečnanu sodného pH 5,5, 150 mM NaCl jako mobilní fází. Třídící sloupec (25 ml) se nechal protékat mobilní fázi s rychlostí 20 ml/h a bylo odebráno 0,5 ml frakce. Vyeluované frakce byly analyzovány na obsah proteinu absorbanci při 280 nm, spojeny a byla stanovena koncentrace spojených frakcí s proteinem. Koncentrace PEGylovaného IFN-p-la byla uvedena v IFN ekvivalentech po započtení příspěvku PEG (20 kDa mPEG-O-p-fenylacetaldehyd má extinkční koeficient při 280 nm 0,5 pro 1 mg/ml roztoku) k absorbanci při 280 nm s extinkčním koeficientem 2 pro 1 mg/ml roztoku PEGylovaného IFN-P-la. Vzorky ze spojených frakcí byly odebrány na analýzu a zbytek byl naředěn na 30 pg/ml formulačním pufrem obsahujícím HSA, alikvótní podíl při 0,25 ml/vialka, a skladován při teplotě -70°C. 2. UV spektrum purifikovaného 20 kDa mPEG-0-/?-fenylacetaldehydem modifikovaného IFN-P-la. UV spektrum (240-340 nm) 20 kDa mPEG-0-/>-fenylacetaldehydem modifikovaného IFN-p-la bylo získáno použitím pre-HSA hůlkového vzorku. 146 • · • · Φ·Φ· φ · φφφ φ • φ • φ φ • φ ♦ · • φ φφφφ • * · φφ · PEGylovaný vzorek vykazoval maximální absorbanci při 278-279 nm a minimální absorbanci při 249-250 nm, což je v souladu s hodnotami pozorovanými pro nemodifikovaný IFN-p-la bulkový meziprodukt. Koncentrace proteinu PEGylovaného produktu byla stanovena ze spektra s extinkčním koeficientem S28o°’1% = 2,0. Koncentrace proteinu PEGylovaného bulk byla 0,10 mg/ml. Ve vzorku nebyla pozorována žádná turbidita, což je evidentní z nulové absorbance při 320 nm. 3. Charakterizace 20 kDa mPEG-O-jo-fenylacetaldehydem modifikovaného IFN-p-la technikou SDS-PAGE. 2,5 μg 20 kDa mPEG-0-/?-fenylacetaldehydem modifikovaného IFN-p-la bylo podrobeno SDS-PAGE za redukčních podmínek na 10-20% gradientovém gelu, který byl značen Coomassie brilliant blue R-250 a je uveden na obrázku 4 (Sloupec A: 20 kDa mPEG-O-p-fenylacetaldehydem modifikovaného IFN-p-la; sloupec B: nemodifikovaný IFN-p-la; sloupec C: markéry molekulových hmotností (odshora až dolů; 100 kDa, 68 kDa, 45 kDa, 27 kDa a 18 kDa)). SDS-PAGE analýza 20 kDa mPEG-0-/?-fenylacetaldehydem modifikovaného IFN-P-la odhalila jediný hlavní pás se skutečnou hmotností 55 kDa, což je v souladu s modifikací jediným PEG. Nebyly detekovány žádné vyšší formy vyplývající z přítomnosti dalších PEG skupin. V purifikovaném PEGylovaném produktu byl detekován IFN-p-la, nicméně množství bylo nižší než je hranice stanovení. Hladina nemodifikovaného IFN-P-la v preparátu byla stanovena pouze jako 1% z celkového proteinu. 4. Charakterizace 20 kDa mPEG-O-ju-fenylacetaldehydem modifikovaného IFN-P-la chromatografií s dělením podle rozdílné mol. hmotnosti (SEC). 20 kDa mPEG-O-p-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-P-la byl podroben SEC na analytickém třídícím sloupci Superose 6 HR10/30 FPLC s PBS pH 7,2 jako mobilní fází. Sloupec se nechal protékat mobilní fázi s rychlostí 20 ml/h a eluent byl monitorován na absorbanci při 280 nm, jak je uvedeno na obrázku 5: sloupec A: standardy molekulových hmotností (670 kDa, thyroglobulin; 158 kDa, gamma globulin; 44 kDa, ovalbumin; 17 kDa, myoglobin; 147 147
·· ♦ • ♦ · • · f · • · ···· ♦ · · ·· ♦ • · 1,3 kDa, vitamin B 12); sloupec B: 20 kDa mPEG-O-p-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-p-la. PEGylované IFN-p-la byl vyeluován jako jediný ostrý pík se skutečnou molekulovou hmotnostní přibližně 200 kDa, což je v souladu s velkým hydrodynamickým objemem PEG. Nebyla pozorována žádná agregace. V preparátu byl detekován nemodifikovaný IFN-P-la, ale jeho hladina se pohybovala pod hranicí stanovení. Na základě velikosti píku se hladina nemodifikovaného IFN-p-la pohybovala kolem 1% nebo méně z produktu, což je v souladu s pozorováním technikou SDS-PAGE. 5. Analýza mPEG-O-p-fenylacetaldehydem modifikovaného IFN-p-la technikou spočívající v analýze peptidu.
Specifická PEGylační reakce byla vyhodnocena na základě analýzy peptidu. Nemodifikovaný a 20 kDa mPEG-O-p-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-p-la byl štěpen endoproteinázou Lys-C z Achromobacter (Wako Bioproducts) a výsledné produkty štěpení byly frakcionovány HPLC s reverzní fází na sloupci Vydac C4 za 30 minutového gradientu z 0-70% acetonitrilu v 0,1% TFA. Eluent byl monitorován na absorbanci při 214 nm. Všechny z předem určených peptidů z endoproteinázy Lys-C štěpené IFN-p-la byly předem identifikovány N-koncovou sekvenční analýzou a hmotnostní spektrometrií (Pepinsky et al. (2001) J. Pharmacology and Experimental Therapeutics 297: 1059), a z nich pouze peptid obsahující N-konec z IFN-P-la byl změněn modifikací 20 kDa mPEG-O-^-fenylacetaldehydem, což je zřejmé z jeho vymizení z peptidové mapy. Data z analýzy tudíž ukazují, že PEG část je specificky připojena k tomuto peptidu. Data dále ukazují, že PEG modifikace byla zaměřena na N-konec proteinu, poněvadž pouze N-koncová modifikace by mohla vést ke specifické ztrátě tohoto peptidu. 6. Stabilita 20 kDa mPEG-O-p-fenylacetaldehydem modifikovaného IFN-P-la. K testu stability 20 kDa mPEG-O-p-fenylacetaldehydem modifikovaného IFN-P-la byly vzorky naředěny na 0,1 pg/ml s 100 mM Tris-HCl pufru, pH 7,4 a následně inkubovány při teplotě 37°C po dobu až 7 dnů. 20 μΐ vzorku (2 pg) bylo odebráno ve dnech 0, 2, 5 a 7 a analyzováno SDS-PAGE za redukčních podmínek, 148 148 ·· · • · ·· · ··· * · • · · • ···· • · ··· · jak je vidět z obrázku 6: sloupec A: markéry molekulových hmotností (odshora až dolů; 100 kDa, 68 kDa, 45 kDa, 27 kDa, 18 kDa a 15 kDa); sloupce B, C, D a E: mPEG-0-/?-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-p-la odebraný ve dnech 0, 2, 5, resp. 7. I po 7 dnech při teplotě 37°C nebyla pozorována žádná agregace nebo degradace PEGylovaného ΙΕΝ-β-la. Příklad 3
Specifická aktivita PEGylovaného lidského IFN-p-la při in vitro antivirovém testu.
Specifická antivirová aktivita PEGylovaných IFN-p-la vzorků byla testována na lidských buňkách karcinomu plic (A549 buňky), které byly vystaveny viru encefalomyokarditidy (EMC), a pomocí metabolického barviva 2,3-bis[2-methoxy-4-nitro-5-sulfo-fenyl]-2//-tetrazolium-5-karboxyanilidu (MTT; M-5655, Sigma, St. Louis, MO) pro měření metabolicky aktivních buněk zbývajících po expozici viru. A549 buňky se předem (před expozicí viru) vystavily buď nemodifikovanému nebo PEGylovanému IFN-p-la (vycházeje z 66,7 pg/ml a sériového 1,5-násobného zředění na 0,8 pg/ml) po dobu 24 hodin. Buňky se pak vystavily po dobu 2 dnů viru EMC ve zředění, které vedlo ke kompletnímu zabití všech buněk v nepřítomnosti IFN. Destičky pak byly vyvinuty s MTT. Zásobní roztok MTT byl připraven v 5 mg/ml v PBS filtrovaného za sterilní podmínek a 50 μΐ tohoto roztoku bylo naředěno do buněčných kultur (100 μΐ na jamku). Po inkubaci při pokojové teplotě po dobu 30-60 minut byl roztok MTT/média odstraněn a buňky byly promývány 100 μΐ PBS, nakonec bylo metabolizované barvivo solubilizováno 100 μΐ 1,2 N HC1 v isopropanolu. Živé buňky (detekované přítomností barviva) byly kvantifikovány absorbancí při 450 mn. Data byla analyzována vynesením absorbance vůči koncentraci IFN-p-la a aktivita IFN-P-la byla definována jako koncentrace, při které se 50 % buněk usmrtí, tzn. 50% cytopatický účinek (EC50) nebo 50% maximum OD450. Test byl prováděn osmkrát pro nemodifikovaný IFN-P-la a třikrát až čtyřikrát s různými PEGylovánými IFN-β-la vzorky. U každého testu byl získán duplicitní soubor dat pro každou z koncentrací proteinu. Reprezentativní grafy životnosti buněk vůči koncentraci nemodifikovaného nebo PEGylovaného IFN-P-la jsou uvedeny na obrázcích 7 A a 7B. Na obrázku 7A jsou uvedeny následující symboly: nemodifikovaný IFN-p-la (O), 20 kDa PEG-O-2-methyIpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la (□), 20 kDa mPEG-0-/>-methylfenyl-0-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-β-la (Δ) a 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la (O). Na obrázku 7B jsou uvedeny následující symboly: nemodifikovaný IFN-P-la (O), 20 kDa mPFG-O-p-fenylacetaldehydem modifikovaný ΙΕΝ-β-la (□), 20 kDa mPEG-0-/?-fenylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la (Δ) a 20 kDa mPEG-O-m-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-P-la (O).
Hodnoty EC50 (koncentrace, při které dojde k 50% inhibici viru) pro IFN-β-la modifikovaný 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem, 20 kDa mPEG-O-/>-methylfenyl-0-2-methylpropionaldehydem, 20 kDa mPEG-O-nz-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem, 20 kDa mPEG-0-/>-fenylacetaldehydem, 20 kDa mPEG-O-p-fenylpropionaldehydem a 20 kDa mPEG-O-w-fenylacetaldehydem jsou uvedeny v tabulce 4. Všechny PEGylované IFN-P-la byly modifikovány a purifikovány na homogenní stav v podstatě způsobem popsaným pro 20 kDa PEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la, 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la a 20 kDa mPEG-O-p-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-p-la, jak je popsáno výše.
Tabulka 4
Specifická antivirová aktivita nemodifikovaného a PEGylovaného IFN-p-la
Protein Střední hodnota EC50 (pg/ml) nemodifikovaný IFN-p-la 14 (rozmezí 12-16) 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-p-la 32 (rozmezí 26-37) 20 kDa mPEG-O-p-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-p-la 41 (rozmezí 36-47) 150 ♦ · »« ♦* ·♦ · ♦ · ♦ • · « · · • ··# * • · • · · • ♦ · ♦ · · « ♦ ·· 20 kDa mPEG-0-#i-methylfenyl-0-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-p-la 31 (rozmezí 27-35) 20 kDa mPEG-0-j?-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-P-la 31 (rozmezí 25-39) 20 kDa mPEG-O-p-fenylpionaldehydem modifikovaný IFN-P-la 31 (rozmezí 27-34) 20 kDa mPEG-O-w-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-p-la 27 (rozmezí 25-29) Příklad 4
Farmakokinetiky intravenózně podávaných, nemodifikovaných a PEGylovaných IFN-P-la u krys
Kanylovaným samičím krysám kmene Lewis bylo intravenózně injektováno buď 80 pg/kg nemodifikovaného IFN-P-la nebo 24 pg/kg jednoho z následující PEGylovaných IFN-P-la; 20 kDa PEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la, 20 kDa mPEG-O-p-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-p-la, 20 kDa mPEG-O-/?-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-P-la, 20 kDa mPEG-O-p-fenylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la, 20 kDa mPEG-0-/w-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-p-la a 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la. Oba nemodifikované i PEGylované proteiny byly připraveny v přítomnosti 14-15 mg/ml HSA jako nosiče. U nemodifikovaného proteinu byla krev (0,2 ml) odebírána kanylou v různých časech, těsně před podáním a v 0,083, 0,25, 0,5, 1,25, 3, a 5 hodinách po podání. U PEGylovaných proteinů byla krev (0,2 ml) odebírána kanylou v různých časech, těsně před podáním a v 0,083, 0,25, 0,5, 1,25, 3,24, 48 a 72 hodinách po podání. Celá krev byla spojena do zkumavek k separaci séra (Beckton Dickinson No. 365956) a inkubována při pokojové teplotě po dobu 60 minut kvůli srážení. Sražená krev byla centrifugo vána po dobu 10 minut při teplotě 4°C, sérum bylo odstraněno a skladováno do doby testu při teplotě -70°C. 151 « · ·· · « · · 4 ···» • * ·«* ♦ • V ·· • · · * • · · · » « · ··· • · · ·· ·· ♦ · # ♦ ♦ ♦ w • · · • ···♦ • ·
Vzorky séra se poté rozmrazily a testovaly antivirovými testy. Vzorky séra byly naředěny 1:50 v médiu obsahujícím sérum (Dulbecco's Modified Eagles Medium obsahující 10 obj. % fetálního boviního séra, 100 U pro každý penicilinu a streptomycinu, 2 mM L-glutaminu) a testovány antivirovými testy. Vzorky byly titrovány do určených jamek tkáňové kultivační destičky s 96 jamkami obsahující lidské buňky karcinomu plic (A549, #CCL-185, ATCC, Rockville, MD). Zředění standardu (krysám byly podávány 66,7, 44,4, 29,6, 19,8, 13,2, 8,8, 5,9, 3,9, 2,6, 1,7, 1,2 a 0,8 pg/ml stejné formy IFN-p-la) a na každé destičce byly testovány tři vzorky séra. A549 buňky byly předem ošetřeny zředěnými vzorky séra po dobu 24 hodin před expozicí viru encefalomyelocarditidy (EMC). Po 2 dnech inkubace virem byly živé buňky značeny roztokem MTT (v 5 mg/ml fosfátového pufru) po dobu 1 hodiny, promývány fosfátovým pufrem a solubilizovány 1,2 N HC1 v isopropanolu. Buňky pak byly měřeny při 450 nm. Pro každou destičku byly vyneseny kalibrační křivky nemodifikovaného nebo PEGylovaného IFN-P-la a byly používány ke stanovení množství nemodifikovaného nebo PEGylovaného IFN-p-la v každém testovaném vzorku. Nekompartmentální analýzou se softwarem WinNonLin verze 3.0 nebo 3.3 pak byly vypočteny farmakokinetické parametry.
Na obrázku 8A je vynesena závislost koncentrace na čase pro nemodifikovaný IFN-P-la (horní panel) a IFN-P-la modifikovaného 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem (dolní panel) a na obrázku 8B je vynesena závislost koncentrace na čase pro IFN-P-la modifikovaného 20 kDa mPEG-O-/?-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem (horní panel) a 20 kDa mPEG-O-/?-fenylacetaldehydem (dolní řádek). Experimentální body jsou průměrnými hodnotami z měření na 3 krysách. V tabulce 5 jsou uvedeny farmakokinetické parametry Cmax (maximální pozorovaná koncentrace), ti/2 (poločas eliminace) AUC (plocha pod křivkou), Vss (distribuční objem ve stacionárním stádiu), clearance a MRT (střední doba zdržení) pro nemodifikovaný IFN-p-la a tyto formy PEGylovaného IFN-p-la. Data uvedená na obrázcích 8A a 8B a v tabulce 5 byla získána ve stejné studii.
Na obrázku 9A je vynesena závislost koncentrace na čase pro nemodifikovaný IFN-P-la (horní panel) a IFN-p-la modifikovaný 20 kDa mPEG-O-p-fenylpropionaldehydem (dolní panel). Experimentální body jsou průměrnými hodnotami z měření na 2 krysách. Na obrázku 9B je vynesena závislost koncentrace na čase pro IFN-P-la modifikovaný 20 kDa mPEG-O-m-fenylacetaldehydem (horní panel) a 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem (dolní panel). Experimentální body jsou průměrným hodnotami z měření na 3 krysách. V tabulce 6 jsou uvedeny farmakokinetické parametry pro nemodifikovaný IFN-P-la a tyto formy PEGylovaného IFN-P-la. Data uvedená na obrázcích 9A a 9B a v tabulce 6 byl získána při stejné studii, nezávisle na datech uvedených na obrázcích 8A a 8B a v tabulce 5.
Jak je zřejmé z dat uvedených na obrázcích 8A, 8B, 9A a 9B a v tabulce 5 a 6 zlepšuje PEGylace IFN-P-la PEG molekulami podle předloženého vynálezu farmakokinetické vlastnosti IFN-p-la. Ve všech případech byly PEGylované proteiny odbourávány mnohem pomaleji než nemodifikované IFN-P-la, což vedlo ke clearance v rozmezí 3,9-8,3 ml/h/kg v porovnání s 160-170 ml/h/kg pro nemodifikovaný protein. V důsledku snížených rychlostí clearance se střední doba zdržení (MRT) zvýšila z přibližně 1 hodiny pro nemodifikovaný protein na 4,8-7,6 h pro PEGylované proteiny. Podobně poločas eliminace (ti/2) se zvýšil z přibližně 1 hodiny pro nemodifikovaný protein na 5,2-13 hodin pro PEGylované proteiny. Hodnoty plochy pod křivkou (AUC) byly také signifikantně vyšší po PEGylaci IFN-P-la. Pro nemodifikovaný IFN-p-la byla AUC přibližně 0,5 pg*h/ml, zatímco pro PEGylované proteiny se hodnoty AUC pohybovaly přibližně v rozmezí od 3 do 6 pg*h/ml, i přes fakt, že PEGylované proteiny byly podávány v hladinách 3,3 násobně nižších než nemodifikovaný protein. Pro maximální pozorovanou koncentraci (Cmax) byly hodnoty obecně vyšší pro nemodifikovaný IFN-p-la než pro PEGylované proteiny, což odráží nižší podávané dávky modifikovaných proteinů. U distribučního objemu ve stacionárním stavu byly hodnoty všech PEGylovaných proteinů nižší než pro nemodifikované IFN-p-la, což ukazuje na omezení jejich schopnosti opouštět centrální krevní kompartment.
Tabulka 5: farmakokinetické parametry pro nemodifikovaný IFN-P-la, 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la, 20 kDa mPEG-O-p-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la a 20 kDa 153 153 ···· · ♦ ·♦ ·· • · · ♦ ♦♦· • · • · · • ···· ♦ · • · mPEG-0-/?-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-P-la po intravenózním podání u krys3
Parametr Jednot ky Nemodifikovaný IFN-p-la 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehy-dem modifikovaný IFN-P-la 20 kDa mPEG-O-p-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehy-dem modifikovaný IFN-p-la 20 kDa mPEG-O-/?-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-p-la r '-'max pg/ml 1400000 720000 710000 590000 tl/2 h 0,98 13 11 6,8 AUC pg»h/ml 510000 4800000 4500000 2900000 Vss ml/kg 160 39 40 53 Clearance ml/h/kg 160 5,0 5,3 8,3 MRT h 0,98 7,6 7,4 6,4
Uvedená farmakokinetická data pro nemodifikovaný a PEGylované IFN-β-la byla získána při stejné studii
Tabulka 6: Farmakokinetické parametry pro nemodifikovaný IFN-P-la, 20 kDa mPEG-0-/?-fenylpropionaldehydem modifikovaný IFN-p-la, 20 kDa mPEG-O-m-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-p-la a 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-P-la po intravenózním podání krysám3.
Parametr Jednotky Nemodifi kovaný IFN-P-la 20 kDa mPEG-O-/?-fenylpropionaldehy-dem modifikovaný IFN-p-la 20 kDa mPEG-O-m-fenylacetaldehydem modifikovaný IFN-P-la 20 kDa mPEG-O-m-methylfenyl-O-2-methylpropionalde-hydem modifikovaný IFN-P-la c '-'max pg/ml 670000 930000 550000 700000 tl/2 h 0,92 5,2 7,7 7,1 AUC pg»h/ml 470000 4700000 3800000 6200000 Vss ml/kg 140 25 46 21 Clearance ml/h/kg 170 5,1 6,4 3,9 MRT h 0,81 4,8 7,2 5,5
Uvedená farmakokinetická data pro nemodifikované a PEGylované IFN-p-la byla získána při stejné studii 154 • · · · · · · • · · · · · · • ·· · · * * · • · ··· · · · ···· • · · · · · ·· ·· ·· · Příklad 5
Komparativní farmakokinetiky a farmakodynamiky nemodifikovaného a PEGylovaného lidského ΙΕΝ-β-la v nehumáních primátech
Komparativní studie jednorázové dávky a opakované dávky byly provedeny s nemodifikovaným a PEGylovaným ΙΕΝ-β-la ke stanovení jejich relativní stability a aktivity v nehumáních primátech. V těchto studiích byly farmakokinetiky a farmakodynamiky PEGylovaných ΙΕΝ-β-la konjugátů porovnávány s nemodifikovaným ΙΕΝ-β-la a rozumné interference mohou být přeneseny na lidi.
Zvířata a metody
Studie 1 (opakovaná dávka)
Jde o paralelní skupinu, studii opakované dávky k vyhodnocení komparativních farmakokinetik a farmakodynamik nemodifikovaného PEGylovaného ΙΕΝ-β-la. V této studii byly používáni zdraví primáti (např. makak rhesus). Před dávkováním byla všechna zvířata dvakrát prozkoumána z hlediska příznaků špatného zdravotního stavu veterinářem v rozmezí 14 dnů před podáním předmětu testování. Jedno vyhodnocení musí být provedeno v rozmezí 24 hodin před podáním prvního předmětu testování. Pouze zdravá zvířata obdržela předmět testování. Vyhodnocení zahrnují obecný fyzikální test a odběry krve před aplikací dávek ke stanovení základní klinické patologie a základní hladiny protilátky vůči ΙΕΝ-β-la. Podání bylo prováděno buď subkutánním (SC) nebo intravenózním (IV) způsobem. Všechna zvířata byla zvážena a tělesná teplota byla zaznamenávána v rozmezí 24 hodin před podáními předmětů testování. Bylo používáno dvanáct subjektů rozdělených do skupin po třech. Tyto skupiny obdržely 1 x 106 U/kg nemodifikovaného nebo PEGylovaného ΙΕΝ-β-la, ale jinak stejného ΙΕΝ-β-la. Podání bylo prováděno buď subkutánním (SC) nebo intravenózním (IV) způsobem. Šest samců obdrželo předmět testování IV způsobem (3 na ošetření) a dalších 6 samců obdrželo předmět testování SC způsobem (3 na ošetření). Všechna zvířata musí být naivní vůči ošetření IFN-β. Každému zvířeti byla podána dávka
• · • · · · • · · · · • ·· · · ··· • · · ····· · ··· · • · · · · · • · · · ·· * 155 dvakrát s mezerou čtyři týdny. Objem dávky činil 1,0 ml/kg. Krev byla odebírána pro farmakokinetické testy v 0, 0,083, 0,25, 0,5, 1,1,5, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 48, 72 a v 96 hodinách po každé injekci. Vzorky krve pro měření markéru IFN-indukované biologické odpovědi, sérového neopterinu, byly odebírány v 0, 24, 48, 72, 96, 168, 336 a v 504 hodině po podání studovaného léku. Vyhodnocení během studie zahrnovala klinická pozorování prováděná 30 minut a 1 hodinu po dávce prováděna za účelem sledování znaků toxicity. Prováděna byla denní pozorování z boku klece a celkový vzhled, znaky toxicity, nevolnost a změny v chování byly zaznamenávány. Tělesné hmotnosti a teploty byly rovněž zaznamenávány v pravidelných intervalech během 21 dnů po dávkování.
Studie 2 (jednorázová dávka)
Jde o paralelní skupinu, studii jednorázové dávky k vyhodnocení komparativních farmakokinetik a farmakodynamik nemodifikovaného PEGylovaného IFN-p-la. V této studii byly používáni zdraví primáti (např. makak rhesus). Před dávkováním byla všechna zvířata dvakrát prozkoumána z hlediska příznaků špatného zdravotního stavu veterinářem v rozmezí 14 dnů před podáním předmětu testování. Jedno vyhodnocení musí být provedeno v rozmezí 24 hodin před podáním prvního předmětu testování. Pouze zdravá zvířata obdržela předmět testování. Vyhodnocení zahrnují obecný fyzikální test a odběry krve před aplikací dávek pro stanovení základní klinické patologie a základní hladiny protilátky vůči IFN-P-la. Všechna zvířata byla zvážena a tělesné teploty zaznamenávány v průběhu 24 hodin před podáváním testovaných látek. Bylo používáno dvacet subjektů, kteří byly rozděleny do jedné z pěti skupin po čtyřech zvířatech (2 samčí a 2 samičí na skupinu). Subjektům bylo podáno buď 1 x 106 U/kg nemodifikovaného nebo PEGylovaného IFN-P-la intramuskulárně (IM) nebo 2 x 105 U/kg, 1 x 106 U/kg nebo 5 x 106 U/kg PEGylovaného IFN-p-la intravenózně (IV). Všechna zvířata musí být naivní vůči ošetření IFN-β. Objem dávky činil obecně 1,0 ml/kg. Krev byla odebírána na farmakokinetické testy v 0, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 36, 48 a v 96 hodinách a v 7, 14, 21 a v 28 dnech po podání studovaného léku. Vzorky krve k měření markéru IFN-indukované biologické odpovědi, 2'-5'-oligoadenylát syntázy (2'-5'-OAS), byly odebírány v 0, 12, 24, 48, • ···# ♦ · • · · · • · · · • ·«· · · • ···· 72 a v 96 hodinách a v 7, 14, 21 a v 28 dnech po podání studovaného léku. Vyhodnocení během studie zahrnovala klinická pozorování prováděná 30 minut a 1 hodinu po dávce prováděné za účelem sledování znaků toxicity. Prováděna byla denní pozorování z boku klece a celkový vzhled, znaky toxicity, nevolnost a změny v chování byly zaznamenávány. Tělesné hmotnosti a teploty byly rovněž zaznamenávány v pravidelných intervalech během 28 dnů po dávkování.
Metody stanovení
Hladiny IFN-β v séru byly kvantifikovány biologickým testem stanovujícím cytopatický účinek (CPE). CPE test měří hladiny IFN-zprostředkované antivirové aktivity. Hladina antivirové aktivity ve vzorku odráží počet molekul aktivního IFN obsaženého v každém vzorku v čase odebráním krve. Tento přístup byl standardním způsobem vyhodnocení farmakokinetik IFN-β. CPE test detekuje schopnost IFN-β chránit lidské plicní buňky karcinomu (A549, #CCL-185, ATCC, Rockville, MD) před cytotoxicitou v důsledku napadení virem encefalomyocarditidy (EMC). Buňky byly předem inkubovány po dobu 15-20 hodin se vzorky séra k usnadnění indukce a syntézy IFN-indukovatelných proteinů, které jsou odpovědné za antivirovou odpověď. EMC virus pak byl přidán a inkubován po dalších 30 hodin před vyhodnocením cytotoxicity značením krystalovou violetí. Na každé z testovaných destiček byl používán vnitřní standard IFN-β i PEGylovaný IFN-β. Tyto standardy byly kalibrovány proti referenčnímu stadnardu přirozeného lidského fibroblastu IFN (WHO Second International Standard for Interferon, Human Fibroblast, Gb-23-902-53). Každá z testovaných destiček také zahrnovala kontrolní jamky buněčného růstu obsahující buď IFN-β jakéhokoliv druhu nebo EMC a kontrolní jamky pro vir obsahující buňky a EMC, ale ne IFN-β. Kontrolní destičky obsahující standard a vzorky byly také připraveny ke stanovení účinku, pokud nějaký byl, vzorků na buněčný růst. Tyto destičky byly značeny bez přidání viru. Vzorky a standardy byly testovány dvakrát na každé ze dvou replikačních testovacích destiček, čímž se získaly čtyři údaje o vzorku. Následně byl spočten geometrický průměr koncentrace ze čtyř opakování. Hranice detekce v tomto testu činila 10 U/ml. Sérové koncentrace neopterinu byly určeny v klinické farmakologické jednotce komerčně dostupnými testy. Sérové 1 • · * · ·· · · * · · • · · · · · · • ······ * · · · » · · · · ··· · ·· »· • * • · • · · • * · · · • · 157 koncentrace 2'-5'-OAS byly stanoveny ve smluvní laboratoři validovaným, komerčně dostupným testem.
Farmakokinetické a statistické metody
Rstrip™ software (MicroMath, lne., Salt Lake City, UT) byl používán ke zpracování dat na farmakokinetické modely. Pro každou skupinu byly vyneseny geometrické průměry koncentrací v závislosti na čase. Poněvadž výsledky testů byly vyjádřeny v roztocích, jsou geometrické průměry považovány za vhodnější vyjádření než aritmetické průměry. Sérové hladiny IFN byly upraveny na základní hodnoty a nedetekovatelné sérové koncentrace byly nastaveny na 5 U/ml, což reprezentuje jednu polovinu nižšího limitu detekce. Pro IV infúzní data byly vyneseny dva kompartmentální IV infúzní modely proti detekovatelným sérovým koncentracím u každého subjektu a SC data byla vynesena proti dvěma kompartmentálním injekčním modelům.
Byly spočteny následující farmakokinetické parametry: (i) pozorovaná maximální koncentrace v séru, Cmax (U/ml) (ii) plocha pod křivkou od 0 do 48 hodin, AUC (U x h/ml) lichoběžníkovým pravidlem (iii) poločas eliminace (h); a z IV infúzních dat (pokud bylo používáno IV); (iv) distribuční poločas (h); (v) clearance (ml/h/kg) (vi) skutečný distribuční objem, Vd (ml/kg).
VinNonlin (Version 1.0, Scientific Consulting lne., Apex, NC) software byl používán k vypočtení poločasů eliminace po IV a SC injekci. U každé skupiny byly pro neopterin a 2'-5'-OAS vypočteny aritmetické průměry. Rovněž byla vypočtena Emax maximální změna vůči základní hodnotě. Cmax, AUC a Emax byly podrobeny jednoduché analýze rozptylu v porovnání se skupinami, kterým byly podávány dávky. Cmax a AUC byly logaritmicky převedeny před analýzou. Uvedeny byly rovněž geometrické průměry. 158 • · ·· · ♦ · • ··· • · · · • ··#·♦ • ♦ · ♦ · · Příklad 6
Antiangiogenní účinky PEGylovaného lidského IFN-P-la; schopnost PEGylovaného IFN-P-la inhibovat endoteliální buněčnou proliferaci in vitro
Lidské venózní endoteliální buňky (Cell Systems, Cat.# 2V0-P75) a lidské dermální mikrovaskulární endoteliální buňky (Cell Systems, Cat.# 2M1-C25) byly uchovávány v kultuře s CS-C Medium Kit (Cell Systems, Cat.# 4Z0-5O0). 24 Hodin před experimentem byly buňky trypsinizovány a resuspendovány v testovacím médiu, 90% Ml99 a 10% fetálním bovinním séru (FBS) a upravovány na požadovanou buněčnou hustotu. Buňky pak byly umístněny do želatinou potažených 24 nebo 96 jamkových destiček, buď 12500 buněk na jamku nebo 2000 buněk na jamku. Po inkubaci přes noc bylo testovací médium nahrazeno čerstvým médiem obsahujícím 20 ng/ml lidského rekombinantního bazálního fibroblastového růstového faktoru (bFGF) (Becton Dickinson, Cat.# 40060) a byly přidávány různé koncentrace nemodifikovaného nebo PEGylovaného IFN-P-la podle předloženého vynálezu nebo pozitivní kontroly (endostatin může být používán jako pozitivní kontrola, protilátka proti bFGF). Finální objem byl upraven na 0,5 ml ve 24 jamkové destičce nebo 0,2 ml v 96 jamkové destičce. Po 72 hodinách byly buňky trypsinizovány na Coulter counting, zmrazený pro CyQuant fluorescenční měření nebo značeny [3H]-thymidinem. Tyto in vitro testy prověřují PEGylované lidské IFN-P-la molekuly podle předloženého vynálezu z hlediska účinků na endoteliální buněčnou proliferaci, která může ukazovat na antiangiogenní účinky in vivo. Viz 0'Reilly, et al., Cell 88: 277-285 (1997). Příklad 7
In vivo modely k testování antiangiogenních a neovaskularizačních účinků PEGylovaného lidského IFN-p-la a PEGylovaných hlodavčích IFN-P
Byl testován nemodifikovaný IFN-P-la a 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaný IFN-p-la z hlediska schopností inhibovat tvorbu radiálně orientovaných cévek otevírající periferní SK-MEL-1 lidské maligní melanomové nádory v athymických nahých homozygotních (nul nu) myší. SK-MEL-1 buňky byly kultivovány v kultuře na 80% konfluenci, poté bylo 2 x 106 159 159 • · « ·· « · • · · · « MM · · • · · » «· ·· · • · · ♦ · t • · · · · · · • ··· · · « ···· • · · · · buněk inokulováno intradermálně (0,1 ml v den 0) do boku ve střední axilární linii tři týdny starých athymických nahých homozygótních (nu/nu) NCR myší (Taconic, Germantown, NY). O 24 hodin později (den 1) obdržely skupiny o třech myších následující subkutánní dávky kontrolního nosiče, nemodifikovaného IFN-P-la nebo 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-P-la:
Skupina A: 0,1 ml z 45,6 mg/ml lidského sérum albuminu (kontrolní nosič) pouze jednou v den 1
Skupina B: 0,1 ml z 45,6 mg/ml lidského sérum albuminu obsahujícího 1 MU (5 pg) nemodifikovaného IFN-P-la denně ve dnech 1-9 včetně
Skupina C: 0,1 ml z 45,6 mg/ml lidského sérum albuminu obsahujícího 1 MU jednotky (10 pg) z 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-p-la pouze jednou v den 1
Skupina D: 0,1 ml z 45,6 mg/ml lidského sérum albuminu (kontrolní nosič) denně ve dnech 1-9 včetně
Myši byly usmrceny desátý den (Avertin, 0,5 ml intraperitoneálně), místo inokulace nádoru bylo vyhodnoceno z hlediska neovaskularizace, změřeno podle ošetřované skupiny. Cévy byly vyhodnoceny za fixovaného zvětšení pod disekujícím mikroskopem. Každá z radiálně orientovaných cév otevírající periferní nádor byla označena jako samostatná céva. Každá skupina se sestávala ze tří myší.
Jak je uvedeno z obrázku 10, jednorázové podání 1 MU 20 kDa PEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-p-la (skupina C) bylo účinné při snižovaní počtu neocévek při denním podávání 1 MU nemodifikovaného IFN-p-la (skupina B). Nicméně účinek 20 kDa mPEG-O-2-methylpropionaldehydem modifikovaného IFN-p-la je mnohem výraznější při zvážení faktu, že denní podání samotného nosiče mělo určitý inhibiční účinek (srovnej skupinu A, nosič podávaný jednou, se skupinou D, nosič podávaný denně).
Byly vyvinuty také různé další modely, které mohou být používány k testování antiangiogenních a antineovaskularizačních účinků PEGylovaných % « • · ·· ·· « • « 9 9 9 • ♦ • ···· • · · • · • · • ·· · ·· ·» ♦ ♦ · · * · «·· · · · ···» • · · · ·· ·♦ t • · 160 molekul podle předloženého vynálezu. Některé z těchto modelů byly popsány v patentech US č. 5 733 876 (31.březen 1998: "Method of inhibiting angiogenesis") a 5 135 919 (4.srpen 1992: "Method and a pharmaceutical composition for inhibition angiogensis"). Další testy zahrnují test s chorioallantoickou membránou (CAM) bez ochranné vrstvy podle Taylora a Folkmana; Nátuře 297: 307 (1982) a Crum et al, Science 230: 1375 (1985); model antiangiogeneze myšího dorsálního vzduchového vaku podle Folkmana et al.\ J. Exp. Med. 133:275 (1971) a krysí korneální mikrováčkový test podle Gimbrona, Jr, et al., J. Nati. Cancer Inst. 52: 413 (1974), ve kterém korneální vaskularizace je indukována u dospělých samčích krys kmene Sprague-Dawley (Charls River, Japan) implantací 500 ng bFGF (bovine, R & D Systems, lne,) impregnovaných v kopolymerních destičkách na bázi ethylenvinylacetátu v každé z rohovek. Navíc existuje model, ve kterém je indukována angiogeneze v NIH-Swiss nebo athymický nahých (nuinu) myších po implantaci MCF-7 prsního karcinomu nebo NIH-OVCAR-3 ovariální buněk karcinomu, jak je popsáno v Lindner a Borden; Int. J. Cancer 71:456 (1997). Další buněčné linie nádoru zahrnující (ale není to nikterak limitováno) SK-MEL-1 lidské maligní buňky melanomu mohou být také používány k indukci angiogeneze, jak je popsáno výše. Mohou být testovány různé dávky nemodifikovaných i PEGylovaných IFN-β-1 a proteinů podle předloženého vynálezu s různými frekvencemi dávek a po různou dobu.
Další způsoby testování PEGylovaných myších a krysích IFN-β na antiangiogenní účinky ve zvířecím modelu zahrnují (ale není to nikterak limitováno) metody screeningu nových potenciálních kancerostatik, jak je popsáno v originálu Cancer Chemotherapy Reports, Part 3, Vol. 3, No. 2, September 1972 a supplement In Vivo Cancer Models, 1976-1982, NIH Publication No. 84-2635, February 1984. Kvůli specifitě interferonů typu I mezi species byly ke stanovení antiangiogenní aktivity PEGylovaných IFN-β v hlodavčích modelech připraveny PEGylované hlodavčí IFN-β preparáty (např. myší a krysí). Tyto metody screeningu jsou exemplifikovány postupem, který slouží k testování antiangiogenních účinků PEGylovaného myšího IFN-β na subkutánně implantovaném lewisově plicním karcinomu: Původ nádorové linie % % n I i ·· ·· ·» · ··· ···# · · · | » « · · · · · · · · • MM · · · ··· · · ····· • · t · ···· ··· · ·· ·· ·· · 161
Tato nádorová linie vznikla spontánně v roce 1951 jako karcinom plic v C57BL/6 myších.
Podstata metody testování Nádorový fragment byl implantován subkutánně do axilární oblasti B6D2F1 myši. Testovaná látka (tzn. PEGylovaný interferon podle předloženého vynálezu) byl podáván v různých dávkách, subkutánně nebo intraperitoneálně (IP) ve více dnech po implantaci nádoru. Měřený parametr je střední doba přežití. Výsledky byly vyjádřeny jako procento kontrolní doby přežití.
Zvířata Propagace: C57BL/6 myši Testování: B6D2F1 myši Hmotnost: Hmotnost myší se pohybovala s odchylkou 3 g, s minimální hmotností 18 g pro samce a 17 g pro samice Pohlaví: Při všech testech a u všech kontrolních zvířat v jednom experimentu bylo používáno jedno pohlaví Původ: Jeden původ, pokud možno, pro všechna zvířata v jednom Experimentu
Rozsah experimentu
Deset zvířat v jedné testované skupině
Transfer nádoru Propagace:
Fragment: Příprava 2-4 mm fragmentu z SC donorového nádoru.
Doba: Den 13-15 Místo: Implantace fragmentu SC v axilární oblasti probodnutím slabin.
Testování:
Fragment: Příprava 2-4 mm fragmentu z SC donorového nádoru.
Doba: Den 13-15 Místo: Implantace fragmentu SC v axilární oblasti probodnutím slabin.
Rozvrh testování ··· · · · · · · · · 4 » «·Μ · · · ··· · · · ···· • · · · · · · · ··· · ·· ·· ·· · 162
Den Ο implantace nádoru. Spuštění bakteriálních kultivací. Testování pozitivní kontrolní sloučeniny v každém lichém experimentu. Příprava materiálů. Denní záznamy úmrtí.
Den l:Kontrola kultivací. Zrušení experimentu při kontaminaci. Náhodný výběr zvířat. Ošetření podle instrukcí (v den 1 a v následujících dnech).
Den 2:Opětné zkontrolování kultivací. Zrušení experimentu při kontaminaci.
Den 5:Den 2 vážení a den vyhodnocování toxicity agens při iniciálním testu Den 14: Den kontroly časných úmrtí Den 48: Kontrolní den bez příjmu agens.
Den 60: Konec a vyhodnocování experimentu. Prozkoumání plic z hlediska nádoru.
Kontrola kvality
Rozvržení pozitivní kontrolní sloučeniny (NSC 26271; Cytoxan v dávce 100 mg/kg/injekce) na každý lichý experiment, což je režim, při kterém je dávka podávána intraperitoneálně pouze v den 1. Dolní testovací/kontrolní limit pro pozitivní kontrolu byl 140 %. Přijatelná střední doba přežití u neošetřované kontrolní skupiny byla 19-35,6 dnů.
Vyhodnocení Měřeným parametrem byla střední doba přežití. Spočítání středních tělesných hmotností zvířat v den 1 a den 5. Spočítání poměru testovací/kontrolní skupině pro všechny testované skupiny. Byly vypočteny střední tělesné hmotnosti zvířat pro vynášecí den a pro den, ve kterém se provádělo finální vyhodnocování.
Pro všechny testované skupiny byl vypočten poměr testovací/kontrolní skupině s > 65 % přeživších v den 5. Poměr testovací/kontrolní skupině < 86 % indikoval toxicitu. Pro stanovení toxicity může být také využíván neodpovídající rozdíl ve změně tělesné hmotnosti (testovací mínus kontrolní skupina).
Kritéria aktivity
Iniciální poměr testovací/kontrolní skupině větší nebo roven 140 % je považován za nezbytný k prokázání střední aktivity. Reprodukovatelný poměr testovací/kontrolní skupině větší nebo roven 150 % je považován za nezbytný k prokázání signifikantní aktivity. Příklad 8
In vivo modely k testování antiproliferativních a protinádorových účinků PEGylovaného lidského IFN-β-1 a a PEGylovaných hlodavcích IFN-β K testování antiproliferativních a protinádorových účinků nemodifikovaného a PEGylovaných lidských IFN-β-1 a podle předloženého vynálezu jsou dostupné různé in vivo modely. V modelu popsaném Bailonem et al., Bioconjugate Chemistry 12:195 (2001) byly athymickým nahým myším (Harlan) implantovány subkutánně 2 x 106 lidské renální A498, lidské renální ACHN nebo lidské renální G402 buňky pod zadní bok a 3-6 týdnů se nechaly nádory vyvíjet. V různých dávkách s různými frekvencemi a dobou pak byl nemodifikovaný nebo PEGylovaný lidský IFN-p-la podáván a objem nádoru byl v rámci ošetření měřen a srovnáván. V dalším modelu popsaném Lindnerem a Bordenem, J. Interferon Cytokine Res 17:681 (1997) bylo athymickým nahým (nulnu) ooforektomizovaným samičím BALB/c myším implantováno 2 x 106 MCF-7 (plus estradiol), MDA-MB-231, MDA-MB-468 nebo BT-20 lidských buněk karcinomu prsu, NIH-OVCAR-3 lidských buněk karcinomu ovaria, HT-29 lidských buněk karcinomu střeva nebo SK-MEL-1 nebo FEMX lidských maligních buněk melanomu do dermis překrývajících prsní žlázy nejblíže k podpaží a velikost nádorů byla vynesena jako funkce. V různých dávkách s různými frekvencemi a dobou pak byl nemodifikovaný nebo PEGylovaný lidský IFN-β-1 a podáván a v rámci ošetření byl objem nádoru měřen a srovnáván. Další modely pro testování antiproliferativních a protinádorových účinků PEGylovaného lidského IFN-β-Ι zahrnují (ale není to nikterak limitováno) lokální metastatické modely rakoviny plic popsané Qinem et al., Molecular Therapy 4:356 (2001) a modely jaterní metastáze lidské kolorektální rakoviny na xenoimplantátu nahých myší popsané Tada et al, J. Clinical Investigation 108:83 (2001).
Další metody testování PEGylovaných myších a krysích IFN-β na antiproliferativní a protinádorové účinky ve zvířecích modelech zahrnují (ale není to nikterak limitováno) myší model maligního mezoteliomu, které popsal Odaka et al., Cancer Res 61:6201 (2001), modely lokální a metastické rakoviny plic, které popsal Qin et al, Molecular Therapy 4:356 (2001) a syngenní myší modely 164 ·· ·· ♦ ♦ · • · ♦ · · · • · · · · · · Μ·Ι · « • Ml · · · ···< • ♦ ♦ ♦ ♦ ·· ·· ♦ ♦ * jaterních metastází kolorektální rakoviny, které popsal Tada et al., J. Clinical Investigation 108:83 (2001). Příklad 9
In vivo modely k testování antivirových účinků PEGylovaného myšího IFN-β a PEGylovaného lidského ΙΕΝ-β-la. K testování účinku nemodifikovaného a PEGylovaného myšího IFN-β na hladiny viru lidské hepatitidy (HBV) v HBV-transgenních SCID myších je dostupný in vivo myší model. Larkin et al, Nátuře Medicine 5:907 (1999). V tomto modelu mají transgenní SCID myši nesoucí dimeru lidského FÍBV genomu typu hlava-pata hladiny HBV replikativních forem a pregenomické RNA v játrech a HBV virus v séru. Hepatocyty z transgenních myší byly také pozitivní na HbsAg, HbcAg a HbxAg proteiny, což indikuje replikaci viru. Příklad postupu pro srovnání nemodifikovaného a PEGylovaného myšího IFN-β v tomto modelu je uveden níže: 30 myší (5 skupin po 5 plus 5 náhradních) se srovnatelnými virovými titry bylo titrováno ve dvou nezávislých časech (s rozestupem alespoň jeden týden) ke stanovení základního titru a k dosažení toho, aby jejich titry zůstávaly konstantní před podáním dávek myším IFN-β. Skupinám po 5 myších byly podány 3 x týdně (pondělí, středa, pátek) subkutánně následující vzorky, které jsou uvedeny v tabulce 7.
Tabulka 7
Skupina 1 2 3 4 5 6 7 Dávkování
Kontrolní nosič (1 mg/ml myšího sérum albuminu, MS A) 30 U nemodifikovaného myšího IFN-β v 1 mg/ml MSA 300 U nemodifikovaného myšího IFN-β v 1 mg/ml MSA 3000 U nemodifikovaného myšího IFN-β v 1 mg/ml MSA 30 U PEGylovaného myšího IFN-β v 1 mg/ml MSA 300 U PEGylovaného myšího IFN-β v 1 mg/ml MSA 3000 U PEGylovaného myšího IFN-β v 1 mg/ml MSA
Virové titry byly stanoveny týdně během dávkování a týdně až ob týden po dobu 6 měsíců po dávkování. Byly vyneseny virové titry v závislosti na čase pro srovnání zvířat ošetřených nosičem a IFN-β s ohledem na clearance a obnovení virového titru. Druhá studie pak byla provedena s vhodnými dávkami nemodifikovaného a PEGylovaného myšího IFN-β se skupinou 10-20 myší na skupinu pro celkem 30-60 myší (10-20 pro kontrolní skupinu, 10-20 pro nemodifikovaný myší IFN-β a 10-20 pro PEGylovaný myší IFN-β). Virové titry byly vyhodnoceny shora uvedeným způsobem a po usmrcení bylo sérum analyzováno virovým titrem, jakož i na HbsAg, technikou SDS-PAGE a Western blotting. Játra byla také odstraněna, zmrazená a fixována podle potřeby a značena kvůli detekci HbsAg, HbcAg a HbxAg. Na sérových a tkáňových vzorcích mohou být provedeny další vhodné histologické, histochemické nebo biochemické testy, které jsou odborníkům v oboru jistě známé. K testování účinku nemodifikovaného a PEGylovaného myšího IFN-β na hladiny viru lidské hepatitidy C (HCV) v myších majících chimérní lidská játra existuje také in vivo myší model. Mercer et al, Nátuře Medicine 7:927 (2001). V tomto modelu byly normální lidské hepatocyty roubovány do SCID myší nesoucích transgen aktivující plazminogen ("plasminogen activator transgene") (Alb-uPA) a myši byly inokulovány sérem z lidí infikovaných různými genotypy HCV. Naroubované lidské jaterní buňky byly infikovány virem a virovými replikáty. Hladiny HCV RNA v séru i hladiny pozitivní a negativní (replikátová forma) RNA v jaterních buňkách mohou být kvantifikovány technikou PCR. K vyhodnocení účinnosti nemodifikovaného a PEGylovaného lidského IFN-β-1 a v tomto modelu, tzn. ke stanovení účinku ošetření na HCV titr, histologii jater, hladiny sérové ALT a přítomnost HCV replikativních forem v naroubovaných lidské jaterní tkáni, byla použita vhodná studie, která je podobná (ale není to nikterak limitováno) shora popsanému postupu pro nemodifikovaný a PEGylovaný myší IFN-β v transgenních HBV SCID myších. Na sérových a tkáňových vzorcích mohou být provedeny další vhodné histologické, histochemické nebo biochemické testy, které jsou odborníkům v oboru jistě známé.

Claims (316)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY 1. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu mající strukturu podle obecného vzorce (I): (0¾¾-R p—X—(0¾¾—Q—0%—(CHjír -C (i) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, CO2, COS, SO, SO2, CONR', SO2NR' nebo NR'; Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, sulfamoylu, sulfonátu, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé R', Z a Z' je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, φφ ·· φφ φ • Φ ♦ • · · · · φ φ φ φ φ φ ·· · · φ φ φ • φφφφ φ φ φ ··· · · φ···· • φ ·· φφφφ φφφ φ φφ φφ φφ · 167 alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, sulfamoylu, sulfonátu, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (I) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem; m je 0 nebo 1; každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a p je 1,2 nebo 3.
  2. 2. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 1, kde R je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-iV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  3. 3 (XXV) kde X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR* nebo NR'; každé a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; R* a R** jsou nezávisle a spojovací část; B a B'jsou nezávisle a biologicky aktivní molekula; a index a je celé číslo od 4 do 10000; a každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
    ((3¾¾-(Y)m-Q-X CWjCWj- (III) kde každé Q, X, Y, Z, m a n má nezávisle shora definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
    3. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 1, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): (Π) kde E je atom vodíku nebo lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  4. 4. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 1, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): (II) E-(0-CH2CH2)a- kde E je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce 1 a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  5. 5. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 4, kde E je methyl.
  6. 6. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 4, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-A-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  7. 7. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 4, kde E má strukturu podle obecného vzorce (III):
  8. 8. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 4, kde E má strukturu podle obecného vzorce (IV):
    Z (IV) kde každé X, Z a n má nezávisle zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R"' je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  9. • · · · • « · · · »·· · · 9 ··· f
    • 9 9 · 9 99999 « · 9 «9 9 m je 0 nebo 1; d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
    9. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 7, kde R" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-JV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  10. 10. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 8, kde R'" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. 170 • · 170 • · • · ··· · · · · · · · · « ······ · «·· · # ····· « ♦ « « · · · · ··· · ·· ·· ·« ·
  11. 11. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 4, kde E je detekovatelná značka.
  12. 12. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 11, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z radioizotopů, fluorescenčních částí, fosforescenčních částí, chemiluminiscenčních částí a kvantových teček.
  13. 13. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 1, kde Q je substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl.
  14. 14. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu mající strukturu podle obecného vzorce (Ia): P-X-Q-COS-(CHj)|—CH-R ^ , (Ia) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, sulfamoylu, sulfonátu, silylu, etheru a alkylthioskupiny; • » ··«« M t ·· * ···· ·#· ··· · · · · · ··· φ Μ·· Φ · · «·· φ φ · ΦΦΦΦ • φ · · I I · · Ml I φ * φ φ ·· · 171 každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, sulfamoylu, sulfonátu, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (I) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem; m je 0 nebo 1; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  15. 15. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 14, kde R je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-A-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  16. 16. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 14, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): (Π) 172 172 • · ·· *· Μ · ·· · * · * · · ♦ · ··· · ·· · I · * # • ·«··«· · ····· ····· • » · · · · · · »· · I ·· ·· ·· * kde E je atom vodíku nebo lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  17. 17. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 14, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): E-(O^H2CH,)a- (][) kde E je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce 1 a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  18. 18. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 17, kde E je methyl.
  19. 19. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 17, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-iV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  20. 20. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 17, kde E má strukturu podle obecného vzorce (III): (III) 173
    ♦ • · * ···· ♦ · • ·
    kde každé Q, X, Y, Z, m a n má nezávisle zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R"je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  21. 21. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 17, kde E má strukturu podle obecného vzorce (IV): R"’-“HC—(QI2)a—X—CW^CWi Z (IV) kde každé X, Z a n má nezávisle zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  22. 22. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 20, kde R" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  23. 23. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 17, kde R'" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného • 4 44 44 44 · <· 44 4 4444 444 4 4 4 4 · · · 4 4 4 4 4 4444 · 4 4 444 4 4 4 4444 4 4 44 4444 444 4 44 44 44 4 174 aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-Y-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  24. 24. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 17, kde E je detekovatelná značka.
  25. 25. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 24, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z radioizotopů, fluorescenčních částí, fosforescenčních částí, chemiluminiscenčních částí a kvantových teček.
  26. 26. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 14, kde Q je substituovaný nebo ne substituovaný alkaryl.
  27. 27. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu mající strukturu podle obecného vzorce (V):
    (CH2),t-CH-R Z (V) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, • » *· ·· Μ · « ·»······*· • · · · « * · · · · · • ···· · ♦ · ··· · · · ···· • · · · # · t · ··· · ·* »· Μ · 175 thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfínátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthi o skupiny; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Cj až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfínátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (V) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem; každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfínátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; m je 0 nebo 1; d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4; a 176 ♦ ··
    • · • · · » n je O nebo celé číslo od 1 do 5.
  28. 28. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 27, kde R je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-iV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  29. 29. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 27, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): E-(0-CH2CH2)a- (n) kde E je atom vodíku nebo lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  30. 30. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 29, kde E je methyl.
  31. 31. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 27, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): B
    (II) kde E je Část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (V) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000. • · ·» ·· ·· · * ·······#·· • · · ··«· · · · · * t ·«»« I I » ··· ι · ····· • · · · · · » · ··· · #· ·| Μ · 177
  32. 32. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 31, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-A-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  33. 33. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 31, kde E má strukturu podle obecného vzorce (III): R"-HC—(CH2)s-(Y)m-Q-x—CW2CW2 Z , (III) kde Q je C3 až Os nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; X, Y, Z, m a n mají zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  34. 34. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 31, kde E má strukturu podle obecného vzorce (IV): r"—ec—(CH2fe—cw2cw2· (IV) kde X, Z a n mají zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Cj až C7 alkyl; a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  35. 35. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 33, kde R" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-jV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  36. 36. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 34, kde R"' je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-iV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu. • · ·· ·· ·♦ · v ♦ ········* • · · · · · · · « · · V · MM t · · ··· · · · ···· • · # · · · · · ··· · ·· ** ·· · 179
  37. 37. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 31, kde E je detekovatelná značka.
  38. 38. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 37, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z radioizotopů, fluorescenčních částí, fosforescenčních částí, chemiluminiscenčních částí a kvantových teček.
  39. 39. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 27, kde X a Y, pokud jsou přítomny, jsou kyslík.
  40. 40. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu mající strukturu podle obecného vzorce (VI): Z
    kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR* nebo NR’; Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, 180 • t • ··*· · ♦ t « I ««« · • · · · · • · · · · • t «** · · I » · · • f ♦· ·· · • t • · · • ···» • · ·· « thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosflnátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; m je 0 nebo 1; d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  41. 41. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 40 mající strukturu podle obecného vzorce (VII): Z
    H (VII) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; Z je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  42. 42. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 41, mající strukturu podle obecného vzorce (VIII):
    O Η , (VIII) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu a n je celé číslo od 1 do 5. • * ·· ·· ·· « ·« · ♦ · · · ··· • · · t · · · · · · » • IMI · · * ··· « « | «til • ♦ · « · · * ♦ ··« I ·· »1 | 181
  43. 43. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 42, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): E^CH2CH2)r (n) kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina, detekovatelná značka nebo část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (VIII) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  44. 44. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 42, kde substituenty kruhu jsou v poloze meta nebo para.
  45. 45. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 40, mající strukturu podle obecného vzorce (IX):
    kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; každé n a u jsou nezávisle nula nebo celé číslo od jedné do pěti; a Z je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina.
  46. 46. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 45, kde substituenty kruhu jsou v poloze meta nebo para.
  47. 47. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 45, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): 182 • ·♦ ·· • ·· • • · • · • • * * · • · • · • • · • ···· • · · • t • • • · # • ♦ • • ·· ·· ·· E-(D-CH2CH2)a- (π) kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina, detekovatelná značka nebo část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IX) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  48. 48. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu mající strukturu podle obecného vzorce (X): P—X~ -(CH2)n- -R (X) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; R' je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Cj až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; Z a Z' jsou individuálně atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo ne substituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny za předpokladu, že alespoň jedno Z nebo Z' není atom vodíku; R je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (X) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem; každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a p je 1,2 nebo 3.
  49. 49. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 48, kde R je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-iV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  50. 50. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 48, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): E-{0-CH2CH2)a~ kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina nebo detekovatelná značka; a index a je celé číslo od 4 do 10000. • · • · Μ · · · ·» · ···· ··« # « · · # · · ···· • ······ · · · · · · · ···· • « · ♦ ···· ··· · ♦♦ ·· ·· · 184
  51. 51. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 50, kde E je methyl.
  52. 52. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 48, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): E-(0-CH2CHjV (ii) kde E je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (X) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  53. 53. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 52, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-iV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  54. 54. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 52, kde E má strukturu podle obecného vzorce (III): Rn'-HC—(CH2)g-(Y)— Q-X— CW2CW2— I Z , (III) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR’, S02NR’ nebo NR’; 185 ·· ·· ·
    Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfmátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R' a každé Z mají nezávisle shora popsaný význam; m je 0 nebo 1; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  55. 55. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 52, kde E má strukturu podle obecného vzorce (IV):
    Z (IV) kde každé X, Z a n má nezávisle zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Cj až C7 alkyl; a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  56. 56. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 54, kde R" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, 186 • · alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-A-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  57. 57. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 55, kde R"' je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-A-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  58. 58. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 50, kde E je detekovatelná značka.
  59. 59. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 57, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z radioizotopů, fluorescenčních částí, fosforescenčních částí, chemiluminiscenčních částí a kvantových teček.
  60. 60. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu mající strukturu podle obecného vzorce (Xa): p-X-(CHA-CH—R (Xa) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; R' je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfmátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; Z je lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (X) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  61. 61. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 60, kde R je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-A-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  62. 62. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 60, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): EKO-CHaCH^- (II) kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina nebo detekovatelná značka; a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  63. 63. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 62, kde E je methyl.
  64. 64. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 60, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): E-(O-0H2CH2)a-5 (n) kde E je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (X) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  65. 65. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 64, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, 189 • ♦ · · • · · · · • · · ** ·· ·· · • · · • · * · ♦ · *··· • * · ·· · hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  66. 66. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 64, kde E má strukturu podle obecného vzorce (III): R--HC—(CH*-CO»--§-x CW2CW2· Z (III) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; Q je C3 až Os nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R' a každé Z mají nezávisle shora popsaný význam; mje 0 nebo 1; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  67. 67. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 64, kde E má strukturu podle obecného vzorce (IV): 190 • ♦
    ♦ ·· · · • · ♦ ·
    • ·»·· • t R--HC— «ΜΛ-X-CW2CW2- z (IV) kde každé X, Z a n má nezávisle zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  68. 68. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 66, kde R" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  69. 69. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 67, kde R'" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-iV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  70. 70. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 62, kde E je detekovatelná značka. 191
  71. 71. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 69, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z ,· * . n * , , v, ,, J jí radioizotopu, fluorescenčních časti, fosforescenčnieh částí, chemiluminiscenčnich 64sti a kvantových teček.
  72. 72. Aktivovaný polymer na bázi Polyalkylenglykolu podle nároku 60 mající strukturu podle obecného vzorce (XI):
    z -> (xi) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; a n a Z mají zde definovaný význam.
  73. 73. Aktivovaný polyalkylenglykol podle nároku 62 mající strukturu podle obecného vzorce (XII): O
    CH3 (OCH2€H2)aO-(°¾¾ 1 , (XII) kde n, a, a Z mají zde definovaný význam.
  74. 74. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 73, kde Z je methyl.
  75. 75. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 73, kde n je jedna.
  76. 76. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu mající strukturu podle obecného vzorce (XIII): 192 • · · • · · ··· # · ♦ · • t • · · • · # · · O CH3(OCH2CH2)aO
    H (XIII) kde a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  77. 77. Kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 1 a biologicky aktivní sloučeninu nebo její prekurzor.
  78. 78. Kompozice podle nároku 77, vyznačující se tím, že biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor je vybrána ze skupiny sestávající z peptidu, analogu peptidu, proteinu, enzymu, malé molekuly, barviva, lipidu, nukleosidu, oligonukleotidu, analogu oligonukleotidu, sacharidu, oligosacharidu, buňky, viru, lipozómu, mikročástice, povrchu a micely.
  79. 79. Kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 48 a biologicky aktivní sloučeninu nebo její prekurzor.
  80. 80. Kompozice podle nároku 79, vyznačující se tím, že biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor je vybrána ze skupiny sestávající z peptidu, analogu peptidu, proteinu, enzymu, malé molekuly, barviva, lipidu, nukleosidu, oligonukleotidu, analogu oligonukleotidu, sacharidu, oligosacharidu, buňky, viru, lipozómu, mikročástice, povrchu a micely.
  81. 81. Kompozice, mající strukturu podle obecného vzorce (XIV):
    (XIV) h • · • · ♦ · · • · · • ···· · • · Μ· ·
    t · ·· « ··♦ · ·· · • I · • · · · • · ··#* • t · • · · 193 kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, CO2, COS, SO, SO2, CONR', SO2NR' nebo NR'; Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé R', Z a Z' je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* je spojovací část; B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor; mje 0 nebo 1; každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a p je 1,2 nebo 3. 194 ě · *· f • · · • *··· • · • ·· · • · ·· • · · • · · • ♦·· »· · • · · • · · · • ·«··« • · * ·· ·
  82. 82. Kompozice podle nároku 81, kde R* je připraven reakcí části vybrané ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  83. 83. Kompozice podle nároku 81, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): E-(0*CH2CH2)a~ (π) kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina nebo detekovatelná značka; a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  84. 84. Kompozice podle nároku 83, kde E je methyl.
  85. 85. Kompozice podle nároku 81, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): e-(0-ch2ch2V5 (II) kde E je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (XIV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  86. 86. Kompozice podle nároku 85, kde E vytváří vazbu s další biologicky aktivní sloučeninou, B. « · 9« ♦* · i ·*«·····«· « · · · ·· · · · · · • ·»·· I t · ··· · · · ·#·· « · · « · · · · ·«· · ·· ·· ·· · 195
  87. 87. Kompozice podle nároku 85, kde E vytváří vazbu s biologicky aktivní sloučeninou, která je jiná než B.
  88. 88. Kompozice podle nároku 85, kde E vytváří další vazbu s biologicky aktivní sloučeninou, B.
  89. 89. Kompozice podle nároku 85, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  90. 90. Kompozice podle nároku 85, kde E má strukturu podle obecného vzorce (III): R--HC—CCHa)^-ÍY)m— Q—X— CWaPWj- Z , (III) kde každé Q, X, Y, Z, m a n má nezávisle zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  91. 91. Kompozice podle nároku 85, kde E má strukturu podle obecného vzorce R"-HC—(ΟΗΰΕ—X—CW2CW2* Z (IV) kde každé X, Z a n má nezávisle zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R"' je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  92. 92. Kompozice podle nároku 90, kde R" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  93. 93. Kompozice podle nároku 91, kde R"' je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  94. 94. Kompozice podle nároku 83, kde E je detekovatelná značka.
  95. 95. Kompozice podle nároku 94, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z radioizotopů, fluorescenčních částí, fosforescenčních částí, chemiluminiscenčních částí a kvantových teček.
  96. 96. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 81, kde Q je substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl. 197 • » *♦ · ů · · • ···* · • · ··· · ·· ·· • · · * ♦ · ♦ ♦ « · ··· · * * · ·· ·· ·· · « · · • * · ♦ • · ··*« • · ♦ *· ·
  97. 97. Kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XlVa): P-X-Q-(Y)ST~(CH2)s-CH—R*—B z , (XI Va) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, CO2, COS, SO, SO2, CONR', SO2NR' nebo NR'; Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; 198 9 Φ9
    • · * *·*· I « • · · ·<* · • · 9 t
  98. 98. Kompozice podle nároku 97, kde R* je připraven reakcí části vybrané ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-jV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  99. 99. Kompozice podle nároku 97, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): E-(0-CH2CH2)8-5 (II) kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina nebo detekovatelná značka; a index a je celé číslo od 4 do 10000.
    99 · • 9 9 9 9 9 ·*· · • t ·· · R* je spojovací část; B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor; m je 0 nebo 1; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  100. 100. Kompozice podle nároku 99, kde E je methyl.
  101. 101. Kompozice podle nároku 97, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): E-(0~CH2CH2V5 (ii) 199
    • · · · · • · · · · • ♦ ·♦· I · • · · · ·· ·* ·» · * · • · · • ·+·· • · kde E je část vhodná k tvorbě vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (XIV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  102. 102. Kompozice podle nároku 101, kde E vytváří vazbu s další biologicky aktivní sloučeninou, B.
  103. 103. Kompozice podle nároku 101, kde E vytváří vazbu s biologicky aktivní sloučeninou, která je jiná než B.
  104. 104. Kompozice podle nároku 101, kde E vytváří další vazbu s biologicky aktivní sloučeninou, B.
  105. 105. Kompozice podle nároku 101, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  106. 106. Kompozice podle nároku 101, kde E má strukturu podle obecného vzorce R"-HC—(CH2)h-ο%— q_x— CW2CW2- z (III) kde každé Q, X, Y, Z, m a n má nezávisle zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a (III) R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  107. 107. Kompozice podle nároku 101, kde E má strukturu podle obecného vzorce (IV): Rw-HC—(CH2fe—~x——-cW2CW2' * Z , (IV) kde každé X, Z a n má nezávisle zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  108. 108. Kompozice podle nároku 106, kde R" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  109. 109. Kompozice podle nároku 106, kde R'" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, 201 • * « · * · • · · · • · • · • · · ·
    • · • · azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  110. 110. Kompozice podle nároku 99, kde E je detekovatelná značka.
  111. 111. Kompozice podle nároku 110, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z radioizotopů, fluorescenčních částí, fosforescenčních částí, chemiluminiscenčních částí a kvantových teček.
  112. 112. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 97, kde Q je substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl.
  113. 113. Kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XV):
    C *)d P , (XV) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, CO2, COS, SO, SO2, CONR', S02NR' nebo Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, • # ·· · · · · · ·· * · I · · · · · ··· · ·· · · · * · • *··· ι · · ··· ♦ ♦ · ♦··· • · ·· · · * · • ·· « «· Μ ·* · 202 sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* je spojovací část; B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor; mje 0 nebo 1; d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5. • * « * • * « *
    • · · · · · · • ·· · · · · · e> · · ··· · » · · · · · * · * · * t # · · * # · * 203
  114. 114. Kompozice podle nároku 113, kde R* je připraven reakcí části vybrané ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  115. 115. Kompozice podle nároku 113, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): b-(o-ch2ch2v (ii) kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina nebo detekovatelná značka; a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  116. 116. Aktivovaný polymer na bázi polyalkylenglykolu podle nároku 115, kde E je methyl.
  117. 117. Kompozice podle nároku 113, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): Ε-(ο-αι2αι2),-_ (II) kde E je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (XV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  118. 118. Kompozice podle nároku 117, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, 204 * · ·· » methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  119. 119. Kompozice podle nároku 117, kde E má strukturu podle: R--HC—(CH2)s-(¾-q-χ—CW2CW2‘ (III) Z kde Q je C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé X, Y, Z, m a n má nezávisle zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  120. 120. Kompozice podle nároku 117, kde E má strukturu podle obecného vzorce (IV): 205 t « ** ·· ·· · ··# · · · * · « t « · · * · · * · · · · » MM · · · ♦·· « · · ·«·* • · · · · · » · ««» « #« »* ·· · R·--HQ—ÍCBate—X—CW^W2- Z (IV) kde X, Z a n mají zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  121. 121. Kompozice podle nároku 119, kde R" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  122. 122. Kompozice podle nároku 120, kde R"' je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  123. 123. Kompozice podle nároku 115, kde E je detekovatelná značka. 206 ·· » • · • · ·
  124. 124. Kompozice podle nároku 123, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z radioizotopů, fluorescenčních částí, fosforescenčních částí, chemiluminiscenčních částí a kvantových teček.
  125. 125. Kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XVI):
    (XVI) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR’, S02NR’ nebo NR'; Tj a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfmátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* je spojovací část; B je biologicky aktivní molekula, 207
  126. 126. Kompozice podle nároku 125, kde R* je methylenová skupina a B je biologicky aktivní molekula obsahující aminoskupinu, kde methylenová skupina vytváří vazbu s aminoskupinou na B.
  127. 127. Kompozice podle nároku 126, kde amin je vybrán ze skupiny sestávající z amino-konce peptidu, aminu aminokyselinového bočního řetězce peptidu a aminu glykosylačního susbstituentu glykosylovaného peptidu.
  128. 128. Kompozice podle nároku 127, kde aminem je amino-konec peptidu.
  129. 129. Kompozice podle nároku 128, kde peptidem je interferon.
  130. 130. Kompozice podle nároku 129, kde interferonem je interferon-beta.
  131. 131. Kompozice podle nároku 130, kde interferonem-beta je interferon-beta-1 a.
  132. 132. Kompozice podle nároku 125, mající strukturu podle obecného vzorce (XVII): Z
    (XVII) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; Z je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina; R* je spojovací část; 208 «· ♦ • · · · * ·
    • ·♦·# • * • » B je biologicky aktivní molekula; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  133. 133. Kompozice podle nároku 132, kde R* je methylen a B je biologicky aktivní molekula připojená přes amin.
  134. 134. Kompozice podle nároku 133, kde aminem je amino-konec peptidu.
  135. 135. Kompozice podle nároku 134, kde peptidem je interferon.
  136. 136. Kompozice podle nároku 135, kde peptidem je interferon-beta.
  137. 137. Kompozice podle nároku 136, kde interferonem-beta je interferon-beta-1 a.
  138. 138. Kompozice podle nároku 125, mající strukturu podle obecného vzorce (XVIII): P
    (XVIII) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; R* je spojovací část; B je biologicky aktivní molekula; a n je jedna nebo dvě.
  139. 139. Kompozice podle nároku 138, kde R* je methylen a B je biologicky aktivní molekula připojena přes amin.
  140. 140. Kompozice podle nároku 139, kde aminem je amino-konec peptidu.
  141. 141. Kompozice podle nároku 140, kde peptidem je interferon.
  142. 142. Kompozice podle nároku 141, kde interferonem-beta je interferon-beta-la.
  143. 143. Kompozice podle nároku 125, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): E-(0~CH2CH2)a- (II) kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina, detekovatelná značka nebo část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (XVI) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  144. 144. Kompozice podle nároku 143, kde E je methyl.
  145. 145. Kompozice podle nároku 125, mající strukturu podle obecného vzorce (XIX):
    O (CH2)tr CH—R*I λ Z B (XIX) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; každé n a u jsou nezávisle nula nebo celé číslo od jedné do pěti; Z je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina; R* je spojovací část; a B je biologicky aktivní molekula.
  146. 146. Kompozice podle nároku 145, kde R* je methylen a B je biologicky aktivní molekula připojena přes amin.
    •· ·· ·· I • · · ♦ · · · » »« I 9 9 9 9 99 9 99999 · · ♦ · · • · · » # I O * 99 9 9 9 210
  147. 147. Kompozice podle nároku 146, kde aminem je amino-konec peptidu.
  148. 148. Kompozice podle nároku 147, kde peptidem je interferon.
  149. 149. Kompozice podle nároku 148, kde interferonem-beta je interferon-beta-la.
  150. 150. Kompozice podle nároku 143, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-^V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  151. 151. Kompozice podle nároku 143, kde E má strukturu podle obecného vzorce (III): «--HC (CHjfe-0Q— Q—X— CW2CW2- Z , (III) kde Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, 211 • · ·♦ M · ♦ ♦ • ♦ « • • · • ···· ♦ · • • · • ♦ • • t· ♦ • · «· ♦ · · • ♦ · · « t t··· • · · ·· » heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé X, Y, Z, m a n má nezávisle zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  152. 152. Kompozice podle nároku 143, kde E má strukturu podle obecného vzorce (IV): R«-*HC—*(CH2)£-X-CY2CW2- Z , (IV) kde X, Z a n mají zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R"'je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  153. 153. Kompozice podle nároku 151, kde R" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-V-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  154. 154. Kompozice podle nároku 152, kde R'" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, 212
    ·· ♦♦ ♦ · * · · • ♦ · · · • · ··· · · ♦ · · ι *· ·* ·· · • · · • ···· • I hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-iV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  155. 155. Kompozice podle nároku 143, kde E je detekovatelná značka.
  156. 156. Kompozice podle nároku 155, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z radioizotopů, fluorescenčních částí, fosforescenčních částí, chemiluminiscenčních částí a kvantových teček.
  157. 157. Kompozice podle obecného vzorce (XX):
    B1—RiíCjH-{CH2V“(Y)ro~Q-X-CW2CW2(0-CH2CH2)a—X—Ti Z (XX) kde každé X a Y je nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, 213
    ·· «· • ♦ t · • ψ · · • ♦ ♦ «· · • « · ψ · · • ··· · • ·
    fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; Q je C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; R* a R** jsou nezávisle spojovací části; B a B' jsou nezávisle biologicky aktivní molekuly; mje 0 nebo 1; d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4; a index a je celé číslo od 4 do 10000; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  158. 158. Kompozice podle nároku 157, kde B a B' jsou stejné biologicky aktivní molekuly.
  159. 159. Kompozice podle nároku 157, kde B a B' jsou různé biologicky aktivní molekuly.
  160. 160. Kompozice podle obecného vzorce (XXI): 214 ·* « • · #··· I
    B--R-CH—{CT2)n~XK:W2CW2(0-CH2Cll2)—X--TÍ z £
    Tr“CYXr(CHa3í l^B X (XXI) kde X a Y jsou nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR’, S02NR’ nebo NR1; Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé R’ a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; R* a R** nezávisle spojovací část; B a B' jsou nezávisle a biologicky aktivní molekula, m je 0 nebo 1; d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4; a index a je celé číslo od 4 do 10000; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  161. 161. Kompozice podle nároku 160, kde B a B' jsou stejné biologicky aktivní molekuly.
  162. 162. Kompozice podle nároku 160, kde B a B' jsou různé biologicky aktivní molekuly.
  163. 163. Kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XXII): Z' P—X- B I c- z , (XXII) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR’, S02NR’ nebo NR'; R' je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé Z a Z1 je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu; aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny za předpokladu, že alespoň jedno Z nebo Z' není atom vodíku; R* je spojovací část; B je biologicky aktivní molekula; každé n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a p je 1,2 nebo 3.
  164. 164. Kompozice podle nároku 163, kde R* je připraven reakcí části vybrané ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-N-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  165. 165. Kompozice podle nároku 163, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): (II) B-(0-CH2CH2)fi- kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina nebo detekovatelná značka; a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  166. 166. Kompozice podle nároku 165, kde E je methyl.
  167. 167. Kompozice podle nároku 163, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): e-(0-ch2ch2v (ii) kde E je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (II) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  168. 168. Kompozice podle nároku 167, kde E se váže na biologicky aktivní sloučeninu nebo její prekurzor, který je jiný než B.
  169. 169. Kompozice podle nároku 167, kde vytváří E další vazbu s biologicky aktivní sloučeninou B.
  170. 170. Kompozice podle nároku 167, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-iV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  171. 171. Kompozice podle nároku 167, kde E má strukturu podle obecného vzorce (III) : R"—-HC'-((¾¾ OOrn Q X CW2CW2 Z , (III) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; 218 t * + é · • · • · · • ··· • · «·· · ♦ · · · I « · · · · ♦ » ♦ · ♦ · · • · · • · · · • ·»··· • · · ·· · každé X a Y je nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR’; Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R' a každé Z mají nezávisle shora popsaný význam; m je 0 nebo 1; každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5; R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem; a každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl.
  172. 172. Kompozice podle nároku 167, kde E má strukturu podle obecného vzorce (IV):
    Z (IV) kde každé X, Z a n má nezávisle zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  173. 173. Kompozice podle nároku 171, kde R" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, 219 219
    ·· · • ♦ · • ♦ · · • · »··· • · ·»· · · hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-JV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  174. 174. Kompozice podle nároku 172, kde R"' je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-N-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  175. 175. Kompozice podle nároku 165, kde E je detekovatelná značka.
  176. 176. Kompozice podle nároku 175, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z radioizotopů, fluorescenčních částí, fosforescenčních částí, chemiluminiscenčních částí a kvantových teček.
  177. 177. Kompozice podle nároku 163, kde R* je methylen a B je biologicky aktivní molekula připojená přes amin.
  178. 178. Kompozice podle nároku 177, kde aminem je amino-konec peptidu.
  179. 179. Kompozice podle nároku 178, kde peptidem je interferon.
  180. 180. Kompozice podle nároku 179, kde peptidem je interferon-beta.
  181. 181. 220 ·« II * • ·· • • • * • III· * « *·« • « • t é ·· ·· • · » • · · C Ml * « ·* • · • · · « MM
  182. • · 182. Kompozice podle nároku 180, kde interferonem-beta je interferon-beta-la. Kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XXIIa): P-X---CBh-R*-B (XXIIa) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR’ nebo NR'; R' je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; Z je lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená C] až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, 221
    • · · · • · ···· • · · ·« ♦ sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* je spojovací část; B je biologicky aktivní molekula, a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  183. 183. Kompozice podle nároku 182, kde R* je připraven reakcí části vybrané ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-jV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu s biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  184. 184. Kompozice podle nároku 182, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): E-(0-CH2CH2)a- (II) kde E je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená Ci až C20 alkylová skupina nebo detekovatelná značka; a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  185. 185. Kompozice podle nároku 184, kde E je methyl.
  186. 186. Kompozice podle nároku 182, kde P je polyethylenglykol mající strukturu obecného vzorce (II): E-fOCHjCHjV, (Ii) 222 • ♦ · · • * · · • · · · • · I ··# • · · • · ·* • * · · • · · ···· • · · Μ * kde Ε je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (II) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem a index a je celé číslo od 4 do 10000.
  187. 187. Kompozice podle nároku 186, kde E se váže na biologicky aktivní sloučeninu nebo její prekurzor, který je jiný než B.
  188. 188. Kompozice podle nároku 186, kde E vytváří další vazbu s biologicky aktivní sloučeninou B.
  189. 189. Kompozice podle nároku 186, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-N-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  190. 190. Kompozice podle nároku 186, kde E má strukturu podle obecného vzorce (III): R"-HC—(CH*-(¾-Q—X—CW2CW2- Z , (III) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; každé X a Y je nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; Q je C3 až Ce nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o 223
    «· ·· · » · · · · · ♦ · · ♦ · · · • ··· · ♦ · ···· • · ·« ·« · • · · · nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R' a každé Z mají nezávisle shora popsaný význam; mje 0 nebo 1; každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5; R" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (III) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem; a každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl.
  191. 191. Kompozice podle nároku 186, kde E má strukturu podle obecného vzorce (IV) R"-HC—(CH2)5-X-CW2CW2- Z (IV) kde každé X, Z a n má nezávisle zde definovaný význam; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a R'" je část vhodná pro tvorbu vazby mezi sloučeninou obecného vzorce (IV) a biologicky aktivní sloučeninou nebo jejím prekurzorem.
  192. 192. Kompozice podle nároku 190, kde R" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, •Ί • · · • · · • ···· · • t • · · i ·· ·· • · · · • · · · * · ··· • · · • t ·· ·· · 224 dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-TV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  193. 193. Kompozice podle nároku 191, kde R'" je vybrán ze skupiny sestávající z karboxylové kyseliny, esteru, aldehydu, hydrátu aldehydu, acetalu, hydroxyskupiny, chráněné hydroxyskupiny, karbonátu, alkenylu, akrylátu, methakrylátu, akrylamidu, substituovaného nebo nesubstituovaného thiolu, halogenu, substituovaného nebo nesubstituovaného aminu, chráněného aminu, hydrazidu, chráněného hydrazidu, sukcinimidylu, izokyanátu, izothiokyanátu, dithiopyridinu, vinylpyridinu, jodacetamidu, epoxidu, hydroxysukcinimidylu, azolu, maleimidu, sulfonu, allylu, vinylsulfonu, tresylu, sulfo-iV-sukcinimidylu, dionu, mesylu, tosylu a glyoxalu.
  194. 194. Kompozice podle nároku 184, kde E je detekovatelná značka.
  195. 195. Kompozice podle nároku 194, kde E je vybráno ze skupiny sestávající z radioizotopů, fluorescenčních částí, fosforescenčních částí, chemiluminiscenčních částí a kvantových teček.
  196. 196. Kompozice podle nároku 182, kde de R* je methylen a B je biologicky aktivní molekula připojena přes amin.
  197. 197. Kompozice podle nároku 196, kde aminem je amino-konec peptidu.
  198. 198. Kompozice podle nároku 197, kde peptidem je interferon.
  199. 199. Kompozice podle nároku 198, kde peptidem je interferon-beta.
  200. 200. Kompozice podle nároku 199, kde interferonem-beta je interferon-beta-1 a.
  201. 201. Kompozice podle nároku 182, kde má strukturu podle obecného vzorce (XXIII): 225 » · « • · · · • « · * • ····»· • · · Μ· 9 I ·· Μ · • ···#· · · · ♦ • · · · ♦ » ·· *· · (XXIII) CH3(OCH2CB2)P-(ΡΗ&—ρ ζ kde η, a, R* Β, a Z mají zde definovaný význam.
  202. 202. Kompozice podle nároku 201, kde Z je methyl a n je jedna.
  203. 203. Kompozice podle obecného vzorce (XXIV): Z
    B B-_R^CH-(CH2)r-(Y)m^Q-X-CW2CW-(0-CH2€H2)~X—(CH2)n Ž (XXIV) kde každé X a Y je nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina; Q je C3 až Ce nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; t • · t • · • · · • » # • · MM • · · • · * 226 R* a R** jsou nezávisle spojovací části; B a B' jsou nezávisle biologicky aktivní molekuly; mje 0 nebo 1; a index a je celé číslo od 4 do 10000; a každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  204. 204. Kompozice podle nároku 203, kde B a B1 jsou stejné biologicky aktivní molekuly.
  205. 205. Kompozice podle nároku 203, kde B a B1 jsou různé biologicky aktivní molekuly.
  206. 206. Kompozice podle obecného vzorce (XXV):
  207. 207. Kompozice podle nároku 206, kde B a B' jsou stejné biologicky aktivní molekuly.
  208. 208. Kompozice podle nároku 206, kde B a B' jsou různé biologicky aktivní molekuly. 227 227 φ I ···· ·· · ··· ···» · · · φ « · · · · * · · · · • ···· · · · Μ· · · · ···· • « «· · · · · «·· · ·· ·· ·· ·
  209. 209. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje kompozici podle nároku 77 a farmaceuticky přijatelný nosič.
  210. 210. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje kompozici podle nároku 79 a farmaceuticky přijatelný nosič.
  211. 211. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje kompozici podle nároku 81 a farmaceuticky přijatelný nosič.
  212. 212. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje kompozici podle nároku 113 a farmaceuticky přijatelný nosič.
  213. 213. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje kompozici podle nároku 125 a farmaceuticky přijatelný nosič.
  214. 214. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje kompozici podle nároku 132 a farmaceuticky přijatelný nosič.
  215. 215. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje kompozici podle nároku 157 a farmaceuticky přijatelný nosič.
  216. 216. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje kompozici podle nároku 160 a farmaceuticky přijatelný nosič.
  217. 217. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje kompozici podle nároku 163 a farmaceuticky přijatelný nosič.
  218. 218. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje kompozici podle nároku 201 a farmaceuticky přijatelný nosič.
  219. 219. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje kompozici podle nároku 203 a farmaceuticky přijatelný nosič. 228
  220. 220. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje kompozici podle nároku 206 a farmaceuticky přijatelný nosič.
  221. 221. Farmaceutický přípravek podle kteréhokoliv z nároků 209 až 220, vyznačující se tím, že dále obsahuje další biologicky aktivní látku.
  222. 222. Farmaceutický přípravek podle nároku 221, vyznačující se tím, že biologicky aktivní látka je vybrána ze skupiny sestávající z peptidu, analogu peptidu, proteinu, enzymu, malé molekuly, barviva, lipidu, nukleosidu, oligonukleotidu, analogu oligonukleotidu, sacharidu, oligosacharidu, buňky, viru, lipozómu, mikročástice, povrchu a micely.
  223. 223. Farmaceutický přípravek podle nároku 222, vyznačující se tím, že biologicky aktivní látka je antivirotikum.
  224. 224. Kompozice, kde obsahuje produkt z reakce sloučeniny podle nároku 1 a biologicky aktivní sloučeniny nebo jejího prekurzoru.
  225. 225. Kompozice podle nároku 222 mající strukturu podle obecného vzorce (XIV) p-X-Q-(Yfe— (CHj)^ CH—r*—-B Z (XIV) kde veškeré proměnné mají zde definovaný význam; a kde R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině nebo jejím prekurzoru; a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor.
  226. 226. Kompozice obsahující produkt z reakce sloučeniny podle nároku 27 a biologicky aktivní sloučeniny nebo jejího prekurzoru. 229
    • · · • · · • · · · • ·····
  227. 227. Kompozice podle nároku 226 mající strukturu podle obecného vzorce (XV): p-X-Ti
    Z (L)d (XV) kde veškeré proměnné mají zde definovaný význam; a kde R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině nebo jejím prekurzorem; a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor.
  228. 228. Kompozice podle nároku 226 mající strukturu podle obecného vzorce (XX): OWd Β’-R^CH—ÍCH2)ir(Y)m-Q-XCW2CW2-(0-CH2CH2)a-X-Tl z z
    (XX) kde veškeré proměnné mají zde definovaný význam; a kde každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině, B, nebo jejím prekurzoru; R** je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R" s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině, B', nebo jejím prekurzoru; a B a B'jsou nezávisle biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor.
  229. 229. Kompozice podle nároku 226 mající strukturu podle obecného vzorce (XXI): η T2— (YferíCH^
    β·—r—C|H—(ch2)~x—cw2CW2-{o-ce2CH2)a—χ—τί Z (XXI) kde veškeré proměnné mají zde definovaný význam; a kde každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině, B, nebo jejím prekurzoru; R** je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R'" s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině, B', nebo jejím prekurzoru; a BaB' jsou nezávisle biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor.
  230. 230. Kompozice obsahující produkt z reakce sloučeniny podle nároku 40 a biologicky aktivní sloučeniny nebo její prekurzoru.
  231. 231. Kompozice podle nároku 230 mající strukturu podle obecného vzorce (XVI):
    (XVI) kde veškeré proměnné mají zde definovaný význam; a kde R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině nebo jejím prekurzoru; a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor.
  232. 232. Kompozice obsahující produkt z reakce sloučeniny podle nároku 41 a biologicky aktivní sloučeniny nebo jejího prekurzoru. 231 «· • ···· · *
    • ♦ · • ·♦ • ♦ * ··♦· • ♦
  233. 233. Kompozice podle nároku 232 mající strukturu podle obecného vzorce (XVII): Z
    (XVII) kde veškeré proměnné mají zde definovaný význam; a kde R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině nebo jejím prekurzoru; a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor.
  234. 234. Kompozice obsahující produkt z reakce sloučeniny podle nároku 42 a biologicky aktivní sloučeniny nebo jejího prekurzoru.
  235. 235. Kompozice podle nároku 234 mající strukturu podle obecného vzorce (XVIII):
    (XVIII) kde veškeré proměnné mají zde definovaný význam; a kde R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině nebo jejím prekurzoru; a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor.
  236. 236. Kompozice obsahující produkt z reakce sloučeniny podle nároku 45 a biologicky aktivní sloučeniny nebo jejího prekurzoru. 232 φ φ ·· ·· ·♦ · φφ · · · · · · * · φ φ φ ♦ · · · · · · ♦ • φφφφ · · · ··· · · · ···· • φ · ♦ · · ♦ ♦ ·Φ· ♦ ·· ·· ·· ·
  237. 237. Kompozice podle nároku 236 mající strukturu podle obecného vzorce (XIX):
    O-(CH2)n—CH- -R* \ B (XIX) kde veškeré proměnné mají zde definovaný význam; a kde R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině nebo jejím prekurzoru; a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor.
  238. 238. Kompozice obsahující produkt z reakce sloučeniny podle nároku 48 a biologicky aktivní sloučeniny nebo jejího prekurzoru.
  239. 239. Kompozice podle nároku 238 mající strukturu podle obecného vzorce (XXII): P-x-(CIÍ2)ri-CH—R—B Z (XXII) kde veškeré proměnné mají zde definovaný význam; a kde R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině nebo jejím prekurzoru; a B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor.
  240. 240. Kompozice podle nároku 238 mající strukturu podle obecného vzorce (XXIV): 233 233 Μ ·· # · · ♦ • · ♦ · • é ··· • ♦ · ·♦ ·· -*· t • · · • ···· · • · ··« · ·· · • f ♦ • · · · • · · ·*« t • · I ♦ · ·
    B B-~R—CH—(CH2)n—(Y)m—Q—X~CW2CW2~(O^H2CH2)—X~TO)n Z (XXIV) kde veškeré proměnné mají zde definovaný význam; a kde každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině, B, nebo jejím prekurzoru; R** je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R" s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině, B', nebo jejím prekurzoru; a B a B' jsou nezávisle biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor.
  241. 241. Kompozice podle nároku 238 mající strukturu podle obecného vzorce (XXV):
    b._rH-CH— (CH^—X—CW2CW2·-(0-CH2CH2)a—X—* (XXV) kde veškeré proměnné mají zde definovaný význam; a kde každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; R* je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině, B, nebo jejím prekurzoru; R** je spojovací část vzniklá reakcí substituentu R'" s reaktivní částí na biologicky aktivní sloučenině, B', nebo jejím prekurzoru; a B a B' jsou nezávisle biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor.
  242. 242. Způsob ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XIV) pacientovi: 234 • Φ *« ·* ·♦ • ·· • • · • · • ♦ • * • « • · • · • ♦ • · • • · • • tt * • • Ml • · • • • • • * ··♦ * * 9 ·· « · • L·'' (Cfy—R*—b l p—χ (ΟΪ2>ή-Q—00α (^2)« kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, CO2, COS, SO, SO2, CONR', S02NR' nebo NR'; Q je C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé R’, Z a Z’ je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; 235 235 * « ·* • ·· • « • • · • • • • • · • · • · 9 • • · • Ml· • · • ··· • · • ···« • • • · • • • • ··· • ttf ·· ·» • R* je spojovací část; B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor; m je 0 nebo 1; každé n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a p je 1,2 nebo 3.
  243. 243. Způsob podle nároku 242, vyznačující se tím, že B je biologicky aktivní peptid.
  244. 244. Způsob podle nároku 243, vyznačující se tím, že B je interferon.
  245. 245. Způsob podle nároku 244, vyznačující se tím, že B je interferon-beta-la.
  246. 246. Způsob podle nároku 242, vyznačující se tím, že kompozice dále obsahuje biologicky látku vybranou ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu.
  247. 247. Způsob podle nároku 246, vyznačující se tím, že antivirotikum je vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX-497, VX-950 a ISIS-14803.
  248. 248. Způsob podle nároku 242, vyznačující se tím, že virová infekce je chronická hepatitida C.
  249. 249. Způsob ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XIVa) pacientovi: P-X-q-(Y)_(CH2)~CH—R*—B Z , (XIVa) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; 236 236 • · φφ φφ ·· φ ··· · · · « φ φ Φ ··· φφφφ φφφφ • ···· · · φ φφφ Φ # ΦφφφΦ • · Φ φ φφφφ • φφ · ΦΦ φφ φφ φ X a Υ jsou nezávisle Ο, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR; Q je C3 až Ce nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl (včetně kondenzovaných bicyklických a bicyklických kruhových struktur s můstky), substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Cj až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* je spojovací část; B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor; m je 0 nebo 1; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  250. 250. Způsob podle nároku 249, vyznačující se tím, že B je biologicky aktivní peptid. 237 237 • · ·· ·· • · · · • · · » • · ··· • · · • · · · ·· · • · · • · · · · · • · • Μ · • · · • # · · • · é ···· • · · ·· ·
  251. 251. Způsob podle nároku 250, vyznačující se tím, že B je interferon.
  252. 252. Způsob podle nároku 251, vyznačující se tím, že B je interferon-beta-la.
  253. 253. Způsob podle nároku 249, vyznačující se tím, že kompozice dále obsahuje biologicky látku vybranou ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu.
  254. 254. Způsob podle nároku 253, vyznačující se tím, že antivirotikum je vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX-497, VX-950 a ISIS-14803.
  255. 255. Způsob podle nároku 249, vyznačující se tím, že virová infekce je chronická hepatitida C.
  256. 256. Způsob ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XV) pacientovi:
    (CH2)r-CH-R*-B Z (XV) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, CO2, COS, SO, SO2, CONR', SO2NR nebo NR; Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo • · φ φ φ · φ · · · φ·φ φ φφφφ φ · φ ··· · ♦ ····· φ φ # φ φ · · ♦ φφφ φ ·· ·· ·· · 238 nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Cj až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* je spojovací část; B je biologicky aktivní sloučenina nebo její prekurzor; m je 0 nebo 1; d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  257. 257. Způsob podle nároku 256, vyznačující se tím, že B je biologicky aktivní peptid.
  258. 258. Způsob podle nároku 257, vyznačující se tím, že B je interferon.
  259. 259. Způsob podle nároku 258, vyznačující se tím, že B je interferon-beta-la.
  260. 260. Způsob podle nároku 256, vyznačující se tím, že kompozice dále obsahuje biologicky látku vybranou ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu.
  261. 261. Způsob podle nároku 260, vyznačující se tím, že antivirotikum je vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX-497, VX-950 a ISIS-14803.
  262. 262. Způsob podle nároku 256, vyznačující se tím, že virová infekce je chronická hepatitida C.
  263. 263. Způsob ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XVI):
    kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X a Y jsou nezávisle O, S, CO, CO2, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Cj až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* je spojovací část; B je biologicky aktivní molekula, m je 0 nebo 1; d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  264. 264. Způsob podle nároku 263, vyznačující se tím, že B je biologicky aktivní peptid.
  265. 265. Způsob podle nároku 264, vyznačující se tím, že B je interferon.
  266. 266. Způsob podle nároku 265, vyznačující se tím, že B je interferon-beta-la.
    241
  267. 267. Způsob podle nároku 263, vyznačující se tím, že kompozice dále obsahuje biologicky aktivní látku vybranou ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu.
  268. 268. Způsob podle nároku 267, vyznačující se tím, že antivirotikum je vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX-497, VX-950 a ISIS-14803.
  269. 269. Způsob podle nároku 263, vyznačující se tím, že virová infekce je chronická hepatitida C.
  270. 270. Způsob ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XX) pacientovi: B"—RrCH—(CHjjn (1%-Q~“X CW2CW2~((KSí2CH2)r-X“TÍ
    ZT2~O0irP2i B z (XX) kde každé X a Y je nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR’ nebo NR1; Ti a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cg nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená • 9 · ···· · · · · • ···· · · · ··· · · · ···· • « · · · · * · 9·· · ·· ·· ·· · 242 alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; Q je C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; r* a r** jsou nezávisle spojovací části; B a B' jsou nezávisle biologicky aktivní molekuly; m je 0 nebo 1; d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4; a index a je celé číslo od 4 do 10000; a n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  271. 271. Způsob podle nároku 270, vyznačující se tím, že B je biologicky aktivní peptid.
  272. 272. Způsob podle nároku 271, vyznačující se tím, že B je interferon.
  273. 273. Způsob podle nároku 272, vyznačující se tím, že B je interferon-beta-la. 243 • *
    ·**« ♦ t • · • · • · · • · · t · • · · Φ • · · · « • Μ · · I ···!
  274. 274. Způsob podle nároku 270, vyznačující se tím, že kompozice dále obsahuje biologicky aktivní látku vybranou ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu.
  275. 275. Způsob podle nároku 274, vyznačující se tím, že antivirotikum je vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX-497, VX-950 a ISIS-14803.
  276. 276. Způsob podle nároku 270, vyznačující se tím, že virová infekce je chronická hepatitida C.
  277. 277. Způsob ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XXI) pacientovi:
    B'~R—CH—(CH2)s—X—CW2CW2-(O.CH2CH2)a—X—Tt Z (XXI) kde každé X a Y je nezávisle O, S, CO, CO2, COS, SO, SO2, CONR', S02NR' nebo NR'; T] a T2 nezávisle chybí nebo jsou lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená C1 až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé R' a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; každé L je nezávisle lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo 244 • · ·· ··
    • · · · • ··· · · • · · ·· • · • · · • ##·· • · nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* a R** jsou nezávisle spojovací část; B aB'j sou nezávisle biologicky aktivní molekula, m je 0 nebo 1; d je 0 nebo celé číslo od 1 do 4; a index a je celé číslo od 4 do 10000; a každé n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  278. 278. Způsob podle nároku 277, vyznačující se tím, že B je biologicky aktivní peptid.
  279. 279. Způsob podle nároku 278, vyznačující se tím, že B je interferon.
  280. 280. Způsob podle nároku 279, vyznačující se tím, že B je interferon-beta-la.
  281. 281. Způsob podle nároku 277, vyznačující se tím, že kompozice dále obsahuje biologicky látku vybranou ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu.
  282. 282. Způsob podle nároku 281, vyznačující se tím, že antivirotikum je vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX-497, VX-950 a ISIS-14803.
  283. 283. Způsob podle nároku 277, vyznačující se tím, že virová infekce je chronická hepatitida C. 245 • ♦ ·· · • ··♦· • * ··· ♦ *· c · ♦ · • · « · • * ··· I · · ·« ·· ♦ · Ψ9 t • f t • ♦ · · • · · ···· • · · ·· ·
  284. 284. Způsob ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XXII) pacientovi: P—X- <CH2)ň V ! ‘C-\z -(CH2)n~R*-B (XXII) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR'; R' je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená C| až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfmátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; každé Z a Z' je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, mm ·# ·» ·· * «« « ···· Φ 9 9 Φ 9 9 Φ 9 9 Φ 9 9 Φ 9 9 9ΦΦΦ Φ Φ Φ ΦΦΦ Φ Φ Φ ΦΦΦ· 9 9 9 9 Φ 9 Φ Φ ΦΦΦ Φ 99 99 ΦΦ 9 246 sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny za předpokladu, že alespoň jedno Z nebo Z' není atom vodíku; R* je spojovací část; B je biologicky aktivní molekula, m je 0 nebo 1; každé n je 0 nebo celé číslo od 1 do 5; a p je 1, 2 nebo 3.
  285. 285. Způsob podle nároku 284, vyznačující se tím, že B je biologicky aktivní peptid.
  286. 286. Způsob podle nároku 285, vyznačující se tím, že B je interferon.
  287. 287. Způsob podle nároku 286, vyznačující se tím, že B je interferon-beta-1 a.
  288. 288. Způsob podle nároku 284, vyznačující se tím, že kompozice dále obsahuje biologicky aktivní látku vybranou ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu.
  289. 289. Způsob podle nároku 288, vyznačující se tím, že antivirotikum je vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX-497, VX-950 a ISIS-14803.
  290. 290. Způsob podle nároku 284, vyznačující se tím, že virová infekce je chronická hepatitida C.
  291. 291. Způsob ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, vyznačující se tím, že obsahuje podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XXIIa) pacientovi: ♦ · · • · • · ·· ·· · ···· · · · ··· · · · · · ··· • ···· · · · ··· · · · ···· • * ·· ·«·# ··· · ·· ·· ·· · 247 P-X-(0¾-Clř—R*-B Z , (XXIIa) kde P je polymer na bázi polyalkylenglykolu; X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR’, S02NR’ nebo NR’; R' je atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Cj až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyí, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; Z je lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Cj až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina, C3 až Cs nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyí, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C2o nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* je spojovací část; B je biologicky aktivní molekula, m je O nebo 1; a 248 ·· ·· · · · · · ··· · · · · · · · • · · · · · · · · · · • ···· » t * ··· · · · ···· • · ·· ···· • Μ · ·· ·· · * · n je O nebo celé číslo od 1 do 5.
  292. 292. Způsob podle nároku 291, vyznačující se tím, že B je biologicky aktivní peptid.
  293. 293. Způsob podle nároku 292, vyznačující se tím, že B je interferon.
  294. 294. Způsob podle nároku 293, vyznačující se tím, že B je interferon-beta-la.
  295. 295. Způsob podle nároku 291, vyznačující se tím, že kompozice dále obsahuje biologicky aktivní látku vybranou ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu.
  296. 296. Způsob podle nároku 295, vyznačující se tím, že antivirotikům je vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX-497, VX-950 a ISIS-14803.
  297. 297. Způsob podle nároku 291, vyznačující se tím, že virová infekce je chronická hepatitida C.
  298. 298. Způsob ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, vyznačující se tím, že zahrnuje podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XXIV) pacientovi: B (CH2X,—(Y)m~Q· •X— CWaCW2—(0-Cl2CH2)a—X— (CH^ R Z (XXIV) kde každé X a Y je nezávisle O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR', S02NR' nebo NR’; • · • Μ«· · · ♦ ··· · ♦ · ·♦♦♦ • · ·· · · 9 · • 99 9 99 99 ·· · 249 každé R'and Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C20 alkylová nebo heteroalkylová skupina; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; Q je C3 až Ce nasycený nebo nenasycený cyklický alkyl nebo cyklický heteroalkyl, substituovaná nebo nesubstituovaná arylová nebo heteroarylová skupina nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkaryl, kde alkyl je Ci až C20 nasycená nebo nenasycená alkylová nebo heteroalkarylová skupina, kde substituenty jsou vybrány ze skupiny sestávající z halogenu, hydroxylu, karbonylu, karboxylátu, esteru, formylu, acylu, thiokarbonylu, thioesteru, thioacetátu, thioformiátu, alkoxylu, fosforylu, fosfonátu, fosfinátu, aminoskupiny, amidoskupiny, amidinu, iminu, kyanoskupiny, nitroskupiny, azidoskupiny, sulfhydrylu, sulfátu, sulfonátu, sulfamoylu, sulfonamidoskupiny, sulfonylu, heterocyklylu, aralkylu, aromatické části, heteroaromatické části, iminoskupiny, silylu, etheru a alkylthioskupiny; R* a R** jsou nezávisle spojovací části; B a B' jsou nezávisle biologicky aktivní molekuly; m je 0 nebo 1; a index a je celé číslo od 4 do 10000; a každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  299. 299. Způsob podle nároku 298, vyznačující se tím, že B je biologicky aktivní peptid.
  300. 300. Způsob podle nároku 299, vyznačující se tím, že B je interferon.
  301. 301. Způsob podle nároku 300, vyznačující se tím, že B je interferon-beta-la.
  302. 302. Způsob podle nároku 298, vyznačující se tím, že kompozice dále obsahuje biologicky aktivní látku vybranou ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu. Μ · ·· | ···· * · ♦ • · « · · · · · · · · • ···· · I · ··· · · ····· • · ·· · · · · ··· · ·· ·· ·· · 250
  303. 303. Způsob podle nároku 302, vyznačující se tím, že antivirotikum je vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX-497, VX-950 a ISIS-14803.
  304. 304. Způsob podle nároku 298, vyznačující se tím, že virová infekce je chronická hepatitida C.
  305. 305. Způsob ošetření pacienta, který je citlivý na virovou infekci, vyznačující se tím, že obsahuje podání účinného množství kompozice mající strukturu podle obecného vzorce (XXV) pacientovi: B'—R- CH—(0¾-X-CW2CW2-(0-CH2CH2)a—X (Cí^ Ž
    (XXV) kde X je O, S, CO, C02, COS, SO, S02, CONR’, S02NR’ nebo NR’; každé a Z je nezávisle atom vodíku, lineární nebo rozvětvená, nasycená nebo nenasycená Ci až C2o alkylová nebo heteroalkylová skupina; R* a R** jsou nezávisle spojovací část; BaB1 jsou nezávisle a biologicky aktivní molekula; každé W je nezávisle atom vodíku nebo Ci až C7 alkyl; a index a je celé číslo od 4 do 10000; a každé n je nezávisle 0 nebo celé číslo od 1 do 5.
  306. 306. Způsob podle nároku 305, vyznačující se tím, že B je biologicky aktivní peptid.
  307. 307. Způsob podle nároku 306, vyznačující se tím, že B je interferon.
  308. 308. Způsob podle nároku 307, vyznačující se tím, že B je interferon-beta-la.
  309. 309. Způsob podle nároku 305, vyznačující se tím, že kompozice dále obsahuje biologicky aktivní látku vybranou ze skupiny sestávající z malé molekuly antivirotika, antivirotika na bázi nukleové kyseliny a antivirotika na bázi peptidu.
  310. 310. Způsob podle nároku 309, vyznačující se tím, že antivirotikum je vybráno ze skupiny sestávající z ribavirinu, levovirinu, 3TC, FTC, MB686, zidovudinu, acykloviru, gancykloviru, viramidu, VX-497, VX-950 a ISIS-14803.
  311. 311. Způsob podle nároku 305, vyznačující se tím, že virová infekce je chronická hepatitida C.
  312. 312. Způsob ošetření pacienta podezřelého z infekce hepatitidou C, vyznačující se tím, že zahrnuje podání kombinace kompozice podle kteréhokoliv z nároků 209-220 a antivirotika pacientovi.
  313. 313. Způsob podle nároku 312, vyznačující se tím, že kompozice a antivirotikum jsou podávány současně.
  314. 314. Způsob podle nároku 312, vyznačující se tím, že kompozice a antivirotikum jsou podávány postupně.
  315. 315. Způsob podle nároku 312, vyznačující se tím, že kompozice a antivirotikum jsou podávány zvlášť.
  316. 316. Způsob podle nároku 312, vyznačující se tím, že antivirotikum je ribavirin. Λ Λ Λ » V * 252 Anotace Název vynálezu: Polvmerní sloučeniny na bázi nolvalkvlenu a jejich použití Předložené řešení se týká polyalkylenglykolových sloučenin a způsobů jejich použití. Konkrétně jsou sloučeniny obsahující nový polyethylenglykolový konjugát používány samostatně nebo v kombinaci s antivirotiky k ošetření virové infekce, např. chronické hepatitidy C.
CZ2004877A 2002-01-18 2003-01-17 Polymerní sloučeniny na bázi polyalkylenu a jejich použití CZ2004877A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US34991702P 2002-01-18 2002-01-18

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ2004877A3 true CZ2004877A3 (cs) 2004-12-15

Family

ID=27613339

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2004877A CZ2004877A3 (cs) 2002-01-18 2003-01-17 Polymerní sloučeniny na bázi polyalkylenu a jejich použití

Country Status (35)

Country Link
US (2) US8017733B2 (cs)
EP (3) EP1476181B1 (cs)
JP (5) JP2005526151A (cs)
KR (1) KR100964411B1 (cs)
CN (2) CN1630530A (cs)
AU (1) AU2003210564B2 (cs)
BE (1) BE2016C040I2 (cs)
BG (1) BG66525B1 (cs)
BR (1) BRPI0306993B8 (cs)
CA (4) CA2840490C (cs)
CY (2) CY2016027I2 (cs)
CZ (1) CZ2004877A3 (cs)
DK (2) DK1476181T3 (cs)
EA (2) EA011829B1 (cs)
EE (1) EE05509B1 (cs)
ES (2) ES2566797T3 (cs)
GE (2) GEP20074024B (cs)
HK (3) HK1072721A1 (cs)
HU (4) HUE028163T2 (cs)
IL (1) IL163006A (cs)
IS (1) IS2989B (cs)
LU (1) LU93162I2 (cs)
ME (2) ME00239B (cs)
MX (1) MXPA04006855A (cs)
NL (1) NL300826I2 (cs)
NO (3) NO339857B1 (cs)
NZ (1) NZ534708A (cs)
PL (2) PL397261A1 (cs)
PT (1) PT3025726T (cs)
RS (1) RS55578B1 (cs)
SI (2) SI1476181T1 (cs)
SK (1) SK3102004A3 (cs)
UA (1) UA82184C2 (cs)
WO (1) WO2003061577A2 (cs)
ZA (1) ZA200406555B (cs)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150246097A9 (en) * 2002-01-18 2015-09-03 Biogen Idec Ma Inc. Polyalkylene Polymer Compounds and Uses Thereof
WO2003061577A2 (en) * 2002-01-18 2003-07-31 Biogen Idec Ma Inc. Polyalkylene glycol with moiety for conjugating biologically active compound
JP4764630B2 (ja) 2002-09-09 2011-09-07 ネクター セラピューティックス 水溶性ポリマーアルカナール
US8129330B2 (en) 2002-09-30 2012-03-06 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof
RS20050502A (en) * 2002-12-26 2007-08-03 Mountain View Pharmaceuticals Inc., Polymer conjugates of interferon- beta with enhanced biological potency
RS20050501A (en) * 2002-12-26 2007-08-03 Mountain View Pharmaceuticals Inc., Polymer conjugates of cytokines,chemokines,growth factors, polypeptide hormones and antagonists thereof with preserved receptor-binding activity
US7432331B2 (en) 2002-12-31 2008-10-07 Nektar Therapeutics Al, Corporation Hydrolytically stable maleimide-terminated polymers
CA2530113C (en) 2003-06-26 2013-08-13 Control Delivery Systems, Inc. Bioerodible sustained release drug delivery systems
DE602004016995D1 (de) 2003-06-26 2008-11-20 Control Delivery Sys Inc In-situ gelierendes arzneimittelabgabesystem
US20090312344A1 (en) * 2004-05-31 2009-12-17 Mohammad Salman Arylpiperazine derivatives as adrenergic receptor antagonists
ATE494012T1 (de) 2004-12-21 2011-01-15 Nektar Therapeutics Stabilisierte polymer-thiol-reagenzien
US20070004635A1 (en) * 2005-06-02 2007-01-04 Schering Corporation Method of treating interferon non-responders using HCV protease inhibitor
MX2008000291A (es) 2005-07-08 2008-04-04 Elan Pharm Inc Preparacion de conjugados polimericos de compuestos de aditivos terapeuticos, agricolas y alimentarios.
TW200817369A (en) * 2006-05-22 2008-04-16 Elan Pharm Inc Preparation of polymer conjugates of therapeutic, agricultural and food additive compounds
WO2008066816A2 (en) * 2006-11-28 2008-06-05 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Derivatization or ligaton of peptides
US20090016985A1 (en) * 2007-07-11 2009-01-15 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Polymeric drug delivery system containing a multi-substituted aromatic moiety
CA2693645A1 (en) * 2007-07-11 2009-01-15 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Polymeric drug delivery systems containing an aromatic allylic acid
CL2008002399A1 (es) * 2007-08-16 2009-01-02 Pharmaessentia Corp Conjugado sustancialmente puro que posee una porcion polimerica, una porcion proteica (interferon alfa 2b) y un ligante alifatico de 1 a 10 atomos de carbono, util en el tratamiento de las hepatitis b o c.
CN103536906A (zh) * 2008-06-05 2014-01-29 津莫吉尼蒂克斯公司 利用聚乙二醇化的iii 型干扰素治疗丙型肝炎
TWI421093B (zh) * 2008-07-31 2014-01-01 Pharmaessentia Corp 胜肽－聚合物綴合物
GB0823309D0 (en) 2008-12-19 2009-01-28 Univ Bath Functionalising reagents and their uses
WO2010140350A1 (ja) 2009-06-02 2010-12-09 パナソニック株式会社 ダウンミックス装置、符号化装置、及びこれらの方法
UA109646C2 (uk) * 2009-12-10 2015-09-25 Терапевтичне застосування кон'югатів білка з полімером
US20130225789A1 (en) * 2012-02-29 2013-08-29 Yi Sun Polyethylene Glycol Having Hetero Multiple Functional Groups
US8993614B2 (en) 2012-03-15 2015-03-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Substituted pyrrolidine-2-carboxamides
KR101475630B1 (ko) * 2013-05-31 2014-12-22 동국대학교 산학협력단 포도근 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 c형 간염의 예방 또는 치료용 조성물
US11759500B2 (en) * 2014-07-24 2023-09-19 Abion Inc. PEGylated interferon-beta variant
SI3183264T1 (sl) 2014-08-19 2021-03-31 Biogen Ma Inc. Metoda pegilacije
GB201419108D0 (en) 2014-10-27 2014-12-10 Glythera Ltd Materials and methods relating to linkers for use in antibody drug conjugates
EA037151B1 (ru) 2014-11-06 2021-02-11 Фармаэссентия Корпорейшн Способ лечения с использованием пегилированного интерферона
EP3421442B1 (en) * 2017-06-28 2020-08-05 Construction Research & Technology GmbH Dispersant for inorganic particles
US11472894B2 (en) 2018-07-23 2022-10-18 Carnegie Mellon University Enzyme-assisted ATRP procedures
CN109232898A (zh) * 2018-08-02 2019-01-18 张玲 一种具有抗凝血功能的聚酰亚胺新材料的制备方法
CN111534458B (zh) * 2020-04-13 2022-01-14 浙江工业大学 无色杆菌tbc-1及其在降解1,3,6,8-四溴咔唑中的应用
CN113716982B (zh) * 2021-08-24 2022-05-06 重庆云瑞肥业有限公司 一种食品垃圾回收用发酵制肥装置

Family Cites Families (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3710795A (en) 1970-09-29 1973-01-16 Alza Corp Drug-delivery device with stretched, rate-controlling membrane
US4179337A (en) * 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4002531A (en) * 1976-01-22 1977-01-11 Pierce Chemical Company Modifying enzymes with polyethylene glycol and product produced thereby
DE3262575D1 (en) 1981-12-23 1985-04-18 Schering Corp Stabilised interferon formulations and their preparation
WO1985003934A1 (en) * 1984-03-06 1985-09-12 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein and process for its preparation
GB8334102D0 (en) * 1983-12-21 1984-02-01 Searle & Co Interferons with cysteine pattern
EP0154316B1 (en) 1984-03-06 1989-09-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified lymphokine and production thereof
DE3675588D1 (de) 1985-06-19 1990-12-20 Ajinomoto Kk Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist.
US4766106A (en) 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4917888A (en) 1985-06-26 1990-04-17 Cetus Corporation Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
WO1987000056A1 (en) 1985-06-26 1987-01-15 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
JP2514950B2 (ja) * 1986-03-10 1996-07-10 エフ・ホフマン―ラ ロシユ アーゲー 化学修飾蛋白質，その製造法および中間体
US4894226A (en) * 1986-11-14 1990-01-16 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polyproline conjugation
US5080891A (en) 1987-08-03 1992-01-14 Ddi Pharmaceuticals, Inc. Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols
US5135919A (en) 1988-01-19 1992-08-04 Children's Medical Center Corporation Method and a pharmaceutical composition for the inhibition of angiogenesis
US5116964A (en) * 1989-02-23 1992-05-26 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
US5286637A (en) * 1989-08-07 1994-02-15 Debiopharm, S.A. Biologically active drug polymer derivatives and method for preparing same
US5252714A (en) 1990-11-28 1993-10-12 The University Of Alabama In Huntsville Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde
US5595732A (en) 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
US5281698A (en) 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation
AU3423293A (en) * 1991-12-19 1993-07-19 Baylor College Of Medicine Pva or peg conjugates of peptides for epitope-specific immunosuppression
ZA933926B (en) * 1992-06-17 1994-01-03 Amgen Inc Polyoxymethylene-oxyethylene copolymers in conjuction with blomolecules
US5382657A (en) * 1992-08-26 1995-01-17 Hoffmann-La Roche Inc. Peg-interferon conjugates
US5262564A (en) 1992-10-30 1993-11-16 Octamer, Inc. Sulfinic acid adducts of organo nitroso compounds useful as retroviral inactivating agents anti-retroviral agents and anti-tumor agents
US5298410A (en) * 1993-02-25 1994-03-29 Sterling Winthrop Inc. Lyophilized formulation of polyethylene oxide modified proteins with increased shelf-life
US5359030A (en) * 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5681811A (en) 1993-05-10 1997-10-28 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized therapeutic agent compositions, delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5874075A (en) * 1993-10-06 1999-02-23 Amgen Inc. Stable protein: phospholipid compositions and methods
DK0730470T3 (da) * 1993-11-10 2002-06-03 Enzon Inc Forbedrede interferonpolymerkonjugater
US5951974A (en) 1993-11-10 1999-09-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates
US5446090A (en) 1993-11-12 1995-08-29 Shearwater Polymers, Inc. Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules
US5639725A (en) 1994-04-26 1997-06-17 Children's Hospital Medical Center Corp. Angiostatin protein
US5730990A (en) 1994-06-24 1998-03-24 Enzon, Inc. Non-antigenic amine derived polymers and polymer conjugates
US5650234A (en) 1994-09-09 1997-07-22 Surface Engineering Technologies, Division Of Innerdyne, Inc. Electrophilic polyethylene oxides for the modification of polysaccharides, polypeptides (proteins) and surfaces
US5824784A (en) * 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5738846A (en) 1994-11-10 1998-04-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates and process for preparing the same
WO1996017929A1 (en) * 1994-12-07 1996-06-13 Novo Nordisk A/S Polypeptide with reduced allergenicity
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
US5672662A (en) 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
SE9503380D0 (sv) * 1995-09-29 1995-09-29 Pharmacia Ab Protein derivatives
EP0856026A1 (en) * 1995-10-19 1998-08-05 Receptagen Corporation Discrete-length polyethylene glycols
US5702717A (en) * 1995-10-25 1997-12-30 Macromed, Inc. Thermosensitive biodegradable polymers based on poly(ether-ester)block copolymers
US5908621A (en) 1995-11-02 1999-06-01 Schering Corporation Polyethylene glycol modified interferon therapy
US5747639A (en) * 1996-03-06 1998-05-05 Amgen Boulder Inc. Use of hydrophobic interaction chromatography to purify polyethylene glycols
AU5773798A (en) 1997-01-29 1998-08-18 Polymasc Pharmaceuticals Plc Pegylation process
EP0975809A4 (en) 1997-03-05 2002-10-30 Univ Washington EXAMINATION PROCEDURE FOR DETECTING AGENTS FOR SELECTIVE INHIBITION OF HCV REPLICATION
US5990237A (en) * 1997-05-21 1999-11-23 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines
US6448369B1 (en) * 1997-11-06 2002-09-10 Shearwater Corporation Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation
US7642323B2 (en) * 1997-11-06 2010-01-05 Nektar Therapeutics Heterobifunctional poly(ethylene glycol) derivatives and methods for their preparation
CA2312975C (en) * 1997-12-17 2012-08-21 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
US6180095B1 (en) * 1997-12-17 2001-01-30 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
US5985263A (en) 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
US5981709A (en) 1997-12-19 1999-11-09 Enzon, Inc. α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same
US5965119A (en) * 1997-12-30 1999-10-12 Enzon, Inc. Trialkyl-lock-facilitated polymeric prodrugs of amino-containing bioactive agents
PT1061954E (pt) * 1998-03-12 2004-10-29 Nektar Therapeutics Al Corp Derivados de poli(etileno glicol) com grupos reactivos proximos
JP4574007B2 (ja) * 1998-04-28 2010-11-04 メルク・セローノ・ソシエテ・アノニム ポリオール−ｉｆｎ−ベータ複体
US6703381B1 (en) * 1998-08-14 2004-03-09 Nobex Corporation Methods for delivery therapeutic compounds across the blood-brain barrier
DE69930015T2 (de) * 1998-10-16 2006-10-12 Biogen Idec Ma Inc., Cambridge Polymerkonjugate von interferon-beta-1a und deren verwendungen
WO2001000246A2 (en) * 1999-06-11 2001-01-04 Shearwater Corporation Hydrogels derived from chitosan and poly(ethylene glycol)
JP2003527090A (ja) 1999-08-27 2003-09-16 マキシゲン・エイピーエス 新規なインターフェロンベータ様分子
US6531122B1 (en) * 1999-08-27 2003-03-11 Maxygen Aps Interferon-β variants and conjugates
US7144574B2 (en) * 1999-08-27 2006-12-05 Maxygen Aps Interferon β variants and conjugates
DK1259562T3 (da) 1999-12-22 2006-04-18 Nektar Therapeutics Al Corp Sterisk hindrede derivater af vandoplöselige polymerer
US6413507B1 (en) * 1999-12-23 2002-07-02 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable carbamate derivatives of poly (ethylene glycol)
ES2367891T3 (es) * 2000-09-29 2011-11-10 Schering Corporation Interleucina-10 pegilada.
US7053150B2 (en) * 2000-12-18 2006-05-30 Nektar Therapeutics Al, Corporation Segmented polymers and their conjugates
TW593427B (en) * 2000-12-18 2004-06-21 Nektar Therapeutics Al Corp Synthesis of high molecular weight non-peptidic polymer derivatives
CA2436407C (en) * 2001-02-01 2011-08-30 Biogen, Inc. Polymer conjugates of neublastin and methods of using same
ATE432288T1 (de) 2001-02-27 2009-06-15 Maxygen Aps Neue interferon-beta-ähnliche moleküle
US7009033B2 (en) * 2001-07-02 2006-03-07 Polymer Source Inc. Heterofunctional polyethylene glycol and polyethylene oxide, process for their manufacture
EP2236161A1 (en) * 2001-10-18 2010-10-06 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of opioid antagonists
AU2002356990A1 (en) * 2001-11-20 2003-06-10 Pharmacia Corporation Chemically-modified human growth hormone conjugates
US6916962B2 (en) 2001-12-11 2005-07-12 Sun Bio, Inc. Monofunctional polyethylene glycol aldehydes
US6956135B2 (en) * 2001-12-11 2005-10-18 Sun Bio, Inc. Monofunctional polyethylene glycol aldehydes
AU2002357806A1 (en) * 2001-12-11 2003-06-23 Sun Bio, Inc. Novel monofunctional polyethylene glycol aldehydes
US7041855B2 (en) * 2001-12-11 2006-05-09 Sun Bio, Inc. Monofunctional polyethylene glycol aldehydes
KR100488351B1 (ko) * 2001-12-11 2005-05-11 선바이오(주) 신규한 폴리에틸렌글리콜-프로피온알데히드 유도체
WO2003061577A2 (en) * 2002-01-18 2003-07-31 Biogen Idec Ma Inc. Polyalkylene glycol with moiety for conjugating biologically active compound
JP4764630B2 (ja) * 2002-09-09 2011-09-07 ネクター セラピューティックス 水溶性ポリマーアルカナール
RS20050502A (en) * 2002-12-26 2007-08-03 Mountain View Pharmaceuticals Inc., Polymer conjugates of interferon- beta with enhanced biological potency
US20110165122A1 (en) * 2009-11-10 2011-07-07 The Regents Of The University Of California Method for targeted and sustained antiviral therapy

Also Published As

Publication number Publication date
HUP0500457A3 (en) 2012-09-28
BRPI0306993B8 (pt) 2021-05-25
HU230473B1 (hu) 2016-07-28
IS7353A (is) 2004-07-15
EA200701386A1 (ru) 2007-10-26
BG108839A (bg) 2005-04-30
JP2016014022A (ja) 2016-01-28
JP2013136756A (ja) 2013-07-11
CA2840490C (en) 2017-02-28
ES2566797T3 (es) 2016-04-15
KR100964411B1 (ko) 2010-06-15
GEP20074024B (en) 2007-01-10
PL213322B1 (pl) 2013-02-28
IS2989B (is) 2017-11-15
DK1476181T3 (en) 2016-05-23
MEP35608A (en) 2011-02-10
DK3025726T3 (da) 2019-12-09
CA2473526A1 (en) 2003-07-31
HUE028163T2 (en) 2016-11-28
HK1224185A1 (zh) 2017-08-18
EP3025726B1 (en) 2019-11-20
JP2005526151A (ja) 2005-09-02
CA2753899C (en) 2014-03-25
PL372728A1 (en) 2005-08-08
JP5275125B2 (ja) 2013-08-28
NO339857B1 (no) 2017-02-06
JP2012255156A (ja) 2012-12-27
EP1476181A2 (en) 2004-11-17
HUS1600035I1 (hu) 2016-10-28
PT3025726T (pt) 2020-01-09
KR20040081463A (ko) 2004-09-21
CN101700401A (zh) 2010-05-05
SK3102004A3 (sk) 2005-01-03
BE2016C040I2 (cs) 2022-05-17
US8017733B2 (en) 2011-09-13
US8524660B2 (en) 2013-09-03
NL300826I2 (cs) 2017-03-16
ES2774801T3 (es) 2020-07-22
EP3669887A1 (en) 2020-06-24
JP6030717B2 (ja) 2016-11-24
WO2003061577A3 (en) 2003-10-02
CA2753899A1 (en) 2003-07-31
NO344612B1 (no) 2020-02-10
UA82184C2 (uk) 2008-03-25
CA2473526C (en) 2013-10-22
CN101700401B (zh) 2013-08-14
EP3025726A1 (en) 2016-06-01
ME00239B (me) 2011-05-10
ZA200406555B (en) 2005-11-30
HUE047557T2 (hu) 2020-04-28
CA2840490A1 (en) 2003-07-31
NZ534708A (en) 2007-05-31
WO2003061577A2 (en) 2003-07-31
EP1476181A4 (en) 2008-11-19
EA009783B1 (ru) 2008-04-28
EA200400962A1 (ru) 2005-06-30
BG66525B1 (bg) 2016-04-28
CA2952488A1 (en) 2003-07-31
EA011829B1 (ru) 2009-06-30
NO2017013I1 (no) 2017-04-10
HUP0500457A2 (hu) 2005-08-29
NO20151082A1 (no) 2015-08-26
SI3025726T1 (sl) 2020-03-31
NO20043422L (no) 2004-10-11
AU2003210564B2 (en) 2008-10-23
CY2016027I1 (el) 2017-06-28
BR0306993A (pt) 2005-09-06
WO2003061577A8 (en) 2008-11-20
GEP20064024B (en) 2007-01-10
US20120014916A1 (en) 2012-01-19
PL397261A1 (pl) 2012-03-26
EE05509B1 (et) 2012-02-15
MXPA04006855A (es) 2005-04-19
IL163006A (en) 2011-01-31
LU93162I2 (fr) 2016-10-03
RS55578B1 (sr) 2017-06-30
SI1476181T1 (sl) 2016-10-28
CA2952488C (en) 2019-05-07
BRPI0306993B1 (pt) 2020-03-10
CY2016027I2 (el) 2017-06-28
HK1143553A1 (en) 2011-01-07
CN1630530A (zh) 2005-06-22
US20050107277A1 (en) 2005-05-19
RS63504A (en) 2007-02-05
NO2017013I2 (no) 2018-08-20
CY1122841T1 (el) 2021-10-29
HK1072721A1 (zh) 2005-09-09
JP2009235409A (ja) 2009-10-15
EE200400105A (et) 2004-12-15
EP1476181B1 (en) 2016-03-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ2004877A3 (cs) Polymerní sloučeniny na bázi polyalkylenu a jejich použití
JP2005526151A5 (cs)
AU2003210564A1 (en) Polyalkylene glycol with moiety for conjugating biologically active compound
US20170049904A1 (en) Polyalkylene polymer compounds and uses thereof