HU211512A9 - Tumor antigen specific antibody and cell line, and pharmaceutical composition comprising them - Google Patents
Tumor antigen specific antibody and cell line, and pharmaceutical composition comprising them Download PDFInfo
- Publication number
- HU211512A9 HU211512A9 HU95P/P00289P HU9500289P HU211512A9 HU 211512 A9 HU211512 A9 HU 211512A9 HU 9500289 P HU9500289 P HU 9500289P HU 211512 A9 HU211512 A9 HU 211512A9
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- antibody
- monoclonal antibody
- cell line
- antigen
- cells
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 33
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 33
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 33
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 67
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 claims abstract 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 3
- OLYXUGBVBGSZDN-ACRUOGEOSA-N Tyr-Leu-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 OLYXUGBVBGSZDN-ACRUOGEOSA-N 0.000 claims description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 29
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 17
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 12
- 102100024952 Protein CBFA2T1 Human genes 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 8
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 6
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100191768 Caenorhabditis elegans pbs-4 gene Proteins 0.000 description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 2
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 201000010897 colon adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 2
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N isopentane Chemical compound CCC(C)C QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 210000000106 sweat gland Anatomy 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- NGYHUCPPLJOZIX-XLPZGREQSA-N 5-methyl-dCTP Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NGYHUCPPLJOZIX-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 9-ethyl-3-carbazolamine Chemical compound NC1=CC=C2N(CC)C3=CC=CC=C3C2=C1 OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SITWEMZOJNKJCH-WDSKDSINSA-N Ala-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SITWEMZOJNKJCH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- KWTQSFXGGICVPE-WCCKRBBISA-N Arginine hydrochloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N KWTQSFXGGICVPE-WCCKRBBISA-N 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- WTEVQBCEXWBHNA-UHFFFAOYSA-N Citral Natural products CC(C)=CCCC(C)=CC=O WTEVQBCEXWBHNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 238000010268 HPLC based assay Methods 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- QXOHLNCNYLGICT-YFKPBYRVSA-N Met-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O QXOHLNCNYLGICT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N N-Lauroylsarcosine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC(O)=O BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 1
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 206010054184 Small intestine carcinoma Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- IMMPMHKLUUZKAZ-WMZOPIPTSA-N Trp-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 IMMPMHKLUUZKAZ-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- DUKURNFHYQXCJG-JEOLMMCMSA-N alpha-L-Fucp-(1->4)-[beta-D-Galp-(1->3)]-beta-D-GlcpNAc-(1->3)-beta-D-Galp-(1->4)-D-Glcp Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](NC(C)=O)[C@H](O[C@@H]2[C@H]([C@H](O[C@@H]3[C@H](OC(O)[C@H](O)[C@H]3O)CO)O[C@H](CO)[C@@H]2O)O)O[C@@H]1CO DUKURNFHYQXCJG-JEOLMMCMSA-N 0.000 description 1
- 235000005550 amino acid supplement Nutrition 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229940043350 citral Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 201000011024 colonic benign neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012059 conventional drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 208000018554 digestive system carcinoma Diseases 0.000 description 1
- AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N dimethyl butane Natural products CCCC(C)C AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000021045 exocrine pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- WTEVQBCEXWBHNA-JXMROGBWSA-N geranial Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\C=O WTEVQBCEXWBHNA-JXMROGBWSA-N 0.000 description 1
- 239000007973 glycine-HCl buffer Substances 0.000 description 1
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 1
- STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N glycylvaline Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O guanidinium Chemical compound NC(N)=[NH2+] ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 238000010841 mRNA extraction Methods 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 108700004121 sarkosyl Proteins 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 208000014680 small intestine neoplasm Diseases 0.000 description 1
- -1 sodium acetal Chemical class 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- IGHGOYDCVRUTSU-UHFFFAOYSA-M sodium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O IGHGOYDCVRUTSU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M sodium;3-acetamido-5-[acetyl(methyl)amino]-2,4,6-triiodobenzoate;(2r,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4s,5r)-3,4-dihydroxy-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound [Na+].CC(=O)N(C)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I.O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
- A61K51/1063—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell being from stomach or intestines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
- A61K51/1057—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell being from liver or pancreas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/303—Liver or Pancreas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3046—Stomach, Intestines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/77—Internalization into the cell
Description
Mi, Kabi Pharmacia AB, svéd társaság, S-751,82 Uppsala. Svédország, ezúton kijelentjük, hogy a bejelentett találmányra számunkra szabadalom engedélyezhető, és a megvalósítására szolgáló eljárást a következő leírásban részletesen ismertetjük:
A találmány tárgya új, monoklonális tumor antigénre specifikus antitest, az antitestet termelő sejtvonal, a monoklonális antitestet tartalmazó gyógyszerkészítmény, valamint az antitest diagnosztikában és terápiában történő alkalmazása, továbbá a sejtvonalnak az antitest termelésére történő alkalmazása.
A monoklonális antitestek előállítására szolgáló hibridóma technológia, amit először Köhler és Milstein írt le (Natúré 256, 495-497 (1975)), ma már általánosan elterjedt. Az eljárás során mielőma sejteket egyesítenek egy adott antigénnel immunizált állatokból származó limfocitákkal. A kapott hibridóma sejt egy adott antigén determinánsra specifikus antitesteket termel. Ennek következtében a monoklonális antitestek az immunoassay vizsgálatokban egyre jobban kiszorítják a szokásos antiszérumokat. Jelentős kutatásokat végeztek a hibridóma technológiának terápiás célból történő alkalmazására.
Általánosan ismert továbbá, hogy normál szöveti sejteknek tumorsejtekbe történő átvitelekor a sejt felületén lévő szénhidrát szerkezet megváltozik. Sok szénhidrát szerkezet antigénként szolgál, és a tumor által módosított szerkezetek úgynevezett tumorral asszociált antigéneket (TAA) képeznek.
A sejt felületi szénhidrái szerkezetek vagy egy lipid részhez kapcsolódnak, amikoris ezeket glikolipideknek nevezzük, vagy valamely fehérjéhez vagy pepiidhez kötődnek, amikoris ezeket glikofehérjéknek vagy ghkopeptidnek nevezzük. A két forma közös megjelölése a glikokonjugátum.
Tumorral asszociált glikokonjugátum antigének ismertek humán tumorbetegségekkel kapcsolatosan, igy például két. karcinomával asszociált antigén, a CEA (karcinoma embrionális antigén) és GICA (gasztrointesztinális rák antigén), amely CA 19-9 epilopot hordoz. mutatható ki a gasztrointesztinális karcinomákban. míg egy harmadik epitop, a CA-50, általános karcinoma antigénnek tűnik. Mindhárom antigén a tumorsejt felületén választódik ki, és a vérszérumban kimutatható. Ezek a felfedezések elősegítették a tumorspecifikus antigéneket felismerő monoklonális antitestek kutatását, amelyek felhasználhatók különböző rákos megbetegedések immunológiai lokalizálásában és terápiájában.
Ismertek hasnyálmirigy és vastagbél-vékonybélrákra specifikus monoklonális antitestek, amelyek jele C242 (a megfelelő antigén CA-242) (Larsson L. N. és munkatársai: Int. J. Cancer 42, 877-882 (1988): Lindholm L. és munkatársai: An Immunoradiometric Assay (IRMA) fór the CA-50 antigén, Tumor Markor Anitgens. Jan Holmgren kiadó. Studentlitteratur, 119851: Haglund C. és munkatársai: Br. J. Cancer 60. 845-851 (1989l; Sell S.. Humán Pathology 21(10), 1003-1019 (1990); Johansson C. és munkatársai: Int. J. Cancer 48. 757-763 0991); és Kuusela P. és munkatársai: Br. J. Cancer, 63, 636-640 (1991)). AC242 antitestet azonban közelebbről még nem írták le, és így szakember számára előállítása nem volt ismert, és ezért általánosan hozzáférhetőnek nem tekinthető.
A találmány tárgya egy új, monoklonális antitest, amely szignifikáns specifikussággal rendelkezik gasztrointesztinális, elsősorban hasnyálmirigy és vastagbélvékonybél ráksejtekkel szemben, amely monoklonális antitestet a továbbiakban a C242:II jellel jelöljük.
A C242:II az IgG csoportba tartozó monoklonális egér antitest, amely előállítható, ha megfelelő tápközegben humán vastagbél adenokarcinoma sejtvonallal immunizált egerek lépsejtjeinek Sp2/0 egér mieloma sejtvonallal történő fuzionálásával kapott hibridóma sejtvonalat tenyésztünk (az eljárást közelebbről az 1. példában mutatjuk be). A C242:II antitestet termelő hibridóma sejtvonalat 1990. január 26-án deponáltuk a Budapesti Szerződés előírásai szerint a European Collection of Animál Cell Cultures (EC ACC) gyűjteményben (PHLS Centre fór Applied Microbiology and Research, Porton Down, Salisbury Wilts, Nagy-Britannia). ahol a 9 001 2601 deponálási számot kapta. Erre a letétre hivatkoztunk korábban a PCT/SE91/00496 számú (WO 92/01470 számon közzétett) nemzetközi szabadalmi bejelentésünkben, amelynek elsőbbsége 1990. július 20.
A találmány tárgya tehát új, monoklonális antitest, amelynek jele C242:II, vagy ezzel lényegében azonos antitest, vagyis ennek funkcionális ekvivalense, amelyeket a továbbiakban találmány szerinti antitestnek nevezünk.
A találmány tárgya továbbá olyan sejtvonal, amely képes a találmány szerinti antitest termelésére, elsősorban a fent említett és 90012601 számon deponált hibridóma sejtvonal.
A lényegében azonos vagy funkcionális ekvivalens kifejezés alatt azt értjük, hogy az antitest lényegében azonos immunológiai specifikussággal rendelkezik, mint a 90012601 számon deponált sejtvonal által termelt antitest, vagyis ugyanahhoz az antigén determinánshoz vagy epitophoz kötődik, és a kötődés vonatkozásában verseng a C242:II antitesttel.
A találmány szerinti antitest kifejezés felöleli az érintett antitestek antigénkötő fragmenseit is. Az ilyen fragmens megtartja az ép immunoglobulin kötőképességét és specifikusságát, és előállítható például az antitestnek proteolitikus enzimekkel, így pepszinnel végzett hasításával. Ennek során F(ab')2 molekula és kisebb peptidek keletkeznek, ahol az F(ab’)2 az antigénkötő fragmensek egyik képviselője. Ugyancsak ide tartoznak a géntechnológiai úton előállított, megfelelő antitestek és fragmensek, valamint az antitest származékai és humanizált formái. A találmány keretein belül esnek továbbá azok az egérből és más állatokból származó antitestek, amelyek eltérő lg csoportba vagy alcsoportba tartoznak, de ugyanilyen specifikussággal rendelkeznek. Az antitestkötő fragmensek és rekombináns úton előállított variánsok vonatkozásában a találmány szerinti antitest csoportja vagy alcsoportja kevésbé jelentős, mivel az egyetlen csoport vagy alcsoport
HU 211 512 A9 specifikus determináns az előállítás során többé-kevésbé kiiktatható. A találmány ezért a teljesen nem humán antitestektől a teljesen humán antitestekig terjed, és különböző kimér formákat ölel fel. A teljesen humán antitestek előállíthatók örökített humán antiestet termelő sejtek tenyésztésével.
A találmány szerinti megoldás egyik megvalósítási módja olyan antitest, amelynek a CA-242 antigén/epitop vonatkozásában mutatott kötőaffinitása a deponált hibridóma sejtvonal által termelt antitest kötőaffinitásához viszonyítva 10+l-szerestől bizonyos esetekben KE1-szeres értékig terjed. A kérdéses keresztreaktivitást a szokásos blokkoló/kötő vizsgálattal mértük.
Az említett géntechnológiai előállítás során a C242:II monoklonális antitest könnyű és nehéz láncegységei változó területeinek megfelelő cDNS molekulákat közelebbről a 4. példában leírt módon klónozzuk. Az eljárás részletes tárgyalása előtt röviden általánosan áttekintjük egy alap immunoglobulin szerkezeti felépítését, amit egy G csoportba tartozó immunoglobulin vonatkozásában az 1. ábrán mutatunk be.
Az 1. ábra szerinti immunoglobulin két azonos, könnyű polipeptid láncegységet (L) és két azonos nehéz polipeptid láncegységet (H) tartalmaz, ahol a négy láncegységet diszulfid kötések és különböző nem-kovalens erők tartják össze, és így szimmetrikus Y konfigurációt képeznek. Mindegyik nehéz láncegység egy változó területet (VH) tartalmaz, amit több állandó terület (CH) követ. Az egyes könnyű láncegységek egy változó területet (VL) tartalmaznak, amelyhez a láncegység másik végén egy állandó terület (CL) csatlakozik. A könnyű láncegységnek két típusa van, amit kappa és lambda jellel különböztetünk meg. A könnyű láncegység változó területe a nehéz láncegység változó területéhez kapcsolódik, és a könnyű láncegység állandó területe a nehéz láncegység első állandó területéhez kapcsolódik, ahol a könnyű és nehéz láncegység változó területei képezik az anligénkötő helyet.
A könnyű és nehéz láncegység változó területei ugyanazt az általános szerkezetet mutatják, mindegyik három hipervariábilts szakaszt tartalmaz, amit komplementaritást meghatározó szakasznak (az angol complementarity delermining region elnevezés után rövidítve CDR) nevezünk, amelyek négy keretszakasz (az angol framework region elnevezés után rövidítve FR) vesz körül. Az egyes változó területekhez tartozó CDR szakaszok szoros közelségben vannak a keretszakaszokkal, cs a két CDR készlet együtt határozza meg az antitest specifikusságát.
A C242:II antitest könnyű és nehéz láncegységei változó területeinek megfelelő cDNS molekulák klónozásához először önmagában ismert módon cDNS fágtárat állítunk elő a C242:II hibridómából. Ezután egér gcnomiális DNS-bőI polimeráz láncreakcióval (PCR) és megfelelő primerek alkalmazásával a nehéz láncegység és a kappa könnyű láncegység állandó területeit átfedő hibridizációs próbákat állítunk elő. A kapott próbákkal a cDNS tárat a C242:II antitest nehéz láncegységét és kappa láncegységét kódoló DNS szekvenciát tartalmazó cDNS kiónokra vizsgáljuk. A pozitív hibridizált fág kiónokat kiterjesztjük, és a cDNS-t plazmid formájában kivágjuk. Ezeket restrikciós térképezéssel jellemezzük, és a kívánt méretű inszerteket tartalmazó plazmidokat szekvenáljuk. A CDR szakaszok meghatározása érdekében a szekvenált inszertek által kódolt aminosav szekvenciákat az ismert egér kappa és nehéz láncegység szekvenciáival hasonlítjuk össze, amelynek során figyelembe vesszük a CDR szakaszok alapvető elhelyezkedését (Kábát E. A. és munkatársai: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4. kiadás, U. S. Department of Health and Humán Services, National Institutes of Health, (1987)). Azt találtuk, hogy a megfelelő láncegységekhez tartozó CDR szakaszok a kővetkező aminosav szekvenciákkal rendelkeznek (az érintett szekvenciákat a 3. és 4. ábrán is jelöltük):
Kappa lánc/könnyű lánc:
CDR1: ArgSerSerLysSerLeuLeuHisSerAsnGlyAsnThr
TyrLeuTyr (TrpPhe)
CDR2: ArgMetSerAsnLeuValSer(GlyVal)
CDR3: LeuGlnHisLeuGluTyrProPheThr(PheGly)
Nehéz lánc:
CDR1: (PheThr)TyrTyrGlyMetAsn
CDR2: (MetGly)TrpIleAspThrThrThrGlyGluProThrTyrAlsGluAspPheLysGly(Arglle)
CDR3: (AlaArg)ArgGlyProTyrAsnTrpTyrPheAspVal (TrpGly).
A zárójelbe tett terminális dipeptid maradékok a CDR szekvenciák adott esetben előforduló változatai. A 3. ábrán megadott kappa láncegység egy cisz maradékot tartalmaz, ami arra utal, hogy a hozzá tartozó CDR szakaszok aminoterminális határa jól definiált.
A fenti CDR szakaszokat kódoló DNS szekvenciákat a 4. ábra mutatja. A CDR aminosav szekvenciák és/vagy DNS szekvenciák ismeretében szakember képes arra. hogy a C242:II antitest CDR szakaszait ismert helyspecifikus mutációval valamely más antitest vagy antitest fragmens változó területeibe klónozza. Az eljárás során, amit általában CDR oltásnak neveznek, a DNS szintjén a C242:II antitest CDR szakaszait kódoló szekvenciákat a befogadó antitest vagy fragmens CDR szakaszait kódoló szekvenciák helyére visszük be, és ennek során a C242:II monoklonális antitest specifikusságának megfelelő antitestet vagy antitest fragmenst kapunk. A találmány szerinti antitest kifejezés ezért magába foglalja a fenti CDR szakaszokat vagy alternatív CDR aminosav szekvenciákat tartalmazó antitesteket vagy antitest ffagmenseket, ahol a CDR szakaszok az ECACC 90012601 számon deponált hibridóma sejtvonal által termelt antitesttel keresztreakcióba lépő funkcionális antitest keretszakaszokba vannak beojtva.
A találmány szerinti antitest tumorasszociált antigénre specifikus, amely antigént CA-242 jellel jelöljük. Ez az antigén egy olyan szialilezett szénhidrát antigén, amely a fent említett CA-50 antigénnel azonos makromolekulán fejeződik ki. Szerkezetileg ez az antigén annyiban tér el a CA-50 epitoptól, hogy a találmány szerinti antitest nem reagál sem szialilezett Lewis-a anyaggal, sem szialoszillakto-N-tetraózzal. A
HU 211 512 A9
CA-50-re specifikus monoklonális antitest azonban gátolhatja a találmány szerinti antitestnek CA-50-hez történő kötődését, ami arra utal, hogy szerkezeti rokonság van a CA-50 és a találmány szerinti antitest által felismert antigén között. A CA-242 tumor asszociált antigént a legtöbb vastagbél-vékonybél tumor kifejezi, és csak gyengén fejeződik ki, vagy hiányzik a normál vastagbél szövetben.
A találmány szerinti antitestnek a sejthez kötött antigénhez történő kötődése után a képződött antigénantitest komplex képes arra, hogy bejusson a sejt belsejébe, például sejtzárvány formájában. Ez a deponált C242:II antitest legfontosabb tulajdonsága.
Bár a találmány szerinti antitest által felismert antigén alig fejeződik ki normál hasnyálmirigy és vastagbél szövetben, erősen kifejeződik a hasnyálmirigy karcinoma és a vastagbél adenokarcinoma sejtekben. A találmány szerinti antitest ezért felhasználható a humán hasnyálmirigy rák és humán vastagbél karcinoma immunolokalizálásában és terápiájában.
A találmány tárgya ezért eljárás immunológiai vizsgálatra \agy terápiára, amelynek során a találmány szerinti új antitestet használjuk.
A találmány tárgya továbbá gyógyszerkészítmény, amely találmány szerinti új antitestei tartalmaz.
A találmány szerinti új antitesten alapuló in vitro immunológiai vizsgálat a szokásos immunológiai technikákkal megvalósítható, amelynek során a találmány szerinti antitestet használjuk jelölt vagy jelöletlen formában. és meghatározzuk az antitestnek a vizsgált mintában található specifikus antigén fajtákkal kialakított komplexét. Az első esetben az antitest jelölését valameh kimutatható jelöléssel végezzük, amelyre példaként említhető a radiojelölés. a kemilumineszcensz jelölés, a fluoreszcens jelölés vagy enzimes jelölés. Az utóbbi esetben az antitestet valamely jelöli anyaggal képzett komplexen keresztül mutatjuk ki. vagy a kimutatást nem jelölőtechnikával végezzük, ilyen például a felületi plazmon rezonancián alapuló bioszenzor módszer. Mintaként alkalmazható például valamely testfolyadék. így szérum, valamint szövetpreparátum (hisztokémiai vizsgálat).
Az in vivő diagnosztikai eljáráshoz a találmány szerinti antitestet megfelelő külső detektálható jelöléssel, így radiojelöléssel. vagy nehéz fématommal látjuk el, majd a vizsgált betegnek adagoljuk, és a szervezeten belül meghatározzuk az antitest felhalmozódásának helyét.
A terápiás alkalmazáshoz a találmány szerinti új antitestet gyógyszerkészítménnyé alakítjuk, amelynek előállításához a szokásos gyógyszerészeti hordozóanyagokat. például vizet alkalmazunk, és amit a szokásos módon, például intravénásán, szubkután, intramuszkulárisan vagy intraperitoneálisan adagolunk.
A következő, nem korlátozó jellegű példákban leírjuk a találmány szerinti új antitestet termelő hibridóma előállítását, ennek immunohisztológiai vizsgálathoz töricnő alkalmazását, a sejtzárvány kialakulását, valamint a C242:I1 monoklonális antitest könnyű és nehéz láncegységét kódoló cDNS molekulák klónozását. Ennek során a következő ábrákra hivatkozunk: Az
1. ábra a G immunoglobulin általános szerkezetének vázlatát mutatja be. A
2. ábra a sejtzárványok kialakulását mutatja be a
C242:ü sejteknél. A
3. ábra a C242:II monoklonális antitest kappa láncegysége változó területét kódoló cDNS szekvenciát mutatja be a megfelelő aminosav szekvenciával együtt. A
4. ábra a C242:II monoklonális antitest nehéz láncegység változó területét kódoló cDNS szekvenciát mutatja be a megfelelő aminosav szekvenciával együtt.
1. példa
A C242:IJ antitestet termelő hibridóma sejtvonal kialakítása
Lépsejlek preparálása
Az American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, Md., USA) gyűjteményből CCL 222 számon beszerezhető COLO 205 humán vastagbél-vékonybél karcinoma sejtvonalat 10% magzati borjúszérummal (FCS) kiegészített Iscove-féle MÉM tápközegen tenyésztjük a szokásos módon. A sejteket az összefolyás előtt, általában 2-3 nappal az altenyészet megkezdése után összegyűjtjük, és foszfát pufferolt sóoldattal, (PBS) háromszor mossuk.
4-6 hetes BALB/C egerek immunizálásához kezdeti dózisként intraperitoneálisan 3xlO7 COLO 205 sejtet adagolunk 0,1 ml PBS-ben szuszpendálva. Második dózisként további 0,1 ml szuszpenzióban 3xlO7 COLO 205 sejtet adagolunk, majd az állatokat 4 nap elteltével megöljük, és a lépet eltávolítjuk. A lépet egyetlen sejtszuszpenzióban disszociáljuk.
A hibridóma előállítása
A sejtszuszpenzióból 1.2xl08 lépsejtet megosztunk két kémcső között. Minden kémcsőhöz további 108 mieloma sejtet adunk, ami SP2/0 egér mieloma sejtvonalból (az ATCC gyűjteményben CRL 1581 számon) származik. A két kémcsövet centrifugáljuk, és a folyékony fázist dekantáljuk. Minden kémcsőhöz lassan 2 ml. 37 °C hőmérsékletű PEG oldatot (10 g 4000 móltömegű PEG, 1 ml DMSO és 10 ml monoklonális sóoldat) adagolunk 1 perc alatt folyamatos kevertetés közben. A kémcsöveket ezután 90 percen keresztül 37 °C hőmérsékletű vízfürdőn óvatosan kevertetjük. A sejtfúzió megszakításához a kémcsövekhez fiziológiás pufferoldatot adunk a következő előírás szerint: 2 ml 30 másodperc alatt. 6 ml 30 másodperc alatt, majd további 32 ml 1 perc alatt. A sejtszuszpenziót a tenyészközeggel mossuk, majd összesen 100 ml htpoxantin/aminopterin/timidin (HAT) eleggyel kiegészített tápközegben szuszpendáljuk. Tápközegként 10% FCS, 36 mg/1 Laszparágin, 116 mg/1 L-arginin HCI. 10 mg/1 fólsav, 292.3 mg/1 L-glutamin. 110,1 mg/1 nátrium-piruvát és 3.49 μΙ/l merkaptoetanol adalékokkal kiegészített Iscove-féle MÉM közeget használunk. 50 μΙ térfogatú alikvot mintákat 96 mérőhelyes szövettenyésztő lemezre viszünk. A mérőhelyeket BALB/C egerekből származó 250 μΐ makrofág szuszpenzióval (2xl(f sejt/ml) lefedjük, ahol a makrofág szuszpenziót HAT
HU 211 512 A9 eleggyel kiegészített tápközegben vesszük fel. A tápközeget a fúziót követő 6 nap elteltével lecseréljük.
Az antitestet kiválasztó hibridómák vizsggálata
A hatodik napon lecserélt, kimerült közeget COLO 205 pozitív antitestekre vizsgáljuk Kennett R. H. módszere szerint (Enzyme-linked antibody assay with cells attached to polyvinyl chloride plates, Monoclonal Antibodies. Hybridomas. A new dimension in biologica! analyses. H. R. Kennett, Τ. 1. McKevin, K. B. Bechtol kiadó, Plenum Press, New York (1980)). Ennek során IIF típusú Nunc immunolemezek mérőhelyeit 2xlO5 sejt/mérőhely mennyiségben 50 pl COLO 205 sejttel (1 mg/100 ml PBS) vonjuk be. Ezután 50 pl/mérőhely mennyiségben a hatodik napon eltávolított, kimerült tápközeget adjuk a sejtekhez. Egy éjszakán keresztül szobahőmérsékleten inkubáljuk, majd peroxidázzal konjugált antiegér Ig-t (Dakopatts P 260, Dakopatts A/S, Koppenhága, Dánia) adunk hozzá 100 pg/mérő ely mennyiségben 1:500 arányban 1 % BSA-PBS-ben hígítva. Egy éjszakán keresztül szobahőmérsékleten inkubáljuk, majd 100 μΐ/mérőhely mennyiségben négy OPD-tablettát (Dako S2000) adunk hozzá 12 ml citromsav pufferben (pH = 5,0) és 5 μΐ 30 %-os hidrogén-peroxidban oldva, és inkubálás után 450 nm hullámhosszon mérjük a fényelnyelést
Megközelítőleg 600 hibridóma kiónt vizsgálunk. A vizsgált kiónok közül 190 reagál COLO 205 sejtekkel, ebből 177 normál humán limfocitákkal (Lymphoprep, Nyegaard A/S, Norvégia) is reagál, amit eldobunk. A fennmaradó kiónok közül az egyik C242 jelet kapja, és izotípusa szerint az IgGl osztályba tartozik. A C242 hibridómát több szubklónozással stabil, monoklonális antitest termelésére képes C242:II kiónná alakítjuk.
Ennek során a C242 hibridóma első klónozásakor C242:5 kiónt kapunk. Ezt C242:5:2 kiónná alakítjuk. Mindkét lépésben a hibridóma szuszpenziói hipoxantm/timidin (HT) eleggyel kiegészített tenyészközegben hígítjuk 4 sejt/ml sűrűségig. Ebből 50 pl-t (0,2 sejt) egy 96 mérőhelyes, előzetesen 250 pl. HT eleggyel kiegészített közegben felvett BALB/C egér makrofág szuszpenzióval (5xl(P makrofág/méróhely) bevont lemez mérő helyeihez adagolunk. 2-5 nap elteltével mikroszkópon, vizuálisan egyetlen sejtklónt detektálunk. A hatodik napon a tápközeget kicseréljük, és a kimerült közeg alikvot részeit a fent leírt módon ELISA vizsgálattal COLO 205 sejtekhez kötődő, de normál humán sejtekhez nem kötődő antitestekre vizsgáljuk Kiválasztjuk a COLO 205 sejtekkel pozitív reakciói, és a normál sejtekkel negatív reakciót adó legjobb kiónt, és fiolákban folyékony nitrogénben fagyasztjuk.
A harmadik klónozáshoz a sejteket megolvasztjuk. és DMEM közegben (Dulbecco szerint módosított Eagle közeg + 5 % FCS) tenyésztjük. A sejteket ezután átlag három sejt/mérőhely mennyiségben 96 mérőhelyes tenyészlemezre visszük, A klónozást 5 % FCS-sel kiegészített DMEM közegben végezzük, és etetősejtként egér makrofágot használunk. Ezen a lemezen 30 klón jelenik meg, amiből 16 klőnt nefelometriásan IgG termelésre vizsgálunk, és az antitestre vonatkozó specifikusságot a fent leírt módon ELISA vizsgálattal ellenőrizzük. A vizsgált kiónok közül tizenkettő IgG-t termel. Tíz kiónt 24 mérőhelyes szövettenyésztő lemezre viszünk, amelyről a kimerült tápközeget IgG termelésre és specifikusságra vizsgáljuk. A szelektálás során négy olyan kiónt választunk ki, amely viszonylag nagy termelékenységet mutat. A végső termelékenységi vizsgálatot a négy kiónnál kettős szövettenyésztő palackban végezzük. A legnagyobb termelékenységet mutató klón a C242/CL 510 Al jelet kapja. Ezt folyékony nitrogénben fagyasztjuk.
A C242/CL 510 Al első klónozása szerint a sejteket egyharmada nem termel IgG-l, mivel az általános egér IgG ELISA szerint 1:1000 arányú hígításnál 0,1 alatti abszorpció mérhető. Öt pozitív szubklónt egyesítve C242:I kiónt alakítunk ki. A klón termelékenysége HPLC alapú vizsgálat szerint 150 pg egér IgG 1 ml-enként.
A C242:I kiónt 96 mérőhelyes lemezen klónozva 33 kiónt kapunk, amely mindegyike egér IgG-t termel. Egyenként legalább 150 pg/ml termelékenységet mutató öt klónból kialakítjuk a végső C242:II jelű kiónt, amely stabilan képes IgG termelésére. HPLC vizsgálat szerint a C242:II termelékenysége 196 pg egér IgG 1 ml-enként. A sejteket fiolákban folyékony nitrogénben fagyasztjuk és tároljuk. AC242:II hibridóma sejtek egy mintáját az ECACC gyűjteményben 90012601 számon deponáltuk.
C242:II monoklonális antitest előállítása
A fenti hibridómából kezdeti sejtszuszpenziót képzünk. és a sejteket összesen 6000 cm2 felületű szövettenyésztő kamrába (Nunc A/S) visszük 2X104 sejt/ml sűrűséggel. A sejteket Iscove szerint módosított DMEM közegben (Iscove'N. N. és Melchers F.: J. Exp. Med. 147. 923 (1978)) tenyésztjük, amit előzetesen 1% gentamicinnel, 1 % aminosav kiegészítővel, és 5 % magzati borjúszérummal egészítünk ki. A sejteket négy vagy öt napon keresztül 37 °C hőmérsékleten 8 % CO2-t tartalmazó nedves légkörben inkubáljuk. Az inkubálás után a sejteket megszámoljuk, és a monoklonális antest koncentráció meghatározásához mintát veszünk. A sejttenyészet felülúszóját dekantáljuk, és cellulóz szűrőn szűrve eltávolítjuk a szuszpendált sejteket. A felülúszót ezután ultraszűréssel Millipore Pellican ultraszűrősejtben 20-30-szorosra bekoncentráljuk, amelynek során 30.000 móltömegű membránt használunk. A koncentrátum egyik mintáját analizálva meghatározzuk a C242:II monoklonális antitest koncentrációját és antigén reaktivitását, majd a monoklonális antitest koncentrátumot további tisztításig -70 °C hőmérsékleten tároljuk.
A C242:I1 monoklonális antitest tisztítása Protetn-A-Sepharose 4B töltetet (Pharmacia AB..
Uppsala, Svédország) készítünk elő a gél duzzasztásával és mosásával a gyártó előírásai szerint, majd a kapott C242:II antitest koncentrátumot 1,5 mól/1 gli1
HU 211 512 A9 cin-NaOH és 3 mól/1 NaCl (pH = 8,9) kötőpuffer alkalmazásával megkötjük. A fenti pufferrel végzett kezdeti mosás után az affinitív oszlopot 0,1 mól/1 citromsav-NaOH pufferrel (pH = 5,0) eluáljuk, és a C242:1I monoklonális antitestet 1 mól/1 Trisz-HCl-t (pH = 8,0) tartalmazó csövekbe gyűjtjük. A kapott antitestet 0,02 mól/1 foszfát pufferrel, 0,15 mól/1 nátrium-kloriddal (pH = 7,2) és 0,2 g/1 nátrium-nitrittel szemben dializáljuk. A dializált C242:II antitestet 30.000 móltömegű membrán alkalmazásával ultraszűréssel koncentráljuk. A koncentráció és a minőség ellenőrzése után a C242:II monoklonális antitestet 20 °C hőmérsékleten tároljuk.
2. példa
A C242:ll immunohisztokémiai vizsgálata vastagbél-vékonybél rákon és normál szöveten Sebészeti úton primer vastagbél-vékonybél karcinoma és különböző normál szöveti mintákat veszünk. A szöveteket jégen tartjuk, és a mintavételt követő 1 órán belül folyékony nitrogénnel előhűtött izopentánon fagyasztjuk. A szöveteket a vizsgálatig -70 C hőmérsékleten tároljuk. A fagyasztott biopsziákat 5 pm-cs szakaszokra vágjuk, és a fixálási 50% acetonban 30 másodpercen keresztül +4 °C hőmérsékleten. majd 100 % acetonban 5 percen keresztül +4 =C hőmérsékleten végezzük. A szakaszokat levegőn szárítjuk, és 10 percen keresztül PBS-sel öblítjük. A mintákat ezután 0,3%. PBS-ben felveti hidrogén-peroxiddal inkubáljuk 5 percen keresztül az endogén peroxidáz blokkolása érdekében, majd kétszer PBS-sel átöblítjük. Ezután a mintákat PBS-4 % BSA eleggyel 1:10 arányban hígított normál sertés szérummal kezeljük 5 percen keresztül +4 °C hőmérsékleten az antitest nem-specifikus kötődésének blokkolása érdekében.
Az antitest inkubálását mindig nedves légkörben. 30 percen keresztül, szobahőmérsékleten végezzük. A mintákat először C242:II monoklonális antitesttel (1. példa) inkubáljuk PBS-4% BSA elegyben. majd az inkubálást biotinilezett ló-antiegér IgG-vei (Vectastain, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) folytatjuk 1:400 hígítással 2% sertés-antinyúl immunoglobulinnal kiegészített PBS-4% BSA eleggyel, majd a végső inkubálást Avidin DH/biotinilezett torma-peroxidáz H komplexszel (Dakopatts A/S, Koppenhága, Dánia) végezzük. Az egyes inkubálási lépések után a mintákat 15 percen keresztül PBS-sel öblítjük. A mintát ezután 15 percen keresztül szubsztrátummal kezeljük. PBS-sel öblítjük, haematoxilinnel megfestjük, és glicerin-zselatinba (Merck, Darmstadt. Németország) ágyazzuk. Szubsztrátumként 10 mg 3-amino-9-etil-karbazolt (Sigma. St. Louis. Mo.. USA) használunk, amit 6 ml dimetil-szultöxidban oldunk, és 4 μ] 30% hidrogén-peroxidot tartalmazó 50 ml 0,02 mól/1 nátrium-acetátlal (pH = 5.5) hígítunk. A szubsztrátum oldatát felhasználás előtt szűrjük. A minták vizsgálati eredményét az 1. táblázatban foglaljuk össze.
7. táblázat
Vastagbél-vékonybél tumor és különböző normál szövetek C242:II antitesttel történő megfestése
| Szövetminta | Festett/összes |
| Vastagbél-vékonybél karcinoma | 26/41 |
| Normál vastagbél | 8/16 |
| Emlő | 2/3 |
| Füllőmirigy | 2/2 |
| Bőr | 0/1 (a verejtékmirigyek enyhe elszíneződése) |
| Máj | 0/2 (az epe enyhe elszíneződése) |
| Vese | 0/1 |
| Hasnyálmirigy | 2/2 (vezeték) |
| Gyomor | 0/1 |
| Vékonybél | 0/1 |
Az 1. táblázatban felsorolt eredményekből látható, hogy a vastagbél-vékonybél tumorból származó biopsziák 63 %-a pozitív elszíneződést mutat a C242:II monoklonális antitesttel. A CA-242 antigén kifejeződése normái vastagbél szöveten általánosan gyengébb, mint a tumor szövetben, az elszíneződés teljes egészében az oszlopos epitéliumra és talpas sejtekre lokalizálódik. A vastagbéltől eltérő normál szövetek gyakorlatilag nem mutatnak reakcióképességet, míg pozitív eredményt találtunk a normál mellkasi vezetékben, hasnyálmirigy vezetékben, epevezetékben és verejtékmirigyben, de az elszíneződés intenzitása gyenge.
3. példa
Sejtzárvány képződés COLO 205 humán vastagbél karcinomához kötött C242. II antitestnél A sejtzárvány képződés vizsgálatához egyrétegű kultúrában tenyésztett COLO 205 sejtekből (lásd az 1. példát) egyetlen sejtszuszpenziót készítünk. A sejteket tripszinnel kezeljük, majd a tenyészközeggel alaposan átöblítjük, végül szuszpendáljuk. Jóddal jelölt C242:II antitestet (lásd az 1, példát; 200.000 cpm megfelel 50 ng monoklonális antitestnek) adunk a COLO 205 sejtek egyetlen sejtszuszpenziójához (106 sejt) 5 ml-es csövekben. A végső térfogat 200 μΙ
A sejteket l25I-C242 jelenlétében 1 órán keresztül jégen (0 °C) inkubáljuk. A szuszpenziót ezután centrifugáljuk. és a sejteket mosással megszabadítjuk a meg nem kötött monoklonális antitesttől. Az előinkubált sejteket ezután 37 °C hőmérsékleten 1 órán keresztül 10 perces intervallumokban inkubáljuk, amelynek során a sejteket minden esetben lehűtjük, és pelletáljuk. A tenyészközegbe felszabadult rádió jelölésű anyag menynyiségél a felülúszóban vizsgáljuk (LKB gamma számláló Pharmacia AB. Uppsala, Svédország). A felülúszón emellett TCA kicsapást végzünk, és mérjük a csapadék radioaktivitását. A felülethez kötött 125I6
HU 211 512 A9
C242-t 2,5 mg/ml papaint tartalmazó 0,2 mól/1 glicin HC1 pufferrel (pH = 1,5) végzett savas mosással távolítjuk el, és mérjük a radioaktivitást. A felülethez kötött antitest mennyiségét a 37 °C-on végzett inkubálás során minden esetben úgy számoljuk, hogy a felszabadult és beépült monoklonális antitestet kivonjuk a felülethez kötött ossz monoklonális antitestből. A felszabadult antitest degradálódását a közeg felülúszójából TCA kicsapással kapott csapadékon mérjük.
Az eredményeket az 1. ábrán adjuk meg, ahol a sejtfelületen mért radioaktivitást (Sur), a beépült radioaktivitást (Int), a felszabadult radioaktivitást (Rés) és a degradált felszabadult radioaktivitást (Deg.Re) ábrázoljuk a sejtfelületen mért ossz kezdeti radioaktivitás százalékában. Az 1. ábrából látható, hogy a C242:II antitest több, mint 20%-ban beépül 1 órán belül, ha az előinkubált sejteket 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Csekély savban oldódó radioaktivitás mérhető, ha a közeg felülúszóját TCA kicsapásnak vetjük alá, ami arra utal. hogy a felszabadult aktivitás I órás inkubálás alatt kismértékben fragmcntálódik.
4. példa
A C242:II monoklonális antilesl könnyű és nehéz láncegységének részeit kódoló cDNS molekuláris klónozása
A: ossz RNS előállítása
10' sejtből ossz RNS-t állítunk elő Chomezynksi P. és Sacchi N. által módosított (Anal. Biochem. 162, 156-159 (1987)) Chirgwin J. M. és munkatársai módszerével (Biochemistry 18, 5294-5299 (1979)). Ennek során a sejtpellctet 15 ml hideg denaturáló oldatban (4 mól/1 guanidinium-liocinát, 25 mmól/1 nátrium-citrál, pH = 7, 0.5 % N-lauroil-szarkozin és 0,1 mól/1 2-merkapto-etanoí) oldunk, majd 1,2 ml 2 mól/1 nátrium-acetálot (pH = 4,0) adunk hozzá, és az elegyet fenol/kloroform/izoamil-alkohol 250:49:1 eleggyel extraháljuk. Centrifugálás után az RNS-t a vizes fázisból azonos térfogatnyi izopropanollal kicsapjuk, majd egy éjszakán keresztül -20 C hőmérsékleten inkubáljuk. Centrifugálás után az RSN-t szuszpendáljuk. ismét kicsapjuk, majd a ccntrifugálást és kicsapásl megismételjük. Így 960 pg ossz RNS-t kapunk.
B: az mRNS izolálása
A kapott ossz RNS-ből poliadenilezetl mRNS-Ι izolálunk PolyATract™ mRNS izoláló rendszerrel (Promega Corporation. Madison, Wisconsin, USA) a gyártó előírásai szerint (Promega Technical Bulletin, 090. szám (1990)). Ennek során 960 pg ossz RNS-t oldunk vízzel, és biotinilezett oligo(dT) mintával (50 pmól) kezeljük 0.4 X SSC jelenlétében (1 X SSC= 8,77 g NaCl, 4,41 g nátnum-citrát 1 liter vízben, pH = 7,0). Strcptavidinnel bevont paramágneses gyöngyöket (Slreptavidin Magnesphere™) adunk hozzá, és 10 perces inkubálás után a mágneses részecskéket eltávolítjuk. és 0.1 X SSC-vcl többször mossuk. A poliadenilezett mRNS-t a gyöngyökről vizes inkubálással eluáljuk. amelynek során 5 pg mRNS-t kapunk.
C: cDNSfágtár előállítása E. coliban
A kapott poliadenilezetl mRNS-ből cDNS-t állítunk elő Gubler U. és Hoffman B. J. módszerével (Gene, 25, 263-269 (1983)) Uni-Zap™ vektor (Stratagene Inc. La Jolla, Californta, USA) alkalmazásával, ami lehetővé teszi a kétszálú cDNS egyirányú klónozását. Ennek során 5 pg poliadenilezetl mRNS-t egyszálú cDNS-sé alakítunk Uni-Zap™ linker primer (56 ng/ml) alkalmazásával, amikoris 0,6 mmól/1 dATP-t, dGTP-t, dTTP-t és 5-metil-dCTP-t, valamint 45 egység moloncia egér leukémia vírus reverz transzkriptázt adunk az elegyhez. Az elegyet 1 órán keresztül 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk. A kétszálú cDNS szintézisét 0,15 mmól/1 koncentrációjú dATP-vel, dGTP-vel dl'ÍP-vel és dCTP-vel végezzük 3,2 egység R-náz H enzim és 6,5 egység DNS polimeráz I enzim jelenlétében. Az inkubálást 2,5 órán keresztül 16 °C hőmérsékleten végezzük. Az elegyet fenol/kloroform 1:1 eleggyel extraháljuk, és etanollal kicsapjuk. A cDNS végeit 0,16 mmól/1 dNTP és 10 egység T4 DNS polimeráz jelenlétében 37 °C hőmérsékleten 30 percen keresztül végzett inkubálással tompa végűvé alakítjuk. Fenol/kloroform eleggyel végzett extrahálás és etanolos kicsapás után a kapott tompa végű cDNS-t EcoRI adapterhez ligáljuk három Weiss egység T4 DNS ligáz és 1 mmól/1 ATP jelenlétében egy éjszakán keresztül 8 °C hőmérsékleten végzett inkubálással. A ligálás után az EcoRI tapadó végeket 10 egység T4 polinukleotid kinázzal kezeljük 1 mmól/1 ATP jelenlétében 37 °C hőmérsékleten 30 percen keresztül végzett inkubálással. A kapott cDNS-t, amely foszforilezett EcoRI tapadó végekkel rendelkezik, 90 egység Xhol enzimmel emésztjük, és így az Uni-Zap™ linker primer által kódolt szekvenciától egy Xhol tapadó véget alakítunk ki. A kapott cDNS-t ezután 1 pg Uni-Zap™ XR EcoRI-gyel és Xhol-gyel kialakított karjaihoz ligáljuk kettő Weiss egység T4 DNS ligáz és 1 mmól/1 ATP jelenlétében egy éjszakán keresztül 12 °C hőmérsékleten végzett inkubálással. A ligáló elegyet in vitro fág részecskékbe csomagoljuk Gigapack II Gold csomagoló extraktum alkalmazásával a gyártó előírásai szerint, és a kapott tagokkal E. coli PLK-F' sejteket fertőzünk. A kapott 8,5xl04 független klónból álló cDNS tárat 7,5xl08 pfu/ml fág titerre egészítjük ki. A kapott cDNS tárat E. coli XLl-Blue törzzsel (Bullock W. Biotechniques 5, 4 (1978)) vizsgáljuk.
D: hibridizációs minták előállítása A C242JI antitest IgGl nehéz láncegységét és kappa láncegységét kódoló cDNS kiónok kimutatásához a nehéz láncegység C Hl első állandó területét és a kappa láncegység CK állandó területét lefedő hibridizációs mintákat állítunk elő egér genomiális DNS-bő! polimeráz láncreakcióval (Saiki R. H. és munkatársai: Science, 239, 487-491 (1988)). Ennek során az egér genomiális DNS-hez a fenti immunoglobulin területeket kódoló exonok 5’ és 3’ szakaszaival hibridizáló oligonukleotid primerpárokat használjuk. Agaróz gélelektroforézissel végzett tisztítás után a kapott DNS próbafragmenseket 32P-vel jelöljük véletlenszerű primer kiterjesztéses módszerrel (Feinbcrg A. P. és Vogelstein B.: Biochem. 132, 6, (1983)).
HU 211 512 A9
E: IgGl nehéz és kappa láncegységeket kódoló szekvenciák azonosítása és plazmidba történő' beépítése
A cDNS tárat két külön körben immunoglobulin IgGl és kappa minták segítségével vizsgáljuk (Sambrook J. és munkatársai: Molecular Cloning, 2. kiadás, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)). A két külön hibridizációs vizsgálat pozitívan hibridizáló fág kiónjait tovább tisztítjuk, amelynek során a kezdeti vizsgálathoz használt próbákat alkalmazzuk. A pozitívan hibridizáló fág kiónokat E. coli XLI-Blue tenyészetben elszaporítjuk, és a kapott fág törzset használjuk a pBluescript SK(-) plazmidokat tartalmazó cDNS-nek fágmid kivágással és szaporítással történő előállításához (Short J. M. és munkatársai: Nucleic Acids Rés. 16, 7583-7600(1988)).
F: A hibridizációs telepek plazmid cDNS-ének jellemzése
A kapott, és a cDNS-t tartalmazó plazmidokat restrikciós enzimes térképezéssel jellemezzük, és a kívánt méretű inszerteket tartalmazó plazmidokat didezoxi DNS szekvenálásnak vetjük alá (Sanger F. és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 54635467 (1977)). Az lg kappa próbával hibridizáló plazmid. jele pKGE761. olyan cDNS inszertet tartalmaz, amelynek szekvenciája a korábban ismert egér kappa könnyű láncegység szekvenciával (Kábát E. A. és munkatársai: Sequences of Protein of Immunological Interest. 4. kiadás, U. S. Department of Health and Humán Services, National Institutes of Health (1987)) közeli homológiát mutató nyílt leolvasó keretet kódol. A kappa könnyű láncegység VK változó területét kódoló részleges cDNS szekvenciát és ennek lefordított fehérje szekvenciáját a 3. ábra mutatja. A három CDR szekvenciát (CDR1-CDR3) aláhúzással jelöljük. A VK szegmens aminoterminális végét megelőző szignál peptidet S jelöli. A VK szekvencia karboxiterminális végét követő állandó területet CK jelöli.
Az IgGl próbával hibridizáló plazmid. jele pKGE762. olyan cDNS inszertet tartalmaz, amelynek szekvenciája a korábban ismert egér IgGl nehéz láncegységének szekvenciájával (Kábái E.A. és munkatársai idézett műve) közeli homológiát mutató nyílt leolvasókeretet kódol. Az IgGl nehéz láncegységének VH változó területét kódoló részleges cDNS szekvenciát és ennek lefordított fehérje szekvenciáját a 4. ábra mutatja. A három CDR szekvenciát (CDR1-CDR3) aláhúzással jelöljük. A VH szegmens aminoterminális végét megelőző szignálpeptidet S jelöli. A VH szegmens karboxiterminális végét követő állandó területet CH1 jelöli.
Claims (13)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Az ECACC 90012601 számon deponált C242:I1 hibridóma sejtvonal által termelt antitest, vagy lényegében azonos antigénkötő képességgel (epitop specifikussággal) rendelkező más antitest.
- 2. Az 1. igénypont szerinti monoklonális antitest in vivő diagnosztikai célra.
- 3. Az 1. igénypont szerinti monoklonális antitest terápiás célra.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti antitest fragmentált formája.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti antitest, azzal jellemezve, hogy specifikusan ugyanahhoz az epitophoz kötődik, mint az az anütest, amely a komplementaritást meghatározó szakaszaiban az alábbi aminosav szekvenciákkal rendelkezik:Kappa lánc:CDR 1: ArgSerSerLysSerLeuLeuHisSerAsnG1 y AsnThrTy rLeuTy r CDR2: ArgMetSerAsnLeuValSer CDR3: LeuGlnHisLeuGluTyrProPheThrNehéz lánc:CDR1: TyrTyrGlyMetAsnCDR2: TrplleAspThrThrThrGlyGluProThrTyrAl sGluAspPheLysGlyCDR3: ArgGlyProTyrAsnTrpTyrPheAspVal.
- 6. In vitro diagnosztikai eljárás, azzal jellemezve, hogy a mintát 1-5. igénypontok bármelyike szerinti monoklonális antitesttel érintkeztetjük a saját antigénjéhez kötött monoklonális antitestből álló komplex kialakulását biztosító körülmények között, majd a kapott komplexet meghatározzuk, ahol a komplex mennyisége a mintában lévő antigén mennyiségével van összefüggésben
- 7. Gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy Ιό. igénypontok bármelyike szerinti monoklonális antitestet tartalmaz
- 8. A 7. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy a monoklonális antitest vizes oldatát tartalmazza.
- 9. Sejtvonal, azzal jellemezve, hogy 1-5. igénypontok bármelyike szerinti antitestet vagy ennek antigénkötő fragmensét termeli.
- 10. A 9. igénypont szerinti sejtvonal, amely ECACC 90012601 számon deponált C242:II hibridóma sejtvonal vagy ennek mesterséges vagy spontán változata.
- 11. Monoklonális antitest, azzal jellemezve, hogy specifikusan ugyanahhoz az epitophoz kötődik, mint az az antitest, amely a komplementaritást meghatározó szakaszaiban az alábbi szekvenciákkal rendelkezik:Kappa lánc:CDR1: ArgSerSerLysSerLeuLeuHisSerAsnGlyAsnThrTyrLeuTyrCDR2: ArgMetSerAsnLeuValSerCDR3:LeuGlnHisLeuGluTyrProPheThrNehéz lánc:CDR]: TyrTyrGlyMetAsnCDR2: TrpIleAspThrThrThrGlyGluProThrTyrAlsGluAspPheLysGIyCDR3:ArgGlyProTyrAsnTrpTyrPheAspVal
- 12. Az 1-5. és II igénypontok bármelyike szerinti antitest, lényegében a példák valamelyikében leírt állapotban
- 13. A 6. igénypont szerinti eljárás, lényegében a példák valamelyikében leírt állapotban.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9102074A SE9102074D0 (sv) | 1991-07-03 | 1991-07-03 | Tomour antigen specific antibody |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU211512A9 true HU211512A9 (en) | 1995-11-28 |
Family
ID=20383243
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9400011A HU218084B (hu) | 1991-07-03 | 1992-07-03 | Daganatokra specifikus monoklonális antitest és sejtvonal, valamint ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények |
| HU95P/P00289P HU211512A9 (en) | 1991-07-03 | 1995-06-20 | Tumor antigen specific antibody and cell line, and pharmaceutical composition comprising them |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9400011A HU218084B (hu) | 1991-07-03 | 1992-07-03 | Daganatokra specifikus monoklonális antitest és sejtvonal, valamint ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5552293A (hu) |
| EP (1) | EP0521842B1 (hu) |
| JP (1) | JP3194020B2 (hu) |
| KR (1) | KR100246681B1 (hu) |
| AT (1) | ATE171193T1 (hu) |
| AU (2) | AU658198B2 (hu) |
| CA (1) | CA2073124C (hu) |
| DE (1) | DE69226990T2 (hu) |
| DK (1) | DK0521842T3 (hu) |
| EE (1) | EE03031B1 (hu) |
| ES (1) | ES2124250T3 (hu) |
| FI (1) | FI109207B (hu) |
| HU (2) | HU218084B (hu) |
| IE (1) | IE80841B1 (hu) |
| IL (1) | IL102390A (hu) |
| NO (1) | NO315472B1 (hu) |
| NZ (1) | NZ243435A (hu) |
| SE (1) | SE9102074D0 (hu) |
| WO (2) | WO1993001302A1 (hu) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE9402430L (sv) | 1994-07-11 | 1996-01-12 | Pharmacia Ab | Konjugat mellan modifierat superantigen och en målsökande förening samt användning av konjugaten |
| SE9601245D0 (sv) | 1996-03-29 | 1996-03-29 | Pharmacia Ab | Chimeric superantigens and their use |
| TW517061B (en) | 1996-03-29 | 2003-01-11 | Pharmacia & Amp Upjohn Ab | Modified/chimeric superantigens and their use |
| CA2385528C (en) | 1999-10-01 | 2013-12-10 | Immunogen, Inc. | Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents |
| ES2619313T3 (es) * | 2001-03-15 | 2017-06-26 | Precision Biologics, Inc. | Terapia de anticuerpos monoclonales para el cáncer de páncreas |
| DE10116552A1 (de) * | 2001-04-03 | 2002-10-10 | Abc Armbruster Biochemicals | Verfahren zur Bestimmung der wirksamen Parathormon-Aktivität in einer Probe |
| US20060246060A1 (en) * | 2002-07-02 | 2006-11-02 | Nesta Douglas P | Novel stable formulation |
| US7390898B2 (en) | 2002-08-02 | 2008-06-24 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use |
| US8088387B2 (en) | 2003-10-10 | 2012-01-03 | Immunogen Inc. | Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates |
| CA2525130C (en) | 2003-05-20 | 2014-04-15 | Immunogen, Inc. | Improved cytotoxic agents comprising new maytansinoids |
| AU2006213662B2 (en) | 2005-02-11 | 2010-08-05 | Immunogen, Inc. | Process for preparing stable drug conjugates |
| US20110166319A1 (en) * | 2005-02-11 | 2011-07-07 | Immunogen, Inc. | Process for preparing purified drug conjugates |
| AU2012244244B2 (en) * | 2005-08-11 | 2015-08-27 | Arpi Matossian-Rogers | TCR-V-beta related peptides for treatment and diagnosis of autoimmune disease |
| BRPI0614366A2 (pt) * | 2005-08-11 | 2009-10-06 | Arpi Matossian Rogers | peptìdeo, anticorpo ou fragmento de anticorpo, anticorpo ou ligante funcionalmente equivalente, molécula de ácido nucleico, vetor, célula hospedeira, métodos para expressar um peptìdeo, um anticorpo ou fragmento de anticorpo, um anticorpo ou ligante equivalente e para tratar uma doença em um paciente, composição farmacêutica, composição de vacina, métodos de vacinação de um indivìduo contra uma doença ou um distúrbio e de diagnose de um indivìduo para a presença de anticorpos autoimunes, e, arranjo de peptìdeos |
| AU2006283726C1 (en) | 2005-08-24 | 2015-05-07 | Immunogen, Inc. | Process for preparing maytansinoid antibody conjugates |
| ES2570731T3 (es) | 2008-08-05 | 2016-05-20 | Toray Industries | Método de detección de cáncer |
| ES2726945T3 (es) | 2009-06-03 | 2019-10-10 | Immunogen Inc | Métodos de conjugación |
| WO2012135517A2 (en) | 2011-03-29 | 2012-10-04 | Immunogen, Inc. | Preparation of maytansinoid antibody conjugates by a one-step process |
| ME03353B (me) | 2011-03-29 | 2019-10-20 | Immunogen Inc | Priprema konjugata antitela i majtanzinoida jednostepenim postupkom |
| NZ707091A (en) | 2012-10-04 | 2018-12-21 | Immunogen Inc | Use of a pvdf membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates |
| WO2015076425A1 (ja) * | 2013-11-25 | 2015-05-28 | リンク・ジェノミクス株式会社 | 新規モノクローナル抗体 |
| MA40934A (fr) | 2014-11-19 | 2017-09-27 | Immunogen Inc | Procédé de préparation de conjugués agent de liaison cellulaire-agent cytotoxique |
| AU2017206656B2 (en) | 2016-01-10 | 2024-02-01 | Neotx Therapeutics Ltd. | Immunopotentiator enhanced superantigen mediated cancer immunotherapy |
| CN108601848A (zh) | 2016-02-05 | 2018-09-28 | 伊缪诺金公司 | 用于制备细胞结合剂-细胞毒性剂缀合物的有效方法 |
| CN107167590B (zh) * | 2017-04-14 | 2019-03-08 | 江苏福隆生物技术有限公司 | 糖类抗原242的板式化学发光法检测试剂盒及制备方法 |
| WO2019035034A1 (en) * | 2017-08-16 | 2019-02-21 | The Broad Institute, Inc. | NEURONAL DOSAGE METHOD INVOLVING CALCINEURIN |
| WO2020230142A1 (en) | 2019-05-15 | 2020-11-19 | Neotx Therapeutics Ltd. | Cancer treatment |
| AU2021357520A1 (en) | 2020-03-05 | 2022-09-29 | Neotx Therapeutics Ltd. | Methods and compositions for treating cancer with immune cells |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4752569A (en) * | 1984-06-21 | 1988-06-21 | The Regents Of The University Of California | Sialylated Lewisx epitope, antibodies and diagnosis |
| US4904596A (en) * | 1985-08-07 | 1990-02-27 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Hybridoma antibody (FH6) defining a human cancer-associated difucoganglioside |
| SE8902043L (sv) * | 1988-11-10 | 1990-05-11 | Pharmacia Ab | Foerfarande foer karakterisering av makromolekyler |
| WO1992001474A1 (en) * | 1990-07-20 | 1992-02-06 | Kabi Pharmacia Ab | Heterobifunctional reagents and conjugates with oxaalkylene units for amphiphilic bridge structures |
| EP0610179B1 (en) * | 1990-07-20 | 1996-10-16 | Pharmacia AB (reg.number 556131-9608) | Target specific antibody-superantigen conjugates and their preparation |
-
1991
- 1991-07-03 SE SE9102074A patent/SE9102074D0/xx unknown
-
1992
- 1992-07-02 IL IL10239092A patent/IL102390A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-07-02 WO PCT/SE1992/000495 patent/WO1993001302A1/en active Search and Examination
- 1992-07-03 AT AT92850166T patent/ATE171193T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-07-03 CA CA002073124A patent/CA2073124C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-03 WO PCT/SE1992/000502 patent/WO1993001303A1/en active IP Right Grant
- 1992-07-03 HU HU9400011A patent/HU218084B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-07-03 AU AU19425/92A patent/AU658198B2/en not_active Ceased
- 1992-07-03 ES ES92850166T patent/ES2124250T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-03 JP JP17584892A patent/JP3194020B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-03 AU AU22920/92A patent/AU2292092A/en not_active Abandoned
- 1992-07-03 NZ NZ243435A patent/NZ243435A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-07-03 EP EP92850166A patent/EP0521842B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-03 DK DK92850166T patent/DK0521842T3/da active
- 1992-07-03 DE DE69226990T patent/DE69226990T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-03 KR KR1019930704117A patent/KR100246681B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-07-03 IE IE922188A patent/IE80841B1/en not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-12-22 NO NO19934777A patent/NO315472B1/no unknown
- 1993-12-31 FI FI935970A patent/FI109207B/fi not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-11-16 EE EE9400328A patent/EE03031B1/xx not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-05-08 US US08/438,123 patent/US5552293A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-20 HU HU95P/P00289P patent/HU211512A9/hu unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HUT71193A (en) | 1995-11-28 |
| AU658198B2 (en) | 1995-04-06 |
| IE922188A1 (en) | 1993-01-13 |
| CA2073124C (en) | 2007-06-19 |
| ATE171193T1 (de) | 1998-10-15 |
| IL102390A0 (en) | 1993-01-14 |
| NO934777L (no) | 1994-02-11 |
| JP3194020B2 (ja) | 2001-07-30 |
| NZ243435A (en) | 1994-10-26 |
| FI935970A (fi) | 1993-12-31 |
| HU218084B (hu) | 2000-05-28 |
| IL102390A (en) | 1996-01-19 |
| HU9400011D0 (en) | 1994-05-30 |
| WO1993001302A1 (en) | 1993-01-21 |
| NO934777D0 (no) | 1993-12-22 |
| US5552293A (en) | 1996-09-03 |
| ES2124250T3 (es) | 1999-02-01 |
| DK0521842T3 (da) | 1999-06-14 |
| AU2292092A (en) | 1993-02-11 |
| NO315472B1 (no) | 2003-09-08 |
| EP0521842A2 (en) | 1993-01-07 |
| FI109207B (fi) | 2002-06-14 |
| KR100246681B1 (ko) | 2000-04-01 |
| EE03031B1 (et) | 1997-08-15 |
| WO1993001303A1 (en) | 1993-01-21 |
| JPH05276987A (ja) | 1993-10-26 |
| DE69226990D1 (de) | 1998-10-22 |
| AU1942592A (en) | 1993-01-07 |
| FI935970A0 (fi) | 1993-12-31 |
| EP0521842A3 (hu) | 1994-01-26 |
| EP0521842B1 (en) | 1998-09-16 |
| DE69226990T2 (de) | 1999-03-25 |
| IE80841B1 (en) | 1999-03-24 |
| SE9102074D0 (sv) | 1991-07-03 |
| CA2073124A1 (en) | 1993-01-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU211512A9 (en) | Tumor antigen specific antibody and cell line, and pharmaceutical composition comprising them | |
| CA2798778C (en) | Anti-human trop-2 antibody having anti-tumor activity in vivo | |
| CN113544156B (zh) | 抗Claudin18.2抗体及其应用 | |
| AU2012341450B2 (en) | Anti-human TROP-2 antibody having antitumor activity in vivo | |
| JP3492373B2 (ja) | モノクローナル抗体 | |
| US7183384B2 (en) | Monoclonal antibody 7H11 reactive with human cancer | |
| JP2005538682A (ja) | カルボキシックアンヒドラーゼｉｘ（ｃａｉｘ）腫瘍抗原に対する抗体 | |
| JP2001503601A (ja) | 前立腺特異的膜抗原の細胞外ドメインに対して特異的なモノクローナル抗体 | |
| JP2935520B2 (ja) | ガン治療に用いられる新規高親和性改変抗体系統群 | |
| JPH05504330A (ja) | ヒトのがん腫と反応する新しい抗体 | |
| MX2014013542A (es) | Anticuerpos contra claudina 18.2 utiles en el diagnostico de cancer. | |
| JP2012068254A (ja) | 腫瘍治療のための組成物と方法 | |
| CN113906053B (zh) | 抗cea抗体及其应用 | |
| NL8700415A (nl) | Monoclonale antilichamen en antigeen voor humane niet-kleincellige longcarcinoma en bepaalde andere humane carcinoma's. | |
| JP2007535907A (ja) | 抗ヒドロキシラーゼ抗体およびその使用 | |
| EP3543259A2 (en) | Antibody binding to carbonic anhydrase and use thereof | |
| WO2021213466A1 (zh) | 抗cd73的抗体及其用途 | |
| JP2000504204A (ja) | ヒト癌胎児性抗原に対する特異的結合メンバー；材料および方法 | |
| US20200062856A1 (en) | Humanized Anti-TPBG Antibody, Preparation Method Therefor, Conjugate Thereof, and Applications | |
| WO2004094612A2 (en) | Cancer specific monoclonal antibodies | |
| CN113597432B (zh) | 抗EpCAM抗体及其应用 | |
| JP3483556B2 (ja) | 細胞接着阻害抗体およびこれを利用する細胞接着阻害剤 | |
| JP4493882B2 (ja) | 抗原およびこの抗原を識別するモノクローナル抗体 | |
| CN113527489B (zh) | 抗cd73的抗体及其用途 | |
| JP3045313B2 (ja) | Ｔａｇ−７２に結合できるヒトサブグループｉｖ ｌ鎖の複合抗体 |