HU227043B1 - Stabile microbubble suspension as enhancement agents for ultrasound echography - Google Patents

Stabile microbubble suspension as enhancement agents for ultrasound echography Download PDF

Info

Publication number
HU227043B1
HU227043B1 HU9401409A HU9401409A HU227043B1 HU 227043 B1 HU227043 B1 HU 227043B1 HU 9401409 A HU9401409 A HU 9401409A HU 9401409 A HU9401409 A HU 9401409A HU 227043 B1 HU227043 B1 HU 227043B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
phospholipid
suspension
concentration
microbubbles
microbubble
Prior art date
Application number
HU9401409A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT74561A (en
HU9401409D0 (en
Inventor
Michel Schneider
Jean Brochot
Jerome Puginier
Feng Yang
Original Assignee
Bracco Int Bv
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=8212014&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU227043(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Bracco Int Bv filed Critical Bracco Int Bv
Publication of HU9401409D0 publication Critical patent/HU9401409D0/hu
Publication of HUT74561A publication Critical patent/HUT74561A/hu
Publication of HU227043B1 publication Critical patent/HU227043B1/hu

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00Preparations for testing in vivo
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00Preparations for testing in vivo
    • A61K49/22Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations
    • A61K49/222Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, liposomes
    • A61K49/225Microparticles, microcapsules
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00Preparations for testing in vivo
    • A61K49/22Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations
    • A61K49/222Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, liposomes
    • A61K49/223Microbubbles, hollow microspheres, free gas bubbles, gas microspheres

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Acoustics & Sound (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Surgical Instruments (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
  • Physical Water Treatments (AREA)
  • Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
  • Physical Or Chemical Processes And Apparatus (AREA)
  • Aeration Devices For Treatment Of Activated Polluted Sludge (AREA)
  • Apparatuses For Generation Of Mechanical Vibrations (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Amplifiers (AREA)
  • Colloid Chemistry (AREA)

Description

A találmány az olyan vizes alapú, gázzal töltött mikrobuborékokat tartalmazó, injektálható szuszpenziókra vonatkozik, amelyek olyan ampfipatikus vegyületeket tartalmaznak, melyek közül legalább egy a mikrobuborékok idő- és nyomás-nyomásállóságának növelésére alkalmas foszfolipid stabilizátor, ami a szuszpenzió össztömegére számítva 0,01 tömeg%-nál kisebb mennyiségben van jelen. A foszfolipid stabilizátort lamelláris vagy lamináris alakban alkalmazzuk.
A találmány tárgyát képezi továbbá a fenti szuszpenziók előállítási eljárása is.
A folyékony hordozóban gázmikrobuborékokat tartalmazó szuszpenziók ultrahangvizsgálatokhoz hatásosan alkalmazható, jól ismert kontrasztszerek.
A mikrobuborék szuszpenziók akusztikus készítményként, azaz az ultrahangos képmegjelenítés kontrasztszerként való kifejlesztése azon a korábbi megfigyelésen alapul, hogy a gyors intravénás injekciók hatására az oldott gázok buborékfejlődés közben kiszabadulnak az oldatból. Ezek az intravaszkuláris gázbuborékok a vérhez viszonyított akusztikus impedanciájuk különbözősége miatt kiváló ultrahangos kontrasztszerek.
Ha élő szervezetek véráramába ilyen folyékony hordozós gázmikrobuborék szuszpenziót injektálunk, az ultrahangos vizsgálatoknál alkalmazott akusztikus képmegjelenítés jelentős mértékben felerősödik, és ezáltal a belső szervek vizuális megfigyelhetősége nagymértékben javul.
A belső szervek és a mélyen fekvő szövetek képmegjelenítése az orvosi diagnózis döntő eszköze lehet, ezért számos olyan kutatást végeznek, amely nagyon koncentrált stabil és ugyanakkor könnyen előállítható, minimális inaktív komponenst tartalmazó, hosszú ideig tárolható, és egyszerűen szétosztható gázmikrobuborék-szuszpenziók előállítására irányul.
Az ilyen oldatok előállítására irányuló számos erőfeszítés ellenére azonban eddig még nem sikerült teljesen kielégítő eredményeket elérni.
Az EP-A-0 077 752 számú európai közrebocsátási iratban (Schering) olyan eljárást ismertetnek, amelyben a gázmikrobuborék-szuszpenziókat egy felületaktív anyag vizes oldatának és egy stabilizálószerként alkalmazott viszkozitásjavító szer oldatának összekeverésével állítanak elő.
A gázbuborékokat úgy vezetik be az elegybe, hogy a reagenselegyet egy kis résen levegővel együtt átkényszerítik. Szén-dioxid-mikrobuborékszuszpenziót úgy állítanak elő, hogy egy felületaktív anyagot, nátrium-hidrogén-karbonátot és egy viszkozitásjavító szert tartalmazó oldathoz savat adnak. A komponensek összekeverését azonban közvetlenül az alkalmazás előtt kell végezni, és az oldatot az elkészítés után azonnal el kell fogyasztani vagy be kell injektálni. Az ismertetett felületaktív anyagok (tenzidek) lecitineket, észtereket és zsírsavak és zsíralkoholok poli(oxi-etilén)-nel és poli(oxi-etilén)-ezett poliolokkal, például szorbitollal, glikolokkal és glicerinnel, koleszterollal alkotott észtereit; és poli(oxi-etilén)-poli(oxi-propilén) polimereket tartalmaznak. A szuszpenziók tenzidkoncentrációja 0,01-10 tömeg%, előnyösen 0,5-5 tömeg%. A viszkozitásjavító és stabilizálóvegyületek közé tartoznak például a mono- és poliszacharidok (glukóz, laktóz, szukróz, dextrán és szorbitol); poliolok, például glicerin, poliglikolok, vagy polipeptidek, például a proteinek, zselatin, oxi-polizselatin és plazma-protein. A viszkozitásjavító szerek összes mennyisége 0,5-50%-ban korlátozott. A poli(oxi-propilén)—poli(oxi-etilén) polimerek (például Pluronic F—68) viszkozitásjavító szerként való alkalmazását is ismertetik.
Az egyik előnyös változatban úgy állítanak elő mikrobuborékszuszpenziót, hogy ekvivalens mennyiségű tenzidet [0,5 tömeg% Pluronic F-68 kereskedelmi nevű poli(oxi-propilén)—poli(oxi-etilén) kopolimer vizes oldatot] és viszkozitásjavító szert (10%-os laktózoldat) steril körülmények között alaposan összeráznak. így 2 perc elteltével olyan szuszpenziót kapnak, amely közel 50%, 50 pm alatti méretű buborékot tartalmaz. A leírás szerint a felületaktív anyag és/vagy viszkozitásjavító szer mennyisége 50%-ig is felmehet, a specifikus példákban azonban 1-4% Pluronic F-68 termék alkalmazását ismertetik.
Ultrahang akusztikus képmegjelenítő szerként alkalmazható, könnyen előállítható vizes szuszpenziót ismertetnek a WO-91/15 244 számon közzétett nemzetközi szabadalmi leírásban. Ezek a szuszpenziók lamináris és/vagy lamelláris filmképző felületaktív anyagot és adott esetben hidrofil stabilizátort tartalmaznak. A lamináris felületaktív anyagok lehetnek liposzómák formájában, azaz mikroszkópikus hólyagocskák, általában gömb alakú hólyagocskák lehetnek. Ezeket a hólyagocskákat általában egy vagy több koncentrikusan elrendezett, az amfipatikus vegyületekéből (hidrofil és hidrofób csoportokat egyaránt tartalmazó vegyületek) kialakult bimolekuláris réteg alkotja. A kettős rétegben a molekulák úgy helyezkednek el, hogy a hidrofób csoportok egymással szembenéznek, a hidrofil csoportok pedig a vizes fázis irányába mutatnak. A szuszpenziót úgy kapják, hogy a laminarizált felületaktív anyagot a vizes fázissal való összekeverés előtt vagy után levegővel érintkeztetik. A filmképző felületaktív anyagok lamellárissá való átalakulását különböző liposzómaképző eljárással, ezen belül nagynyomású homogenizálással vagy akusztikus vagy ultrahang-frekvenciás szonikálással végzik. Az ismertetett foszfolipidek koncentrációja 0,01-20%, és a mikrobuborékok koncentrációja 108—109 buborék/ml. A mikrobuborékszuszpenziók hónapokig stabilan eltarthatok. Az 1. példában a foszfolipidek koncentrációja 0,5%.
Stabil akusztikus vizsgálatokhoz alkalmas szuszpenzió-előállítási kísérletet ismertetnek a WO-92/11873 számon közzétett nemzetközi leírásban is. Az akusztikus vizsgálatokban kontrasztszerként alkalmazható, mikrobuborékok abszorbeálására és stabilizálására szánt vizes készítményeket poli(oxi-etilén)/poli(oxi-propilén) polimerek és negatívan töltött foszfolipidek, mint például foszfatidil-glicerin, foszfatidil-linozitol, foszfatidiletanol-amin, foszfatidil-szerin, valamint lizoformjaik alkalmazásával állítják elő. A készítmények foszfolipidkoncentrációja 0,01-5 térfogat vagy tömeg% lehet,
HU 227 043 Β1 azonban a leírásban és az igénypontokban ismertetett dipalmitoil-foszfatidil-glicerin (DPPG) koncentrációja 1%. A készítményeknek a negatívan töltött foszfolipidek mellett 0,1-10% polimert (Pluronic F-68) is kell tartalmazniuk. A készítmények összes oldottanyag-koncentrációja 5,1-10,4%. A mikrobuborékkoncentrációt nem ismertetik, de az eredményekből körülbelül 107 buborék/ml koncentráció becsülhető. A szuszpenziók ismertetett stabilitása jobb, mint az EP-A-0077752 számú európai közrebocsátási iratban közölt eredmények.
Az eddig ismert készítmények másik hátránya, hogy nagy mennyiségű különböző oldott anyagokat, mint például polimert, foszfolipidet, elektrolitot és egyéb olyan oldott anyagot tartalmaz, amelyek miatt gyakorlati alkalmazásuk egyre bonyolultabbá válik. így például ismeretes, hogy bizonyos betegeknél a nagyobb koncentrációban alkalmazott poli(oxi-etilén)/poli(oxi-propilén)=Pluronic kereskedelmi nevű termék) kellemetlen mellékhatásokat idéznek elő [lásd például G. M. Vercelotti és munkatársai Blood (1982) 59, 1299. kiadvány]. Bizonyos esetekben a nagy foszfolipidtartalom sem kívánatos.
A nagyon sok különböző féle oldott anyagot tartalmazó készítményeket nem szívesen alkalmazzák, és széles körű elterjedésük sem kívánatos. A gyógyszeripar manapság gyakorlatilag azt tűzte ki célul, hogy a különböző gyógyászati és gyógyszer készítmények aktív és inaktív összetevőinek koncentrációját a lehető legkisebbre csökkentse, és minden olyan összetevőt elhagyjon, ami nem szükséges. A hatásosabb készítmények előállítására és formázására irányuló törekvések ma folyamatosan nagy fontossággal bírnak. Különösen így van ez az akusztikus vizsgálatokban alkalmazásra kerülő mikrobuborékos szuszpenzióknál, amelyek összetevői nem gyógyhatásúak.
Azonban amint azt a fentiekben ismertettük, a jelenleg alkalmazott ilyen készítmények tipikus koncentrációja 1-4 tömeg%, és a szakterületen nem javasolják a foszfolipidek és a foszfolipidtől eltérő adalék anyagok csökkentett mennyiségű alkalmazását. Ennek valószínűleg az az oka, hogy a szokásos rutinkísérletekben az adalék anyagok további koncentrációcsökkentése nem eredményezett a gyakorlati alkalmazáshoz megfelelő stabilitású szuszpenziókat, és nem mutatta a koncentrációhatár alsó értékének csökkentési lehetőségét sem.
Munkánk során azt tapasztaltuk, hogy ha stabilizátorként foszfolipideket alkalmazunk, ezekkel legalább 107 mikrobuborék/ml buborékszámú, gázzal töltött mikrobuborékszuszpenzió állítható elő. Az ultrahangos akusztikus vizsgálatokban kontrasztszerként alkalmazható szuszpenziókat úgy állíthatjuk elő, hogy egy vizes hordozóban a mikrobuborékok idő- és nyomásállóságának növelésére legalább egy foszfolipidet szuszpendálunk. A foszfolipid koncentrációja 0,01 tömeg% alatt van, azonban legalább olyan nagy vagy annál nagyobb koncentrációban van jelen a foszfolipid, amelynél a foszfolipidmolekulák a gázmikrobuborék-folyadék határfelületet önmagukban alkothatnák. Az alkalmazott foszfolipid felületaktív anyag már elhanyagolhatóan kis mennyiségben (akár önmagában, akár viszonylag kis mennyiségű egyéb amfifilekkel alkalmazva) is hatásosan alkalmazható a mikrobuborékok stabilizálására. Az egyéb amfipatikus vegyületek (például nagyobb mennyiségű (Pluronic®) alkalmazása esetén fennáll az a lehetőség, hogy a stabilizátormolekulák kölcsönös kohéziója csökken, és monomolekuláris foszfolipidfilmképződés nem jön létre. Azonban, ha a készítmény nem tartalmaz egyéb nagy mennyiségű amfifil anyagot, a foszfolipidmolekulák közötti intermolekuláris kötőerők (elektrosztatikus kölcsönhatás vagy hidrogénkötés) szabadon érvényesülnek, és elegendő mértékűek a buborékok összeomlás vagy egyesülés elleni stabilizálására alkalmas stabil filmszerű szerkezetek létrehozására.
A találmány tárgyát az olyan nagy mikrobuborékkoncentrációjú nagyon stabil, hosszú ideig tárolható és könnyen előállítható szuszpenziók képezik, amelyek jellemző tulajdonságaikat még akkor is megtartják, ha a szuszpenzióban alkalmazott felületaktív anyagok és egyéb adalék anyagok koncentrációja az eddig ismert ilyen készítményekéhez képest sokkal alacsonyabb. A találmány szerinti készítmények foszfolipidkoncentrációja akár olyan alacsony is lehet, hogy a gázmikrobuborékok körül lévő felületaktív anyag csak egyetlen réteget alkot, miközben az ilyen szuszpenziós készítmények buborékkoncentrációja 107 mikrobuborék/ml marad. A találmány szerinti készítményekben nem találhatóak és nem is valószínű, hogy előfordulnak olyan mikrobuborékok, amelyek liposzómaszerű kettős réteget alkotó felületaktív anyagból (gázzal töltött liposzóma) épülnének fel.
Ezzel az eljárással nagy, például 109-101° buborék/ml koncentrációjú, viszonylag nagy stabilitású és hosszú időn át tárolható szuszpenziók állíthatók elő még akkor is, ha a foszfolipid felületaktív anyag koncentrációja jóval az ismert készítményeké alatt van. A találmány szerinti eljárással előállított készítmények koncentrációja akár 1 pg foszfolipid/ml is lehet, biztosítva, hogy az alkalmazott felületaktív anyag mennyisége elegendő legyen a gázmikrobuborékok körül kialakuló egyrétegű lipidképződéshez.
A számításaink azt mutatják, hogy ez a foszfolipidkoncentráció 10® buborék/ml buborékkoncentráció esetén akár 1 pg/ml vagy 0,0001% is lehet, azonban előnyösebb a 0,0002%-tól 0,01 %-ig terjedő érték. A találmányszerinti stabil mikrobuborékszuszpenziókfoszfolipidkoncentrációja még előnyösebben 0,001-0,009%. A foszfolipidkoncentráció tovább is csökkenthető, azonban a 0,0001% alatti foszfolipidkoncentrációjú szuszpenziók nem stabilak, összes buborékkoncentrációjuk is alacsony, és az injektálás utáni akusztikus válaszuk sem kielégítő. Ha pedig a foszfolipidkoncentrációt 0,01% felé növeljük, a koncentráció növelésével az injektálás utáni jellemzőik, azaz stabilitásuk és akusztikus válaszuk nem javulnak tovább. A koncentráció növelése a korábbi készítményeknél ismert, nem kívánt mellékhatások előfordulásának valószínűségét növeli. Feltételezhetően csak a felületaktív anyagok lamelláris vagy lamináris alakú szegmensei képesek olyan mole3
HU 227 043 Β1 kularendezettség kialakítására, amely a buborékokat megfelelően stabilizálja. Ez azt is megmagyarázza, hogy a felületaktív anyagok koncentrációja az ismertetett alacsony érték mellett sem befolyásolja hátrányosan a gázbuborékok stabilitását.
A találmány szerinti készítmények előnyös tulajdonságai nemcsak az ismert készítményekhez viszonyított alacsony foszfolipidtartalomban mutatkozik, hanem abban is, hogy az injektált oldott anyagok, azaz lipidek és/vagy szintetikus polimerek és egyéb adalékok koncentrációja is 1000-50 000-szer kisebb. Ezt az eredményt a mikrobuborékkoncentráció csökkenés, azaz a termék akusztikus jellemzőinek vagy stabilitásának csökkenése nélkül érhetjük el.
A találmány szerinti készítmények további jellemzője, hogy a nagyon alacsony oldottanyag-koncentráció mellett csak az akusztikus jel előállításához szükséges mikrobuborékokat tartalmazza, azaz nem tartalmaz olyan mikrobuborékokat, amelyek a képmegjelenítésben nem vesznek részt.
Ezen túlmenően a találmány szerinti injektálható készítmények nagyon alacsony oldottanyag-koncentrációja nagymértékben csökkenti a nem kívánt mellékhatásokat is, és az injektált szer eltávozását is jelentősen növeli.
A találmány szerinti alacsony foszfolipidkoncentrációjú mikrobuborékszuszpenziók olyan filmképző foszfolipidekből állíthatók elő, amelyek szerkezetét valamilyen kényelmes eljárással, például a nyers foszfolipid megfelelő oldószeres oldataiból való fagyasztva szárítással vagy szórva szárítással módosítjuk. A fagyasztva vagy szórva szárított foszfolipidport a vizes hordozóban való diszpergálás előtt levegővel vagy más gázzal érintkeztetjük. A módosított (összetört) szerkezetű foszfolipidpor vizes hordozóval való érintkeztetésekor olyan lamellarizált vagy laminarizált szegmensek keletkeznek, amelyek a bennük diszpergált gázmikrobuborékokat stabilizálják. A találmány szerinti alacsony foszfolipidtartalmú szuszpenziókat kényelmesen úgy is előállíthatjuk, hogy a foszfolipideket levegővel vagy egyéb gázzal való érintkeztetés előtt lamellarizáljuk vagy laminarizáljuk. Ebben az esetben a foszfolipid levegővel vagy egyéb gázzal való érintkeztetését végezhetjük száraz por alakban vagy a vizes hordozóban diszpergált laminarizált foszfolipid alakjában.
A „lamelláris vagy lamináris alak” kifejezés azt jelenti, hogy a felületaktív anyag egy vagy két molekuláris rétegből felépülő vékony filmet vagy lemezt alkot. Az ilyen felületaktívanyag-molekulák a liposzómahólyagocskák szerkezetéhez hasonlóan szerveződnek.
Amint azt a WO-A-91/15244 számon közzétett nemzetközi közrebocsátási iratban ismertetik, a filmképző felületaktív anyag lamellárissá való átalakítását bármilyen liposzómaképző eljárással, például nagynyomású homogenizálással vagy akusztikus vagy ultrahang-frekvenciás szonikálással könnyen elvégezhetjük. A lamellárissá való átalakítás úgy is elvégezhetjük, hogy egy szilárd mikroszemcsés (10 pm-es vagy ettől kisebb méretű) hidrolizálva oldható hordozót (nátriumklorid, szukróz, laktóz vagy egyéb szénhidrát) bevonunk foszfolipiddel, majd a bevont hordozót valamilyen vizes fázisban oldjuk. Ehhez hasonlóan oldhatatlan szemcsés anyagokat, például üveg vagy gyanta mikrogyöngyöket is bevonhatunk szerves oldószerben oldott foszfolipiddel, majd az oldószert elpárologtatjuk. A lipidbevonatú mikrogyöngyöket ezután vizes hordozóval érintkeztetjük, és így a hordozóban liposzómahólyagocskák képződnek. A foszfolipidek lamellarizálását kevéssel a kritikus hőmérséklet (Te) feletti hőmérsékletre való melegítéssel és enyhe keveréssel is elérhetjük. A kritikus hőmérséklet a foszfolipidek gél-folyadék átalakulási hőmérséklete.
A találmány szerinti alacsony foszfolipidtartalmú mikrobuborékszuszpenziók előállításának gyakorlati kivitelezését bármilyen olyan ismert eljárással végezhetjük, amelyben „töltetlen” liposzómahólyagocskák képződnek, ami azt jelenti, hogy az oldat vizes fázisán kívül semmilyen idegen anyagot nem tartalmaznak.
A levegő vagy gáz liposzómaoldatba való bevezetését bármilyen szokásos injekciós eljárással végezhetjük úgy, hogy a liposzómaoldatba kis nyílásokon keresztül levegőt vagy gázt kényszerítünk, vagy az oldatban nyomás alatt egyszerűen feloldjuk a gázt, majd a nyomást hirtelen megszüntetjük.
Egy másik eljárással úgy járunk el, hogy a liposzómaoldatot levegő vagy egy másik fiziológiásán elfogadható gáz jelenlétében keverjük vagy szonikáljuk. A gázképződést magában a liposzómaoldatban is, például gázfejlesztő kémiai reakcióval, mint például oldott karbonát vagy hidrogén-karbonát savas bontásával is előidézhetjük. Ilyen eljárást ismertet a WO 91/09629 számú szabadalmi irat.
Ha vizes folyadék hordozóban laminarizált felületaktív anyagot szuszpendálunk, és a szuszpenzióba mikrobuborékképzésre megfelelő levegőt vagy egyéb gázt vezetünk be, a mikrobuborékokat feltételezhetően fokozatosan körülveszik és stabilizálják az olyan monomolekuláris rétegű felületaktívanyag-molekulák, amelyek a liposzómahólyagocskáktól eltérően nem képezhetnek kettős réteget. A felületaktívanyag-molekulák szerkezeti átrendezését mechanikus úton (keveréssel) vagy melegítéssel érhetjük el. A szükséges energiát valamilyen kohéziócsökkentő szer, például kis mennyiségű Pluronic kereskedelmi nevű szer alkalmazásával csökkenthetjük. Azonban a mikrobuborékkészítményekben lévő kohéziócsökkentő szer a foszfolipidmolekulák természetes egymás közötti affinitását is csökkenti, emiatt a mikrobuborékok külső nyomással (például 2,7-4,0.103 Pa felett) szembeni stabilitása is csökken.
Amint azt a fentiekben ismertettük, a találmány szerinti alacsony foszfolipidtartalmú szuszpenzió előállításánál úgy is eljárhatunk, hogy a foszfolipidoldatok helyett adott esetben lamellarizált vízmentes foszfolipideket alkalmazunk. Ha lamellarizált foszfolipideket alkalmazunk, ezeket például a liposzómák dehidratálásával állítjuk elő, azaz valamilyen hagyományos eljárással előállított vizes oldat alakú liposzómát valamilyen szokásos eljárással dehidratálunk. A liposzómadehidratálás egyik módja a fagyasztva szárítás. Ebben az eljá4
HU 227 043 Β1 rásban az előnyös hidrofil vegyületeket tartalmazó liposzómaoldatot megfagyasztjuk, és ezután csökkentett nyomáson elpárologtatva (szublimálva) megszárítjuk.
Egy másik eljárásban nem lamellarizált vagy nem laminarizált foszfolipideket állítunk elő úgy, hogy a foszfolipidet szerves oldószerben oldjuk, és az oldatot liposzómaképzés nélkül megszárítjuk. Ilyenkor úgy járunk el, hogy a foszfolipideket megfelelő szerves oldószerben valamilyen hidrofil stabilizátor, például polimer, amely lehet például PVP, PVA, PEG, vagy a szerves oldószerben és a vízben egyaránt oldódó vegyület jelenlétében feloldjuk, majd az oldatot fagyasztva vagy szórva szárítással megszárítjuk. A vízben és a szerves oldószerben egyaránt oldható hidrofil stabilizátor lehet például almasav, glikolsav vagy maitól. Oldószerként bármilyen olyan szerves oldószert alkalmazhatunk, amelynek forráspontja elég alacsony és olvadáspontja elég magas a következő lépésben alkalmazott szárítás elősegítésére. Ilyen tipikus oldószerként alkalmazhatunk például dioxánt, ciklohexanolt, terc-butanolt, tetraklór-difluor-etilént (C2CI4F2) vagy 2-metil-2butanolt, előnyösen terc-butanolt, 2-metil-2-butanolt vagy C2CI4F2-t. A hidrofil stabilizátort az alkalmazott oldószerben való oldhatósága függvényében választjuk ki. Az ilyen porokból előállított mikrobuborékszuszpenziók előállítását a laminarizált foszfolipidek előállításánál ismertetettekhez hasonlóan állítjuk elő.
A fagyasztva szárított előlamellarizált vagy előlaminarizált foszfolipidoldátok aktivizálása előtt az oldatban a fentiekben ismertetettekhez hasonlóan valamilyen hidrofil stabilizátorvegyületet oldunk. Ebben az esetben azonban a hidrofil stabilizátorok választási lehetősége sokkal bővebb, mert itt szénhidrátokat, például laktózt vagy szukrózt, valamint hidrofil polimereket, például dextránt, keményítőt, PVP-t, PVA-t, PEG-t alkalmazhatunk. Az ilyen hidrofil vegyületek találmány szerinti készítményekben való alkalmazása nagyon előnyös, mert a mikrobuborékok részecskeeloszlását és tárolás alatti stabilizálását is elősegítik. A fagyasztva szárított foszfolipidből előállított nagyon híg vizes oldatok (0,0001-0,01 tömeg0/) például a lipidre számolt (10:1)-(1000:1) tömegarányú poli(etilénglikol) alkalmazásával stabilizálhatok. Az így kapott 1O9-1O10 buborék/ml (méreteloszlás 0,5-10 pm) buborékkoncentrációjú vizes mikrobuborékszuszpenziók hosszú időn át tárolva is stabil, lényeges változásokat nem szenvedő készítmények maradnak. Ezeket a készítményeket a levegőn tárolva szárított laminarizált foszfolipidek rázás vagy erős keverés nélkül végzett egyszerű feloldásával állíthatjuk elő. A csökkentett nyomáson végzett fagyasztva szárítás nagyon előnyös, mert a száraz por fölött bármilyen fiziológiailag elfogadható gáz, például nitrogén-, szén-dioxid-, argon-, metán-, freon-, SF6-, CF4-gáz nyomás kialakítható, és így az ilyen körülmények között kialakított foszfolipidek újradiszpergálásával a fenti gázokat tartalmazó mikrobuborékszuszpenziók állíthatók elő.
Munkánk során azt tapasztaltuk, hogy a találmány szerinti készítményekhez jól alkalmazható felületaktív anyagok a víz és gázok jelenlétében stabil filmképzésre alkalmas amfipatikus vegyületek. Ilyen előnyös felületaktív anyagok a következők: lecitinek (foszfatidil-kolin) és egyéb foszfolipidek, például foszfatidinsav (PA), foszfatidil-inozitol, foszfatidil-etanol-amin (PE), foszfatidil-szerin (PS), foszfatidil-glicerin (PG), kardiolipin (CL) és spingomielinek. Megfelelő foszfolipidek a természetes és szintetikus lecitinek, például tojás vagy szója lecitin vagy a telített lecitinek, például dimirisztoil-foszfatidiIkolin, dipalmitoil-foszfatidil-kolin, disztearoil-foszfatidilkolin vagy diarachidoil-foszfatidil-kolin vagy telítetlen szintetikus lecitinek, például dioleil-foszfatidil-kolin vagy dilinoleil-foszfatidil-kolin. Előnyösek a telített lecitinek.
A fenti lipideken kívül egyéb adalék anyagot, például koleszterint és egyéb anyagokat is alkalmazhatunk. Ilyen adalék anyagok a filmképző felületaktív anyagokkal együtt alkalmazható egyéb, többnyire ismert nem foszfolipid felületaktív anyagok. Ilyen anyagok például a következők: poli(oxi-propilénglikol) és poli(oxi-etilénglikol) és ezek különböző kopolimerjei, foszfatidil-glicerin, foszfatidinsav, dietil-foszfát, zsírsavak, ergoszterin, fitoszterin, lanoszterinek, tokoferol, propil-gallát, aszkorbil-palmitát és butilezett hidroxi-toluol. Az ilyen nem filmképző felületaktív anyagok összes felületaktív anyagra számított mennyisége általában legfeljebb 50 tömeg0/, előnyösen 0-30 tömeg0/. Ez tehát azt jelenti, hogy a találmány szerinti alacsony foszfolipidtartalmú szuszpenziók különböző adalékanyag-tartalma O-tól 0,05 tömeg°/-ig terjed, amely az eddig ismert készítmények adalékanyag-tartalmának legfeljebb 1/100-a.
Megemlítjük, hogy a találmány szerinti szuszpenziók másik jellemzője a mikrobuborékok viszonylag nagy gázbefogadó kapacitása, ami az adott mennyiségű felületaktív anyagban foglalt gáz összes mennyiségének nagy mértékét jelenti. Emiatt az 1-5 pm mérettartományú mikrobuborékszuszpenziókban a gázbuborék-folyadék határfelületen jelen lévő foszfolipidek tömegének a bezárt gáz standard állapotú térfogatával képzett hányadosa 0,1 mg/ml-től 100 mg/ml-ig terjed.
Az injektálható készítményeknek a gyakorlatban a vérrel a lehető legnagyobb mértékben izotóniásnak kell lenniük. Emiatt a találmány szerinti készítményekhez az injektálás előtt kis mennyiségű izotonizálószert kell adni. Az izotonizálószerek olyan, a gyógyászatban szokásosan alkalmazott fiziológiás oldatok, amelyek vizes sóoldatot (0,9%-os NaCI-oldat), 2,6%-os glicerinoldatot és 5%-os dextrózoldatot tartalmaznak.
A találmány tárgyát képezi az ultrahangos akusztikus vizsgálatokban kontrasztszerként alkalmazható találmány szerinti stabil mikrobuborékszuszpenziók előállítási eljárása is. Az eljárás alapvetően azon alapul, hogy a foszfolipidekkel stabilizált mikrobuborékszuszpenzió foszfolipidkoncentrációját a találmány szerinti készítményekre jellemző határértékek között állítjuk be.
Általában úgy járunk el, hogy a mikrobuborékszuszpenzió kiindulási foszfolipidkoncentrációját a kívánt értéknél magasabbra állítjuk be, majd a foszfolipidmikrobuborékban befogott gáz térfogatához viszonyított koncentrációját a hangképző buborékok számának lényeges csökkenése nélkül csökkentjük. Ezt például úgy érhetjük el, hogy a levegő/folyadék határfelületen közvet5
HU 227 043 Β1 lenül nem érintett foszfolipidet tartalmazó folyékony hordozó egy részét eltávolítjuk, majd a szuszpenziót friss folyékony hordozóval hígítjuk. Ezt végezhetjük a szuszpenziótartományban egyrészt
a) a jelképző buborékok gyülekezési helyén, másrészt
b) ahol a buborékok erőteljesen felhígulnak.
Ezután a (b) tartományban lévő folyadékot valamilyen szokásos eljárással (például dekantálással, leszívással) eltávolítjuk, és a szuszpenziót friss folyadékkal töltjük fel. Ezt a műveletet egy vagy több alkalommal megismételjük, és így a stabilizálásban közvetlenül részt nem vevő foszfolipideket eltávolítjuk.
Általában nemkívánatos a nem közvetlenül a buborékok gáz/folyadék határfelületén lévő foszfolipidmolekulák teljes eltávolítása, mert az egyensúlyi állapot felborulhat, azaz ha a kiürítés túl nagy, a gáz/folyadék határfelületről néhány felületaktív molekula felszabadulhat, és a buborék destabilizálódik. A kísérletek azt igazolják, hogy a folyékony hordozó foszfolipidkoncentrációja egészen a találmány szerinti készítményre jellemző alsó határig csökkenhet anélkül, hogy a tulajdonságok lényegesen megváltoznának, és mellékhatások lépnének fel. Ez azt jelenti, hogy az optimális foszfolipidkoncentrációt az adott határok között leginkább az alkalmazás típusa szabja meg, azaz ha viszonylag magas foszfolipidkoncentrációt alkalmazunk, az ideális koncentráció a felső határ közelében lesz. Ha pedig a diagnosztizálandó beteg állapotától függően a foszfolipidek mennyiségét tovább kell csökkenteni, ezt a csökkentést a mikrobuborékszám akusztikus vizsgálatban mutatott hatékonyságának befolyásolása nélkül végezhetjük.
A találmány szerinti eljárásban a kiválasztott filmképző felületaktív anyagot adott esetben valamilyen ismert vagy a leírásban ismertetett eljárással lamellárissá alakítjuk át. A felületaktív anyagot ezután levegővel vagy egyéb gázzal érintkeztetjük, és egy zárt tartályban egy folyékony hordozóval keverjük össze, és így mikrobuborékszuszpenzió képződik. A szuszpenziót állni hagyjuk, és a kialakult gázzal töltött mikrobuborékréteget hagyjuk a tartály tetejére emelkedni. Az anyalúg alsó részét eltávolítjuk, és a felülúszó mikrobuborékréteget a mikrobuborékok előállításánál alkalmazott gázzal telített vizes oldattal mossuk. A mosást addig ismételjük, míg az el nem használódott vagy szabad felületaktív molekulák lényegében teljesen eltávoznak. El nem használódott vagy szabad molekulák azokat a felületaktív molekulákat jelentik, amelyek a gázmikrobuborékok körül kialakuló monomolekuláris stabilizálóréteg képzésében nem vesznek részt.
Az alacsony foszfolipidtartalmú szuszpenziók előállítása mellett a mosási eljárás további előnye a találmány szerinti szuszpenziós készítmények további tisztítása. Ez azt jelenti, hogy majdnem minden olyan mikrobuborékot eltávolítunk, amelyek az injektált szuszpenzió akusztikus válaszában viszonylag kevés szerepet játszanak. A tisztítás eredményeként kapott szuszpenziók csak olyan pozitív hatású mikrobuborékokat tartalmaznak, amelyek az injektálás után az akusztikus jelre azonos refleksziót mutatnak. Ennek eredményeként olyan szuszpenziókat kapunk, amelyek foszfolipidkoncentrációja és egyéb adalékanyag-tartalma nagyon alacsony, és nem tartalmaznak olyan mikrobuborékokat, amelyek a képmegjelenítő eljárásban nem aktiválódnak.
A találmány egyik változatában az adott esetben lamelláris felületaktív anyagot a levegővel vagy egyéb gázzal való érintkeztetés előtt a folyékony vizes hordozóval érintkeztetjük.
A mellékelt 1. ábrán egy frissen készített találmány szerinti szuszpenzió akusztikus válaszát mutatjuk be a mikrobuborékkoncentráció függvényében. A görbék jelölésében D1 jelentése „felső fázis” és L1 jelentése „alsó fázis.
A következő példákat a találmány szerinti alacsony foszfolipidtartalmú szuszpenziók és előállítási eljárásuk részletesebb bemutatására ismertetjük.
1. példa
Multilamelláris hólyagocskákat (Multilamellar vesicle=MLV) állítunk elő úgy, hogy 50 ml 8:2 térfogatarányú hexán/etanol elegyben feloldunk 240 mg diarachidoilfoszfatidil-kolint (Avanti Polar Lipids gyártmányú DAPC termék) és 20 mg dipalmitoil-foszfatidinsavat (Avanti Polar Lipids gyártmányú DPPA-sav), majd az oldószereket forgóbepárlóban, gömblombikban lepároljuk. A kapott lipidfilmet egy vákuumexszikkátorban megszárítjuk. Az 5 ml víz hozzáadásával kapott szuszpenziót keverés közben 90 °C-on 30 percig inkubáljuk. A kapott MLV-t 85 °C-on 0,8 μΐτι-es polikarbonátszűrőn (Nuclepore kereskedelmi nevű termék) extrudáljuk. A kapott MLV készítmény 2,6 ml-ét 47,4 ml 167 mg/ml koncentrációjú, 10 000 molekulatömegű dextrán (Fluka) vizes oldathoz adjuk. A kapott oldatot alaposan összekeverjük, majd 500 ml-es gömblombikba tesszük, -45 °C-on megfagyasztjuk, és 1,44 Pa nyomáson liofilizáljuk. Ajég egy éjszaka alatt teljesen szublimál. Ezután a leszívatott tartály levegőnyomását helyreállítjuk. A kapott por különböző mennyiségeit üvegfiolákba töltjük (lásd táblázat), majd a fiolákat gumidugóval bedugjuk. A fiolákat dugóba szúrt tűn keresztül a levegő eltávolítására vákuummal leszívatjuk. A levegő leszívatása után a port kén-hexafluorid-gázzal (SF6) érintkeztetjük. A fiolák mindegyikébe 10 ml 3%-os vizes glicerinoldatot adunk (a dugón keresztül), majd gyengén rázogatjuk. A kapott mikrobuborék szuszpenziók buborékszámát hemacitométerrel mérjük. Az átlagos buborékméret 2,2 pm. A kapott eredményeket a következő táblázatban foglaljuk össze.
Száraz tömeg (mg/ml) Foszfolipidkoncentráció (pg/ml) Koncentráció (buborék/ml)
0,5 8* 9,0><106
1 16 1,3x107
5 81 7,0x107
10 161“ 1,4x108
* Nem éri el a találmány szerinti minimális buborékkoncentrációt.
** Túllépi a találmány szerinti maximális foszfolipidkoncentrációt.
HU 227 043 Β1
Hatásvizsgálat
A fentiekben ismertetett eljárással előállított készítmények hatásvizsgálatát úgy végeztük, hogy nyulakba a nyaki vénán keresztül 1 ml/5 kg dózisú készítményt injektáltunk.
Egy Acuson XP128 ultrahangos rendszerrel (Acuson Corp., Amerikai Egyesült Államok) és egy 7 MHz szektor transducerral in vivő akusztikus méréseket végeztünk. Az állatokat elaltattuk, és az átalakítót a mell bal oldalán rögzítettük úgy, hogy nyulak esetén a szív jobb és bal oldali kamrája, kismalacok esetén hosszirányú négy kamra képe legyen látható, a 0,5 mg/ml száraz anyagot tartalmazó készítmény a nyulaknál és kismalacoknál is a jobb és bal oldali kamrában egyaránt enyhe opálosodást mutatott.
Az 1 mg/ml, 5 mg/ml és 10 mg/ml-es készítmények esetén az opálosodás kiváló volt.
2. példa
Liofilizátumokat állítunk elő az 1. példában ismertetett eljárással azzal a különbséggel, hogy a gázfázis kialakítását az SF6 helyett levegővel végezzük. A lipofilizátumokat ezután a 3%-os glicerinoldat helyett 0,9%-os sóoldatban szuszpendáljuk. így a fentiekhez hasonló buborékkoncentrációjú készítményeket kapunk.
A készítményeket nyulakba és kismalacokba injektálva azonban a hatás a fenti készítményekhez képest rövidebbnek mutatkozott, például 120 mp helyett 10-20 mp volt. Ezen túlmenően a kismalacok esetén még a 10 mg/ml koncentrációjú készítmény is csak gyenge bal oldali kamraopálosodást mutatott.
3. példa
MLV liposzómákat állítunk elő az 1. példában ismertetett eljárással úgy, hogy 240 mg DAPC-t és 10 mg DPPA-t (95:5 mólarány) oldunk fel, majd a kapott készítményt 20 ml 82,5 mg/ml-es vizes polietilénglikol- (PEG=2000) oldathoz adjuk. Az elegyet szobahőmérsékleten rázzuk 10 percig, és az így kapott oldatot 5 percig -45 °C-on fagyasztjuk, majd 5 órán át 0,2 mbar nyomáson liofilizáljuk. A kapott 1,6 g port gumidugóval ellátott üvegfiolába töltjük, majd az 1. példában ismertetettek szerint SFg-tal érintkeztetjük, és 20 ml desztillált vízzel hígítjuk.
A kapott szuszpenzió buborékkoncentrációja 5*109 buborék/ml, és a buborékok átlagos átmérője 5,5 pm. A szuszpenziót felszívatjuk egy 20 ml-es fecskendőbe, a fecskendőt lezárjuk, és 24 órán át vízszintesen tartjuk. A fecskendőben lévő oldat felső részén fehér buborékréteg látható. A fecskendőt vízszintesen tartva a folyadék legnagyobb részét (körülbelül 16-18 ml) leszívatjuk, és a fecskendőbe azonos térfogatú friss SFg-tal telített vizet töltünk. A fecskendőt a buborékok vizes fázisban való homogenizálásáig rázzuk. A fentiekhez hasonló körülmények között 8 óra múlva egy második, majd négy óránként további három dekantálást végzünk. A kész buborékfázist (P145 sarzs) 3 ml desztillált vízben szuszpendáljuk. A szuszpenzió 1,8><109 buborék/ml koncentrációjú, és a buborékok átlagos átmérője 6,2 pm. A szuszpenzió aliquot mennyiségét (2 ml) 6 órán át 0,2 mbar nyomáson liofilizáljuk. A kapott port 0,2 ml 9:1 térfogatarányú tetrahidrofurán:víz elegyben oldjuk, és HPLC elemzéssel fényletapogató detektor alkalmazásával meghatározzuk az oldat foszfolipidtartalmát.
Az oldat 0,7 mg DAPC/ml koncentrációjú, így 108 buborékonként 3,9 pg foszfolipidet tartalmaz.
A P145 sarzs molekulaméret-eloszlását Coulterszámlálóval mérjük. A buborékok összes felülete 4,6χ107 pm2/108 buborék.
Feltételezve, hogy az egy molekula DAPC által elfoglalt felület 0,5 nm2, kiszámolhatjuk, hogy ahhoz, hogy a buborékok mindegyike körül monorétegű foszfolipid alakuljon ki 1,3 pg DAPC/108 buborék szükséges.
A P145 szuszpenziót ezután 4 °C-on tartjuk, és a szokásos eljárással meghatározzuk a buborékok koncentrációját.
A termék 10 nap múlva ugyanolyan jó minőségű, mint előállításakor, és még mindig (1—1,2)x109 buborék/ml koncentrációjú. A nagyon alacsony foszfolipidkoncentráció ellenére a szuszpenzió rendkívül stabil.
A kísérletet egy másik mikrobuboréksarzzsal megismételjük úgy, hogy a dekantálás idejét előnyösen nagyobb buborékok létrehozásához meghosszabbítjuk (P132 sarzs). A kapott térfogatú készítményben lévő buborékok átlagos átmérője 8,8 pm, és a Coulterszámlálóval meghatározott összes felülete 22^10® pm2/10® buborék. A számítások szerint az ilyen buboréksűrűség esetén az egyrétegű DAPC-vel való bevonáshoz 6 pg DAPC szükséges. A kapott eredmények a kísérleti hibahatárokon belül megegyeznek a mikrobuborékok egy foszfolipidréteggel való bevonásához szükséges mennyiséggel, és ez az eredmény, tekintettel a buboréksűrűség-meghatározás nehézségeire, elfogadhatónak látszik.
A különböző mosott buborékkészítményekkel végzett akusztikus mérések azt mutatják, hogy az alsó fázissal kapott echográfiás jel sokkal gyengébb, mint a felső fázissal vagy a frissen készített mintával kapott jel. Első megközelítésre ez normálisnak tűnik, mert mindenképpen a fecskendő felső részén lévő fehér rétegben van a mikrobuborékok nagyobb része. Azonban, amint azt az 1. ábrán láthatjuk, a buborékszámlálás az alsó rétegben is meglepően nagy buboréksűrűséget mutat. Csak a Coulter-méréssel vált nyilvánvalóvá, hogy a mikrobuborékok mérete 0,5 pm alatt van. Ez azt mutatja, hogy a kisméretű buborékok még nagy koncentrációban sem képesek az ultrahangjel megfelelő visszatükrözésére.
A fenti P132 készítmény hatásvizsgálata
A hatásvizsgálatot úgy végeztük, hogy a P132 készítmény 3%-os glicerines oldattal négyszeresére hígított oldatát 0,2 ml/kg dózisban kismalacokba injektáltuk. A 2,5x107 buborék/ml mosott buborékot és 5 pg/ml foszfolipidet tartalmazó készítmény a jobb és bal pitvarban egyaránt kiváló opálosodást mutatott jól kirajzolódó endokardiális határokkal. A P145 készítmény (3%-os
HU 227 043 Β1 glicerines oldat) aliquot mennyiségű injektálásával is jó opálosodást kaptunk. Ez a készítmény 0,2 pg/kg foszfolipidet tartalmaz. A kontrasztszer csak a bal pitvarban 0,02 pg/kg dózisú injekció alkalmazásával volt detektálható. Ezen túlmenően a veseartériában lévő kontraszt- 5 szer hatása 0,005 pg/kg dózisú foszfolipidkoncentrációnál csak pulzálódopplerrel detektálható.
Az eredményekből az következik, hogy a szuszpenziók megfelelő stabilitása attól függ, hogy a laminarizált foszfolipid gázmikrobuborékok körüli elhelyezke- 10 dése mennyire egyrétegű. Ez megmagyarázza a készítménnyel elért kiváló eredményeinket, valamint azt is igazolja, hogy a foszfolipidmennyiségnek valóban nem kell nagyobbnak lennie, mint amennyi a szuszpenzióban lévő mikrobuborékok körül kialakuló egy ré- 15 teg képzéséhez elegendő.
4. példa
Egy 8:2 térfogatarányú hexámetanol elegyben 48 mg DAPC-t és 2 mg DPPA-t tartalmazó oldatot állí- 20 tünk elő az 1. példa szerinti eljárással és az oldatot szárazra pároljuk. A kapott por 5 mg-ját és 375 mg polietilénglikolt 60 °C-on 5 g terc-butanolban oldunk.
A tiszta oldatot gyorsan 45 °C-ra hűtjük, és liofilizáljuk.
g liofilizátumot üvegfiolába töltünk, és a port SF6-tal 25 érintkeztetjük (lásd 1. példa). A fiolába ezután 10 ml
3%-os glicerinoldatot adunk, és tartalmát enyhe rázással feloldjuk. A kapott szuszpenzió buborékkoncentrációja 1,5x10® buborék/ml, és a buborékok átlagos átmérője 9,5 pm.
A készítmény hatásvizsgálatát úgy végezzük, hogy a fenti készítményt nyulakba injektáltuk. A jobb és bal kamra egyaránt jól kirajzolt képet mutatott. Még a szuszpenzió tízszeres hígítása is erős kontrasztjavulást mutatott.
5. példa
A kísérletben előállított készítményt a 4. példa szerinti eljárással állítjuk elő azzal a különbséggel, hogy a foszfolipid kezdeti hexán/etanol oldatos hígítását elhagyjuk, azaz a polietilénglikollal és terc-butanollal együtt „nyers” foszfolipidet oldunk fel, majd a kapott oldatot fagyasztva szárítjuk, és ezután a maradékot vízben szuszpendáljuk.
Ezekben a kísérletekben számos foszfolipidet és foszfolipid- és egyéb lipidkombinációt vizsgálunk.
A következő táblázatban 100 mg/ml PEG 2000-t tartalmazó terc-butanolos foszfolipidkészítményekkel kapott eredményeket foglaljuk össze.
A fagyasztva szárítással kapott maradékokat SF6tal telítjük (lásd 1. példa) majd desztillált vízzel 100 mg száraz tömeg/ml koncentrációjú oldatokat készítünk.
Lipidelegy (tömegarány) terc-Butanolos foszfolipidkoncentráció (pg/ml) Buborékkoncentráció (x109/ml) Átl. átm. (pm)
DSPC 2 1,3 10
DSPC/DPPG (100/4) 2 3,8 7
DSPC/Chol (2/1) 6 0,1 40
DAPC/Plur F68 (2/1) 6 0,9 15
DAPC/Palmsav (60/1) 2 0,6 11
DAPC/DPPA (100/4) 1 2,6 8
DAPC/Chol/DPPA (8/1/1) 8 1,2 19
DAPC/DPPA (100/4*) 5 2,4 18
A táblázatban:
DAPC=diarachidoil-foszfatidil-kolin;
DSPC=diszteraoil-foszfatidil-kolin;
DPPG=dipalmitoil-foszfatidil-glicerin (savforma);
DPPA=dipalmitoil-foszfatidinsav;
Chol=koleszterin;
Palm. sav=palmitinsav;
Plur F68=Pluronic RF-68.
*=Ebben a kísérletben a SF6 helyett CF4-et alkalmazunk gázként.
A kapott szuszpenziók mindegyikére jellemző a nagy mikrobuborékkoncentráció, ami azt mutatja, hogy a foszfolipid lipidekké való kezdeti konverziója nem szükséges.
A készítmények hatásvizsgálatát úgy végeztük, hogy a szuszpenziókat 0,15 mol/l-es NaCI-oldattal hígítottuk, és a 3. példában ismertetetteknek megfelelően kismalacokba injektáltuk.
A kapott eredmények azt mutatják, hogy a jobb és bal kamra egyaránt jól opálosodó képet mutat, és
10-50 pg lipid/test-kg vagy ettől kisebb dózissal alkalmazott készítménnyel jól körülrajzolt endokardiális határvonalat kapunk.
6. példa ml terc-butanolban 2 g PEG-2000-t, 9,6 mg DAPC-t és 0,4 mg DPPA-t oldunk, majd a kapott oldatot egy éjszakán át 0,2 mbar nyomáson fagyasztva szárítjuk. A kapott port SF6-tal érintkeztetjük, majd
HU 227 043 Β1 ml desztillált vízben oldjuk. A hemacitometriás meghatározással 1,4*109 buborék/ml koncentrációjú szuszpenziót 20 ml fecskendőbe töltjük, és a fecskendőt 16 órán át vízszintesen tartjuk. Az oldat felső részén fehér buborékréteget láthatunk. A fecskendőt vízszintes helyzetben tartjuk, és az alsó fázist (16-18 ml) leszívatjuk. A leszívatott folyadék helyére azonos térfogatú, friss SFg-tal telített desztillált vizet szívunk, és a vizes fázisban lévő buborékokat keveréssel homogenizáljuk. A rövid időközönként megismételt dekantálással két különböző sűrűségű mikrobuborékot, azaz egy nagyobb méretű és egy közepes méretű buborékokat tartalmazó szuszpenziót kapunk. A nagyobb buborékokat csak a dekantálás után 10-15 perc múlva, a közepes méretűeket 30-45 perc múlva gyűjtjük össze. A dekantálást tízszer megismételjük, hogy mindkét sűrűségű mikrobuborékot tartalmazó szuszpenzió méreteloszlását szűkítsük, és a mikrobuborékokhoz nem kapcsolódó foszfolipidet teljesen eltávolítsuk. A nagyméretű buborékokat tartalmazó (a továbbiakban nagyméretű buborékok) fázisokat összegyűjtjük. Ugyancsak egyesítjük a közepes méretű buborékokat (a továbbiakban közepes méretű buborékok) tartalmazó frakciókat is. A kétféle sűrűségű mikrobuborékszuszpenziók aliquot mennyiségét liofilizáljuk, majd a frakciókban lévő foszfolipid mennyiségének meghatározására a frakciókat egyenként HPLC elemzésnek vetjük alá.
A nagyméretű buborékfrakció buboréktartalma 2,5*107 buborék/ml, a buborékok átlagos átmérője 11,3 pm, és a foszfolipidtartalom 13,7 pg/107 buborék. Ez az eredmény kiváló egyezést mutat a mindegyik buborék körül egyetlen réteg foszfolipidet tartalmazó, foszfolipidmolekulánként 0,5 nm2 felületű mikrobuborékra számolt 11,5 pg/107 buborék elméleti értékkel.
A közepes méretű buborékfrakció buboréktartalma 8,8*10® buborék/ml, a buborékok átlagos átmérője 3,1 pm, és a foszfolipidtartalom 1,6 pg/107 buborék.
Ez utóbbi érték ugyancsak kiváló egyezést mutat az 1,35 pg/107 buborék elméleti értékkel.
Az eredmények azt is jelzik, hogy a találmány szerinti mikrobuborékszuszpenziók stabilitása feltehetően a mikrobuborékok körül kialakult egyrétegű foszfolipidképződés eredménye.

Claims (13)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Ultrahang akusztikus vizsgálatokhoz kontrasztszerként alkalmazható vizes hordozós, gázzal töltött mikrobuborékokat tartalmazó, injektálható szuszpenzió, amely milliliterenként legalább 107 mikrobuborékot és a mikrobuborékok összeomlása ellen stabilizátorként ható amfipatikus vegyületeket tartalmaz, melyek közül legalább egy foszfolipidstabilizátor, továbbá adott esetben jelen lévő egyéb segédanyagok is tartalmaz, ahol a szuszpenzióban a foszfolipid koncentrációja 0,01 tömeg% alatti érték a szuszpenzió össztömegére számolva; ez az érték azzal a koncentrációval azonos, vagy annál valamivel nagyobb, mint amelynél a foszfolipidmolekulák a gázmikrobuborék-folyadék határfelületet önmagukban alkotják.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti injektálható szuszpenzió, melyben a mikrobuborékkoncentráció 108—101° mikrobuborék/ml.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti injektálható szuszpenzió, melyben foszfolipidkoncentráció 0,00013 tömeg%-nál nagyobb.
  4. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti injektálható szuszpenzió, melyben a folyékony hordozó stabilizátorként vízben oldható poli- és oligoszacharidot, cukrot és hidrofil polimert, mint például polietilénglikolt, tartalmaz.
  5. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti injektálható szuszpenzió, melyben a foszfolipid legalább részben lamelláris vagy lamináris formában van jelen, és azt a következők közül választjuk: lecitin, ezen belül foszfatidinsav, foszfatidil-kolin, foszfatidil-etanol-amin, foszfatidil-szerin, foszfatidil-glicerin, foszfatidil-inozit, kardiolipin vagy szfingomielin.
  6. 6. A 4. vagy 5. igénypont szerinti injektálható szuszpenzió, mely egyéb segédanyagként foszfolipidek tulajdonságait befolyásoló anyagot tartalmaz, melyet a következők közül választunk: diacetil-foszfát, koleszterin, ergoszterin, fitoszterin, szitoszterin, lanoszterin, tokoferol, propil-gallát, aszkorbil-palmitát vagy butilezett hidroxi-toluol.
  7. 7. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti injektálható szuszpenzió, mely a foszfolipidet fagyasztva vagy porlasztva szárított alakban tartalmazza.
  8. 8. Az 1. igénypont szerinti injektálható szuszpenzió, melyben mikrobuborékkoncentrációja körülbelül 108-109 mikrobuborék/ml, és a mikrobuborékok mérete 0,5-10 pm, mely értékek a tárolás alatt kismértékben vagy egyáltalán nem változnak.
  9. 9. Az 1. igénypont szerinti injektálható szuszpenzió, melyben a folyékony hordozó egyéb segédanyagként az összes felületaktív anyagra számított 50 tömeg%-ig terjedő mennyiségű nem lamináris felületaktív anyagot is tartalmaz, melyet a következők közül választunk: zsírsav, zsírsavak és alkoholok poliolokkal képzett észterei és éterei, ahol a poliol a következők közül választott: polialkilénglikólók, polialkilénezett cukrok és egyéb szénhidrátok, ezen belül poli- és oligoszacharidok, cukrok és vagy polialkilénezett glicerinek, mint például polietilénglikolok.
  10. 10. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti injektálható szuszpenzió, melyben a mikrobuborékokat SF6-tal, CF4-gyel, freonokkal vagy levegővel töltjük.
  11. 11. Eljárás az 1. igénypont szerinti gázzal, töltött mikrobuborékokat tartalmazó injektálható szuszpenziók előállítására, melyben egy folyékony vizes hordozóban laminarizált foszfolipidet és adott esetben egyéb adalék anyagokat szuszpendálunk, a foszfolipidet a szuszpendálás előtt vagy után érintkeztetjük a gázzal, és a szuszpendáltatást olyan körülmények között végezzük, hogy a szuszpenzióban kialakult mikrobuborékok koncentrációja megfelelő akusztikus válasz kialakítására elegendő legyen és a foszfolipid egy része a buborékok körül stabilizált réteget alkosson, azzal jelle9
    HU 227 043 Β1 mezve, hogy a szuszpenziót addig mossuk a mikrobuborékok stabilizálásában részt nem vevő feleslegben lévő foszfolipidek eltávolítása céljából, míg a szuszpenzió tömegére számolva a foszfolipidkoncentráció 0,01 tömeg% alá csökken.
  12. 12. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a részlegesen lamellarizált felületaktív anyagot a levegővel vagy egyéb gázzal való érintkeztetés előtt elegyítjük a vizes hordozóval.
  13. 13. A 11. vagy 12. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vizes hordozó stabilizálóvegyülete5 két is tartalmaz, melyeket a következők közül választunk: hidrolizálva oldható fehérjék, polipeptidek, cukrok, poli- és oligoszacharidok és hidrofil polimerek.
HU9401409A 1992-11-02 1993-10-21 Stabile microbubble suspension as enhancement agents for ultrasound echography HU227043B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP92810837 1992-11-02
PCT/EP1993/002915 WO1994009829A1 (en) 1992-11-02 1993-10-21 Stable microbubble suspensions as enhancement agents for ultrasound echography

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9401409D0 HU9401409D0 (en) 1994-08-29
HUT74561A HUT74561A (en) 1997-01-28
HU227043B1 true HU227043B1 (en) 2010-05-28

Family

ID=8212014

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9401409A HU227043B1 (en) 1992-11-02 1993-10-21 Stabile microbubble suspension as enhancement agents for ultrasound echography

Country Status (22)

Country Link
US (7) US5445813A (hu)
EP (1) EP0619743B1 (hu)
JP (1) JP3135919B2 (hu)
KR (1) KR100216138B1 (hu)
CN (1) CN1069838C (hu)
AT (1) ATE146972T1 (hu)
AU (3) AU666238B2 (hu)
CA (1) CA2125027C (hu)
DE (2) DE69307124T2 (hu)
DK (1) DK0619743T3 (hu)
ES (1) ES2097548T3 (hu)
FI (1) FI115953B (hu)
GR (1) GR3022826T3 (hu)
HU (1) HU227043B1 (hu)
IL (1) IL107453A (hu)
IS (1) IS1625B (hu)
LU (1) LU90837I2 (hu)
NL (1) NL300061I2 (hu)
NO (1) NO308830B1 (hu)
NZ (2) NZ280615A (hu)
WO (1) WO1994009829A1 (hu)
ZA (1) ZA938117B (hu)

Families Citing this family (180)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6001335A (en) 1989-12-22 1999-12-14 Imarx Pharmaceutical Corp. Contrasting agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same
US6551576B1 (en) 1989-12-22 2003-04-22 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Container with multi-phase composition for use in diagnostic and therapeutic applications
US5580575A (en) 1989-12-22 1996-12-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Therapeutic drug delivery systems
US5352435A (en) * 1989-12-22 1994-10-04 Unger Evan C Ionophore containing liposomes for ultrasound imaging
US6146657A (en) 1989-12-22 2000-11-14 Imarx Pharmaceutical Corp. Gas-filled lipid spheres for use in diagnostic and therapeutic applications
US5542935A (en) 1989-12-22 1996-08-06 Imarx Pharmaceutical Corp. Therapeutic delivery systems related applications
US5705187A (en) 1989-12-22 1998-01-06 Imarx Pharmaceutical Corp. Compositions of lipids and stabilizing materials
US5585112A (en) 1989-12-22 1996-12-17 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas and gaseous precursor-filled microspheres
US5469854A (en) 1989-12-22 1995-11-28 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods of preparing gas-filled liposomes
US5656211A (en) 1989-12-22 1997-08-12 Imarx Pharmaceutical Corp. Apparatus and method for making gas-filled vesicles of optimal size
US5922304A (en) 1989-12-22 1999-07-13 Imarx Pharmaceutical Corp. Gaseous precursor filled microspheres as magnetic resonance imaging contrast agents
US5773024A (en) 1989-12-22 1998-06-30 Imarx Pharmaceutical Corp. Container with multi-phase composition for use in diagnostic and therapeutic applications
US5305757A (en) 1989-12-22 1994-04-26 Unger Evan C Gas filled liposomes and their use as ultrasonic contrast agents
US5776429A (en) 1989-12-22 1998-07-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas-filled microspheres using a lyophilized lipids
US5733572A (en) 1989-12-22 1998-03-31 Imarx Pharmaceutical Corp. Gas and gaseous precursor filled microspheres as topical and subcutaneous delivery vehicles
US6088613A (en) 1989-12-22 2000-07-11 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of magnetic resonance focused surgical and therapeutic ultrasound
US5578292A (en) 1991-11-20 1996-11-26 Bracco International B.V. Long-lasting aqueous dispersions or suspensions of pressure-resistant gas-filled microvesicles and methods for the preparation thereof
USRE39146E1 (en) 1990-04-02 2006-06-27 Bracco International B.V. Long-lasting aqueous dispersions or suspensions of pressure-resistant gas-filled microvesicles and methods for the preparation thereof
US7083778B2 (en) * 1991-05-03 2006-08-01 Bracco International B.V. Ultrasound contrast agents and methods of making and using them
US5445813A (en) * 1992-11-02 1995-08-29 Bracco International B.V. Stable microbubble suspensions as enhancement agents for ultrasound echography
IN172208B (hu) 1990-04-02 1993-05-01 Sint Sa
US6989141B2 (en) * 1990-05-18 2006-01-24 Bracco International B.V. Ultrasound contrast agents and methods of making and using them
US6613306B1 (en) 1990-04-02 2003-09-02 Bracco International B.V. Ultrasound contrast agents and methods of making and using them
US20010024638A1 (en) * 1992-11-02 2001-09-27 Michel Schneider Stable microbubble suspensions as enhancement agents for ultrasound echography and dry formulations thereof
US20040208826A1 (en) * 1990-04-02 2004-10-21 Bracco International B.V. Ultrasound contrast agents and methods of making and using them
US20030194376A1 (en) * 1990-05-18 2003-10-16 Bracco International B.V. Ultrasound contrast agents and methods of making and using them
AU636481B2 (en) * 1990-05-18 1993-04-29 Bracco International B.V. Polymeric gas or air filled microballoons usable as suspensions in liquid carriers for ultrasonic echography
GB9106686D0 (en) * 1991-03-28 1991-05-15 Hafslund Nycomed As Improvements in or relating to contrast agents
US5205290A (en) 1991-04-05 1993-04-27 Unger Evan C Low density microspheres and their use as contrast agents for computed tomography
US5874062A (en) 1991-04-05 1999-02-23 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods of computed tomography using perfluorocarbon gaseous filled microspheres as contrast agents
US5409688A (en) * 1991-09-17 1995-04-25 Sonus Pharmaceuticals, Inc. Gaseous ultrasound contrast media
US6875420B1 (en) 1991-09-17 2005-04-05 Amersham Health As Method of ultrasound imaging
US6723303B1 (en) 1991-09-17 2004-04-20 Amersham Health, As Ultrasound contrast agents including protein stabilized microspheres of perfluoropropane, perfluorobutane or perfluoropentane
MX9205298A (es) * 1991-09-17 1993-05-01 Steven Carl Quay Medios gaseosos de contraste de ultrasonido y metodo para seleccionar gases para usarse como medios de contraste de ultrasonido
GB9200388D0 (en) * 1992-01-09 1992-02-26 Nycomed As Improvements in or relating to contrast agents
IL104084A (en) * 1992-01-24 1996-09-12 Bracco Int Bv Sustainable aqueous suspensions of pressure-resistant and gas-filled blisters, their preparation, and contrast agents containing them
PL176116B1 (pl) * 1993-01-25 1999-04-30 Sonus Pharma Inc Środek kontrastowy do ultrasonografii i sposób wytwarzania środka kontrastowego do ultrasonografii
US5558855A (en) * 1993-01-25 1996-09-24 Sonus Pharmaceuticals Phase shift colloids as ultrasound contrast agents
IL108416A (en) * 1993-01-25 1998-10-30 Sonus Pharma Inc Colloids with phase difference as contrast ultrasound agents
US5701899A (en) * 1993-05-12 1997-12-30 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Perfluorobutane ultrasound contrast agent and methods for its manufacture and use
US5695740A (en) * 1993-05-12 1997-12-09 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Perfluorocarbon ultrasound contrast agent comprising microbubbles containing a filmogenic protein and a saccharide
CA2164813C (en) * 1993-07-30 2009-11-24 Ernest G. Schutt Stabilized microbubble compositions for ultrasound
US5798091A (en) 1993-07-30 1998-08-25 Alliance Pharmaceutical Corp. Stabilized gas emulsion containing phospholipid for ultrasound contrast enhancement
HU225495B1 (en) * 1993-12-15 2007-01-29 Bracco Research Sa Gas mixtures useful as ultrasound contrast media
DE4406474A1 (de) 1994-02-23 1995-08-24 Schering Ag Gas enthaltende Mikropartikel, diese enthaltende Mittel, deren Verwendung in der Ultraschalldiagnostik, sowie Verfahren zur Herstellung der Partikel und Mittel
US5736121A (en) 1994-05-23 1998-04-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Stabilized homogenous suspensions as computed tomography contrast agents
US5540909A (en) * 1994-09-28 1996-07-30 Alliance Pharmaceutical Corp. Harmonic ultrasound imaging with microbubbles
US6743779B1 (en) 1994-11-29 2004-06-01 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for delivering compounds into a cell
US5830430A (en) 1995-02-21 1998-11-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Cationic lipids and the use thereof
US5997898A (en) 1995-06-06 1999-12-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Stabilized compositions of fluorinated amphiphiles for methods of therapeutic delivery
US6231834B1 (en) 1995-06-07 2001-05-15 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for ultrasound imaging involving the use of a contrast agent and multiple images and processing of same
US6033645A (en) 1996-06-19 2000-03-07 Unger; Evan C. Methods for diagnostic imaging by regulating the administration rate of a contrast agent
US5804162A (en) 1995-06-07 1998-09-08 Alliance Pharmaceutical Corp. Gas emulsions stabilized with fluorinated ethers having low Ostwald coefficients
US6139819A (en) 1995-06-07 2000-10-31 Imarx Pharmaceutical Corp. Targeted contrast agents for diagnostic and therapeutic use
WO2004073750A1 (en) * 1995-06-07 2004-09-02 Harald Dugstad Improvements in or relating to contrast agents
US5897851A (en) * 1995-06-07 1999-04-27 Sonus Pharmaceuticals, Inc. Nucleation and activation of a liquid-in-liquid emulsion for use in ultrasound imaging
US6521211B1 (en) 1995-06-07 2003-02-18 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Methods of imaging and treatment with targeted compositions
US5648098A (en) * 1995-10-17 1997-07-15 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Thrombolytic agents and methods of treatment for thrombosis
DE19602930A1 (de) * 1996-01-18 1997-07-24 Schering Ag Poröse Matrices aus niedermolekularen Substanzen zur Genierung stabiler Gasblasensuspensionen, deren Verwendung als Ultraschallkontrastmittel sowie Verfahren zu deren Herstellung
CA2246779C (en) 1996-02-19 2008-04-29 Nycomed Imaging A/S Improvements in or relating to contrast agents
CZ281298A3 (cs) * 1996-03-05 1999-01-13 Acusphere, Inc. Fluorované plyny v mikrokapslích jako zobrazující činidla pro ultrazvukové vyšetření
US5611344A (en) * 1996-03-05 1997-03-18 Acusphere, Inc. Microencapsulated fluorinated gases for use as imaging agents
US6245747B1 (en) 1996-03-12 2001-06-12 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Targeted site specific antisense oligodeoxynucleotide delivery method
CA2252617A1 (en) 1996-05-01 1997-11-06 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for delivering compounds into a cell
US5849727A (en) 1996-06-28 1998-12-15 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Compositions and methods for altering the biodistribution of biological agents
US5837221A (en) * 1996-07-29 1998-11-17 Acusphere, Inc. Polymer-lipid microencapsulated gases for use as imaging agents
NZ334365A (en) * 1996-08-02 1999-10-28 Nycomed Imaging As Use of a contrast agent comprising microbubbles of biocompatible gas stabilised by opsonisable amphiphilic material for ultrasound imaging of the liver
US6414139B1 (en) 1996-09-03 2002-07-02 Imarx Therapeutics, Inc. Silicon amphiphilic compounds and the use thereof
DK1323434T3 (da) 1996-09-11 2007-11-12 Bristol Myers Squibb Medical I Fremgangsmåde til diagnostisk billeddannelse af nyreregioner under anvendelse af et kontrastmiddel og en vasodilator
US5846517A (en) 1996-09-11 1998-12-08 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for diagnostic imaging using a renal contrast agent and a vasodilator
US6537246B1 (en) 1997-06-18 2003-03-25 Imarx Therapeutics, Inc. Oxygen delivery agents and uses for the same
US6120751A (en) 1997-03-21 2000-09-19 Imarx Pharmaceutical Corp. Charged lipids and uses for the same
US6143276A (en) 1997-03-21 2000-11-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods for delivering bioactive agents to regions of elevated temperatures
US6090800A (en) 1997-05-06 2000-07-18 Imarx Pharmaceutical Corp. Lipid soluble steroid prodrugs
US5962015A (en) * 1997-05-02 1999-10-05 Kobo Products S.A.R.L. Stabilized liposomes
US6416740B1 (en) 1997-05-13 2002-07-09 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Acoustically active drug delivery systems
GB9717588D0 (en) * 1997-08-19 1997-10-22 Nycomed Imaging As Improvements in or relating to contrast agents
GB9717542D0 (en) 1997-08-19 1997-10-22 Nycomed Imaging As Process
US6548047B1 (en) 1997-09-15 2003-04-15 Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Inc. Thermal preactivation of gaseous precursor filled compositions
ZA9811087B (en) * 1997-12-04 1999-06-03 Bracco Research Sa Automatic liquid injection system and method
US6123923A (en) 1997-12-18 2000-09-26 Imarx Pharmaceutical Corp. Optoacoustic contrast agents and methods for their use
US20010003580A1 (en) * 1998-01-14 2001-06-14 Poh K. Hui Preparation of a lipid blend and a phospholipid suspension containing the lipid blend
EP1056473B8 (en) * 1998-02-09 2005-07-20 Bracco International B.V. Targeted delivery of biologically active media
DE19840536A1 (de) 1998-08-28 2000-03-09 Schering Ag Mit Ultraschallkontrastmittel gefüllte Spritze mit einer magnetischen Bewegungsvorrichtung
DE19840532A1 (de) 1998-08-28 2000-03-09 Schering Ag Mit Ultraschallkonstrastmittel gefüllte Spritze mit einer mechanischen Bewegungsvorrichtung
US6187665B1 (en) * 1999-01-14 2001-02-13 Lucent Technologies, Inc. Process for deuterium passivation and hot carrier immunity
US6575930B1 (en) * 1999-03-12 2003-06-10 Medrad, Inc. Agitation devices and dispensing systems incorporating such agitation devices
FR2791249B1 (fr) 1999-03-25 2001-06-15 Edap Technomed Milieu de couplage pour ultrasons de puissance
US6514209B1 (en) 1999-06-07 2003-02-04 Drexel University Method of enhancing ultrasonic techniques via measurement of ultraharmonic signals
US6210611B1 (en) * 1999-11-30 2001-04-03 Duke University Methods for producing gas microbubbles having lipid-containing shells formed thereon
EP2286843A3 (en) 2000-06-02 2011-08-03 Bracco Suisse SA Compounds for targeting endothelial cells
WO2002080774A2 (en) * 2001-04-06 2002-10-17 Bracco Research S.A. Method for improved measurement of local physical parameters in afluid-filled cavity
US6855561B2 (en) * 2001-09-10 2005-02-15 Quidel Corporation Method for adding an apparent non-signal line to a lateral flow assay
US7211240B2 (en) 2002-03-01 2007-05-01 Bracco International B.V. Multivalent constructs for therapeutic and diagnostic applications
US7261876B2 (en) 2002-03-01 2007-08-28 Bracco International Bv Multivalent constructs for therapeutic and diagnostic applications
EP1587944A4 (en) 2002-03-01 2007-03-21 Dyax Corp KDR AND VEGF / KDR BINDING PEPTIDES AND THEIR USE FOR DIAGNOSTIC AND THERAPEUTIC PURPOSES
ES2398393T3 (es) 2002-03-01 2013-03-15 Dyax Corp. Péptidos de unión a KDR y a VEGF/KDR y su uso en diagnóstico y terapia
US8623822B2 (en) 2002-03-01 2014-01-07 Bracco Suisse Sa KDR and VEGF/KDR binding peptides and their use in diagnosis and therapy
US7794693B2 (en) * 2002-03-01 2010-09-14 Bracco International B.V. Targeting vector-phospholipid conjugates
US20040126400A1 (en) * 2002-05-03 2004-07-01 Iversen Patrick L. Delivery of therapeutic compounds via microparticles or microbubbles
CA2532324A1 (en) * 2002-07-11 2004-01-22 Targeson, Llc Microbubble compositions, and methods for preparing and using same
KR20050072496A (ko) 2002-11-29 2005-07-11 아머샴 헬스 에이에스 초음파 촬영 방법
US20070128117A1 (en) * 2003-02-04 2007-06-07 Bracco International B.V. Ultrasound contrast agents and process for the preparation thereof
EP1590006B1 (en) * 2003-02-04 2010-09-08 Bracco Suisse SA Ultrasound contrast agents and process for the preparation thereof
US20060235296A1 (en) 2003-02-13 2006-10-19 Bracco Imaging S.P.A. Contrast enhanced x-ray phase imaging
DK2949658T3 (en) 2003-03-03 2018-10-01 Dyax Corp Peptides that specifically bind HGF receptor (cMet) and uses thereof
ITFI20030077A1 (it) * 2003-03-26 2004-09-27 Actis Active Sensors S R L Metodo per l'indagine ecografica tramite mezzi di contrasto
CA2526166C (en) 2003-06-12 2014-04-15 Bracco Research Sa Blood flow estimates through replenishment curve fitting in ultrasound contrast imaging
US8021303B2 (en) 2003-06-12 2011-09-20 Bracco Research Sa System for extracting morphological information through a perfusion assessment process
AU2004308757B2 (en) * 2003-12-22 2010-06-17 Bracco Suisse S.A. Assembly of gas-filled microvesicle with active component for contrast imaging
CA2547024C (en) * 2003-12-22 2013-12-17 Bracco Research Sa Gas-filled microvesicle assembly for contrast imaging
WO2005070299A1 (en) * 2004-01-16 2005-08-04 The University Of Houston System Methods and apparatus for medical imaging
WO2005070472A2 (en) 2004-01-20 2005-08-04 Sunnybrook And Women's College Health Sciences Centre, High frequency ultrasound imaging using contrast agents
US8012457B2 (en) 2004-06-04 2011-09-06 Acusphere, Inc. Ultrasound contrast agent dosage formulation
GB2417080B (en) 2004-08-13 2008-05-21 Stichting Tech Wetenschapp Intravascular ultrasound techniques
WO2006018433A1 (en) 2004-08-18 2006-02-23 Bracco Research Sa Gas-filled microvesicles composition for contrast imaging
EP1833373B1 (en) 2004-12-23 2015-12-16 Bracco Suisse SA A perfusion assessment method and system based on bolus administration
US20080045919A1 (en) * 2004-12-23 2008-02-21 Bracco Research S.A. Liquid Transfer Device for Medical Dispensing Containers
WO2006094951A1 (en) 2005-03-03 2006-09-14 Bracco Research Sa Medical imaging system based on a targeted contrast agent
EP1714642A1 (en) * 2005-04-18 2006-10-25 Bracco Research S.A. Pharmaceutical composition comprising gas-filled microcapsules for ultrasound mediated delivery
CA2624636C (en) 2005-11-10 2016-04-05 Bracco Research Sa Instantaneous visualization of contrast agent concentration in imaging applications
CA2624608C (en) 2005-11-10 2016-06-07 Bracco Research Sa Detection of immobilized contrast agent in medical imaging applications based on flow dynamics analysis
ES2428964T3 (es) 2005-12-09 2013-11-12 Bracco Suisse Sa Conjugados de vectores específicos de una diana-fosfolípidos
EP1797919A1 (en) * 2005-12-16 2007-06-20 Bracco Research S.A. Liquid transfer device for medical dispensing containers
WO2008016992A1 (en) 2006-08-01 2008-02-07 Scimed Life Systems, Inc. Pulse inversion sequences for nonlinear imaging
ITBO20060593A1 (it) * 2006-08-04 2008-02-05 Francesca Cavalieri Microbolle realizzate in alcol polivinilico e relativo caricamento delle stesse con ossido di azoto
US9446156B2 (en) 2006-09-05 2016-09-20 Bracco Suisse S.A. Gas-filled microvesicles with polymer-modified lipids
EP2117603A2 (en) * 2006-12-19 2009-11-18 Bracco International B.V. Targeting and therapeutic compounds and gas-filled microvesicles comprising said compounds
US8512249B2 (en) 2006-12-21 2013-08-20 Bracco International Bv Detection of the detachment of immobilized contrast agent in medical imaging applications
JP5524860B2 (ja) 2007-12-28 2014-06-18 ブラッコ・シュイス・ソシエテ・アノニム 医療画像用途における固定化された造影剤の定量分析
US10130342B2 (en) 2007-12-28 2018-11-20 Bracco Suisse Sa Initialization of fitting parameters for perfusion assessment based on bolus administration
EP2090322A1 (en) 2008-02-18 2009-08-19 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of fsh receptor ligands for diagnosis and therapy of cancer
GB0811856D0 (en) * 2008-06-27 2008-07-30 Ucl Business Plc Magnetic microbubbles, methods of preparing them and their uses
AU2009301141B2 (en) 2008-10-07 2015-08-27 Bracco Suisse S.A. Targeting construct comprising anti-polymer antibody and liposomes or microvesicles binding to the same
EP2189112A1 (en) 2008-11-24 2010-05-26 Bracco Research S.A. Real-time perfusion imaging and quantification
KR101630190B1 (ko) 2008-12-16 2016-06-14 브라코 스위스 에스.에이. 조영제의 볼러스 투여를 위한 장치
EP2441044B8 (en) 2009-06-08 2019-03-27 Bracco Suisse SA Auto-scaling of parametric images
CA2767993C (en) * 2009-08-06 2018-06-26 Sunstar Giken Kabushiki Kaisha Composition and process for production thereof
EP2473972B1 (en) 2009-09-01 2019-11-06 Bracco Suisse SA Method for producing medical parametric images
PL2335675T3 (pl) 2009-12-10 2015-08-31 Neubourg Skin Care Gmbh & Co Kg Wolne od emulgatorów, stabilizowane polimerem formulacje pianki
EP2345732A1 (en) 2010-01-19 2011-07-20 Universite Paris Descartes Methods for intracellular delivery of nucleic acids
EP2544593B1 (en) 2010-03-09 2014-12-31 Bracco Suisse SA Initialization of fitting parameters for perfusion assessment based on bolus administration
ES2515467T3 (es) 2010-08-09 2014-10-29 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Métodos y composiciones farmacéuticas para el tratamiento de una enfermedad ocular en un sujeto
DK3338807T3 (da) 2010-08-09 2021-02-22 Bracco Suisse Sa Målrettet konstruktion til gasfyldte mikrovesikler
JP5992920B2 (ja) 2010-12-24 2016-09-14 ブラッコ・スイス・ソシエテ・アノニム ワクチンとしての使用のためのガス入りの微小胞
EP2474327A1 (en) 2011-01-07 2012-07-11 RWTH Aachen Microdosing of ultrasound contrast agents
AU2012235634B2 (en) 2011-03-28 2017-05-25 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. Sustained-release injectable formulation
WO2012136813A2 (en) 2011-04-07 2012-10-11 Universitetet I Oslo Agents for medical radar diagnosis
EP2545908A1 (en) 2011-07-11 2013-01-16 RWTH Aachen Medium for microbubbles or microparticles and preparation thereof
EP2936433B1 (en) 2012-12-21 2018-09-19 Bracco Suisse SA Segmentation in diagnostic imaging applications based on statistical analysis over time
JP6313329B2 (ja) 2012-12-21 2018-04-18 ブラッコ・スイス・ソシエテ・アノニムBracco Suisse SA ガス封入マイクロベシクル
CA2903968A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Westfaelische Wilhelms-Universitaet Muenster Detection of acute renal allograft rejection
CN105407968B (zh) 2013-07-03 2019-09-03 博莱科瑞士股份公司 用于对缺血性中风的超声处置的设备
WO2015155380A1 (en) 2014-04-07 2015-10-15 Bracco Suisse Sa Estimation of acoustic level in-situ with non-fundamental analysis
DK3233136T3 (da) 2014-12-18 2019-05-20 Bracco Suisse Sa Formulering med målrettede gasfyldte mikrovesikler
WO2016102515A1 (en) 2014-12-22 2016-06-30 Bracco Suisse Sa Gas-filled microvesicles for use as vaccine
CN107206111B (zh) 2014-12-31 2021-04-27 蓝瑟斯医学影像公司 脂质封装的气体微球组合物及相关方法
CN108601948B (zh) 2015-12-09 2021-04-20 皇家飞利浦有限公司 超声系统
EP3386397B1 (en) 2015-12-10 2020-02-05 Bracco Suisse SA Detection of immobilized contrast agent with dynamic thresholding
JP6991148B2 (ja) 2016-02-09 2022-01-12 ブラッコ・スイス・ソシエテ・アノニム セレクチン標的化のための組み換えキメラタンパク質
CN107233582B (zh) * 2016-03-29 2020-04-24 北京飞锐达医疗科技有限公司 一种基于叔丁醇/水混合溶剂制备超声造影剂的方法
CN107233583B (zh) * 2016-03-29 2020-04-24 北京飞锐达医疗科技有限公司 一种具有超长持续时间的超声造影剂及其制备方法
AU2017260532B2 (en) 2016-05-04 2024-08-22 Lantheus Medical Imaging, Inc. Methods and devices for preparation of ultrasound contrast agents
US9789210B1 (en) 2016-07-06 2017-10-17 Lantheus Medical Imaging, Inc. Methods for making ultrasound contrast agents
US10335502B1 (en) 2019-01-29 2019-07-02 Bracco Suisse Sa Freeze-dried formulation for gas-filled microvesicles
US10232061B1 (en) 2018-07-06 2019-03-19 Bracco Suisse Sa Freeze-dried formulation for gas-filled microvesicles
SG11202010539RA (en) * 2018-07-06 2020-11-27 Bracco Suisse Sa Freeze-dried formulation for gas-filled microvesicles
US20210389320A1 (en) 2018-12-21 2021-12-16 Bracco Suisse Sa Gas-filled microvesicles with ligand
US11717570B2 (en) 2019-05-15 2023-08-08 Bracco Suisse Sa Gas-filled microvesicles
US20200360289A1 (en) 2019-05-15 2020-11-19 Bracco Suisse Sa Freeze-dried product and gas-filled microvesicles suspension
GB201908352D0 (en) 2019-06-11 2019-07-24 Innovation Ulster Ltd Sonodynamic therapy
US12005130B2 (en) 2019-10-16 2024-06-11 Agitated Solutions Inc. Generating microbubbles for bubble studies
JP6760630B1 (ja) * 2019-10-29 2020-09-23 学校法人 愛知医科大学 微小気泡含有電解質液の製造方法および微小気泡含有電解質液の調製に用いる微小気泡含有溶媒の製造方法
JP2023512943A (ja) 2020-02-11 2023-03-30 ブラッコ・スイス・ソシエテ・アノニム 治療的使用のためのガス充填微小胞
GB202004629D0 (en) 2020-03-30 2020-05-13 Innovation Ulster Ltd Therapy
US11191888B1 (en) 2020-05-18 2021-12-07 Agitated Solutions Inc. Syringe-based microbubble generator
CN113440627B (zh) * 2021-07-30 2022-11-25 北京诺康达医药科技股份有限公司 一种冻干粉末及其制备方法与应用
CN114177317A (zh) * 2021-11-03 2022-03-15 深圳奥祺生物医药有限公司 一种用于超声造影的微泡冻干制剂、造影剂及制备方法
WO2024133827A1 (en) 2022-12-21 2024-06-27 Bracco Suisse Sa Gas-filled microvesicles with perfluoro olefin
US11833224B1 (en) 2023-02-08 2023-12-05 Leuvian Llc Lyoprotectant compositions and uses thereof

Family Cites Families (79)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3968203A (en) * 1965-10-01 1976-07-06 Jerome G. Spitzer Aerosol astringent composition
US3615972A (en) * 1967-04-28 1971-10-26 Dow Chemical Co Expansible thermoplastic polymer particles containing volatile fluid foaming agent and method of foaming the same
US3650831A (en) * 1969-03-10 1972-03-21 Armour Dial Inc Method of cleaning surfaces
US3900420A (en) * 1970-05-18 1975-08-19 Felix Sebba Microgas emulsions and method of forming same
US4027007A (en) * 1970-12-09 1977-05-31 Colgate-Palmolive Company Antiperspirants formulated with borax
GB1575343A (en) * 1977-05-10 1980-09-17 Ici Ltd Method for preparing liposome compositions containing biologically active compounds
CH621479A5 (hu) * 1977-08-05 1981-02-13 Battelle Memorial Institute
CH624011A5 (hu) * 1977-08-05 1981-07-15 Battelle Memorial Institute
US4235871A (en) * 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
US4256251A (en) * 1978-04-24 1981-03-17 Lawrence M. Smith Surgical staplers and staple
US4192859A (en) * 1978-09-29 1980-03-11 E. R. Squibb & Sons, Inc. Contrast media containing liposomes as carriers
US4587545A (en) * 1978-12-20 1986-05-06 At&T Bell Laboratories High voltage dielectrically isolated remote gate solid-state switch
US4276885A (en) * 1979-05-04 1981-07-07 Rasor Associates, Inc Ultrasonic image enhancement
US4265251A (en) * 1979-06-28 1981-05-05 Rasor Associates, Inc. Method of determining pressure within liquid containing vessel
US4316391A (en) * 1979-11-13 1982-02-23 Ultra Med, Inc. Flow rate measurement
US4681119A (en) * 1980-11-17 1987-07-21 Schering Aktiengesellschaft Method of production and use of microbubble precursors
US4442843A (en) * 1980-11-17 1984-04-17 Schering, Ag Microbubble precursors and methods for their production and use
US4657756A (en) * 1980-11-17 1987-04-14 Schering Aktiengesellschaft Microbubble precursors and apparatus for their production and use
DE3141641A1 (de) * 1981-10-16 1983-04-28 Schering Ag, 1000 Berlin Und 4619 Bergkamen Ultraschall-kontrastmittel und dessen herstellung
US4718433A (en) * 1983-01-27 1988-01-12 Feinstein Steven B Contrast agents for ultrasonic imaging
US4572203A (en) * 1983-01-27 1986-02-25 Feinstein Steven B Contact agents for ultrasonic imaging
GB2135647A (en) * 1983-02-15 1984-09-05 Squibb & Sons Inc Method of preparing liposomes and products produced thereby
DE3313947A1 (de) * 1983-04-15 1984-10-18 Schering AG, 1000 Berlin und 4709 Bergkamen Mikropartikel und gasblaeschen enthaltende ultraschall-kontrastmittel
US5141738A (en) * 1983-04-15 1992-08-25 Schering Aktiengesellschaft Ultrasonic contrast medium comprising gas bubbles and solid lipophilic surfactant-containing microparticles and use thereof
DE3313946A1 (de) * 1983-04-15 1984-10-18 Schering AG, 1000 Berlin und 4709 Bergkamen Mikropartikel und gasblaeschen enthaltende ultraschall-kontrastmittel
US4900540A (en) * 1983-06-20 1990-02-13 Trustees Of The University Of Massachusetts Lipisomes containing gas for ultrasound detection
US4544545A (en) * 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
DE3324754A1 (de) * 1983-07-06 1985-01-17 Schering AG, 1000 Berlin und 4709 Bergkamen Ultraschallkontrastmittel sowie dessen herstellung
US5618514A (en) * 1983-12-21 1997-04-08 Nycomed Imaging As Diagnostic and contrast agent
GB8504916D0 (en) * 1985-02-26 1985-03-27 Isc Chemicals Ltd Emulsions of perfluorocarbons in aqueous media
DE3529195A1 (de) * 1985-08-14 1987-02-26 Max Planck Gesellschaft Kontrastmittel fuer ultraschalluntersuchungen und verfahren zu seiner herstellung
US4684479A (en) * 1985-08-14 1987-08-04 Arrigo Joseph S D Surfactant mixtures, stable gas-in-liquid emulsions, and methods for the production of such emulsions from said mixtures
US4927623A (en) * 1986-01-14 1990-05-22 Alliance Pharmaceutical Corp. Dissolution of gas in a fluorocarbon liquid
DE3637926C1 (de) * 1986-11-05 1987-11-26 Schering Ag Ultraschall-Manometrieverfahren in einer Fluessigkeit mittels Mikroblaeschen
FR2608942B1 (fr) * 1986-12-31 1991-01-11 Centre Nat Rech Scient Procede de preparation de systemes colloidaux dispersibles d'une substance, sous forme de nanocapsules
US5283067A (en) * 1987-01-30 1994-02-01 Ciba-Geigy Corporation Parenteral suspensions
US5089181A (en) * 1987-02-24 1992-02-18 Vestar, Inc. Method of dehydrating vesicle preparations for long term storage
CH672733A5 (hu) * 1987-05-22 1989-12-29 Bracco Ind Chimica Spa
DE3741201A1 (de) * 1987-12-02 1989-06-15 Schering Ag Ultraschallarbeitsverfahren und mittel zu dessen durchfuehrung
US4844882A (en) * 1987-12-29 1989-07-04 Molecular Biosystems, Inc. Concentrated stabilized microbubble-type ultrasonic imaging agent
WO1989006978A1 (en) * 1988-02-05 1989-08-10 Schering Aktiengesellschaft Berlin Und Bergkamen Ultrasonic contrast agents, process for producing them and their use as diagnostic and therapeutic agents
US5425366A (en) * 1988-02-05 1995-06-20 Schering Aktiengesellschaft Ultrasonic contrast agents for color Doppler imaging
US5730954A (en) * 1988-08-23 1998-03-24 Schering Aktiengesellschaft Preparation comprising cavitate- or clathrate-forming host/guest complexes as contrast agent
DE3828905A1 (de) * 1988-08-23 1990-03-15 Schering Ag Mittel bestehend aus cavitate oder clathrate bildenden wirt/gast-komplexen als kontrastmittel
US4957656A (en) * 1988-09-14 1990-09-18 Molecular Biosystems, Inc. Continuous sonication method for preparing protein encapsulated microbubbles
DE3934656A1 (de) * 1989-10-13 1991-04-18 Schering Ag Verfahren zur herstellung von waessrigen dispersionen
US5149319A (en) * 1990-09-11 1992-09-22 Unger Evan C Methods for providing localized therapeutic heat to biological tissues and fluids
US5088499A (en) * 1989-12-22 1992-02-18 Unger Evan C Liposomes as contrast agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same
US5209720A (en) * 1989-12-22 1993-05-11 Unger Evan C Methods for providing localized therapeutic heat to biological tissues and fluids using gas filled liposomes
US5776429A (en) * 1989-12-22 1998-07-07 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas-filled microspheres using a lyophilized lipids
US5123414A (en) * 1989-12-22 1992-06-23 Unger Evan C Liposomes as contrast agents for ultrasonic imaging and methods for preparing the same
SE465300B (sv) * 1989-12-29 1991-08-26 Sjoeberg John Anitec Ab Anordning vid stickkniv foer urtagning av blod fraan slaktdjur
DE4004430A1 (de) * 1990-02-09 1991-08-14 Schering Ag Aus polyaldehyden aufgebaute kontrastmittel
GB9003821D0 (en) * 1990-02-20 1990-04-18 Danbiosyst Uk Diagnostic aid
EP0522081A4 (en) * 1990-03-30 1993-06-16 Smithkline Beecham Corporation Inhibition of disease associated with immunodeficiency virus infection
US5556610A (en) * 1992-01-24 1996-09-17 Bracco Research S.A. Gas mixtures useful as ultrasound contrast media, contrast agents containing the media and method
US5445813A (en) * 1992-11-02 1995-08-29 Bracco International B.V. Stable microbubble suspensions as enhancement agents for ultrasound echography
IN172208B (hu) * 1990-04-02 1993-05-01 Sint Sa
US5137928A (en) * 1990-04-26 1992-08-11 Hoechst Aktiengesellschaft Ultrasonic contrast agents, processes for their preparation and the use thereof as diagnostic and therapeutic agents
US5205287A (en) * 1990-04-26 1993-04-27 Hoechst Aktiengesellschaft Ultrasonic contrast agents, processes for their preparation and the use thereof as diagnostic and therapeutic agents
US5190982A (en) * 1990-04-26 1993-03-02 Hoechst Aktiengesellschaft Ultrasonic contrast agents, processes for their preparation and the use thereof as diagnostic and therapeutic agents
AU636481B2 (en) * 1990-05-18 1993-04-29 Bracco International B.V. Polymeric gas or air filled microballoons usable as suspensions in liquid carriers for ultrasonic echography
DE4100470A1 (de) * 1991-01-09 1992-07-16 Byk Gulden Lomberg Chem Fab Echokontrastmittel
GB9106686D0 (en) * 1991-03-28 1991-05-15 Hafslund Nycomed As Improvements in or relating to contrast agents
GB9106673D0 (en) * 1991-03-28 1991-05-15 Hafslund Nycomed As Improvements in or relating to contrast agents
US5874062A (en) * 1991-04-05 1999-02-23 Imarx Pharmaceutical Corp. Methods of computed tomography using perfluorocarbon gaseous filled microspheres as contrast agents
GB9107628D0 (en) * 1991-04-10 1991-05-29 Moonbrook Limited Preparation of diagnostic agents
US5147631A (en) * 1991-04-30 1992-09-15 Du Pont Merck Pharmaceutical Company Porous inorganic ultrasound contrast agents
US5364612A (en) * 1991-05-06 1994-11-15 Immunomedics, Inc. Detection of cardiovascular lesions
DE4127442C2 (de) * 1991-08-17 1996-08-22 Udo Dr Gros Wäßrige Dispersion Fluorcarbon enthaltender Phospholipid-Vesikel und ein Verfahren zu ihrer Herstellung
DK0605477T4 (da) * 1991-09-17 2007-10-01 Ge Healthcare As Gasformige ultralydskontrastmidler
US5409688A (en) * 1991-09-17 1995-04-25 Sonus Pharmaceuticals, Inc. Gaseous ultrasound contrast media
GB9200388D0 (en) * 1992-01-09 1992-02-26 Nycomed As Improvements in or relating to contrast agents
IL104084A (en) * 1992-01-24 1996-09-12 Bracco Int Bv Sustainable aqueous suspensions of pressure-resistant and gas-filled blisters, their preparation, and contrast agents containing them
CA2148372A1 (en) * 1992-11-02 1994-05-11 Margaret A. Wheatley Surfactant-stabilized microbubble mixtures, process for preparing and methods of using the same
US5716597A (en) * 1993-06-04 1998-02-10 Molecular Biosystems, Inc. Emulsions as contrast agents and method of use
IL110185A (en) * 1993-07-02 1999-05-09 Molecular Biosystems Inc Method for making encapsulated gas microspheres from heat denatured protein in the absence of oxygen gas
CA2164813C (en) * 1993-07-30 2009-11-24 Ernest G. Schutt Stabilized microbubble compositions for ultrasound
US5601085A (en) * 1995-10-02 1997-02-11 Nycomed Imaging As Ultrasound imaging

Also Published As

Publication number Publication date
NO308830B1 (no) 2000-11-06
FI943167A0 (fi) 1994-07-01
DK0619743T3 (da) 1997-01-20
DE10199055I2 (de) 2005-09-29
DE69307124D1 (de) 1997-02-13
AU704954B2 (en) 1999-05-13
CN1088456A (zh) 1994-06-29
FI943167A (fi) 1994-07-01
HUT74561A (en) 1997-01-28
GR3022826T3 (en) 1997-06-30
NZ280615A (en) 1997-02-24
CA2125027C (en) 1998-12-01
JPH07503254A (ja) 1995-04-06
HU9401409D0 (en) 1994-08-29
US5445813A (en) 1995-08-29
ZA938117B (en) 1994-06-23
CA2125027A1 (en) 1994-05-11
KR940703691A (ko) 1994-12-12
EP0619743A1 (en) 1994-10-19
WO1994009829A1 (en) 1994-05-11
EP0619743B1 (en) 1997-01-02
CN1069838C (zh) 2001-08-22
NL300061I1 (nl) 2001-12-01
US20010001279A1 (en) 2001-05-17
FI115953B (fi) 2005-08-31
US5908610A (en) 1999-06-01
KR100216138B1 (ko) 1999-08-16
AU5336294A (en) 1994-05-24
NO942476D0 (no) 1994-06-30
DE69307124T2 (de) 1997-07-17
AU2618197A (en) 1997-12-18
AU666238B2 (en) 1996-02-01
LU90837I2 (fr) 2001-11-19
US5597549A (en) 1997-01-28
IS1625B (is) 1996-10-18
AU3431795A (en) 1996-01-04
NZ257115A (en) 1997-06-24
JP3135919B2 (ja) 2001-02-19
ES2097548T3 (es) 1997-04-01
DE10199055I1 (de) 2002-08-14
US6187288B1 (en) 2001-02-13
IS4089A (is) 1994-05-03
AU681812B2 (en) 1997-09-04
IL107453A (en) 1998-01-04
NO942476L (no) 1994-06-30
US5686060A (en) 1997-11-11
IL107453A0 (en) 1994-02-27
NL300061I2 (nl) 2002-02-01
ATE146972T1 (de) 1997-01-15
US20030129137A1 (en) 2003-07-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU227043B1 (en) Stabile microbubble suspension as enhancement agents for ultrasound echography
JP4418033B2 (ja) 造影剤のまたはそれに関する改良
US5531980A (en) Stable microbubbles suspensions injectable into living organisms
KR101076053B1 (ko) 초음파 조영제 및 그것의 제조방법
JP4229918B2 (ja) 超音波のコントラスト増強のためのリン脂質を含む安定な気体エマルジョン
HU225495B1 (en) Gas mixtures useful as ultrasound contrast media
CZ242096A3 (en) Method of storing ultrasonic gaseous suspensions
US20060257321A1 (en) Ultrasound contrast agents and methods of making and using them
US6613306B1 (en) Ultrasound contrast agents and methods of making and using them
US20040180004A1 (en) Stable microbubble suspensions as enhancement agents for ultrasound echography and dry formulations thereof
US20060034771A1 (en) Ultrasound contrast agents and methods of making and using them
JP4444385B2 (ja) リポソーム用時調製用キット
US20010008626A1 (en) Ultrasound contrast agents and methods of making and using them
US20030185759A1 (en) Ultrasound contrast agents and methods of making and using them
US20030194376A1 (en) Ultrasound contrast agents and methods of making and using them
US20010012507A1 (en) Ultrasound contrast agents and methods of making and using them

Legal Events

Date Code Title Description
AA1S Information on application for a supplementary protection certificate

Free format text: PRODUCT NAME: SULPHUR HEXAFLUORIDE MICROBUBBLES; REG. NO/DATE: EU/1/01/177/001-002 20010326

Spc suppl protection certif: S1000015

Filing date: 20100902

Expiry date: 20131021

GB9A Succession in title

Owner name: BRACCO SUISSE S.A., CH

Free format text: FORMER OWNER(S): BRACCO INTERNATIONAL B.V., NL

FG4S Grant of supplementary protection certificate

Free format text: PRODUCT NAME: SULPHUR HEXAFLUORIDE MICROBUBBLES; REG. NO/DATE: EU/1/01/177/001-002 20010326

Spc suppl protection certif: S1000015

Filing date: 20100902

Expiry date: 20131021

Extension date: 20160326