HU228862B1 - The use of an ingenane compound for production medicament useful for treatment cancer - Google Patents

Description

EGE 1NGBKÁN VEGYÖLKT ALKALMAZÁSA RÁK KEZELÉSÉRE ALKALMAS GYÓGYSAERKÉSZÍTMÉTíYELŐÁLLÍTÁSÁRA

A íahUtoáay tárgya egy tttgenán vegyőlet alkalmazása rák vagy más, nsopíasztrkua sejtekkel kapcsolatos állapotok kezelésére alkatom gyógyszerkészítmények előállítására.

áIMÁiM^hátiwe

Szoros összettlggés áll fess a napsugárzás otoaiholya komponensének kitett tó és a bőrrákok, mint pl, a rosszindulatú melanuma és tem-tnetenomaszerő bőrrákok, fiiként a banális sejt kareiaősfek (8CC) és pikkelyes sejt fcarctnórnak kifejlődése között, Ezeknek, a rákoknak a gyakorisága rohamosan növekszik világszerte, Angliában, 1994-ben 4,ÖÖÖ újonnan diagnosztizált msszinduUtó tselanosát, és az utolsó lö évben 8ö%~os növekedést regisztráltak (Wessex Cancer Ttttsh 199Ő), Az Egyesült Államokban megközelítőleg 34,100 új eset és évente 4%-ea emelkedés várható,. Anszttábátoa Queenslaad-bea a legelterjedtebb a nrelanötna a világon, de a korai detektálás és a széleskörű egészségügyi propaganda kampányok, valamint a fényvédő krémek használatának bevezetése és az tdtóbolys megvilágítás redukálása segített csökkenten a halálos- esetek számát. A BCC-k jelenleg 1ŐGÖ közül egy embert érintenek Nagy-Britannia népességében, és az előfordulásuk több mint kétszeresére tót az elmúlt 20 év alatt (fesperíal Cancer Research Fund, UX, 199?}. Egy millió áj BCC-s és SCC-s eset álsgaosztizál&áto számítottak az USA-ban 1997-hen, összehasonlítva az 1990-ben előfordult Ő0G_SÖOO és 1980bsa mgjszöált -406,000 esettel (National Öceaaic and Almosphstte Ádministtatiou U.S.A,, 1997), Ausztráljában nem veit ok sna, hogy egy hasonló növekvő gyakoriságra szintén ne számítsanak a napsugárzás és az UV-sugárzás veszélyeisxek széleskörű népszerűsítése ellenére, nfivel Queenslaod népessége van a legnagyobb veszély* nek kitéve.

Az összes tórák 90%-a a bőr azon területein fordul elő, amelyek rendszeresen ki varrnak téve s napfénynek vagy más ulttsibolya sugárzásnak; az ü.V.R. a felelős a bőr leégéséért és összettiggéshen van a rosszindulaté mtóaomskkal, az U.V.A, pedig kapcsolatba hozható a bőr korát öregedésével és a BCC-k és SCC-k kifejlődésével (Wessex Caneer Trust, 199ö). A gyerekkori napozás kapcsolaton van a rosszindulatú metenrta kifejlődésével fiatalabb felnőtteknél. Egyéb rizikó faktorok közé tartozik a genetikai fogékonyság (világos arcszín, sok bőr szeplő), kémisi szennyeződés, megengedettexhtáli Röntgen-sugárzás és bizonyos szereknek és pesstíetáeknsk való kitettség. A sztmtosziera ózott rétegének eívékonyodását is úgy tekintik, hogy texájtól a bőrrák hosszú ideje tattá növekedéséhez.

A sebészed eltávolítás ezídeig a legáltalánosabb kezelési ηιόφ a rosszindulatú melaaomáknak, BCCksek és SCC-fcaek, Ez kivitelezhető elekírodeszikkáeiő és kikaparás, ctyosehészet, egyszerit széles kimeiszés, íttikrografíkus sebészei vagy lézer terápia tormájában, Más kezelési módok) melyeket akkor alkalmaznak, amikor a rákot kifejlődésének már egy késői szakaszában detektálják, a kividről ható sugárterápia, kemoterápia vagy egy kevésbé kiterjedt bfeírtttsnníerápia vagy fetedmattóns terápia. A kezelési mód kiválasztása a betegség típusától és előrehaladottságától, továbbá a beteg korától és egészségi állapotától függ (National Caneer Instítute, (ISA, 1997),

A jelenlegi kezelési .módok mindegyike súlyos kódútoktól szenved, A legfőbb gond a rákos sejtek csekély folísmerbetSsége a khsetszés helyén, és a kiájniás nagy vsdósrtn.ilnégo_s árts szükségessé teszi az ezt kővető sebészi beavatkozást vagy kezelést további elvéltozésok és hegesedás veszélyével, Egy publikációban a nemtökéletesen kimetszett BCC-tere 3Ö-ő?9s-os arányt közöltek (busman és Liggtos, !99ő), A sebészettel össze© * * ¢. S- »

Aiggá tessssszztspgteteé istetey viwnaaí^ő sssjt gtetetete és a tetmltóesfe kssekázabste aiszeke.áéeét ttezhete Metemh étegektes ssagy a vs®ö^ tette Agy e sék tet stezsztézimket képte s« eve» tes sebészeti tevtestes tejéig és a késéi kiújtep ;te & isáktez vsteg áiíaitess. A sebétet jtesslegí <stetetei, test pl. besegázzást teté^b és kewtetesz, testet ag ánarnsss^amdé és csekély speeifkite veszélyt tetetek As tetstetepiál és gÁitepiát teste a iegígésateebbsste de ezek mteteBs alkateszlte te lészktáieg steg tetetekte telik.

Bitetekig egy kteBe gyégyzees az im», earfyet xtsxte egy kiégte steszteAsx, BCC-te vagy BCCte ztelzsaxss.ék, tetetem stesteteis & mwséfteet vagy tea készteti őket, feögy epsgstéztea {sgjte· Itest) tehtete át atelkkt Agy wteyi jtetetete a?. étet kMlvevé egészsége bfeetete. Gyeketbtesz ez teg sem etetek A jeleskeg Akteezteé gyúgyszete sem asm szelektívek sem asm gesehtevste c»z Átetete

A bites bkssteg teste satesess altesssazza a helyi kemissáyie teme^déjM Szkws thteme AU tetei gydgyszte w s testek testes, amelyek végezte Gteikeztesyvlskel jásissk, mtes gk a ctetetess alkatomba (Aáele Gtes^ Qetetete tetette ©ftetette Retetek, ssw, közlés). A legiéhk veszély ss testesas telve! kégsééese, aste alatt a teste sejtek folyamatom atetetek. Egy exteteszs, wly a Aetesses semzetség ateaysiBöl (kasgans atom vagy az telég; almája) sstetófc» és jeteíés stezyieéghess iatekssaz steaszteb gBktetefcak *GoW tsév alatt tettefete Attetetétes sssstv-tetgst tetei. kteteteykétk a tszpkáték 4$ a szétess tetetettek ketestes. Azotaa a kétetehy egy ksssteaá kitekéi ksséteítess a BCX.Ak.tei szettem tetetstetsak tetetitek 28 teteg közéi 14 tstestet makacs teásé s kezek IseiysBl stezssate szövet kssziulégte vizsgálata tegtixts. Kébtey «tetess a kezelés helyette bsszteégbi vszsgálatss. a sestetteíltel szövet teágysxéááte ölzessytete a tesxákss szövette. A szeszük íelkivták a ügyeltet az teélagtexls és ez 6a»

Aswtaa sxte-tteteteyas kteletessyek Bátáteexsk, tegy a steessys sseáv eagzktsteskst steg ttestlsg kstsztsaljak s% kiteltem aégi gyteétbslte a tsapBAsk vagy szétess kaméztesk keateéatee feteyte aíkettsek

Aa Bsg^ífAtetses?<se észtet tevteyséte tssévög teltetem sz Bteptetete stevseteégééi tetette sztszagtest tetetettek a tegs gyégyászastes. A sseszateslget egy étet görög mvus égte sevetek el ti sztéléikéi tektetetei jektetös tette tctetettyeégéte (Pesns, IW), Bzektssk ssz tetálytshsak a tagjai k&íli csak szasiatsábass vizsgállak meg; ssélsássyat tsztettesyeaaz. A. ©eawáség tetséklvél vteezéksssy,. a Ide, alaeeegy tevésé g?ágy«S» ste^ktél égtem s tetekig te tikig tejte, Btestek e steteyetek és tetetettetek ttetestete szélé ssagtezt tetetegyik Wtettey stetestesste és e tetetette omslktei ette és a kétetmtete tetette gyatets tetette vagy eszk stegywteakte ttek fe. Azi éili^te Agy ékítek ige® steáte klkaptel wa> tea teává a ssggsétekkkil, s Gtese látetesktek ks.ik$szöteg telte tttextessé', íyékszesmkesg Átete tetess vagy kiteAgy-gyséksákte *Biteeges IBte* és tetesítet késztetik egészest a teteiste skklse'· smAgtekCWá0tesBBesttellíBksAÍb8J_s ISk, tétek

A séktews ekkvite tetesiá jMzgmts texzkte a teste kte tetess! Cssseet Izsttee ékel telik te steezBte stetey ésjisél eztemszé U4,éöí> ktetete teíék tsagystestes B'sgteíte ikteeg tsteekék. Vtes tessszgateéi, tevstesyss szszszgwte atfeshetes ktetesg és ssvae ksvstessi ezfateltek a bstezpteatetó tettess élte 6osr eaíteaalM testem. Négy &jt vizsgáltak, ttek egyike, as teptete pepte tetette tetete μ «1« egyik kisteaii« mg az éögtetes tersetek IsgteHsb pteite® és as tettette mésfte gyesbe aktete mitek egy saw kivrneá», egy eteteea tessstem * *- * illetve egy késfefeú msz^mtöta; (BsUda és Fsfegsofel, 1953). Az ssolsó öt öv tattefeayos és sme bOsfelofesssk Sssosfegí&fefe az etöfe^ea átóv aayagok sokíéfeségéS;. így pl. <1B ás feísa-fespássk, 8awarndek, smwk és felfesjék, iám fel sfebm s sesszmé^bes» és ssfew- biö&tóv hatást kífeSísek státó pttótiv aM fetetefe eiÖjelK Mokfe a «Mákét «z 1. tábfesufesa fegfefesk ösm EMWfem áz wsaíség jél Ismsfe ássál, hegy 1sbw pmussfefekgg sása pl. ífeéMfesfeessket termel (ilecker B.: Cocamsaegeas fsera Esg&ofefeMwe ásd Msj^s'fesesw ás *S^xadsaa sa Fhsmsaegsesy sód .FfeyíöoMsoisky” (W&gsus ss &U Bpsfegsr Yedag kfetó 1979,147-165.O.)),

* X mn χ

φ » $ X 4 > m m ΐ ο $ X 4 4 * X 44 $

X <1 4

Í4 X 4 4 «4 <v

........

Λ

<

* > X ί * ΐ X Ü ΐ

X I Η X X

** «Λ * « « **♦

A legfetetevekben mmstertayozeit &j ebben a esepedtes ax Esgdarte fefefete t (szintezte A, étet Lg 8. ©íyAíW tm-K tmtely labdacsot viselő kntystej, kígyó-gyom, tmeska haj, Qnsestetesszthma gyesnés virégos-fejÜ kniystej kőxőaségea neveken ismert. Ez s tedny kiterjedten előfordul a bóptssi országokban, Itefeétw .Indiát és Észak-Atssztróbát, beleértve Queeaslandet Az *£»eydepedia of Conmmn Nabnal la» gsteents Vseá jő Food, Dntgs te Cnsttete (Letsng és Fostez, 1998) sxerint az egész vmégzsl és termést bezó oővényí teszteljék a gyógynövényem, elsősorban köptető kéazimÁyekb«z és s tebteóteklis gyógyításban légzési izsztetetességsk, ndat pl. tótat, bmatósx, köhögés és szántóba kezdésére, Élben a dkkte közéife begy ex Btgjóoróáa pifefete aktív sfeolástete a telis és s sfekrós sav, és egyéb vegyítitek. Is efefeteinsk benne, kötek tntsxpónek, artednek, Üawteok, SfdMc, fenstalabad savak, Iteöxfe tarok és gyanták, Ezen koagxmznzek közöl a sbikim sav egy lényeges kőzhtermék ax aromás saanesavak szfetéziséte, és tei'rfek, teígy katefengéa aktefeal rznázltelk egerekbe» {&«» és ösmas, 1974; Stsvrio és Stoliz, 197Ó), la&apevic és tartat (19k8z) jsteofeafekat, jogtanokat és egy pepbdasab ame8 teiztekltkes átapéot azonosítottak az tepöte?fe pspfes'-te, A jatrafimokráí megállapították, bogy a tetettem ismert jztetektól eltérő te&rmáeiővaí maáeSsetók, A jsimftetel azt is smgfetepltfefek, bogy s mriteteló dberpének egy oly&n csopmtjtez tartannak, amelynek tagjait a»g tehetne számolni áttekintve a korábbi tetamáayoleat Azonban ssmmlfefe Wláa vagy feltételezés a jsirofenok vagy a® dj pepitán vegyítitek Wlégiai stövitésárs nem miélhoté tetetek és smmssfek javaslat $m erre vettanzólag, hogy ezeket a vegyieteket te tehetne használni bársnifete femtekölögfei eék-z,

Egy tetetettem megjelent sikkben teste az .éoyfeeróávpofeeeó' hiteséből (gntesj) származó nagyteste dglian éitegró&rómter szelektív ehoiorteítását Ez egy nagyon telkes SÉtadoNigéoábaa található sövény, amelyet kerti postaidként alkalmaznak, és 'btess arról, hagy báni gyégyszefeém testei)éL Ezeknek a vegyüteteknek egyike szelektíven títetoxikna az A-49Ő jelű banda vese tetetem sejtvonaba, és ez a tette több mint 19989-szez nagyobb az adttarnycin tatorteltásánáí(Farepe et sí, 199ő).

Egy tebtenkm bejelentés sorozatban Tamas igényelte sz AspAerófe fekte növények és kivonataik sí» keltezését tetetek; eélefoa, beleértve a tantor terápiát (EF 3309941, AlOfeszei óstóbggő ke«$lexet és sx AXDS-t (HU 90Ő799), étekké sz rómmitás fokozáséra és szbfeagébs szerként nyílt sebek kezdésére (DE 4UWM).

tgy, míg a kölösfeözB Bsg?fe>rófe kéavkméayek toteteles.es sfeivitfemél tefe eteteket lövátegsimb ilteé Faiepe et al, 199Ó; Oksoz et ai, 1998), art teltek, begy nem este elyan vegyétek vasnak jelea fegtefeb égy Sgtete fejtem, amelytói art ktehék, bsgy ksteegések (Evans és Ostsw, 1974; Stevrfe és Srólz, I97fe Esete, 1978; 197¾ femem tegsléhb egy tej bfe-steliéfe és femete&egiró betétes {Qna<ttea et sl, 1993), és egy másik; fej tekkessb az .BW-spemfess etetem smmmfeést a iXmliitenfetetem (tel, 1994),

Ttetetmk ssefete mms smgteitefe vagy seprtfeekteteö mkk .Sépétefe tefete?! szfamró temely eznatea baetefetteró ítmtzimfetete mtemms vagy 8€C-k kezelésész, A BCC feyterófe peptes fe jebfeékróte ktfetej vagy tefes gyste) tejével Wtó bte tetetette tmgjete egy smsvbtettteym dkk, Weefem IX és Ckiek 3. tetms btemefe «£ fessél tel emetems” (Banális sejt kmtefem tea kezelése) eted gakbkteéfe (197S), A szemük art teljék, begy gyégjdtó fefejtetegttet tetfeteferttek eam sfevény tejes tevének tte fetew éfe, és széles tetet bsstejjék bárt gyégymetkém tyslteemsk, szettetek és estette gyégytefca. A rtéztefefete zébátty mves Skfeey-bez tetetette fegtefe gymzmteéiyek teeléséte, A fesfe szemük a teegtól elteték, Imgy tezgzkzt kezeljék te éven kemtell febksztes BCC-m, ^βΛ fetegef egy Μ éves íérfe 1271 óta aaőrváaywm tegvfegáfek e R»ys! Brissfeaae liespitsMxtm Au egyik teke» klifefe fezáfe sejt kteieöteí állspítteik:meg fele a mellkas élte» részé», steíyet az egyik szélétől vek vétesy minta hisgsteájávzl igesefek, Néhány toppal később» aszta a klepste tóy« halágyait» s beteg testte tmp iSatah ez £epé»íte pspfe nedvét th sap»n kérésztől A terület erytferfete vélt és azután p»st»lássá (geoByhőlyagoa), ami te» a lázié leháfeeit. Amikor a beteg hat Íróiról a kezelés ötén visszatért» Woegyezeü, fegy sehétóleg eltávolítsák a teswtefet ksgeseáás kis tesöfeét, A tóbkszArfe szetaő ítetefe heg szövetet nmtsróüt» amely ssagrón tróhény fektess gyaüadásoa sejtet tamíwazo^ 4e m mstatót »rrte tfeyfegte vásszamaíadt teste “

A eaeteék azt éllkjte, hegy “«& a közlést semm&éfspsn nem feli a terápia egyik tanyának ajfelwfcéat vetsfeh Található séísásy cikk, melyekben a seáv korrőróv rómaészeíéró és kismértéké sasnskirsstxltea figysvktebtek, amit a mxfeteők égpósírótA /mgfes--sz»l tötfeaS házilagos kezelése okozhat (Eke T,_s 1994), Az törteik valészfcrólsg, hogy a Wéeáoa és Ctek által késéit fete az .& pspfe oedvének irritáló aktivitáséiról esőd» és hogy» »te a >SróM Xtaásmr* kivonata esetéfes Fmreis és mt&ai festék (198¾ a vssszsterzdé bsaw sejtek tólélésések igen nagy & rizikója egy ilyen feteór eretltesyokónt létrejött heg szöveted vagy a hsgszfeei: alatt

Vizsgálattek sorért meglepő mádon tó találtak» fegy hárma kölöséfezö Reptette fejből, fegteteór yxgtes, Rnptaéts Afea és fegtemte éwnm< származó növények nedve spteőfetet gételje három ekérő hamsán tessz sommal afeteedéfek beleértve a ressztetefe (asahgnas) oselanomát, tea íáhaesróen naegállapteiksk, hegy nagyon atamy kőstenrteiókfen az .&'. ps?pfe ás az < éter nedve igy fefekélja a rosszlnáelatá xaelsaoma sejtek difeeróálődkte, fegy azok teenokte a normális njelanoeíták morfológiai megjelenéséhez. Hasonló vzgy még feaesmtykbk fewettófeéktel egy tóráimmá shmsláka a tefeltefetes gén pmrwte skdvdsidját és egy riporter gé» «agresszióját MWét makogna mfewte sejtekben, Az etetesyfe sasért kdiöoösen assgbpöek, mivel a mehsnmtat simáról» amelyet késztetek, elited!» vök az feszes» ezzel szemben tesztek, hmMh fetefefepiás szerrel törte» gátlásra (teytefe és Persona, 19W

Az első zzem$mn estetk a íarólnróny tárgya egy ingeaán vegyérót slkslmszéss rák vagy más, stepls&tefes sejtekkel kapteshte állapotéit kezelésére alkalmas gyógyfessrkteifetey előállitására, ekei az eaáhsh vegyfebt (aj altWi&slö az ékgzfefeks tmpfe, &pfefeár éte és/ragy jgjgróorbáa fetewtek' sedrékéi %%~ es terfeial fegeett ea&ahélázsak (k) tefeálja a teullteiessfe gés sfeyálóéáaái és (e) képez a tikos sejteket Mgs&i vsgy sz^etedifete gátotei» de an fel fetyégesest a wmáhs rwteslls fefefesziokra vagy spetttáé kátefessált feteitedláfep ahol ez etalfeit kktmtfe 15 pestet 2F€fe» teteö telsgfessfet vagy aestees kezelés te» is mgmteá;

IWytese a ve;gykbk»kí képestek/ gtefei legtekk agy sajtesfe mpteöMt se tefeásk kfekk MWtfe, ΜΜ22Ο» feM23?» MIM, Bíé» UMiikR ftsU» AM§» MCF7, MCC1Ó fe C»l»lé, kiég:

eteyfee^m a wgySíetW kéyWefe géfesl az kíkfeöt sejtek tegwsdását vagy k»pes,W dkfesselkbfest iteskáfe ez MéBÜt sejtéklrtefegfefeyö-sebfee a vegylfei képes a teatets teletelték és/vagy T sejtek tteiierfeiéjéi i&hrkéM

Bőeyéte a vegykfe sz él, gepte vugy E. éim tekéken vsa jelte ** »*\ »** »*** ·*.** * *

Bgy toifei ssto^ms ssseto § tóátehy tárgya totoi e SltotóláogsmlÓOssgsí W vegyület Rgy totói sm^esi szerbi a iák bőr to, msgfedtoű míkm, Metfei sejt Mtte, pikkelyes sejt kattotog tei& sejt kssdtóms. vagy ssetos ketetols.

Sgy fetoki sstogmt sstok a gysgyestoissitosty íegikilis adegettea Μα», ®gy tevfes srnsptó ssensi a tik setoi wae^ tütoik, vtosgtofe, pntoatoik, toksyskíik vagy tolkük.

A vegyik» elwybssís egy fmufelögbíhg sifegsiktó totoévat vagy Mgtóvel együtt etetemsfe

As Atgstejiafes jste livő yeg>etfeto ttotokjatotstók, psgtsfek, partotok is hgstótok Akti a vegyt&t egy jtoa&ty aa etoytoa a Jtogwie 4e saste&taai tol <199Sa) togtofetót S kettórttorivat se toiktok, A tartoésstesss· elitorfei jaütose pegltor is pasai» szteizakbas toábki stotóitsfeto igyetktok mig< Β» saegtttoa legkijik se sBMi, 1 tolásaim megtolt ssstoitotáket is ssxsúóg&k&ts nyers kprnt vegyietek aa Aipittoár eetotóig estess akvisylajtaji.bse togpaffibaíik (Mspsto el si mks, b_s e; Mm et al, |»}>

'}

* X *

X ♦ * X X X X mx xxx X X X x í X

X

X XX X X X X

X

X

XX X X s XX

Η* ί * t ΐ « 4 ί * ΐ US! ί * * ί ψ

i *<f ί ϊ ΐ Μ * ♦ <*** *** χ ·>

** «φ >»

X *** «φ a *

A vsgyitote as afehbi tesogtaOi vétesjok ki:

8,8,94949-450010^000^01--3-^5:^011-041-15-4410^1-^5155055 (pepfesfo); Í5-|>^W^öXl§><s&fitoálQS>J4-ö3«>>ftöf^Í),í lE-<l&<jmsfe 1); 2,5_t?AH'4jeaa8e«teti-3-bmt»I.«ö3d»í5«-íádre3d-jateo&«‘6(l?)JU'-<d^(jaW^i2);

2,539-A5sset55XÍ-3-het5ZO5l-í5S5-ő, 1A-őihitiJztxt-T-feofeshotli-eai-Á-oikoősxoslte-jekofeAXr?), 1 tekésa {jsizöiatt 3); 23,944.tefeaacetexi>-Míaas5ojl~^i.845«d&idmt»7-fcteiti’rdí-e3d>j&tre^-Ő(n},H^dÍáa (jateAs 4);

23,7,9,14-|5et505aeetefe3leoaoikttfe-835dil4t&éte-jaisi4a-ŐiiÍ7}41.ő-5liésxíjahx4'éaő);

29-<0041--5S5§5555Ol--3'«55gsMt;

és győgyészteilag eiiogadfeste sóik vagy észtereik.

A vegyStet atkskixsz&ite olyso készitetétsyhste atasiy sstég 8-atós-beteá>feídrofetódfet vagy M« -hiihvid--9,K-dtea;iil'-ptol4o is teti&fetsz,.

A &tálmá8y szettel alkalmasait vegyidet mfegstllAs egy tek kezelési eljAste, atöely íttagéhaa fog. lalja egy tslétóksy szoíiai Aatezttü ve^s?8kk sikeitetes baiéfessy toesatyiségéitsk beadását egy Syw fetseiéste tetszendő etalifetA, hteaytet a dk egy eted tsaw- Még efettyAs-ebhes a tek a kővetkező ssegoztbats letetetek egyike: ssisstekdste Iteigom} tesAotoa, egyéb Mitekofe be^tee & Metfeá sejt kataisőte, pikkelyes sejt telsdknét és hazáin sejt kamAteA tdőöték, xtestagbélsAk, gsztenatasük, nsehsyaktek és welkáte

A tel AAy szedni a&tató vegyidet adagolkete egy eljtóshaa daganatos sej A pAiétaiiv akddlásfesak gkdásées, atody abban éd, hogy a sejteket éhtekez-fehe testes: egy aaü-groldesaliv s-aemtyiségíl teldofetty etesd d Attsteate vegyfeadel A sejlsket ez elv vagy te te? kezdhetjök,

A tefetefesy szete -Aatesawit vegyidet adagoihafe egy eljátetea Idt-kfeöstzfes nsegelőzésése vagy eztyKtfenba, melyet sitmibelys szígéasés, Itezélő sagatzás, ttaikteahémá stsgátes, ttesmak való kitetteég vagy bmteé okoz, amely abbsm áll, lavgy egy telétetetty zsas'tet alkteazett vegyidet Í5s.tékotiy áteastyinégével egy atsa slsazot'iilő asetaelyt iögikáli.sast kezelitek. Bs ielksszaálhatd szoisims festeiézás, tadieteségsa soAi bekövetkező sésölések és itestadék kezdésém,

A teláfesésy bű Aatezok vegyüld tAgoSte egy eijMsbaz sesss-sbgaaaim sejtek píoiheiédájss5.sk dtkozáséta, amely abban éti, begy a sejteket egy telátetey szedte alkalmazott vegyület gtoSfeleiét elősegítő msnssyteégével fedoikezésbe bomáu Bz se eljárás fdWtehsatsl szövetek tegeaemelbjéttek kAkéiáteg és mivel a T-ite4hei A a tAlsttetsy szeőtei késziimenym adott váfeszAs psAíézákktesk, lelhaszniÁíó betegségi éllagotekta adott ksztetesválasz Ibkozézám,

Az emlős teltet: ember vagy agy házi állat vagy vadéltet Míg stai kShtetesea htetgAyozzok, hogy a teléhtatey «te atetetazoti vegyütetefe alkalmasak emlsetok orvosi kezelésében iortésrő lellteszoéhlsi®, aikah mAtetők az áHaigyőgyászteba® is, keteéttsvs a tétess éllatok, test pl- tegyék és rsaseskik, és s házé éltetők, mist! yt tevők, taathéb és Wdfe teatek a® élteteken élő éltetők, mód pl. smestóliék, tetyaleiék, őkőAlék és gebfe éltetek kezeléséé

A ietetezhy s»tet alkstetmMi: vegytteieket fetosety Áshass tes® teiltatjok, $ a tetetett jtes tetess kteteyeo titegteAttealjs a legsoeghtette testi tte dtei s kezdete betegség tete A teis a keztesvoa vagy éitatosv-os stssgliéléte vttn bfcmt» és a keeeleteld betegség lajtéjétői és állagotétel, a kezeletitte szentély fettétel és fetetos egészség* tlllsgte^ ⁸ hete stejétel és hfetstely előzőleg alfeteszott kese* látók fegg.

A htesssd vagy hígító tó ttós tefessysgsk ssegvátetósa a beadási vtóditó togg, tó tete a tetette jástós sztetest képes stóghsteete a legalkabsassbb tewhktea aásáaa «gyes «sava, A tóláksásy szerba slteksassP vagydktektó: btehsljte ttólisstg topMHsaa és/tógy pssaetetóks tójekstótóm, bsfetów ez vtóavd» tós stósktíét

A gydgysstazkésktóteysk «Itóhítete szvlgátó tójfetek tó gyteitó^tótóteí tetesd ssyagok jól ismatiek s szsktetetóss, és kikaeeskatók kfetesyvekhau, tedpl. Rsvtegtoatók Ptessstóáetsesl teeseas, 17. kiadás, Mató tesitóteg Ctepstty, tette, VSA.

tomeka héjteetemk tói tóim az sssgásdl tetóidd lesz, hagy a httóstets” ssd jetette *be tóglsl, d« «ess ktetetódik este”,tó s 'Menza* szó hasted jtósstóstó btó

Ml®áO8&áM

Az L ábra tetehtófe sz tó pepte? tettesek hatótól a ssstófetóutes gaa akhváaiójtóa, wlyzt a tó gtótóissitóz akdtótótótóak tetótelátóva! tetstek úgy tosmögtot sztsbsstót tófeassaáidsáste

A 2. tótóv tósmtótgsk az MCF7 testek sajtók joS»tóctóját tetette tero telyadteites te aydasiva tó pepte vudv jektófedhea ? sspte keresztül (a .testei «Pékek teteétótes kifejezte'

A 3« ábra tetstetjs az A, pppfc ««te egy atawtel «tóható kivonató stetóaksidjtek stetessató prtóhját: 1Ü5 sss-es, vágd az «zt kóvstó RF»HFW»t

A 4, áte a 3. tótóbtó kapsü Itóes tekéid testei RMíPLC tasatográSa vtetetytó esteije tó,

Az 5, ábra a 4, ábtóbdl teptói este tesstes dióda mdmrad fektet stestssesái matatja te.

A ó, ültet tevttefetk a MMWL rndsa&m sajtók ?, példától gyesi 15-ds tóxtótóvai itefettó kezeléséeek aeedsteyek, A sejteket IFWM stóttesl stagiestóüük, amely a «itóteseleies «Has tegyek A, B: 4 vap, C, Öt 21 eap.

A 7, ábra a ó, példa awito kapud éténél oldható tetóid vétóvytótóg-tesAtógsffiájáste stedsteyte mtteija te, fefetó ravdseszkévi kksteemtetóteói: (82:18} sikatetesávat

Á 8, áfeta tehtógéte ketfesteteós TtíÁvsl ifetétó tovább tetófes evdtegyeít ütegje be, alsó dl» tveteóhaa tetexstiteeeiüt (1:1) tó testeik, tósmteótev ltósvl;a«et<ja{7:l) tótetetótete,

A: 35-45 tolt volt látható agy UV ksesábsa, Az aktivitásokat pontoztok sz MMtól-ltó estetett l;5tó) hígtestea (Ή+ sínes fetes, » =» komplett sejthalál, d ~ a sajtók 100%-os vfemtektódss desddtós megjeleutete,

B: látó) tolt vall láltetó egy W tettetett. Az aktóiltóete pestetek az MM9&UM szetvhes 1:,SOO higkdsbsv (·««·-« » teás telis, ~ » terepied sajtótól, d «· a sajtók lítótóes vámtekttóss tetetós satgjdeeéssa,

C; tó-27 toBW&íátóahS agy VV tetetea Az aktótóteaí pevtetók azMMdóLdsl saemtóg Itátó hígtetóm {-HA· ® tess teás, - ~ Ruvgtók sajtótól, d « & sajtók lötótóss vtetetetósa tótetes tóúgjafeΐ$χΐϊ<ίΐ ^&χΐϊχΐί35ΐϊ^ί3- syw aedv tetted tevtegteájáte; attetóayah llFTtC-ag teteaeete (9:1> ttetetóvwiswl» ás 14' átótestte estek teák létetek egy ÜV»toay ksstótes

A llk teás a t, teától fcspte l-es teteó tested kttóttótóg^tójáttók «ttetósyte itealjsk be IBlTCte, Itótótótetetatóí (4:1) svtesztótótótewfeas. Az A-ö tetei tetók láteteű égy W-tety teste te. (Az tótól estet vtógtetótók (Utó .tódtól tetemtee ládtódvi dte a O teste»iteife tetette!

X

XX

X

X

XXX ❖ X * X XX* X

XX

XX

XX ΧχΧ.φ szewton),

Α 11„ ál» a 9. ábrából aym 1-es tokelá fetóöó kzormtogzádáját nrotoja to tosán-etil-aeetát (4ri) oidőazer-tetsdszezbea, A H sáv totolővá vált egy üY-fény kaoedbas,

A 12. ábra benmtatja a aym nedvből készített disto-étoe! oldbatő toksáé tetodllő prepazatlv vékorzymteg kzotnatográriájáwk (FIA Merek) máméeyeit, to:sán-etll-se«tát (4:1) oklészez-remteser alkalmazáséval A H és ex A-F zónákat UV fesmföm tették tatodévá, esirshákok és (eltosznátok «fs vzro vlzsgáistostoa,

A 1.1 ábrás csupasz egerekben szakkörén tornán merino» MM9ŐL xetograttokaak a 1L pákla szerint előállton, ntodagesen tetítoU ftotelővaí történő késelésének emritzóytíi snotatjnk be, A nyilsk a taxw (jobb-kéz fetöh eltol) és a nostoálls tor (visszafelé btoyalé teteje) tepikábs kezelésének helyét jelzik, Nem volt láthoté risszatnaradé tumor növekedés vagy ottriagos károsodás a nntmáhs Isőrőn 32 nappal a kezelési sorozat nsegkezdése ttot, és 2Ö nappal az első toptok® alkalmazás uiás,

A talátoáoyt stoktoeeeo az alábbi, tato-toriátoze jellegű péltokkal ás altokkal istnertet jtlk.

Másam toptototo iaj, az bopAeréú? peplna, ftotototo késs és az Anptotélo Bnmwetob' nedvének szem képességét tezrieitők, bogy g.átoja-8 hatom toldnböző hantáé daoet sejtveoal növatoalését, Az aktivitást konrioilként a normális bőt isbmbluszíohkaí szemben vizsgáltok,

A esjri'tntalntot RPMl táphőzegbee totótok tok antoy 5% magzati bosjú szérmmtt (FCS) tartalmazott, és a vizsgálatokat ngyarsebben a táp^ázegtom végezíkk.

A nedvet vtoetortszerilen győjtődök olyan növényekből, amelyek snegmovelt talajto® totosemto-han egy' tomon, a Napiény Fartőn, Itoitoeto Qtteoasbmbtot nőttek. A növény szárának ielszitot alaposa® megmostok 7Őto-os etano&h és ettootom toiöttodtot ollót haazaátnmk tol a szét bevágását® és a tejes latén aeáv kinyerésére. A nedvei 1Ö tnl-es steril plasztik oeaizrioga esőbe gyöjtötok, toC-nst szállítottak Rritotoe-be, és kÖMC-en togywtoa tároltak, A lélhaaztolást snegelöztoa a nedvet sorozatosan roegbigtottnk ő-szös l.Glto-ee steril U nsl-es Fppesdori'-esóvekbezt steril MiriiÖ^ vízzel, Minden egyes hlgllésböl 10 pl alikvotoi hozzasdtsmk a miksotiier lemez két-két ntélyedétohez, amely 11X1 pl sejtvonslat totabnazott, A vizsgálatokat két patalel kísérletben végeztük,

Öt nap tmrivn a sejtakei tnegvizsgáltok a növekedés gátlására vak kísérletben, a kontroll kezeletlen sejt mintákkal ősszehzsosbtva, A kapto otadméayeket a á-ö, táblázatban téglátok össze, melyekben a tesztelt sejt» vonalak az alábbiak voltak:

NFF torznál bőr dbtzástasztok

Mbitoi.mallg®ns melnoertto agy metosztáris

Ifeka nyak! rák

HMM gpotttatPlznttszlbrmálődott ltomé® kttotsnoalták és a (totozás ö-tol á-íg: 0 «* ni» tolás « kemptoi sejthalál,

A táölfetok topánéban megástok írigtosok a tolnia bígtosása samatkozrtak mtoétt bswtodtok a tenyészethez, feaélibgvs a végső totyészetton lévő hígítás ntegkőzelltőfcg l ítozor nagyobb.

í 5

♦* ♦*·. .** «**2 s “í ί*^β * » »» *

Hete sejtek

Minta	Hígítás
ló	V25	BÚS	1/ÖS	1/3Π5
£ gsgte	5	33	3	1	1
£ kte	3	5	5	5	Cl
£ íteamomk?	5	0	0	8	ö
Bkess tamdás	8	8	0	0	8

BÁCatkemltesiték

Mim	Hígítás
ló	1/25	1/125	1/825	1/3125
£ ggg&e	4	0	8	0	8
£ Ate	3	8	0	s	8
£ ikajeamsá'd	5	ö	íi	ö	δ
Bktes tezáadás	8	8	8	8	8

Feekbdí ee emísaánpkbdl táikstd, hegy;

a) as £ gsgkn akdv » Béla ssjbkksí szentes, ds kisebb tetétteg tel se MM88L sej lakkét méter k) A® £ Ate akik ez MWát sejtekkel szentes és sagyes estet. skdy $ Béla sejtekkel szentet,

e) Az £ i£«seííSfAí kevésbé akih? sx MM98I4st szembas snité s másik két trnm, és a Hét» sejteket esek a legnagyobb kenesnAéetáhea gátéiba

d) Az NFF mseméi kkmktete emteljesen pisáink 1/5 higitátes, de esek tsteékete te hlgkésokímm így gékBM 1£3 ktgkteél an BFF sejtek tósegss gátlása (3 gtmig de se ΜΜ9Λ sejtek ketékeny gátlása <4 géni) veit ntegBgyeíbetd. í/í23Ma hígításnál az. NFS sejtekkel snmabmt gátiáat w ügyeltksk meg (Ö gesst), de «teljes gátlás ntelfessit az egyik mmtáte aa MMSdt sejtekkel szentet <4 pont), és tzteékekehb gkdks (1 gsat) a gazaiéi nnatáham A HÁGA sejtek, amelyeket s némáit® kemtkteték: kágvlseldsként lehetne tekí nte&i, esak a isgtmgyekb kmteeAteíástél gátoltak,

Ügy tek, begy «ps ksWAteldhaa ex £ gepte müve kteetlea ttsegdd az MWdh sejteket Anettet Bsestmyábk kAmtezáeídtiál (IMS blgébb ábtt), bétr a szagmodés gátlásét ttetn Ugyekdk meg, a túléld sejtek dmtewte ás a mattéi gtemteák wgjelmtek te&íják, Aeétkdk hegy kátelyam fejtetett ttmahsttextsea ktebte akastek, ágy áa£ kegy az £ gsgte nedve legalább egy olyan komgmmst tssieh msA tátegtí«tOtetelteM a«t ktknbk kteetedl eitotete szeteket, amelyek vntelpte a IMtete,

Ae L gáidábaa laki ktekte tmgtetétakák £ és £ W«á egy ttséslk snemátlyek létem tea ktWbte sejtvenal késnittnéttyaket, kilkWktd mávényl mktiáksd és ekénk bigliásekat ¢¢4 . * * * ** «*** *

A násték&t vagy az 1. gáláéba» laímk szem» hwttebSk. vagy bd- vzgy aeetosös taelémek vetettók até. A sfevésvj nedv bígkaáaa kswaattót 55®C-<m 15 pemea ét tadeghetttót. Az seoíooos kezeléshez 4Ö μΐ ki· woatóí 406 μΐ seetetea ausvepesafeteX és s esövet ztettók vagy vostó* ksvetábea tevemttók, A osávek tartalmát 10090 g-vel 3 pemig «bifegáltok,, éa a &18tezét (aeetoískIMoS thtesá) egy tabk esőbe étviédik. Minő a peOetst (csapadék) mtód a feteászét hagytak syitett «sbvehbes Sói egy éjszaké» ét, sacbabboMaéklotes, eteívé veatífitareal íblszeeelt párologtató kamrába», hegy a maradék aeetoat eliéwlítsnk.

A kapott eredstséoyzkol a 7-9, táblázathass matógnk be, asselyekbea *** esz jateaő, hegy rnsos hatóz és a - 10050-as sejtóatóSt jelöl, Isd: az mzékelásl alkalmazva, tsz emdsuéoyeh még meglepőbbek, mmt az k példában, wd etós gátlb aktivitás ügyelhető meg egészen az 1/3125'tós hígításig. Ammbmt az WF sppek bbooyoz növekedés gátlása látható ebbe» a klsátletbe».

Sem a hőkezelés, sem az acetanes kezdés sem befolyásolta az aathtamor aktivitást lényegesen. Az aeetónes kezeléssel a legnagyobb skdvást a pelhtet tslálbdp mm < AHa eaetéfeon, bsísds btaosyss akti· vitás az oldható tehetem Is jtóen veit Bs azt feltétetek hogy a vegyőteek, amelyek felelősek az aktivitásért, seas fehére jelíegáek, és hogy legalább az egyik kompooens egy Upld leket.

$ χ 4 ♦

4 4 4 « 4

444

444

Ϊ * 4 4 4 4

Üt * 4 »4 4 4 4 4

Ϊ4 4 « 4 44 l

4

44444

4 4 * 4 4

444

4 4 4 4 4

4 »4 4 4 4 4 »

4 4 4 44

2Ö

❖

HeEs sejtek

Mbta	1/5 '	1/25	1/125	Ϊ/625	1,(3125
A pepta	&	e	B+	4-4,4.	444
£ taát	'	·>·Κ'	4.4.4,	4-4-4-	.4-4-4.
A bőm ta	4-	'4-4	-4-4-4	4.4.4.	.4.4.4
secám-'öiitató ál pepta	4~M-	e-ii'	444	4-4-4.	.44-4
aeetott'Oklbatd F. ktao	44-4-	..NJU-ui»	4-4.4-	.4.4.4.
setarts ppte b, pepta
see tos ppte £ tam	±	-itt·	4-4-4.	.4-44-	Λ.Ϊ.Λ. y y y
£ pepta ta		'!H'	4-4.4.	444	4-4-4,

Mivelaz & pspfe s feggyskodhfe a bárom növény hátak melyeket estekben a vtagátaobtas te.taeb tünk, a tevábbl taésletsktan eswk a fsgaak a ktamatta tasstaltsh fel Fa watíb» sem jdeati sta kegy az aktaltta a sstak két bsjbas mom jeles.

MeglameteíM a 2, példát MM229 ás MM220 tanta mtagnos twbmsmsa sejtek áe ΒΊ6 egét aaa&gsw ntamome sejtettek továbbá KFF és MMtak. sejtek statatasával A ytagátaokat bál pástaEsnvssbes négetalk. kotaoílhám ebtavtans mesosytata vág és a pete ás tastata batóák bipitásabtek taataabásávat, ssnlytaet ex aeetesoa taxelás mán Ital - t/lkáttasa kkgttobtmk, Az mxtettayeksb a 10, iábtaatbaa btgbtak ősm, ύ

:V8 M	«	M,»	w,»	pí»	ma
b Uh	i0	Ϋ0	04	b/H	04

0t

0t

nymiAW í 0á | * í i s 4/0 10$ 10t wWA\\\\Xww8íwa>V\*x\\wwa>\\\\\«^^

OSÍ4 1¾¾¾	hn |	t	0	0 j 0
» λί «Λ .V. \ ..,£. » .

: 0 t 10 00

Í0 $0 ? 00

0f 01

0* ' 0t wmMMaWM wwm^wwwJ ^WVAWAXXXXW^^ ^1« Hl

W4WW4 in

L0 ?0 y 0' í 0 ^SXSWW^AA.VWwS.yu^WíAW^tww^W^AwW'W^WWS'W

04 tű

0'

SI i 44

0

0 10 j« j*' |it :	0 | H	0

10 5 0 5 0

4'

4 444X4

4 4 4 4 4

444

444

4 4 4 4 4

4

X * 4 4 * 44 * φ

Az eredmények egyezésben varrnak a 2, példában kapott aeáméayekkel, 1/100 - 1/50 higltásiuil nem volt hatás sz NFF sejteke», de az MM9ÓL sejtek sziguiilkáus gátlását ügyeltük useg, Ezeket a hígításokat túlélő moianoma sejtek: a tsomsálls melsnoelták megjelenési formáját mutatták. A másik két humán «elánom» sejtveaal és sz egér melanoma sejtvonal gátlását színiéit megállapítottuk.

Hasonló eredményeket kaptunk Metkeí sejt kareiaóma (MCC lő) vagy pikkelyes sejt kamúsóma (Colo 6} sejtek használatakor. Az eredményeket all. táblázatban mutatjuk he.

A dendrites sejt morfológia megtnulatteott a pikkelyes sejt kamísóma által még az 1/500,000 hígításfen» is. A nyers kivonatnak ez sz extrém hatáseróssége szántén nyilvánvaló volt a M'etksü sejt gátlásában, amely még 1/500,000 lúgitáshsts Is evidens.

v»v»wv»vnv»vv*vnv»

* «# χ.« ** * X * * * * «« & pep<Wbfrl ssőttttasó aedv friss kőtefrzteyőt 95'tezs vizes etateial exttafrőtek Az etaaalt az eltihite frakcióból tsz axsssfeád tste vtemsu^cteifegábast eiteteíofrak, ős a frakciói tetetetaéfrak az eredeti térfogát» szfrtteedyéteÓ rfpktesggel (&FM1 1Ó4Ö), amely S% magzati tejé szőnmmt ős aat$tiötitaso&at tsrtabsaesit. As tetess extekrfó tett sústetttststlő etspsdéksk vákmmueterfrbgób&a szőtísotes, ős «kömtifrrflórf eredeti iérfegetes a festi kút sstősteettydste lőpkfrzegbctt, A nyers nedvet (Q, ez etette frskciós <S> és a essptetet (P) teteltók s teibkbmt isiit tette NFF sejtekkel, MWóE, MMS37, MM22P ős MM2ÖS4 wtoems séjivmslekksi tesfrbstt, vetette UM1215 kote-kamitetsa zajtwad és A54P frláő baretem sejiwAl szetstes. A vtegéttetel tetet gőrteeos któtetet végezte, és 4 a&pl tsmyésztőa ttte a ttesfs tezzásdésát kóvetóets tetetette Az mxbtteysk a 12. tteőza&an iátetők, amelyben -s a sejtek mmrteit ítíegjeteősőt jelzi, -h- a sejttem vrfószfel sóveketeét jelenti és. jelenti a sejthalált.

ív ν'

* s XXXXí X

X

X S X X * X XX« «XX

X X í X X X X

X X xx x X X X

X

X x XX * * « X ί φ'« «·* * » β « * «φ* φ*φ <

* * * s κ * * » «♦ φ» φφφ,

A kapott eredmények megegyeznek az elózó kísérletekben kapoüakkal. Alacsony dózis esetón a® MMOőL sejtek ismét dendrites megjeíenésűek. Az összes tumor sejtvonaiat, valamint a® NFF tormális fibroblaszt sejtvon&íat a nyers növényi sredv ás az etanolos extrakcióval kapott oldható frakció 1/20 hígításban megöli, ügy tűnik, hogy oz aktivitás nagy réssé az etanoí-oldható frakciói» külöteli el. .Az A4S9 tüdőrák sejtvonal különösen fogékonynak látszik, mivel egészen 1/25ÖÖ hígításig mind a nyers nedv ntind az oldható frakció hat rá.

Az £ nedvét foszftttttl-pufeoit sóoídatóan hozzáadtuk egy lemez mélyedéseihez, amelyek egy olyan szerkezetiéi transzfefctált MM96L sejteket vagy MCF? mellrák sejtvenal&t tartalmaztak, mely a birka meiailothieneía promoterból és upstream irányban egy ö-gsíaktozidóz riporter génből állt, melyet a metallothkmeia génnel helyettesítettünk, A® assay így alkalmassá vált a gén-expresszié mérésére, és különösen a .metaBoütionein gén potenciális tianszfcrípeiéjánsk, tessszkkiöjtíosk és expresszíójának mérésére. A sejteket mikrotiter lemezeken a kivonattal 2Ö órán át kezeltük, 100 μΜ Zn$0r«t adtunk hozzá, és a lemezeket S érán keresztül tovább ínkubáltuk, majd a íápközeget eltávolítottak. A S-galaktosídáz aktivitást égy mértük, hogy a sejteket 1-2 órán át 37^cC-oo egy kromogén szabszöátial iskubákuk. Ezt a vízsgsloteí használtuk a gének transzkripeionális aktiválódásának érzáksoy tesztjeként.

Az eredményeket az 1. ábrán matatjuk be.

Ez azt matatja, hogy a metallothteneia gén afcüvációja markánsan fokozódott, amit a β-galaktosúdáz riporter gás expresszié mérése igazol, ami meglepő módon még nyilvánvalóbbá vált, amikor a mintát javább hígítottuk, A mechanizmust, amellyel az £ pop/sz ezt a hatást szabályozza, még nem ismerjük. Miközben a teszten dezaeediáz aktivitásának gátlására speeitikas ismert hatóanyagok a riporter gén növekvő exprosszíőjst mutatják a szór növekvő koncentrációjával, addig az £. pvyto egy fordított dózis válasszal rendelkezik. Az eredmények azonban azt mulatják, hogy 'ez a vizsgálati módszer felhasználható az £ pepíns nedvében vagy magában a növényben lévő bafosaysg/ok/ tiszfoásátok nyomon követésére.

A metallotiŰGseia fehérje aatioxsdáss aktivitású, és védőszsrepet játszik a nehéz résnek által isfesrkáit kamutómákban, A metailotiúoaeia premoter az £ popte nedv olyan koncentrációjánál aktiválódott, amely tiöl alacsony ahhoz, hogy közvetlenül megölje a sejteket, tevévé a ttodkivüí érzékeny MCF? mellrák sejtvonalat (2. ábra). A hasonulás az MM9ÖL meíamoma sejtek megjotesésébíío a normál metenneiták dendrites morfoiőgiájábez ezeknél a hígításoknál valószínűleg magában foglalja a m^dtethioneia gént ezekben a hatásokban.

A 4. példa amim végxetti $5%~os etanolos extrakdóval kapott oldható fiákétól iznkratikus reverz felső nagynyomásé ftóyatiék-krematográtián&k (RF-BF1C) vetettük alá.

100 pl nyers kivonatot feloldotótek. í ml 95%-os erasoíbas és periodikusan rázattak 4°C«on egy éjszakán át. A kivonatot esntrsibgékuk iÖOOO x g-vel 4 percig, a folldászót eltávolítottak és vákuum centrifugában szárítottuk. A szilárd maradékot mtosstituáltuk alaposan sesteifegáit 100 pl fettetó pufferben, és az oldható anyagot felvittük egy Brownlee Áqttepöte RF-30Ö oszlopra <C§), 22Ö x 4 mm, egy 30 x 4 mm-es RF-3Ö0 védd oszloppal.

Futtató pufféiként aceteaitribvfz 30:50 (foö) elegye! alkalmaztunk, az átfolyási ráta S,?$ nd/pere volt. A iáakciókat fél perces időközökben gyűjtöttük, és az titszorbancia profilt 195 nm-en vettük fel Az * * ¢.

abstestea gtek a 3. ábrás jmía^tk be,

A frakmékai vákuum etelétgáláte teltettek, te μΐ PSS-feea ájtetenk, és rrmgtegáltnk MM§ét aejWtél azemisem valamint a tétekben leírt meinlintkimtein φίζΑζ asaay-ban, A 13-28 frakciók msfréwike tedukátls áss MMFÖL s^ték tesgtót átekrdását egy dendrites tnegjeiersési fonnává, de sejtitek nem bgyeltitah wg. Á hatás még sokkal élesebb a riporter assayteg ahol az aktivitás még 1/tö WÖ hígításnál fr tegllgyte®^ (am a tanytesthes 1/1ÖÖ ÖÖÖ vé^snmmntráeiönál),.

A. feobbmrnttatófr eredtteyete. iálmteea afr talállak, hogy egv következő niteatefhgáM® után az MM$$L sejtekkel smM aktivitás rtei a fehilteőban akttá a ellette megjete? ás hogy az aktivitást m lebeteU éltetem szállal, hogy a mintát ámsgeíte egy nndekntaterá ntesttessm, A fent- tétek sejtvenaIskM teli az MCF? mellrák sejtvettal sejtjeinek gmkleráeróját gátolta az A. prgte nedv egészen Í/ÍÍX1 ÖOO végknaremtáeiólg, A sejtek mámát a bieirmhonm sav reagens (Fieroe) hsaználatávai beesőik meg. Az etedoteycket a 2. ábrán matatjuk be.

Az /2 jrnpláv nyers latestek további oktesm áektenáltót az oldószerek növekvő gtkatkásá sorozatával végeztük, 1 tni nyers latesthez 2Ö ml dietíMtefr adtunk egy eeniritkga e-söbea, A csövet rámttuk és centrilngáknk SÖOÖ g-ve! 5 percig, hogy a rétegek elváljanak, A áteteres fellé réteget eltávolítóitok és az eljárást még kétszer megismételtük, Az átérés irakeiökat egyesteök, svnáeiás begtóéhso .teezm gáttetk és I tni DMikben frávették a htolőghá vizsgálat eáljára, flaseuió módon a msredékot oélmcetáttel, majd nteán-klonddal oteháhnk. A kezded éteves etektmn tartalmazta az aktivitás legnagyobb részét, annt az MCF? mellrák sejink számának esökkteaével mértünk, és a dendrites rnegfektem való áifrtelásM Azonban az akbvhéa azinte kteteteé azokból a Izakeiékhók amelyek az aiíbsteikol és a oteiénterídhél terasznak, Semmilyen aktivitás oens látható a végső vizes Izakeiábam Az etadmányeket a 13, iábltebsn fcgblink össze.

s χ

ΧΧΧΐΧ

X tt

S X X Μ'» XXÍ

W ί χ χ X » χ X

X X χχ * χ X χ χ

χ

Η χ χ χ χχ ¥> .φ?*Φ ψ· ?φ ¢- <£· Sr S X » φ, * « ·> # Φ *** <··> *·Χ$

A CMV proaBötar stetekást HeLa sejteken tóxsgákük, mriyetek egy íepEkfoite-defetens adenövím mstosetíd befedtek meg, amelyben $s Eb gént a 8-gabkteHás gént irányító CMV proraeWsreí heiyeüesitetebte Az tendnfeyekei a Í4, tábfeteben fegtetete össze, és a nsegfertótete, 4s temetette» sejtek tesntroE &tékebfe snfetekáfesn bjezstek ki.

115

L„iw

550

BWM * 4 «mm «

« 4 « « 4 í m

Mi

4 4 í í 4 s 4 4« 4 4 4 «

S «4 4 S 4 S4 ϊ

*♦« wst ** * * ♦ Of **.*. «ΐ* φ * * * * ** do « β *

A kapott eredmények kvaüíative hasotoósk azokhoz, melyeket mb ditTcreostefest-iadukálö szereknél látnék, mint pl. % Itisztoa dezacetiláz sahibstorok vagy a buthát, az albeit még erősebb aktivitással nuxislkosik, mint ezek a szerek, A nyers és a dietil-éteres kivonatok esetés a magasabb koncenttációnál megfigyelt alacsonyabb ptomoter aktivitás valóstottiifeg visszatükrözi a scjtöiő hatásokat, ami a HeLa sejtekkel szemben láthafo ugyanazoknál a koncentrációknál.

Egy tovább 1 oldószeres frakcionálási kísérletben a nyers nedvet megosztottak metanokviz (17:3) és uhexán között, az oldószeres megosztás egy korábbi cikk alapján volt elvárható, mely szerint a diíerpének (poláris fázis) elválaszthatok a triterpéaekiől (heptáo íszis) (Evans és Kmgbors 1977), Előre nem várt módon szórtban, mindkét fázisban találtunk aktivitási, ami azt sugallja, hogy a hatóanyagok rendellenesen viselkednek ebben s rendszerben.

Egy másik oldószeres frakcionálási kísérletet azért végeztünk, mert szükség volt arra, hogy a «tintát tovább tisztítsuk a .HPLC analízis előtt. A nyers latexet összekevertük 70-95 %-os etanollaí és egy éjszakán át 4°€-o« sázattak. Az elegyet íeceatrifagáltuk 10ÖÖ g-vel 10 percen ás, majd a felülászót eltávolítottak és betömónyitettök a nyers nedv eredeti térfogatának körülbelül egyh&rm&dám. A koseentrátamfeoz 100%-os aeetonsth.lt adtunk 30-óÖ%-ig, A kivált fehér csapadékot centrifngálássaí eltávolítottak (12ÖÖÖ x g, 10 pete). A felüíószó feláósalt mskreciklosos Ótepénekben Öattofítnok és peplnáa), amint TLC-vel és töntegspektxosskópiával meghatároztok. Essek a megfigyelési pontok jelentik az utas egy megféleláea nagyléptékű eljáráshoz a hatóasyagok dúsítására.

A 7. példában leírt és a 3. ábrán bemutatott HPLC srabSakcsossálásból származó 14, és 15. frakciókat ismételt ksomatográfiával tovább tisztítottak, a domtosas srimmetrikas csócsot konstans «heudezésti dióda spektrumok segítségével szelektáltuk (pl, 14. és 15, ftakciók; a 14, frakcióra kapott eredményeket a 4. és 5. ábrán mutatjuk be). A tisztított bakcsók ítoiívitását, amely előidézte az MM96L sejtek átalakulását dendrites megjelenéaövé, sej t vizsgálattal igazoltok.

Az MM9ŐL sejtek átalakulási jellemzőit a 15-ös frakció hozzáadása után a ö, ábrán mulatjuk be. A sejteket fotonúkre-j^áfokkértt tettük láthatóvá egy antitest kapcsolási eljárás felhasználásával. Az első antitestet, egy egér moxtoklosfebs antítostet, amely a tirozi&ázzal rokon téhérjc-l (TRP-i) ellett irányul, egy stotoaöik antitesttel mutattok ki, egy búk® atsti-egér-slkélihss fosziatáz kosjngátotnsnsl, brőín-klőr-loónlil-foszfát és mtiokfek tetrszóliam (BdP/NBT) retet kifejlesztő szubsztrát alkalmazásával. Négy napos iukobálás után (óA és 68 ábra) a mekmoma sejtek számában egy erőteljes csökkenési figyeltünk meg, és egy kifejezeti suorfbíőgíto változást. A sejtek átváltoztak bessz», fe-alakü (dendrites) megjelenésűvé, arai a normális érett melaaocíták jellemzője, Úgy tűnt, hogy az összes sejt a tonlfetou adaptálódott ebhez a megváltozott morfológiához, amely meglepő módon az MM9Ő.L sejtpopuláció heterogén természetét adta. 21 napos inkubálás után úgy tönt, hogy a kezelt sejtek elrendeződtek valamslyesi párhuzamosan egymással egy nyalábban, amim a ŐC és $D ábrán látható, ami a normál éreti melaaocátákra jelfenreő. Hasonló tulajdonságokat tigsteltltok meg az A, pep&r-ból származó ösaszes dendrites sejtet indukáló öakeióaál, beleértve a oyers nedvet is,

A M, és 15, &atöó elekttospray íőusegspekirosskápláa analízise 2_sS,?J4-fetiascctosü3-torÍtzil-s>ai8,1 Ó-difeámxi-ö-ttiktoitiolU^xr-jats'ottoóC 17)4 IB-difen (j&tiofe 5, Mupovic et al, 1998a) jctessléiéi igazolta suti 780 értékkel (számított 7790IS). A tmgmágnem rezonancia (f&SQ analízis, 1D NME. alkalmazásával, a 14es feskdóra afeé-toaöfeti szignálokat adtot 7 és 9,4 ppm közöd, amely egyezésbe» vau a plridfo-szerő csoporttal, mely a nikotinoát-esopo^^ö van jeles a gyűri! 9-es beiysetésél. 'Tehát egy össs kettős kötés látható a sagy kapcsoló konstans által 5-6 ppm-nél, ami megegyezik a 11,12 belső kettős-kötéssel a jattofán gyűrű szcrteetében. Továbbá azonosítottak a 14-es frakcióban elcktmspmy aaa&íssel negatív ion módba» a 2,5,7,0,14-pentaaceto?d-3-bcnzoil-oxí-8,15-dikjdroxi-jatrö&-6(l?},líE-áiént Is fjattofáts 6, Jakttpovie et &l< 1998a) nto 716 (számított 716,3ö4), 673 (M hetén}, 65Ö (M - ÁcÖH) értőkkel,

A 15-ös frakció tartalmazta a 2,3,5,7,í$-pentaacetozi-0-mkotlm)fl-oxi-14«oao-jatro&-ö(17),llE-di^tt (jsttoífe 1, Jakupovic et al, 1998a) wk 597 (M - hetén - ÁcOH). Így a spektroszkópiai analízissel a HPLC-n koré» elnálódó (7-7,3 pereséi), sejtölő és dendrites aktivitást msuritó fiatefiófc a jatroíás S, 6 és 1 keverékét tartalmazták, Ez az eredmény jó egyezésben van a 14-es és 15-ös HPLC Sakeiők viselkedésével, amikor RFTLC-n kromatognrtáljnk toluobaceton 9: l futtató elegyben. Az UV-positív Toltok nem mozdnlnak el az «rigóból, R? 0,0 (megközelítőleg), szemben a későn elnálódó frakciókkal (pl, 20-22-es űskclók, R_{-0,3-11,5). Bz a jatrofíro 5,6 és 1 viszonylag poláros viselkedését mutatja összehasonlítva a jattoíéo 3,2 és 4-gyeí, amint azt HPTLC kromatográfiával bizonyitotozk totonhaceton 9:1 vagy bssás:eűl-acetát 4:1 kifejlesztő eldószetrendszerek alkalmazásával. Ezek az eredmények hasonlóak azokhoz, melyeket ískopevte és munkatársai kaplak (1998a) fsetsv>léíer:sts«' til-tere-feutsl'étet (1:1) ibtritö elegybe», pl. jatrofinS; R_s- 0,04, jsttofán 6: Sí 0,10 (3X) és jatrofán 1: k_f 9,1 I. Ez neta volt nyilvánvaló a korai HPLC frakciók iőmegspektt-oszképrii adataiban ingeaámszánnasékok flásd később) vagy az irodalomban közölt és az 1, táblázattam megadott más, az & pep/us nyers kívountsiban lévő komponensek jelenlétében.

fa) A 7, példa szerint készített étor-oldhatő fiákétól eöléts-glikol-dmtenl-éterbett (DME) ieloidottok, és 20x20 cm szilikagél lemezeken, kiörefotozebi-aeriát (S2-.18) futtató elegy alkalmazásával fotmsatogmfiömk (7, ábra), A lemezt ÜV kannában láthatóvá tetttik, az l.;V-pozitív sávokai szoaositotttsk és a gélből kivágtak, DME-vei ehaihnk és az MM9ÓL melanoraa sejlvnnallal szembeni gátló aktivitásra, valamim nsuriológkó átalakulást* teszteltük. A® egész gél és a netu-UY abszorbeáló fiakciók ÜV fény alatt történő feldarabolásával előzetes kísérletekben kimutattok, hogy az aktivitás az IiV-t abszorbeáló sávúkhoz kapcsolódik, A gél oldalsó sávjatoak megfestésével 0_s19to<ss kferofórmos jóddal láthatóvá tettünk egyéb, eresen jód-pozttív sávokat Ezeknél azoabán jelentéktelen aktivitást találtunk. Az ÜV-nhszorbsŰió sávok R_s- 0,0-nál (A), R_f 0,16-0,18-nál (B1), Rí 0,22Ö,2ó-sél (82), Rí Ö,73-9,39-sál (C) és R_s- 0,80-0,9é-nál (D) btológiathg aktívak voltak, a sejtszánt észrevehető csökkenését és komplett dendrites sej t-reverziót mutattak 1/51)99 hígításnál

A 81, C és D zónákat srihksgél 60 lemezeken hcitostográflávsl tovább tisztítottak, amelyhez kétrttmeaziós oldósrzwrittászeri a&aímazhmk, első dsneaziéfca» hexámetű-acetátot (1:1) és a másodikban tohsohtreettutt (9:1) f lásd 8A - 8C ábra). Azokat az UY-abszorbeslé tóitokat, melyek MM9ŐL sejtekkel szembe*» gátló aktivitása nagyobb volt mktt 30% ás komplett dendrites sejt-reverziót mutattak 1/51X1 isigitóssrii, ez ábrákon megjelöltök.

Az erősen UV-abazmbeáló, B zónából származó 22 és 23 foltokat (lásd SC ábra) s gólból kivágtuk, BMB-vel «Ittáltuk és vákuum centrifugában szóritoltttk, A 22-ea és 23-as fistkció totwgspektroszkőpiás analízise 5,8,9,Í0_si4'pettrias«tori-3--tetooiltosbl5-&idrezi-i?«pferiri mfz 639,5 [M - AsOHf, azaz pcplaáa jelenlétét ssmetri.

fb) Az egész nyers nedvet 10 s 1.0 cm-es HPT1.C szilikagél ól) koncentráló zónákét tartalmazó lesne®<> s tot (Metck Kát. szám 913748.1900), íoteskasetöa (94) kifejtető rendszerben kronsatografólftá, amit a0, ábráéi muiatoak be. Az UV-pozitfv zónákat (1, 8, 0,14; 2, R_f- 0,23; 3, R_f 9,49; 4, R_f 0,54; 5, 8, 0,57; ő, 8,8,63; és 7, 8, 0,73) a gélből kivágtuk és DMllRbebl-étemel eluáltuk. A frakciókat MM96L sejtekkel szemben teszteltük a feat-leirtak szerit», és az 1, 3,4, 5 és 6 frakciókat azt matatták, hogy rendelkeznek sejt gátié és sejt teverziós aktivitással Ezeket a frakciókat kölétekölös kmmatogmfátek HPTLC lemezeken hexámeüi-aceiáí <4:1} fottató elegyben, és a követted ÜV-pezibv sávokat kaptuk: A, R_f 9,I7; B, E? 0,24; C, R_f ,42; D,R, 0,48; F R_f 0,52; F R, 0,58; ö Rj 0,62 (10, ábra) és H, 8.,9,92 (11. ábra), Az összes frakció a G kivételével (jód-pozitiv, lásd 10, ábra) aktív veit 1/5900 bigításnál az MM50L sejtekkel szemben a sejhtóvekeőós gáiáaáí és a komplett dendrites morfhlógiáta való átalakulást tekintve.

Az A-F frakciók (B kistelével) és a H frakció fömegspekt-roszkópiai analízisét a 15. táblázatban s»· latjuk be az £. pepte publikált alkotórészetek ismert molekula-tömeg ionjaiból származó vegyetek kísérleti megjelölésével.

4 4 4 4 4 444

444

4 4 4 4 «

4 44 4 4 4 4

4 S 4 pepi«áa« 5_>S,9«íO_>14-pesstaacet<»xi-3~benKoil-oxi“ÍS-hidíOxi»i>epl«á35.

jatrofSa 2 ~ 2^5,7At4“^xaacetoxi-3-benzoil-oxi-t5»l«dK»a->jatto«ótfi?},! l£--diés jatrofSaS “ 2,S,14rtriaeefoxi'-3-besaoiköxí-'S,Í5-dikiíkojd'7'izí>feiraiÍ-osí.-b.-aikodí!olI-öxi-jalm.fe-{>(i7),ll£-íiiáo jatroiSa 4 » 2,5,9, í 4-teöaaeetoxi-3-bea2OÖ>oxjA í S-difeidro-xi~7~ke^a5friI-oxi»jawofe«6( 17), 11 E-diéa,

Így a tömegspekrtoszkópia feltárt egy 2O-^efrl->i»ger5öW’angeUfr)ól (A frakció), pepMaból (A, € és D frakciók) és jatrofrar 2«bö! (D frakció), 3-ból (C és H reakció) ás 4-boI (E és F frakció) álló keveréket. A H frakcióra kapott ^{H kémiai eltolódást adatokat a ló. táblázatban mutatjuk be.

ló. táblázat

A H frakció ‘H kémiai eltolódás* adatai

S*\

Onic	9.979	tud
8,202	ddd
8,797	btdd
7,327	tori
OBz	§,049	AA’
7,403	BB‘
7,541	C
OiBn	1,972	<10
0,912	d
9,449	á
0,459	d

* A kémiai eltolódásokat 295K-irtl mértük a kloroformhoz viszonyítva 7,24 pps&-sái

Esek a jelek «gy jatroíáa gyűrűs szettem jeieeíétét matatják, amist a DQE-COSY, NOBSY ás T0CSY két-dlnmKtós spekmsmokhü meghatároztuk. A H kakeíó spektruma egyezésben van a jatusíán 3 jelenlétéveí kát dmzteteomer konfomstolóban (tekistve a leghssostóbbai}, két vagy több hasonlóan szubsztiíuált jaörofáa keverékébe», vagy egy áj jefcefSnsal, amely két alkoílaát-, egy benzeái- ás egy izobutóát-esop<»tot tartalmaz. A hasonló gyürSs keö&rmádőt H-vel jelöltök mint Mupovie ás tmsai {Í998&}, melybe» a J4,5 - 6 Hz és erős a NOE-jel vsa 5 ás 8 között és 4 és 7 között; 17,8 és /8,9 gyakorlatilag séta, ami nyilvánvaló a keresztesócsok teljes biáayábóí a DQF-COSY spektrumba». Egyik szigisái sess egyeztethető össze bármilyen isgesxsls»uktéra jelenlétével. A mintát a mágnesből visszanyertük, ás egy aiikvot erős aktivitást mutatott MM96E sejtekkel szemben, amit 29 pg/tal köasemrációaál a komplett sajilistol, ás 29 pg/mi-sél kisebb kmaceakédőnál egy teljes dendrites megjelenésű sejt-átalakulás igazolt

Az A üuhciót 8PTLC ktsmatogtáfiával bexl«:«liMiset;U (4:1) kíibjlesstb xeadszetben tovább tisztítóttnk. Az abszorbaocia kiegészítéseként az ÜV kamrában az okialsó csikót megfestettük betójva a gélt 7ö%-es toetaoelos fosztoavval, és hajszárítóval történő melegítéssel eWdvtoak egy intenzív kék sávot UV-tóay alatt, amely elválasztható a fő tiVtobszotbekló sávtól, Bázel a sávval azonos aem-fesíődő régiót kivágtuk, dietilálestei dokitok és vákuum centtitógábas szárítottak. 4 ml íafcssfeől któölbeíüí 1 mg-»yi ilyen anyagot gyiiltöttfesk össze. Elvégezek az anyag WR analíziséi, majd ezt kővetően a btoassay-t, ás azt tolóitok, hogy akilv a komplett áesáriíes morfbtógia tovemóbss 1/5x19* hígításban, ami 1 ag/ná végkoosestoúeiöt jelent. Ezt az anyagot NMR-ml azonosítottuk (lásd 17, táblázat) 2Ö-aeetŰ*mge»ok3«aagdálkéaí (€s?HmÖ?í. Ez a megfigyelés egyezésben áll a 15. táblázató»» hemniatott lbtoogs|toktto,sz.hó>fei adatokkal φ ** «<· ♦X < X * * χ χ « ♦*# ·«· »»« χ« *« *«*

Udafeta

A bteaktív A2 frakcióm kapott NMR adatok a XO-acetü-in^noM-atsgelát kémiai szerkezetét támasztják alá

SHNMR	tJCNMR
H	pputóntétípbedás	#	C	Hz	[PPM]
1	6,106	1	9	25933,898	206,2210
.3	5,396 s	2	26	21513,854	171,0737
5	3,875 <3	3	21	21165,912	168,3070
7	6,024 d	4	23	17626,074	140,1589
8	4,070	5	2	17086,838	135,8710
11	2,4783 ss	6	6	17082,062 ,	1.35,8339
12	2,222 tótó	7	1	16614,730	132,1169
12	1,743 tótó	8	7	16301,014	129,6223
13	0,681 ss	9	22	15970,620	127,0428
14	0,936 sí	10	4	10668,691	84,8352
lő	1,033 s	11	3	10395,594	82,6629
17	1,062 s	12	5	9411,686	74,8398
lő	0,952 tí	13	10	9059,148	72,0365
19	1,785 érs	14	20	§404,062	66,8274
2.0	4,745 d	15	8	5481,686	43,5892
20	4,467 tí	lő	11	4841,115	38,4955
23	6, 153	1?	12	3911,906	31,1067
24	1,906 te·-	18	7	3735377	29,7045
25	1,996 fedd	19	16	3585,756	28,5132
27	2,042	20	15	3018,42?	24,0019
4OH	3,4303	21	13	2924,308	23,2535
SOK	3,514 d	22	14	2892,863	23,0035
	23	27	2655,734	31,1179
24	24	2612,189	20,7716
25	18	2171,913	17,2706
26	25	2007,769	15,9653
27	19	1698,690	15,6546
28	17	1951,372	15,5169

Azonban a .2Ö-aeebl-isgesr6l-3-angeiát hiánya as aktivhás-'Veaémh IIPIC tisztítás sorén kapott ibínegspektrumban ás egyéb TLC tkskeiékban eltekintve az Á ftafetótél, tó jetei, hogy nemcsak ez az aktív frakció. Inkább a jamtéőn J-6 ás pepfeán jelenlétére is enged következtetni az NMR-ból és a töineg-spekwmképias adatokból Ea különösen igaz a TI,C-vel preparált H-feketem (jwtíáu 3 W rtó 830; lásd 1D NMR süteményeket is a tő. táblázatban) éá a 13-as és 14-es RPLC-vel preparált feketetea tjaferlln 5, nfe 779 és 10 NMR; jalro&s

X X « ·>·?

« β β * « V » 0*Χ « Ο

X « ♦ * * * •ί^Λ X* Φ» Xtf *

S, JÍ3/S 71ό;. jattodat 1 vagy jatefea δ származék, 597).

Jakupovic és mtsai (1998a) feltéleiezték, hogy a pandiáa osztályba tartozó vegyöletek közti termékek a jatroíánok és peplnáu k&ötts szratézisú&an, Mivel a rákos sejtek elleni aktivitást és a dendrites sejt-reverziót mind a jairofánoknái mind a pepluáanál kimutattak a jelen találmányban, ebből arra következtethetünk, hogy a psraliánok szánén rendelkeznek ezekkel a tokjdoassgokkat mi nyers nedvet 7Ő%-ös etanolbsa a ó, példában leírtak szerint dsetü-éterrel extraháltunk. Az extrakturaot vátaaaa centrifugában betőményftettSk és újra sznsspsadiknk kb. 5 mi DME-ben. A DMB-s sxtraktsssá pxepamív TJX lemezeken kromato-grafáltuk (Merek FIX, Slltca gél 60, Kát. szám 005745.1000} hexáaetii-asetát (4:1} fttót&tó elegy alkalmazásával. A 12. ábrán bemutatott 1F és A-F” régióknak megfelelő zónákat & gélből kivágtak és egyesítettük, éter/DME-vel eluéítok és. vákuum centrifugában szárítottuk. A kivonat feldúsült jatrofáa 1,3 és 4-ben, peplnánbsn és isgeaán-acetátban. A peiletet 95%-os etanolban szuszpendálfak és 10 percig 10000 g-veí cenirifegálíuk. A télölószóí (6,0 ml, 10 mattal) 0,2 srf-es aUkvo-tökra. szétosztottuk és 2öX-en tároltok. Ezt a kivonatot megvizsgáltuk MM96L melanowa sejtvonallaí szemben, melyen igen jelentős hatást mutatott, a dendrites sejt morfológia nyilvánvaló volt még 1/5x10* hígításnál; ez m^íaplázta a nyers nedv hatását Az igy nyert kivonat feldúsult jatro^n 2, 3 és 4-ben, peplaánban és mgesán-aceiáiban. Közvetlenül az injekció beadását megelőzően 0,1-0,2 ad-es mjeteciókboz 20 «i»t 1 mbte hígítottunk RPMÍ 1640 szövettenyészto tápköeoggei, amely 5% magzati borjüszérumet tartalmazott. Az elanolos oldatot (10 mg/ml) egy géz párnán abszorbeáltuk (0,2-0,4 ml), és ezt használtuk az egerek topskáhs kezeléséhez.

(a) Öt darab négyhetes csupasz egeret heinjekciózfuk s.e. 4 különböző helyen 0,1 ml szövettenyésztő tápkőzeggel, amely 2 x 10* MM96L humán melanoma sejtet tartalmazott. Ezek közöl három egeret az 12., 3., 5., 6., 7. és 8, napén betnjekeióstttnk 0,1 ml. 5% botj& magzati szérumot és 20 gl etaaolos kivonatot tartalmazó RPMI ^közeggel. Ezenkívül a kezeit egerek maximum 4 tpplkibs kezelés formájában kb. 5-10 pld kaptok a 10 mg/ml etaaolos kivonatból vagy a nyers hígitadan nedvből. Mindegyik kezek egeret két eltérő helyen kezeltünk topikálisaa vagy az etaaolos kivoosttsl vagy a nyert! nedvvel. Az egyik egér a toptkstts kezelést & 12., 13. és 14. napokon, a másik két egér pedig a 15., 19., 20, és 22. napokon kapta. A tumor térfogatát a 32, napon mértük.

A topskábs kezeléseket megelőzően a kivonatot tsrtabwzó injekció látszólag nem hatott a tumor iérfogatára. Az etaaolos kivonattal való íopikális kezdést követően egy éjszaka alatt változás következett be a tumor megjelenésében. A tömörek szürkés-feketére ssdnezőátek, majd kemény, fekete daderoa megjdenásűvé váltak, melyet var képződés követett, A nyers nedvvel kezeit tumorok hasonló változásokat mutattak egy nappal később, Egyidejűleg as etaaolos kivonat és nyers nedv összes hatása hasonló volt, így a topíkábsan kezeit lézlók méréseit összevontok. Azokon az egereken, amelyek plusz töpikális kezelési kaptok, a tumor térfogata 76%-kal csókként (p<0,2). Egy etapoísa kivonattal kezelt temer teljesen eltőst, amint az a 13, ábrán látható, és nyele másik felület i fakad varattá zsugorodott Másik három kezek taw kezdetei hasonló elszíneződést és tumor regressziót; unhatott, de a topikálts tesdés abbahagyását követően, itt nappal a tnérés elvégzése előtt éjra nőni fedett.

(b) Hat darab négyhetes C57 Fekete (C57B1) egeret ben^ekcióztuak a hastájoa ^t külöaböző helyes 0,1 .ad sttóvetteayéstoó lápkSaeggak amely 10* »16 melanoma ráksejtet tartátaazoit. Hagytok & tumorokat 4 ί* χϊ φφ φ·«·ί· φ * χ φ φ <** *φφ « φ > * X Φ * Φ * X !í$t *φφ # ssspsg safej&bg ssaM wbfe tetakk az taatokat az tatai reta sstask 3 taeteta az U 2. ás 4< napon (20 gg «testes kivonat 0,1 ta $% mgtai tejé sztamoí teaksazá RBM! lépkésegteB ée egy tapMIb teelás a 4, napon (54Ö pl a 10 tsg/atő etamlos kteosfte), Nyolc nappal az olaá kgtaeiö ato a mmorek tttakte tata^- tök ogy taotassos vonalzóval A kezelés a Blö nsetsnosna tamrok ttabta 04%-kal esöfekeutae (p<ö,05) M. rom kezeit éltaan Osszetaeootes a hfeomkonííöB egér u« itetavek

Az tefenkayokot a IS. táhliaaásan foglaítsfc össze.

ί

ot-

4 44444

4 * V 4 4 44 4

444

4 4 4 4 4

4

4

4 4

4 4 S 44 ΐ

Ás MM9SL scjivonal Í5Ö cní-es lemezeken, 1Ö% magzati borjó szérumot tartalmazó fiPKál ló4Ö tápközegben tenytetótt teafa nselaaoma sejtjeit fekobáliak a tisztított kivonattól 4 órán keresztül 3?^sC-on 5%

COs'levegöhea. A sejteket foszf&ttal-puferolt sóoldattal (PBS) mostuk, PBS-ben lekapartak, pelletáltnk, 1 ml PBS-bea újra sznszpendáltók, peiietáltbk és felvettük 3Ö0 μΐ NsMÖ lizálő páterben, jégen I S percig állni hagytuk, pelíetáltók és a felölészöt proteináz K»val és SDS-seí 37°C-on 25 percig kezeltük, majd fenolt» kloroform» mai extraháltak és a teljes RNS-t amntóníum-acetót/etónollal egy éjszakán át -2Ö*C~oo kicsaptak. A Promega taRNS izoláló kitér használtak a mRNS izolálására, amelyet ezután revemen étirtok ^.jelzett dCTP jelenlétében <:DNS-sé, Ez utóbbit egy Genom Systems te» Geae Discovery Árray 1.2 (GD Aj-bers a gyártó utasításai szerint híbridízáltuk. A sorrendet egy Molectóar Dynamics Phosphorfteger-rel mennyiségileg meghatároztak, és ImageQaat és Excel softverrel analizáltuk.

A kezelt és kezeletlen 'sejtókból kettőzök folt térfogatok arányát kiszámítottak, és ezt használtuk a génaktiválás (arány >1) vagy gátlás (arány <1) mértékének definiálásra. A hátterek tipikusan 500 és lOÖÖ közé estek, de nem kivontak; ennélfogva a megállapított arányok az aktuális változások aMbeesüh értéket felé hajlanak,

A sorrend több mint 18ÖŰÖ egyedülálló szekvenciából, ágy-nevezett expresszált szekvencia tagokból (ES'l'-k) álló eBNS pontot tartalmazott, melyek közül megközelítőleg 30ÖÖ humán sejtók azoaosítoó expresszit génje. Számos EST szekvencia a tesztelt hrnafa melanoma sejtekben op~ vagy downxtream irányban szabályozott a kivonattól történő kezelés áltól Csak a dupWtokon alapuló változások, melyeknél az arány standard deviációja <30%, tekinthetők biológiailag szignifikánsnak étel az állapotnál Azt is meg kell jegyezni, hogy egy viszonylag rövid, 4 órás kezelési időt alkalmaztunk, hogy a szét a legkorábbi és legkritikusabb eélpen^ait azonosítónk. Az valőszfeő, hegy a további lényeges változások a génespresszíébas, melyek az elsődleges választól függnek, esak esen idő ntfa fognak végbemenői

Néhány releváns ismert gén ts'awteiptotánsk rangében bekövetkezett változások eredményeit, melyek ügy tókfatoSek, hogy előnyösek a rákos sejtek tevédén vegy közvetett szabályozására, a 19. táblázatot foglaltak össze,

A példákban megfigyelt sejt morfológiában bekövetfcszett változások várhatóan nagyszámő, olyan fehérje ttozv-regídáeló-jának eredutoyekéut jönnek léte, amelyek az aktushoz, az egyik lő ehostóseletáKs fehérjéhez kötődnek. Ebben szintén szerepet játehst a rettol-kőlő fehérje növekedése, valamint a retísoidok intmceünltó szintének növekedésén keresztül a differenciálódott fesmtipns redukálásának fokozódása.

A szoíáris UY-sugárzás által redukált jcienfegi és jövőbeni DNS-károsodás javítása növelhető az XF javító (reparr) fehérjék megfigyelt indukciója révén, Ezentálmeuően a GADD45d>en és az ionizáló sugárzás rezisztóas lehérjébm (DAE3> bekövetkezett csökkenés felhasználható a tamorszövet radioterápiém való szentótistálásátes. Áz utóbbi változás matéu figyelemre méhő, mert« erősen felül-szabályozott az· MMÖőS, sejtekben az UVB áltól, and a bőrrák és melanoma «kősója.

Nágyssámú, az Immmmlasz fokozásáén felelős molekula indukálódik, kötessen a G-CSF. Erek közöl néhány, mint pl. a fe Ifisitekömpsfihilfe komplex (MHC) fehérjéi, az ímmanterápíára felhasználható jellegzetes telajdoaságokssk fekmtfeüök, feteva az blö T-scjt aktivitást.

A sejtefivekedés saabályozósástak IggteigmSkáasttbb változásai a G-féhérje és PKC sziatézssatjábaa detekfeh változásokra, és a pmtóoszóma aktivitás tókeződásám vonatkoznak. .Az teaceiiaíáns jeladás fsig42

ΦΦ

ΦΦ * φ φ φφ»

X Φ $

ΧΦ ΦΦ

ΧΦ Φφ«φ oal&g) számos sejb&iyamat. márnám kdük» beleértve a prslilbtáetdt ás szátbezlstd {patfevsyj ás ezfotdrásdtl kátelmbstások, igy pb azok, mlyeá a Ras jeladás által szabályo»taky soíztsális egy»sályábass bekbvstáezetz változásokat, nmlyetozk valószitdlleg ellentétes követkasndztyoí vonunk a aejt seáosárs, A ptoteraszslnra IAMT7-SI btjrtgstmstts iodbkamjáoek szlatja a iagzrargasabbsek között vott, amit bármely géoze a kisárletben tsláltrmk, ás jekratös nmdtvszdást tehetne elvárni számos lábét je ssfotéalsébeo. az obikvdin útvonalon,

A gén>ezpzissszM adatat alapján a felálzoány szerint alknis«seb vegy&tsk várhatóan. aktivsk:

1, a gén-ezpszstsoó nkkbrattásában a G-lahétjs, PKC ás te jeladást zsivotraiakban, oly nekiess, begy sgy ás vért nákefcoes nkSivstáshös:. vezsafeak;

2, a szalmás W es basőslé szétrak állal eUlkfeett veszély nfeékkMfeen a DNS javítás és az tntnram válasz fokozása által a eél- vagy az eDfekdsr sejtek!»;

3, ndjnvánskánt mdiotsadpiáltos vagy ntás DNS-t károsító szarod végzett terápiához, a protokdv lekérjék: (GADD5Ó ás ÖAP3) dtttelteiyeása alapjára

&

&

i * ♦ *

S * S’ ♦« * tt t «♦ «

M * »

ψ n * ΐ « **

H. példa; Szólóm keratózts kezelése egy irarjtónöukéuwn

Az etikai bizottság engedélyéi megkaptok a Queenslsnd Institute of Medical Reseatch-íöl egy orvos által ellenőrzött kísérlethez, melyben az £. pepte nyers nedvét alkalmazzuk egy humán személynél arcon lévő szoláris keratózis kezelésére.

Ausztráliában honos növényekből kapott nyers kivonatot 50%-os glicerinben -2G°C-on tároltok 2 hétig, és ezt alkalmaztak, egy géz párnán a klinikáikig diagnosztizált szoláris keratózis felszínéhez, amely körülbelül 5 mm áimérőjü volt, és a férfi önkéntes arcának bal halántékán helyezkedett el Körülbelül 50 μί érintkezett a felszínnel. Egy nappal később egy második kezelést végeztünk ugyanazon a helyen. Az első érintkeztetés után semmilyen reakciót sem vettünk észre 4-5 óráig, ezután gyulladásos reakció lépett fel a kezelés helyén és kiterjedt SÖ-1ÖÖ mm átmérőjű területre. Egy nappal később a duzzanat lokaíizálódott, és a kezelés kelvén egy hólyag képződött és a lokalizált tapaszokon disztális irányban a kezelést helytől, ha új preraalígnus helyeket is megcéloztunk. Négy nappal az első kezelést kővetően a duzzanat lelohadt, és a kezelt helyeken var-képződés volt megfigyelhető. Tizennégy nap múlva a var Íehámlott új bőrt hagyva maga alatt. Hát héttel később a kezel? terület még lilás színárnyalatú, de már nem volt semmi nyoma az eredeti szoláris keratózisnak. Kontrollként 1 cm² területen ugyanannak az önkéntesnek az alkatján a normális bőrt hasonló utódon kezeltük. Enyhe gyulladás lokaiizálódoit, amely 7-10 nappal a kezelés után eltűnt

A szoláris keratózis kezelésé? kísérő erős gyulladásos reakció visszatükrözheti az ölő-T sejtek felerősödését (recruit-ment) és proliferációját, amint azt a 13. példában a gén elrendezés szkrineiéséből kapott immunválasz eredményei alapján, és az alábbi 15, példában az £. pep/tts nyers nedv által a T-sejíék wt vitro proliferáctójának megfigyelése alapján feltételeztük. Az ölő-T sejt aktivitás fokozódása is kulcslépésnek tekinthető a rákos sejtek immunválasz által történő elpusztításában, és segíthet megmagyarázni a premalignus léziók felismerését és támadását disztális irányban az eredeti kezelés helyéhez képes?.

15, példa; A nyers peóy és a TLC-jj tisztított ”A” és ^!Tt^,: frakció hatás?? a normális roelanoejfa

A 12-O-tettadekanoíl-forboi-í3-acetát (TPA) elengedhetetlen a normál melanociták i« viíro tenyésztéséhez, mivel ezek a sejtek TPA nélkül csak nagyon gyengén szaporodnak. Egy előzetes kísérlettjén £. joep/m frakciókat adtunk a TPA-nélküli tápkőzeghez a kísérlet kezdetétől. £. pep/ns frakciókat adtunk friss tápkőzeghez, 3 sejtszámot pontoztuk és összehasonlítottuk a friss, £. pep/as frakciókat vagy TPA-t nem tartalmazó tápközeggel, Ezzel a sorrejjddel magasabb melanocitaszámot kaptunk, mint a kontroli” TPA-hiányos tápközegben szaporodó sejtekkel, érdekes -módon, az£. pep/as frakciókat tartalmazó tápközegben a sejtek egészségesebbnek látszottak, mint azok a sejtek, amelyek az úgynevezett standard TPA-t tartalmazó médiumban növekedtek, így az £. ρφίκί-eredetö vegyületek nagyobb lehetőséget nyújthatnak arra, hogy a TPA-t eszközként használjuk a sej t--tenyésztésben.

Egy második kísérletben nomál melanocitákar helyeztünk lemezekre, 5ÖÖ0 sejtet snélyedésenként RPMX 1640 tápközegben, amely 10% magzati borjú szérumot, kolera toxint, antibiotikumokat és TPA-t tartalmazott. 24 óm múlva a tápkőzeget a sejtekről leszívással eltávolítottak és friss. TPA nélküli tápközeggel helyettesítettük, de a speciális (A és H) frakciók hozzáadásával. A sejteket pontoztuk további 10 napos inkubálás után. Az eredményeket a 20. táblázatban mutatjuk be. Az nyilvánvaló, hogy még l/'5,ÖG0,ÖÖÖ hígításnál is sejtproliferá-ciós hatás figyelhető meg a nyers és tisztított frakciókkal, ellentétben a sejt-gátló hatásokkal, melyeket ezeknél a koncentrációknál a tumor sejtvonaiakkal szemben megfigyeltünk, amint a korábbi példákban bemutat46 te. Egy eikSltittitett tesztben a T-sejíek /» vám prohfeteiöját szinte tnegfrgyelíök, miután & T-sejteket nyers £. pepőu nedvvel kezeltük.

Mivel mlsd a normát melanoeiták mind a T-sejtek pteterá-eiéját indukálták az £ pepin? nedv frakciói, ez· a szer szeles körben alkalmazható lehet sejí-prnlíferáetös szerként normális sejtekhez akár úr vívó akár te teo, bármely olya» orvost állapotban, ahol a normális sejtek regenerációja előnyös lehetne, beleértve - áe nem korlátozva ezekre - a

a) bőrsejtek (kemíinoeitáh) megsokszorozását gyors sebgyögyuláshoz traumás esetekben és sebészeti beavatkozások.után, valanünt égésekből való felgyógyulás során;

b) pasbcatifaís sziget sejtek megsokszorozását beültetéshez (implantációhoz);

c) T-ssjtek és az Immtsmundazer más sejtjeinek megsokszorozását. Érdemes megemlíteni, hogy a hatás kiterjedése a kezelési ponton te a barnán önkéntesben a szolátis karatém kísérleti kezelése során, megmagyarázható a természetes ötő-T-sejte felhalmozódásával a kezelés régiójában.

d) elöregedett vagy elhalt szövőt regerserieíóját ntájfeéi, veséből, vastagbélből, tüdőből és szemből;

«) gszds szövet megsokszorozását mint egy lehetőséget szert' átültetéshez.

Különböző dpnsú betetted feloldottunk steril MilliQ™ tehén 1 mg/ml végkoueonbációban, és a íenbekben lent módon megbigüotUsk 0,1 mkre azövettenyészlő iágkőzeggel, amely 5ÖÖ0 M.M9ŐL sejtet tartalmazott A sejteket 4 napos iskuhálás után pontoztuk, A kopott ettenéttyekei a 21, táblásaiban mutatják be.

Miközben a legtöbb bétáin nem befolyásolta a ssjtszámoé. a Ö-alanin-femm-bidmktód (honsobtesn) lenyomta a aejtsssámet .20 pg/ml végknsKenrtáeiósüsl,, és a sejtek dendrites snegjelenést mateak, Á t-4-btároxt-Ν,Ν-dlntel-ptolln .tette gátolta a sejtszámot 20 ggZte végknnoentráelőnál; azonban a sejtek morfológiája polidettdtites fetmájúvá változott, melynek jelentősége még nem ismert.

Esnek alapján azt tehet mondani, hogy a ü-slsnín-betei-híteklonid (homoboter) egy alkalmas hordozd szer lehet az & pepfe aym nedv vagy tisztitől! aktív anyagainak, beleértve sz mgenolt, géptest és I -ő jatroiánokat, kiszereléséhez akár őmsagakbaa akár kosfetecióbas. Ezt a készítményt lei lehetne használni premalignus bőr-károsodások logikáiig kezelésére alacsony koncentrációjú K pep&r batóanyag/okfesl, vagy rákellenes szerként kiszeotei magasabb koncsnöáeíőjő. E. pepte hsteuysgmkktel, Feltételezték, hogy a heteink per se felhasználhatók rákellenes szenekként; lásd pl, US $«$45,őó? szarná szabadnlnb leírást (Wíersema et &!,)<

Felületaktív tulajdonságaik miatt a feetaínukat széles körben alkalmazzák ibrmulázó alkotórészekként kozmetikumokban. Zwstter -teos tulajdonságaikra visszavezethetően a betörnek elő tudják segíteni más alkotórészek hanszgítttjár is a hör mélyebb rétegeibe. Egy hatalmiak, melyet szokásosan alkalmaznak kozmetikai kószihmésyekben, nagyon lúg & pepim nedv kivonatokkal vagy msekből származó tisztított frakciókkal, mist pl, jatroiáuok, peptoáo, gamllán vagy ingenáo, önmagában vagy tenbináelóhao, kívánatos lenne kiegészítő tulajdonságokkal rendelkeznie, Az Ssszes tesztelt bétáin közöl, beleértve a gllctn-beteint, csak a il-alanin-beterhidroklortdnak (homo-betem) volt fenotípusl átfordító hatása, az sikolt a legmérsékelteöb, az & pepte nedvhez és Etetőkhöz hasonlítva.

♦ ψ 4 4 4 « 4 444

444

4 4 4 4 4

4

4 4 4 4

4 4 4 44 >

/

Κ 444S4 «

4 4 4 4 4

444

444

4 4 4 4 4

4

4 4 4 4

4 44 !

Φ φφ a* φφ φ. Φ φ ♦ .·♦ *· .χ Φ Φ Φ Φ'Λ Χ Φ ·* χ * φ ’ * * *

ΦΦϋ Λ* ** *** *

Iwdaloísiétótók kjantói Μ aad Ctoehtó, S. Int. 3» Oneoivf 1358 8 1X43-1

ΦΧ»«ΦΜΦ& φ *«« and Fitrg«r&Xd» G.B«

3, Kati, Cancar Xast., 1352 .13 .133

Bosch, R.R»» FtóaX» &*M, RX, Oa Fotó, 318Χ» Ml

Ύ \·£' 4< i·

P.H, , Font, J.J <$ 45* y & » & >

óbb

AWASyiW

ΒΦ CaXX Mea» 133? Sw X; 23S<2> 188?, 235 437-435

Bvssíí, MM and Klnghow, 2UD.

Stóanical Jnnwal of tha X»Xmaan Soeiefcy, 1877 74 33-35

SW8.s_f 1.,4,. ami Ossat, MM

FalAone G tó «X, raaw«o.> 1384 48 10-174

Francia» Ö\B»_S Bárt, Msd M Autó», 18 S5 8

Wilaan» F.R «$ and kifa,

.. ? <

:X ni

Λ>νοχφ

Gunditóa, Mi tó

Cató, λίϊ. J. Mad»» 1883 33 444-447 * »4. SS *í x S S SS · » SSS S S i * s * * *

SS* ** #* *** »

Guc, S. de AJ

Chung Kuo Chung Yao Taa ChXh, X9SS 20 744-74S

B&rkwXX, uX <5 a< <«* vS

Ccearcinogans frna ©uphorbiaoaaa and iw on Fhaxmcognoay and ^hyfcochemisfcxy* , 14?sm. , Springer V&xXag 1770) *

Antlcancar Baseweh, XSS4 14 S33“B3B

Ó'akupwie> J._f Rhytónchmiatry, XI nsfcexn, T_t| Bit > ΐ?

M„ and SUw, M,

:axxhá:Xa

J,

·*

X sxx-ms _iy te a& ai Mám* Xnsfc* Owaldo Crna,

X«««%ssss

Α.ϊ, »d FOS tan, &*

BasyeXo^adia of Cowson mtunaX Xagradiwta Vsad Food, Dnsgs and Cos&sfcios, John WXXey & Sons, lac. 2^a4 adi&ion, 1S§S ii, m,, vwuXapaXXX, 8,, UXXah, l_M Xsm, and Xanoa, é». J FhyaioX*, Xt§S 274 G5SS~US0£

Onffay, bLB

Φ* $ β 4

ΦΦ

GÍU. V λ?

'1; χ, <* ·Φ*

Cfeuag Kuo Chung Kis Chieh Ho 7aa Chih, 1994 14 282-284 karca, J, A. „ Sm-C«mra, J. F\, Yusfce, A., J&kupovxc. 4Γ and Jaska, F.

Fhvtecheaúsfcxv,. 1998 47 1621-1830

5üits«»to, T. ec ál Flanta Med., 1992 SS 25S-2SI l, F, and Faxsons, 7,G,

Caacsr tes, 1980 46 5009-5013

E.G., Chsm, H,2\, Davis, 0GR., Cella, d.E.

ki w tvy 1997 3« ,-X-'fXS~í kcalla, A. sD ni .Proc, JT&fcl, Acad. S«l. HSA,

1354 91 1X328-1X333

Okaaa, 5, aá al

FAyfcochsminkry# 1996 42 473-1

Í-S-Z ii., t,f ο ?:

Pesoseai, G., Baarila, D.» Flacexdtx» ddbili, F„ aad CXaataai, 5.

Y.

, 139 B 37 29’

Plns-Masison, C.A,, Radoaovlch, M., Sakaguchi, X. Appalla, F, and Br&dy# üü, d. Vlrol,, 1998 72 6348-6355

Stavric, F, and Sfcoltr, D.D,

Food Cosmet. Toxicol,, 1976 14 141

S'eirpe, F. ad al

Siöcbüsu Biophys. Acfc&, 1393 ÜSS 33-39

Susaman, L.A.F, and LIggirs, D.F.

AusdraXi&a and New Sealaad Journal of Snrgary, 1.9 98 gg 278-27S

Vijaya, Fü ad aX

J. Bthnopharmanol„, 1.99S 49 XI5-XXS

Waudnn, D. and ühlek, 9\

M«d, J. Ausfc.,.X9?£ 928 ^x~24

Ydahxda» T. ad a,X

Chasu Fhaxm, Bull. (TnfcynU 1994 O 1803-1807

Claims (4)

1. Egy ingen án vegyidet alkalmazása rák vagy más, oeoplssztikss sejtekkel kapcsolatos állapotok kezelésére alkalmas gyégyszefeészitmésy előállítására, ahol az említett vegyület (a) előállítható az őfeoőerbte Eapőorbt# fekte es/vagy fetepfeztetes dmmmoW» nedvéből 9554-os etanolial végzett extrabáiávsai;

(b) stimulálja a metailotbionein gén aktiválódását;

(c) képes a rákos sejteskai tnegőlai vajgy szaporodásukat gátolni, de lényegében nem hal a normális oeos&tahs fibroblasstokm vagy spontán transzformált keratínoeitákta;

ahol az említett aktivitás 1.5 perces 95X«on történő melegítés «tán vagy seetonos kezelés alán is megmarad.

2. Az. 1. igény pont szerinti nikshnazás, ahol a vegyidet képes gátolni legalább egy sejtvonai szaporodását az alábbiak közül: MM9ŐL, MM229, .MM220, MM537, MM2Ő58, HoLa, B16, X1M1215, A549, MCF7, MCClóés Coiolő,

3. A 2. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a vegyidet képes gátolni az MMből, sejtek szaporodását vagy képes differenciálódást indukálni as MMPbl, sejtekben,

4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, adni a vegyidet képes a normális melanoeiiák és/vagy T-srjtek pröhfefeeiöjét íadokáhii,

5. Az í. igénypont szedeti alkalmazás, ahol a vegs4det 2ö»aeetiMtegei5öh3’aí5gelát.

ő. Az I, igénypest szeristi alkalmazás, ahol a rák bőrrák, rosszéndslate melanoma, Markel sejt karol» nóma, pikkelyes sejt ksrcináma, hazáim sejt kzmlnőma vagy sz&lárb kesdőzía.

7. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a készítmény topikális adagolásra alkalmas,

4, Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a tők szilárd te;nor, tettetek,, vastagbéltek, prosztstetek. otehoyaktek vagy mellrák.