HU209247B

HU209247B - Process for producing nasally administrable pharmaceutical dosage form

Info

Publication number: HU209247B
Application number: HU88642A
Authority: HU
Inventors: Philip Edgar Hansen; Anders Robert Sorensen
Original assignee: Novo Nordisk As
Priority date: 1986-12-16
Filing date: 1987-12-15
Publication date: 1994-04-28
Also published as: ES2044957T3; CS273139B1; HUT57592A; EP0272097A3; CN87108340A; EP0272097B1; NO175566C; NO175566B; KR890700036A; DE3780925T2; IE61110B1; YU228487A; FI883783A0; IE873408L; JPH0768149B2; JPH01501550A; EP0272097A2; FI94024C; NZ222907A; PT86370A

Description

A találmány tárgya eljárás új intranazálisan adagolható gyógyszerészeti formált alak előállítására.

Bár a nem behatoló orális vagy rektális adagolási út a beteg szempontjából kétségtelenül előnyös, mégis a parenterális adagolási módot tekintik általában a leghatásosabbnak. Különösen olyan hatóanyagok esetében amelyek az emésztőrendszerben inaktiválódnak vagy csak kismértékben abszorbeálódnak, vagy olyan hatóanyagok esetében, amelyek kiterjedt elsődleges máj metabolizmust szenvednek orális adagolás után, a parenterális adagolás a megszokott.

A parenterális hatóanyag adagolásnak nyilvánvaló hátrányai vannak, mint például a steril adagolási eszközök szükségessége, fájdalomérzet és a fenntartó injekciók irritációs hatása, valamint a fertőzés veszélyének fennállása. Ennélfogva a parenterális adagolással azonos hatású adagolási módok, amelyek legalábbis az első áthaladási metabolizmust kiküszöbölik, szükségesnek bizonyultak. Egy ilyen ígéretes hatóanyag adagolási mód a nazális adagolás. Azonban mint minden nem behatolásos gyógyszerhatóanyag adagolási mód esetében is, az intranazális adagolás után is a hatóanyag felhasználhatósági mértéke nagyban megjósolhatatlan és egyebek között például a hatóanyag kémiai természetének függvénye.

Például ismert, hogy a progeszteron és a propranolol felszívódása az orrüregből ugyanolyan magas vérkoncentrációt eredményez, mint az intravénás adagolás során tapasztalt felszívódás. Más intranazális hatóanyag formált alakok is ismertek, amelyekben a hatóanyag molekulatömege körülbelül 1 kD, ilyen például az ergopeptid alkaloidokból vizes etanolból készült szuszpenzió, amelyet aeroszolként adagolnak (636 011 számú svájci szabadalmi leírás), a zsírsavakkal képzett gyógyszerészetileg aktív aminsók (988 852 számú kanadai szabadalmi leírás), és a zsírsavban (vagy észterében) szuszpendált katecholamin, amelyet polioxi-etilénnel emulgeálnak (0160501 A számú európai közzétételi szabadalmi leírás).

Az elmúlt évtizedekben számos (főként szintetikus) polipeptid hatóanyagot dolgoztak ki. A polipeptideket általában parenterális úton adagolják, mivel a tápanyag emésztőcsatornában nem stabilak és nem képesek megfelelően felszívódni. Ez az egyik oka annak, hogy az utóbbi években intenzív kutatás folyt a polipeptidek nazális úton történő adagolásával kapcsolatban. Azt találták, hogy néhány kisebb molekulatömegű polipeptid (amelyek körülbelül legfeljebb 10 aminosavat tartalmaznak), intranazálisan adagolva egyszerű vizes formált alakokból jól felszívódik. A magasabb molekulasúlyú polipeptidek nazális biológiai felszívódása nem teljes és változó; és a molekulatömeg növekedésével ez a jelleg egyre növekszik [lásd: L. Illum: Archív fór Pharmaci og Chemi 94, (1987), 127-135].

Mivel a nagyobb molakulasúlyú polipeptidek nazális adagolású formált alakjának fenti hátrányai fennálltak, különféle biokompatíbilis adalékanyagokat dolgoztak ki, amelyek az abszorpciót segítik.

A 0111841 számú európai szabadalmi bejelentés ilyen abszorpciót segítő adalékanyagként epesavat ír le és a 4476116 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás ilyen segédanyagként kelátképző szereket például EDTA-t ismertet.

Az inzulin nazális adagolású formált alakja igen előnyös lenne a diabetesben szenvedő beteg számára a jelenleg alkalmazott parenterális adagolási formált alak helyett, mivel az inzulin az orrüregben megfelelő mértékben és konstans mennyiségben felszívódik. Ilyen formált alakok előállításában számos abszorpciót segítő adalékanyagot, főként felületaktív anyagot vizsgáltak már.

Az 1527605 számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban ionos és nemionos felületaktív anyagokat, például epesavat és sóit és magasabb szénatomszámú polioxi-etilén alkohol étereket írtak le abszorpciót elősegítő anyagként, míg R. Salzman és munkatársai, New England J. of Med. 312, (1985), 1078-1084 közleményében egy adott ilyen magasabb szénatomszámú polioxi-etilén alkohol étert, a polioxi-etilén-9-laurilétert írták le. A 4548 922 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban más abszorpciót segítő anyagokat, például a tauro-dihidro-fuzarinsav sóit ismertették.

Az eddig ismert, abszorpciót elősegítő adalékanyagok kémiai szerkezete lényegesen eltér a sejtmembránokban található ilyen anyagok szerkezetétől, az orrüregben található ilyen anyagokat is beleértve. Bizonyára ez is magyarázza ezeknek az alkalmazott adalékanyagoknak orrot irritáló hatását, amely az ormyálkahártya maradó károsodását is okozhatja, különösen, amennyiben a hatóanyagot hosszú ideig adagolják. Ennek figyelembevételével más, a fiziológiailag létező anyagokkal közelebbi szerkezeti rokonságban álló abszorpciót segítő felületaktív anyagok, például foszfolipidek alkalmazása is felmerült. Azonban az 1527 602 számú nagy-britanniai szabadalmi leírásban közöltek szerint a szokásosan alkalmazott hosszúszénláncú lecitin elegybe kevert foszfolipidek nem rendelkeznek mérhető abszorpciót elősegítő hatással nazális formált alakok esetében.

Meglepően viszont úgy találtuk, hogy a közepes lánchosszúságú foszfatidil-kolinok és foszfatidil-etanol-aminok jelentősen elősegítik a polipeptidek nazális abszorpcióját anélkül, hogy az on nyálkahártyáját irritálnák vagy károsítanák. A nazális abszorpció tovább javítható olyan formált alak előállításával, amelyben a foszfolipiddel zsírolaj, például növényi olaj van elegyítve.

A fentiek alapján a találmány tárgya eljárás intranazális adagolású formált alak előállítására, melynek során biológiailag aktív polipeptid hatóanyagot és egy abszorpciót segítő rendszert, amely legalább egy (I) általános képletű foszfolipidet tartalmaz, elegyítünk, ahol az általános képletben

R’ és R” jelentése azonos vagy eltérő és lehet hidrogénatom, alkilcsoport, alkenil-csoport, alkil-karbonil-csoport, alkenil-karbonil-csoport és alkadienilkarbonil-csoport, alkatrienil-karbonil-csoport vagy alkatetraenil-karbonil-csoport, amely csoportok maximum 14 szénatomot tartalmaznak, azzal a fel2

HU 209 247 Β tétellel, hogy R’ és R” mindegyikének jelentése nem lehet hidrogénatom, és

R’” jelentése hidrofil-csoport, amely lehet 2-(trimetilammónio)-etil-csoport, 2-amino-etil-csoport, vagy 2,3-dihidroxi-propil-csoport, amely így magában foglalja a kolin (lecitinek), az etanolamin, a glicerin, a szerin és az inozitolok foszfatidil-származékait. Kívánt esetben, és előnyösen, az abszorpciót segítő rendszer zsírolajat is tartalmaz a foszfolipiddel(ekkel) keverve.

A találmány tárgya előnyösen eljárás intranazális adagolásra alkalmas formált alak előállítására, melynek során legalább egy (I) általános képletű foszfolipidet és kívánt esetben, de előnyösen zsírolajat folyékony vagy szilárd hígítóanyagban elegyítünk a gyógyszerészetileg aktív hatóanyag oldatával vagy por formájával, amely hígítóanyag kívánt esetben puffért, tartósító és ozmózisnyomást szabályozó segédanyagokat is tartalmazhat.

A találmány szerinti eljárásban alkalmazott előnyös (I) általános képletű vegyületek, amelyekben

R’ és R” mindegyikének jelentése alkil-karbonilcsoport. További előnyös (I) általános képletű vegyületek amelyekben R” jelentése 2-(trimetil-ammónio)etil-csoport, amely vegyületek lecitinként ismertek. További előnyös (I) általános képletű vegyületek, amelyekben R’ és R” mindegyikének jelentése alkil-karbonil-csoport vagy alkilcsoport, amely csoportok minimálisan 4 és maximálisan 12 szénatomot tartalmaznak. A legelőnyösebb (I) általános képletű vegyületek, amelyekben R’ és R” jelentése nonil-karbonil-csoport.

A találmány szerinti eljárás előnyös foganatosítási módja szerint olyan formált alakot hozunk létre, amelyben két (I) általános képletű vegyület található, amelyek súlyaránya 1:10-10:1, előnyösen 1:2-2:1. A fenti két foszfolipid közül az egyik célszerűen olyan (I) általános képletű vegyület, ahol az általános képletben R’ és R” jelentése egyaránt oktanoil-csoport, dekanoil-csoport vagy lauroil-csoport. A másik alkalmazott foszfolipid célszerűen olyan (I) általános képletű vegyület, ahol az általános képletben R’ és R” egyikének jelentése hidrogénatom, és a másik jelentése oktanoilcsoport, dekanoil-csoport vagy lauroil-csoport (dodekanoil-csoport).

A találmány szerinti eljárásban alkalmazott előnyös (I) általános képletű vegyületek például: a dioktanoil-L-a-foszfatidil-kolin, a dioktil-O-L-a-foszfatidil-kolin, adidekanoil-L-a-foszfatidil-kolin, a didecil-O-L-a-foszfatidil-kolin, a decil-O-L-a-foszfatidil-kolin, a dilauroil-L-a-foszfatidil-kolin, a lauroil-L-a-foszfatidil-kolin.

Számos (I) általános képletű vegyület előállítását írták le közleményeikben E. C. Robles és D. Van Den Berg: Biochim. Biophys. Acta 187, (1969), 520-526, és Η. K. Mangold és F. Paltauf(ed.): Ether Lipids, Chapter 3, Acad, Press. Más (I) általános képletű vegyületek analóg eljárásokkal állíthatók elő.

Kívánt esetben az abszorpciót elősegítő rendszer zsírolajat tartalmaz, amely előnyösen növényi olaj, különösen előnyösen szójaolaj, földimogyoró olaj, kókuszolaj, kukoricaolaj, olívaolaj, napraforgóolaj vagy ezek keveréke.

A találmány szerinti eljárással előnyösen előállított formált alakban polipeptid inzulin és inzulin származék, például kémiai vagy enzimológiai módszerrel vagy rekombináns DNS technológiával módosított inzulin, vagy ilyen inzulinok keveréke, proinzulin és glukagon. Más előnyös polipeptidek: a paratireoid hormon, a paratireoid hormon antagonisták, a kalcitonin, a vazopresszin, a nénin, a prolaktin, a növekedési hormon, a tiroid stimuláló hormon, a kortikotropin, a kortikotropin-kibocsátási faktor, a tüszőmirigy stimuláló hormon, a luteinizáló hormon, a magzati gonadotropin, a szívpitvari peptidek, az interferon, a szövet plazminogén aktivátor, a gamma-globulinok, a VII Faktor, a VIII Faktor, a növekedési hormont felszabadító hormon, a luteinizáló hormont felszabadító hormon, a szomatosztatin és a kolecisztokininek.

A találmány szerinti eljárással előállított formált alak lehet folyadék, például spray vagy szilárd formált alak, például szippantásra alkalmas por forma. A folyadék alakú formált alakok, például a víz alapú formált alakok általában egyéb adalékanyagokat is tartalmaznak, amelyek például pH-puffer anyagok, előnyösen foszfátpuffer, citrátpuffer vagy acetátpuffer anyagok, tartósítószerek és ozmózisnyomást fenntartó anyagok, például glicerin vagy nátriumklorid lehetnek. A por alakú formált alakok a hatóanyagot és az abszorpciót elősegítő anyagot tartalmazó nazálisán elfogadható porszerű hígítóanyaggal, vagy ezek keverékével elegyítve, amely lehet például cellulóz vagy származékai, például cellulóz-éter vagy nátrium-karboximetil-cellulóz, keményítő, hosszúszénláncú zsírsav vagy sója, például alumínium-sztearát, szerves polimer, például akrilsavszármazék vagy szervetlen hordozóanyag, például talkum vagy kovaföld. Vízmegkötő polimerek, például polietilén-glikol vagy polivinil-pirrolidon adagolása ugyancsak kívánatos lehet a porszerű formált alakok nyálkahártyához tapadásának elősegítésére.

Előnyösen folyékony formált alakok, amelyekben a hígítóanyag víz. Az ilyen formált alakot előnyösen az abszorpciót elősegítő rendszer gyógyszerészeti hatóanyag és adalékanyagok vizes elegyébe való bekeverésével állíthatjuk elő, ahol az elegyítést bármely szuszpenzió vagy emulzió előállításra alkalmas eljárással, például ultrahangos kezeléssel végezzük el. A vizes fázis semleges pH értékre, azaz körülbelül 6,5-8 pH értékre való beállítása bármely előállítási lépésben történhet. Előnyösen mikroemulziót állítunk elő, amelyben a diszpergált részecskék vagy cseppek nagysága 10 nm, és így ezek átjutása a nyálkahártyán könnyű. Az így kapott mikroemulziók ultraszűréssel sterilizálhatók. Az előnyös formált alakban az (I) általános képletű foszfolipid és zsírolaj tartalom körülbelül 0,01-10%, előnyösen 0,5-5% (t/tf), illetve 0,01-50% előnyösen 0,1-10% (t/tf). Mivel a proteázok és peptidázok az orr nyálkahártyában megtalálhatók [lásd: R.

HU 209 247 Β

E. Stratford és V. H. L. Lee: Int. Joum. Pharmaceutics 30, (1986), 73-82 közleményét], kívánatos lehet biokompatíbilis proteáz és peptidáz inhibitorok elegyítése a polipeptid tartalmú formált alakba.

A gyógyszerészeti formált alakban, amelyet a találmány szerinti eljárással állítunk elő, a hatóanyag mennyisége természetesen függ az adott hatóanyag minőségétől, illetve a nazális adagolás során mutatott biológiai felszívódásától, más adagolási utakkal összehasonlítva (amely más adagolási út lehet például parenterális injekció), valamint függ az adagolás kívánt gyakoriságától és a kívánt egységdózis értékétől. Ezek a farmakológiai adatok a szakember által rutinszerűen megállapíthatók állatkísérletek alapján, például indexértékek formájában, mint például a becsült értékek az inzulin adagolásra az alább közölt példákban.

Az inzulint példának véve, a találmány szerinti eljárással előállított formált alak körülbelül 5-1000 nemzetközi egységet (U. I.)/ml tartalmazhat és előnyösen körülbelül 50-5001. U./ml koncentrációjú.

A találmány szerinti eljárással előállított inzulin formált alakok előnyösen marha, sertés vagy emberi inzulint tartalmaznak.

A találmány szerinti eljárás szerint az inzulin formált alakot víz hígítóanyag alkalmazásával állítjuk elő úgy, hogy az inzulint, például kristályos inzulin-cinksót vagy nagy tisztaságú, 1285 023 nagy-britanniai szabadalmi eljárás szerint tisztított inzulint vízben oldunk sav, például sósav jelenlétében. A tartósító anyag, például fenol, alkil-fenol, mint például krezol, vagy metilp-hidroxi-benzoát vizes oldatát állítjuk elő, amely kívánt esetben az oldatot izotóniássá módosító anyagot, például nátriumkloridot vagy glicerint is tartalmaz. Ezen túlmenően a tartósító anyag oldata tartalmazhat puffért, például nátriumfoszfátot, nátriumcitrátot, nátriumacetátot vagy trisz(hidroxi-metil)-amino-metánt valamint egy proteáz inhibitor anyagot. A kapott tartósítóanyag oldatot elegyítjük a savas inzulin oldattal, majd bázist, például nátriumhidroxid oldatot adunk hozzá és pH értékét semleges értékre állítjuk be. Az (I) általános képletű foszfolipidet, kívánt esetben zsírolajjal keverve, mint oldatot vagy emulziót az inzulin oldathoz adjuk. Ezt az (I) általános képletű anyagot tartalmazó oldatot vagy emulziót az (I) általános képletű foszfolipid vegyület vízben való oldásával és kívánt esetben a szuszpenzió ultrahangos kezelésével állítjuk elő az inzulin oldathoz való keverés előtt. Más eljárás szerint a foszfolipid oldat vagy emulzió kívánt esetben puffer anyagot és tartósítóanyagot tartalmazhat. Az elegyítés után az inzulin formált alak pH-értékét újból semlegesre állíthatjuk be. Végül a kapott inzulin oldatot a számított térfogatra egészítjük ki víz hozzáadásával.

A találmány szerinti eljárással előállított formált alak bármely nazális alkalmazásra használt adagolóeszköz segítségével alkalmazható. Az adagolóeszközt úgy kell készíteni, hogy a maximális mérési pontosságot biztosítása, és elemei, például tartály, szelep és működtető egység a nazális adagolásnak megfeleljenek. Ez lehet mechanikus szivattyún alapuló eszköz, például mérőfejjel ellátott porlasztó vagy nyomás alatti aeroszol rendszer. Az aeroszol rendszerben propelláns alkalmazása szükséges, amely a formáltalak szempontjából inért anyag. Alkalmas propelláns anyagok például a fluorozott szénhidrogének, szénhidrogének, a nitrogén és dinitrogénoxid vagy ezek keveréke. Célszerű a propelláns anyagok mellőzésével más megoldást választani.

A találmány szerinti eljárást az alábbi példákon részletesen bemutatjuk.

Az 1-12. példákban alkalmazott inzulin kiindulási anyag körülbelül 20-30 pg cinket tartalmaz 1 mg nitrogénre vonatkoztatva.

A szójaolajat és a mogyoróolajat az U. S. P. XXI., illetve N. F. XVI. tisztasági fokú minőségben alkalmazzuk.

1. példa

772 mg humán inzulint oldunk 40 ml 0,02 mólos sósavban és 1,6 g vízmentes glicerint adunk az oldathoz. Ezután annyi desztillált vizet adunk az oldathoz, hogy térfogata 80 ml legyen. Az oldat pH értékét 0,2 mólos nátriumhidroxid oldattal 7,4 értékre állítjuk be. 1,0 g didekanoil-L-a-foszfatidil-kolint 2 ml etanolban (96%-os) oldunk és fecskendővel 10 ml desztillált vízbe injektáljuk. A kapott zavaros oldatot nagy energiájú ultrahangos készülékkel kezeljük 10 percig, majd a kapott kolloid oldatot keverés közben az inzulin oldathoz adjuk. Az elegyhez 100 ml térfogatra kiegészítő mennyiségű desztillált vizet adunk. A formált alakot, ami 200 I. U./ml inzulint tartalmaz, megfelelő nazális adagolásra alkalmas spray-ben eloszlatjuk, és hím NZW nyulak orrüregébe 100 pl preparátumot adagolunk. Hasonló formált alakot, amely nem tartalmaz didekanoil-L-a-foszfatidil-kolint, készítünk és nyulakon ezt is vizsgálatnak vetjük alá. Meghatározott időintervallumokban vérmintát veszünk a külső fül vénából és a glükózkoncentrációt hexokináz eljárással meghatározzuk.

A kapott tesztvizsgálati eredmények:

	A vér glükóztartalma a kezdeti glükóztartalom %-ában
Kezelés után eltelt idő/perc	0	30	60	90	120
Inzulin adalékanyag nélkül	100	100	103	99	100
Inzulin didekanoil-L-afoszfatidil-kolinnal	100	56	65	70	81

2. példa

100 mg didekanoil-L-a-foszfatidil-kolint adunk 100 mg szójaolajhoz, és az oldatot 5 ml 0,01 mólos nátriumfoszfát pufferhez (pH 7,4) adjuk.

Az elegyet ultrahangos kezeléssel emulgeáljuk, majd 2 ml 400 egység/ml koncentrációjú inzulin oldatot adunk az emulzióhoz, és a pH-értéket 7,4 értékre állítjuk be. Ezután 10 ml térfogatra kiegészítő vizet adunk az emulzióhoz.

HU 209 247 Β

A formált alak nyulaknak történő nazális adagolása után 120 percig a vér glükóz koncentrációját mérjük. A glükóz koncentrációnak megfelelő görbe alatti területet a kezdeti érték százalékában adjuk meg, és háromszög módszerrel becsüljük. Az index értéket az alábbi képlettel számoljuk:

Index = 0,053xA/D, ahol

A a görbe alatti terület a vizsgált formált alak esetében,

D a vizsgált formált alak dózisa és a 0,053 faktor kísérletileg kapott állandó a gyorsan ható inzulin formált alak szubkután alkalmazása esetében.

A vizsgált nazális inzulin emulzió 24 indexszel rendelkezik.

Hasonló formált alakot állítunk elő növényi olaj nélkül, és az 12-15% indexszel rendelkezik.

3-12. példa

A 3-6. és 8. valamint 12. formált alakokat az 1. példa szerinti eljárással, a 7. és 9-11. példák szerinti formált alakokat pedig a 2. példa szerinti eljárással állítjuk elő. A táblázatban az alábbi rövidítéseket alkalmazzuk:

Foszfatidil-kolin: PC

Didekanoil-foszfatidil-kolin: DDPC

Dilauril-foszfatidil-kolin: DLPC

A százalékos értékeket súly%-ban adjuk meg. Valamennyi formált alak 801. U./ml inzulint tartalmaz.

Pél- da szám	Foszfolipid	Növényi olaj	Index
3	0,5% lauroil-lysoPC	nincs	10,9%
4	0,5% mirisztoillysoPC	nincs	3,8%
5	0,5% sztearoillysoPC	nincs	0,8%
6	0,5% DDPC + 0,2% lauroil lysoPC	nincs	13,9%
7	0,5% DDPC + 0,2% lauroillysoPC	mogyoróolaj 2%	21,9%
8	0,5% didecyl-O-PC	nincs	21,9%
9	0,5% didecyl-O-PC + 0,5% DDPC	mogyoróolaj 1%	28,7%
10	0,5% DDPC 0,5% DLPC	mogyoróolaj 1%	18,9%
11	0,5% DDPC 0,5% dimirisztoil-PC	mogyoróolaj 1%	14,3%
12	0,5% DDPC	nincs	11%

Az adatok azt mutatják, hogy közepes vagy hosszúszénláncú acilcsoportot vagy alkilcsoportot tartalmazó foszfatidil-kolinok alkalmazása esetében az abszorpció nagyban megnövekszik.

13. példa

100 mg didekanoil-L-a-foszfatidil-kolint oldunk 100 ml szójaolajban, majd az oldatot 5 ml 0,01 mólos nátriumfoszfát pufferhez adjuk (pH 7,4), amely 160 mg glicerint tartalmaz. A keveréket ultrahangos kezeléssel emulzifikáljuk, majd 100 mg glukanont adunk az emulzióhoz és pH értékét 7,4 értékre állítjuk be, majd térfogatát vízzel 10 ml-re egészítjük ki.

A formált alakot nyulaknak nazálisán adagoljuk, majd a vérminták (a külső fül vénából nyert minták) glükóz koncentrációját hexokináz módszerrel mérjük.

Az alábbi vér glükóz tartalmat tapasztaljuk:

A kezelés utáni percek	0	15	30	60	120
Glukanon az abszorpciót segítő anyag nélkül	100	107	113	111	107
Glukanon az abszorpciót segítő anyaggal	100	144	178	188	163

14. példa

4,53 g humán inzulint mozsárban 395,47 mg alfaciklodextrinnel eldörzsölünk, és így 0,3 IU/mg inzulint tartalmazó készítményt nyerünk.

A készítményt nyulakon vizsgáljuk, melyeket a nazális inzulin-készítménnyel kezeltünk, 20 mg/állat mennyiségben. A kezelést követő 0., 15., 30., 60. és 120. percben vérmintákat vettünk, és a vér glükóz-koncentrációját meghatároztuk. A vérkoncentrációkat a kezdeti glükóz-koncentráció %-ában fejeztük ki, és kiszámítottuk háromszög módszenei az átlagos vér-glükóz koncentráció-időgörbe és az f(idő) = 100 görbe közötti területet. A nazális készítmény és egy gyorsan ható inzulin-készítmény standard, szubkután injekciójának hatására kapott hipoglikémiás érték összehasonlításából az alábbi képlet szerint határoztunk meg egy indexet:

index = 0,053xA/D, ahol

A a vizsgálati készítmény görbéje feletti terület,

D a vizsgált készítmény dózisa IU/állat egységben kifejezve, és a

0,053 érték egy empirikusan számított faktor, melyet a gyorsan ható inzulin-készítmény szubkután adagolása esetén állapítottunk meg.

A találmány szerinti készítmény a fentiek szerint

42-es indexszel rendelkezett.

75. példa

2,91 mg humán inzulint mozsárban 717,09 mg, alfa-ciklodextrinnel dörzsölünk el.

A kapott port 80 mg didekanoil-foszfatidil-kolintazonos mennyiségű, 30 tf/tf% vizet tartalmazó etanollal permetezünk be, majd száradni hagyjuk.

A száraz port 0,7 mm lyukméretű szitán engedjük át, majd 0,2 mm lyukméretű szitán áttörve kapjuk a 0,1 IU/mg inzulin-koncentrációjú készítményt.

A 14. példa szerint nyulakon vizsgálva a fenti készítmény 88-as indexszel rendelkezett.

HU 209 247 Β

16. példa

A 14. példában leírtak szerint járunk el, melynek során 2,3 mg humán inzulinból 537,7 mg alfa-ciklodextrinből és 60 mg didekanoil-foszfatidil-kolin 4 tf/tf% vizet tartalmazó etanolos oldatából kiindulva 0,1 IU/mg inzulin-tartalmú készítményt állítunk elő.

A 14. példa szerint nyulakon vizsgálva a fenti készítmény 95-ös indexszel rendelkezett.

17. példa mg humán glükagont mozsárban 796 mg alfa-ciklodextrinnel dörzsölünk el, és igy 5 mg/g glükagon-tartalmú készítményt nyerünk.

A készitményt nyulakon vizsgáltuk, melynek során 6 nyulat kezeltünk a nazális glükagon-készítménnyel, az adagolás 20 mg/állat dózisban történt kezelést követő 0., 15., 30., 60. és 120. percben vérmintákat vettünk, és meghatároztuk a vér glükóz-koncentrációját. A vérkoncentrációkat a kezdeti glükóz-koncentráció %-ában fejeztük ki, és kiszámítottuk háromszög módszerrel az átlagos vér-glükóz koncentráció-időgörbe és az f(idő) = 100 görbe közötti területet. Ezt a területet az adagolási dózissal elosztva a kezelés hiperglikémiás hatásának értékét kapjuk meg.

A fenti vizsgálatban a készítmény 74876 terület/dózis értéket adott.

18. példa

A 15. példában leírtak szerint járunk el, és 4 mg humán glükagonból, 716 mg alfa-ciklodextrinből és 80 mg didekanoil-foszfatidil-kolin 4 tf/tf% vizet tartalmazó etanollal készített oldatából 5 mg/g glükagon koncentrációjú készítményt állítunk elő. A 17. példa szerinti vizsgálatban a készítmény 107 683 terület/dózis értéket adott.

19-20. példa

A jelen példa szerinti készítményeket az 1. példában leírtakhoz hasonlóan állítjuk elő. Az indexet a 2. példa szerint számítottuk ki.

Példa száma	Foszfolipid	Növényi olaj	Index
19.	1% dimirisztoil-foszfatidíl-glicerol	nincs	13,7%
20.	1% dilauroil-foszfatidil-etanol-amin	nincs	18,4%

21. példa

664 mg alfa-ciklodextrint 5,5 ml vízben oldunk, és az oldathoz 35,8 mg bioszintetikus humán növekedési hormont (B-hGH, Novo Nordisk A/S, Koppenhága) adunk, majd az oldatot fagyasztva szántjuk. A kapott porból 600 mg-ot 250 μΐ 96%-os etanollal granuláljuk, 0,7 és 0,3 mm lyukméretű szitán törjük keresztül, és szárítóberendezésben szilikagél felett szárítjuk. A kapott nazális készítmény 3 IU/20 mg B-hGH-t tartalmaz.

A nazális készítmény biológiai alkalmasságát az alábbiakban leírt módon előállított, intravénás adagolásra alkalmas oldattal szemben vizsgáltuk:

1,364 mg B-hGH-t 1 ml vízben oldottunk, és pH =

8,4 értékű, 1% humán szérum albumint tartalmazó karbonát/glicin pufferral 5,3 ml végtérfogatra hígítottunk.

A kapott injekció-oldat 0,754 IU/ml B-hGH-t tartalmazott.

A kísérletet körülbelül 2,5 kg súlyú hím NZW nyulakon végeztük, melynek során 6 állat tartozott a nazális csoportba, míg 3 az intravénásba. A kísérlet során az állatokat rögzítettük, és a vérminta vételére a fül artériába katétereket ültettünk be.

A nazális csoportban mindegyik állatnak 20 mg készitményt adagoltunk. Az állatok orrüregébe juttatáshoz speciálisan kialakított, jól definiálható légnyomást létrehozó fecskendőt alkalmaztunk. 0,5 ml-es vérmintákat szedtünk jéggel hűtött és heparint tartalmazó kémcsövekbe, a kísérleti vegyületek adagolása előtt 5 perccel, és az adagolást követő 10., 20., 30., 40., 50.,

60., 75., 90., 120., 180. és 240. percben.

A kontroll csoportban minden állatnak intravénásán 250 μΐ injekció-oldatot adagoltunk. A vérmintákat az adagolás előtt 5 perccel és az adagolást követően a 10., 20., 30., 40., 50., 60., 75., 90. és 120. perc múlva vettük. A vérmintákat a hGH-ELISA módszerrel, immun reaktív hGH-val összehasonlítva analizáltuk.

A nazális por biológiai alkalmassága 31%-nak bizonyult.

22. példa

608 mg alfa-ciklodextrint 5,0 ml vízben oldunk, 35,8 mg B-hGH-t adunk az oldathoz, és fagyasztva szárítjuk. A kapott porból 552 mg-ot 48 mg DDTC 200 μΐ 96%-os etanollal készített oldatával granuláljuk,

0,7 és 0,3 mm lyukméretű szitán törjük át, és szárítószekrényben szilikagél felett szárítjuk. A nazális porkészítmény 3 IU/20 mg D-hGH-t tartalmaz. A 20. példában leírtak szerint vizsgálva, a készítmény biológiai alkalmassága 36%-nak bizonyult (az intravénás készítménnyel szemben).

23. példa

552 mg alfa-ciklodextrint 4,6 ml vízben oldunk, majd az oldathoz 35,8 g B-hGH-t adunk, és fagyasztva szárítjuk. A kapott porból 504 mg-ot 96 mg DDPC 200 μΐ 96%-os etanollal készített oldatával granulálunk, 0,7 és 0,3 mm lyukméretű szitán áttörjük, és szárítószekrényben szilikagél felett szárítjuk. A nazális porkészítmény 3 IU/20 mg D-hGH-t tartalmaz. A 20. példában leírtak szerint vizsgálva, a készítmény biológiai alkalmassága 44%-nak bizonyult (az intravénás készítménnyel szemben).

24-27. példa

A jelen példa szerinti készítményeket a 2. példában leírtak szerint állítjuk elő, a 100 mg szójaolaj helyett 100 mg kókuszolajaCkukoricaolajat, olívaolajat, illetve napraforgóolajátaföalmazva. Az indexet a 2. példában megadottak szerint számítottuk ki.

HU 209 247 Β

Példa száma	Foszfolipid	Növényi olaj	Index
24.	1 % didekanoilfoszfatídil-kolin	1 % kókuszolaj	25%
25.	1% didekanoilfoszfatidil-kolin	1 % kukoricaolaj	23%
26.	1 % didekanoilfoszfatidil-kolin	1 % olívaolaj	23%
27.	1 % didekanoilfoszfatidil-kolin	1 % napraforgóolaj	23,5%

28. példa

A találmány szerinti készítménynek az emberi orr nyálkahártya toleranciájára vonatkozó vizsgálatokat a

20. és 21. példa szerinti készítményekkel (a továbbiakban: H és I készítmény) vizsgáltuk. Két külön napon 8-8 egészséges önként jelentkezőnek két szippantás H vagy I készítményt adagoltunk, mindkét orrlyukba egyet-egyet, ahol az adag 20 mg vizsgált készítményt tartalmazott. Az adagolást, eldobható pipettával mért, kis mennyiségű sűrített levegővel végeztük. A por adagolása előtt 10 perccel és azt követően 108 perccel orrtükrözést hajtottunk végre. A por adagolása előtti és utáni eredményeket összehasonlítottuk, és a por által okozott irritációt „nincs”, „enyhe”, „mérsékelt” vagy „súlyos” kategóriába soroltuk. Mint az alábbi táblázatból látható, az I készítményben levő didekanoil-foszfatidil-kolin csaknem teljesen kiküszöböli a hasonló, azonban foszfolipidet nem tartalmazó készítmény irritáló tulajdonságait.

Az orrnyálkahártya irritációja	Készítmény
H	I
nincs	0	6
enyhe	4	1
mérsékelt	3	1
súlyos	1	0
Összesen	8	8

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

Claims

1. Eljárás intranazális adagolású formált alak előállítására, mely egy gyógyászatilag aktív polipeptidet, és egy abszorpciót segítő rendszert tartalmaz, azzal jellemezve, hogy legalább egy (I) általános képletű foszfolipidet, ahol az általános képletben

R’ és R” jelentése azonos vagy eltérő és lehet hidrogénatom, alkilcsoport, alkenilcsoport, alkil-karbonil-csoport, alkenil-karbonil-csoport, alkadienilkarbonil-csoport, alkatrienil-karbonil-csoport vagy alkatetraenil-karbonil-csoport, amely csoportok legfeljebb 14 szénatomot tartalmaznak, azzal a feltétellel, hogy R’ és R” mindegyikének jelentése nem lehet hidrogénatom, és

R’” jelentése hidrofil csoport, amely 2-(trimetil-ammónio)-etil-csoport-etil-csoport, 2-amino-etil-csoport vagy 2,3-dihidroxi-propil-csoport lehet, és adott esetben valamely zsírolajat és más, szokásos gyógyszeradalékot szokásos intranazális készítménnyé alakítunk, ahol az (I) általános képletű foszfolipidet legalább 0,5 t/tf% mennyiségben alkalmazzuk.

(Elsőbbsége: 1987.07.16.)

2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan (I) általános képletű foszfolipidet alkalmazunk, ahol R’”, jelentése 2-(trimetil-ammónio)-etilcsoport.

(Elsőbbsége: 1986.12.16.)

3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan (I) általános képletű foszfolipidet alkalmazunk, ahol R’ és R” mindegyikének jelentése 4-12 szénatomszámú alkilcsoport vagy alkil-karbonil-csoport, előnyösen alkil-karbonil-csoport.

(Elsőbbsége: 1986.12.16.)

4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan (I) általános képletű foszfolipidet alkalmazunk, ahol R’ és R” jelentése egyaránt nonil-karbonilcsoport.

(Elsőbbsége: 1986.12.16.)

5. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan (I) általános képletű foszfolipidet alkalmazunk, ahol R’ vagy R” egyikének jelentése hidrogénatom.

(Elsőbbsége: 1986.12.16.)

6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy zsírolajat is alkalmazunk.

(Elsőbbsége: 1987.07. 16.)

7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy zsírolajként növényi olajat, így szójaolajat, mogyoróolajat, kókuszolajat, kukoricaolajat, olívaolajat vagy napraforgóolajat alkalmazunk.

(Elsőbbsége: 1987.07. 16.)

8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az (I) általános képletű foszfolipidet 0,5-5 t/tf% mennyiségben alkalmazzuk.

(Elsőbbsége: 1987.07.16.)

9. A 6. vagy 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a zsírolajat 0,01-50 t/tf%, előnyösen 0,1-10 t/tf% mennyiségben alkalmazzuk.

(Elsőbbsége: 1987.07. 16.)

10. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy polipeptidként inzulint, inzulin-származékot, inzulin és legalább egy inzulinszármazék keverékét vagy inzulin-származékok keverékét alkalmazzuk.

(Elsőbbsége: 1987.07.16.)

11. A 10. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az inzulint 5-1000, előnyösen 50-500 nemzetközi egység/ml mennyiségben alkalmazzuk.

(Elsőbbsége: 1987.07.16.)

12. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy polipeptidként glükagont alkalmazunk.

(Elsőbbsége: 1987.07.16.)

13. A 6-12. igénypontok bármelyike szerinti eljá7

HU 209 247 Β rás, azzal jellemezve, hogy legalább egy foszfolipid és zsírolaj elegyét egy folyékony vagy por állapotú, gyógyszerészetileg aktív hatóanyaggal együtt folyékony vagy szilárd hígítóanyagban diszpergálunk, amely hígítóanyag adott esetben puffért, tartósító és ozmózis nyomást fenntartó adalékanyagokat tartalmaz.

(Elsőbbsége: 1987.07. 16.)

14. Eljárás gyógyászati eszköz előállítására, azzal jellemezve, hogy a 6-13. igénypontok bármelyike szerint előállított formált alakot egy önmagában ismert, intranazális adagolásra alkalmas adagolóeszközbe töl5 tünk.