EA020347B1 - Пептид-полимерные конъюгаты - Google Patents
Пептид-полимерные конъюгаты Download PDFInfo
- Publication number
- EA020347B1 EA020347B1 EA201170278A EA201170278A EA020347B1 EA 020347 B1 EA020347 B1 EA 020347B1 EA 201170278 A EA201170278 A EA 201170278A EA 201170278 A EA201170278 A EA 201170278A EA 020347 B1 EA020347 B1 EA 020347B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- fragment
- conjugate
- peptide
- polyethylene glycol
- polymer
- Prior art date
Links
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 title claims abstract description 49
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical group [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 108010051696 Growth Hormone Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 239000000122 growth hormone Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 40
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 claims description 23
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 claims description 23
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 claims description 20
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 17
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 17
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 claims description 11
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 claims description 11
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 10
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 8
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 3
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 abstract 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 abstract 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 abstract 1
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 51
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 11
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 11
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- -1 polybutenylene Polymers 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 4
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 4
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 4
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 4
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 4
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 4
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 4
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 4
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000004766 neurogenesis Effects 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 4
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 4
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 4
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 3
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 3
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NMDDZEVVQDPECF-LURJTMIESA-N (2s)-2,7-diaminoheptanoic acid Chemical compound NCCCCC[C@H](N)C(O)=O NMDDZEVVQDPECF-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- HUGUQSLESBCFPI-UHFFFAOYSA-N (3-hydroxy-2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) hydrogen carbonate Chemical compound OC1CC(=O)N(OC(O)=O)C1=O HUGUQSLESBCFPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 2
- 108010005716 Interferon beta-1a Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 125000004036 acetal group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 229940124622 immune-modulator drug Drugs 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011785 micronutrient Substances 0.000 description 2
- 235000013369 micronutrients Nutrition 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DXIYRKVXLUOOON-UHFFFAOYSA-N (hydroxyamino)phosphonic acid Chemical compound ONP(O)(O)=O DXIYRKVXLUOOON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 1-[6-[2-[3-[3-[3-[2-[2-[3-[[2-[2-[[(2r)-1-[[2-[[(2r)-1-[3-[2-[2-[3-[[2-(2-amino-2-oxoethoxy)acetyl]amino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-[(2r)-2,3-di(hexadecanoyloxy)propyl]sulfanyl-1-oxopropan-2-yl Chemical compound O=C1C(SCCC(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(=O)N[C@@H](CSC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CO)C(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(N)=O)CC(=O)N1CCNC(=O)CCCCCN\1C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2CC/1=C/C=C/C=C/C1=[N+](CC)C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C1 UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CGMLYSXFBBTQPC-UHFFFAOYSA-N 6-(1,3-dioxolan-2-yl)hexane-1,5-diamine Chemical compound NCCCCC(N)CC1OCCO1 CGMLYSXFBBTQPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 101000987586 Homo sapiens Eosinophil peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010005714 Interferon beta-1b Proteins 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 101001110310 Lentilactobacillus kefiri NADP-dependent (R)-specific alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- NTNWOCRCBQPEKQ-YFKPBYRVSA-N N(omega)-methyl-L-arginine Chemical compound CN=C(N)NCCC[C@H](N)C(O)=O NTNWOCRCBQPEKQ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-diisopropylethylamine Substances CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- NPYPAHLBTDXSSS-UHFFFAOYSA-N Potassium ion Chemical compound [K+] NPYPAHLBTDXSSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000005262 Sulfatase Human genes 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004450 alkenylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004419 alkynylene group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940003504 avonex Drugs 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 150000001576 beta-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 150000001733 carboxylic acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-M deoxycholate Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-M 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 102000044890 human EPO Human genes 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 229940038850 rebif Drugs 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 108060007951 sulfatase Proteins 0.000 description 1
- 125000000475 sulfinyl group Chemical group [*:2]S([*:1])=O 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N tetramethylammonium Chemical compound C[N+](C)(C)C QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 208000000143 urethritis Diseases 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/21—Interferons [IFN]
- A61K38/215—IFN-beta
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/27—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Virology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Polyethers (AREA)
Abstract
Изобретение относится к конъюгату полимерного фрагмента и фрагмента интерферона, фрагмента эритропоэтина или фрагмента гормона роста.
Description
Перекрестная ссылка на родственные заявки
По заявке на данное изобретение испрашивается приоритет на основании предварительной патентной заявки США № 61/085072, поданной 31 июля 2008 г., полное содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки.
Уровень техники
Прогресс в области клеточной биологии и технологии рекомбинантных белков привел к разработке белковых терапевтических средств.
Тем не менее, все еще существуют значительные затруднения. Большинство белков чувствительны к протеолитическому разложению и вследствие этого имеют короткое время циркуляции в организме. К другим недостаткам относятся низкая растворимость в воде и индукция выработки нейтрализующих ан тител.
Присоединение полимера, например полиэтиленгликоля (РЕС), к белку препятствует доступу протеолитических ферментов к белковому остову, что приводит к повышению стабильности белка. Кроме того, это также может повышать растворимость в воде и сводить к минимуму иммуногенность. Существует потребность в эффективных способах присоединения полимера к белкам.
Сущность изобретения
Один из аспектов настоящего изобретения относится к пептид-полимерному конъюгату следующей формулы:
где каждый из К.1, Р2. Р3. Р4 и К5 представляет собой Н;
каждый из А1 и А2 независимо представляет собой полиэтиленгликолевый фрагмент; каждый из С1 и С2 представляет собой связывающую функциональную группу:
О
в которой О связан с А! или А2 и атом N связан с атомом углерода;
С3 представляет собой связь;
Р выбирают из группы, состоящей из фрагмента интерферона-β (ΙΝΡ-β), фрагмента эритропоэтина (ЕРО) и фрагмента гормона роста (СН), при этом атом азота на Ν-конце Р связан с С3;
т равно 0 или целому числу от 1 до 10;
η равно целому числу от 1 до 10.
В предпочтительном варианте Р представляет собой фрагмент интерферона-β, в частности τΙΝΕ-β 8еТ17.
В другом предпочтительном варианте Р представляет собой фрагмент модифицированного интерферона-β, содержащего 1-4 дополнительных аминокислотных остатка на Ν-конце.
В ещё одном предпочтительном варианте Р представляет собой фрагмент эритропоэтина.
В ещё одном другом предпочтительном варианте каждый из А! и А2 представляет собой фрагмент полиэтиленгликоля с молекулярной массой 2-100 кД, наиболее предпочтительно каждый из А! и А2 представляет собой фрагмент полиэтиленгликоля с молекулярной массой 10-30 кД.
В предпочтительном варианте предложен конъюгат, где т равно 4, η равно 2. Наиболее предпочтительно, когда в указанном конъюгате Р представляет собой фрагмент интерферона-β, в частности, такой как τΙΝΕ-β 8еТ17.
В другом предпочтительном варианте Р представляет собой фрагмент модифицированного интер ферона-β, содержащего 1-4 дополнительных аминокислотных остатка на Ν-конце.
В другом предпочтительном варианте Р представляет собой фрагмент эритропоэтина.
В ещё одном другом предпочтительном варианте Р представляет собой фрагмент гормона роста.
В предпочтительном варианте конъюгат согласно настоящему изобретению может быть представлен следующей структурой:
- 1 020347 где тРЕС представляет собой фрагмент метоксиблокированного полиэтиленгликоля с молекулярной массой 20 кД.
В ещё одном предпочтительном варианте конъюгат может представлять собой фрагмент следующей структуры:
где тРЕС представляет собой фрагмент метоксиблокированного полиэтиленгликоля с молекулярной массой 20 кД.
В ещё одном другом предпочтительном варианте конъюгат может представлять собой фрагмент следующей структуры:
тРЕСЮ
где тРЕС представляет собой фрагмент метоксиблокированного полиэтиленгликоля с молекулярной массой 20 кД.
В контексте настоящего изобретения термин полимерный фрагмент означает одновалентный радикал, производный от линейного, разветвленного или звездообразного полимера. Молекулярная масса полимерного фрагмента может составлять 2-100 кД. Примеры полимерного фрагмента включают, но не ограничиваются ими, полиэтиленоксид, полиэтиленгликоль, полиизопропиленоксид, полибутениленоксид, полиэтиленгликоль и их сополимеры. Другие полимеры, такие как декстран, поливиниловые спир ты, полиакриламиды или полимеры на основе углеводов, также можно использовать при условии, что они не являются антигенными, токсичными или вызывающими иммунный ответ.
Термин полипептидный фрагмент означает одновалентный радикал, производный либо от природного полипептида, либо от модифицированного полипептида. Природным пептидом может являться ΙΝΕ-α2|, ΙΝΕ-β, СН, ЕРО и гранулоцитарный колониестимулирующий фактор либо антитело. Модифицированным пептидом может являться, например, пептид, содержащий ΙΝΕ и 1-4 дополнительных аминокислотных остатка на Ν-конце ΙΝΕ-α;|:ι.
Примером такого модифицированного ΙΝΕ является
ΙΕΝ, представляющий фрагмент
ΙΝΕ-α2|, аминогруппа на Ν-конце которого связана с карбонильной группой.
Термин интерферон-β относится к семейству высокогомологичных белков, ингибирующих вирусную репликацию и клеточную пролиферацию, а также модулирующих иммунный ответ. См. Оегупек е! а1. (1980). №11игс. 285(5766): 542-7 и ТашдиеЫ е! а1. (1980). Сепе. 10(1): 11-5. Он включает как природные ΙΝΕ-β, так и их функциональные эквиваленты, т.е. полипептиды, по меньшей мере на 80% (например, 85, 90, 95 или 99%) идентичные своему аналогу дикого типа. Примеры ΙΝΕ-β включают активные ингредиенты коммерчески доступных лекарственных средств, таких как авонекс, бетаферон и ребиф. См., например, Е!етабИат М. е! а1., Ас!а №ито1. 8еапб.. 2006, 113(5): 283-7.
Ниже приведены аминокислотные последовательности примеров белков ΙΝΕ-β человека либо в форме предшественников, либо в зрелой форме:
,-ηϋ,Ά ’/дт 5 111с1еИа1 5тзуп11д£1 ягззпГдсдк 11ыд1пдг1е ус1кйгтп£Ц 1рееккд1дд £дкебаа1£1 ует1дп1£ак £гдрззз£дн пеШуеп11а ηνγΐιρίηΕΙλ Су1еек1еке Ц£1;гдк1тзэ 1Н1кгуудг1 1Ьу1какеуз Ησθίίϋίντνβ Игп£у£1пг 1£ду1гп (см. номер доступа СепВапк: М28622, версия от 27 апреля 1993 г.; выделенная курсивом часть относится к сигнальным пептидам);
тпв£з£за£д ρν3ΐ319111 ν1ρ3β£ρ3ρν ррдеЗзксЕ/а арЬгдр1£эз ег1с1кд1гу1 1(1дз.ва1гке Сспкзптсез зкеа1аепп1 п1рктаек0д с£дзд£пеес σ1ν!ςΐίΐ^11 е£еуу1еу1д пгГеззееда ΓβνςπίδίΛνΙ хдШдккакп 1όθί££ράρύ £паз11ск1д адпд«1д0т£. £Ы11гз£ке £1дЕ81га1г дт (см. номер доступа СепВапк: САА00839, версия от 3 декабря 1993 г).
В одном примере ΙΝΕ-β представляет собой мутантную форму τΙΝΕ-β 8еТ17 (рекомбинантный ΙΝΕ-β, где в положении 17 находится серин вместо цистеина природной зрелой последовательности ΙΝΕ-β. Аминокислотная последовательность данной мутантной формы приведена ниже:
зуп11д£1дг зепЕдздкИ ид1пдг1еус 1кс1гтп£с11р ее1кд1дд£д кес1аа1Е1уе т!дп1£а1£г ддзззЕд^пе Ιίνβηΐίθην укдхпЫк^ 1еек1еке<1£ сгдк1твв1Ь 1кгуудгИ1т у1какеувкс θΑίνΓνοϋ гп£у£1пг1Ь ду1гп
- 2 020347
В другом примере ΙΝΕ-β представляет собой модифицированный природный ΙΝΕ-β, где 1-4 дополнительных аминокислотных остатка присоединены к Ν-концу природного ΙΝΒ-β.
ЕРО, продуцируемый либо в печени, либо в почках, представляет собой гликопротеиновый гормон, контролирующий эритропоэз или производство красных кровяных клеток. Он включает как природный ЕРО, так и его функциональные эквиваленты. См. патент США 5621080 и публикацию патентной заявки США 20050176627. Аминокислотные последовательности человеческого ЕРО (в форме предшественника и в зрелой форме) приведены ниже:
тдукесра^1 «111з1151р 1д1ру1дарр г11сб8ГУ1е гуНеакеае пбСЬдсаекс βΐηθηίύνρά ЬкУпЕуамкг теуддчауеу ^цд1а11веа у1гдда11уп вздрмер1д1 ϊινάΚ3ν891Γ з1ЬЬ11га1д адкеалэррб аазаар1гЫ СасЦкгкХЕг уузп£1гдк1 к1уЬдеасг£ дбг (предшественник) арргИсбзг У1егу11еак еаептЬИдса ебсз1пеп1£ урШкупЕуа «Игтеудяда УвУмдд1а11 зеаи1гдда1 1упззяриер 1д1Ьубкачз д1гз1£Х11г а1дадкеа1з ррбаазаарб гШЬасНЕг к 1£гуузп£1г дк!к!ут.деа сгЕдЭг (зрелая форма)
Белок ЕРО, используемый для создания конъюгата по настоящему изобретению, может представлять собой белок ЕРО либо в форме предшественника, либо в зрелой форме, продуцируемый организмами соответствующих видов, например человеческий, мышиный, свиной или крупного рогатого скота. В одном примере белок ЕРО имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% (например, 85, 90, 95 или 99%) идентичную одной из аминокислотных последовательностей, приведенных выше. В другом примере ЕРО представляет собой модифицированный природный ЕРО, где 1-4 дополнительных аминокислотных остатка присоединены к Ν-концу природного ЕРО.
Термин гормон роста относится к природному человеческому гормону роста либо в форме предшественника, либо в зрелой форме и его функциональным вариантам, т.е. имеющим аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% (например, 85, 90, 95 или 99%) идентичную природному человеческому гормону роста, и обладающим такой же физиологической активностью, что и человеческий гормон роста. В одном примере гормон роста представляет собой модифицированный природный гормон роста, где 1-4 дополнительных аминокислотных остатка присоединены к Ν-концу природного гормона роста. Аминокислотные последовательности природного человеческого гормона роста (в форме предшественника и в зрелой форме) приведены ниже:
та£дзг£з11 £б!уде£ееа 11г£з111£д тдг!ес1дзрг ί£1г С/дсгз
1а£д11с1ри у1ркедкуз£
5ν)1βρνς£1χ
ТддтЕкдЬуз уедзсд£ (предшественник)
1дедеа£р£1
1дпрдЬз1с£
5у£апз1ууд к£б£пзЬпс1б р1зг!£бпат зеатргрзпг азбвпуубИ а!1кпуд!1 у
1гаЬг11эд1а еекдчкзпХе ксНеедгдп! сЕгкбтдкуе £ρϋίρ13Γ1£ 81с£зез1р£ 1уудазйвпу 1тс1с1а11кп.у форма) бпат1га!1г1 рзпгееЬддк уб11кб1еед дИусЕгкбт
Ид1а£бЕуде зп1е11г181 1дс1тдг1еб άΚνβϋίΐΓΐν
Еееаухркед Ιΐίςε^ίθρν дзргтдд££к дсгзуедзсд кув£1дпрд£ д£1гву£апз д£узк£бспз £ (зрелая т£рС1р1зг1 сз1с£ зезхр з1уудазс18п зНпсИаИкп (модифицированная форма) £бпат1гаЬг Срзпгееедд ууб11к<11ее уд!1ус£гкб
1Ъд1а£бСуд кзп1е11г1з д1дЫтдг1е тбкуе££1г1 еГееаутрке
11Идеад1ер адзргЪддтЕ удсгзуедзс дкуз£1дпрд уд£1гву£ап кдЬузкЕсЗЬп д£
Процент идентичности двух аминокислотных последовательностей определяют, используя алгоритм, описанный Катйп аиб А11ксйи1 в Ргос. Ναΐΐ. Асаб. 8с1. И8А 87: 2264-68, 1990, модифицированный согласно Кат1ш апб А11ксйи1 Ргос. №111. Асаб. 8ст И8А 90: 5873-77, 1993. Такой алгоритм включен в программы ΝΒΕΑ8Τ и ХВБА8Т (версия 2.0) А11ксйи1, е! а1. I. Мо1. Вю1. 215: 403-10, 1990. Поиски белка программой ВБА8Т можно проводить с помощью программы ХВБА8Т. количество баллов = 50, длина слова = 3, для получения аминокислотных последовательностей, гомологичных белковым молекулам, используемым в настоящем изобретении. Если между двумя последовательностями существуют гэпы, можно использовать программу Сарреб ВБА8Т, как описано у А11ксйи1 е! а1., в №1с1ею Ас1бк Век. 25(17): 3389-3402, 1997. При использовании программ ВБА8Т и Сарреб ВБА8Т можно использовать параметры по умолчанию соответствующих программ (например, ХВБА8Т и ПВЬА8Т).
Термин связывающая функциональная группа означает бивалентную функциональную группу, один конец которой связан с полимерным фрагментом, а другой конец связан с пептидным фрагментом. Примеры включают, но не ограничиваются ими, -О-, -8-, сложный эфир карбоновой кислоты, карбонил, карбонат, амид, карбамат, мочевину, сульфонил, сульфинил, амино, имино, гидроксиамино, фосфонатную или фосфатную группу.
- 3 020347
Пептид-полимерные конъюгаты, описанные выше, могут находиться в свободной форме или в форме соли, если это применимо. Соль, например, может быть образована между анионом и положительно заряженной группой (например, амино) на пептид-полимерном конъюгате настоящего изобретения. Подходящие анионы включают хлорид, бромид, йодид, сульфат, нитрат, фосфат, цитрат, метансульфонат, трифторацетат и ацетат. Кроме того, соль может быть образована между катионом и отрицательно заряженной группой (например, карбоксилатом) на полипептид-полимерном конъюгате настоящего изобретения. Подходящие катионы включают ион натрия, ион калия, ион магния, ион кальция и катион аммония, такой как ион тетраметиламмония.
Кроме того, пептид-полимерный конъюгат может иметь одну или несколько двойных связей или один или несколько асимметричных центров. Такие конъюгаты могут существовать как рацематы, раце мические смеси, одиночные энантиомеры, отдельные диастереомеры, диастереомерные смеси, а также цис- или транс- либо с Е- или Ζ-двойной связью изомерные формы.
Примеры полимер-пептидных конъюгатов настоящего изобретения приведены ниже:
О
А
О шРЕСО ΝΗ
А ' гоРЕОО N
Н
ΤΙΝΡ-β Зег17 $
О
А
О шРЕСО ΝΗ
А А шРЕСО N'
Н
ЕРО •<ЗН
О
А
О шРЕОО ΝΗ
А А тРЕСО N
Н где шРЕС представляет собой метоксиблокированный полиэтиленгликоль с молекулярной массой 20 кД и Ν-концы τΙΝΕ-β 8ег17, ЕРО и СН присоединены к крайнему правому атому углерода, показанно му на приведенных выше структурах.
Некоторые белки имеют терапевтическую полезность. Вследствие этого конъюгаты настоящего изобретения, содержащие пептидный фрагмент, можно использовать для лечения заболеваний. Например, ΙΝΕ-β является иммуномодулирующим лекарственным средством для лечения инфекции НСУ или НВУ. См., например, 1оигпа1 οί Уакси1аг апй 1п1егуеп1юпа1 Кайю1оду. 13 (2002): 191-196. Таким образом, конъюгаты настоящего изобретения можно применять в способе лечения инфекции, вызванной вирусом гепатита С (НСУ), или инфекции, вызванной вирусом гепатита В (НВУ), с помощью ΙΝΕ-β-полимерного конъюгата, описанного выше. В качестве другого примера ЕРО является гормоном, продуцируемым почками, для стимулирования образования красных кровяных клеток в костном мозге. Он был использован в качестве иммуномодулирующего лекарственного средства для лечения анемии, вызванной хроническим заболеванием почек, вторичной анемии после лечения СПИДа зидовудином и анемии, связанной с раком. Недавние исследования также показали, что ЕРО увеличивает нейрогенез и играет важную роль в восстановлении после инсульта. См., например, Р.Т. Ткак 1оигпа1 οί №игокс1епсе, 2006, 26: 1269. Таким образом, еще один аспект настоящего изобретения относится к способу лечения анемии или усиления нейрогенеза с помощью ЕРО-полимерного конъюгата, описанного выше.
Также описанный выше ΙΝΕ-β-полимерный конъюгат настоящего изобретения можно использовать в составе композиции, предназначенной для лечения инфекции НСУ или инфекции НВУ. Кроме того, описанный выше ЕРО-полимерный конъюгат можно использовать в составе композиции для лечения анемии или для усиления нейрогенеза. Конъюгаты настоящего изобретения можно использовать для производства лекарственного средства для лечения инфекции НСУ, инфекции НВУ или анемии или для усиления нейрогенеза.
Подробности одного или более вариантов осуществления изобретения изложены в приведенном ниже описании. Другие особенности, цели и преимущества изобретения будут очевидны из описания и из формулы изобретения.
Подробное описание изобретения
Пептид-полимерные конъюгаты по настоящему изобретению можно получать способами синтеза, хорошо известными в области химии. Например, можно объединять линкерную молекулу, имеющую одну или более активных функциональных групп, с двумя молекулами полимера, имеющими функциональную группу, реагирующую с функциональными группами на линкерной молекуле. Затем проводят
- 4 020347 взаимодействие пептидной молекулы, содержащей функциональную группу, с функциональной группой на линкерной молекуле, с получением пептид-полимерного конъюгата настоящего изобретения. В настоящем описании приведены две иллюстративные схемы синтеза.
Приведенная ниже схема 1 демонстрирует пример получения пептид-полимерных конъюгатов формулы I. Диаминное соединение 1, содержащее ацетальную группу, подвергают взаимодействию с Ν-гидроксисукцинимидилкарбонатом тРЕС (т.е. соединением 2) с образованием дипегилированного соединения 3, которое впоследствии преобразуют в альдегид 4. Проводят взаимодействие полученного альдегидного соединения с пептидом Н-Р, имеющим свободную аминогруппу, путем восстановительного алкилирования, с получением пептид-полимерного конъюгата настоящего изобретения.
Схема 2 демонстрирует пример получения пептид-полимерных конъюгатов формулы II. Химическое соединение 6 содержит полимерный фрагмент и альдегидную функциональную группу. Оно может быть подвергнуто взаимодействию с пептидом 7, имеющим свободную функциональную аминогруппу. Полученный продукт 8 затем восстанавливают, например, гидрированием или с помощью Ν;·ιΒΗ3ί.'Ν с получением пептид-полимерного конъюгата 9.
Схема 2
А--О,--ί--СН=И—-Р’ восстановление
И
А----Ь--СН=М--Р’
А представляет собой полимерный фрагмент
С | представляет собой связь или связывающую функциональную группу
Ь представляет собой алкенилен или алкинилен
Η2Ν-Ρ’ представляет собой ΙΝΕ-β, ЕРО или СН
Приведенная ниже схема 3 является примером получения пептид-полимерного конъюгата формулы III. Соединение 10, содержащее ацетальную группу, которое можно получить из β-аминокислоты, подвергают взаимодействию с Ν-гидроксисукцинимидилкарбонатом тРЕС2 с образованием пегилированного соединения 11, которое впоследствии преобразуют в альдегид 12. Проводят взаимодействие полученного альдегидного соединения с пептидом Н-Р, имеющим свободную аминогруппу, путем восстановительного алкилирования, с получением желаемого соединения 13.
Схема 3
- 5 020347
Проведение химических реакций, описанных выше, включает использование растворителей, реагентов, катализаторов, реактивов для создания защитных групп и снятия защитных групп, а также определенных условий реакции. Они могут дополнительно включать стадии, либо до, либо после стадий, специально описанных в настоящем описании, необходимые для добавления или удаления соответствующих защитных групп, чтобы в конечном итоге осуществлять синтез пептид-полимерного конъюгата. Кроме того, различные стадии синтеза можно проводить в другой последовательности или порядке, чтобы получать нужные полипептид-полимерные конъюгаты. Преобразования синтетической химии и методики работы с защитными группами (создание и снятие защиты), полезные при синтезе соответствующих пептид-полимерных конъюгатов, известны в данной области и включают, например, такие, как описано в К. Ьатоск, Сошргейепв1уе Отдаше ТтапвТогшайопв, УСН РиЬБвйегв (1989); Т.^. Огеепе апб Р.О.М. Жав. Рто1ес11уе Огоирв ίη Отдаше 8уп1кев1в, 2пб Еб., боки \Убеу & 8опв (1991); Ь. Иевет апб М. Иевет, Иевет апб Иевет'в КеадеШв Тот Отдаше 8уп1кев1в, 1окп \УПеу & 8опв (1994) и Ь. Расщепе, еб., Епсус1ореб1а оТКеадеШв Тог Отдаше 8уШйев1в, бокп \УПеу & 8опв (1995) и в их последующих изданиях.
Синтезированный таким образом пептид-полимерный конъюгат можно дополнительно очищать таким методом, как ионообменная хроматография, гель-фильтрационная хроматография, электрофорез, диализ, ультрафильтрация или ультрацентрифугирование.
Пептид-полимерный конъюгат настоящего изобретения может быть фармацевтически активен в форме конъюгата. Альтернативно, он может высвобождать фармацевтически активный пептид ш у1уо (например, путем гидролиза) в результате ферментативного расщепления связи между пептидным фрагментом и полимерным фрагментом. Примеры ферментов, принимающих участие в расщеплении связей ш у1уо, включают окислительные ферменты (например, пероксидазы, аминоксидазы или дегидрогеназы), восстановительные ферменты (например, кеторедуктазы) и гидролитические ферменты (например, протеазы, эстеразы, сульфатазы или фосфатазы).
Таким образом, один из аспектов настоящего изобретения относится к способу введения эффективного количества одного или нескольких из описанных выше пептид-полимерных конъюгатов для лечения заболевания (например, инфекции НСУ или НВУ либо анемии). В частности, заболевание можно лечить путем введения субъекту одного или нескольких пептид-полимерных конъюгатов в эффективном количестве. Такой субъект может быть определен профессионалом в области здравоохранения на основании результатов любого подходящего метода диагностики.
Используемый в настоящем описании термин воздействие или лечение определяют как применение или введение композиции, содержащей пептид-полимерный конъюгат, субъекту (человеку или животному), имеющему заболевание, симптом заболевания, вторичное по отношению к заболеванию заболевание или расстройство, или предрасположенность к заболеванию, с целью лечения, облегчения, уменьшения, устранения или улучшения состояния заболевания, симптома заболевания, вторичного по отношению к заболеванию заболевания или расстройства, или предрасположенности к заболеванию. Эффективное количество означает количество пептид-полимерного конъюгата, которое оказывает терапевтический эффект на подвергаемого лечению субъекта. Терапевтический эффект может быть объективным (т.е. измеряемым при помощи определенных тестов или маркеров) или субъективным (т.е. субъект демонстрирует признаки или ощущает эффект).
В применении на практике способа по настоящему изобретению композицию, содержащую один или несколько из указанных выше конъюгатов, можно вводить парентерально, перорально, через нос, ректально, местно или трансбуккально. Используемый в настоящем описании термин парентерально означает подкожную, внутрикожную, внутривенную, внутримышечную, внутрисуставную, внутриарте
- 6 020347 риальную, интрасиновиальную, интрастернальную, интратекальную, внутриочаговую, внутрибрюшинную, интратрахеальную или внутричерепную инъекцию, а также любой подходящий инфузионный метод.
Стерильная инъекционная композиция может представлять собой раствор или суспензию в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например раствор в 1,3-бутандиоле. В числе приемлемых сред и растворителей, которые можно использовать, находятся маннит, вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды обычно используют нелетучие масла (например, синтетические моно- или диглицериды). Жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные, пригодны для создания инъецируемых препаратов, а также природные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, особенно в их полиоксиэтилированном варианте. Такие масляные растворы или суспензии могут также содержать длинноцепочечный спиртовой разбавитель или диспергатор либо карбоксиметилцеллюлозу или аналогичные диспергирующие агенты. Для создания препарата можно также использовать другие обычно используемые поверхностно-активные вещества, такие как твины или спаны, или другие аналогичные эмульгаторы или усилители биодоступности, которые обычно используют в производстве фармацевтически приемлемых твердых, жидких или других лекарственных форм.
Композиция для перорального введения может представлять собой любую приемлемую для перорального введения дозированную форму, включая капсулы, таблетки, эмульсии, а также водные суспензии, дисперсии и растворы. В случае таблеток обычно используемые носители включают лактозу и кукурузный крахмал. Также обычно добавляют лубриканты, такие как стеарат магния. Для перорального введения в форме капсул полезные разбавители включают лактозу и сухой кукурузный крахмал. При пероральном введении водных суспензий или эмульсий активные ингредиенты можно суспендировать или растворять в масляной фазе в сочетании с эмульгаторами или суспендирующими агентами. При желании, можно добавлять определенные подсластители, отдушки или красители.
Назальный аэрозоль или ингаляционную композицию можно получать способами, хорошо известными в области создания фармацевтических препаратов. Например, такую композицию можно получать в виде раствора в физиологическом растворе, используя бензиловый спирт или другие подходящие консерванты, усилители абсорбции для увеличения биодоступности, фторуглероды и/или другие солюбилизирующие или диспергирующие агенты, известные в данной области. Композицию, содержащую одно или несколько из указанных выше соединений, можно также вводить в форме суппозиториев для ректального введения.
С одним или несколькими указанными выше активными конъюгатами, как правило, используют фармацевтически приемлемый носитель. Носитель в фармацевтической композиции должен быть приемлемым в том смысле, что он должен быть совместимым с активным ингредиентом композиции (и предпочтительно способным стабилизировать активный ингредиент) и не наносить ущерб субъекту, подвергающемуся лечению. Один или более солюбилизирующих агентов можно использовать в качестве фармацевтических эксципиентов для доставки указанного выше соединения. Примеры других носителей включают коллоидный оксид кремния, стеарат магния, целлюлозу, лаурилсульфат натрия и краситель Ό&Ο Уе11о\\ № 10.
Приведенные ниже примеры должны рассматриваться как чисто иллюстративные и никоим образом не ограничивающие оставшуюся часть раскрытия информации. Считается, что без дополнительных подробностей специалист в данной области может, исходя из приведенного описания, в полной мере использовать настоящее изобретение. Полное содержание всех публикаций, цитированных в настоящем описании, включено в него посредством ссылок.
Пример 1. ΙΤΝ-β-ди-РЕО полимерный конъюгат.
Получение ди-РЕО альдегида
О
кД РЕОО(С=О)О8и получали из 20 кД тРЕООН, приобретенного у (8ииВю 1пс., СА, И8А), способом, описанным в Вюсоищда1е СНет. 1993, 4, 568-569.
Раствор 6-(1,3-диоксолан-2-ил)гексан-1,5-диамина в дихлорметане (11,97 г раствора, содержащего 9,03 мг диамина, 47,8 мкмоль) добавляли в колбу, содержащую 20 кД РЕОО(С=О)О8и (1,72 г, 86,0 мкмоль). После полного растворения РЕОО(С=О)О8и добавляли Ν,Ν-диизопропилэтиламин (79 мкл, 478 мкмоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч и затем по каплям добавляли метил-трет-бутиловый эфир (200 мл) при перемешивании. Образовавшийся осадок собирали и сушили в вакууме с получением ди-РЕО-ацеталя (1,69 г, 98%) в виде белого твердого вещества.
Ή ЯМР (400 МГц, й6-ДМСО) δ 7,16 (т, 1=5,2 Гц, 1Н), 7,06 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 4,76 (т, 1=4,8 Гц, 1Н),
- 7 020347
4,10-3,95 (м, 4Н), 1,80-1,65 (м, 1Н), 1,65-1,50 (м, 1Н), 1,48-1,10 (м, 6Н).
Ди-РЕС-ацеталь (4,0 г, 0,2 ммоль) суспендировали в буфере рН 2,0 (лимонная кислота, 40 мл). Реакционную смесь перемешивали при 35°С в течение 24 ч и затем экстрагировали дихлорметаном (3x50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния, концентрировали и затем снова растворяли в дихлорметане (20 мл). Раствор добавляли по каплям к метил-трет-бутиловому эфиру (400 мл) при перемешивании. Образовавшийся осадок собирали и сушили при пониженном давлении с получением ди-РЕС альдегида (3,8 г, 95%) в виде белого твердого вещества.
1Н ЯМР (400 МГц, б6-ДМСО) δ 9,60 (с, 1Н), 7,24 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,16 (т, 1=5,2 Гц, 1Н), 4,10-3,95 (м, 4Н), 3,95-3,80 (м, 1Н), 3,00-2,85 (м, 2Н), 2,58-2,36 (м, 2Н), 1,46-1,15 (м, 6Н).
Альтернативно, ди-РЕС альдегид получали следующим образом.
Две аминогруппы коммерчески доступного гомолизина (АйаксН РНаттасеиНса1 Со., ЬЙ, СЫпа) защищали бензилоксикарбонилом. Гомолизин с Ν-защитой этерифицировали и восстанавливали с образованием альдегидного соединения. Затем альдегидную группу защищали с помощью этиленгликоля. Бензилоксикарбонильную защитную группу затем удаляли гидрированием в присутствии катализатора палладия. Соединение со снятой Ν-защитой подвергали взаимодействию с активированным тРЕСОН (8ипЫо СНетйаИ Со., ЬЙ, 8ои111 Когеа) в слабощелочных условиях. Полученный продукт перемешивали в лимоннокислом буфере рН 2,0 (8щта-Айпс11, Сегтапу) при 25°С в течение 72 ч для удаления альдегидной защитной группы. Получали 109 г альдегида ди-РЕС полимера (выход: 95%). Чистота была более 97,7% (по данным ВЭЖХ) и более 95% (по данным 1Н ЯМР анализа).
Получение человеческого τΗΙΕΝ-β 8ет17.
Фрагмент ДНК, кодирующий человеческий ΙΕΝ-β 8ет17, клонировали в экспрессионный вектор рЕТ24а для создания экспрессионной плазмиды τΜΕΝ-β 8ет17-рЕТ24а. Полученную экспрессионную плазмиду трансформировали в Е.соН и положительные трансформанты, т.е. клоны, несущие экспрессионную плазмиду, отбирали, культивировали и полученные культуры Е.соН хранили при -80°С.
мкл указанной выше сохраняемой культуры Е.соН инокулировали в 200 мл среды для посева, состоящей из среды Тетйс ВгоЙ и глицерина, примерно на 15 ч при 37°С и 200 об/мин. 150 мл полученной таким образом культуры Е.соН переносили в 2,5 л культуральной среды, содержащей глюкозу (10 г/л), Мд8О4-7Н2О (0,7 г/л), (1МН4)2НРО4 (4 г/л), КН2РО4 (3 г/л), К2НРО4 (6 г/л), цитрат (1,7 г/л), дрожжевой экстракт (10 г/л), канамицин (50 мг/мл), хлорамфеникол (50 мг/мл), пеногаситель и микроэлементы, включая Ее8О4-7Н2О (10 мг/л), 2п8О4-7Н2О (2,25 мг/л), Си8О4-5Н2О (1 мг/л), Мп8О4-Н2О (0,5 мг/л), Н3ВО3 (0,3 мг/л), СаС12-2Н2О (2 мг/л), (NН4)6Мо7О24 (0,1 мг/л), ЕЭТА (0,84 мг/л) и С1 (50 мг/л), и культивировали при 37°С. Когда значение ОИ600 культуры Е.соН достигало 120-140, к культуре добавляли 1РТС (1 М) для индукции экспрессии τΗΙΕΝ-β 8ет17. Индуцированную культуру инкубировали при 37°С и 300 об/мин в течение 3 ч. При необходимости в процессе инкубации к культуре Е.соН добавляли питательную среду, содержащую 800 г/л глюкозы и 20 г/л Мд8О4.
Культуру Е.соН, полученную, как описано выше, подвергали центрифугированию для сбора клеток Е.соН. Клетки ресуспендировали в буфере РВ8 (0,1 М №2НРО4, 0,15 М №1С1) и разрушали в гомогенизаторе АРУ. Полученный таким образом гомогенизированный раствор центрифугировали при 10000 об/мин, 4°С в течение 15 мин. Осадки (включая тельца включения) собирали, ресуспендировали в РВ8 и перемешивали при комнатной температуре в течение 20-30 мин для образования суспензии. №1ОН (6н.) добавляли к суспензии для доведения ее рН до 12, чтобы растворились белки, заключенные в тельца включения. Примерно через 2 мин рН суспензии доводили до 7,5 при помощи 6н. НС1. Затем суспензию подвергали центрифугированию и полученный в результате супернатант собирали, определяя в нем концентрацию белка на спектрофотометре. Супернатант смешивали с буфером для рефолдинга (ТЕА, рН 8,3) и инкубировали при комнатной температуре без перемешивания в течение 24-48 ч. Затем его концентрировали и диализовали, используя ТЕЕ систему и кассету РЬССС, поставляемую МННроте, 1пс. Полученный раствор подвергали ультрафильтрации, диализу и фракционированию на колонке с сефарозой 8РЕЕ. Полученные в результате фракции А9 и А10, содержащие рекомбинантный белок τΗΙΕΝ-β 8ет17, затем фракционировали на другой колонке с сефарозой 8РЕЕ для обогащения рекомбинантным белком (во фракциях А8-А10). Содержащие τΗΓΝ-β 8ет17 фракции затем очищали гель-фильтрацией (8ирейех 75 НВ 10/300) с получением белка τΗΓΝ-β 8ет17 (1 мг/мл) с чистотой более 90%. Биологическая активность рекомбинантного белка составляла менее 2-107 МЕ/мг белка.
- 8 020347
Получение ΙΕΝ-β-ди-РЕС полимерного конъюгата.
18,9 мг τΗΙΕΝ-β 8ег,- и 1,51 г ди-РЕС альдегида суспендировали в 26 мл 0,1 М натрий-фосфатного буфера (рН 5,0). К полученному раствору добавляли 400 экв. Ναί.’ΝΒΗ3 (Леток Отдашск, Ве1дшт). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч и затем подвергали диализу с 25 мМ трис-НС1 (рН 7,8). Неочищенный продукт очищали на ионообменной колонке с получением 2 мг ΙΕΝ-β-ди-РЕС полимера.
Получение человеческого ΙΕΝ-β.
Трансформированные клетки Е.соН ВЬЕ (ΌΕ3)-ΒΙΕ, несущие кодирующую последовательность ΙΕΝ-β, функционально связанную с промотором Е.соН, инокулировали в 250 мл среды 8ΥΝ (10 г/л добавки ке1ес1 коу!оие, 5 г/л дрожжевого экстракта, 10 г/л №1С1) с добавлением 50 мкл/мл канамицина и 50 мкл/мл хлорамфеникола. Затем клетки культивировали при 37°С в инкубаторе с шейкером при 220 об/мин в течение ночи (т.е. 16 ч).
250 мл ночной культуры, указанной выше, инокулировали в 3,0 л минимальной среды (10 г/л глюкозы, 0,7 г/л Мд8О4-7Н2О, 4 г/л (ΝΗ4)2ΗΡΟ4, 3 г/л КН2РО4, 6 г/л К2НРО4, 2 г/л цитрата, 10 г/л дрожжевого экстракта и 2 г/л изолейцина) с добавлением 10 г/л основной глюкозы, 0,7 г/л питательного Мд8О4, 30 мл питательных микроэлементов (10 г/л Ре8О4-7Н2О, 2,25 г/л 2и8О4-7Н2О, 1 г/л Си8О4-5Н2О, 0,5 г/л Ми8О4-Н2О, 0,3 г/л Н3ВО3, 2 г/л СаС12-2Н2О, 0,1 г/л (\1ЦМоО-4, 0,84 г/л ЕПТА, 50 мл/л НС1), 25 мкл/мл канамицина и 25 мкл/мл хлорамфеникола и культивировали в пятилитровом ферментере (В1оДо 3000; Вгип8\\1ск 8с1еи1аНои Со., ЕФкои ΝΤ). В процессе ферментации рН среды поддерживали на уровне рН 7,1 автоматизированным добавлением 37% раствора №Н4ОН. Содержание растворенного кислорода (ИО) поддерживали на уровне 30%. Питательный раствор (800 г/л глюкозы, 20 г/л Мд8О4, 50 мкл/мл канамицина и 50 мкл/мл хлорамфеникола) добавляли, используя программно-управляемый насос, который был запрограммирован на подпитку в случае, когда уровень ПО превышает 40-60. Когда плотность клеток (ОП600) в ферментируемой культуре достигала 180-200, 4 мл 1 М изопропил-β-^-1-тиогалактопиранозида (ГРТС) добавляли к ферментируемой культуре для индукции экспрессии ΙΕΝ-β, совместно с 30 мл питательных микроэлементов и 25 г дрожжевого экстракта. Клетки собирали центрифугированием через 5 ч после индукции [РТС.
Клеточные осадки суспендировали в буфере РВ8 (0,1 М фосфат натрия, 0,15 М хлорид натрия, рН 7,4) в приблизительном соотношении 1:3 (г мокрой массы/мл), разрушали микрофлюидизатором и затем центрифугировали при 10000 об/мин в течение 20 мин при 4°С. Осадок, содержащий тельца включения (ГВ), дважды промывали буфером РВ8, центрифугировали, как описано выше, и суспендировали в 1 л раствора РВ8 (0,1 М фосфат натрия, 0,15 М хлорид натрия, рН 7,4, 3% /\\П1егдеп1 3-14, 5 мМ ДТТ). После перемешивания в течение 30 мин рН суспензии доводили до 12 при помощи 6 М №ОН, перемешивая для растворения осадка. Затем рН суспензии доводили до рН 7,5 при помощи 6н. НС1. После центрифугирования при 10000 об/мин в течение 20 мин собирали супернатант, содержащий растворимый ΙΕΝ-β.
Затем проводили рефолдинг растворимого ΙΕΝ-β следующим образом. Указанный выше супернатант разбавляли в 10 л свежеприготовленного буфера для рефолдинга (100 мМ трис-НС1 (рН 1,6), 0,5 М Ь-аргинин, 2 мМ ЕОТА) с получением рефолдинговой смеси. Смесь инкубировали в течение 48 ч без перемешивания. После инкубации смесь, содержащую заново свернутый рекомбинантный ΙΕΝ-β, диализовали против 20 мМ трис-буфера (с 100 мМ №С1, 0,05% х\\П1егдеп1 3-14, рН 7,0).
Диализованную смесь наносили на колонку с 8Р-сефарозой (СЕ АтегкНат РНатташа), которую предварительно уравновешивали и промывали 20 мМ трис-НС1 буфером с 100 мМ №1С1 (рН 7,0). ΙΕΝ-β элюировали раствором, содержащим 20 мМ трис-НС1 буфер (рН 7,0) и 200 мМ №С1. Фракции, содержащие ΙΕΝ-β, собирали, основываясь на их оптической плотности при 280 нм. Содержащийся в них ΙΕΝ-β дополнительно очищали на колонке с гидрофобным взаимодействием (СЕ НеаННсате, Ви1у1 8ерНатоке Εакΐ Ε^λν), которую предварительно уравновешивали и промывали раствором, содержащим 1 М сульфат аммония, 20 мМ ацетат натрия и 0,05% х\\П1егдеп1 (рН 4,5). ΙΕΝ-β элюировали раствором, содержащим 0,5 М сульфат аммония и 20 мМ ацетат натрия. Фракции, содержащие белок, собирали, основываясь на их оптической плотности при 280 нм. Полученные фракции объединяли и концентрацию ΙΕΝ-β определяли белковым анализом ВСА (ВСА™ Рто1еш аккау, Р1егсе).
Получение конъюгата РЕС-ΙΕΝ-β.
К раствору ди-РЕС альдегида (296 мг, 7,4 мкмоль) в воде (1,46 мл) добавляли 2 М натрийфосфатный буфер (рН 4,0, 0,37 мл), х\\П1егдеп1 3-14 (1,48 мл, 10% в воде) и ΙΕΝ-β (14,8 мг в 3,7 мл буфера с рН 4,5, содержащего 20 мМ ацетат натрия, 0,7% сульфат аммония и 0,05% детергент). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин, затем добавляли водный раствор цианоборгидрида (400 мМ, 92,5 мкл, 37 мкмоль). Реакционную смесь перемешивали в темноте в течение 40 ч и очищали хроматографией на 8Р НР сефарозе. Фракции, содержащие желаемый конъюгат РЕСΙΕΝ-β, собирали, основываясь на их времени удержания и оптической плотности при 280 нм. Концентрацию конъюгата определяли белковым анализом ВСА (ВСА™ Рто1еш аккау, Р1егсе).
- 9 020347
Фармакокинетические исследования на крысах.
Проводили фармакокинетическое исследование на крысиной модели, чтобы сравнить время полужизни в сыворотке ΙΕΝ-β и ΡΕΟ-ΙΕΝ-β. Самцам крыс (250-350 г) вводили внутривенно в дозе 600 мкг/кг массы ΙΕΝ-β (п=3) и ΡΕΟ-ΙΕΝ-β (п=3). Кровь (250 мкл) собирали от каждой крысы перед введением и через 0,1, 1, 2, 4, 6, 10, 24, 48, 72 и 96 ч после введения. Из крови получали образцы сыворотки и количества ΙΕΝ-β, содержащиеся в образцах, анализировали иммуноферментным анализом (ЕЬ18А). Время полужизни в сыворотке ΙΕΝ-β и ΡΕΟ-ΙΕΝ-β составляло 2 и 20 ч соответственно, рассчитанное, исходя из концентрации в сыворотке в последних трех временных точках.
Пример 2. ΕΡΟ-ΡΕΟ полимерный конгьюгат.
Получение ΡΕΟ-ΕΡΟ.
К раствору ди-ΡΕΟ альдегида (267 мг, 6,1 мкмоль) в воде (2,67 мл) добавляли 2 М натрийфосфатный буфер (рН 4,0, 1 мл) и ΕΡΟ (10 мг в 3,03 мл буфера, рН 7,3, содержащего 20 мМ фосфат натрия и 150 мМ Νηί,Ί). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин с последующим добавлением водного раствора цианоборгидрида натрия (400 мМ, 100 мкл, 40 мкмоль). Реакционную смесь перемешивали в темноте в течение 17 ч и очищали на колонке с 8Ρ Тоуореаг1 (Токой). Колонку уравновешивали 20 мМ натрий-ацетатным буфером, рН 4,5. Реакционную смесь разбавляли до концентрации 0,3-0,4 мг/мл и наносили на колонку с 8Ρ Тоуореаг1. Фракции, содержащие желаемый конъюгат ΡΕΟ-ΕΡΟ, собирали, основываясь на их времени удержания и оптической плотности при 280 нм. Концентрацию конъюгата определяли поглощением в УФ-области при 280 нм.
Фармакокинетические исследования на крысах.
Проводили фармакокинетическое исследование на крысиной модели, чтобы сравнить время полужизни в сыворотке ΕΡΟ и ΡΕΟ-ΕΡΟ. Самцам крыс (250~350 г) вводили внутривенно ΕΡΟ (п=5) и ΡΕΟ-ΕΡΟ (п=5) в дозе 25 мкг/кг массы. Кровь (250 мкл) собирали от каждой крысы перед введением и через 0,088, 0,75, 1,5, 3, 6, 10, 24 и 48 ч после введения. При введении крысам ΡΕΟ-ΕΡΟ образцы крови дополнительно собирали через 72 и 96 ч после введения. Из крови получали образцы сыворотки и анализировали иммуноферментным анализом (ΕΕΙ8Α) для определения содержащихся в них количеств ΕΡΟ. Результаты свидетельствуют, что время полужизни в сыворотке ΕΡΟ составляло 9 ч, тогда как для ΡΕΟ-ΕΡΟ оно значительно увеличивалось, т.е. составляло 38 ч.
Получение ΕΡΟ-ΡΕΟ полимерного конъюгата.
0,2 мг ΕΡΟ (Сакйтеге 8с1еп1Шс Сотрапу, Тай\ап) и 4 мг ди-ΡΕΟ альдегида (20 экв.) суспендировали в 0,1 М фосфатном буфере (рН 5,0). К полученному раствору добавляли 400 экв. Ν;·ιί.’ΝΒΗ3. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Данные ВЭЖХ подтвердили образование ΕΡΟ^-ΡΕΟ полимера.
Пример 3. СН-ΡΕΟ полимерный конгьюгат.
Получение Меΐ-йΟН.
Трансформированные клетки Ε.^1ί ВЬЕ (ΌΕ3)-ΒΙΕ способные экспрессировать Меΐ-йΟН, культивировали согласно методу ферментации, описанному выше, для экспрессии Ме1-й6Н.
Клетки собирали центрифугированием и клеточный осадок суспендировали в ТЕ буфере (50 мМ трис-НС1, 1 мМ Ε^ТΑ, рН 8,0) в приблизительном соотношении 1:3 (г мокрой массы/мл). После этого клетки разрушали микрофлюидизатором и затем центрифугировали при 10000 об/мин в течение 20 мин. Осадок, содержащий тельца включения (ΙΒ), дважды промывали буфером ΕΕΌ (50 мМ трис-НС1, 1 мМ Ε^ТΑ. 2% дезоксихолат, рН 8,0), центрифугировали, как описано выше, суспендировали в очищенной МИЙО воде и центрифугировали при 20000 об/мин в течение 15 мин. ΙΒ суспендировали в 400 мл 50 мМ раствора ТИИ (50 мМ трис-НС1, 4 М мочевина, 2,5 мМ ДТТ, рН 10,0) и суспензию центрифугировали при 20000 об/мин в течение 20 мин; супернатант собирали.
Супернатант разводили в 2,0 л свежеприготовленного буфера для рефолдинга (50 мМ трис-НС1, 0,5 мМ Ε^ТΑ. 5% глицерин, смесь 10 мМ Ο8Н/1 мМ Ο88Ο, рН 8,0). Полученную таким образом смесь инкубировали в течение 36 ч без перемешивания и затем диализовали против 20 мМ трис-буфера (рН 7,0).
Диализованную смесь, содержащую Меΐ-йΟН, наносили на колонку с О-сефарозой (ΟΕ Атегкйат ΡΙκ-πιττ-ιΟη. Ρίΐΐκϋυτ^ ΡΑ), которую заранее уравновешивали и промывали 20 мМ трис-НС1 буфером, рН 7,0. Меΐ-йΟН элюировали раствором, содержащим 20 мМ трис-НС1 буфер, рН 7,0,и 100 мМ ИаС1. Фракции, содержащие Меΐ-йΟН, определенные по их оптической плотности при 280 нм, собирали, объединяли и наносили на колонку с гидрофобным взаимодействием (ΟΕ Атегкйат Нитша, Ρίΐΐκϋπτ§^ ΡΑ), заранее уравновешенную и промытую 20 мМ натрий-ацетным буфером (рН 7,0) при скорости потока 5 мл/мин. Меΐ-йΟН элюировали раствором, содержащим 20 мМ натрий-ацетный буфер и 150 мМ сульфат аммония. Фракцию, содержащую Меΐ-йΟН, собирали и проводили белковый анализ ВСА (ВСА™ ΡΐΌ^ίπ аккау, Ρ^е^се) для определения концентрации Меΐ-йΟН.
Получение конъюгата ΡΕΟ-Меΐ-йΟН.
К раствору ди-ΡΕΟ альдегида (74 мг, 1,7 мкмоль) в воде (387 мкл) добавляли 2 М натрийфосфатный буфер (рН 4,0, 374 мкл) и человеческий ΟН (22,4 мг в 6,5 мл буфера, рН 4,5, содержащего
- 10 020347 мМ ацетат натрия и 150 мМ ЫаС1). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин с последующим добавлением водного раствора цианоборгидрида натрия (400 мМ, 140 мкл, 56 мкмоль). Реакционную смесь перемешивали в темноте в течение 17 ч и очищали хроматографией на 8Р ХЬ сефарозе. Фракции, содержащие желаемый полимер-белковый конъюгат, собирали, основываясь на их времени удержания и оптической плотности при 280 нм. Концентрацию конъюгата определяли при помощи набора для определения белков методом Брэдфорд (Р1етее, ЕоекГогб. 1Ь).
Фармакокинетические исследования на крысах.
Проводили фармакокинетическое исследование на крысиной модели, чтобы сравнить время полужизни в сыворотке Ме1-йСН и РЕС-Ме1-йСН. Самцам крыс (250-350 г) вводили внутривенно Ме111СН (п=5) или РЕС-Ме1-йСН (п=5) в дозе 100 мкг/кг веса. Образцы крови собирали у крыс, которым вводили Ме1-11СН, до введения и через 0,083, 1, 2, 4, 8, 12 и 24 ч после введения; и у крыс, которым вводили РЕС-Ме1-йСН, до введения и через 0,33, 1, 4, 8, 12, 24, 48, 72 и 96 ч после введения. Из крови получали образцы сыворотки и анализировали иммуноферментным анализом (ЕЬ18Л) для определения концентраций 11СН. Время полужизни Ме1-йСН и РЕС-Ме1-йСН составляло 3 и 35 ч соответственно.
Другие варианты осуществления.
Все признаки, раскрытые в данном описании, можно объединять в любой комбинации. Каждый признак, раскрытый в данном описании, можно заменять другим признаком, служащим той же, эквивалентной или аналогичной цели. Таким образом, если прямо не указано иное, каждый раскрытый признак является только примером конкретной группы эквивалентных или аналогичных признаков.
Исходя из приведенного выше описания, специалист в данной области может легко установить основные характеристики настоящего изобретения и, не отходя от его сущности и объема, сможет вносить различные изменения и модификации в настоящее изобретение, чтобы адаптировать его к различным способам применения и условиям. Таким образом, другие варианты осуществления также входят в объем прилагаемой формулы изобретения.
Claims (17)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Пептид-полимерный конъюгат следующей формулы:где каждый из К1, В2, Е3, К4 и В5 представляет собой Н;каждый из А1 и А2 независимо представляет собой полиэтиленгликолевый фрагмент; каждый из Οι и С2 представляет собой связывающую функциональную группу:О в которой О связан с А! или А2 и атом N связан с атомом углерода;О3 представляет собой связь;Р выбирают из группы, состоящей из фрагмента интерферона-β (ΙΝΡ-β), фрагмента эритропоэтина (ЕРО) и фрагмента гормона роста (ОН), при этом атом азота на Ν-конце Р связан с О3;т равно 0 или целому числу от 1 до 10;п равно целому числу от 1 до 10.
- 2. Конъюгат по п.1, где Р представляет собой фрагмент интерферона-β.
- 3. Конъюгат по п.2, где Р представляет собой τΙΝΡ-β 8ет17.
- 4. Конъюгат по п.2, где Р представляет собой фрагмент модифицированного интерферона-β, содержащего 1-4 дополнительных аминокислотных остатка на Ν-конце.
- 5. Конъюгат по п.1, где Р представляет собой фрагмент эритропоэтина.
- 6. Конъюгат по п.1, где каждый из А1 и А2 представляет собой фрагмент полиэтиленгликоля с молекулярной массой 2-100 кД.
- 7. Конъюгат по п.6, где каждый из А1 и А2 представляет собой фрагмент полиэтиленгликоля с молекулярной массой 10-30 кД.
- 8. Конъюгат по п.1, где т равно 4, п равно 2.
- 9. Конъюгат по п.8, где Р представляет собой фрагмент интерферона-β.
- 10. Конъюгат по п.9, где Р представляет собой τΙΝΡ-β 8ег17.
- 11. Конъюгат по п.9, где Р представляет собой фрагмент модифицированного интерферона-β, со- 11 020347 держащего 1-4 дополнительных аминокислотных остатка на Ν-конце.
- 12. Конъюгат по п.8, где Р представляет собой фрагмент эритропоэтина.
- 13. Конъюгат по п.8, где Р представляет собой фрагмент гормона роста.
- 14. Конъюгат по п.1, где Р представляет собой фрагмент гормона роста.
- 15. Конъюгат по п.1, представляющий собой О XО тРЕСОМН X____ Ϊ нτίΝΕ-β Зег1Т где тРЕС представляет собой фрагмент метоксиблокированного ной массой 20 кД.
- 16. Конъюгат по п.1, представляющий собой полиэтиленгликоля молекуляр- где тРЕС представляет собой фрагмент метоксиблокированного ной массой 20 кД.
- 17. Конъюгат по п.1, представляющий собой полиэтиленгликоля молекуляр- где тРЕС представляет собой фрагмент метоксиблокированного ной массой 20 кД.полиэтиленгликоля молекуляр-
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US8507208P | 2008-07-31 | 2008-07-31 | |
| PCT/US2009/052347 WO2010014874A2 (en) | 2008-07-31 | 2009-07-31 | Peptide-polymer conjugates |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201170278A1 EA201170278A1 (ru) | 2011-08-30 |
| EA020347B1 true EA020347B1 (ru) | 2014-10-30 |
Family
ID=41609027
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201170278A EA020347B1 (ru) | 2008-07-31 | 2009-07-31 | Пептид-полимерные конъюгаты |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US8273343B2 (ru) |
| EP (1) | EP2313457B1 (ru) |
| JP (1) | JP5639585B2 (ru) |
| KR (1) | KR101533757B1 (ru) |
| CN (1) | CN102131844B (ru) |
| AR (1) | AR072850A1 (ru) |
| AU (1) | AU2009276458B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0911722B1 (ru) |
| EA (1) | EA020347B1 (ru) |
| HK (1) | HK1158236A1 (ru) |
| MX (1) | MX2011001167A (ru) |
| MY (1) | MY156568A (ru) |
| NZ (1) | NZ591167A (ru) |
| TW (1) | TWI421093B (ru) |
| UA (1) | UA104146C2 (ru) |
| WO (1) | WO2010014874A2 (ru) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107530403A (zh) * | 2014-11-06 | 2018-01-02 | 药华医药股份有限公司 | 用于长效型干扰素的剂量方案 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050107277A1 (en) * | 2002-01-18 | 2005-05-19 | Lin Kochung | Polyalkylene polymer compounds and uses thereof |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3643575A (en) * | 1967-10-31 | 1972-02-22 | Nippon Kogaku Kk | Exposure-measuring device in a single-lens reflex camera |
| US5643575A (en) | 1993-10-27 | 1997-07-01 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
| US5919455A (en) | 1993-10-27 | 1999-07-06 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
| US5951974A (en) | 1993-11-10 | 1999-09-14 | Enzon, Inc. | Interferon polymer conjugates |
| US5824784A (en) | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
| US5932462A (en) * | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
| EP1191189A1 (de) * | 2000-09-26 | 2002-03-27 | Siemens Aktiengesellschaft | Gasturbinenschaufel |
| US7257546B2 (en) * | 2001-09-04 | 2007-08-14 | Yahoo! Inc. | System and method for correlating user data from a content provider and user data from an advertising provider that is stored on autonomous systems |
| EA008505B1 (ru) * | 2001-11-20 | 2007-06-29 | Фармация Корпорейшн | Конъюгаты химически модифицированного гормона роста человека |
| RS20050202A (en) | 2002-09-09 | 2007-08-03 | Nektar Therapeuticals Al.Corporation, | Water-soluble polymer alkanals |
| US20040142870A1 (en) * | 2002-11-20 | 2004-07-22 | Finn Rory F. | N-terminally monopegylated human growth hormone conjugates, process for their preparation, and methods of use thereof |
| JP2006519170A (ja) * | 2002-12-26 | 2006-08-24 | マウンテン ビュー ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド | サイトカイン、ケモカイン、増殖因子、ポリペプチドホルモン、およびレセプター結合活性が保存されたそのアンタゴニストのポリマー結合体 |
| PT2644206T (pt) | 2003-05-23 | 2019-07-10 | Nektar Therapeutics | Derivados de peg contendo duas cadeias de peg |
| US7405198B2 (en) | 2003-11-24 | 2008-07-29 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated erythropoietin |
| US20060024953A1 (en) * | 2004-07-29 | 2006-02-02 | Papa Rao Satyavolu S | Dual damascene diffusion barrier/liner process with selective via-to-trench-bottom recess |
| EA200700380A1 (ru) | 2004-08-31 | 2007-10-26 | Фармация Энд Апджон Компани Ллс | Конъюгаты глицеринразветвлённого полиэтиленгликоля - гормона роста человека, способ их получения и способы их применения |
| US7524318B2 (en) * | 2004-10-28 | 2009-04-28 | Boston Scientific Scimed, Inc. | Ablation probe with flared electrodes |
| EP1869079A2 (en) * | 2005-03-11 | 2007-12-26 | Siegfried Ltd. | Di-polymer protein conjugates and processes for their preparation |
| WO2006094530A1 (en) * | 2005-03-11 | 2006-09-14 | Siegfried Ltd. | Di-polymer protein conjugates and processes for their preparation |
| EP1834963A1 (en) * | 2006-03-13 | 2007-09-19 | Siegfried Ltd. | Di-polymer protein conjugates and processes for their preparation |
| CL2008002399A1 (es) | 2007-08-16 | 2009-01-02 | Pharmaessentia Corp | Conjugado sustancialmente puro que posee una porcion polimerica, una porcion proteica (interferon alfa 2b) y un ligante alifatico de 1 a 10 atomos de carbono, util en el tratamiento de las hepatitis b o c. |
-
2009
- 2009-07-31 TW TW098125858A patent/TWI421093B/zh active
- 2009-07-31 BR BRPI0911722-9A patent/BRPI0911722B1/pt active IP Right Grant
- 2009-07-31 AR ARP090102949A patent/AR072850A1/es active IP Right Grant
- 2009-07-31 EA EA201170278A patent/EA020347B1/ru unknown
- 2009-07-31 US US12/533,147 patent/US8273343B2/en active Active
- 2009-07-31 MX MX2011001167A patent/MX2011001167A/es active IP Right Grant
- 2009-07-31 AU AU2009276458A patent/AU2009276458B2/en active Active
- 2009-07-31 JP JP2011521347A patent/JP5639585B2/ja active Active
- 2009-07-31 KR KR1020117004412A patent/KR101533757B1/ko active IP Right Grant
- 2009-07-31 MY MYPI2011000446A patent/MY156568A/en unknown
- 2009-07-31 WO PCT/US2009/052347 patent/WO2010014874A2/en active Application Filing
- 2009-07-31 UA UAA201102277A patent/UA104146C2/ru unknown
- 2009-07-31 CN CN200980130470.7A patent/CN102131844B/zh active Active
- 2009-07-31 EP EP09803633.8A patent/EP2313457B1/en active Active
- 2009-07-31 NZ NZ591167A patent/NZ591167A/en unknown
-
2010
- 2010-12-29 US US12/981,183 patent/US20110098451A1/en not_active Abandoned
-
2011
- 2011-11-25 HK HK11112846.8A patent/HK1158236A1/zh unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050107277A1 (en) * | 2002-01-18 | 2005-05-19 | Lin Kochung | Polyalkylene polymer compounds and uses thereof |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| JING LI and W. JOHN KAO, Synthesis of Polyethylene Glycol (PEG) Derivatives and PEGylated-Peptide Biopolymer Conjugate, Biomacromolecules, 17 May 2003, vol. 4, pages 1055-1067. See the whole document * |
| PASCAL BAILON et al., Rational Design of a Potent, Long-Lasting Form of Interferon A 40 kDa Branched Polyethylene Glycol-Conjugated Interferon alpha-2a for the Treatment of Hepatitis C Bioconjugate Chemistry, 16 February 2001, vol. 12, pages 195-202. See the whole document * |
| SAMUEL ZALIPSKY, Chemistry of Polyethylene Glycol Conjugates with Biologically Active Molecules, Advanced Drug Delivery Reviews, 30 September 1995, vol. 16, pages 157-182. See the whole document * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2313457A2 (en) | 2011-04-27 |
| KR20110059600A (ko) | 2011-06-02 |
| TWI421093B (zh) | 2014-01-01 |
| BRPI0911722B1 (pt) | 2022-09-13 |
| AU2009276458B2 (en) | 2014-06-19 |
| AR072850A1 (es) | 2010-09-22 |
| TW201008583A (en) | 2010-03-01 |
| MX2011001167A (es) | 2011-04-12 |
| BRPI0911722A2 (pt) | 2016-09-13 |
| MY156568A (en) | 2016-03-15 |
| JP5639585B2 (ja) | 2014-12-10 |
| US8273343B2 (en) | 2012-09-25 |
| CN102131844A (zh) | 2011-07-20 |
| CN102131844B (zh) | 2016-03-02 |
| EA201170278A1 (ru) | 2011-08-30 |
| NZ591167A (en) | 2012-06-29 |
| EP2313457B1 (en) | 2020-01-15 |
| AU2009276458A1 (en) | 2010-02-04 |
| US20110098451A1 (en) | 2011-04-28 |
| WO2010014874A3 (en) | 2010-05-06 |
| HK1158236A1 (zh) | 2012-07-13 |
| UA104146C2 (ru) | 2014-01-10 |
| WO2010014874A2 (en) | 2010-02-04 |
| EP2313457A4 (en) | 2014-10-01 |
| KR101533757B1 (ko) | 2015-07-03 |
| US20100029907A1 (en) | 2010-02-04 |
| JP2011529910A (ja) | 2011-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20200246420A1 (en) | pHLIP® peptide-mediated epitope tethering at cell surfaces | |
| CA3196814A1 (en) | Uricase-albumin conjugate, preparation method therefor, and use thereof | |
| AU2008286742B2 (en) | Protein-polymer conjugates | |
| EA020347B1 (ru) | Пептид-полимерные конъюгаты | |
| EP3862014A1 (en) | Treatment of panx1 associated diseases | |
| CA2782624C (en) | Therapeutic use of protein-polymer conjugates |